CN110066334A - 抗Galectin-3的全人源化单域抗体及应用 - Google Patents

抗Galectin-3的全人源化单域抗体及应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及抗Galectin‑3的全人源化单域抗体及应用。该抗体至少具有重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3之一。该抗体可用于制备细胞或偶联物、诊断试剂或诊断试剂盒、药物或药物组合物；该药物或药物组合物具有针对人Gal‑3阳性肿瘤的抗肿瘤作用。本发明通过噬菌体展示技术获得了靶向Galectin‑3的全人源单域抗体，该抗体能够以高亲和力特异性识别人Gal‑3蛋白。该抗体能够应用于流式检测，特异性识别人Gal‑3阳性细胞。该抗体也能够应用于免疫组织化学染色，特异性识别肿瘤组织和肺血管组织中表达的人Gal‑3蛋白，具有基础研究和临床病理检测的潜在应用价值。

Description

抗Galectin-3的全人源化单域抗体及应用
技术领域
本发明涉及一种抗Galectin-3的全人源化单域抗体及应用，属于生物技术领域。
背景技术
据发明人所知，Galectin-3(Gal-3)是半乳糖凝集素蛋白家族成员之一。该家族蛋白根据结构不同分为三种类型：二聚体型，串联型和嵌合体型。Gal-3 是唯一的一种嵌合体型半乳糖凝集素[1]。Gal-3由LGALS3基因编码，位于14 号染色体上(14q22.3)，分子量大小为35KD。Gal-3由一个N端结构域和一个C端结构域组成：N端结构域包含112个氨基酸，主要由一个富含甘氨酸- 脯氨酸-酪氨酸的重复胶原样序列组成，介导Gal-3的寡聚化，同时存在 Ala62–Tyr63的蛋白酶剪切位点，易受金属蛋白酶的水解；C端结构域有138 个氨基酸，包含一个糖识别结构域(carbohydrate recognition domain,CRD)，能够特异性识别β-半乳糖苷。此外，CRD结构域中的“NWGR”序列参与Gal-3 的抗凋亡功能[2]。Gal-3分布在细胞核、细胞质以及细胞质基质中，Gal-3也可以通过非经典的分泌方式分泌到细胞膜以及细胞外[3]。
Gal-3在正常组织和病理组织中具有重要的作用，能够调控细胞增殖、粘附、分化、血管生成和凋亡[4]。在肿瘤中，Gal-3表达升高，参与肿瘤的血管生成、生长侵袭和转移，调控肿瘤细胞抵抗凋亡[5]，逃避免疫监视[6]。在血管组织中，Gal-3能够促进肺动脉平滑肌细胞增殖、炎症和纤维化，并抑制凋亡[7]，参与肺血管稳态调节，促进肺动脉重构和肺动脉高压[8]。总之，前期研究证实Gal-3可以作为肿瘤和心血管疾病等疾病的标志物和治疗靶标。
单域抗体(single domain antibody,sdAb)，即重链单域抗体VHH，仅包括抗体重链的可变区。相对于普通抗体的3个重链互补决定区 (complementarity determiningregion,CDR)和3个轻链CDR区，单域抗体仅通过3个重链CDR区就具备了特异性的抗原结合能力。相对于普通150KD 的IgG抗体，单域抗体分子量小，仅为15KD，蛋白表达水平较高。同时，单域抗体能够识别抗原表面隐蔽的精细结构，具有更好的组织穿透能力；同时，单域抗体与小分子药物、细菌毒素和放射性元素等偶联，用于疾病的诊断和治疗[9]。
经检索发现，专利号CN200980150730.7、授权公告号CN102257390B的中国发明专利公开了一种Galectin-3免疫测定法，其中涉及了能与Galectin-3 结合的单克隆抗体。以该技术方案为代表的现有技术中已经存在了一些抗 Galectin-3的抗体。发明人课题组经系统地试验研究后得出了不同于现有技术的抗Galectin-3的全人源化单域抗体。
发明内容
本发明的主要目的是：针对现有技术存在的问题，提供一种抗Galectin-3 的全人源化单域抗体，能特异性识别Gal-3阳性肿瘤细胞。同时，还提供该抗体的应用。
本发明解决其技术问题的技术方案如下：
一种抗Galectin-3的全人源化单域抗体，所述单域抗体由重链构成，其特征是，所述抗体至少具有以下技术特征之一：
i、所述重链包括重链CDR1，即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基26—31；
ii、所述重链包括重链CDR2，即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基48—67；
iii、所述重链包括重链CDR3，即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基96—108。
优选地，所述重链包括重链CDR1、重链CDR2以及重链CDR3；重链CDR1 即SEQ IDNO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基26—31；重链CDR2即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基48—67；重链CDR3即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基96—108。
优选地，所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
优选地，所述抗体具有标记，所述标记包括荧光标记、酶标记、以及放射性标记。
本发明还提供：
编码前文所述抗Galectin-3的全人源化单域抗体的核酸。
优选地，所述核酸的序列如SEQ ID NO:1所示。
本发明还提供：
具有前文所述抗Galectin-3的全人源化单域抗体的细胞或偶联物。
优选地，所述细胞包括嵌合抗原受体T细胞、嵌合抗原受体NK细胞、以及经人工编辑的细胞；所述偶联物包括抗Galectin-3的全人源化单域抗体- 细菌毒素偶联物、抗Galectin-3的全人源化单域抗体-细菌毒素变体偶联物、抗Galectin-3的全人源化单域抗体-细胞因子偶联物、以及抗Galectin-3的全人源化单域抗体-化疗药物偶联物。
本发明还提供：
前文所述抗Galectin-3的全人源化单域抗体用于制备细胞或偶联物、诊断试剂或诊断试剂盒、药物或药物组合物的用途。
前文所述核酸用于制备抗Galectin-3的全人源化单域抗体、药物或药物组合物的用途。
前文所述细胞或偶联物用于制备药物或药物组合物的用途。
其中，所述药物或药物组合物具有针对人Gal-3阳性肿瘤细胞的抗肿瘤作用。
本发明通过噬菌体展示技术获得了靶向Galectin-3的全人源单域抗体，该抗体能够以高亲和力特异性识别人Gal-3蛋白。该抗体能够应用于流式检测，特异性识别人Gal-3阳性细胞。该抗体也能够应用于免疫组织化学染色，特异性识别肿瘤组织和肺血管组织中表达的人Gal-3蛋白，具有基础研究和临床病理检测的潜在应用价值。
附图说明
图1为实施例1中ELISA检测富集噬菌体对抗原蛋白的结合情况图。
图2为实施例1中ELISA检测单克隆噬菌体对抗原蛋白的结合情况图。
图3为实施例1的阳性克隆富集率分析图。
图4为实施例2的表达载体示意图。
图5为实施例2的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果图。
图6、图7为实施例3的特异性结合检测结果图。
图8为实施例4的亲和力分析结果图。
图9为实施例5的细胞特异性结合检测结果图。
图10为实施例6的免疫组织化学(IHC)染色结果图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。但是本发明不限于所给出的例子。所用方法如无特别说明均为常规方法，所用试剂和材料如无特别说明均为市售品。
实施例1、筛选抗Galectin-3的全人源化单域抗体
采用噬菌体展示技术，以人Gal-3(Ala2-Ile250，R&D Systems, Minneapolis,MN,USA)蛋白为Gal-3抗原进行筛淘。
首先，以Tomlinson I&J噬菌体文库(Genservice Ltd.,Cambridge,UK，文库大小为1.47x108)的抗体序列为模板，通过PCR扩增该文库的抗体重链序列，进而构建单域抗体噬菌体文库。
之后，使用50μg/ml的上文所述Gal-3抗原于4℃包被免疫板过夜；用含有5％脱脂奶粉，0.1％Tween-20的PBS溶液室温封闭免疫板1小时；将上文获得的单域抗体噬菌体文库以1012pfu与含3％脱脂奶粉的PBS溶液按比例 1:1混合后室温孵育2小时，加入封闭好的免疫板中(100μl/孔)，室温孵育 1小时；用0.1％Tween-20的PBS溶液洗涤免疫板20次；以100μl 100mM Triethylamine室温洗脱30分钟；洗脱的噬菌体感染对数生长期的TG1细胞，扩增和回收后用于下一轮淘选。淘选后ELISA分析阳性噬菌体富集情况。
ELISA检测的具体过程为：以5μg/ml的上文所述Gal-3抗原和阴性对照蛋白人Gal-14-hFc蛋白分别于4℃包被免疫板过夜；用含有5％脱脂奶粉，0.1％ Tween-20的PBS溶液室温封闭免疫板1小时；将每一轮富集的噬菌体扩增并回收，以1:1比例与含10％脱脂奶粉的PBS溶液室温孵育2小时，加入封闭好的免疫板中(100μl/孔)，室温孵育1小时；用0.1％Tween-20的PBS溶液洗涤免疫板5次；将HRP/Anti-M13Monoclonal conjugate以1：4000比例与含5％脱脂奶粉，0.05％Tween-20的PBS溶液混合，加入洗涤好的免疫板中 (50μl/孔)，室温孵育1小时；用0.05％Tween-20的PBS溶液洗涤免疫板5 次；将TMB显色液加入免疫板中(100μl/孔)，室温显色3分钟后，加入0.5M 硫酸终止显色(100μl/孔)；用酶联免疫检测仪在450nm波长下检测吸光值，并分析每轮扩增后噬菌体的亲和力。
ELISA检测结果如图1所示，以Gal-14-hFc为抗原阴性对照(图中简写为Gal-14)，在三轮富集后，噬菌体群对Gal-3抗原的亲和力显著升高。
对第三轮富集的噬菌体单克隆进行抗原结合分析，具体过程为：
用第三轮富集的噬菌体库感染TG1细胞，并从中随机挑取200个单克隆，扩增并回收噬菌体。以5μg/ml的上述所述Gal-3抗原和阴性对照Gal-14-hFc 蛋白分别于4℃包被免疫板过夜；用含有5％脱脂奶粉，0.05％Tween-20的PBS 溶液室温封闭免疫板1小时；将200个扩增后的单克隆噬菌体，以1:1比例与含10％脱脂奶粉的PBS溶液室温孵育1小时，分别加入包被有Gal-3抗原和阴性对照Gal-14-hFc蛋白并封闭好的免疫板中(50μl/孔)，室温孵育1小时；用0.05％Tween-20的PBS溶液洗涤免疫板5次；将HRP/Anti-M13 Monoclonalconjugate以1：4000比例与含5％脱脂奶粉，0.05％Tween-20的 PBS溶液混合，加入洗涤好的免疫板中(50μl/孔)，室温孵育1小时；用0.05％ Tween-20的PBS溶液洗涤免疫板5次；将TMB显色液加入免疫板中(100μl/ 孔)，室温显色3分钟后，加入0.5M硫酸中止显色(100μl/孔)；用酶联免疫检测仪在450nm波长下检测吸光值，并分析单克隆噬菌体对Gal-3蛋白的结合能力。检测结果如图2所示，发现150个识别Gal-3蛋白的阳性克隆。
对这150个阳性克隆进行测序分析，发现有9条抗体序列发生了富集，其中克隆31A2为优势富集克隆(如图3所示)。
经测序鉴定克隆31A2的抗体DNA序列为SEQ ID NO：1，氨基酸序列为SEQ ID NO：2。
SEQ ID NO：1：
gaggtgcagctgttggagtctgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctc ctgtgcagcctcttctttctatttctcttcttatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaa ggggctggagtgggttgggactatctatcatagtgggagcagctactacaacccgtccctcaagag tcgagtcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagc cgaggacacggccgtatattactgtaccacaattcgacctgaggttttattggggggctactgggg ccagggaaccctggtcaccgtctcgagc。
SEQ ID NO：2：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASSFYFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVGTIYHSGSSYYNPS LKSRVTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTTIRPEVLLGGYWGQGTLVTVSS。
在氨基酸序列中，氨基酸残基26-31(即SFYFSS)为重链CDR1，氨基酸残基48-67(即VGTIYHSGSSYYNPSLKSRV)为重链CDR2，氨基酸残基96-108(即 TTIRPEVLLGGYW)为重链CDR3。
实施例2、31A2单域抗体的表达与纯化
构建实施例1中31A2单域抗体的真核细胞表达载体pFUSE-31A2-hFc (Invivigen,San Diego,CA)，如图4所示，然后以此制备质粒。
用添加10％胎牛血清、100U/ml青霉素、0.1mg/ml链霉素的DMEM培养基在细胞培养皿中种5百万个HEK293T细胞，置于5％CO2，37℃培养箱中培养。当细胞密度到达60-80％时，利用PEI将10μg pFUSE-31A2-hFc质粒转染入 HEK293T细胞；收集上清。
将收集的上清液在3500rpm、4℃条件下离心20分钟，并用0.45μm的微孔滤膜抽滤，进一步去除碎片；将上清液通过Protein A Argrose(GE Healthcare，Piscataway，NJ)亲和柱分离纯化31A2-hFc重组蛋白。通过BCA 法测定蛋白浓度，并将5μg 31A2-hFc重组蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，得到31A2-hFc重组蛋白在变性和非变性的环境下的条带，如图5所示。
实施例3、31A2单域抗体的特异性分析
(1)对人Gal-3蛋白和小鼠Gal-3蛋白的特异性分析
使用5μg/ml的BSA，人Gal-3蛋白和小鼠Gal-3蛋白分别于4℃包被免疫板过夜；用含有3％脱脂奶粉，0.05％Tween-20的PBS溶液室温封闭免疫板 1小时；将实施例2的31A2-hFc重组蛋白用含有3％脱脂奶粉，0.05％Tween-20 的PBS溶液稀释至5μg/ml，加入封闭好的免疫板中(50μl/孔)，室温孵育 1小时；用0.05％Tween-20的PBS溶液洗涤免疫板3次(340μl/孔)；将goat anti-human Fcγ-HRP(Iackson ImmunoResearch)以1：2000比例与3％脱脂奶粉、0.05％Tween-20的PBS溶液混合，加入洗涤好的免疫板中(50μl/孔)，室温孵育1小时；用0.05％Tween-20的PBS溶液洗涤免疫板3次；将TMB显色液加入免疫板中(100μl/孔)，室温显色3分钟后，加入0.5M硫酸中止显色(100μl/孔)；使用酶联免疫检测仪在450nm波长下检测吸光值并分析 31A2-hFc重组蛋白对各Gal-3蛋白的特异性。
结果如图6所示，31A2-hFc重组蛋白(即31A2单域抗体)特异性识别人源Gal-3蛋白，但不识别小鼠来源的Gal-3蛋白。
(2)对人Gal-3蛋白和人Gal-14蛋白的特异性分析
使用5μg/ml的人Gal-3蛋白和阴性对照蛋白人Gal-14-hFc蛋白于4℃包被免疫板过夜；用含有3％脱脂奶粉，0.05％Tween-20的PBS溶液室温封闭免疫板1小时；将实施例2的31A2-hFc重组蛋白用含有3％脱脂奶粉，0.05％ Tween-20的PBS溶液稀释至5μg/ml，加入封闭好的免疫板中(50μl/孔)，室温孵育1小时；用0.05％Tween-20的PBS溶液洗涤免疫板3次(340μl/ 孔)；将goat anti-human Fcγ-HRP(Iackson ImmunoResearch)以1：2000 比例与3％脱脂奶粉，0.05％Tween-20的PBS溶液混合，加入洗涤好的免疫板中(50μl/孔)，室温孵育1小时；用0.05％Tween-20的PBS溶液洗涤免疫板3次；将TMB显色液加入免疫板中(100μl/孔)，室温显色3分钟后，加入0.5M硫酸中止显色(100μl/孔)；使用酶联免疫检测仪在450nm波长下检测吸光值并分析31A2-hFc重组蛋白对各蛋白的特异性。
结果如图7所示，31A2-hFc重组蛋白(即31A2单域抗体)特异性识别人Gal-3蛋白，但是不识别其同源蛋白人Gal-14蛋白。
实施例4、31A2单域抗体的亲和力分析
使用5μg/ml的人Gal-3蛋白于4℃包被免疫板过夜；用含有3％脱脂奶粉，0.05％Tween-20的PBS溶液室温封闭免疫板1小时；将实施例2的31A2-hFc 重组蛋白用含有3％脱脂奶粉，0.05％Tween-20的PBS溶液分别稀释成20，10， 5，2.5，1.25，0.625，0.3125，0.15625，0.078125，0.0390625，0.01953125， 0.009765625μg/ml(倍比稀释)，加入封闭好的免疫板中(50μl/孔)，室温孵育1小时；用0.05％Tween-20的PBS溶液洗涤免疫板3次(340μl/孔)；将goat anti-human Fcγ-HRP以1：2000比例与3％脱脂奶粉，0.05％Tween-20 的PBS溶液混合，加入洗涤好的免疫板中(50μl/孔)，室温孵育1小时；用 0.05％Tween-20的PBS溶液洗涤免疫板3次；将TMB显色液加入免疫板中(100 μl/孔)，室温显色3分钟后，加入0.5M硫酸中止显色(100μl/孔)；使用酶联免疫检测仪在450nm波长下检测吸光值，并拟合亲和力曲线分析31A2-hF 重组蛋白的亲和力。
结果如图8所示，31A2-hFc重组蛋白(即31A2单域抗体)与人Gal-3蛋白的亲和力为2.37nM。
实施例5、31A2单域抗体识别Gal-3阳性肿瘤细胞
通过流式细胞术检测实施例2的31A2-hFc重组蛋白对Gal-3阳性肿瘤细胞的识别情况。
培养人结直肠癌细胞系DLD1，人肝癌细胞系Hep3B，HepG2，Huh7，鼠肝癌细胞系Hepa1-6，并等分(200万个细胞/EP tube)，2000rpm，4℃离心5 分钟，弃掉上清，并用PBSbuffer重悬，再次离心，弃掉PBS溶液，用4％的多聚甲醛固定细胞，100μl/EP tube，室温20分钟，用PBS buffer重悬，再次离心，加入0.1％的Triton破膜，100μl/EP tube，室温20分钟，用PBS buffer重悬，再次离心，用含5μg/ml纯化的31A2-hFC重组蛋白，含5％BSA 的PBS溶液重悬细胞，并放置冰上孵育1小时；2000rpm，4℃离心5分钟，弃掉上清，并用PBS buffer重悬，并再次离心，弃掉PBS溶液，将Goat F (ab’)2anti-human IgG(γ)R-PE conjugate(life)以1：200比例与含5％BSA 的PBS溶液混合并重悬细胞，并放置冰上孵育1小时；2000rpm，4℃离心5 分钟，弃掉上清，并用PBS buffer重悬，并再次离心，弃掉PBS溶液，用0.3ml PBS溶液重悬细胞，并用流式细胞仪检测PE荧光标记信号,分析31A2-hFc重组蛋白对Gal-3阳性肿瘤细胞的识别情况。
结果如图9所示，31A2-hFc重组蛋白(即31A2单域抗体)特异性识别人结直肠癌细胞系DLD1，人肝癌细胞系Hep3B，HepG2，Huh7，而不能识别鼠肝癌细胞系Hepa1-6，其中，人结直肠癌细胞系DLD1，人肝癌细胞系Hep3B，HepG2， Huh7均具有人Gal-3抗原，而鼠肝癌细胞系Hepa1-6具有鼠Gal-3抗原。
实施例6、31A2单域抗体用于免疫组织化学(IHC)染色
检测实施例2的31A2-hFc重组蛋白用于免疫组织化学(IHC)染色的试验依托南京医科大学实验平台所完成。其中，31A2-hFc重组蛋白的浓度为10 μg/ml，二抗为anti-huamn-Fcγ-HRP(Jackson)，稀释比例为1:1000。
结果如图10所示，31A2-hFc重组蛋白(即31A2单域抗体)能够特异性地标记人肝癌细胞移植瘤组织和人肺水肿组织，这些组织均Gal-3阳性。阴性对照为识别Gal-14的单域抗体。
本发明抗体可具有标记，如，荧光标记、酶标记、放射性标记等。
本发明的31A2单域抗体能特异性结合/识别人Gal-3抗原，可用于制备嵌合抗原受体T细胞，还可用于制备嵌合抗原受体NK细胞或经人工编辑的细胞，或制备偶联物。偶联物可选自31A2单域抗体-细菌毒素偶联物、31A2单域抗体-细菌毒素变体偶联物、31A2单域抗体-细胞因子偶联物、31A2单域抗体-化疗药物偶联物。
除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。
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序列表
<110> 南京医科大学
<120> 抗Galectin-3的全人源化单域抗体及应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctcttcttt ctatttctct tcttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttgggact atctatcata gtgggagcag ctactacaac 180
ccgtccctca agagtcgagt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg 240
caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtatatt actgtaccac aattcgacct 300
gaggttttat tggggggcta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc gagc 354
<210> 2
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Ser Phe Tyr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr His Ser Gly Ser Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
85 90 95
Thr Ile Arg Pro Glu Val Leu Leu Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115

Claims (12)

1.一种抗Galectin-3的全人源化单域抗体，所述单域抗体由重链构成，其特征是，所述抗体至少具有以下技术特征之一：
i、所述重链包括重链CDR1，即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基26—31；
ii、所述重链包括重链CDR2，即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基48—67；
iii、所述重链包括重链CDR3，即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基96—108。
2.根据权利要求1所述的抗Galectin-3的全人源化单域抗体，其特征是，所述重链包括重链CDR1、重链CDR2以及重链CDR3；重链CDR1即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基26—31；重链CDR2即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基48—67；重链CDR3即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基96—108。
3.根据权利要求1所述的抗Galectin-3的全人源化单域抗体，其特征是，所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
4.根据权利要求1或2或3所述的抗Galectin-3的全人源化单域抗体，其特征是，所述抗体具有标记，所述标记包括荧光标记、酶标记、以及放射性标记。
5.编码权利要求1至4任一项所述抗Galectin-3的全人源化单域抗体的核酸。
6.根据权利要求5所述的核酸，其特征是，所述核酸的序列如SEQ ID NO:1所示。
7.具有权利要求1至4任一项所述抗Galectin-3的全人源化单域抗体的细胞或偶联物。
8.根据权利要求7所述的细胞或偶联物，其特征是，所述细胞包括嵌合抗原受体T细胞、嵌合抗原受体NK细胞、以及经人工编辑的细胞；所述偶联物包括抗Galectin-3的全人源化单域抗体-细菌毒素偶联物、抗Galectin-3的全人源化单域抗体-细菌毒素变体偶联物、抗Galectin-3的全人源化单域抗体-细胞因子偶联物、以及抗Galectin-3的全人源化单域抗体-化疗药物偶联物。
9.权利要求1至4任一项所述抗Galectin-3的全人源化单域抗体用于制备细胞或偶联物、诊断试剂或诊断试剂盒、药物或药物组合物的用途。
10.权利要求5或6所述核酸用于制备抗Galectin-3的全人源化单域抗体、药物或药物组合物的用途。
11.权利要求7或8所述细胞或偶联物用于制备药物或药物组合物的用途。
12.根据权利要求9或10或11所述的用途，其特征是，所述药物或药物组合物具有针对人Gal-3阳性肿瘤细胞的抗肿瘤作用。
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