CN110063429A - 一种当归提取物在制备淡水鱼抗应激剂中的应用及其制备方法 - Google Patents

一种当归提取物在制备淡水鱼抗应激剂中的应用及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种当归提取物在制备淡水鱼抗应激剂中的应用及其制备方法。当归提取物作为淡水鱼抗应激剂能使鱼抗养殖高密度、硫酸铜和敌百虫应激的能力提升，降低养殖环境下鱼类的应激反应、从而降低其发病率和死亡率；降低水产养殖者的养殖风险，增加其收入。

Description

一种当归提取物在制备淡水鱼抗应激剂中的应用及其制备 方法
技术领域
本发明属于淡水鱼养殖技术领域，尤其涉及一种当归提取物在制备淡水鱼抗应激剂中的应用及其制备方法。
背景技术
高密度集约化是当前水产养殖的重要特征。高密度养殖使投饲量提高，水体中养殖废物增多，使水质变差。表现为水中溶氧量降低，氨氮和亚硝酸盐含量超标。已有报道显示：这些因素会导致鱼的氧化损伤，进而降低鱼对饲料的消化吸收，降低鱼的生长和免疫功能，提高鱼的发病率和死亡率。
在高密度养殖过程中还会滋生更多有害的虫类和菌类，需要使用大量的消毒剂和杀虫剂来进行灭杀，而这又会导致水中消毒剂和杀虫剂的含量超标。目前，淡水鱼养殖中最常用的消毒剂之一是硫酸铜，杀虫剂之一是敌百虫。硫酸铜在养殖中的使用浓度一般为0.5-1.0mg/L，已有研究证实，养殖水体使用硫酸铜能诱导鱼的氧化应激和降低鱼的摄食、消化吸收、生长和免疫功能，从而使鱼生长缓慢，甚至会导致疾病和死亡。敌百虫是一种胆碱酯酶抑制剂。敌百虫中毒能导致动物肌肉机能紊乱，而失去平衡，已有报道显示，敌百虫也可诱导养殖鱼类发生氧化应激并对鱼的消化吸收、呼吸和免疫功能造成不利影响。
在淡水鱼养殖过程中，消毒剂和杀虫剂的使用是必不可少的。针对敌百虫或硫酸铜使用造成的鱼类中毒，养殖者一般通过加水或者换水来进行缓解，而加水或者换水会增加养殖成本，使养殖工序更为繁杂，同时也会破坏养殖水环境；且在养殖过程中单纯的加水或者换水也只能缓解一时，并不能实际地解决问题。同时，养殖户为了提高养殖效率，一般会使鱼维持在较高的密度范围内，然而随着季节或者不同地域的环境变化，鱼的适宜养殖密度也会发生变化，鱼对这种变化的抵抗能力也会发生改变，从而导致鱼的应激反应，而且会使养殖鱼类的发病率和死亡率提高。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种当归提取物在制备淡水鱼抗应激剂中的应用及其制备方法，当归提取物作为淡水鱼抗应激剂能使鱼类抗养殖高密度、硫酸铜和敌百虫应激的能力提升，降低高密度养殖环境下鱼类的发病率和死亡率。
本发明采用的技术方案如下：
一种当归提取物在制备淡水鱼抗应激剂中的应用。
当归(Angelica sinensis(Oliv.)Diels)是药食两用植物，作为中药组方中的重要成分有上千年的使用历史。在我国，当归资源丰富，但利用并不充分，例如入药当归加工过程中产生的下脚料，当归头、当归须和当归渣等，利用十分有限。开发当归新用途，发挥当归的综合利用潜力，提高当归经济和社会效益，具有十分重要的意义。现代药学研究结果显示，当归提取物具有多种生物活性。我们前期的研究显示，用当归乙酸乙酯提取物具有抗饲料脂质氧化和降低鱼体氧化应激的作用。本试验研究发现当归提取物具有抗鱼应激的作用。但目前有关当归提取物在鱼抗应激方面的应用未见报道。
进一步地，所述抗应激剂为抗养殖高密度、抗硫酸铜和抗敌百虫应激中的至少一种。试验发现，养殖鱼密度为0.48尾/L水时，鱼的增重、摄食量和饲料效率最高，随着密度的提高，鱼的增重、摄食量和饲料效率逐渐降低；当鱼的密度增至0.97尾/L水时，鱼增重、摄食量和饲料效率下降到最低水平；进一步提高鱼密度达1.13尾/L水，鱼出现死亡。产生最大密度应激而不引起鱼死亡的养殖密度为0.97尾/L水。本方案发现，当归提取物具有抗养殖高密度应激作用，即在养殖密度为0.97尾鱼/L水时，当归提取物能够抑制由于养殖密度提高而导致的鱼增重、摄食量和饲料效率的下降。
具体地，将所述当归提取物加入鱼饲料中，对淡水鱼进行投喂。
作为优选，所述当归提取物在鱼饲料中的含量为4.18–7.0g/kg。当归提取物在饲料中的含量低于4.18g/kg时，其对淡水鱼的应激也有明显的抑制作用但不是最佳，而当归提取物在饲料中的含量在4.18–7.0g/kg之间时，其对淡水鱼应激具有最佳的抑制作用，且不会对鱼类生长产生副作用。
作为进一步的优选，所述当归提取物在饲料中的含量为4.30g/kg、4.25g/kg、4.18g/kg中的任意一种。试验证明，添加4.18g/kg饲料的当归乙醚提取物抗敌百虫的应激作用效果最佳，即对淡水鱼因敌百虫的使用而产生的应激具有最好的抑制效果，且用量最少；添加4.25g/kg饲料的当归乙醚提取物不但抗硫酸铜应激作用效果最佳，而且也会对敌百虫应激表现出最佳的抑制效果，且用量最少；添加4.30g/kg饲料的当归乙醚提取物不但抗高密度应激作用效果最佳，而且还会对硫酸铜和敌百虫应激表现出最佳的抑制效果，且用量最少。
所述当归提取物与基础饲料混合的方法如下：在抗应激饲料制备时，根据饲料配方计算出单位质量鱼饲料所需油脂的质量，将当归提取物均匀溶解在该油脂中，得到混合液，再将混合液混入制备饲料的其他原料中，进行饲料的制备。当归提取物不易溶解，如果直接将其与制备饲料的其他原料混合，其容易以团或块状等形式分布在饲料中，与其他原料无法充分混合，从而使最终制得的饲料因提取物分布不均匀而抗应激效果不稳定。而本申请中提供了一种简单有效的将当归提取物添加到饲料中的方法，其将当归提取物先溶解在油脂中，形成均匀的混合液，然后再将混合液与其他制备饲料的原料混合均匀进行饲料制备即可。在这一制备方法中，通过将油脂作为当归提取物与饲料原料混合的媒介，使得当归提取物能均匀分布在饲料中，保证了单位质量饲料中的有效当归提取物含量，使投喂该抗应激饲料后的淡水鱼能极好地抗应激。油脂可以是鱼油、大豆油、玉米油、菜籽油、花生油、葵花籽油等中的一种或几种的混合物。
所述鱼饲料包含以下重量份的组分：鱼粉23-26份、豆粕30-33份、面粉36-38份、鱼油1-2份、大豆油1.5-2.5份、维生素添加剂0.5-1.5份、矿物添加剂0.5-1.5份；含粗蛋白33-36份、粗脂肪5-6.5份、磷0.7-1.5份；将当归提取物溶解在鱼油和/或大豆油中再与其它组分混合制备饲料。
所述当归提取物加入油脂中后，以超声波震荡30-50min使其混合均匀。将当归提取物加入油脂中后，再利用超声波震荡，使得当归提取物能更好地溶解，提升了制得的抗应激饲料的均匀性。
所述当归提取物为当归乙醚提取物。也可以采用其他与乙醚极性相似的中极性溶剂进行提取获得当归提取物。本发明采用乙醚进行提取，其对当归的提取效果较好。
一种当归提取物的制备方法，包括下述步骤：
A1、将当归的根50℃以下干燥至恒重，粉碎过18目筛，获得当归粉末；
A2、一次提取：按当归粉末与环己烷1：6-8g/ml的比例混合，600-800转/分钟旋转搅拌5-7小时，将混合液过滤，获得无滤液的残渣；作为优选，可以将残渣按以上方法再提取2次。
A3、二次提取：将一次提取残渣与乙醚按1：6-8g/ml的比例混合，600-800转/分钟旋转搅拌5-7小时，将混合液过滤，获得残渣和滤液；作为优选，可以将残渣按以上方法再提取2次。将滤液合并，减压蒸馏至恒重去除乙醚，获得当归乙醚提取物。
该提取方法采用极性由小到大的环己烷、乙醚对当归粉末进行提取，其中第一次环己烷提取液弃去，将第二次乙醚提取液减压蒸馏至恒重去除乙醚，获得当归乙醚提取物。在该提取方法中，环己烷将当归中极性最低的物质提取出去；再用乙醚提取时，当归中的中极性物质被提取。在前一次环己烷提取中，极性较低的物质被除去，残渣中极性较低的物质含量很少，从而在当归乙醚提取物中，不会包含太多的极性较低的物质，使得乙醚提取物中的中极性物质相对纯度更高，能够更好的起到抗应激的作用。
进一步地，为了更好的去除低极性物质，或提高当归乙醚提取物的提取纯度和得率，所述一次提取、二次提取均重复2-4次；每一步均进行重复提取，进一步提高了当归提取物的纯度和得率。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
1、本发明首次使用了当归提取物作为淡水鱼的抗应激剂，并将其添加入淡水鱼饲料中进行使用。
2、本发明确定了当归提取物抗淡水鱼应激的极性活性部位。
3、本发明确定了当归乙醚提取物在淡水鱼抗应激饲料中的最佳添加浓度。
4、本发明提供了简便的将当归乙醚提取物添加入抗应激饲料中的媒介和方法。
5、此当归提取物抗高密度、硫酸铜和敌百虫应激的最佳添加浓度为4.30、4.25和4.18g/kg饲料。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为养殖密度对鲫鱼增重的影响图(图中数据以4个重复的平均数±标准差表示；柱上标记字母不同者表示数据间差异显著，相同者表示差异不显著(P<0.05)。增重＝末重－初重(表2))；
图2为养殖密度对鲫鱼饲料效率的影响图(图中数据以4个重复的平均数±标准差表示；柱上标记字母不同者表示数据间差异显著，相同者表示差异不显著(P<0.05)。饲料效率＝100×增重/摄食量(表2))；
图3为养殖密度对鲫鱼死亡率的影响图(图中数据以4个重复的平均数±标准差表示；柱上标记字母不同者表示数据间差异显著，相同者表示差异不显著(P<0.05))；
图4为投喂不同极性当归提取物的鲫鱼摄食恢复率和不同极性当归提取物螯合金属离子(Fe2+)活性(MCA)的示意图(数据以3个重复的平均数±标准差表示；在同一指标内，柱标字母不同者表示数据间差异显著，相同者表示差异不显著(P<0.05))；
图5为当归各提取物的多酚类含量与其摄食恢复率和螯合金属离子(Fe2+)活性(MCA)的关系图(数据以3个重复的平均数表示)；
图6为投喂不同极性当归提取物的鲫鱼肠道抗超氧阴离子活性(ASA)和抗羟自由基活性(AHR)的示意图(数据以3个重复的平均数±标准差表示；在同一指标内，柱标字母不同者表示数据间差异显著，相同者表示差异不显著(P<0.05))；
图7为当归各提取物多酚类含量与其抗超氧阴离子活性(ASA)和抗羟自由基活性(AHR)的关系图(数据以3个重复的平均数表示)；
图8为投喂当归乙醚提取物60天后，鲫增重恢复率折线回归分析图(数据以4个重复的平均数表示。增重恢复率(％)＝(E－Y)/(D－Y)×100(表3))；
图9为水体硫酸铜(Cu)含量对鲤摄食率的影响图(图中数据以3个重复的平均数±标准差表示；柱上标记字母不同者表示数据间差异显著，相同者表示差异不显著(P<0.05))；
图10为水体硫酸铜(Cu)含量对鲤死亡率的影响图(图中数据以3个重复的平均数±标准差表示；柱上标记字母不同者表示数据间差异显著，相同者表示差异不显著(P<0.05))；
图11为水体敌百虫含量对鲤侧翻率的影响图(图中数据以3个重复的平均数±标准差表示；柱上标记字母不同者表示数据间差异显著，相同者表示差异不显著(P<0.05))；
图12为水体敌百虫含量对鲤死亡率的影响图(图中数据以3个重复的平均数±标准差表示；柱上标记字母不同者表示数据间差异显著，相同者表示差异不显著(P<0.05))。
图13投喂当归乙醚提取物30天，硫酸铜应激后鲤摄食率折线回归分析图(注：数据以3个重复的平均数表示。摄食率(％)＝摄食量/体重×100(表4))；
图14为投喂当归乙醚提取物30天，敌百虫应激后鲤侧翻率折线回归分析图(注：数据以3个重复的平均数表示。侧翻率(％)＝侧翻鱼数量/鱼总数量×100(表5))。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明，即所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本发明实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。
因此，以下对在附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种当归提取物在制备淡水鱼抗应激剂中的应用。所述抗应激剂为抗高密度、抗硫酸铜、抗敌百虫应激中的至少一种。
应用当归提取物抑制淡水鱼养殖应激的方法，具体方式为利用含有当归提取物的鱼饲料对淡水鱼进行投喂。其中，鱼饲料可以为淡水鱼养殖过程中的任意常用饲料配方，只需在原配方的基础上添加当归提取物即可；并且当归的提取方式有多种，可以采用乙醚类似的中极性溶剂进行提取。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
具体实施例
1、一种当归提取物的制备方法，包括如下步骤：
1)获得当归的根1000g，50℃鼓风干燥箱内干燥至恒重，粉碎过18目筛，获得当归粉末。
2)取当归粉末400g，按当归粉末与环己烷1：6g/ml的比例混合，600转/分钟旋转搅拌6小时；将混合液过滤，获得澄清滤液和残渣(重复提取3次)；将滤液减压蒸馏至恒重去除环己烷，获得当归环己烷提取物。
3)按当归环己烷提取残渣与乙醚1：6g/ml的比例混合，600转/分钟旋转搅拌6小时；将混合液过滤，获得澄清的滤液和残渣(重复提取3次)；将滤液减压蒸馏至恒重去除乙醚，获得当归乙醚提取物。
4)按当归乙醚提取残渣与丙酮1：6g/ml的比例混合，600转/分钟旋转搅拌6小时；将混合液过滤，获得澄清的滤液和残渣(重复提取3次)；将滤液减压蒸馏至恒重去除丙酮，获得当归丙酮提取物。
5)按当归丙酮提取残渣与水1：6的比例混合，600转/分钟旋转搅拌6小时；将混合液离心，获得澄清无残渣的上清液(重复提取3次)；将上清液减压蒸馏至恒重去除水，获得当归水提取物。
表1当归各提取物的获得率和多酚类物质含量
注：数据以3个重复的平均数±标准差表示；在同一列数据中上标字母不同者表示差异显著(P<0.05)。
采用Folin–Ciocalteau试剂法测定当归四种提取物的多酚类化合物含量，结果(见表1)显示所述当归乙醚提取物的多酚类含量最高，为45.47-51.09g/kg。
2、从四川省内江市当地购得鲫鱼苗后，在养殖室内暂养一周。选择体重8.0±0.2g鲫鱼苗720尾，随机分为8个处理组，每组4个鱼缸。8个处理组的鱼尾数分别为：5、10、15、20、25、30、35和40尾/缸。每个鱼缸的形态、大小和颜色相同，尺寸都为30×30×40cm并内置800L/h流量增氧机一台。以自来水为水源、缸内水体积为31L。控制养殖室温22±2℃；增氧机持续供氧；投喂鱼粉豆粕型杂食性鱼饲料；每2-3天换水一次。养殖期为60天。
60天养殖期后，考察各处理组鱼增重、摄食量、饲料效率和死亡率，结果见表2和图1-3。由图可知，增重最多的放养密度为0.16-0.48尾/L水；随着养殖密度的提高，增重逐渐下降，增重最少的养殖密度为0.97-1.29尾/L水。摄食最多的放养密度为0.32-0.48尾/L水；随着养殖密度的提高，摄食量逐渐下降，摄食最少的密度为0.97-1.29尾/L水。饲料效率最高的放养密度为0.16-0.48尾/L水；随着养殖密度的提高，饲料效率逐渐下降，饲料效率最低的密度为0.97-1.29尾/L水。放养密度1.13-1.29尾/L水时，鱼出现死亡。即当养殖密度为0.48尾鱼/L水时，鱼的增重、摄食量和饲料效率最高，确定最佳放养密度为0.48尾/L水。随着密度的提高，鱼的增重、摄食量和饲料效率逐渐降低；当鱼的密度增至0.97尾/L水时，鱼增重、摄食量和饲料效率下降到最低水平；进一步提高鱼密度达1.13尾/L水，鱼出现死亡。产生最大密度应激而不引起鱼死亡的养殖密度为0.97尾/L水。
表2养殖密度对鲫鱼生长和摄食量的影响
注：表中数据以4个重复的平均数±标准差表示，每个鱼缸31L水；在同一列数据中，上标字母不同者
表示数据间差异显著(P<0.05)。
3、根据饲料配方，将当归4种提取物按0和2g/kg的浓度添加到饲料中，制成相应的5种颗粒饲料。
饲料配方：
1每千克维生素添加剂包含：视黄醇(500,000IU/g)0.80g、维生素D3(500,000IU/g)0.48g、DL-α-生育酚(50％)20.00g、维生素K3(23％)0.43g、维生素B1(90％)0.11g、核黄素(80％)0.63g、吡哆醇(81％)0.92g、氰钴胺(1％)0.10g、D-泛酸钙(90％)2.73g、烟酸(99％)2.82g、D-生物素(2％)5.00g、肌醇(99％)52.33g和叶酸(96％)0.52g。
2每千克矿物质添加剂包含：FeSO4·7H2O(含Fe 20％)69.70g、CuSO4·5H2O(含Cu25％)1.20g、ZnSO4·7H2O(含Zn 23％)21.64g、MnSO4·H2O(含Mn 32％)4.09g、Na2SeO3·5H2O(含Se 1％)2.50g和KI(含I 4％)2.90g。
其中，维生素添加剂和矿物质添加剂中，各物质中括号内的百分含量均表示该物质的质量分数，例如吡哆醇(81％)0.92g表示吡哆醇质量占总质量81％的物质为0.92g。
将当归提取物添加到饲料中的具体添加方法如下：根据饲料配方计算出所制备的抗应激鱼饲料需要的鱼油和大豆油(油脂)质量，将当归提取物按照相应浓度加入油脂中，超声波震荡30min使其充分混合，再将溶有当归提取物的油脂混入其他饲料原料中，制成颗粒饲料。
4、在最佳应激密度(0.97尾/L水)和步骤2相同养殖环境条件下，选择体重22.5±1.1g鲫鱼苗495尾，随机分为6个处理组，每组3个鱼缸。6个处理组的鱼尾数分别为：15、30、30、30、30和30尾/缸，分别命名为对照、诱导、当归环己烷提取物、当归乙醚提取物、当归丙酮提取物和当归水提取物组。6个处理组分别投喂含0、0和2g/kg当归环己烷提取物、当归乙醚提取物、当归丙酮提取物和当归水提取物的饲料。每天投喂4次，早上8：00投喂第一次，以后每隔4小时投喂一次，晚上8：00进行最后一次投喂。投喂第1天，每次0.5克/缸；以后每次投喂增加0.1克/缸；直至出现剩料不再增加投喂量。以后每天必须保证有剩料，并于每次投喂后30分钟开始迅速捞出残饵，及时烘干残饵并记录重量；等剩料消失后再增加投喂量。投喂实验进行10天后，统计每个处理组的摄食量和鱼的体重，计算摄食率。停喂1天后，采集鱼的肠道样品，采用试剂盒(南京建成生物工程研究所)法测定6个处理组肠道组织抗超氧阴离子活性(ASA)和抗羟自由基活性(AHR)以及当归4种提取物体外螯合金属离子(Fe2+)活性(MCA)。
结果(见图4和6)显示当归提取物具有螯合过度金属离子的作用；投喂当归提取物恢复了鲫鱼摄食率和其肠道清除ROS活性；当归的乙醚提取物效果最好。相关性分析结果(见图5和7)显示当归四种提取物的恢复摄食、MCA、ASA和AHR与其多酚类含量存在密切关系，其恢复摄食作用可能是由于其多酚类物质的抗氧化功能。
5、根据饲料配方(步骤3)，将当归乙醚提取物分别按0、1、2、3、4、5、6和7g/kg的浓度添加到饲料中，制成相应的8种颗粒饲料。
在最佳应激密度(0.97尾/L水)和以上相同养殖环境下，选择体重8.8±0.3g鲫鱼苗1020尾，随机分为9个处理组，每组4个鱼缸。9个处理组的鱼尾数分别为：15、30、30、30、30、30、30、30和30尾/缸，分别命名为对照(D)、诱导(Y)、1g(E1)、2g(E2)、3g(E3)、4g(E4)、5g(E5)、6g(E6)和7g(E7)组。9个处理组分别投喂含0、0、1、2、3、4、5、6和7g/kg当归乙醚提取物的饲料。60天后测定鲫的生长、摄食量和饲料效率和进行折线回归分析。
表3投喂当归乙醚提取物(EEE)对鲫鱼养殖密度应激的影响
注：数据以4个重复的平均数±标准差表示；在同一列数据中上标字母不同者表示差异显著(P<0.05)。
增重＝末重－初重；饲料效率＝100×增重/摄食量。
结果(见表3和图8)表明，投喂当归乙醚提取物恢复了鱼的生长、摄食量和饲料效率；当归乙醚提取物促生长的最佳添加浓度为4.30g/kg饲料。
6、在以上相同养殖环境下，选择体重25.17±1.05g鲤鱼苗210尾，随机分为7个处理组，每组3个鱼缸，每缸10尾鱼。在7个处理组鱼缸水体内溶解硫酸铜，使其浓度分别0.0、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0mg Cu/L水。投喂鱼粉豆粕型杂食性鱼饲料，四天后考察每个处理组的采食量和死亡率，实验结果见图9-10。由图可知，随着Cu浓度的提高鱼的摄食量逐渐降低；当Cu浓度增至0.8mg/L水时，鱼摄食量下降到最低水平；进一步提高Cu浓度达0.9mg/L水时，鱼出现死亡。因此，产生最大硫酸铜应激而不引起死亡的Cu浓度为0.8mg/L水。
7、在以上相同养殖环境下，选择相同体重鲤鱼苗210尾，随机分为7个处理组，每组3个鱼缸，每缸10尾鱼。在7个处理组鱼缸水体内分别溶解0.0、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2和4.0mg敌百虫/L水。四天后考察每个处理组的鱼侧翻率和死亡率，实验结果见图11-12。由图可知，随着敌百虫浓度的提高鱼的侧翻率逐渐升高；当敌百虫浓度增至2.4mg/L水时，鱼侧翻率达到最高水平；进一步提高敌百虫浓度达3.2mg/L水时，鱼出现死亡。因此，引起最大敌百虫应激而不引起鱼死亡的浓度为2.4mg/L水。
8、在以上相同养殖环境下，选择体重9.29±0.13g鲤鱼苗420尾，随机分为7个处理组，每组4个鱼缸，每缸15尾鱼。7个处理组分别投喂含0、1、2、3、4、5和6g/kg当归乙醚提取物的饲料。30天后，分别从每个处理组随机选择30尾鱼，平均分给3个鱼缸(每缸10尾鱼)；在每个鱼缸水体中溶入0.8mg Cu/L的硫酸铜。投喂鱼粉豆粕型杂食性鱼饲料，四天后考察每个处理组的鲤鱼摄食率和进行摄食恢复率折线回归分析。
表4投喂当归乙醚提取物(EEE)30天对鲤硫酸铜应激的影响
注：数据以3个重复的平均数±标准差表示，每个重复10尾鱼；在同一列数据中上标字母不同者表示
差异显著(P<0.05)。摄食率(％)＝摄食量/体重×100。
结果(见表4和图13)表明，投喂当归乙醚提取物抑制了硫酸铜诱导的鱼摄食率的降低；当归乙醚提取物恢复鱼摄食的最佳添加浓度为4.25g/kg饲料。
9、按步骤8投喂不同浓度当归乙醚提取物饲料30天后，分别从每个处理组随机选择30尾鱼，平均分给3个鱼缸(每缸10尾鱼)；在每个鱼缸水体中溶入2.4mg/L的敌百虫。四天后考察每个处理组的鲤鱼侧翻率和进行侧翻抑制率折线回归分析。
表5投喂当归乙醚提取物(EEE)30天对鲤敌百虫应激的影响
注：数据以3个重复的平均数±标准差表示，每个重复为4天侧翻数的平均值；在同一列数据中上标字母不同者表示差异显著(P<0.05)。侧翻率(％)＝侧翻鱼数量/鱼数量×100。
结果(见表5和图14)表明，投喂当归乙醚提取物抑制了敌百虫诱导的鲤鱼侧翻；当归乙醚提取物抑制鲤鱼侧翻的最佳添加浓度为4.18g/kg饲料。
综上所述，当归提取物作为淡水鱼抗应激剂能使淡水鱼抗养殖高密度、硫酸铜和敌百虫应激的能力提升，降低高密度养殖环境下淡水鱼的死亡率和发病率。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种当归提取物在制备淡水鱼抗应激剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗应激剂为抗养殖高密度、抗硫酸铜、抗敌百虫应激中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，将所述当归提取物添加入鱼饲料中，对淡水鱼进行投喂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述当归提取物在鱼饲料中的含量为4.18–7.0g/kg。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述当归提取物在饲料中的含量为4.30g/kg、4.25g/kg、4.18g/kg中的任意一种。
6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述当归提取物与饲料混合的方法如下：在饲料制备时，根据饲料配方计算出单位质量鱼饲料所需油脂的质量，将当归提取物均匀溶解在该油脂中，得到混合液，再将混合液混入制备饲料的其他原料中，进行饲料的制备。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述鱼饲料包含以下重量份的组分：鱼粉23-26份、豆粕30-33份、面粉36-38份、鱼油1-2份、大豆油1.5-2.5份、维生素添加剂0.5-1.5份、矿物添加剂0.5-1.5份；含粗蛋白33-36份、粗脂肪5-6.5份、磷0.7-1.5份；将当归提取物溶解在鱼油和/或大豆油中再与其它组分混合制备饲料。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述当归提取物加入油脂中后，以超声震荡30-50min使其混合均匀。
9.根据权利要求1至5任一项所述的应用，其特征在于，所述当归提取物为当归乙醚提取物。
10.一种当归提取物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
A1、将当归的根50℃以下干燥至恒重，粉碎过18目筛，获得当归粉末；
A2、一次提取：按当归粉末与环己烷1：6-8g/ml的比例混合，600-800转/分钟旋转搅拌5-7小时，将混合液过滤，获得无滤液的残渣；
A3、二次提取：将一次提取残渣与乙醚按1：6-8g/ml的比例混合，600-800转/分钟旋转搅拌5-7小时，将混合液过滤，获得澄清无残渣的滤液，将滤液减压蒸馏至恒重去除乙醚，获得当归乙醚提取物。
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