CN110051840A - Egfr/erk/trim32信号通路在促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞分化中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，具体涉及EGFR/ERK/TRIM32信号通路在促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞分化中的应用。本发明发现EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂以及TRIM32可用于促进脊髓损伤修复过程中神经干细胞向神经元分化。本发明发现脊髓损伤后，髓鞘蛋白通过激活EGFR/ERK信号通路最终导致其下游靶标TRIM32蛋白的抑制，进而抑制神经干细胞向神经元的分化。EGFR/ERK/TRIM32信号通路可以作为脊髓损伤修复的新的药物靶标，为脊髓损伤修复和治疗提供新的思路。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及EGFR/ERK/TRIM32信号通路在促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞分化中的应用。
背景技术
神经干细胞是中枢神经系统内具有自我复制更新和多向分化潜能的细胞，神经干细胞及其分化在神经损伤修复和退行性疾病中具有重要作用，如脊髓损伤、阿尔茨海默症、脑卒中等。神经干细胞散在分布于成年哺乳动物的大脑内，能分化为胶质细胞和神经元，同时体内的神经干细胞具有向损伤区迁移的能力，但迁移数量和再生能力有限，所以神经干细胞的定向分化是目前研究的热点。
近年来，脊髓损伤的发生率呈现逐年增高的趋势。脊髓损伤是脊柱损伤最严重的并发症，往往导致损伤节段以下肢体严重的功能障碍。研究表明，脊髓损伤后，在损伤部位会产生以髓鞘蛋白为首的抑制性微环境，髓鞘蛋白可以通过激活EGFR从而抑制神经元轴突的延伸，申请人前期的研究工作也证明了髓鞘蛋白也可以抑制神经干细胞向神经元分化。但是，关于髓鞘蛋白如何抑制神经干细胞向神经元分化目前仍为未知。因此，分析髓鞘蛋白抑制神经干细胞向神经元分化的机制，开发神经干细胞分化的药物靶标，对于脊髓损伤修复和治疗具有十分重要的意义。
发明内容
为解决现有技术中存在的技术问题，本发明的目的在于提供EGFR/ERK/TRIM32信号通路及其抑制剂和阻断剂在促进脊髓损伤后神经干细胞定向神经元分化中的应用。
本发明发现髓鞘蛋白通过激活EGFR/ERK信号通路抑制脊髓损伤后脊髓神经干细胞向神经元的定向分化，髓鞘蛋白能够抑制TRIM32的表达，而当EGFR/ERK通路被抑制时，髓鞘蛋白抑制TRIM32表达的作用降低且神经干细胞向神经元分化作用增强，同时ERK通过与TRIM32相互作用调控神经干细胞向神经元的分化，由此，本发明发现了一条新的调控脊髓损伤后神经干细胞分化的信号通路，即髓鞘蛋白通过EGFR/ERK/TRIM32信号通路，激活EGFR/ERK进而抑制TRIM32，导致脊髓神经干细胞向神经元分化的抑制。
具体地，本发明的技术方案如下：
第一方面，本发明提供EGFR/ERK/TRIM32信号通路，其中，髓鞘蛋白通过EGFR/ERK/TRIM32信号通路，激活EGFR/ERK进而抑制TRIM32，导致脊髓神经干细胞向神经元分化的抑制。
第二方面，本发明提供EGFR/ERK/TRIM32信号通路在促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞向神经元分化中的应用。
第三方面，本发明提供EGFR/ERK/TRIM32信号通路作为脊髓损伤后神经元修复或促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞向神经元分化的药物筛选靶点或药物靶点中的应用。
第四方面，本发明提供EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂在制备用于促进脊髓损伤后的神经元修复的产品中的应用。
第五方面，本发明提供EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂在制备用于促进脊髓损伤后的运动功能恢复的产品中的应用。
本发明中，EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂具有促进脊髓损伤后的脊髓神经干细胞向神经元定向分化的功能。
因此，上述EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂的应用为通过EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂促进脊髓损伤后的脊髓神经干细胞向神经元的定向分化实现。
本发明中，所述EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂为任一能够抑制或阻断EGFR/ERK/TRIM32信号通路信号传导的物质，包括但不限于多肽、蛋白质、酶、化合物、有机物、无机物等。
具体地，所述EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂为如下任一种：
(1)EGFR的抑制剂或阻断剂；
(2)ERK的抑制剂或阻断剂；
(3)EGFR/ERK信号通路的抑制剂或阻断剂；
(4)ERK与TRIM32相互作用的抑制剂或阻断剂。
优选地，所述EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂为选自Gefitinib、PD98059、Erlotinib HCl、Afatinib、AG-490、MK-8353、Ulixertinib、AZD0364、U0126中的一种或多种。
第六方面，本发明提供一种产品，所述产品包含EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂。
本发明中，所述产品具有如下任一功能：
(1)促进脊髓损伤后的神经元修复；
(2)促进脊髓损伤后的运动功能恢复；
(3)促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞向神经元的定向分化。
上述产品中，所述EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂为如下任意一种或多种：
(1)EGFR的抑制剂或阻断剂；
(2)ERK的抑制剂或阻断剂；
(3)EGFR/ERK信号通路的抑制剂或阻断剂；
(4)ERK与TRIM32相互作用的抑制剂或阻断剂；
优选地，所述EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂为选自Gefitinib、PD98059、Erlotinib HCl、Afatinib、AG-490、MK-8353、Ulixertinib、AZD0364、U0126中的一种或多种。
本发明发现TRIM32蛋白作为EGFR/ERK/TRIM32信号通路的效应蛋白，可通过提高TRIM32的表达，拮抗脊髓损伤后由髓鞘蛋白引起的神经干细胞向神经元的分化的抑制效应，促进脊髓损伤后的功能恢复。
第七方面，本发明提供TRIM32、含有TRIM32的生物材料或促进TRIM32表达的物质在制备用于促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞向神经元的定向分化的药物中的应用。
本发明中，所述TRIM32可来源于任一哺乳动物，包括但不限于人、小鼠、大鼠、猴子、狗等。
不同动物的TRIM32蛋白的氨基酸序列以及编码基因序列可通过NCBI数据库或Genbank公开的序列获得。例如：人TRIM32的NCBI数据库的登录号为Gene ID:22954；小鼠TRIM32的NCBI数据库的登录号为Gene ID:69807；大鼠TRIM32的NCBI数据库的登录号为Gene ID:313264；猴子TRIM32的NCBI数据库的登录号为Gene ID:702595；狗TRIM32的NCBI数据库的登录号为Gene ID:102152434。
本发明中，所述促进TRIM32表达的物质包括EGFR/ERK信号通路的抑制剂、TRIM32表达的激活剂。
优选地，所述EGFR/ERK信号通路的抑制剂包括Gefitinib、PD98059、ErlotinibHCl、Afatinib、AG-490、MK-8353、Ulixertinib、AZD0364、U0126中的一种或多种。所述TRIM32表达的激活剂包括TRIM32表达的转录激活剂、翻译激活剂或TRIM32的酶活性激活剂。
本发明中，所述生物材料包括但不限于表达盒、重组载体、重组微生物、宿主细胞或转基因细胞系等。
第八方面，本发明提供一种促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞向神经元定向分化的方法，为通过抑制或阻断EGFR/ERK/TRIM32信号通路，或通过提高TRIM32蛋白的表达促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞向神经元定向分化。
优选地，所述抑制或阻断EGFR/ERK/TRIM32信号通路为使用EGFR/ERK信号通路的抑制剂。
优选地，所述提高TRIM32蛋白的表达为通过过表达TRIM32蛋白或使用TRIM32的表达激活剂。
本发明具有如下有益效果：本发明发现了一条调控脊髓损伤过程中神经干细胞向神经元分化的信号通路EGFR/ERK/TRIM32，脊髓损伤过程中，髓鞘蛋白通过激活该信号通路最终导致TRIM32蛋白的抑制，进而抑制神经干细胞向神经元的分化。通过抑制或阻断EGFR/ERK/TRIM32信号通路或提高TRIM32蛋白的表达可以拮抗脊髓损伤后由髓鞘蛋白引起的脊髓神经干细胞向神经元定向分化的抑制效应，促进脊髓损伤后的功能恢复。EGFR/ERK/TRIM32信号通路可以作为脊髓损伤修复的新的治疗和药物靶标，为脊髓损伤修复提供新的思路。
附图说明
图1为本发明实施例1中EGFR/ERK信号通路抑制剂对神经干细胞分化的影响，其中，a为神经干细胞体外分化的免疫荧光结果，Control代表正常分化组，Myelin代表加入髓鞘蛋白组，DMSO代表溶解抑制剂的溶剂DMSO的平行对照组，Gefitinib为EGFR抑制剂，PD98059为ERK抑制剂，MK2206 2HCl为Akt抑制剂。比例尺，50μm；b为对a中神经元分化比例的统计结果；c为western-blot检测不同分化条件对神经干细胞向神经元分化的影响，Tuj-1和NeuN为神经元marker，Tubulin作为内参；d为对c中western-blot条带的灰度统计结果。
图2为本发明实施例2和3中TRIM32作为EGFR-ERK通路下游靶标调控神经干细胞的分化，其中，a为髓鞘蛋白抑制微环境条件下，在神经干细胞分化过程中加入Gefitinib和PD98059，在第6天通过western-blot检测Tuj-1和TRIM32的表达量，以Tubulin作为内参。Control为正常分化组，Gefitinib为EGFR抑制剂，PD98059为ERK抑制剂，Myelin代表加入髓鞘蛋白，Tuj-1为神经元marker，Tubulin作为内参；b为对a中western-blot条带的灰度统计结果；c为免疫共沉淀实验检测ERK与TRIM32间的相互作用；d为慢病毒介导TRIM32在神经干细胞中过表达后，髓鞘蛋白对神经元分化的影响。比例尺，50μm。
图3为本发明实施例2和3中利用TRIM32蛋白体内调控脊髓全横断损伤后损伤区神经干细胞的分化，其中，a为在体内，将TRIM32过表达的CD511B-TRIM32病毒和空载体CD511B病毒在脊髓损伤后注射到脊髓中，然后通过免疫荧光染色检测DCX的表达情况。比例尺(左边和右边)，25μm，放大图片比例尺(中间)，7.5μm。DCX为早期神经元marker，2w为实验2周后取材观察，4w为实验4周后取材观察；b为大鼠脊髓损伤后从术后到第12周间的BBB功能评分，通过双盲的方式进行BBB评分，每周一次，SCI+Gefitinib组和SCI+PD98059组表现出较高的BBB得分；c为在第12周时，使用Tuj-1抗体和NeuN抗体进行免疫荧光染色表明损伤区的神经发生，左边图片比例尺，50μm，右边进一步放大图比例尺，10μm；d为脊髓损伤2周后，用DCX抗体和GFP抗体进行免疫荧光染色证明损伤区的神经发生，SCI+Gefitinib组和SCI+PD98059组，损伤区有GFP和DCX共标的阳性细胞，左图比例尺，50μm，右图z轴放大图比例尺，10μm，脊髓损伤4周后，用Tuj-1抗体和GFP抗体进行免疫荧光染色证明损伤区的神经发生，损伤区有GFP和Tuj-1共标的阳性细胞，左边图片比例尺，50μm，右边进一步放大图比例尺，25μm，GFP代表神经干细胞。
图4为本发明实施例3中脊髓损伤治疗后TRIM32表达的检测，EGFR或ERK抑制剂治疗脊髓损伤后，通过免疫荧光染色检测损伤区TRIM32的表达，左边图片的比例尺，500μm，(1-6)中对应左图放大图的比例尺，50μm。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1 EGFR/ERK/TRIM32信号通路的发现
1、髓鞘蛋白通过激活EGFR-ERK通路抑制神经干细胞向神经元分化
以SD大鼠出生后12h的乳鼠端脑神经干细胞为实验对象，在体外分化过程中单独加入髓鞘蛋白(终浓度为10μg/mL)，或在加入髓鞘蛋白的同时分别加入EGFR抑制剂Gefitinib(终浓度为1μM)，ERK抑制剂PD98059(终浓度为1μM)，Akt抑制剂MK2206 2HCl(终浓度为100nM)，通过免疫荧光实验进行分析，结果表明，髓鞘蛋白通过激活EGFR/ERK信号通路抑制神经干细胞向神经元分化(如图1的a和b所示)。
以SD大鼠出生后12h的乳鼠端脑神经干细胞为实验对象，在体外分化过程中单独加入髓鞘蛋白(终浓度为10μg/mL)，或在加入髓鞘蛋白的同时分别加入EGFR抑制剂Gefitinib(终浓度为1μM)，ERK抑制剂PD98059(终浓度为1μM)，Akt抑制剂MK2206 2HCl(终浓度为100nM)，通过western-blot检测分析，结果表明，当采用小分子抑制剂Gefitinib或PD98059将EGFR/ERK通路阻断后，髓鞘蛋白对神经元分化的抑制效应降低，神经元的分化比例升高(如图1的c和d所示)。
2、髓鞘蛋白通过激活EGFR-ERK通路抑制TRIM32的表达
以SD大鼠出生后12h的乳鼠端脑神经干细胞为实验对象，在体外分化过程中单独加入髓鞘蛋白(终浓度为10μg/mL)，或在加入髓鞘蛋白的同时加入EGFR抑制剂Gefitinib(终浓度为1μM)，ERK抑制剂PD98059(终浓度为1μM)，通过western-blot实验，结果表明，当EGFR-ERK通路被抑制时，髓鞘蛋白抑制TRIM32表达的效应降低且神经元分化作用增强(如图2的a和b所示)。
以SD大鼠出生后12h的乳鼠端脑神经干细胞为实验对象，在体外正常分化6天后，收集细胞，裂解蛋白，通过免疫共沉淀(IP)实验，证明ERK可以与TRIM32间发生相互作用(如图2的c所示)。
实施例2 EGFR/ERK/TRIM32信号通路抑制剂在促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞分化的应用
以成年SD大鼠为实验对象，在脊髓全横断损伤后，通过原位给予EGFR抑制剂Gefitinib(浓度为1μM，9-10μL，满足终浓度为50μM/kg)或ERK抑制剂PD98059(浓度为1μM，3.6-4μL，满足终浓度为20μM/kg)，然后持续3天腹腔注射EGFR抑制剂Gefitinib(浓度为30mg/mL，450-500μL，满足终浓度为75mg/kg)和ERK抑制剂PD98059(浓度为20mg/mL，90-100μL，满足终浓度为10mg/kg)。通过BBB评分和组织免疫荧光染色实验分析，结果表明，脊髓全横断损伤后，通过腹腔注射EGFR/ERK抑制剂，可以提高损伤区TRIM32蛋白的表达(如图4所示)，在TRIM32过表达的基础上，可以观察到损伤区有新的Tuj-1阳性的神经元以及NeuN阳性的成熟神经元出现(如图3的c所示)。
以Nestin-Cre小鼠为实验对象，在脊髓全横断损伤后，通过连续5天腹腔注射他莫昔芬进行诱导，同时连续7天腹腔注射EGFR抑制剂Gefitinib(150mg/mL，30μL，满足终浓度为150mg/kg)或ERK抑制剂PD98059(20mg/mL，30μL，满足终浓度为20mg/kg)，分别在第2周和第4周时取材，通过免疫荧光染色，利用谱系示踪的方法进一步证明这些神经元是由Nestin阳性的神经干细胞分化而来(如图3的d所示)。
以成年SD大鼠为实验对象，在脊髓全横断损伤后，通过原位给予EGFR抑制剂Gefitinib(浓度为1μM，9-10μL，满足终浓度为50μM/kg)或ERK抑制剂PD98059(浓度为1μM，3.6-4μL，满足终浓度为20μM/kg)，然后连续3天腹腔注射EGFR抑制剂Gefitinib(浓度为30mg/mL，450-500μL，满足终浓度为75mg/kg)或ERK抑制剂PD98059(浓度为20mg/mL，90-100μL，满足终浓度为10mg/kg)。通过BBB评分实验分析，结果表明，治疗组动物的运动功能得到恢复(如图3的b所示)。
实施例3 TRIM32在促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞分化中的应用
以SD大鼠出生后12h的乳鼠端脑神经干细胞为实验对象，通过慢病毒介导TRIM32(氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示)在神经干细胞中过表达后，设置加入髓鞘蛋白组和不加入髓鞘蛋白组，结果表明，在神经干细胞中过量表达TRIM32蛋白，可以拮抗髓鞘蛋白对神经干细胞向神经元定向分化的抑制作用，促进神经干细胞向神经元分化(如图2的d所示)。
以成年SD大鼠为实验对象，在脊髓全横断损伤后，通过原位给予EGFR抑制剂Gefitinib(浓度为1μM，9-10μL，满足终浓度为50μM/kg)或ERK抑制剂PD98059(浓度为1μM，3.6-4μL，满足终浓度为20μM/kg)，然后连续3天腹腔注射EGFR抑制剂Gefitinib(浓度为30mg/mL，450-500μL，满足终浓度为75mg/kg)或ERK抑制剂PD98059(浓度为20mg/mL，90-100μL，满足终浓度为10mg/kg)。在第2周和第4周时分别取材，通过免疫荧光染色实验分析，结果表明，在大鼠体内通过慢病毒介导TRIM32蛋白的过表达，观察到脊髓全横断损伤后在损伤区有新的神经元产生(如图3的a所示)。通过EGFR抑制剂Gefitinib或ERK抑制剂PD98059给药治疗后，对TRIM32蛋白的表达进行检测，结果如图4所示，结果表明，Gefitinib或PD98059治疗后，TRIM32蛋白的表达显著提高。
综上所述，本发明首次发现髓鞘蛋白通过激活EGFR/ERK通路抑制脊髓损伤过程中脊髓神经干细胞向神经元的定向分化，并首次证明了TRIM32作为ERK下游的靶标参与调控脊髓损伤过程中神经干细胞向神经元的分化过程。本发明的研究结果表明阻抑EGFR/ERK通路可以上调TRIM32的表达，进而可以拮抗髓鞘蛋白对神经干细胞分化的抑制作用，促进脊髓全横断损伤后损伤区Nestin阳性的神经干细胞向神经元分化，促进动物运动功能的恢复。鉴于EGFR/ERK/TRIM32信号通路以及TRIM32作为EGFR/ERK通路的下游靶标调控神经干细胞向神经元分化过程中的重要作用，可以将EGFR/ERK/TRIM32信号通路或TRIM32作为一个新的药物靶点，为脊髓损伤修复提供新的治疗靶标。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 中国科学院遗传与发育生物学研究所
<120> EGFR/ERK/TRIM32信号通路在促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞分化中的应用
<130> KHP191111323.2
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 655
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Met Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ser His Leu Asn Leu Asp Ala Leu Arg
1 5 10 15
Glu Val Leu Glu Cys Pro Ile Cys Met Glu Ser Phe Thr Glu Glu Gln
20 25 30
Leu Arg Pro Lys Leu Leu His Cys Gly His Thr Ile Cys Arg Gln Cys
35 40 45
Leu Glu Lys Leu Leu Ala Ser Ser Ile Asn Gly Val Arg Cys Pro Phe
50 55 60
Cys Ser Lys Ile Thr Arg Ile Thr Ser Leu Thr Gln Leu Thr Asp Asn
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu Lys Ile Ile Asp Thr Ala Gly Leu Ser Glu Ala Val
85 90 95
Gly Leu Leu Met Cys Arg Ala Cys Gly Arg Arg Leu Pro Arg Gln Phe
100 105 110
Cys Arg Ser Cys Gly Leu Val Leu Cys Glu Pro Cys Arg Glu Ala Asp
115 120 125
His Gln Pro Pro Gly His Cys Thr Leu Pro Val Lys Glu Ala Ala Glu
130 135 140
Glu Arg Arg Arg Asp Phe Gly Glu Lys Leu Thr Arg Leu Arg Glu Leu
145 150 155 160
Thr Gly Glu Leu Gln Arg Arg Lys Ala Ala Leu Glu Gly Val Ser Arg
165 170 175
Asp Leu Gln Ala Arg Tyr Lys Ala Val Leu Gln Glu Tyr Gly His Glu
180 185 190
Glu Arg Arg Val Gln Glu Glu Leu Ala Arg Ser Arg Lys Phe Phe Thr
195 200 205
Gly Ser Leu Ala Glu Val Glu Lys Ser Asn Ser Gln Val Val Glu Glu
210 215 220
Gln Ser Tyr Leu Leu Asn Ile Ala Glu Val Gln Ala Val Ser Arg Cys
225 230 235 240
Asp Tyr Phe Leu Ala Lys Ile Lys Gln Ala Asp Val Ala Leu Leu Glu
245 250 255
Glu Thr Ala Asp Glu Glu Glu Pro Glu Leu Thr Ala Ser Leu Pro Arg
260 265 270
Glu Leu Thr Leu Gln Asp Val Glu Leu Leu Lys Val Gly His Val Gly
275 280 285
Pro Leu Gln Ile Gly Gln Ala Val Lys Lys Pro Arg Thr Val Asn Met
290 295 300
Glu Asp Ser Trp Ala Val Glu Glu Gly Ala Ala Ser Ser Ala Ser Ala
305 310 315 320
Ser Val Thr Phe Arg Glu Met Asp Met Ser Pro Glu Glu Val Val Pro
325 330 335
Ser Pro Arg Ala Ser Pro Ala Lys Gln Arg Ser Ser Glu Ala Ala Ser
340 345 350
Ser Ile Gln Gln Cys Leu Phe Leu Lys Lys Met Gly Ala Lys Gly Ser
355 360 365
Thr Pro Gly Met Phe Asn Leu Pro Val Ser Leu Tyr Val Thr Ser Gln
370 375 380
Ser Glu Val Leu Val Ala Asp Arg Gly Asn Tyr Arg Ile Gln Val Phe
385 390 395 400
Asn Arg Lys Gly Phe Leu Lys Glu Ile Arg Arg Ser Pro Ser Gly Ile
405 410 415
Asp Ser Phe Val Leu Ser Phe Leu Gly Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr
420 425 430
Pro Leu Ser Val Ala Met Asn Cys His Gly Leu Ile Gly Val Thr Asp
435 440 445
Ser Tyr Asp Asn Ser Leu Lys Val Tyr Thr Leu Asp Gly His Cys Val
450 455 460
Ala Cys His Arg Ser Gln Leu Ser Lys Pro Trp Gly Ile Thr Ala Leu
465 470 475 480
Pro Ser Gly Gln Phe Val Val Thr Asp Val Glu Gly Gly Lys Leu Trp
485 490 495
Cys Phe Thr Val Asp Arg Gly Ala Gly Val Val Lys Tyr Ser Cys Leu
500 505 510
Cys Ser Ala Val Arg Pro Lys Phe Val Thr Cys Asp Ala Glu Gly Thr
515 520 525
Val Tyr Phe Thr Gln Gly Leu Gly Leu Asn Val Glu Asn Arg Gln Asn
530 535 540
Glu His His Leu Glu Gly Gly Phe Ser Ile Gly Ser Val Gly Pro Asp
545 550 555 560
Gly Gln Leu Gly Arg Gln Ile Ser His Phe Phe Ser Glu Asn Glu Asp
565 570 575
Phe Arg Cys Ile Ala Gly Met Cys Val Asp Ala Arg Gly Asp Leu Ile
580 585 590
Val Ala Asp Ser Ser Arg Lys Glu Ile Leu His Phe Pro Lys Gly Gly
595 600 605
Gly Tyr Ser Val Leu Ile Arg Glu Gly Leu Thr Cys Pro Val Gly Ile
610 615 620
Ala Leu Thr Pro Lys Gly Gln Leu Leu Val Leu Asp Cys Trp Asp His
625 630 635 640
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645 650 655
<210> 2
<211> 1968
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
atggctgcgg ctgcagcagc gtctcacctg aacctggatg ccctccggga agtgctagaa 60
tgtcccatct gcatggaatc cttcactgaa gagcagctgc ggcccaagct gctgcactgt 120
ggccatacca tctgccgcca gtgtctggag aagctcctgg ccagtagcat caatggtgtc 180
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tgtgaaccct gccgagaggc agatcaccaa cctcctggcc actgcacact ccctgtcaag 420
gaggcagctg aggaacgtcg gagggacttt ggggagaagt tgactcgtct aagggaactt 480
actggagagc tgcaaaggag gaaggcagct ttagagggtg tctctagaga tcttcaggca 540
aggtataagg ctgttcttca agaatatggc cacgaggaac gcagggtcca ggaagagcta 600
gcccgctctc ggaagttctt cacaggctct ttggctgagg ttgagaagtc caacagccaa 660
gtagtagagg aacagagcta cctactcaac attgcggagg tgcaggccgt gtctcgctgt 720
gactactttc tagccaagat caagcaagct gatgtagcac tcctggagga gacagcagat 780
gaggaggagc cagagctcac tgcaagccta ccccgggagc ttaccctgca agatgtggag 840
cttcttaaag taggacatgt tggtcctctg caaattggcc aggctgttaa gaagccccgg 900
acagttaaca tggaagattc ctgggcagtg gaggagggag cagcatcttc tgcctcagcc 960
tctgtaacct ttagagagat ggacatgagc cctgaagaag tagttcccag ccctagggct 1020
tcacctgcga aacagcggag ttctgaggca gcctccagta tccaacagtg tctctttctc 1080
aagaagatgg gagcgaaagg cagcactcca ggcatgttca accttccagt cagtctctat 1140
gtgaccagtc agagtgaggt gctggttgca gaccggggca actatcgcat acaagtgttc 1200
aaccgcaaag gctttttgaa ggagatccgc cgcagcccca gtggcattga cagctttgtg 1260
ctaagcttcc ttggagccga cttgcccaat ctcactcctc tttcagtggc catgaactgc 1320
catgggctga ttggtgtcac tgacagctat gacaactccc ttaaagtcta taccttggat 1380
ggccactgtg tggcctgtca caggagccag ctgagcaaac catggggcat cacagcccta 1440
ccgtctggcc agtttgttgt gactgatgtg gaaggcggga agctctggtg tttcactgtg 1500
gaccgaggag ctggagtagt caaatacagc tgcctctgca gtgctgtgag gcccaagttt 1560
gtcacctgtg atgctgaagg cacagtctat ttcacccaag gcttgggtct caatgtggaa 1620
aaccgacaga atgaacacca cctggagggt ggcttctcca tcggctctgt gggccccgat 1680
gggcagctgg gccgacagat cagccacttc ttctctgaga atgaagattt ccgctgcatc 1740
gctggcatgt gtgtggatgc tcggggtgac ctcattgtgg ctgatagcag ccgcaaggaa 1800
atcctccatt ttcccaaggg cggtggctac agcgtcctta ttcgagaggg ccttacctgt 1860
ccagtgggca tcgccctcac acccaagggg cagctgctgg tcttggactg ttgggatcac 1920
tgtgtcaaga tctacagcta ccatctgaga agatactcta ccccttag 1968
Claims (10)
1.EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂在制备用于促进脊髓损伤后的神经元修复的产品中的应用。
2.EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂在制备用于促进脊髓损伤后的运动功能恢复的产品中的应用。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述应用为通过EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂促进脊髓损伤后的脊髓神经干细胞向神经元的定向分化。
4.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂为如下任一种：
(1)EGFR的抑制剂或阻断剂；
(2)ERK的抑制剂或阻断剂；
(3)EGFR/ERK信号通路的抑制剂或阻断剂；
(4)ERK与TRIM32相互作用的抑制剂或阻断剂。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂为选自Gefitinib、PD98059、Erlotinib HCl、Afatinib、AG-490、MK-8353、Ulixertinib、AZD0364、U0126中的一种或多种。
6.一种产品，其特征在于，包含EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂；
所述产品具有如下任一功能：
(1)促进脊髓损伤后的神经元修复；
(2)促进脊髓损伤后的运动功能恢复；
(3)促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞向神经元的定向分化。
7.根据权利要求6所述的产品，其特征在于，所述EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂为如下任意一种或多种：
(1)EGFR的抑制剂或阻断剂；
(2)ERK的抑制剂或阻断剂；
(3)EGFR/ERK信号通路的抑制剂或阻断剂；
(4)ERK与TRIM32相互作用的抑制剂或阻断剂；
优选地，所述EGFR/ERK/TRIM32信号通路的抑制剂或阻断剂为选自Gefitinib、PD98059、Erlotinib HCl、Afatinib、AG-490、MK-8353、Ulixertinib、AZD0364、U0126中的一种或多种。
8.TRIM32在制备用于促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞向神经元的定向分化的药物中的应用。
9.含有TRIM32的生物材料或促进TRIM32表达的物质在制备用于促进脊髓损伤后脊髓神经干细胞向神经元的定向分化的药物中的应用。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述促进TRIM32表达的物质包括EGFR/ERK信号通路的抑制剂、TRIM32表达的激活剂；
优选地，所述EGFR/ERK信号通路的抑制剂包括Gefitinib、PD98059、Erlotinib HCl、Afatinib、AG-490、MK-8353、Ulixertinib、AZD0364、U0126中的一种或多种；
所述TRIM32表达的激活剂包括TRIM32表达的转录激活剂、翻译激活剂或TRIM32的酶活性激活剂。
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