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Abstract

本发明涉及肺病的体外诊断领域，尤其涉及一种慢性阻塞性肺疾病的检测试剂盒。本发明的试剂盒，通过检测血液中Thrombospondin‑2的含量，来实现慢性阻塞性肺疾病的诊断。该试剂盒简单有效，具有良好的应用前景。

Description

一种慢性阻塞性肺疾病检测试剂盒
技术领域
本发明涉及肺病的体外诊断领域，尤其涉及一种慢性阻塞性肺疾病的检测试剂盒。
背景技术
慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是一种具有气流阻塞特征的慢性支气管炎和(或)肺气肿，可进一步发展为肺心病和呼吸衰竭的常见慢性疾病。与有害气体及有害颗粒的异常炎症反应有关，致残率和病死率很高，全球40岁以上发病率已高达9％～10％。
目前COPD的诊断主要依靠肺功能检查、胸部X线检查、胸部CT检查等，但是肺功能检查(肺活量测定法)，是一种费时且昂贵的规程，只能由专科肺内科医师实施。但是上述方法不能有效的和其他疾病诸如哮喘、支气管炎、肺纤维化、结核区分开来。因此寻找COPD特异性的诊断方法对于疾病的预防和治疗具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种COPD标志物和试剂盒。
技术方案如下：
一种慢性阻塞性肺疾病标志物，所述标志物是血液中的Thrombospondin-2蛋白。
前述标志物在制备慢性阻塞性肺疾病试剂盒中的用途。
一种慢性阻塞性肺疾病检测试剂盒，所述试剂盒包括检测Thrombospondin-2蛋白的试剂。
如前述的试剂盒，所述检测Thrombospondin-2蛋白的试剂为免疫组化检测方法用试剂。
如前述的试剂盒，所述检测Thrombospondin-2蛋白的试剂为Western Blot检测方法用试剂。
如前述的试剂盒，所述检测Thrombospondin-2蛋白的试剂为ELISA检测方法用试剂。
如前述的试剂盒，所述检测Thrombospondin-2蛋白的试剂为TMT定量蛋白质组学方法用试剂。
如前述的试剂盒，所述检测Thrombospondin-2蛋白的试剂为R&D SystemsLuminex液相芯片检测用试剂。
如前述的任一试剂盒，它还包括蛋白纯化试剂。
检测血液中Thrombospondin-2蛋白的试剂在制备慢性阻塞性肺疾病检测试剂盒中的用途。
如前所述的用途，所述检测血液中Thrombospondin-2蛋白的试剂为免疫组化检测方法用试剂、Western Blot检测方法用试剂、ELISA检测方法用试剂、TMT定量蛋白质组学方法用试剂或R&D Systems Luminex液相芯片检测用试剂。
进一步地，所述试剂还包括蛋白纯化试剂。
发明人偶然发现，COPD患者的血液中的Thrombospondin-2蛋白含量显著高于健康人群，AECOPD(慢性阻塞性肺疾病急性加重)患者的血液中Thrombospondin-2蛋白含量又显著高于COPD患者。
本发明提供的标志物可以被多种蛋白检测方法检测得到，可开发成多种COPD检测试剂盒。
本发明的试剂盒能够提供快速准确地对COPD进行筛查，为医生提供诊断依据，具有良好的市场前景。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过具体实施方式对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1：健康对照者、COPD患者、AECOPD患者血液中Thrombospondin-2蛋白含量的差异。
图2：血液中C-反应蛋白(CRP)与血液中Thrombospondin-2蛋白的含量间的关系。
图3：FEV1/FVC(％)与血液中Thrombospondin-2蛋白的含量间的关系。
图4：FEV1/Pre(％)与血液中Thrombospondin-2蛋白的含量间的关系。
具体实施方式
实施例1 Thrombospondin-2蛋白与COPD的关联性分析
1.方法
1.1被检对象
纳入健康对照者80人，COPD患者126人，AECOPD患者146人。被检对象人群在实验前均已经知情并同意。
1.2肺功能检查
检查步骤：
(1)询问病史，操作前应向患者说明检查目的、检查过程及注意事项；
(2)输入患者基本信息；
(3)用鼻甲将患者鼻子夹住，指导患者保持用嘴呼吸；
(4)尽可能含紧一次性口含嘴，保证测试过程中不漏气；
(5)根据检查项目通过口令指导患者配合即时做呼气和吸气动作；
(6)采集数据，分析并打印报告；
主要指标含义：
(1)FEV1/FVC(％)：第一秒用力呼气容积占用力肺活量的比值，用于判断受试者是否具有气道气流受限；
(2)FEV1/Pre(％)：第一秒用力呼气容积实测值占预计值百分比，用于评估受试者气道气流受限的严重程度；
1.2检测
留取被检对象的血液，离心获得血清，利用R&D Systems Luminex液相芯片检测血清中Thrombospondin-2蛋白和C-反应蛋白的含量，具体地，包括如下步骤：
(1)重悬混匀稀释的检测混合液，向每个酶标板孔内加入50μL混合液；
(2)加入50μL标准品或样本，封膜后，室温摇晃孵育2小时；
(3)100μL洗板液洗板3次；
(4)每孔内加入50μL生物素标记的抗体混合物，封膜后室温摇晃孵育30min；
(5)100μL洗板液洗板3次；
(6)向每孔中加入100μL显色液，室温摇晃混匀2min；
(7)90min内读板(Bio-Rad)；
2.结果
2.1血液中Thrombospondin-2蛋白含量与COPD的关系
如图1所示，COPD患者的血液中的Thrombospondin-2蛋白含量显著高于健康人群，AECOPD患者的血液中Thrombospondin-2蛋白含量又显著高于COPD患者。
2.2Thrombospondin-2蛋白与C-反应蛋白的关系
C-反应蛋白是在机体受到感染或组织损伤时血浆中一些急剧上升的蛋白质(急性蛋白)，它可激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用，清除入侵机体的病原微生物和损伤，坏死，凋亡的组织细胞。C-反应蛋白在多种炎症性疾病中均有升高，既往发现COPD患者血液中C-反应蛋白显著增加，表明C-反应蛋白与COPD患者疾病状态及炎症严重程度有关。
如图2所示，血清中Thrombospondin-2蛋白与CRP含量正相关，表明Thrombospondin-2与慢阻肺炎症严重程度正相关。
2.3Thrombospondin-2蛋白与FEV1/FVC(％)的关系
FEV1/FVC(％)通常用于评估患者是否具有呼吸气流受限，该值低于70％，确认为COPD患者。
如图3所示，Thrombospondin-2蛋白与FEV1/FVC(％)负相关，表明Thrombospondin-2蛋白在血液中的含量与COPD患病正相关。
2.4Thrombospondin-2蛋白与FEV1/Pre(％)的关系
FEV1/Pre(％)通常用于评估COPD患者呼吸气流受限的严重程度，该值越低，患者COPD呼吸气流受限程度越重。
如图4所示，Thrombospondin-2蛋白与FEV1/Pre(％)负相关，表明Thrombospondin-2蛋白在血液中的含量与COPD呼吸气流受限程度及疾病严重程度正相关。
实施例2本发明的试剂盒
1.本发明的试剂盒的组成
2.试剂盒使用方法
(1)向96孔板中每孔内加入50μL标准品或样本，封膜后，室温摇晃孵育2小时；
(3)100μL洗板液洗板3次；
(4)每孔内加入50μL生物素标记的二抗，封膜后室温摇晃孵育30min；
(5)100μL洗板液洗板3次；
(6)向每孔中加入50μL显色底物，室温摇晃混匀2min；
(7)酶标仪读数；
综上，本发明通过对血液中Thrombospondin-2protein的检测，可实现对COPD的有效检测。

Claims (10)

1.一种慢性阻塞性肺疾病检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括检测血液中Thrombospondin-2蛋白的试剂。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述检测Thrombospondin-2蛋白的试剂为免疫组化检测方法用试剂。
3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述检测Thrombospondin-2蛋白的试剂为Western Blot检测方法用试剂。
4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述检测Thrombospondin-2蛋白的试剂为ELISA检测方法用试剂。
5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述检测Thrombospondin-2蛋白的试剂为TMT定量蛋白质组学方法用试剂。
6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述检测Thrombospondin-2蛋白的试剂为R&D Systems Luminex液相芯片检测用试剂。
7.如权利要求1～6任一所述的试剂盒，其特征在于：它还包括蛋白纯化试剂。
8.检测血液中Thrombospondin-2蛋白的试剂在制备慢性阻塞性肺疾病检测试剂盒中的用途。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述检测血液中Thrombospondin-2蛋白的试剂为免疫组化检测方法用试剂、Western Blot检测方法用试剂、ELISA检测方法用试剂、TMT定量蛋白质组学方法用试剂或R&D Systems Luminex液相芯片检测用试剂。
10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述试剂还包括蛋白纯化试剂。
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