CN110036028B - 抗il1-rap抗体 - Google Patents

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Abstract

本文中提供了抗体特异性的IL1‑RAP。

Description

抗IL1-RAP抗体
相关申请的交叉引用
本申请要求于2016年10月16日递交的美国临时申请第62/408,807号、于2016年11月23日递交的美国临时申请第62/425,970号和于2017年10月10日递交的国际申请第PCT/US2017/055994号的递交日期的权益，所有这些申请均通过引用整体并入本文。
背景技术
白介素-1(IL1)是免疫系统介导的急性和慢性炎症反应的关键调节因子。白介素-1受体辅助蛋白(IL1-RAP，亦称IL-1R3)是在IL1受体信号传导复合物中发挥功能的IL1的共受体，且在一些情形下对于将细胞膜事件与下游信号传导通路连接是必要的。IL-1诱导感染、组织损伤和压力期间急性期和促炎性蛋白的合成，在哺乳动物免疫中起着重要作用。
IL1-RAP也表达于癌细胞和癌症干细胞(“CSC”)上，这些细胞为能够产生额外的癌细胞的细胞。特别地，IL1-RAP在CSC中高度表达，后者在具有不良预后的急性髓细胞性白血病(AML)和骨髓增生异常综合症(MDSs)中普遍存在。因此，IL1-RAP被提议作为有前景的靶标。Barreyro et al.,Blood 2012；120(6):1290-1298。
化疗的一个主要的局限为抗癌药物普遍不能区分正常细胞和癌细胞。抗肿瘤剂的主要类群的几乎所有成员对正常细胞均具有相当的毒性。
特异性靶向癌细胞的组合物可以避免这一问题。然而，现有的癌症治疗并不靶向CSC。由于这一原因，现有的化疗策略即使在特异性递送至癌细胞时，并不有效清除癌症。复发的风险仍然存在，因为存活的CSC能够产生新的癌细胞。
通过差异性地靶向患病组织，抗体提供了相当的治疗机会，以改善靶向的患病的和非患病的组织之间的区分。
US2015/0315279涉及结合人IL1RAP的细胞外膜-锚定-近侧区的抗ILRAP抗体。
发明概述
在一个方面，本文中提供了分离的抗IL1-RAP抗体，其包含可变的轻链和可变的重链，其中：a)所述可变的轻链包含这样的序列，其与选自以下的鼠抗体轻链序列具有至少90％的序列同一性：54.9D7、56.12G6、2H8、50.3G7、54.15B5、42.1D3、54.8H8、54.9E9、50.6C12、57.7A9、46.8G1、42.3G6、46.1D2、41.10C2、46.2C2、44.5D2；和/或b)所述可变的重链包含这样的序列，其与选自以下的鼠抗体重链序列具有至少90％的序列同一性：54.9D7、56.12G6、2H8、50.3G7、54.15B5、42.1D3、54.8H8、54.9E9、50.6C12、57.7A9、46.8G1、42.3G6、46.1D2、41.10C2、46.2C2、44.5D2。在一个实施方案中，所述抗体以相比其结合可溶性IL1-RAP更大的亲和力(例如，至少大2倍、5倍、10倍或100倍的亲和力中的任一个)结合受体IL1-RAP。在另一个实施方案中，所述序列同一性为至少95％、96％、97％、98％或99％。
在另一个方面，本文中提供了抗IL1-RAP抗体，其包含可变的轻链和可变的重链，其中：a)所述可变的轻链包含这样的序列，其具有与选自以下的抗体的鼠抗体轻链CDRL1、CDRL2和CDRL3序列具有至少95％的序列同一性的CDRL1、CDRL2和CDRL3：54.9D7、56.12G6、2H8、50.3G7、54.15B5、42.1D3、54.8H8、54.9E9、50.6C12、57.7A9、46.8G1、42.3G6、46.1D2、41.10C2、46.2C2、44.5D2；和/或b)所述可变的重链包含这样的序列，其具有与选自以下的抗体的鼠抗体重链CDRH1、CDRH2、CDRH3序列具有至少95％的序列同一性的CDRH1、CDRH2、CDRH3：54.9D7、56.12G6、2H8、50.3G7、54.15B5、42.1D3、54.8H8、54.9E9、50.6C12、57.7A9、46.8G1、42.3G6、46.1D2、41.10C2、46.2C2、44.5D2，其中所述抗体以相比其结合可溶性IL1-RAP更大的亲和力(例如，至少大2倍、5倍、10倍或100倍的亲和力中的任一个)结合受体IL1-RAP。在一个实施方案中，所述CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3具有来自选自以下的抗体的序列：
在另一个方面，提供了(任选地分离的)抗IL1-RAP抗体，其包含：(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区，和(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区，其中
所述CDR L1具有这样的序列，其与RASQSVSTSGYSSMH(SEQ ID NO:10)的序列具有至少90％的序列同一性(例如，相比其具有0、1或2个保守的或非保守的氨基酸取代)，
所述CDR L2具有这样的序列，其与YASDLES(SEQ ID NO:11)的序列具有至少90％的序列同一性(例如，相比其具有0、1或2个保守的或非保守的氨基酸取代)，
所述CDR L3具有这样的序列，其与HHSWGIPMYT(SEQ ID NO:12)的序列具有至少90％的序列同一性(例如，相比其具有0、1或2个保守的或非保守的氨基酸取代)，
所述CDR H1具有这样的序列，其与GYIFITY(SEQ ID NO:7)的序列具有至少90％的序列同一性(例如，相比其具有0、1或2个保守的或非保守的氨基酸取代)，
所述CDR H2具有这样的序列，其与FPASGT(SEQ ID NO:8)的序列具有至少90％的序列同一性(例如，相比其具有0、1或2个保守的或非保守的氨基酸取代)，并且
所述CDR H3具有这样的序列，其与TDFYRYDGGYALDY(SEQ ID NO:9)的序列具有至少90％的序列同一性(例如，相比其具有0、1或2个保守的或非保守的氨基酸取代)。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的CDR L1具有RASQSVSTSGYSSMH(SEQ ID NO:10)的序列，所述分离的抗体的CDR L2具有YASDLES(SEQ ID NO:11)的序列，所述分离的抗体的CDR L3具有HHSWGIPMYT(SEQ ID NO:12)的序列，所述分离的抗体的CDR H1具有GYIFITY(SEQ ID NO:7)的序列，所述分离的抗体的CDR H2具有FPASGT(SEQ ID NO:8)的序列，并且所述分离的抗体CDR H3具有TDFYRYDGGYALDY(SEQ ID NO:9)的序列。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有这样的序列，其与DIVLTQSPISLAVFLGQRATISCRASQSVSTSGYSSMHW YQQKAGQPPKLLIKYASDLESGVPVRFSGSGSGTDFILNIHPVEVEDIA TYYCHHSWGIPMYTFGGGTKLEIKR(SEQ ID NO:5)的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有这样的序列，其与DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSTSGYSSMH WYQQKPGKAPKLLIYYASDLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDF ATYYCHHSWGIPMYTFGQGTKLEIKR(SEQ ID NO:115)的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有这样的序列，其与DIQLTQSPSSLSASVGDRATITCRASQSVSTSGYSSMH WYQQKPGKAPKLLIYYASDLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDF ATYYCHHSWGIPMYTFGQGTKLEIKR(SEQ ID NO:116)的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有这样的序列，其与DIQLTQSPSSLSASVGDRATITCRASQSVSTSGYSSMH WYQQKPGKAPKLLIKYASDLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDF ATYYCHHSWGIPMYTFGQGTKLEIKR(SEQ ID NO:117)的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的重链可变区具有这样的序列，其与HVQLQQSGPELVRPGASVKLSCKASGYIFITYWMNW VKQRPGQGLEWVGQIFPASGTTYYNELFEGKATLTVDTSSNTAYMHLT SLTSEDSAVYYCARTDFYRYDGGYALDYWGQGTSLTVSS(SEQ ID N O:6)的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的重链可变区具有这样的序列，其与QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFITYWMNW VRQAPGQGLEWMGQIFPASGTTYYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYME LSSLRSEDTAVYYCARTDFYRYDGGYALDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:118)的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的重链可变区具有这样的序列，其与QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFITYWMNW VRQAPGQGLEWVGQIFPASGTTYYAQKFQGRVTMTVDTSTSTVYMEL SSLRSEDTAVYYCARTDFYRYDGGYALDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:119)的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的重链可变区具有这样的序列，其与QVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYIFITYWMNW VRQAPGQGLEWVGQIFPASGTTYYAQKFQGRATLTVDTSTSTAYMELS SLRSEDTAVYYCARTDFYRYDGGYALDYWGQGTLLTVSS(SEQ ID N O:120)的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的重链可变区具有这样的序列，其与EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFITYWMNW VRQAPGQGLEWVGQIFPASGTTYYAQKFQGRVTMTVDTSTSTVYMEL SSLRSEDTAVYYCARTDFYRYEGGYALDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:121)的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。
在另一个方面，提供了(任选地分离的)抗IL1-RAP抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，其中所述轻链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:5和115-117中的任一个的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性，并且所述重链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:6和118-121中的任一个的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有SEQ ID NO:5和115-117中的任一个的序列，并且所述分离的抗体的重链可变区具有SEQ ID NO:6和118-121中的任一个的序列。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:5序列具有至少90％的序列同一性，并且所述分离的抗体的重链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:6的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。在一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有SEQ ID NO:5的序列，并且所述分离的抗体的重链可变区具有SEQ IDNO:6的序列。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:117的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性，并且所述分离的抗体的重链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:118的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。在一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有SEQ ID NO:117的序列，并且所述分离的抗体的重链可变区具有SEQ ID NO:118的序列。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:117的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性，并且所述分离的抗体的重链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:119的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。在一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有SEQ ID NO:117的序列，并且所述分离的抗体的重链可变区具有SEQ ID NO:119的序列。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:117的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性，并且所述分离的抗体的重链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:120的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。在一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有SEQ ID NO:117的序列，并且所述分离的抗体的重链可变区具有SEQ ID NO:120的序列。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:117的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性，并且所述分离的抗体的重链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:121的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。在一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有SEQ ID NO:117的序列，并且所述分离的抗体的重链可变区具有SEQ ID NO:121的序列。
在另一个方面，本发明特征为分离的抗IL1-RAP抗体，其包含：(1)包含CDR L1、CDRL2和CDR L3的轻链可变区，和(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区，其中
所述CDR L1具有这样的序列，其与RASQSISNNLH(SEQ ID NO:32)的序列具有至少90％的序列同一性(例如，相比其具有0、1或2个保守的或非保守的氨基酸取代)，
所述CDR L2具有这样的序列，其与YASQSIS(SEQ ID NO:33)的序列具有至少90％的序列同一性(例如，相比其具有0、1或2个保守的或非保守的氨基酸取代)，
所述CDR L3具有这样的序列，其与QQSHNWPHT(SEQ ID NO:34)的序列具有至少90％的序列同一性(例如，相比其具有0、1或2个保守的或非保守的氨基酸取代)，
所述CDR H1具有这样的序列，其与GYTFTNY(SEQ ID NO:29)的序列具有至少90％的序列同一性(例如，相比其具有0、1或2个保守的或非保守的氨基酸取代)，
所述CDR H2具有这样的序列，其与NTYTGE(SEQ ID NO:30)的序列具有至少90％的序列同一性(例如，相比其具有0、1或2个保守的或非保守的氨基酸取代)，并且
所述CDR H3具有这样的序列，其与YYGNFDY(SEQ ID NO:31)的序列具有至少90％的序列同一性(例如，相比其具有0、1或2个保守的或非保守的氨基酸取代)。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的CDR L1具有RASQSISNNLH(SEQ IDNO:32)的序列，所述分离的抗体的CDR L2具有YASQSIS(SEQ ID NO:33)的序列，所述分离的抗体的CDR L3具有QQSHNWPHT(SEQ ID NO:34)的序列，所述分离的抗体的CDR H1具有GYTFTNY(SEQ ID NO:29)的序列，所述分离的抗体的CDR H2具有NTYTGE(SEQ ID NO:30)的序列，并且所述分离的抗体的CDR H3具有YYGNFDY(SEQ ID NO:31)的序列。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有这样的序列，其与DIVLTQSPATLSVTPGDSVSLSCRASQSISNNLHWYQQ KSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVETEDFGVYFCQ QSHNWPHTFGGGTKLEIKR(SEQ ID NO:27)的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有这样的序列，其与EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSISNNLHWYQQ KPGQAPRLLIYYASQSISGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQ QSHNWPHTFGQGTKLEIKR(SEQ ID NO:122)的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的重链可变区具有这样的序列，其与HVQLQQSGPELVRPGASVKLSCKASGYIFITYWMNW VKQRPGQGLEWVGQIFPASGTTYYNELFEGKATLTVDTSSNTAYMHLT SLTSEDSAVYYCARTDFYRYDGGYALDYWGQGTSLTVSS(SEQ ID N O:28)的序列具有至少90％的序列同一性。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的重链可变区具有这样的序列，其与EVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTNYGMHW VRQAPGQGLEWMGWINTYTGEPTYAQKFQGRFTFTLDTSTSTAYLEIR SLRSDDTAVYYCARYYGNFDYWGQGTLLTVSS(SEQ ID NO:123)的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。
在另一个方面，本发明的特征为分离的抗IL1-RAP抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，其中所述轻链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:27和122中任一个的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性，并且所述重链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:28和123中任一个的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有SEQ ID NO:27和122中任一个的序列，并且所述分离的抗体的重链可变区具有SEQ ID NO:28和123中任一个的序列。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:27的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性，并且所述分离的抗体的重链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:28的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。在一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有SEQ ID NO:27的序列，并且所述分离的抗体的重链可变区具有SEQ ID NO:28的序列。
在本方面的一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:122的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性，并且所述分离的抗体的重链可变区具有这样的序列，其与SEQ ID NO:123的序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或100％)的序列同一性。在一些实施方案中，所述分离的抗体的轻链可变区具有SEQ ID NO:122的序列，并且所述分离的抗体的重链可变区具有SEQ ID NO:123的序列。
在另一个实施方案中，所述(任选地分离的)抗体为单特异性的。在另一个实施方案中，所述(任选地分离的)抗体为多特异性的或双特异性的。在另一个实施方案中，所述多特异性的或双特异性的(任选地分离的)抗体能结合选自以下的抗原：CD45、CD38和CD34。在另一个实施方案中，所述(任选地分离的)抗体为人源化的。在另一个实施方案中，所述(任选地分离的)抗体为完整的免疫球蛋白。在另一个实施方案中，所述(任选地分离的)抗体为抗体片段，例如，选自：Fab、F(ab’)2、Fab’或单链Fv。
在另一个方面，本文中提供了核酸分子，其包含编码如本文中描述的抗IL1-RAP抗体或抗体片段中的任一个的核苷酸序列。在一个实施方案中，所述核酸序列与表达控制序列可操作地连接。在另一个实施方案中，所述核酸分子包含于表达载体中。
在另一个方面，本文中提供了宿主细胞，其包含如本文中所公开的表达载体。在一个实施方案中，所述宿主细胞为中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
在另一个方面，本文中提供了制造抗IL1-RAP抗体的方法，包括培养如本文中提供的宿主细胞。在一个实施方案中，所述方法还包括分离所述抗体。
在另一个方面，本文中提供了如本文中公开的抗体，其与化学部分缀合。在一个实施方案中，所述缀合部分为标记物。在另一个实施方案中，所述缀合部分为化疗剂或细胞毒性剂。在另一个实施方案中，所述化疗剂或细胞毒性剂选自：烷化试剂、抗代谢物、抗生素、羟基脲、基于铂的化疗剂、紫杉醇、硼替佐米(bortezomib)、来那度胺(lenalidomine)、萨立多胺(thalidomide)、metanzinoid。
在另一个方面，本文中提供了组合物，其包含和佐剂(aduvant)和如本文中提供的抗体或缀合抗体。在一个实施方案中，所述组合物为药学上可接受的。
在另一个方面，本文中提供了检测表达受体IL1-RAP的细胞的方法，包括：将细胞与有效量的能够结合所述细胞的如本文中公开的抗体、抗体片段或抗体缀合物接触，以及检测所述抗体与所述细胞的结合，其中结合表明存在目标细胞。
在另一个方面，本文中提供了诊断疾病的方法，包括：将来自个体的生物样品与有效量的能够结合患病的细胞的如本文中公开的抗体、抗体片段或抗体缀合物接触，以及检测所述抗体与患病的细胞的结合，其中结合表明存在疾病。在一个实施方案中，所述抗体与可检测的部分缀合。在另一个实施方案中，所述疾病为癌症。在另一个实施方案中，所述细胞为肿瘤细胞或癌症干细胞。在另一个实施方案中，所述疾病为骨髓增殖性病症。在另一个实施方案中，所述骨髓增殖性病症选自：AML、CML、CMML、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤和骨髓纤维化。
在另一个方面，本文中提供了抑制细胞分裂的方法，包括将细胞与至少有效量的能够结合所述细胞的如本文中公开的抗体、抗体片段或抗体缀合物接触。在一个实施方案中，抑制细胞分裂导致细胞死亡。在另一个实施方案中，所述细胞为肿瘤或癌症干细胞。在另一个实施方案中，所述肿瘤或癌症干细胞来自骨髓增殖性病症。在另一个实施方案中，所述骨髓增殖性病症选自：AML、CML、CMML、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤和骨髓纤维化。
在另一个方面，本文中提供了抑制NF-kB信号传导的方法，包括将细胞与至少有效量的能够结合所述细胞的如本文中公开的抗体或抗体片段接触。在一个实施方案中，抑制细胞分裂导致细胞死亡。在另一个实施方案中，所述细胞为肿瘤或癌症干细胞。在另一个实施方案中，所述肿瘤或癌症干细胞来自骨髓增殖性病症。在另一个实施方案中，所述骨髓增殖性病症选自：AML、CML、CMML、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤和骨髓纤维化。
在另一个方面，本文中提供了治疗癌症的方法，包括向患者施用治疗有效量的如本文中公开的抗体或抗体缀合物。在一个实施方案中，所述抗体为抗体缀合物，其通过可切割的、不可切割的或无痕的连接子与化疗或细胞毒性药物缀合。在另一个实施方案中，所述药物选自：美登醇(maytansinoid)、澳瑞他汀(auristatin)、尾海兔素(dolastatin)、tubulysin、念珠藻素(cryptophycin)、吡咯并苯二氮(PBD)二聚物、吲哚啉苯二氮二聚物、α-鹅膏蕈碱、trichothene、SN-38、倍癌霉素(duocarmycin)、CC1065、卡奇霉素(calicheamincin)、烯二炔抗生素、紫杉醇、阿霉素衍生物、蒽环霉素以及它们的立体异构体、azanofide、等排体、类似物或衍生物。在另一个实施方案中，所述癌症为骨髓增殖性病症。在另一个实施方案中，所述骨髓增殖性病症选自：AML、CML、CMML、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤(pasmocytoma)和骨髓纤维化。在另一个实施方案中，本文中描述的抗体结合肿瘤相关的抗原或癌症干细胞抗原。在一些实施方案中，所述肿瘤相关的抗原或癌症干细胞抗原为CLL-1。
在另一个方面，本文中提供了减少肿瘤负荷的方法，包括施用有效量的如本文中公开的抗体、抗体片段或抗体缀合物。
附图说明
图1为如通过不同的AML细胞系中的增加的荧光显示的抗IL1-RAP抗体50.3G7与IL1-RAP结合的FACS图。
图2为产生的用以免疫小鼠来制造本公开的抗IL1-RAP抗体的嵌合的人/小鼠蛋白的示意图。
图3A和图3B显示了ELISA试验的结果。3A：直接的ELISA，板涂有胞外结构域IL1-RAP或可溶形式IL1RAP；3B：三明治ELISA，板涂有山羊抗IL1RAP抗体，然后添加IL1-RAP的胞外结构域或可溶性IL1-RAP，最后添加2H8抗体。抗体2H8优选结合胞外结构域IL1RAP。
图4A-图4D显示了通过FACS，针对不同的细胞系(即，293T、IL1-RAP转染的293、EOL-1、HNT-34)测试的克隆2H8、5H9.1.4和56.12G6的结合特异性的图。
图5A-图5D为FACS图和柱状图，其显示了在不同水平的从健康患者分离的正常人血清(NHS)的存在下抗IL1-RAP抗体2H8和56.12G6与HNT-34细胞的结合，以及可溶性IL1-RAP(Q9NPH3-2)或IL1-RAP(Q9NPH3-4)的胞外结构域(ECD)。左图：对HNT-34细胞的抗体结合滴定。右图：处理条件的EC50值。
图6A-图6D为显示克隆2H8、50.3G7和56.12G6与单个原发性患者的AML细胞的测试性结合的FACS分析的散点图。在测试的12个AML患者中，6个为2H8阳性的。
图7为柱状图，其显示了实施例15中描述的集落形成细胞(CFC)试验的结果。
图8为柱状图，其显示了证明抗IL1-RAP克隆对健康CD34+细胞的影响。
图9是作为抗IL1-RAP克隆浓度的函数的百分比抑制的图。
图10A-图10C是以不同的抗IL1-RAP克隆处理的小鼠中骨髓、脾和血细胞中的肿瘤负荷的图示。
图11是不同的抗IL1-RAP克隆对以EOL-1肿瘤移植的小鼠的存活的治疗效应的Kaplan-Myer图。
图12A-图12P分别显示了54.9D7、56.12G6、2H8、50.3G7、54.15B5、42.1D3、54.8H8、54.9E9、50.6C12、57.7A9、46.8G1、42.3G6、46.1D2、41.10C2、46.2C2、44.5D2的轻链和重链可变区序列。CDR被加粗并有下划线。
图13为柱状图，其显示了如通过FACS检查的不同的抗体克隆与mIg2和mIg3的结合。
图14显示了与EOL-1细胞结合的具有不同的HC和LC组合的54.9D7的人源化的克隆的平均荧光强度(MFI)值。
图15为与EOL-1细胞结合的54.9D7的3种人源化的克隆的MFI值的图。
图16A-图16D是显示嵌合的54.9D7和54.9D7的3种人源化的克隆的结合亲和力的图。
发明详述
I.前言
本文中提供了特异性结合IL1-RAP的抗体。抗IL1-RAP抗体可按缀合形式使用来将细胞毒性剂特异性递送至表达的IL1-RAP细胞，例如，癌细胞如癌症干细胞(CSC)、白血病、淋巴瘤和实体瘤。
还提供了抗IL1-RAP特异性抗体，其抑制癌细胞生长和/或减少肿瘤负荷，而无需与细胞毒性剂缀合。这样的抗体可以抑制白介素1家族成员5、6、8或9(IL-1F5、IL-1F6、IL1F8或IL1F9)介导的信号传导，诱导依赖抗体的细胞介导的细胞毒性，封闭依赖IL-1的信号传导，或以上的组合。在一些实施方案中，本公开的抗体提供了依赖补体的细胞毒性(CDC)或依赖抗体的细胞介导的细胞毒性(ADDC)。
还提供了抗IL1-RAP特异性的抗体，其有效减少癌症生长或癌症干细胞生长、代谢活性、活力或分裂的。除了治疗应用或与之相结合，本公开的抗IL1-RAP抗体可用于体内和体外诊断试剂。
II.定义
除非另有定义，本文中使用的技术和科学术语具有本领域技术人员通常理解的相同含义。参见，例如，Lackie,DICTIONARY OF CELL AND MOLECULAR BIOLOGY,Elsevier(4thed.2007)；Sambrook et al.,MOLECULAR CLONING,A LABORATORY MANUAL,Cold SpringsHarbor Press(Cold Springs Harbor,NY 1989)。术语“一个(a)”或“一种(an)”旨在指“一个/种或多个/多种”。术语“包含(comprise)”及其变形如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”，当位于叙述步骤或元素之前时，旨在指加入其他的步骤或元素是任选的且不排除其他的步骤或元素。类似或等同于本文中描述的那些的任何方法、装置和材料可用于实施本发明。提供了以下定义以帮助理解在本文中互换使用的某些术语，且其并不意味着限制本公开的范围。
如本文中使用的“IL1-RAP”是指人白介素1受体辅助蛋白。IL1-RAP的序列可以如Uniprot登陆号Q9NPH3-1(同种型1)中所示的：
在以上显示的570aa多肽中，残基1-20为信号序列，残基21-367为胞外的，残基368-388为跨膜的，而残基389-570为细胞质的。技术人员理解可以将IL1-RAP变体(例如，物种同系物、等位基因变体等)任选地对其，例如，以用于确定保守的残基和域。
如本文中使用的“膜-锚定近侧区”是指IL1-RAP蛋白的临近跨膜区但位于跨膜区的N-端的氨基酸。在一些情形下，受体IL1-RAP包含膜-锚定近侧区。本领域技术人员了解如何确定膜-锚定近侧区，其可以包含(仅通过实例的方式)Uniprot登陆号Q9NPH3-1的氨基酸300-370、301-370、302-370、303-370、304-370、305-370、306-370、307-370、308-370、309-370、310-370、311-370、312-370、313-370、314-370、315-370、316-370、317-370、318-370、319-370、320-370、321-370、322-370、323-370、324-370、325-370、326-370、327-370、328-370、329-370、330-370、331-370、332-370、333-370、334-370、335-370、336-370、337-370、338-370、339-370、340-370、340-369、340-368、340-367、340-366、340-365、340-364、340-363、340-362、340-361、340-360、341-370、341-369、341-368、341-367、341-366、341-365、341-364、341-363、341-362、341-361、341-360、342-370、342-369、342-368、342-367、342-366、342-365、342-364、342-363、342-362、342-361、342-360、343-370、343-369、343-368、343-367、343-366、343-365、343-364、343-363、343-362、343-361、343-360、344-370、344-369、344-368、344-367、344-366、344-365、344-364、344-363、344-362、344-361、344-360、345-370、345-369、345-368、345-367、345-366、345-365、345-364、345-363、345-362、345-361、345-360、346-370、346-369、346-368、346-367、346-366、346-365、346-364、346-363、346-362、346-361、346-360、347-370、347-369、347-368、347-367、347-366、347-365、347-364、347-363、347-362、347-361或氨基酸347-360。所述膜-锚定近侧区可以包含IL1-RAP主序列的来自上述残基的羧基或氨基方向的、具有15、14、13、12、11、10个或更少个氨基酸的区域。在一些情形下，本文中提供的抗IL1-RAP抗体与包含这膜-锚定近侧区中的一个或多个的IL1-RAP蛋白结合。在一些情形下，本文中提供的抗IL1-RAP抗体与包含这些膜-锚定近侧区中的一个或多个的IL1-RAP蛋白结合，但不与不包含这些膜-锚定近侧区中的一个或多个的IL1-RAP蛋白结合，或基本上不与其结合。
如本文中使用的“受体IL1-RAP”、“膜IL1-RAP”和“膜结合的IL1-RAP”和是指存在于细胞表面上的表达IL1-RAP的蛋白形式，例如，具有IL1-Rap(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列的蛋白(Q9NPH3-1)。由此，受体IL1-RAP、膜IL1-RAP或膜结合的IL1-RAP也指这类形式的IL1-RAP，当其从膜纯化时或在其他情形下为无膜的时。
如本文中使用的“可溶性IL1-RAP”是指天然存在的未与膜结合的IL1-RAP蛋白。可溶性IL1-RAP蛋白的特定实例包括不包含上述跨膜区的IL1-RAP蛋白、不包含上述膜-锚定近侧区的IL1-RAP蛋白、不存在于表达IL1-RAP的细胞表面上的IL1-RAP蛋白、经蛋白水解切割使得其未被膜锚定的IL1-RAP蛋白、细胞溶质IL1-RAP和存在于(例如，分泌至)正常人血清中的IL1-RAP蛋白。
IL1-RAP(同种型2)的一种可溶性形式(Q9NPH3-2)为356个氨基酸的序列，其残基VPAPRY被C-端肽GNRCGQ(残基351-356)取代，且缺失残基357-570(相对于同种型1)。
另一种可溶性形式(同种型3)(Q9NPH3-3)为346aa序列，其序列ISHSRTEDET...GLSYSSLKNV被ASSKIHSGTG...PILPGSFWNR取代。
在一些情形下，受体IL1-RAP包含完整的跨膜(或膜锚定)区或其一部分。例如，受体IL1-RAP可以包含跨膜的跨越区，表示为Uniprot登录Q9NPH3-1的氨基酸370-388、369-388、368-388、367-388、366-388、365-388、364-388、363-388、362-388、361-388、370-395、369-395、368-395、368-394、368-393、368-392、368-391、368-390或368-389。跨膜区可包含IL1-RAP主要序列的来自上述残基的羧基或氨基方向末端的20个或更少个(例如，19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2个或1个)氨基酸的区域。在一些情形下，本文中提供的抗IL1-RAP抗体与包含这些跨膜区中的一个或多个的IL1-RAP蛋白结合。在一些情形下，受体IL1-RAP为膜结合的。例如，所述受体IL1-RAP或其一部分可锚定至细胞的膜中。
在一些情形下，受体IL1-RAP与可溶性IL1-RAP的区别在于在羧基端存在VPAPRYTVELAC(SEQ ID NO:2)序列，其序列可缺少可溶性IL1-RAP。在一些情形下，受体IL1-RAP与可溶性IL1-RAP的区别在于在羧基端存在HARSAKGEVAKAAKVKQKVPAPRYTVELACGFGATC(SEQ ID NO:3)序列，其序列可缺少可溶性IL1-RAP。在一些情形下，受体IL1-RAP与可溶性IL1-RAP的区别在于在羧基端缺少GNRCGQ(SEQ ID NO:4)序列，其序列可包含可溶性IL1-RAP。
术语“受体IL1-RAP特异性的抗体”、“抗受体IL1-RAP抗体”、“膜IL1-RAP特异性抗体”、“抗膜IL1-RAP抗体”、“膜IL1-RAP抗体”和“结合IL1-RAP的膜结合形式但不结合可溶性形式的抗体”等在本文中作为同义使用，是指特异性结合IL1-RAP的受体(即，膜结合的)形式的抗体。在一些实施方案中，与受体IL1-RAP的特异性结合包括与受体IL1-RAP结合，但基本上不与发现于(例如，分泌至)正常人血清中的IL1-RAP的可溶性形式结合。在一些实施方案中，与受体IL1-RAP的特异性结合包括与受体IL1-RAP结合，但基本上不与包含序列GNRCGQ(SEQ ID NO:4)的IL1-RAP的可溶性形式结合。
在一些实施方案中，本文中提供的抗IL1-RAP抗体与本文中描述的膜-锚定近侧区内的氨基酸残基结合。例如，在一些情形下，本文中提供的抗IL1-RAP抗体可与氨基酸300-368、320-360、330-350或347-362中的残基结合。在一些情形下，本文中提供的抗IL1-RAP抗体与IL1-RAP主要序列的来自上述膜-锚定近侧区的羧基或氨基端方向的15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2个或1个氨基酸的区域结合。例如，所述抗体可与多肽VPAPRYTVELAC(SEQ ID NO:2)或HARSAKGEVAKAAKVKQKVPAPRYTVELACGFGATC(SEQ ID NO:3)结合。
在一些情形下，受体IL1-RAP特异性的抗体可与IL1-RAP的某些非天然可溶性形式，如包含受体IL1-RAP的细胞外域(ECD IL1-RAP)，包含一个或多个膜锚定近侧区，但不包含跨膜区和/或不包含GNRCGQ的蛋白结合。
在一些情形下，本文中提供的抗IL1-RAP抗体与包含这些跨膜区中的一个或多个的IL1-RAP蛋白结合，但不与不包含这些跨膜区中的一个或多个的IL1-RAP蛋白结合。在一些情形下，本文中提供的抗IL1-RAP抗体以相比不包含这些跨膜区中的一个或多个的IL1-RAP蛋白低得多的解离常数(即，更紧的结合)，与包含上述跨膜区中的一个或多个的IL1-RAP蛋白结合。例如，在一些实施方案中，本文中提供的抗IL1-RAP抗体了可以相比不包含跨膜区的IL1-RAP蛋白大2、3、4、5、6、8、10、15、20、25、30、40、50、100倍或1000倍或更大的亲和力，与包含跨膜区的IL1-RAP蛋白结合。
在一些情形下，受体IL1-RAP抗体与细胞如某些癌细胞(例如，癌症干细胞(CSC)或造血肿瘤细胞(HTC))表面上存在的IL1-RAP特异性结合，但不与大多数成熟的外周血细胞结合。如下文中更详细论述的，在一些实施方案中，本发明的抗IL1-RAP抗体可结合表达的IL1-RAP细胞，抑制其增殖和/或介导其破坏。
“IL1-RAP相关的病症”(或IL1-RAP相关的病症、IL1-RAP病症、IL1-RAP相关的病况或疾病等)是指与相比标准对照(例如，正常、非患病、非癌症细胞)中的IL1-RAP表达升高的或降低的IL1-RAP细胞表面表达相关的病况和疾病。升高的IL1-RAP水平与癌细胞，特别是癌症干细胞，特别是白血病如AML(急性骨髓性白血病)、MDS(脊髓增生异常综合征)和CML(慢性骨髓性白血病)，以及造血性CSC(例如，LSCs)中的相关。
术语“移植体”或“移植”是指细胞存活、增殖和/或在引入后正确定位至个体或组织中的能力。在癌症干细胞(CSC)的情形下，该术语可指CSC重新产生肿瘤或扩散至不同位点的能力。该术语通常被用于描述细胞群体在异种移植模型(例如，小鼠中人细胞的移植)中存活和发挥功能的能力。可按例如，WO2006/047569中描述的确定造血细胞的移植。可按例如Beckhove et al.(2003)Int.J.Cancer 105:444中描述的确定肿瘤细胞的移植。
术语“抗体”是指包含来自免疫球蛋白基因的框架区或其片段(“抗体片段”)的多肽，其特异性结合和识别抗原。通常，“可变区”包含抗体(或其功能性等同物)的抗原结合区，且在结合的特异性和亲和力中最为重要。示例性的免疫球蛋白(抗体)结构单元包含四聚物。每个四聚物由两个相同的多肽链对组成，每对具有一条“轻链”(约25kD)和一条“重链”(约50-70kD)。该术语可指完整的免疫球蛋白(两条轻链和两条重链，例如，四聚物)、免疫球蛋白多肽(轻链或重链)、包含免疫球蛋白如嵌合的或双特异性的抗体或scFv’s的结合部分，或融合至另一氨基酸序列如荧光蛋白的融合蛋白)，以及抗体片段，如Fab、F(ab')2、Fv、scFv、Fd、dAb，所有这些均保留抗原结合活性。该术语包括但不限于来源于人或其他哺乳动物细胞的同种型类型IgA、IgD、IgE、IgG和IgM的多克隆或单克隆抗体，包括天然的或遗传改良的形式如人源化的、人的、单链的、嵌合的、合成的、重组的、杂合的、突变的、移植的和体外产生的抗体。
“同种型”是通过重链恒定区定义的一类抗体。免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因。轻链被分类为κ或λ。重链被分类为γ、μ、α、δ或ε，其进而分别确定了同种型类型IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。
术语“嵌合的抗原受体”或“CAR”是指这样的多肽，其包含(1)靶标结合域(例如，抗体的结合部分，如scFV)；(2)铰链区；(3)跨膜域(TM)；和(4)包含至少一个信号传导域的胞内域(例如，CD4)。
示例性的免疫球蛋白(抗体)结构单元包含四聚物。每个四聚物由两个相同的多肽链对组成，每对具有一条“轻链”(约25kD)和一条“重链”(约50-70kD)。每条链的N-短确定了主要负责抗原识别的约100-110个或更多个氨基酸的可变区。术语可变的轻链(VL)和可变的重链(VH)分别是指轻链和重链的这些区域。所述可变区包含抗体(或其功能性等同物)的抗原结合区，且在结合的特异性和亲和力中最为重要。参见Paul,Fundamental Immunology(2003)。
抗体可作为完整的免疫球蛋白或作为包含特异性抗原结合活性的众多良好表征的片段中的任意一个存在。为了清楚的目的，具有重链和轻链的四聚物抗体在本文中称为“完整的免疫球蛋白”，且可以为天然存在的、多克隆的、单克隆的或充足产生的。可通过以不同的肽酶消化来制造片段。胃蛋白酶在铰链区中的二硫连接下消化抗体，以产生F(ab)’2，其为Fab的二聚物，其自身为通过二硫键与VH-CH1接合的轻链。可在温和条件下还原F(ab)’2，以打破铰链区中的二硫连接，从而将F(ab)’2二聚物转化为Fab’单体。Fab’单体本质上为具有部分铰链区的Fab。虽然根据完整抗体的消化来定义不同的抗体片段，但技术人员理解可通过化学或通过使用重组DNA方法重头合成这样的片段。因此，如本文中使用的术语抗体也包括通过修改完整的抗体，或使用重组DNA方法重头合成的那些，或使用噬菌体展示文库鉴定的那些(参见，例如，McCafferty et al.,Nature 348:552-554(1990))而产生抗体片段。
如本文中使用的，术语“Fv”是指单价或二价可变区片段，且可以包括仅可变区(例如，VL和/或VH)，以及更长的片段，例如，Fab、Fab’或F(ab’)2，其还包含CL和/或CH1。除非另有说明，术语“Fc”是指包含CH1和CH2区的重链单体或二聚物。
单链Fv(scFv)是指包含通过连接子，例如，肽连接子接合的VL和VH的多肽。ScFvs也可用于形成串联(或二价)scFvs或双体。串联scFvs和双体的制造和特性描述于，例如，Asano et al.(2011)J Biol.Chem.286:1812；Kenanova et al.(2010)Prot Eng DesignSel 23:789；Asano et al.(2008)Prot Eng Design Sel 21:597。
如本文中使用的“单克隆抗体”是指对抗原上的给定表位具有单一结合特异性和亲和力的抗体的克隆制备。“多克隆抗体”是指针对单一抗原产生的，但具有不同的结合特异性和亲和力的抗体的制备。
如本文中使用的，“V-区”是指包含VL和VH区的抗体可变区域。每个VL和VH还包含框架1、CDR1、框架2、CDR2和框架3，包括CDR3和框架4的片段，所述片段由于B-细胞分化期间各自的重链和轻链V-区基因的重排而被添加至V-片段。
如本文中使用的，“可变的轻链”和“可变的重链”分别是指抗体轻链和抗体重链的可变区。
如本文中使用的，“互补决定区(CDR)”是指每条链中的插入通过轻链和重链可变区而确立的4个“框架”区的3个高变区。CDR主要负责与抗原的表位结合。每条轻链和重链的CDR通常分别被称为CDRL1、CDRL2、CDRL3和CDRH1、CDRH2、CDRH3。因此，CDRH3通常为位于抗体的重链的可变域中的第3个CDR，而CDRL1是轻链的可变域中的第一个CDR1。
不同的轻链或重链的框架区的序列在一个物种中相对保守。抗体的框架区，即构建的轻链和重链的组合框架区，用于将CDR在三维空间中定位和对齐。
可以使用本领域中的各种熟知的定义，例如，Kabat,Chothia,国际ImMunoGeneTics数据库(IMGT)和AbM(参见，例如，Johnson et al.,同上；Chothia&Lesk,(1987)J.Mol.Biol.196,901-917；Chothia et al.(1989)Nature 342,877-883；Chothiaet al.(1992)J.Mol.Biol.227,799-817；Al-Lazikani et al.,J.Mol.Biol 1997,273(4))，来确定CDR和框架区的氨基酸序列。可在bioinf.org.uk/abs获取的网站找到使用Kabat系统定位CDR的有用的指导。抗原结合位点的定义在下述文献中也有描述：Ruiz etal.Nucleic Acids Res.,28,219–221(2000)；和Lefranc Nucleic Acids Res.Jan1；29(1):207-9(2001)；MacCallum et al.,J.Mol.Biol.,262:732-745(1996)；和Martin etal,Proc.Natl Acad.Sci.USA,86,9268–9272(1989)；Martin,et al,Methods Enzymol.,203:121–153,(1991)；Pedersen et al,Immunomethods,1,126,(1992)；和Rees et al,InSternberg M.J.E.(ed.),Protein Structure Prediction.Oxford University Press,Oxford,141–172 1996)。在一些实施方案中，本公开的受体IL1-RAP抗体的CDR在图12中进行了鉴定。
“嵌合的抗体”是指这样的抗体，其中(a)恒定区或其一部分被改变、取代或交换，使得抗原结合位点(可变区、CDR或其一部分)与具有不同的或改变的类型、效应子功能和/或种类的恒定区连接；或(b)可变区或或其一部分被以具有不同的或改变的抗原特异性的可变区(例如，来自不同的物种的CDR和框架区)改变、取代或交换。嵌合的抗体可包含可变区片段，例如，包含两个Fab或Fv区或scFv的重组抗体。如上文所表明，嵌合体还可包含来自与接合的Fv区不同的来源的Fc区。在一些情形下，嵌合的抗体包含位于Fv区内的嵌合体。这样的嵌合抗体的实例为人源化的抗体，其中Fvs和CDR来自不同的来源。
人源化的抗体是这样的抗体，其中从非人抗体的VH和VL区获得的抗原结合环，即CDR被移植至人框架序列。可根据以下文献中描述的方法进行人源化，即将非人CDR序列取代为人抗体的对应序列，例如，美国专利第5,545,806号；第5,569,825号；第5,633,425号；第5,661,016号；Riechmann et al.,Nature 332:323-327(1988)；Marks et al.,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Morrison,Nature 368:812-13(1994)；Fishwild et al.,Nature Biotechnology 14:845-51(1996)。转基因小鼠或其他生物体如其他哺乳动物，也可用于表达人源化的或人抗体，如在第6,673,986号美国专利中公开的。
如本文中使用的，术语“百分比(％)同一性”是指在对齐序列和引入空白后，在必要时，以实现最大百分比同一性(即，可以为最佳对齐而在候选和参照序列的其中之一或两者中引入空白，且可以为比较目的而不管非同源序列)，候选序列例如本发明的分离的抗IL1-RAP抗体的与参照序列的氨基酸(或核酸)残基相同的氨基酸(或核酸)残基的百分比。可BLAST 2.0软件，使用标准设置实现为确定百分比同一性目的的比对。可进行比对来实现在比较序列的全长上的最大对齐。在一些实施方案中，按下式计算给定候选序列与、和或对给定参照序列(其可以可选地表述为给定的候选序列，其具有或包含与、和或对给定参照序列的某一百分比氨基酸(或核酸)序列同一性)的百分比氨基酸(或核酸)序列同一性：
100x(A/B的分数)
其中A为在候选序列和参照序列的对齐中评分为相同的氨基酸(或核酸)残基的数目，且其中B为参照序列中的氨基酸(或核酸)残基的总数目。在其中候选序列的长度不等于参照序列的长度的一些实施方案中，候选序列与参照序列的百分比氨基酸(或核酸)序列同一性将不等于参照序列与候选序列的百分比氨基酸(或核酸)序列同一性。
在特定的实施方案中，对齐以用于与候选序列进行比较的参照序列可显示出在候选序列或候选序列的连续的氨基酸(或核酸)残基的选定部分的全长上显示50％-100％的同一性的候选序列。为比较目的而对齐的候选序列的长度为参照序列长度的至少30％，例如，至少40％，例如，至少50％、60％、70％、80％、90％或100％。当候选序列中的位置被与参照序列中的对应的位置相同的氨基酸(或核酸)残基占据时，则分子在该位置处是相同的。
本文中使用的术语“抗原”、“免疫原”、“抗体靶标”、“靶标分析物”等术语是指可被抗体识别，即，可被抗体特异性结合的分子、化合物或复合物。术语可以指可被抗体，例如，多肽、多核苷酸、碳水化合物、脂类、化学部分或以上的组合(例如，磷酸化的或糖基化的多肽等)特异性识别的任何分子。技术人员将理解该术语不暗示分子在每种情形下均为免疫原性的，但简单地指其可被抗体靶向。
抗体结合抗原上的“表位”。表位为抗体所识别和结合的抗原上的定位位点。表位可包含多个氨基酸或多个氨基酸的一部分，例如，5个或6个或更多个，例如，20个或更多个氨基酸，或这些氨基酸的一部分。在一些情形下，表位包含非蛋白组分，例如，来自糖水化合物、核酸或脂类。在一些情形下，表位为三维部分。因此，例如，在靶标为蛋白的情形下，表位可以由连续的氨基酸或来自通过蛋白折叠而成为接近的蛋白(例如，不连续的表位)的不同部分的氨基酸组成。对于形成三维结构的其他类型的靶标分子也是如此。
术语“对…特异性的”、“特异性结合”和类似的术语是指相比非靶标化合物，以大至少2倍的亲和力，例如，大至少4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、25倍、50倍或100倍中的任何一个的亲和力与靶标结合的分子(例如，抗体或抗体片段)。例如，相比非一抗靶标(例如，来自不同物种或不同同种型或非抗体靶标的抗体)，特异性结合一抗靶标的抗体将通常以大至少2倍的亲和力结合一抗。例如，相比非靶标分子(例如，IL1-RAP、与IL1-RAP相关的蛋白或其他蛋白的可溶性形式)，特异性结合IL1-RAP的受体形式的抗体将通常以大至少2倍的亲和力结合IL1-RAP的受体形式。
如本文中使用的，如果其以大于10-6M的KD结合靶标，则抗体不“实质上结合”靶标。
术语“结合”关于细胞类型(例如，结合淋巴瘤细胞的抗体)，通常指与这些细胞的纯的群体中的大多数细胞结合的试剂。例如，如果抗体浓度足够高，则结合给定细胞类型的抗体通常与指示细胞群体中的至少2/3的细胞(例如，75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)结合。在一些情形下，可以通过将抗体与表达膜结合的IL1-RAP的细胞的结合和抗体与不表达膜结合的IL1-RAP的细胞的结合(或其缺失)进行比较，来测定受体-IL1-RAP特异性结合。技术人员将认可根据测定结合的方法和/或阈值将产生一些改变。
术语“捕获”关于抗体靶标(例如，抗原、分析物、免疫复合物)，通常示与纯的群体中的大多数的抗体靶标(假定合适的摩尔比)结合的抗体。例如，结合给定抗体靶标的抗体通常结合溶液中的至少2/3的抗体靶标(例如，至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％中的任一个)。技术人员将认可根据测定结合的方法和/或阈值将产生一些改变。
术语“交联的”关于抗体是指抗体与固体或半固体基质(例如，琼脂糖、珠子、培养板)或与另一蛋白或抗体的结合。例如，可将抗体多聚化(multimerized)以产生具有多个(多于2个)抗原-结合位点的抗体复合物。可以通过将抗体作为高价同种型表达(例如，IgA或IgM，其通常分别形成2个或5个抗体的复合物)，而将抗体多聚化。也可以通过使用包含能够连接蛋白(例如，碳二亚胺、NHS酯等)的反应基的交联剂，而进行抗体多聚化。用于将抗体与基质交联的方法和组合物描述于，例如，Abcam和New England Biolab分类和网站(可在abcam.com和neb.com获取)。具有不同反应基的交联剂化合物描述于，例如Thermo FisherScientific分类和网站(可在piercenet.com获取)。
如本文中使用的，当相比在无第一抗体时第二抗体的结合，在有第一抗体存在时第二抗体与靶标的结合可检测地减少时，则第一抗体或其抗原结合部分“竞争”与具有第二抗体或其抗原结合部分的靶标的结合。可选地，当在有第二抗体存在时第一抗体与靶标的结合也可检测地减少时，其可以但不必如此。即，第二抗体可以抑制第一抗体与靶标的结合，但该第一抗体不抑制第二抗体与靶标的结合。然而，当每种抗体可检测地抑制其他抗体与其同源表位或配体的结合，不管是相同的、更大的或更小的程度时，则抗体被说成是彼此“交叉竞争”与其各自的表位的结合。竞争和交叉竞争性抗体均包括于本发明中。术语“竞争者”抗体可适用于第一或第二抗体，如本领域技术人员可以测定的。在一些情形下，竞争者抗体(例如，第一抗体)的存在将第二抗体与靶标的结合减少了至少10％，例如，至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多中的任一个，例如，使得在第一(竞争者)抗体存在时，第二抗体与靶标的结合为不可检测的。
术语“标记物”、“可检测的部分”和类似的术语是指通过光谱学、光化学、生物化学、免疫化学、化学或其他物理方式可检测的组合物。例如，可用的标记物包括荧光染料、冷光试剂、放射性同位素(例如，32P、3H)、高电子密度的试剂、酶(例如，如ELISA中常用的)、生物素、地高辛或半抗原和蛋白或可以例如，通过将放射性标记物掺入至与靶标分析物特异性反应的肽或抗体中而变得可检测的其他实体。可以采用本领域已知的用于将抗体与标记物缀合的任何方法，例如，使用Hermanson,Bioconjugate Techniques 1996,AcademicPress,Inc.,San Diego中描述的方法。术语“标签”可以与术语“标记物”作为同义使用，但通常指基于亲和力的部分，例如，用于纯化的“His标签”或与生物素相互作用的“链霉亲和素标签”。
“标记的”分子(例如，核酸、蛋白或抗体)为与标记物通过连接子或化学键共价，或者通过离子、范德瓦耳斯力、静电或氢键非共价结合的那些，使得可通过检测与分子结合的标记物的存在而检测分子的存在。
术语“差异化表达的”或“差异化调节的”通常是指相比至少一个其他的样品，在一个样品中过表达的(上调的)或低表达的(下调的)蛋白或核酸生物标志物。在本公开的上下文中，术语通常是指相对于如未患病的组织中存在的可溶性IL-1RAP，癌细胞(例如，AML细胞或AML CSC)上受体IL1-RAP的过表达。
例如，术语“过表达的”或“上调的”可互换地指以相比对照可检测地更大的水平转录的或翻译的蛋白或核酸，通常为生物标志物。该术语包括由于转录、转录后加工、翻译、翻译后加工、细胞定位(例如，细胞器、细胞质、核、细胞表面)，以及RNA和蛋白稳定性而导致的过表达。可以使用用于检测生物标志物，不论mRNA(即，RT-PCR、杂交)或蛋白(即，流式细胞术、成像、ELISA、免疫组织化学技术)的常规技术，来检测过表达。过表达可以为相比正常细胞的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。
术语“激动剂”、“活化剂”、“诱导物”及类似术语是指相比对照增加活性或表达的分子。激动剂是例如，结合、刺激、增加、激活、增加激活、致敏或上调靶标活性的试剂。相比对照，表达或活性可增加至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多中的任一个。在某些情形下，激活为相比对照1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍或更多倍中的任一个。
术语“抑制剂”、“抑制剂”或“拮抗剂”或“下调剂”可互换地指导致相比对照的可检测地更低的表达或活性水平的物质。抑制的表达或活性可以为相比对照10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更少中的任一个。在某些情形下，抑制为相比对照1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍或更多倍中的任一个。
“对照”样品或值是指用作用于比较测试样品的参照，通常为已知的参照的样品。例如，测试样品可取自测试条件，例如，在测试化合物的存在下和相比来自已知条件的样品，例如，无测试化合物(阴性对照)或在已知化合物存在下(阳性对照)。在本公开的上下文中，阴性对照的实例为来自已知的健康(非癌症)个体的生物样品，且阳性对照的实例为来自已知AML患者的生物样品。对照也可代表从多个测试或结果集合的平均值或范围。本领域技术人员认可可设计对照以评估任何数目的参数。例如，可基于药理学数据(例如，半衰期)或治疗测量(例如，比较益处和/或副作用)设计对照来比较治疗效益。可设计对照以用于体外应用。本领域技术人员理解哪种对照在给定溶液中是有价值的，且能够基于与对照值的比较来分析数据。对照对于确定数据显著性也具有价值。例如，如果对照中给定参数的值存在广泛变异，则测试样品中的变异将不被认为是显著的。
术语“诊断”是指对象患有病症如癌症的相对可能性。类似地，术语“预后”是指对象中可能发生的某些未来结果的相对可能性。例如，在本公开的上下文中，预后可以指个体将发展癌症、复发、治愈的可能性，或者可能地疾病的严重性(例如，症状的严重性、功能下降的速率、存活等)。该术语不试图为绝对的，如医学诊断领域技术人员所理解的。
如本文中使用的“生物活检”或“来自患者的生物样品”是指从患有或怀疑患有IL1-RAP相关的病症的患者获得的样品。样品也可以为血液样品或血液部分，例如，白细胞部分、血清或血浆。在一些实施方案中，样品可以为组织生物活检，如针吸生物活检、细针穿刺生物活检、手术生物活检等。样品可包括具有病灶或疑是病灶的组织样品，尽管生物样品也可来源于另外的位点，例如，疑是转移的位点、淋巴结或来自血液。在一些情形下，生物样品也可来自临近病灶或疑是病灶的区域。
“生物样品”可从患者获得，例如，来自动物，如动物模型或来自培养的细胞，例如，从患者去除并在培养物中培养以用于观察的细胞系或细胞的生物活检。生物样品包括组织和体液，例如，血液、血液部分、淋巴、唾液、尿液、粪便等。
术语“治疗(therapy)”、“治疗(treatment)”和“改善(amelioration)”是指症状严重性的任何减少。在治疗癌症(例如，AML)的情形下，治疗可以指例如，减少肿瘤大小、癌细胞数目、生长速率、转移活性、减少非癌细胞的细胞死亡、减少恶心和其他的化疗或放疗副作用等。术语“治疗(treat)”和“防止(prevent)”不试图为绝对的术语。治疗和防止可以指发作的任何延迟、症状的改善、患者存活的提高、存活时间或存活率的增加等。治疗和防止可以为完全的(不可检测的肿瘤细胞水平)或部分的，使得在患者中发现相比无本发明时将发生的更少的肿瘤细胞。可与未接受治疗的个体或个体库或与相同患者在治疗之前或治疗期间的不同时间来比较治疗的效应。在一些方面，相比例如，给药前的个体或未接受治疗的对照个体，疾病的严重性减少了至少10％。在一些方面，疾病的严重性减少了至少25％、50％、75％、80％或90％，或者在一些情形下，使用标准诊断技术不再可检测到。
术语“有效量”、“有效剂量”、“治疗有效量”等是指如上文所述的足以改善病症的治疗剂的量。例如，对于给定参数，治疗有效量将显示治疗效应的至少5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或至少100％中的任一个的增加或降低。治疗效应也可表示为“倍数”增加或降低。例如，治疗有效量可相比对照具有至少1.2倍、1.5倍、2倍、5倍或更多倍中的任一个的效应。
如本文中使用的“抑制(Inhibits)”或“抑制(inhibition)”，例如，诸如细胞生长、增殖、代谢活性、活力、存活或分裂的特征的抑制是指所述特征相对于对照的降低。在一些情形下，本发明的化合物可以抑制上述特征中的一种。例如，以本文中描述的抗体处理的细胞可显示上述特征之一的相比未处理细胞的约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97.5％、99％、99.5％、99.9％或更多的降低。在一些情形下，以本发明的化合物处理的细胞可显示对照(例如，未处理的)细胞的小于约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97.5％、99％、99.5％、99.9％的生长、增殖、代谢活性、活力、存活或分裂。
IL1-RAP活性的“抑制剂”是指使用针对IL1-RAP活性的体外和体内试验确定的抑制分子，例如，拮抗剂及其同源物和模拟物。抑制剂可以例如，结合或失活IL1-RAP的活性。抑制剂包括天然存在的和合成的拮抗剂(例如，起拮抗剂功能的小化学分子、抗体等)。对于抑制剂的这样的试验包括例如，将假定的抑制剂化合物施加至表达IL1-RAP的细胞，然后确定细胞的结合或测量IL1-RAP的功能活性，如本文中所描述的。IL1-RAP的功能活性可包括细胞增殖或细胞存活。以可能的抑制剂处理表达IL1-RAP的细胞，与无抑制剂的对照样品进行比较，以检测效应的程度。对照细胞(未处理的)被指定100％的相对的IL1-RAP活性值。
当相对于对照的IL1-RAP活性值为约80％或70％，任选地为50％、40％、30％、25％、20％、15％、10％、5％、1％或更低时，则实现了IL1-RAP的抑制。IL1-RAP的抑制可以提供细胞增殖的减少或细胞存活的减少。在其他情形下，可通过IL1-RAP与配体或另一蛋白，例如IL1R1、TOLLIP、MYD88、IRAK1或IRAK2的结合或联合的减少来检测抑制。在其他情形下，可通过依赖于白介素-1的NF-κ-B激活的减少来检测抑制。也可通过AML细胞存活的减少或其集落形成的减少来检测抑制。在一个实施方案中，可以按实施例6中所示的来测定IL1-RAP活性。
如本文中使用的，术语“药学上可接受的”是指与制剂的其他成分相容的且对其受体无害的载体。该术语与“生理学上可接受的”和“药理学上可接受的”作为同义使用。药物组合物通常包含用于缓冲和在储存中保藏的试剂，且可以根据给药途径包含缓冲剂和用于合适的递送的载体。
术语“剂量(dose)”和“剂量(dosage)”在本文中可互换使用。剂量是指在每次给药时向个体施用的活性成分的量。对于本发明，剂量可以指抗体或相关组分的浓度，例如，治疗剂的量或放射标记物的剂量。剂量根据多种因素而改变，包括给药频率；个体的尺寸和耐受性；病况的严重性；副作用的风险；给药途径；和可检测的部分(存在时)的成像形式。本领域技术人员将认可可根据以上因素或基于治疗进展修改剂量。术语“剂量形式”是指药物的特定形式，且取决于给药途径。例如，剂量形式可以存在于液体，例如，盐水溶液中以用于注射。
“对象”、“患者”、“个体”等术语可互换使用，且指(除非另有指示)哺乳动物如人和非人的灵长类，以及兔子、大鼠、小鼠、山羊、猪和其他的哺乳动物物种。该术语未必指诊断患有特定疾病的对象，但通常指在医疗监督下的个体。患者可以为寻求治疗、监测、调节或修改现有治疗方案等的个体。“癌症患者”或“AML患者”可以指这样的个体，其诊断患有癌症、当前在遵循治疗方案或存在复发风险，例如，在手术摘除肿瘤后。在一些实施方案中，癌症患者诊断患有癌症且为治疗候选对象。癌症患者可以包括未接受治疗、当前在接受治疗、已接受手术的个体，以及已停止治疗的那些。
在治疗癌症的上下文中，需要治疗的对象可以指患有癌症或癌前病况、已患癌症且存在复发风险、怀疑患有癌症、在接受标准的癌症治疗如放疗或或化疗等的个体。
“癌症”、“肿瘤”、“转化的”等术语包括癌前的、肿瘤的、转化的和癌细胞，且可以指实体瘤或非实体性癌症(参见，例如，Edge et al.AJCC Cancer Staging Manual(7thed.2009)；Cibas and Ducatman Cytology:Diagnostic principles and clinicalcorrelates(3rd ed.2009))。癌症包括良性和恶性肿瘤(异常生长)。“转化”是指自发的或诱导的表型改变，例如，细胞的永生化、形态改变、异常细胞生长、减少的接触抑制和锚定，和/或恶性化(参见，Freshney,Culture of Animal Cells a Manual of Basic Technique(3rd ed.1994))。尽管转化可起因于转化性病毒的感染和掺入新的基因组DNA或摄入外源性DNA，但其也可以自发性产生或在暴露至致癌物质后产生。
术语“癌症”可以指白血病、癌、肉瘤、腺癌、淋巴瘤、实体性和淋巴样癌症等。不同类型的癌症的实例包括但不限于急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、B-细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、小细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、单核细胞白血病、骨髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、肺癌(例如，非小细胞肺癌或NSCLC)、卵巢癌、前列腺癌、结直肠癌、肝癌(即肝癌(hepatocarcinoma))、肾癌(即肾细胞癌)、膀胱癌、乳腺癌、甲状腺癌、胸膜癌、胰腺癌、子宫癌、宫颈癌、睾丸癌、肛门癌、胰腺癌、胆管癌、胃肠类癌肿瘤、食道癌、胆囊癌、附件癌、小肠癌、胃(胃(gastric))癌症、中枢神经系统癌症、皮肤癌、绒膜癌；头颈癌、成骨性肉瘤、纤维肉瘤、成神经细胞瘤、胶质瘤和黑素瘤。
“癌症靶标”或“癌症标记物”为癌症中，例如，癌细胞上或癌症环境中差异性表达或加工的分子。示例性的癌症靶标为细胞表面蛋白，如受体IL1-RAP(以及例如，细胞粘附分子和受体)、胞内受体、激素和由细胞分泌至癌症环境中的分子如蛋白酶。针对特定癌症的标记物为本领域已知，例如，针对AML的CD45、针对AML CSC的CD34+CD38-、结肠癌和结直肠癌上的MUC1表达、肺癌中的蛙皮素受体，以及前列腺癌上的前列腺特异性的膜抗原(PSMA)。
在一些实施方案中，癌症靶标可以与某些类型的癌细胞，例如，AML、白血病、骨髓瘤、淋巴瘤、非小细胞肺癌细胞、前列腺癌、结直肠癌、乳腺癌或卵巢癌相关。细胞类型特异性的靶标通常在该细胞类型中以相比参照细胞群体高至少2倍的水平表达。在一些实施方案中，细胞类型特异性标记物以相比其在参照群体中的平均表达至少高3、4、5、6、7、8、9、10、20、50、100倍或1000倍中的任一个的水平存在。因此，可以检测或测量所述靶标来从其他细胞区分目标细胞类型。例如，AML癌症靶标包括CLL-1、IL1-RAP、GPR114、Ly86、LILRA1和CD180。
癌症干细胞(CSC)是在肿瘤或血液癌症中发现的能够产生组成大部分癌症的细胞的细胞。CSC也可自我更新，类似于正常的(非癌症的)干细胞。因此，CSC可通过迁移至个体中的非肿瘤组织并开始“新的”肿瘤而介导转移。CSC组成了非常小的百分比的任何给定的癌症，这取决于检测的癌症阶段。例如，AML细胞样品中CSC的平均频率据信为约1:10,000。造血CSC可鉴定为CD34+，类似于正常造血干细胞(HSC)。其他CSC相关的标记物包括CD44(乳腺)、CD133(神经胶质癌)和Notch(例如，骨髓瘤和成神经细胞瘤)。
“炎性病况”是指个体中的任何炎症，并且可以为瞬时的(例如，响应暴露于病原体或过敏原)或慢性的。炎症的特征在于募集和激活巨噬细胞和其他白血球的炎性细胞因子如IFN-γ、IL-6和TNF-α。在一些情形下，炎症可以发展成为慢性的有害病况或自身免疫性病况(例如，MS、狼疮、类风湿性关节炎、克罗恩病)。炎症可以为局部明显的(例如，在局部的感染或暴露位点处)或系统性的(例如，动脉粥样硬化、高血压)。
术语“内化(internalize)”、“内化(internalization)”、“内吞(endocytose)”、“内吞(endocytosis)”、“吞食”和类似术语是指细胞摄取物质，例如，通过抗体(或受体)介导的内吞作用或吞噬作用。
术语“核酸”是指脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及它们的单链或双链形式的聚合物，以及它们的补体。术语“多核苷酸”是指核苷酸的线性序列。术语“核苷酸”通常指多核苷酸的单一单元，即单体。核苷酸可以为天然存在的核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸，或者它们的合成的或修改的形式。本文中包括的多核苷酸的实例包括单链和双链DNA、单链和双链RNA(包括siRNA)，以及具有单链和双链DNA和RNA的混合物的杂合分子。
词语“互补的”或“互补性”是指多核苷酸中的核酸与第二多核苷酸中的另一核酸形成碱基对的能力。例如，序列A-G-T与序列T-C-A互补。互补性可以为部分的，其中仅一些核酸根据碱基配对匹配，或者为完全的，其中所有核酸均根据碱基配对匹配。
使用核酸杂交技术的多种特定DNA和RNA测量的方法为本领域技术人员已知(参见Sambrook,Id.)。一些方法涉及电泳分离(例如，检测DNA的DNA印迹和检测RNA的RNA印迹)，但也可在无电泳分离下进行DNA和RNA的测量(例如，定量PCR、斑点杂交或阵列)。
词语“蛋白”、“肽”和“多肽”可互换使用，是指氨基酸多聚体或一组两个或更多个互相作用的或结合的氨基酸聚合物。该术语适用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基为对应的天然存在的氨基酸，以及包含修改的残基的天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物的人工的化学模拟物。
术语“氨基酸”是指天然存在的氨基酸、修改的或合成的氨基酸，以及功能类似于天然存在的氨基酸的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸为由遗传密度编码的那些。修改的氨基酸包括例如，羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指与天然存在的氨基酸具有相同的基本化学结构，例如，与氢、羧基、氨基和R基团结合的α碳的化合物，例如，高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亚砜、甲基蛋氨酸锍。这样的类似物可具有修改的R基团(例如，正亮氨酸)或修改的肽骨架，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指具有不同于氨基酸的一般化学结构的结构，但功能类似于天然存在的氨基酸的化合物。
氨基酸在本文中可通过IUPAC-IUB生物化学命名委员会建议的其通常已知的三字母符号或通过单字母符号来提及。同样地，核苷酸可通过其通常接受的单字母编码来提及。
“保守修改的变体”适用于氨基酸和核酸序列。关于特定的核酸序列，保守修改的变体是指编码相同的或基本上相同的氨基酸序列的那些核酸，或者在核酸不编码氨基酸序列时，指基本上相同的或相关的例如，天然连续的序列。由于遗传密码的简并性，大量的功能上相同的核酸编码大多数的蛋白。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU均编码氨基酸丙氨酸。因此，在通过密码子明确丙氨酸的每一个位置处，该密码子可改变为描述的对应的密码子中的另一个，而不改变所编码的多肽。这样的核酸变体为“沉默变体”，其为一类保守修改的变体。本文中的每个编码多肽的核酸序列也描述了核酸的沉默变体。技术人员将认可在某些上下文中，核酸中的每个密码子(除了AUG，其通常为蛋氨酸的仅有密码子，和TGG，其通常为色氨酸的仅有密码子)可被修改以产生功能上相同的分子。因此，编码多肽的核酸的沉默变体在描述的序列中关于表达产物，但非关于真实的探针序列为内隐的。
关于氨基酸序列，技术人员将认可对核酸、肽、多肽或蛋白序列的改变、添加或删除编码序列中的单个氨基酸或小百分比的氨基酸的个别取代、缺失或添加为“保守修改的变体”，其中所述改变导致氨基酸被化学相似的氨基酸取代。提供了功能相似氨基酸的保守的取代表为本领域所熟知。这样的保守修改的变体外加且不排除本发明的多态性变体、种间同源物和等位基因。以下氨基酸通常为彼此的保守取代：1)丙氨酸(A)，甘氨酸(G)；2)天冬氨酸(D)，谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)，谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)，赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，蛋氨酸(M)，丙氨酸(V)；6)苯丙氨酸(F)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W)；7)丝氨酸(S)，苏氨酸(T)；和8)半胱氨酸(C)，蛋氨酸(M)(参见，例如，Creighton,Proteins(1984))。
术语“相同的”或“百分比同一性”在两个或更多个核酸或者两个或更多个多肽的上下文中，是指两个或更多个这样的序列或亚序列，其为相同的或具有特定百分比的如使用采用默认参数的BLAST或BLAST 2.0序列比较算法或者通过手动对齐和目测所测量的相同核苷酸或氨基酸(即，当在比较窗或指定区域上比较且针对最大对应性对齐时，约60％的同一性，例如，至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高中的任一个的同一性)。参见例如，NCBI网站ncbi.nlm.nih.gov/BLAST。这样的序列则被说成是“基本上相同的”。通常在最佳对齐的序列上确定百分比同一性，使得该定义适用于具有缺失和/或添加的序列，以及具有取代的那些。本领域常用的算法导致空白等。通常，在包含抗体表位的区域或为至少约25个氨基酸或核苷酸长度的序列上，或者在为50-100个氨基酸或核苷酸长度的区域上，或者在参照序列的整个长度上存在同一性。
术语“重组”在参照例如，细胞或核酸、蛋白或载体使用时，指该细胞、核酸、蛋白或载体通过引入异源核酸或蛋白，或者改变天然的核酸或蛋白而被修改，或者指细胞来源于如此修改的细胞。因此，例如，重组细胞表达在天然(非重组)形式的细胞中未发现的基因，或者表达在其他方面异常表达的、低表达的或根本未表达的天然的基因。
术语“异源的”关于多核苷酸或多肽指该多核苷酸或多肽包含未发现在天然下彼此为相同的关系的两个或更多个亚序列。例如，异源的多核苷酸或多肽通常为重组产生的，具有来自布置的以产生新的功能单元的无关基因的两个或更多个序列，例如，来自一种来源的启动子和来自另一种来源的编码区。类似地，异源蛋白指蛋白包含未发现在天然下彼此为相同的关系的两个或更多个亚序列(例如，融合蛋白)。
III.IL1-RAP相关的病症
可以利用如本文中描述的抗体治疗、防止、改善或减轻IL1-RAP病症。IL1-RAP相关的病症包括与升高的IL1-RAP表达相关的癌症，和与减少的IL1-RAP表达相关的炎性病症，如本文中所描述的。本发明的抗体可用于诊断和监测这些病症，以及靶向治疗，例如，特异性递送抗体或与化疗剂(或细胞毒性剂)缀合的抗体至表达IL1-RAP的细胞，如癌细胞，同时避免或减少至其他细胞的递送。在一些情形下，靶向治疗可以包括将表达IL1-RAP的细胞与如本文中描述的抗体接触。
IL1-RAP表达与骨髓瘤和其他的造血细胞癌症，和癌(例如，结肠癌、卵巢癌、肝癌、前列腺癌、子宫癌、乳腺癌和肾癌)相关。因此，可使用受体IL1-RAP特异性的抗体靶向的癌症的实例包括造血细胞癌症(例如，B细胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、骨髓增生异常综合征(白血病前期)、白血病和骨髓瘤(例如，急性髓细胞性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性单核细胞性白血病(CMML)、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤))。可以使用本公开的抗体靶向的另外的表达IL1-RAP的癌症包括但不限于结肠癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、肾癌、肝癌和子宫癌。也可使用受体IL1-RAP特异性的抗体靶向骨髓增生异常综合症(MDS)。
在一些情形下，可通过本文中提供的抗IL1-RAP抗体治疗的IL1-RAP相关的病症包括关节、骨和肌肉疾病，如类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、手部糜烂性骨关节炎、复发性多灶性骨髓炎、创伤性膝关节损伤和复发性多软骨炎。在一些情形下，可通过本文中提供的抗IL1-RAP抗体治疗的IL1-RAP相关的病症包括遗传性系统性自身炎症性疾病，如家族性地中海热、cryopyrin相关的周期性综合征、TNF受体相关的周期性综合征、高IgD综合征、周期性发热、口疮性口炎、咽炎和腺炎，以及IL-1受体拮抗剂缺乏症。在一些情形下，可通过本文中提供的抗IL1-RAP抗体治疗的IL1-RAP相关的病症包括全身性炎症性疾病，如全身性幼年特发性关节炎、成年发病型Still病、Schnitzler综合征、贝赛特氏病、滑膜炎痤疮脓疱病、骨质增生性骨炎综合征和巨噬细胞激活综合征。在一些情形下，可通过本文中提供的抗IL1-RAP抗体治疗的IL1-RAP相关的病症包括常见的炎症性疾病，如痛风、假性痛风、2型糖尿病、化脓性汗腺炎、收缩性心力衰竭、心脏重塑、干眼综合征、脓疱性银屑病和中性粒细胞性皮肤病。IL1-RAP相关的病症的其他实例包括Dinarello et al.Nature Reviews DrugDiscovery，第11卷，2012年8月第613页和其中提供的补充材料中描述的疾病和病况。
可通过检测细胞表面标志物表达对AML细胞进行定征，并将其与其他细胞区分开来。除了为CLL-1+以外，AML细胞可以为CD33+(虽然一些为CD33-)、CD45+和CDw52+。AML原始细胞(包括LSCs)通常为CD34+CD38-。HSC和LSC的特征可以在于CD34的表达，但前者不表达CLL-1。MDS细胞的特征可以在于CD5、CD7、CD13和CD34的表达。CML细胞的特征可以在于7-ADD、CD33、CD34和CD38的表达。
骨髓增生异常综合症(MDS)包括一组密切相关的成血性病症，其中骨髓显示出暗示白血病前期过程的定性和定量变化，但具有未必以急性白血病终结的慢性过程。多个术语，包括白血病前期、难治性贫血、难治性骨髓增生异常性贫血、冒烟性或亚急性白血病、骨髓增生异常综合征(DMPS)和脊髓发育不良，都被用来描述MDS。这些病况的特征均在于具有成熟受损(骨髓增生异常)和血细胞数减少的细胞骨髓。DMPS的特征在于存在巨型母细胞(megablastoids)、巨核细胞发育不良，以及异常原始细胞数量的增加，反映了增强的粒细胞成熟过程。患有DMPS的患者显示类似于急性髓细胞性白血病中发现的那些的染色体异常，并且在一定比例的受累患者中进展到急性髓细胞性白血病。
慢性骨髓增殖性病症是一系列病况，其特征在于成熟和未成熟的粒细胞、红细胞和血小板数量的增加。慢性骨髓增殖性病症可以转变为该组内的其他形式，倾向于以急性髓细胞性白血病终结。该组中的特定疾病包括真性红细胞增多症、慢性髓细胞性白血病、原因不明的髓细胞性白血病、原发性血小板增多症和慢性中性粒细胞性白血病。
骨髓纤维化的特点在于骨髓的瘢痕，其导致红细胞和白细胞以及血小板数量的减少。骨髓纤维化瘢痕可由白血病引起，但可能有其他的原因，如血小板增多或不良药物作用。
IV.抗IL1-RAP抗体
本文中提供了抗IL1-RAP抗体(包括，例如，受体IL1-RAP特异性的抗体、特异性结合IL1-RAP的膜结合形式但不实质上结合IL1-RAP的可溶性形式的抗受体IL1-RAP)。在一些实施方案中，本文中提供的抗IL1-RAP抗体特异性结合IL1-RAP的膜结合形式但不结合IL1-RAP的可溶性形式。本文中描述的抗受体IL1-RAP抗体也可抑制表达IL1-RAP的细胞的生长。部分考虑到本文中描述的数据，据信在无缀合的细胞毒性剂下，这些抗IL1-RAP抗体可用于抑制表达IL1-RAP的细胞(例如，癌细胞)的细胞生长。还据信本文中描述的抗IL1-RAP抗体也显示补体依赖性细胞毒性(CDC)活性或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。据信这些抗IL1-RAP抗体也可用于靶向表达IL1-RAP的细胞以用于破坏，例如，在无缀合的细胞毒性剂下。然而，在一些情形下，然而，可将细胞毒性剂与本发明的抗IL1-RAP抗体缀合。
本文中描述的抗IL1-RAP抗体具有独特的细胞结合活性，如本文中的实施例中描述的那些。例如，抗IL1-RAP抗体可用于靶向嗜曙红白血病细胞(示例为EOL-1细胞)。在一些实施方案中，抗IL1-RAP抗体还可以结合AML、CML或MDS细胞或实体瘤细胞，如肝、肾、肺和脑肿瘤细胞。在一些实施方案中，这些抗体可用于检测这样的癌细胞，其显示被本文中公开的抗IL1-RAP抗体中的至少一种以高亲和力靶向的表位。在一些实施方案中，然后可以利用相同的抗IL1-RAP抗体靶向那些癌细胞以用于破坏。这样的方法可包括治疗具有例如，如本文中所述的表达IL1-RAP的癌细胞的个体，包括向所述个体施用抗IL1-RAP抗体。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体相比先前描述的抗IL1-RAP抗体具有显著的和令人吃惊的优势。例如，IL1-RAP以可溶性和膜结合形式表达。在一些情形下，可溶性形式存在于(例如，分泌至)正常人血清中。发明人已发现因此可通过IL1-RAP的可溶性形式封闭与可溶性和膜结合形式的抗体的结合，且其不能在表达IL1-RAP的细胞表面上积累。
在一些情形下，本文中描述的抗IL1-RAP抗体提供了相比先前描述的抗IL1-RAP抗体的显著的优势，因为本文中提供的抗体激活或强烈激活抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，或补体依赖性细胞毒性(CDC)，或以上的组合。在一些情形下，本文中描述的受体特异性的IL1-RAP抗体提供了相比非受体特异性的抗IL1-RAP抗体显著更大的ADCC和/或CDC激活。例如，在一些情形下，受体特异性的IL1-RAP抗体能够大量结合表达膜结合的IL1-RAP的细胞，且不或不实质上竞争可溶性IL1-RAP与这些细胞的结合。在一些情形下，本文中提供的抗体对递送细胞毒性或化疗剂至表达IL1-RAP的受体形式的细胞特别有利，而不管存在的可溶性IL1-RAP。
在一些实施方案中，抗IL1-RAP抗体结合与具有抗体54.9D7、56.12G6、2H8、50.3G7、54.15B5、42.1D3、54.8H8、54.9E9、50.6C12、57.7A9、46.8G1、42.3G6、46.1D2、41.10C2、46.2C2或44.5D2的CDR序列的抗体相同的表位。在一些实施方案中，抗IL1-RAP抗体包含选自以下抗体克隆的3个重链CDR和/或3个轻链CDR：CDR 54.9D7、56.12G6、2H8、50.3G7、54.15B5、42.1D3、54.8H8、54.9E9、50.6C12、57.7A9、46.8G1、42.3G6、46.1D2、41.10C2、46.2C2或44.5D2。CDR可来自相同的抗体或组中的不同的抗体。在一些实施方案中，抗IL1-RAP抗体具有这样的轻链CDR序列和重链CDR序列，其相对于抗体54.9D7、56.12G6、2H8、50.3G7、54.15B5、42.1D3、54.8H8、54.9E9、50.6C12、57.7A9、46.8G1、42.3G6、46.1D2、41.10C2、46.2C2或44.5D2的一个或多个CDR序列，具有多达1、2、3个或4个氨基酸取代、添加或缺失/CDR。在一些实施方案中，相对于上述抗IL1-RAP抗体的一个或多个轻链CDR序列，轻链CDR序列包含多达1、2、3个或4个氨基酸取代、添加或缺失/CDR。在一些实施方案中，相对于上述抗IL1-RAP抗体的一个或多个重链CDR序列，重链CDR序列包含多达1、2、3个或4个氨基酸取代、添加或缺失/CDR。在一些实施方案中，取代、添加或缺失发生于总共6个CDR中的仅1、2、3、4个或5个CDR中。在一些实施方案中，抗IL1-RAP抗体具有这样的可变区序列，其与54.9D7、56.12G6、2H8、50.3G7、54.15B5、42.1D3、54.8H8、54.9E9、50.6C12、57.7A9、46.8G1、42.3G6、46.1D2、41.10C2、46.2C2或44.5D2的那些具有至少75％、80％、85％、90％、95％的同一性或96％、97％、98％、99％或100％的同一性。在一些实施方案中，抗IL1-RAP抗体的轻链和/或重链CDR与54.9D7、56.12G6、2H8、50.3G7、54.15B5、42.1D3、54.8H8、54.9E9、50.6C12、57.7A9、46.8G1、42.3G6、46.1D2、41.10C2、46.2C2或44.5D2的那些具有至少95％的同一性或96％、97％、98％、99％或100％的同一性的CDR序列同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆54.9D7的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
54.9D7轻链可变区序列：SEQ ID NO:5
54.9D7重链可变区序列SEQ ID NO:6
54.9D7人源化的轻链可变区序列变体1SEQ ID NO:115
54.9D7人源化的轻链可变区序列变体2SEQ ID NO:116
54.9D7人源化的轻链可变区序列变体3SEQ ID NO:117
54.9D7人源化的重链可变区序列变体1SEQ ID NO:118
54.9D7人源化的重链可变区序列变体2SEQ ID NO:119
54.9D7人源化的重链可变区序列变体3SEQ ID NO:120
54.9D7人源化的重链可变区序列变体4SEQ ID NO:121
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含54.9D7轻链可变区，其与SEQ ID NO:5具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含54.9D7重链可变区，其与SEQ ID NO:6具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含54.9D7人源化的轻链可变区，其与SEQ IDNO:115具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含54.9D7人源化的轻链可变区，其与SEQ ID NO:116具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含54.9D7人源化的轻链可变区，其与SEQ ID NO:117具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含54.9D7重链可变区，其与SEQ ID NO:118具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含54.9D7重链可变区，其与SEQ ID NO:119具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含54.9D7重链可变区，其与SEQ ID NO:120具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含54.9D7重链可变区，其与SEQ ID NO:121具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
以下显示了嵌合的54.9D7(SEQ ID NO:5)的轻链可变区序列、54.9D7的人源化的轻链可变区序列变体1(SEQ ID NO:115)、54.9D7的人源化的轻链可变区序列变体2(SEQ IDNO:116)、54.9D7的人源化的轻链可变区序列变体3(SEQ ID NO:117)的序列对齐。人源化的轻链可变区序列(SEQ ID NO:115-117)中的每个的不同于SEQ ID NO:5的序列的氨基酸通过“·”或“:”指示。
SEQ ID NO:5和115-117的序列对齐
以下显示了嵌合的54.9D7的重链可变区序列(SEQ ID NO:6)、54.9D7的人源化的重链可变区序列变体1(SEQ ID NO:118)、54.9D7的人源化的重链可变区序列变体2(SEQ IDNO:119)、54.9D7的人源化的重链可变区序列变体3(SEQ ID NO:120)和54.9D7的人源化的重链可变区序列变体4(SEQ ID NO:121)的序列对齐。人源化的重链可变区序列(SEQ IDNO:118-121)中的每个的不同于SEQ ID NO:6的序列的氨基酸通过“·”或“:”指示。
SEQ ID NO:6和118-121的序列对齐
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的一个或多个54.9D7 CDR：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个54.9D7 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3或4个氨基酸取代或缺失：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆56.12G6的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
56.12G6轻链可变区序列：SEQ ID NO:13
56.12G6重链可变区序列SEQ ID NO:14
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含56.12G6轻链可变区，其与SEQ ID NO:13具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含56.12G6重链可变区，其与SEQ ID NO:14具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个56.12G6 CDR，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个56.12G6 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3或4个氨基酸取代或缺失：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆2H8的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
2H8轻链可变区序列：SEQ ID NO:126
2H8重链可变区序列SEQ ID NO:127
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含2H8轻链可变区，其与SEQ ID NO:126具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含2H8重链可变区，其与SEQ ID NO:127具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个2H8 CDR，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个2H8 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3个或4个氨基酸取代或缺失：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆50.3G7的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
50.3G7轻链可变区序列：SEQ ID NO:27
50.3G7重链可变区序列：SEQ ID NO:28
50.3G7人源化的轻链可变区序列变体1：SEQ ID NO:122
50.3G7人源化的重链可变区序列变体1：SEQ ID NO:123
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含50.3G7轻链可变区，其与SEQ ID NO:27具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含50.3G7重链可变区，其与SEQ ID NO:28具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个50.3G7 CDR，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个50.3G7 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3个或4个氨基酸取代或缺失：
在一些实施方案中，抗IL1RAP抗体为人源化的50.3G7抗体，其具有与SEQ ID NO:124的序列具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的轻链序列：
/>
(SEQ ID NO:124；用于缀合的CDR和半胱氨酸取代被加粗且有下划线)。
在一些实施方案中，抗IL1RAP抗体为人源化的50.3G7抗体，其具有与SEQ ID NO:125的序列具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的重链序列：
(SEQ ID NO:125；用于缀合的CDR和半胱氨酸取代被加粗且有下划线)。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆54.15B5的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
54.15B5轻链可变区序列：SEQ ID NO:27
54.15B5重链可变区序列：SEQ ID NO:28
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含54.15B5轻链可变区，其与SEQ ID NO:27具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含54.15B5重链可变区，其与SEQ ID NO:28具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个54.15B5 CDR，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个54.15B5 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3个或4个氨基酸取代或缺失：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆42.1D3的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
42.1D3轻链可变区序列：SEQ ID NO:41
42.1D3重链可变区序列:SEQ ID NO:42
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含42.1D3轻链可变区，其与SEQ ID NO:41具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含42.1D3重链可变区，其与SEQ ID NO:42具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个42.1D3 CDR，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个42.1D3 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3个或4个氨基酸取代或缺失：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆54.8H8的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
54.8H8轻链可变区序列：SEQ ID NO:41
54.8H8重链可变区序列：SEQ ID NO:42
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含54.8H8轻链可变区，其与SEQ ID NO:41具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含54.8H8重链可变区，其与SEQ ID NO:42具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个54.8H8 CDR，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
/>
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个54.8H8 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3个或4个氨基酸取代或缺失：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆54.9E9的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
54.9E9轻链可变区序列：SEQ ID NO:52
54.9E9重链可变区序列：SEQ ID NO:53
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含4.9E9轻链可变区，其与SEQ ID NO:52具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含54.9E9重链可变区，其与SEQ ID NO:53具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个54.9E9 CDR，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个54.9E9 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3个或4个氨基酸取代或缺失：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆50.6C12的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
50.6C12轻链可变区序列：SEQ ID NO:58
50.6C12重链可变区序列：SEQ ID NO:59
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含50.6C12轻链可变区，其与SEQ ID NO:58具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含50.6C12重链可变区，其与SEQ ID NO:59具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个50.6C12 CDR，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个50.6C12 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3个或4个氨基酸取代或缺失：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆57.7A9的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
57.7A9轻链可变区序列：SEQ ID NO:66
57.7A9重链可变区序列：SEQ ID NO:59
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含57.7A9轻链可变区，其与SEQ ID NO:66具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含57.7A9重链可变区，其与SEQ ID NO:59具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个57.7A9 CDR，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个57.7A9 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3个或4个氨基酸取代或缺失：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆46.8G1的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
46.8G1轻链可变区序列：SEQ ID NO:67
46.8G1重链可变区序列：SEQ ID NO:68
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含46.8G1轻链可变区，其与SEQ ID NO:67具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含46.8G1重链可变区，其与SEQ ID NO:68具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个46.8G1 CDR，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个46.8G1CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3个或4个氨基酸取代或缺失：
/>
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆42.3G6的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
42.3G6轻链可变区序列：SEQ ID NO:75
42.3G6重链可变区序列：SEQ ID NO:76
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含42.3G6轻链可变区，其与SEQ ID NO:75具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含42.3G6重链可变区，其与SEQ ID NO:76具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个42.3G6 CDR，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个42.3G6 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3个或4个氨基酸取代或缺失：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆46.1D2的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
46.1D2轻链可变区序列：SEQ ID NO:81
46.1D2重链可变区序列：SEQ ID NO:82
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含46.1D2轻链可变区，其与SEQ ID NO:81具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含46.1D2重链可变区，其与SEQ ID NO:82具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个46.1D2 CDR，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个46.1D2 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3个或4个氨基酸取代或缺失：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆41.10C2的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
41.10C2轻链可变区序列：SEQ ID NO:89
41.10C2重链可变区序列：SEQ ID NO:90
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含41.10C2轻链可变区，其与SEQ ID NO:89具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含41.10C2重链可变区，其与SEQ ID NO:90具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个41.10C2 CDRs，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个41.10C2 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3个或4个氨基酸取代或缺失：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆46.2C2的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
46.2C2轻链可变区序列：SEQ ID NO:97
46.2C2重链可变区序列：SEQ ID NO:98
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含46.2C2轻链可变区，其与SEQ ID NO:97具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含46.2C2重链可变区，其与SEQ ID NO:98具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个46.2C2 CDR，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个46.2C2 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3个或4个氨基酸取代或缺失：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含克隆44.5D2的轻链可变区序列和/或重链可变区序列。
44.5D2轻链可变区序列：SEQ ID NO:105
44.5D2重链可变区序列：SEQ ID NO:106
在其他情形下，抗IL1-RAP抗体可包含44.5D2轻链可变区，其与SEQ ID NO:105具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。另外或可选地，抗IL1-RAP抗体可包含44.5D2重链可变区，其与SEQ ID NO:106具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％的同一性。
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个44.5D2 CDR，其与选自以下的CDR具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：
在一些情形下，抗IL1-RAP抗体可包含一个或多个44.5D2 CDR，其相比选自以下的CDR含有1、2、3个或4个氨基酸取代或缺失：
任何本文中描述的抗体均可为嵌合的抗体或人源化的抗体。在一些实施方案中，抗体为结合抗IL1-RAP的抗体片段，例如，Fab。在一些实施方案中，抗IL1-RAP抗体以可检测的试剂标记，例如，如下文中所述的。在一些实施方案中，抗IL1-RAP抗体与治疗剂，例如，如下文所述的化疗剂或细胞毒性剂接合。
在其他的实施方案中，抗IL1-RAP抗体为双特异性抗体，其具有第一臂和第二臂，所述第一臂具有结合受体IL 1RAP的抗原结合区，所述第二臂具有结合第二靶标抗原的抗原结合区。第二靶标抗原可以为任何抗原目标。例如，第二靶标抗原为癌症标记物，即相比非癌细胞在癌细胞(例如，细胞表面蛋白)上以更高水平(例如，多于2x)表达的蛋白。例如，第二靶标抗原可以选自：CLL-1、GPR114、IL1RAP、TIM-3、CD19、CD20、CD22、ROR1、间皮素、CD33、CD123/IL3Ra、c-Met、PSMA、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、CEA、CA-125、Muc-1、AFP、糖脂质F77、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1TCR、酪氨酸酶、TRPI/gp75、gp100/pmel-17、Melan-A/MART-1、Her2/neu、WT1、EphA3、端粒酶、HPV E6、HPV E7、EBNA1、BAGE、GAGE和MAGE A3TCRSLITRK6、ENPP3、连接素-4、CD27、SLC44A4、CAIX、Cripto、CD30、MUC16、GPNMB、BCMA、Trop-2、组织因子(TF)、CanAg、EGFR、αv-整合素、CD37、叶酸受体、CD138、CEACAM5、CD56、CD70、CD74、GCC、5T4、CD79b、Steap1、Napi2b、Lewis Y抗原、LIV、c-RET、DLL3、EFNA4、Ly6e(RIG-e)、CD79a、CD274(PD-L1)、CD38、DLL4、CD319(SLAMF7)或内皮唾酸蛋白/CD248。
在一些实施方案中，抗体还具有选自以下的至少一种活性：
·以100μM或更低(例如，1-10μM、0.1-10μM、10-50μM、约20μM等)的KD结合IL1-RAP的受体形式；
·以100nM或更低(例如，1-10nM、0.1-10nM、10-50nM、约20nM等)的KD结合IL1-RAP的受体形式；
·相比无抗体存在时的细胞生长，减少表达IL1-RAP的细胞的细胞生长；以及
·相比无抗体存在时的细胞生长，在交联或固定(例如，于固体或半固体基质上)时减少表达IL1-RAP的细胞的细胞生长。
·减少表达IL-1RAP的癌细胞系的集落形成。
·抑制受体IL1-RAP表达细胞中的IL-1b诱导的NF-kappB信号传导。
·减少肿瘤异种移植动物模型中的肿瘤负荷。
·以1M或更大(例如，大于10M、大于100M等)的KD结合可溶性IL1-RAP。
·以小于10-7M的KD结合受体IL-1Rap。
在一些实施方案中，抗IL1-RAP抗体与来自人的受体IL1-RAP结合。在一些实施方案中，抗IL1-RAP抗体与来自食蟹猴的受体IL1-RAP结合。在一些实施方案中，抗IL1-RAP抗体与来自啮齿动物(小鼠或大鼠)的IL1-RAP结合。
A.制造抗体的方法
为了制备本发明描述的抗体，例如，重组的单克隆或多克隆抗体，可以使用本领域已知的许多技术(参见，例如，Kohler&Milstein,Nature256:495-497(1975)；Kozbor etal.,Immunology Today 4:72(1983)；Cole et al.,pp.77-96in Monoclonal Antibodiesand Cancer Therapy,Alan R.Liss,Inc.(1985)；Coligan,Current Protocols inImmunology(1991)；Harlow&Lane,Antibodies,ALaboratory Manual(1988)；和Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice(2d ed.1986))。可从细胞克隆编码目标抗体的重链和轻链的基因，例如，可从杂交瘤克隆编码单克隆抗体的基因，并用于制造重组的单克隆抗体。也可从杂交瘤或浆细胞制造编码单克隆抗体的重链和轻链的基因文库。重链和轻链基因产物的随机组合产生具有不同抗原特异性(参见，例如，Kuby,Immunology(3rd ed.1997))的大的抗体库。、可调整制造单链抗体或重组抗体的技术(美国专利4,946,778、第4,816,567号美国专利)以制造针对本发明的多肽的抗体。另外，可使用转基因小鼠或其他生物体如其他的哺乳动物来表达人源化的或人抗体(参见，例如，美国专利第5,545,807号；第5,545,806号；第5,569,825号；第5,625,126号；第5,633,425号；第5,661,016号，Marks et al.,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg et al.,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-13(1994)；Fishwild et al.,NatureBiotechnology 14:845-51(1996)；Neuberger,Nature Biotechnology 14:826(1996)；和Lonberg&Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。可选地，可使用噬菌体展示技术来鉴定特异性结合所选抗原的抗体和异聚Fab片段(参见，例如，McCafferty et al.,Nature 348:552-554(1990)；Marks et al.,Biotechnology 10:779-783(1992))。抗体也可成为双特异性的，即能够识别两种不同的抗原(参见，例如，WO 93/08829,Traunecker etal.,EMBO J.10:3655-3659(1991)；和Suresh et al.,Methods in Enzymology 121:210(1986))。抗体也可以为异源缀合物，例如，两种共价接合的抗体或免疫毒素(参见，例如，美国专利第4,676,980号、WO 91/00360；WO 92/200373；和EP 03089)。
可以使用任何数目的表达系统，包括原核和真核表达系统来制造抗体。在一些实施方案中，表达系统为哺乳动物细胞表达，如杂交瘤或CHO细胞表达系统。许多这样的系统普遍可从商业供应商获得。在其中抗体包含VH和VL区的实施方案中，可以使用单一载体，例如，在双顺反子表达单元中或在不同启动子的控制下，来表达VH和VL区。在其他的实施方案中，可使用单独的载体表达VH和VL区。如本文中描述的VH或VL区可任选地在N-端包含蛋氨酸。
也可以以不同的形式制造本发明的抗体，包括作为Fab、Fab'、F(ab')2、scFv或dAB。可以通过多种方法获得抗体片段，包括利用酶，如胃蛋白酶(以产生(Fab')2片段)或木瓜蛋白酶(以产生Fab片段)；或重头合成，消化完整的抗体。也可使用重组DNA方法合成抗体片段。在一些实施方案中，CLL-1抗体包含特异性结合CLL-1的F(ab')2片段。本发明的抗体还可包含人恒定区。参见，例如，Fundamental Immunology(Paul ed.,4d ed.1999)；Bird,et al.,Science 242:423(1988)；和Huston,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879(1988)。
人源化非人抗体(即，使用来自非人抗体的CDR)的方法在本领域也是已知的。通常，人源化的抗体具有来自非人的来源的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基常常被称为输入(import)残基，其通常取自输入性可变域。可以根据Winter及共事者的方法(参见，例如，Jones et al.,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann et al.,Nature 332:323-327(1988)；Verhoeyen et al.,Science 239:1534-1536(1988)，和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992))，通过取代人抗体序列所对应的啮齿动物CDR或CDR序列，而实质上进行人源化。这样的人源化的抗体为嵌合的抗体(第4,816,567号美国专利)，其中大幅少于完整的人可变域被来自非人物种的对应的序列取代。在实践中，人源化的抗体通常为人抗体，其中一些CDR残基和可能地一些FR残基被来自啮齿类抗体中的类似位点的残基取代。
在一些情形下，抗体或抗体片段可以与另一分子，例如，聚乙二醇(PEG化)或血清白蛋白缀合，以提供延长的体内半衰期。抗体片段的PEG化的实例提供于Knight etal.Platelets 15:409,2004(对于阿昔单抗)；Pedley et al.,Br.J.Cancer 70:1126,1994(对于抗CEA抗体)；Chapman et al.,Nature Biotech.17:780,1999；和Humphreys,et al.,Protein Eng.Des.20:227,2007)。抗体或抗体片段也可标记或缀合上如下文中描述的治疗剂。
B.结合亲和力
可根据目标抗体(或其他靶向部分)的比较解离常数(Kd)，通常相比关于环境中的抗体和其他物质或不相关分子的解离常数，来确定结合的特异性。通常，抗体关于不相关物质的Kd比关于靶标的Kd高至少2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、200倍或更高。如本文中使用的，较高的Kd为描述较低的亲和力相互作用的Kd。相反，较好的或较低的Kd为描述较高亲和力相互作用或较紧密结合的Kd。仅通过实例的方式，特异性结合靶标的抗体的Kd可以为毫微微摩尔、皮摩尔、纳摩尔或微摩尔，并且抗体结合不相关物质的Kd可以为毫摩尔或更高。因此，抗体能够以相比对于不相关物质的亲和力大2倍；3倍；4倍；5倍；10倍；20倍；25倍；50倍；100倍；200倍；250倍；500倍；750倍；1,000倍；10,000倍；100,000倍；1,000,000倍或更多的亲和力结合靶标分子。在一些情形下，抗体结合不相关物质的Kd可以为不可检测的。
在一些实施方案中，抗IL1-RAP抗体对受体IL1-RAP具有的亲和力为1000pM或更低，例如，800pM、700pM、600pM、500pM、400pM、300pM、200pM、100pM或更低中的任一个的Kd。在一些实施方案中，抗IL1-RAP抗体对受体IL1-RAP具有的亲和力为10nM(10-2mM、10-5M)或更低，例如，1nM或更低、1-10nM、100-1000pM、10-1000pM、约1nM或更低、1-500pM的Kd。在一些实施方案中，IL1-RAP抗体也以10nM、1nM、500pM或更低的Kd结合灵长类受体IL1-RAP，例如，食蟹猴。在一些实施方案中，受体IL1-RAP抗体以人受体IL1-RAP的Kd的数量级内的Kd结合食蟹猴受体IL1-RAP。技术人员理解较低的Kd值表明较高的亲和力。
在一些情形下，可根据抗体(或其他靶向部分)对靶标(即，IL1-RAP的受体形式)的比较解离常数(Kd)，相比关于抗体(或其靶向部分)和IL1-RAP的可溶性形式的解离常数，来确定结合的特异性。例如，抗体关于可溶性IL1-RAP的Kd可以为相比关于IL1-RAP的受体形式的Kd的至少2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、200倍或更多倍高(即，更低的亲和力或更差的结合)。因此，抗体能够以相比针对IL1-RAP的可溶性形式的亲和力大2倍；3倍；4倍；5倍；10倍；20倍；25倍；50倍；100倍；200倍；250倍；500倍；750倍；1,000倍；10,000倍；100,000倍；1,000,000倍或更多倍的亲和力结合IL1-RAP的受体形式。
在一些情形下，本发明的抗IL1-RAP抗体结合IL1-RAP的受体形式，但不结合IL1-RAP的可溶性形式。例如，抗体显示对可溶性IL1-RAP的不可检测的或微量的亲和力。在其他情形下，抗体不实质上结合可溶性IL1-RAP。例如，抗体不显示对可溶性IL1-RAP的大于背景的可检测的结合。
作为另一个实例，本发明的结合IL1-RAP的受体形式但不实质上结合可溶性形式的抗体可显示对可溶性形式的结合的Kd，其相比对IL1-RAP的受体形式的结合的Kd为2倍、20倍、50倍、100倍；1,000倍、10,000倍、1,000,000倍或更大倍中的任一个。本发明的结合IL1-RAP的受体形式但不实质上结合可溶性形式的抗体也可显示对受体形式的亲和力，其相比对IL1-RAP的可溶性形式的结合的亲和力为20倍、50倍、100倍；1,000倍、10,000倍、1,000,000倍或更多倍。在一些情形下，本发明的抗IL1-RAP抗体能够以毫微微摩尔、皮膜或微摩尔Kd结合IL1-RAP的受体形式，且显示对IL1-RAP的可溶性形式的毫摩尔或不可检测的结合，例如通过ELISA、FACS、表面等离子体共振等。
对于抗体，所需的亲和力，例如，高(pM至低nM)、中等(低nM至100nM)或低(约100nM或更高)，可以根据其是否用作诊断剂或治疗剂而不同。不受理论的限制，在一个实例中，与具有高亲和力的抗体相比，具有中等亲和力的抗体可更成功地定位肿瘤。因此，可将具有不同亲和力的抗体用于诊断和治疗应用。
靶向部分将通常以小于约1000nM，例如，小于250、100、50、20或更低nM的Kd结合。在一些实施方案中，亲和力试剂的Kd小于15、10、5或1nM。在一些实施方案中，Kd为1-100nM、0.1-50nM、0.1-10nM或1-20nM。可通过熟知的方法确定解离常数(Kd)的值，且可通过如例如，Caceci et al.,Byte(1984)9:340-362中公开的方法计算甚至复杂的混合物。
可以根据本领域已知的方法，例如，如Ernst et al.Determination ofEquilibrium Dissociation Constants,Therapeutic Monoclonal Antibodies(Wiley&Sons ed.2009)中所述的方法，来测定抗体或任何靶向试剂对靶标的亲和力。
可以使用定量ELISA和类似的基于阵列的亲和力方法。ELISA(酶联免疫吸附信号传导测定)是一种基于抗体的方法。在一些情形下，将抗体特异性的目标靶标与基质粘合，和与怀疑包含靶标的样品接触。然后冲洗表面以去除未结合的物质。可以多种方式检测靶标结合，例如，使用利用标记的抗体的第二步，利用在抗原结合后可检测的标记物直接标记靶标或标记一抗。在一些情形下，将抗原与基质(例如，使用对蛋白具有高亲力或具有链霉亲和素-生物素相互作用的基质)粘合，并使用标记的抗体(或其他靶向部分)进行。已开发了原来的ELISA方法的几种排列，且其为本领域已知(参见Lequin(2005)Clin.Chem.51:2415-18的综述)。
也可使用表面等离子体共振(SPR)来测定Kd、Kon和Koff，例如，如通过使用Biacore T100系统所测量的。例如，在Hahnfeld et al.Determination of Kinetic DataUsing SPR Biosensors,Molecular Diagnosis of Infectious Diseases(2004)中对SPR进行了综述。在典型的SPR实验中，将一种相互作用物(靶标或靶向试剂)固定于流动池中的SPR活性的镀金的载玻片上，并引入包含其他相互作用物的样品以流过表面。当给定频率的光照射于表面上时，金的光反射的改变指示结合，以及结合动力学。
也可通过将生物素化的相互作用物锚定至链霉亲和素(SA)感应芯片，来测定结合亲和力。然后将其他相互作用物与芯片接触，并检测，例如，如Abdessamad et al.(2002)Nuc.Acids Res.30:e45中所描述的。
V.诊断应用
本文中描述的抗体特异性结合IL1-RAP的受体形式和表达IL1-RAP的细胞。因此，可将受体IL1-RAP特异性的抗体用于体外和体内诊断试验，以检测表达IL1-RAP的细胞(例如，CSC；某些实体瘤细胞；造血癌细胞；关节、骨或肌肉的细胞；或者如本文中所指示的炎性疾病中涉及的细胞)。例如，可从患者获得样品(例如，血液样品或组织生物活检)，并与受体IL1-RAP抗体接触，且可以通过检测抗体结合来确定患者样品中表达IL1-RAP的细胞的存在。可直接(例如，在抗体自身被标记时)或通过使用第二检测试剂，如二抗来检测抗体结合。可检测的标记物可以直接或间接，例如，通过螯合剂或连接子，而与本发明的抗体结合。在一些情形下，本发明的抗体特异性的IL1-RAP的受体形式而非可溶性形式可用于检测或捕获来自包含可溶性IL1-RAP的血液或其他的体液的表达IL1-RAP的细胞。
在一些实施方案中，将抗IL1-RAP抗体与来自患有或疑似患有IL1-RAP相关的病症的个体的生物样品接触，并确定抗体与样品中的细胞的结合，其中高于或低于正常抗体结合表明该个体患有IL1-RAP相关的病症。在一些实施方案中，生物样品为血液样品或血液部分(例如，血清、血浆、血小板、红细胞、白细胞)。在一些实施方案中，生物样品为组织样品(生物活检)，例如，来自疑似的肿瘤位点或来自已知受影响的组织，例如，以确定已知肿瘤的边界。在一些实施方案中，生物样品从炎症位点获得。
通常进行生物活检来从组织，即非流体细胞类型获取样品。适用的生物活检技术将取决于待评估的组织类型(例如，乳腺、皮肤、结肠、前列腺、肾、肺、膀胱、淋巴结、肝、骨髓、气管或肺)。在癌症的情形下，技术还取决于肿瘤的大小和类型(例如，实体的、悬浮的或血液)，以及其他因素。代表性的生物活检技术包括但不限于切除生物活检、切口生物活检、针吸生物活检、手术生物活检和骨髓生物活检。“切除生物活检”是指去除整个肿瘤块，其周围有较小的正常组织边缘。“切口生物活检”是指去除包含肿瘤的横截面直径的一块组织。通过内窥镜或荧光镜检查进行的诊断或预后可能需要肿瘤块的“空心针生物活检”或“细针吸取生物活检”，其通常从肿瘤块内获得细胞悬液。生物活检技术论述于例如，Harrison’sPrinciples of Internal Medicine,Kasper,et al.,eds.,16th ed.,2005,第70章，和整个第V部分。
可将检测抗体与样品中的细胞结合的任何方法用于本发明的诊断试验。检测抗体结合的方法为本领域所熟知，例如，流式细胞术、荧光显微镜检查、ELISAs等。在一些实施方案中，方法包括准备生物样品用于检测，以及随后的测定步骤。例如，细胞亚群(例如，白细胞、CD34+细胞、CD45+细胞等)可分离自来自个体的样品的剩余部分(例如，其他的血液组分)，或者可以将组织中的细胞悬浮以易于检测。
在一些实施方案中，测定了样品中表达IL1-RAP的细胞的百分比并与对照进行比较，例如，来自已知患有IL1-RAP相关的病症的个体或个体组(阳性对照)或来自已知未患IL1-RAP相关的病症的个体或个体组(正常、非患病或阴性对照)的样品。在一些实施方案中，对照为针对给定组织确立的IL1-RAP表达的标准范围。高于或低于表达IL1-RAP的细胞的正常百分比或高于或低于表达水平表明该个体患有IL1-RAP相关的病症。
在一些实施方案中，可向个体提供(施用)标记的抗IL1-RAP抗体以确定预期的治疗的适用性。例如，可将标记的抗体用于检测患病区域中的IL1-RAP密度，其中密度相对于非患病的组织通常更高。标记的抗体也可指示患病的区域能够进行治疗。因此，可以基于成像结果来挑选患者进行治疗。可使用标准的成像技术(例如，CT扫描、MRI、PET扫描等)完成解剖学定征，如确定癌症的精确边界。
在一些实施方案中，如本文中描述的标记的抗体特异性的受体IL1-RAP可与治疗化合物进一步结合，例如，以形成“治疗诊断性”组合物。例如，本文中描述的抗IL1-RAP抗体可与可检测的标记物和治疗剂，例如，细胞毒性剂连接(直接地或间接地)，以杀死表达的IL1-RAP的癌细胞。在一些实施方案中，标记的抗体特异性的IL1-RAP的受体形式被用于诊断和/或定位表达IL1-RAP的癌细胞，然后利用单独的治疗性抗体特异性的IL1-RAP的受体形式靶向表达IL1-RAP的癌细胞。在一些实施方案中，IL1-RAP的受体形式的特异性的诊断性抗体是未以高速率或高百分比内化至表达IL1-RAP的细胞中的那些。在一些实施方案中，IL1-RAP的受体形式特异性的治疗性抗体是在交联或多聚化后抑制表达的IL1-RAP细胞的增殖的抗体。
A.标记物
包含受体IL1-RAP抗体的诊断性试剂可以包含本领域已知的任何诊断性试剂，如例如在以下参考文献中提供的：Armstrong et al.,Diagnostic Imaging,5th Ed.,Blackwell Publishing(2004)；Torchilin,V.P.,Ed.,Targeted Delivery of ImagingAgents,CRC Press(1995)；Vallabhajosula,S.,Molecular Imaging:Radiopharmaceuticals for PET and SPECT,Springer(2009)。可以通过多种方式检测诊断性试剂，包括作为提供和/或增强可检测的信号的试剂。可检测的信号包括但不限于发射γ的、放射性的、回波的、光学的、荧光的、吸收性的、磁的或断层扫描的信号。用于对诊断试剂成像的技术可包括但不限于单光子发射计算机断层扫描(SPECT)、磁共振成像(MRI)、光学成像、正电子发射断层扫描(PET)、计算机断层扫描(CT)、x-射线成像、γ射线成像等。术语“可检测的试剂”、“可检测的部分”、“标记物”、“成像剂”和类似的术语在本文中作为同义使用。
在一些实施方案中，标记物可包含光学试剂如荧光试剂、磷光试剂、化学发光试剂等。众多试剂(例如，染料、探针、标记物或指示剂)为本领域已知，且可用于本发明。(参见，例如，Invitrogen,The Handbook-AGuide to Fluorescent Probes and LabelingTechnologies,Tenth Edition(2005))。荧光试剂可包含多种有机和/或无机小分子，或各种荧光蛋白及其衍生物。例如，荧光试剂可包括但不限于：花菁、酞菁、卟啉、吲哚菁、罗丹明、吩恶嗪、苯基氧杂蒽、吩噻嗪、苯硒嗪、荧光素、苯并卟啉、方酸菁、二吡咯并嘧啶酮、并四苯、喹啉、吡嗪、咕啉、克酮酸(croconium)、吖啶酮、菲啶、罗丹明、吖啶、蒽醌、含氧族元素吡喃盐(chalcogenopyrylium)类似物、二氢卟酚、萘酞菁、次甲基染料、吲哚啉(indolenium)、偶氮化合物、薁(azulenes)、氮杂薁(azaazulene)、三苯基甲烷染料、吲哚、苯并吲哚、吲哚羰花青、苯并吲哚羰花青和BODIPYTM衍生物。荧光染料论述于例如，第4,452,720号美国专利、第5,227,487号美国专利和第5,543,295号美国专利。
标记物也可以为放射性同位素，例如，发射γ射线、正电子、β和α粒子，以及X-射线的放射性核素。合适的放射性核素包括但不限于：225Ac、72As、211At、11B、128Ba、212Bi、75Br、77Br、14C、109Cd、62Cu、64Cu、67Cu、18F、67Ga、68Ga、3H、166Ho、123I、124I、125I、130I、131I、111In、177Lu、13N、15O、32P、33P、212Pb、103Pd、186Re、188Re、47Sc、153Sm、89Sr、99mTc、88Y和90Y。在一些实施方案中，放射性试剂可包括111In-DTPA、99mTc(CO)3-DTPA、99mTc(CO)3-ENPy2、62/64/67Cu-TETA、99mTc(CO)3-IDA和99mTc(CO)3三元胺(环状的或线性的)。在一些实施方案中，所述试剂可包含DOTA及其具有111In、177Lu、153Sm、88/90Y、62/64/67Cu或67/68Ga的不同的类似物。在一些实施方案中，可通过掺入与螯合剂接合的脂质，如DTPA-脂质，对纳米粒子进行标记，如以下参考文中所提供的：Phillips et al.,Wiley Interdisciplinary Reviews:Nanomedicine andNanobiotechnology,1(1):69-83(2008)；Torchilin,V.P.&Weissig,V.,Eds.Liposomes2nd Ed.:Oxford Univ.Press(2003)；Elbayoumi,T.A.&Torchilin,V.P.,Eur.J.Nucl.Med.Mol.Imaging 33:1196–1205(2006)；Mougin-Degraef,M.et al.,Int’lJ.Pharmaceutics 344:110-117(2007)。
在一些实施方案中，诊断试剂可以与第二结合配体或与在与显色底物接触后产生有颜色的产物的酶(酶标签)结合。合适的酶的实例包括脲酶、碱性磷酸酶、(辣根)过氧化氢酶和葡糖氧化酶。第二结合配体包括例如，如本领域已知的生物素和亲和素或链霉亲和素化合物。
在一些实施方案中，标记的抗体可进一步与提高体内稳定性的组合物，例如PEG或纳米粒子如脂质体结合，如下文中更详细描述的。
B.标记的方法
将可检测的和治疗性试剂与抗体缀合的技术是熟知的(参见，例如，Arnon etal.,“Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”,inMonoclonal Antibodies And Cancer Therapy,Reisfeld et al.(eds.),pp.243-56(AlanR.Liss,Inc.1985)；Hellstrom et al.,“Antibodies For Drug Delivery”in ControlledControlled Delivery(2nd Ed.),Robinson et al.(eds.),pp.623-53(Marcel Dekker,Inc.1987)；Thorpe,“Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:AReview”in Monoclonal Antibodies'84:Biological And Clinical Applications,Pinchera et al.(eds.),pp.475-506(1985)；和Thorpe et al.,“The Preparation AndCytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates”,Immunol.Rev.,62:119-58(1982))。
通常，抗体在不干扰与表位结合的区域中与可检测的部分连接。因此，在一些情形下，可检测的部分与恒定区连接，或在可变区中位于CDR外部。本领域技术人员认可可检测的部分可以位于抗体上的其他位置，并且可以相应地调整可检测的部分的位置。在一些实施方案中，在连接至可检测的部分之前和之后比较抗体与表位结合的能力，以确保连接不过度地破坏结合。
在一些实施方案中，抗体可以与另外的靶向部分结合。例如，可以将结合靶标分子或靶标细胞上的不同位点的抗体片段、肽或适配子与抗体缀合，以最优化例如，与癌细胞的靶向结合。
VI.治疗应用
IL1-RAP在很多疾病状态中异常表达，且可以使用本文中描述的IL1-RAP的受体形式的特异性的抗体来靶向在这样的病况中表达IL1-RAP的细胞。例如，以下细胞上的IL1-RAP表达升高：癌细胞(例如，本文中描述的B细胞淋巴瘤、AML细胞和实体瘤细胞)；CSC(例如，骨髓CSC)；和与本文中提供的IL1-RAP相关的病症有关的细胞。在正常造血干细胞(HSC)上IL1-RAP并不显著表达。如上所示的，包含抗IL1-RAP抗体的治疗性组合物还可包含可检测的标记物，以形成治疗性组合物，例如，用于检测和定位表达IL1-RAP的细胞，以及监测治疗效应。
A.化疗剂和细胞毒性剂
如本文中所证明的，抗IL1-RAP抗体能够抑制癌细胞生长(增殖)，并因而能够被认为是化疗剂。以下公开提供了可以与抗IL1-RAP抗体连接以用于递送表达IL1-RAP的细胞的另外的化疗剂和细胞毒性剂的实例。
化疗(抗癌症)剂可以为能够减少癌症生长、干扰癌细胞复制、直接或间接杀死癌细胞、减少转移、减少肿瘤血液供应等的任何试剂。因此，化疗剂包含细胞毒性剂。细胞毒性剂包括但不限于皂草素、紫杉醇、长春花生物碱、蒽环霉素和基于铂的试剂。化疗剂的类型包括但不限于烷化试剂、抗代谢物，例如，甲氨蝶呤、植物生物碱，例如，长春新碱和抗肿瘤抗生素如蒽环霉素，例如，阿霉素，以及不落入特定类型的混杂的药物如羟基脲。基于铂的药物，示例为顺铂和奥沙利铂，代表了主要的化疗剂类型。这些药物结合DNA并干扰复制。紫杉醇，示例为紫杉醇，代表了另一类的主要的化疗剂类型。这些化合物通过干扰细胞支架和纺锤体形成而抑制细胞分裂，并因此阻止快速分裂的癌细胞的生长来发挥作用。其他的化疗药物包括激素治疗。化疗剂还包括抑制微管蛋白组装或聚合的试剂，如美登素、mertansine和澳瑞他汀。化疗剂还包括DNA损伤剂如卡奇霉素。
化疗剂可包括美登醇、澳瑞他汀、尾海兔素、tubulysin、念珠藻素、吡咯并苯二氮(PBD)二聚物、吲哚啉苯二氮二聚物、α-鹅膏蕈碱、trichothene、SN-38、倍癌霉素、CC1065、卡奇霉素、烯二炔抗生素、紫杉醇、阿霉素衍生物、蒽环霉素以及它们的立体异构体、azanofide、等排体、类似物或衍生物。
当前使用的用于治疗骨髓瘤的化疗剂包括硼替佐米、来那度胺和萨立多胺。可向骨髓瘤患者施用的另外的治疗剂包括二膦酸盐(以防止骨折)和红细胞生成素(以减少贫血)。
可以在相同的组合物或在单独的组合物中组合多于一种治疗剂。还可将治疗剂与另外的治疗剂组合，视特定个体情况而定。提供给癌症患者的常见的治疗剂包括用以处理疼痛、恶心、贫血、感染、炎症和癌症患者通常经历的其他的症状的药物。
B.形成治疗性组合物的方法
可以使用各种已知的交联试剂将抗体与治疗性试剂、可检测的试剂或纳米载体连接。用于多肽的共价或非共价接合的方法为本领域所熟知。这样的方法可包括但不限于使用化学交联剂、光激活的交联剂和/或双功能的交联性试剂。用于交联分子的示例性方法公开于第5,603,872号美国专利和第5,401,511号美国专利。交联性试剂的非限制性示例包括戊二醛、双官能团环氧乙烷、乙二醇二缩水甘油醚、碳二亚胺如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺或二环己基碳二亚胺、二亚胺酸盐(bisimidates)、二硝基苯、辛二酸的N-羟基琥珀酰亚胺酯、双琥珀酰亚胺酒石酸酯、二甲基-3,3'-二硫代-双丙酰亚胺、叠氮基乙二醛、N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯和4-(溴代氨基乙基)-2-硝基苯基叠氮化物。可以通过抗体中的半胱氨酸残基来缀合试剂，所述残基可以为天然存在的或人工引入的。
对于与纳米载体(例如，脂质体)缀合的抗体，一定数目的抗体将存在于表面上，即，以给定的表面密度。在一些实施方案中，纳米载体将具有至少5个抗体/载体。例如，至少10、30、40、50、75、100个或更高的抗体/纳米载体。本领域技术人员将理解表面密度代表了平均范围，因为每纳米载体的抗体数目对于群体的所有成员均为绝对一致的。
纳米载体包括囊泡，如脂质体和胶团，以及聚合的纳米粒子等。纳米载体可用于递送治疗剂和诊断剂，但可能对屏蔽用于治疗癌症的细胞毒性剂特别有用。纳米载体可以包括脂质(例如，磷脂)、亲水性聚合物、疏水性聚合物、两亲性化合物、交联的聚合物和聚合的基质(参见，例如，WO2009/110939)。根据应用，纳米载体可设计成具有特定的尺寸、半衰期、保存期和泄漏率。
纳米载体，如抗体靶向的脂质体、聚合的纳米粒子或延长保存期的脂质体的制备描述于例如，第6465188号、第7122202号、第7462603号和第7550441号美国专利。
在一些实施方案中，抗体与稳定部分如PEG或脂质体或其他的纳米载体连接。第4,732,863号和第7892554号美国专利及Chattopadhyay et al.(2010)Mol Pharm 7:2194描述了用于将选定的抗体与PEG、PEG衍生物和纳米粒子(例如，脂质体)接合的方法。可以通过确立的如本文中描述的方案制备包含磷脂酰-乙醇胺(PE)的脂质体。包含PE提供了位于脂质体表面上的活性功能位点以用于连接。
也可以配制抗体缀合物以提供多于一种活性化合物，例如，另外的化疗或细胞毒性剂、细胞因子或生长抑制剂。活性成分也可制备为缓释的制剂(例如，固体疏水性聚合物(例如，聚酯水凝胶(例如，聚(2-羟基乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇)的半渗透的基质)、聚乳酸。抗体和免疫缀合物可封装于例如，通过于胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米粒子和纳米胶囊)或大乳液中的凝聚技术或通过界面聚合制备的纳米粒子中，例如，分别为羟基甲基纤维素或明胶微胶囊和聚-(甲基甲基丙烯酸酯)微胶囊。
C.施用方法
本发明的抗IL1-RAP抗体可有效地递送治疗性组合物至体内表达IL1-RAP的细胞。在一些实施方案中，治疗的方法包括施用个体有效量的治疗性抗IL1-RAP缀合物，例如，与治疗性试剂接合的抗IL1-RAP抗体。在一些实施方案中，个体已被诊断患有癌症。在一些实施方案中，个体正接受或已接受了癌症治疗，例如，手术、放疗或化疗。在一些实施方案中，个体已被诊断，但癌症在缓解。
在一些实施方案中，抗IL1-RAP缀合物包含脂质体。在一些实施方案中，方法还包括监测个体的癌症的进展。在一些实施方案中，基于个体的治疗进程确定每次施用的抗IL1-RAP缀合物的剂量，例如，如果个体对治疗反应不充分，则施用更高剂量的化疗。
在一些实施方案中，本发明可以包括抗体或抗体靶向的组合物，及生理上(即，药学上)可接受的载体。术语“载体”是指用作诊断或治疗性试剂的稀释剂或媒介物的通常为惰性的物质。该术语还包括赋予组合物粘合性质的通常为惰性的物质。生理上可接受的载体可以为液体，例如，生理盐水、磷酸盐缓冲液、正常缓冲的盐水(135-150mM NaCl)、水、缓冲的水、0.4％盐水、0.3％甘氨酸、提供增加的稳定性的糖蛋白(例如，白蛋白、脂蛋白、球蛋白等)等。因为生理上可接受的载体部分由施用的特定组合物以及用于施用组合物的特定方法决定，因此存在本发明的药物组合物的多种合适的制剂(参见，例如，Remington'sPharmaceutical Sciences,17th ed.,1989)。
可以通过常规的、熟知的消毒技术来对本发明的组合物消毒，或者可以在无菌条件下制造本发明的组合物。可将水溶液包装以供使用，或在无菌条件下过滤并冻干，在给药之前将冻干的制剂与无菌的水溶液合并。组合物可按照需要包含药学上可接受的辅助性物质以接近生理条件，如pH调节剂和缓冲剂、张力调节剂、湿润剂等，例如，醋酸钠、乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、山梨醇单月桂酸酯和三乙醇胺油酸酯。也可以包含糖以用于稳定组合物，如用于冻干的抗体组合物的稳定剂。
可制备剂量形式以用于粘膜(例如，鼻、舌下、阴道、口或直肠)、肠胃外(例如，皮下、静脉内、肌内或动脉内注射，大剂量或输注)、口服或经皮给药至患者。剂量形式的实例包括但不限于：分散剂；栓剂；软膏剂；泥罨剂(药膏)；糊剂；粉剂；敷料剂；乳膏剂；硬膏剂；溶液；贴剂；气溶胶(例如，鼻用喷雾或吸入器)；凝胶；适合经口或经粘膜给药至患者的液体剂量形式，包括悬浮剂(例如，水性或非水性液体悬浮剂、水包油乳剂或油包水液体乳剂)、溶液和酏剂；适合肠胃外给药至患者的液体剂量形式；以及可以重构以提供适合肠胃外给药至患者的液体剂量形式的无菌的固体(例如，晶状或无定型固体)。
可注射的(例如，静脉内)组合物可包含悬浮于可接受的载体，如水性载体中的抗体或抗体靶向的组合物的溶液。可以使用各种水性载体中的任何一种，例如，水、缓冲的水、0.4％盐水、0.9％等渗盐水、0.3％甘氨酸、5％葡萄糖等，并且可以包含糖蛋白以用于增加稳定性，如白蛋白、脂蛋白、球蛋白等。通常，将使用正常缓冲的盐水(135-150mM NaCl)。组合物可包含药学上可接受的辅助性物质以接近生理条件，如pH调节剂和缓冲剂、张力调节剂、湿润剂，例如，醋酸钠、乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、山梨醇单月桂酸酯和三乙醇胺油酸酯等。在一些实施方案中，可在试剂盒中配制抗体靶向的组合物，以用于静脉内给药。
适用于如例如，通过关节内(在关节内)、静脉内、肌内、肿瘤内、皮内、腹膜内和皮下途径进行肠胃外给药的制剂包括水性和非水性的、等渗的无菌注射溶液，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使得制剂与预期受体的血液等渗的溶质，以及可包含悬浮性试剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂的水性和非水性的无菌悬浮剂。注射溶液和悬浮液也可由无菌粉末、颗粒和片剂来制备。在本发明的实施中，可以例如，通过静脉内输注、局部、腹腔内、膀胱内或鞘内来施用组合物。肠胃外给药和静脉内给药是优选的给药方法。靶标组合物的制剂可以存在于单位剂量或多剂量的密封容器，如安瓿瓶和小瓶中。
选择的靶向递送组合物，单独或与其它合适的组分组合，可以制成气溶胶制剂(“雾化的”)，以通过吸入给药。可以将气溶胶制剂置于加压的可接受的推进剂中，如二氯二氟甲烷、丙烷和氮气。
药物制剂可以以单位剂型包装或制备。在这种形式中，例如，根据治疗性试剂的剂量或抗体的浓度，将制剂细分为含有适量活性成分的单位剂量。单位剂量形式可以是包装的制剂，所述包装含有离散量的制剂。如果需要，组合物还可含有其他相容的治疗性试剂。
可以通过任何合适的途径注射或输注来施用抗体(或抗体靶向的组合物)，包括但不限于静脉内、皮下、肌内或腹膜内途径。药物组合物的给药的实例包括将抗体以10mg/ml储存在无菌的等渗盐水溶液中以用于在4℃下注射，以及在向患者施用前将其稀释在100ml或200ml的0.9％氯化钠中以用于注射。通过静脉内输注在1小时的过程中以0.2-10mg/kg的剂量施用抗体。在其他的实施方案中，通过静脉内输注在15分钟-2小时的时间段内施用抗体。在其他的实施方案职工，给药方案为通过皮下大剂量注射。
选择了抗体的剂量以提供对患者的有效治疗，且其范围为少于0.1mg/kg体重至约25mg/kg体重，或范围为1mg-2g/患者。在一些情形下，剂量范围为1-100mg/kg或约50mg-8000mg/患者。可以以合适的频率重复给药，其范围可以为每天一次至每3个月1次，取决于抗体的药代动力学(例如，抗体在循环系统中的半衰期)和药效动力学反应(例如，抗体的治疗效应的持续时间)。在一些实施方案中，约7至约25天的体内半衰期，且以每周一次和每3个月一次重复抗体给药。
给药可以为周期性的。可以根据给药途径施用剂量，例如，每1、3、5、7、10、14、21天或28天或更长时间一次(例如，每2、3、4个或6个月一次)。在一些情形下，给药更为频繁，例如，每天2次或3次。可以根据治疗进展和任何不利的副作用，监测患者来调整给药的剂量和频率，这被本领域技术人员所认可。
因此，在一些实施方案中，另外的给药依赖于患者进展，例如，在给药之间监测患者。例如，在第一次给药或第一轮给药后，可以监测患者的肿瘤生长速率、复发(例如，在手术后患者的情形下)或总体的疾病相关的症状如虚弱、疼痛、恶心等。
在治疗癌症的治疗性应用中，可以以每日约0.001mg/kg至约1000mg/kg的初始剂量施用抗体靶向的组合物(例如，包括治疗性试剂和/或诊断性试剂)，并随时间进行调整。可以采用约0.01mg/kg至约500mg/kg，或约0.1mg/kg至约200mg/kg，或约1mg/kg至约100mg/kg，或约10mg/kg至约50mg/kg的每日剂量范围。根据患者的需要、待治疗的病况的严重性和采用的靶标组合物而改变剂量。例如，可以根据经验，考虑在特定患者中诊断的癌症的类型和阶段来确定剂量。在本发明的上下文中，向患者施用的剂量应当随时间足以影响患者中的有利治疗响应。还通过在特定患者中伴随着特定的靶标组合物给药的任何不利副作用的存在、性质和程度来确定剂量的大小，这被技术人员所认可。
本申请中引用的所有专利、专利申请和其他的出版物，包括GenBank登录号均通过引用整体并入本文中用于所有目的。
实施例
实施例1：
针对IL1-RAP的抗体的产生
从全长人IL1-RAP cDNA(Open Biosystems)克隆了编码细胞外域(Q9NPH3的残基21-367(“Q9NPH3-4”))的人IL1-RAP的cDNA片段。将6xHis标签加至C-端以产生IL1-RAP-His融合蛋白，其被用于免疫小鼠，从而产生单克隆小鼠抗人IL1-RAP抗体。使用标准方案生成杂交瘤。简言之，利用纯化的重组IL1-RAP融合蛋白免疫4-6周大的Balb/c小鼠，每周两次，进行总共4周。然后评估滴度，并将脾细胞与SP2/0细胞融合。挑选杂交瘤，并通过酶联免疫吸附测定(ELISA)和荧光激活的细胞分选(FACS)筛选来自产生的克隆的上清液。
通过与亲本或人IL1-RAP转染的293/293IL1-RAP细胞和多种AML细胞系，如OCI-AML2、OCI-AML3和HNT-34的FACS结合，来检测挑选的杂交瘤克隆的特异性。抗体克隆50.3G7的结合结果示出于图1中。
实施例2：
针对IL1-RAP的膜结合形式的抗体的产生
为了产生对识别膜结合的IL1-RAP特异性的抗体，产生了不同的嵌合的小鼠/人IL1-RAP蛋白。以每种嵌合体免疫接种小鼠，并使用基于ELISA的筛选来筛选膜结合的ILRAP特异性的mAbs。示意图示出于图2中。
2a.特异性结合膜结合的IL1-RAP的抗体的鉴定
通过使用IL1-RAP(Q9NPH3-4)的his标记的细胞外域(ECD)和可溶性IL1-RAP形式(Q9NPH3-2)的间接性ELISA，鉴定了优先识别膜结合的IL1-RAP的抗体克隆。使用过氧物酶缀合的山羊抗小鼠IgG(亚类IgG1、2和3特异性的)抗体检测克隆。
2b.通过ELISA，2H8优先识别膜结合的IL1-RAP
从293细胞表达和纯化了IL1-RAP(Q9NPH3-4)的细胞外域和可溶性IL1-RAP形式(Q9NPH3-2)。进行了三明治ELISA。图3A和图3B中示出的结合数据支持了这样的结论，即相比可溶性IL1-RAP形式，克隆2H8结合更好地结合膜结合的IL1-RAP。
2c.2H8结合AML细胞系
通过FACS测试了克隆2H8、5H9.1.4和56.12G6对不同细胞系(即，293T、IL1-RAP转染的293、EOL-1、HNT-34)的结合特异性。结果示出于图4A-图4D中。数据表明2H8选择性结合表达的IL1-RAP 293细胞或AML细胞系。
2d.2H8与IL1-RAP的结合受正常人血清的最低程度的影响
测试了不同水平的从健康患者分离的正常人血清(NHS)存在下的不同抗IL1-RAP抗体与HNT-34细胞的结合，且可溶性IL1-RAP(IL1-RAP(Q9NPH3-4)的Q9NPH3-2或细胞外域(ECD)示出于图5A-图5D中。左图：HNT-34细胞上的抗体结合滴定。右图：针对处理条件的EC50值。相比2H8，人血清或IL1-RAP蛋白并不更为有效地抑制56.12G6与HNT-34细胞的结合，表明2H8抗体可显示来自人血清中存在的可溶性IL1-RAP的最低程度的干扰。
实施例3：
IL-RAP与原发性AML样品的结合
测试了IL1-RAP克隆以确定与AML原发性患者样品的结合。利用克隆2H8、50.3G7和56.12G6检查了总共12份AML患者样品，所有抗体均指向IL1-RAP表面表达的蛋白。2H8识别患者AML患者样品的CD34+群体的6/12(50％)。这些AML患者样品来自不同的2008WHO和FAB分类。图6A-图6D显示了个别阳性患者的示例性的FAC数据。
通过流式细胞术的表达分析。通过聚蔗糖分离(GE Healthcare)从骨髓抽吸的或完整的血液分离了BMMC或PBMC。将细胞重悬于染色溶液(HBSS,1％ BSA,1mM EDTA)中，至2x106细胞/mL，并在染色前用小鼠、大鼠或人IgG封闭。将5μL的CD34-APC加入至具有50μL染色溶液的每个管中。将各种抗体mIgG、2H8、56.12G6、50.3G7抗体加入至每个管中，至终浓度为2ug/mL，然后将APC缀合的山羊抗小鼠二抗加入至每个管中，并在冰上孵育30分钟。利用染色溶液洗涤细胞，并重悬于200μL的具有碘化丙啶的染色溶液中。然后立即将细胞施加至流式细胞术以用于分析。如果染色的样品的几何平均荧光强度(MFI)与同种型IgG对照的那些的比率大于1.5，且相比对照样品多于5％的细胞表达抗原，或者在一些情形下，明显的阳性群体而非>1％的细胞的总体转变，则认为样品对于靶标为阳性的。
另外，针对产生的IL1-RAP克隆对83份AML样品进行了染色。78份(94％)的样品对至少一种IL1-RAP克隆染色为阳性。4份/4份(100％)的骨髓样品和75份/79份(95％)的外周血(PBMC，外周血单核细胞)样品对IL1-RAP染色为阳性(参见表2)。将AML样品分成French-American-British(FAB)分类类群以用于分析。
表2：FAB亚型(NCCN(国立综合癌症网络)细胞遗传学分类)
实施例4：
IL1-RAP克隆的表位定位
测试了依照本公开产生的不同的抗IL1-RAP抗体与重组小鼠IL1-RAP的结合。由于无克隆结合小鼠IL1-RAP，产生了小鼠/人IL1-RAP嵌合的受体，其包含小鼠域mIg2或mIg3。(参见图2)。将嵌合的小鼠/人受体瞬时转染至293细胞中。通过FACS检查了IL1-RAP克隆与mIg2和mIg3的结合，并在图13中示出的柱状图中作图。总之，存在需要小鼠域mIg2用于结合的克隆，如50.3G7，需要小鼠域mIg3用于结合的克隆，如56.12G6。
实施例5：
IL1-RAP克隆的功能定征
在集落形成细胞(CFC)测定中评估了IL1-RAP克隆。简言之，使用Ficoll(GEHealthcare)或CD34+富集试剂盒(Stem Cell)分离细胞。使用Live-Dead试剂盒(Miltenyi)去除死细胞，并将活细胞调整至终浓度为CD34+细胞2x 103个细胞/mL、BMMC 1x 104个细胞/mL、PBMC 2x 105个细胞/mL。将2H8或IgG对照抗体加入细胞溶液，至终浓度为10μg/mL或1μg/mL，37℃下孵育1小时。利用PBS洗涤细胞，然后重悬于培养基中，至相同的体积。将细胞溶液(0.3mL)与2.7mL的Methocult w/o EPO(干细胞)混合，以包含约450个CD34+细胞/管、3,000个BMMC/管或30,000个PBMC/管，并将混合物涂至35mm2板上，并允许在37℃下孵育两周。将产生的集落计数，且结果示出于图7。
进行CFC测定以理解抗体对白血病干细胞样细胞的影响。由于患AML的患者在血液和骨髓中具有原始细胞和白血病干细胞样细胞，我们询问抗体是否优先归巢至一个子集或者同样地影响恶性细胞。为了探索这种可能性，进行了CFC测定。在2H8处理，以及50.3G7和56.12G6中见到了集落形成的减少。然而，相比对照IgG，对正常CD34细胞无影响。AML原始细胞和白血病干细胞样细胞均被IL1-RAP抗体靶向。相反，正常HSC未受这些抗体影响。结果示出于图8。
添加IL1-RAP抗体至AML患者原始细胞导致相比同种型抗体对照集落形成的抑制。尽管使用半固体培养基评估集落形成是确定白血病干细胞的自我更新潜能的经典方法，其并不直接评估患病的患者中存在的白血病干细胞的群体。
实施例6：
IL-1β诱导的NF-κB信号传导的抑制
利用50pg/mL重组人IL-1β处理HEK-蓝色IL-1β细胞。筛选25个IL1-RAP mAb克隆对IL-1β诱导的NF-κB信号传导的抑制。将IL-1Ra用作阳性对照。滴定了抗IL1-RAP mAb克隆，其从6.4ng/mL至多达100μg/mL。表3中的10种抗体具有IC50<12μg/mL，且6种具有IC50<0.5μg/mL。以10μg/mL抗体时观察到的对克隆54.9D7的最大抑制为92.3％。观察到的最低IC50为32.3ng/mL，也是对于克隆54.9D7。百分比抑制在图9中图示为抗体浓度的函数，且在表3中以表格显示。
表3
实施例7
IL1-RAP抗体的体内评估
建立了移植EOL-1肿瘤细胞的携带AML肿瘤的模型以评估抗IL1-RAP抗体克隆的最初功效。克隆50.3G7抗体有效减少骨髓、脾和外周血中显著的肿瘤负荷。将NOD/SCID IL2Rγ-/-(NSG)小鼠以亚致死剂量辐射，并移植5x106个EOL-1肿瘤细胞。在细胞移植后6天，(骨髓中～.1-1％的移植的EOL-1细胞)，且向小鼠施用10mg/kg的抗体，每周一次，为期3周。在EOL-1细胞移植后第4周采集骨髓、脾和血液，并通过FACS，经人CD45和CD33抗体染色分析移植的人细胞的百分比。结果来自以IgG对照抗体或以IL1-RAP特异性的抗体克隆50.3G7、56.7A9和56.12G6处理的7-13只小鼠。克隆50.3G7给出了相比其他抗体，在减少骨髓、脾和血液中的AML肿瘤负荷中的最佳功效。结果示出于图10A-图10C。
利用我们的功能性封闭IL1-RAP功能性封闭抗体54.9D7、42.4D11、42.1D2、54.9E9和膜优先的抗体2H8.3的鉴定，我们评估了体内这些抗体的肿瘤抑制功效。再次地，NSG小鼠被以亚致死剂量辐射，并接种5x106个EOL-1肿瘤细胞。在细胞移植后6天，向小鼠施用10mg/kg的抗体，每周一次，为期3周。相对于其他的IL1-RAP抗体，以54.9D7抗体处理的携带肿瘤的小鼠存活时间最长，其中值存活时间为38天，相对于对照IgG抗体处理的小鼠，其仅具有28天的中值存活时间(P值<0.00001)。54.9D7抗体也具有最佳的IL1-RAP信号传导封闭活性，且最强的体内功效可归因于封闭了至AML细胞的IL1-RAP信号传导。克隆2H8.3，其优先结合膜结合的IL1-RAP，相对于对照IgG抗体也产生了显著的存活改善(2H8.3的中值存活为35天，相对于IgG的28天；P值＝0.014)。先前确定为有效的肿瘤抑制抗体的50.3G7抗体一致性地给出显著的存活改善，50.3G7的中值为36天，相对于IgG的28天；P值<0.0001。选择的抗IL1-RAP克隆的存活曲线和统计学示出于图11。克隆54.9D7、50.3G7和2H8.3被高亮。
实施例8
抗体54.9D7的人源化的克隆
制造和测试了抗体54.9D7的3种人源化的形式。序列和活性示出于图14、图15和图16A至16D。人源化的克隆结合EOL-1细胞的平均荧光强度(MFI)值示出于表4。人源化的克隆的KD、kon和kdis值示出于表5A和表5B中。克隆“hH1L3”是指54.9D7的人源化的克隆，其具有SEQ ID NO:118的重链可变区序列和SEQ ID NO:117的轻链可变区序列。克隆“hH2L3”是指54.9D7的人源化的克隆，其具有SEQ ID NO:119的重链可变区序列和SEQ ID NO:117的轻链可变区序列。克隆“hH3L3”是指54.9D7的人源化的克隆，其具有SEQ ID NO:120的重链可变区序列和SEQ ID NO:117的轻链可变区序列。
表4
Chi54.9D7 hH1L3 hH2L3 hH3L3
EC50 160 114.2 112.6 108.2
表5A
克隆 KD(M) kon(1/Ms) kdis(1/s)
Chi54.9D7 <1.0E-12 1.43E+05 <1.0E-07
54.9D7 H1L3 5.56E-10 1.36E+05 7.57E-05
54.9D7 H2L3 <1.0E-12 1.41E+05 <1.0E-07
54.9D7 H3L3 <1.0E-12 1.77E+05 <1.0E-07
表5B
克隆 KD(M) kon(1/Ms) kdis(1/s)
Chi54.9D7 <1.0E-12 1.58E+05 <1.0E-07
54.9D7 H1L3 2.29E-10 1.64E+05 3.75E-05
54.9D7 H2L3 <1.0E-12 1.69E+05 <1.0E-07
54.9D7 H3L3 <1.0E-12 1.93E+05 <1.0E-07
应理解本文中描述的实例和实施方案仅用于说明目的，且根据其的不同的修改或改变将被提示给本领域技术人员，且包含在本申请的精神和范围内，以及所述权利要求的范围内。本文中引用的所有出版物、专利和专利申请均通过引用整体并入本文中用于所有目的。
序列表
<110> 坎塔吉亚有限责任公司 (CANTARGIA AB)
<120> 抗IL1-RAP抗体
<130> 1064607
<140> PCT/US17/56808
<141> 2017-10-16
<150> US 62/408,807
<151> 2016-10-16
<150> US 62/425,970
<151> 2017-10-10
<160> 139
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 570
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 1
Met Thr Leu Leu Trp Cys Val Val Ser Leu Tyr Phe Tyr Gly Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ser Asp Ala Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met
20 25 30
Arg Gln Ile Gln Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro
35 40 45
Leu Phe Glu His Phe Leu Lys Phe Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala
50 55 60
Gly Leu Thr Leu Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu
65 70 75 80
Glu Pro Ile Asn Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys
85 90 95
Asp Val Leu Trp Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr
100 105 110
Thr Cys Met Leu Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro
115 120 125
Leu Glu Val Val Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Pro Met Lys Leu
130 135 140
Pro Val His Lys Leu Tyr Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile Thr Cys
145 150 155 160
Pro Asn Val Asp Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Thr Ile Thr
165 170 175
Trp Tyr Met Gly Cys Tyr Lys Ile Gln Asn Phe Asn Asn Val Ile Pro
180 185 190
Glu Gly Met Asn Leu Ser Phe Leu Ile Ala Leu Ile Ser Asn Asn Gly
195 200 205
Asn Tyr Thr Cys Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr Phe His
210 215 220
Leu Thr Arg Thr Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala
225 230 235 240
Val Pro Pro Val Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys
245 250 255
Glu Pro Gly Glu Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe
260 265 270
Leu Met Asp Ser Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys
275 280 285
Pro Asp Asp Ile Thr Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile Ser His
290 295 300
Ser Arg Thr Glu Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys
305 310 315 320
Val Thr Ser Glu Asp Leu Lys Arg Ser Tyr Val Cys His Ala Arg Ser
325 330 335
Ala Lys Gly Glu Val Ala Lys Ala Ala Lys Val Lys Gln Lys Val Pro
340 345 350
Ala Pro Arg Tyr Thr Val Glu Leu Ala Cys Gly Phe Gly Ala Thr Val
355 360 365
Leu Leu Val Val Ile Leu Ile Val Val Tyr His Val Tyr Trp Leu Glu
370 375 380
Met Val Leu Phe Tyr Arg Ala His Phe Gly Thr Asp Glu Thr Ile Leu
385 390 395 400
Asp Gly Lys Glu Tyr Asp Ile Tyr Val Ser Tyr Ala Arg Asn Ala Glu
405 410 415
Glu Glu Glu Phe Val Leu Leu Thr Leu Arg Gly Val Leu Glu Asn Glu
420 425 430
Phe Gly Tyr Lys Leu Cys Ile Phe Asp Arg Asp Ser Leu Pro Gly Gly
435 440 445
Ile Val Thr Asp Glu Thr Leu Ser Phe Ile Gln Lys Ser Arg Arg Leu
450 455 460
Leu Val Val Leu Ser Pro Asn Tyr Val Leu Gln Gly Thr Gln Ala Leu
465 470 475 480
Leu Glu Leu Lys Ala Gly Leu Glu Asn Met Ala Ser Arg Gly Asn Ile
485 490 495
Asn Val Ile Leu Val Gln Tyr Lys Ala Val Lys Glu Thr Lys Val Lys
500 505 510
Glu Leu Lys Arg Ala Lys Thr Val Leu Thr Val Ile Lys Trp Lys Gly
515 520 525
Glu Lys Ser Lys Tyr Pro Gln Gly Arg Phe Trp Lys Gln Leu Gln Val
530 535 540
Ala Met Pro Val Lys Lys Ser Pro Arg Arg Ser Ser Ser Asp Glu Gln
545 550 555 560
Gly Leu Ser Tyr Ser Ser Leu Lys Asn Val
565 570
<210> 2
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
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Val Pro Ala Pro Arg Tyr Thr Val Glu Leu Ala Cys
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<210> 3
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<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
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His Ala Arg Ser Ala Lys Gly Glu Val Ala Lys Ala Ala Lys Val Lys
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Gln Lys Val Pro Ala Pro Arg Tyr Thr Val Glu Leu Ala Cys Gly Phe
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Gly Ala Thr Cys
35
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<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
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Gly Asn Arg Cys Gly Gln
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
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<223> 合成的抗体肽构建体
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Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
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Arg
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<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 7
Gly Tyr Ile Phe Ile Thr Tyr
1 5
<210> 8
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 8
Phe Pro Ala Ser Gly Thr
1 5
<210> 9
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 9
Thr Asp Phe Tyr Arg Tyr Asp Gly Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 10
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 10
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Ser Met His
1 5 10 15
<210> 11
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<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 11
Tyr Ala Ser Asp Leu Glu Ser
1 5
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 12
His His Ser Trp Gly Ile Pro Met Tyr Thr
1 5 10
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 13
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Phe Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Arg Gln Lys Ser Gly Thr Phe Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Thr Asn Pro Ile Thr
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Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
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<210> 14
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 14
Arg Ser Asn Tyr Ser Ser Leu Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Thr Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser His Gly His Thr Thr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg His Tyr Gly Ser Tyr Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 15
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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<211> 6
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<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 16
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 17
His Tyr Gly Ser Tyr Tyr Phe Asp Leu
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 18
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His
1 5 10
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 19
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 20
Gln Gln Trp Ser Thr Asn Pro Ile Thr
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 21
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Met His
1 5 10
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<220>
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<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
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<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 23
Tyr Tyr Gly Tyr Phe Asp Tyr
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
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<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
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Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His
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<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
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Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
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<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
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Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Trp Thr
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 27
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn
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Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ser His Asn Trp Pro His
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 28
His Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ile Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Glu Leu Phe
50 55 60
Glu Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Thr Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 29
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
1 5
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
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Asn Thr Tyr Thr Gly Glu
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<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 31
Tyr Tyr Gly Asn Phe Asp Tyr
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 32
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn Leu His
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 33
Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 34
Gln Gln Ser His Asn Trp Pro His Thr
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
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Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
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<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 36
Ser Arg Gly Gly Ser His
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<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 37
Ala Tyr Gly Asn Ser Glu Met Asp Phe
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 38
Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Ile His
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 39
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 40
His Gln Arg Thr Tyr Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 41
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 41
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Asp
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile Asn Ser Val Glu Thr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Arg Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys
100 105
<210> 42
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 42
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Asn Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Glu Ala Arg Phe Ala Phe Ser Leu Ala Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Lys Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Phe Leu His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 43
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 43
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe
1 5
<210> 44
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 44
Phe Phe Leu His Phe Asp Tyr
1 5
<210> 45
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 45
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Asp Leu His
1 5 10
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 46
Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Leu Thr
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 47
Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 48
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 48
Thr Ser Gly Gly Ser His
1 5
<210> 49
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 49
Ser Tyr Gly Asn Tyr Val Met Asp Tyr
1 5
<210> 50
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 50
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ile Tyr Ile Tyr
1 5 10
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 51
Gln Gln Trp Asn Ser Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 52
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 52
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Thr Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Tyr Tyr Pro Leu Thr
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Phe Gly Ala Gly Ala Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 53
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 53
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Ser Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Leu Leu His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ile Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 54
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 54
Ser Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
1 5
<210> 55
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 55
Phe Leu Leu His Phe Asp Tyr
1 5
<210> 56
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 56
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His
1 5 10
<210> 57
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 57
His Gln Arg Ser Tyr Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 58
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 58
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro His Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Glu Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 59
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 59
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Asp
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro His Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Pro Phe Asn Tyr Lys Asp Pro Met Asp Trp Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 60
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 60
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
1 5
<210> 61
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 61
Tyr Pro His Asn Gly Gly
1 5
<210> 62
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 62
Ser Pro Phe Asn Tyr Lys Asp Pro Met Asp Trp
1 5 10
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 63
Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 64
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 64
Asn Ala Glu Thr Leu Ala Asp
1 5
<210> 65
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 65
Gln His Phe Trp Ser Thr Pro Trp Thr
1 5
<210> 66
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 66
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Thr Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser His Gly His Thr Thr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg His Tyr Gly Ser Tyr Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
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<223> 合成的抗体肽构建体
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Asp Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Leu His Phe Trp Gly Pro Pro Tyr
85 90 95
Met Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Met Lys Arg
100 105 110
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<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 68
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Thr Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Ser Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Tyr Gly Phe Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
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<220>
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<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
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Gly Tyr Ala Phe Ser Thr Ser
1 5
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<221>
<222>
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<222>
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Arg Asp Tyr Tyr Gly Phe Phe Asp Val
1 5
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Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Val
1 5 10
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Leu His Phe Trp Gly Pro Pro Tyr Met Tyr Thr
1 5 10
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<223> 合成的抗体肽构建体
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Phe Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
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Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
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Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
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Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
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65 70 75 80
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Ala Arg Gly Ser Phe Pro Trp Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
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Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Phe Thr
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Ser Val Lys Leu Leu Ile
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<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 82
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe Ser Ser Ser
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Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Asn Tyr Tyr Gly Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Asp Gly Tyr Pro Ala Trp Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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Gly Tyr Gly Phe Ser Ser Ser
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Gln Gln Tyr Ser Tyr Leu Pro Trp Thr
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<221>
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<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 89
Asp Ser Val Leu Thr Gln Ser Leu Thr Ser Leu Val Val Ser Leu Gly
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Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn His
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Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Lys Leu Leu Ile Phe Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
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Pro Val Glu Gly Asp Glu Gly Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Ile Asn
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<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
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Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Phe
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Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
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Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Lys Ser Ala
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Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
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115 120
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<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 91
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Phe Gly Val
1 5
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<211> 5
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 92
Trp Trp Asp Asp Asp
1 5
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<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 93
Leu Lys Leu Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 94
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn His Gly Asn Ser Phe Met His
1 5 10 15
<210> 95
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
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<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 95
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 96
His Gln Ile Asn Ala His Pro Tyr Thr
1 5
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 97
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Asp Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Val Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Thr Tyr Pro Leu Thr
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100 105
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<211> 118
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<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 98
Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Leu Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asn Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Ile Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Leu Tyr Tyr Gly Asn Phe Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Leu Thr Val Ser Ser
115
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
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Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
1 5
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 100
Ser Asn Ser Gly Gly Ser
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 101
Tyr Tyr Gly Asn Phe Gly Phe Asp Tyr
1 5
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<211> 10
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 102
Ser Ala Arg Ser Ser Val Asp Tyr Met Tyr
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 103
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 104
Gln Gln Trp Asn Thr Tyr Pro Leu Thr
1 5
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<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 105
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Glu Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
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<211> 104
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
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Thr Val Val Asp Ser Gly Lys Cys Arg Ser Lys Gly Phe Gly Tyr Thr
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65 70 75 80
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100
<210> 107
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 107
Gly Tyr Thr Leu Gly Gly Cys
1 5
<210> 108
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 108
Asn Pro Ser Asn Gly Phe
1 5
<210> 109
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 109
Gly Gly His Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 110
Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 111
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 111
Trp Ala Ser Thr Arg His Thr
1 5
<210> 112
<211> 10
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<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 112
Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu Tyr Thr
1 5 10
<210> 113
<211> 356
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 113
Met Thr Leu Leu Trp Cys Val Val Ser Leu Tyr Phe Tyr Gly Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ser Asp Ala Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met
20 25 30
Arg Gln Ile Gln Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro
35 40 45
Leu Phe Glu His Phe Leu Lys Phe Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala
50 55 60
Gly Leu Thr Leu Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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Pro Val His Lys Leu Tyr Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile Thr Cys
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195 200 205
Asn Tyr Thr Cys Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr Phe His
210 215 220
Leu Thr Arg Thr Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala
225 230 235 240
Val Pro Pro Val Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys
245 250 255
Glu Pro Gly Glu Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe
260 265 270
Leu Met Asp Ser Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys
275 280 285
Pro Asp Asp Ile Thr Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile Ser His
290 295 300
Ser Arg Thr Glu Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys
305 310 315 320
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340 345 350
Arg Cys Gly Gln
355
<210> 114
<211> 350
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 114
Met Thr Leu Leu Trp Cys Val Val Ser Leu Tyr Phe Tyr Gly Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ser Asp Ala Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met
20 25 30
Arg Gln Ile Gln Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro
35 40 45
Leu Phe Glu His Phe Leu Lys Phe Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala
50 55 60
Gly Leu Thr Leu Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu
65 70 75 80
Glu Pro Ile Asn Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys
85 90 95
Asp Val Leu Trp Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr
100 105 110
Thr Cys Met Leu Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro
115 120 125
Leu Glu Val Val Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Pro Met Lys Leu
130 135 140
Pro Val His Lys Leu Tyr Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile Thr Cys
145 150 155 160
Pro Asn Val Asp Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Thr Ile Thr
165 170 175
Trp Tyr Met Gly Cys Tyr Lys Ile Gln Asn Phe Asn Asn Val Ile Pro
180 185 190
Glu Gly Met Asn Leu Ser Phe Leu Ile Ala Leu Ile Ser Asn Asn Gly
195 200 205
Asn Tyr Thr Cys Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr Phe His
210 215 220
Leu Thr Arg Thr Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala
225 230 235 240
Val Pro Pro Val Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys
245 250 255
Glu Pro Gly Glu Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe
260 265 270
Leu Met Asp Ser Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys
275 280 285
Pro Asp Asp Ile Thr Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu His Val Val Tyr
290 295 300
Glu Lys Glu Pro Gly Glu Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe
305 310 315 320
Ser Phe Leu Met Asp Ser Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly
325 330 335
Lys Lys Pro Asp Asp Ile Thr Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu
340 345 350
<210> 115
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 115
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Ser Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asp Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Trp
85 90 95
Gly Ile Pro Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 116
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 116
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Ser Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asp Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Val Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Trp
85 90 95
Gly Ile Pro Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 117
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 117
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Ser Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asp Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Val Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Trp
85 90 95
Gly Ile Pro Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 118
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 118
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ile Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 119
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 119
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ile Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 120
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 120
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ile Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 121
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 121
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ile Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Asp Phe Tyr Arg Tyr Glu Gly Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 122
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 122
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Asn Trp Pro His
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 123
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 123
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Phe Thr Phe Thr Leu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Ile Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 124
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 124
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Asn Trp Pro His
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 125
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 125
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Phe Thr Phe Thr Leu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Ile Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Cys Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 126
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 126
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 127
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 127
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 128
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 128
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Tyr Arg Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ile Asn Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Thr Tyr Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 129
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 129
Lys Trp Ser Trp Trp Ser Leu Gly Gly Gly Leu Ala Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Ser Arg Gly Gly Ser His Thr Tyr Tyr Ser Asp Thr Val
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Asn Asn Ala Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Ser Ser Val Arg Ser Ala Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Ala Tyr Gly Asn Ser Glu Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 130
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 130
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ile Tyr Ile
20 25 30
Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Leu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Thr Glu
65 70 75 80
Asp Val Ser Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Ser Tyr Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 131
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 131
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Thr Ser Gly Gly Ser His Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 132
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 132
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met His
1 5 10
<210> 133
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 133
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr
1 5 10
<210> 134
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 134
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Lys Gln Ser Pro Gly Glu Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Gly Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Ser Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asp Leu Lys Asn Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 135
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 135
Val Pro Ala Pro Arg Tyr
1 5
<210> 136
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 136
Ile Ser His Ser Arg Thr Glu Asp Glu Thr
1 5 10
<210> 137
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 137
Gly Leu Ser Tyr Ser Ser Leu Lys Asn Val
1 5 10
<210> 138
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 138
Ala Ser Ser Lys Ile His Ser Gly Thr Gly
1 5 10
<210> 139
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223> 合成的抗体肽构建体
<400> 139
Pro Ile Leu Pro Gly Ser Phe Trp Asn Arg
1 5 10

Claims (26)

1.分离的抗IL1-RAP抗体，其包含可变的轻链和可变的重链，其中：
a)所述可变的轻链包含由RASESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:24)序列组成的CDRL1、由RASNLES(SEQ ID NO:25)序列组成的CDRL2和由QQSNEDPWT(SEQ ID NO:26)序列组成的CDRL3；并且
b)所述可变的重链包含由GYTFTDYSMH(SEQ ID NO:21)序列组成的CDRH1、由NTETGE(SEQ ID NO:22)序列组成的CDRH2、由YYGYFDY(SEQ ID NO:23)序列组成的CDRH3。
2.如权利要求1所述的分离的抗IL1-RAP抗体，其中：
a)所述可变的轻链由DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGNSFMHWYQQKPGQPP KLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQSNED PWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:126)组成；和/或
b)所述可变的重链由QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSMHWVKQAPGKGLK WMGWINTETGEPTYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATY FCARYYGYFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:127)组成。
3.如权利要求1所述的分离的抗IL1-RAP抗体，其中所述分离的抗IL1-RAP抗体为单特异性的。
4.如权利要求1所述的分离的抗IL1-RAP抗体，其中所述分离的抗IL1-RAP抗体为多特异性的。
5.如权利要求1所述的分离的抗IL1-RAP抗体，其中所述分离的抗IL1-RAP抗体为双特异性的。
6.如权利要求4或5所述的分离的抗IL1-RAP抗体，其中所述分离的抗IL1-RAP抗体还能结合选自以下的抗原：CD45、CD38和CD34。
7.如权利要求1所述的分离的抗IL1-RAP抗体，其中所述分离的抗IL1-RAP抗体与化学部分缀合。
8.核酸分子，其编码权利要求1所述的分离的抗IL1-RAP抗体。
9.宿主细胞，其包含权利要求8所述的核酸分子。
10.药物组合物，其包含权利要求1所述的抗体和佐剂。
11.有效量的的权利要求1所述的抗体在制备用于检测表达膜结合的IL1-RAP的细胞的试剂中的用途，其中所述检测包括：
将细胞与有效量的能够结合所述细胞的权利要求1所述的抗体接触，以及
检测所述抗体与所述细胞的结合，
其中结合表明存在目标细胞。
12.有效量的能够结合患病细胞的权利要求1所述的抗体在制备用于诊断IL1-RAP相关的疾病的试剂中的用途，其中所述诊断包括：
将来自个体的生物样品与有效量的能够结合患病细胞的权利要求1所述的抗体接触，以及
检测所述抗体与患病细胞的结合，
其中结合表明存在所述疾病。
13.如权利要求12所述的用途，其中所述IL1-RAP相关的疾病为癌症。
14.如权利要求13所述的用途，其中所述IL1-RAP相关的疾病为骨髓增殖性病症。
15.如权利要求14所述的用途，其中所述骨髓增殖性病症选自：急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性单核细胞性白血病(CMML)、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤和骨髓纤维化。
16.权利要求1所述的抗体在制备用于抑制细胞分裂的药物中的用途，其中所述细胞表达IL1-RAP。
17.如权利要求16所述的用途，其中所述细胞为肿瘤或癌症干细胞。
18.如权利要求17所述的用途，其中所述肿瘤或癌症干细胞来自骨髓增殖性病症。
19.如权利要求18所述的用途，其中所述骨髓增殖性病症选自：急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性单核细胞性白血病(CMML)、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤和骨髓纤维化。
20.权利要求1所述的抗体在制备用于治疗IL1-RAP表达升高的癌症的药物中的用途。
21.如权利要求20所述的用途，其中所述癌症为骨髓增殖性病症。
22.如权利要求21所述的用途，其中所述骨髓增殖性病症选自：急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性单核细胞性白血病(CMML)、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤和骨髓纤维化。
23.如权利要求20所述的用途，其中所述抗体为多特异性的，并且还能与肿瘤相关的抗原或癌症干细胞抗原结合。
24.如权利要求20所述的用途，其中所述抗体为双特异性的，并且还能与肿瘤相关的抗原或癌症干细胞抗原结合。
25.如权利要求23或24所述的用途，其中所述肿瘤相关的抗原或癌症干细胞抗原为CLL-1。
26.权利要求1所述的抗体在制备用于减少肿瘤负荷的药物中的用途，其中所述肿瘤的IL1-RAP表达升高。
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