CN110031567A - 培美曲塞二钠中间体二乙酯的分析方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种培美曲塞二钠中间体二乙酯的分析方法，采用Agilent1100高效液相色谱仪，用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，流动相为0.5%的乙酸与乙腈的混合溶液，稀释液采用0.4%磷酸二氢钠和乙腈混合液。这样可以有效的分离培美曲塞二钠中间体及其杂质，且该方法操作简单，分离度高，分析时间短。

Description

培美曲塞二钠中间体二乙酯的分析方法

技术领域

本发明涉及分析化学中的一种高效液相色谱分析测定化学试剂的方法。

背景技术

培美曲塞二钠（pemetrexed disodium），化学名称为N-[4-[2-(2-氨基-4，7-二氢-4-氧-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-烷基)乙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸二钠，其化学结构式如下：

。

培美曲塞二钠是由美国Eli Lilly公司开发，是一种是一种含有吡咯嘧啶基团的新型多靶位叶酸阻滞剂，能够阻断癌细胞分裂和增生过程中所需要的多种酶，甚至抑制细胞胸苷和嘌呤核苷酸生物合成中包括所有叶酸依赖酶的活性，用于治疗恶性胸膜间皮瘤及非小细胞性肺癌。

培美曲塞二钠可以通过下述文献中的方法制备[Barnett C J, Wilson T M,Kobierski M E. A practical synthesis of multitargeted antifolate LY231514[J].Organic Process Research & Development, 1999, 3(3): 184-188.]。

其中，培美曲塞二乙酯，N-[4-[2-(2-氨基-4，7-二氢-4-氧-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-烷基)乙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯是合成培美曲塞二钠的重要中间体。

CN105531276A报道用三氟乙酸和乙腈作为流动相，磷酸二氢钠和乙腈混合液作为样品的稀释液在250 nm下用梯度洗脱检测培美曲塞二乙酯。三氟乙酸易挥发且酸性较强，三氟乙酸的浓度很难控制，如果配置时间过长或保存不当，就会导致挥发，改变浓度。且该方法时间较长，所以建立一种快速有效的分析方法对培美曲塞二钠中间体进行质量控制是非常有必要的。

液相色谱仪：利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。主要是用于定量组分分析用，简单的说，就是能准确地获知单位体积内含有多少某一种或某几种物质的量。

液相色谱仪根据固定相是液体或是固体，又分为液-液色谱(LLC）及液-固色谱(LSC）。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较，具有高效、快速、灵敏等特点。

高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的组成与特点。

高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合，HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。

发明内容

本发明目的：

提供一种快速有效检测培美曲塞二钠中间体的高效液相色谱检测方法，用于培美曲塞二钠中间体的质量控制。

技术方案：

本发明所述的用高效液相色谱法分析培美曲塞二钠中间体的方法，是采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱（比如优选规格：4.6×250 mm，5 μm）柱，以乙腈为流动相，检测波长可选用250 nm，进行分析检测。

上述方法的优选流动相为0.5%的乙酸：乙腈的混合溶液，两者体积比为6-7:3-4。由于乙酸与色谱柱为惰性物质，酸性较弱，pH值控制容易，能够增加二乙酯的流动性，减少挥发性。

稀释液为0.4%磷酸二氢钠与乙腈的混合物，两者的体积比为1-2:1；采用0.4%磷酸二氢钠和乙腈混合液作为稀释液，磷酸二氢钠pH值比较低，使用低PH值流动相所得的色谱峰形明显不同于采用高pH值流动相所得的色谱峰形，后者的峰形更复杂，后者同时还具有明显的指数拖尾。

本发明所述的分析检测方法，可以通过以下步骤实现，以便达到很好的检测准确率和培美曲塞二钠中间体的质量掌控：

A、取培美曲塞二钠中间体样品适量，用稀释液溶解，配制成每1 mL含培美曲塞二钠中间体0.3 mg的样品溶液；

B、设置流动相流速为1.0 mL/min，检测波长为250 nm，柱温为20 ℃；

C、取A的样品溶液10 uL注入液相色谱仪，优选Agilent1100高效液相色谱仪。

有益效果：

本发明涉及的分析检测方法可以有效的分离培美曲塞二钠中间体及其杂质，且该方法分离度高，操作简单，分析分析时间短，可用于培美曲塞二钠中间体质量的精确控制。

附图说明

图1实施例1的培美曲塞二钠中间体HPLC图谱；

图2比较例1的培美曲塞二钠中间体HPLC图谱。

具体实施方式

以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。

实施例1

仪器：Agilent1100 液相色谱系统

流速：1.0 mL/min

进样量：10 uL

检测波长：250 nm

柱温：20 ℃

柱子：Agilent Extend-C18（4.6×250 mm，5μm）

流动相：0.5%乙酸与乙腈的体积比为7:3

稀释液：0.4%磷酸氢二钠与乙腈的体积比为1:1

将培美曲塞二钠中间体用稀释液稀释制成1ml中含培美曲塞二钠中间体0.3 mg的溶液，作为供试品，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1.

附图1表明，在该色谱条件下，培美曲塞二钠中间体峰的保留时间在13.544左右。

比较例1：

仪器：Agilent1100 液相色谱系统

流速：1.0 mL/min

进样量：10 uL

检测波长：250 nm

柱温：20 ℃

柱子：Agilent Extend-C18（4.6×250 mm，5μm）

流动相：A：0.2%三氟乙酸

B：0.2%三氟乙酸的乙腈溶液

梯度洗脱程序：

稀释液：0.4%磷酸氢二钠与乙腈的体积比为1:1

将培美曲塞二钠中间体用稀释液稀释制成1ml中含培美曲塞二钠中间体0.3 mg的溶液，作为供试品，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图2，与实例1相比，比较例1使用梯度洗脱，出峰时间较长。

附图2表明，在该色谱条件下，培美曲塞二钠中间体峰的保留时间在50.184 min左右。

Claims (4)

1.一种培美曲塞二钠中间体二乙酯的分析方法，采用高效液相色谱仪，其特征在于：选用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以乙腈为流动相进行分析检测。

2.如权利要求1所述的培美曲塞二钠中间体二乙酯的分析方法，其特征在于：流动相为0.5%的乙酸：乙腈的混合溶液，两者体积比为6-7：3-4。

3.如权利要求1所述的培美曲塞二钠中间体二乙酯的分析方法，其特征在于：采用0.4%磷酸二氢钠和乙腈混合液作为稀释液，0.4%磷酸二氢钠与乙腈的体积比为1-2：1。

4.如权利要求1所述的培美曲塞二钠中间体二乙酯的分析方法，其特征在于：具有下列检测步骤：

A、取培美曲塞二钠中间体样品适量，用稀释液溶解，配制成每1 mL含培美曲塞二钠中间体0.3-0.5 mg的样品溶液；

B、设置流动相流速为1.0 mL/min，检测波长为250 nm，柱温为20 ℃；

C、取A的样品溶液10 uL注入高效液相色谱仪进行检测。