CN110022899A - 在淋巴行性药剂投予法中有效的药剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种在将抗癌剂进行淋巴结内投予的淋巴行性药剂投予中适宜的医药组合物。一种供淋巴结内投予的癌症治疗或预防性治疗用医药组合物，其将选自代谢拮抗剂和植物生物碱类抗癌剂中的1种以上的抗癌剂作为有效成分。

Description

在淋巴行性药剂投予法中有效的药剂
技术领域
本发明涉及一种适于淋巴行性药剂投予法的医药组合物。
背景技术
癌症是在日本人中每二人就会有一人罹患的疾病，癌症患者的死因有9成起因于转移。以乳腺癌或头颈部癌为首的癌症多数是经由淋巴管转移至所属淋巴结。首先转移的淋巴结称为前哨淋巴结。
在转移淋巴结的治疗中，除淋巴结清除术或放射线治疗外，一般为向静脉注射抗癌剂的全身化学疗法，但是，抗癌剂这样的低分子容易被位于肿瘤周围的间质的毛细血管再吸收，因此全身化学疗法不一定能够获得充分的治疗效果。
近年来，本发明的发明人成功建立了具有与人类淋巴结同等大小的特殊小鼠。而且发现，在将癌细胞移入至该小鼠的淋巴结(髂骨下淋巴结(SiLN))而使其转移至腋固有淋巴结(PALN)的淋巴结转移模型中，在从髂骨下淋巴结(SiLN)投予阿霉素的情况下，在发生癌症的腋固有淋巴结(PALN)中发挥了抗癌作用(非专利文献1)。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：Shigeki Kato,Shiro Mori,Tetsuya Kodama,Journal of Cancer2015,6(12):1282-1294.
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的目的在于提供一种在将抗癌剂进行淋巴结内投予时更适合的医药组合物。
用于解决课题的技术手段
本发明的发明人鉴于该实际情况进行研究后发现，代谢拮抗剂或植物生物碱类抗癌剂在进行淋巴结内投予时以少量即可发挥优异的抗肿瘤活性，作为用于淋巴结内投予的药剂更有用，从而完成了本发明。
即，本发明涉及以下的(1)～(10)。
(1)一种供淋巴结内投予的癌症的治疗或预防性治疗用医药组合物，其将选自代谢拮抗剂和植物生物碱类抗癌剂中的1种以上的抗癌剂作为有效成分。
(2)如(1)所述的医药组合物，其中，代谢拮抗剂为5-氟尿嘧啶或其盐。
(3)如(1)或(2)所述的医药组合物，其中，植物生物碱类抗癌剂选自伊立替康、SN-38、多西紫杉醇以及它们的盐中的1种以上。
(4)如(1)～(3)中任一项所述的医药组合物，其中，投予对象的淋巴结为以治疗或预防性治疗为目的的淋巴结或位于该淋巴结所属的淋巴管网上游的淋巴结。
(5)如(1)～(4)中任一项所述的医药组合物，其中，单次投予量以代谢拮抗剂计为1ng～100mg和/或以植物生物碱类抗癌剂计为1ng～20mg。
(6)如(1)～(5)中任一项所述的医药组合物，其粘度为40mPa·s以下。
(7)如(1)～(5)中任一项所述的医药组合物，其粘度为1～10mPa·s。
(8)选自代谢拮抗剂和植物生物碱类抗癌剂中的1种以上的抗癌剂在用于制造供淋巴结内投予的癌症的治疗或预防性治疗用医药组合物中的用途。
(9)一种医药组合物，用于通过淋巴结内投予而进行癌症的治疗或预防性治疗，该医药组合物包含选自代谢拮抗剂和植物生物碱类抗癌剂中的1种以上的抗癌剂。
(10)一种癌症的治疗或预防性治疗方法，其对患者将包含选自代谢拮抗剂和植物生物碱类抗癌剂中的1种以上的抗癌剂的医药组合物投予至淋巴结内。
发明的效果
本发明的用于淋巴结内投予的医药组合物以低用量即可发挥优异的抗肿瘤效果。此外，通过投予至位于淋巴管网上游的淋巴结内，能够使位于下游的淋巴结也成为治疗对象。由此，能够将处于转移初期阶段的淋巴结或转移危险性高的淋巴结作为治疗或预防性治疗的对象。
附图说明
图1是腋固有淋巴结转移模型小鼠和使用该小鼠进行药剂投予的图。通过将肿瘤细胞移植至髂骨下淋巴结(SiLN)，诱导肿瘤细胞经由淋巴管转移至腋固有淋巴结(PALN)。其次，通过将药剂投予至副腋窝淋巴结(AALN)，经由淋巴管将药剂送达至腋固有淋巴结，对已转移的肿瘤细胞进行治疗。
图2是溶液B投予后day9T时的腋固有淋巴结的病理图照片(a：2倍、b：10倍)。b是将a的□部分放大后的照片，cor表示淋巴结的皮质，T表示肿瘤。在淋巴结皮质表层发现肿瘤细胞的残留，但在相当于淋巴结边缘窦的部位未发现肿瘤细胞。
图3是溶液C投予后day9T时的腋固有淋巴结的病理图照片(a：2倍、b：10倍)。b是将a的□部分放大后的照片，T表示肿瘤。在淋巴结实质和边缘窦发现肿瘤的浸润、增殖。
图4是溶液C投予后day9T时的副腋窝淋巴结的病理图照片(a：2倍、b：10倍)。b是将a的□部分放大后的照片，F表示纤维化。以淋巴结髓质为中心发现广泛的坏死和纤维化，变异甚至波及包含淋巴结皮质和输出淋巴管基部在内的淋巴结被膜外，暗示输出淋巴管的通过障碍。
具体实施方式
本发明的医药组合物含有选自代谢拮抗剂和植物生物碱类抗癌剂中的1种以上的抗癌剂，且被局部投予至淋巴结内。
作为代谢拮抗剂，例如除5-氟尿嘧啶(5-FU)、5-FU的前药(例如替加氟或其盐)、卡培他滨或其盐、TS-1(也称为S-1，与替加氟并用调节剂而成的复合剂)、卡莫氟、脱氧氟尿苷等氟化嘧啶系抗癌剂外，可列举：吉西他滨、阿糖胞苷、依诺他滨、巯嘌呤、氟达拉滨、克拉屈滨、甲胺喋呤、培美曲塞、羟基脲、奈拉滨、喷司他丁、它们的前药等，更优选为使5-氟尿嘧啶存在于生物体内的氟化嘧啶系抗癌剂，特别优选为5-氟尿嘧啶或其盐。
其中，作为盐，可列举药学上可接受的与无机酸(例如盐酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、磷酸)或有机酸(例如甲酸、乙酸、丙酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、甲磺酸)的盐。
作为植物生物碱类抗癌剂，例如可列举：长春新碱、长春花碱、长春地辛、长春瑞滨、依托泊苷、伊立替康或其活性代谢物或者它们的盐、拓朴替康、索布佐生、多西紫杉醇、紫杉醇、紫杉醇注射剂、埃立布林等，优选为伊立替康或其代谢物或者它们的盐。作为伊立替康的活性代谢物，可列举7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)。
作为伊立替康的盐，可列举上述药学上可接受的与无机酸或有机酸的盐，优选为盐酸盐。
本发明的医药组合物的单位投予剂型中的抗癌剂的含量根据其种类而有所不同，为1ng～1000mg，优选为10ng～100mg，更优选为100ng～10mg，更优选为1μg～1mg。
由于本发明的医药组合物是投予至淋巴结内的，所以优选为可注射至淋巴结内的剂型。作为可注射的剂型，可列举可注射的溶液、可注射的悬浮液、可注射的乳化液、可注射的凝胶、可注射的固体形态。
所谓可注射的固体形态，可列举与注射用水、注射用生理食盐水、注射用葡萄糖液等溶剂混合而可在使用时以淋巴结内注射的形式使用的冷冻干燥制剂或粉末填充制剂。
本发明的医药组合物中，除上述抗癌剂外，还可包含药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。此时，药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂可以从水溶性溶剂或油性溶剂、分散剂、等张剂、防腐剂、溶解剂、稳定剂等中适当选择。
此处，作为水溶性溶剂，例如可列举蒸馏水、生理食盐水、林格液或磷酸盐缓冲液(PBS)等。作为油溶性溶剂，例如可列举橄榄油、蓖麻油、芝麻油、棉籽油、玉米油等植物油。作为分散剂，例如可列举tween20或tween80、聚乙二醇、羧甲基纤维素、藻酸钠等。作为等张剂，例如可列举氯化钠、甘油、山梨醇、葡萄糖等。作为溶解剂，例如可列举水杨酸钠、泊洛沙姆、乙酸钠等。作为防腐剂，例如可列举对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苄醇、氯丁醇、苯甲酸钠、苯酚等。作为稳定剂，例如可列举人血清白蛋白、牛血清白蛋白等白蛋白。
该医药组合物可使用公知的制药技术制备本发明的抗癌剂。例如，可通过使本发明的抗癌剂与上述分散剂、等张剂、防腐剂、溶解剂、稳定剂等一并溶解、悬浮或乳化于水溶性溶剂或油溶性溶剂而制备。
此外，就肿瘤缩小效果的方面而言，本发明的医药组合物的粘度优选为40mPa·s以下，更优选为30mPa·s以下，更优选为20mPa·s以下，更优选为10mPa·s以下。此外，优选为0.5mPa·s以上，更优选为1mPa·s以上。
例如，优选为0.5～40mPa·s，更优选为0.5～30mPa·s，更优选为0.5～20mPa·s，更优选为0.5～10mPa·s，进一步优选为1～10mPa·s。
粘度可以如下述实施例所示，在20℃下使用振动粘度计(例如，音叉振动式粘度计＜SV-1A，A&D株式会社制造＞)进行测定。
粘度的调整一般可在注射制剂中使用作为增粘剂使用的各种亲水性聚合物而进行。具体而言，例如可列举：纤维素、直链淀粉、果胶、明胶、糊精、藻酸盐等直链状的多糖类；纤维素衍生物(甲基纤维素(MC)、羟丙基纤维素(HPC)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)等羟烷基纤维素、羧烷基纤维素、以及包含羧甲基纤维素(CMC)的它们的盐等)；葡糖胺聚醣(透明质酸及其盐等非硫酸化葡糖胺聚醣、脱硫酸化肝素、脱硫酸化软骨素硫酸和脱硫酸化硫酸皮肤素等)；半乳甘露聚糖(瓜尔胶、葫芦巴胶、塔拉胶、刺槐豆胶和角豆胶等)；卡波姆；聚丙烯酸；聚卡波非；聚乙烯吡咯烷酮；聚丙烯酰胺；聚乙烯醇；聚乙酸乙烯酯的衍生物和混合物，此外，可使用也可作为稳定剂、表面活性剂、悬浮剂、乳化剂、分散剂、溶剂、溶解剂、溶解助剂等使用的聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯类，就肿瘤缩小效果的方面而言，优选为使用聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯类。作为聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯，优选为聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯(Polysorbate20，Tween20)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单硬脂酸酯(Polysorbate60，Tween60)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇三硬脂酸酯(Polysorbate65，Tween65)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇油酸酯(Polysorbate80，Tween80)，更优选为聚氧乙烯脱水山梨糖醇油酸酯。
这样制备的本发明的医药组合物被局部投予至患者的淋巴结内。其中，成为投予对象的淋巴结可为以治疗或预防性治疗为目的的淋巴结(目标淋巴结)本身，或可以位于该淋巴结所属的淋巴管网上游的淋巴结。具体而言，例如可列举肿瘤细胞自原发病灶移动而最初发生转移的前哨淋巴结、位于前哨淋巴结下游的淋巴结(二次淋巴结)、位于原发病灶周围的附属淋巴结上游的淋巴结、位于附属淋巴结所属的淋巴管网上游的淋巴结等。
其中，目标淋巴结有无癌均可。例如，在进行淋巴结清除之前，向清除范围内的淋巴结(上游侧淋巴结)中投予本发明的医药组合物，经由淋巴管网将抗癌剂送达至清除范围外的淋巴结(下游侧淋巴结)而实施清除，由此可实现下游侧淋巴结的预防性治疗。
关于本发明的医药组合物向淋巴结的投予，只要本发明的医药组合物可注入至淋巴结内，则其方法并无限定，可切开患者的皮肤而注入投予至露出的淋巴结，也可从患者的皮肤上注射投予至推测为淋巴结的位置的部位。
如下述实施例所示，5-氟尿嘧啶、伊立替康和多西紫杉醇通过进行淋巴结内投予，以少量的投予即可发挥比阿霉素优异的抗肿瘤效果。关于对癌细胞株的细胞增殖抑制活性(GI50值)，已知阿霉素远远强于5-氟尿嘧啶和伊立替康，与多西紫杉醇为相同程度(参照比较例)，故而通过5-氟尿嘧啶、伊立替康或多西紫杉醇的淋巴结内投予所获得的抗肿瘤效果完全无法根据先前的见解所预测。
此外，该抗肿瘤效果是通过位于较预防或治疗目的的淋巴结更上游的淋巴结内投予而发挥。由此，本发明的医药组合物可将处于转移初期阶段的淋巴结或转移的危险性较高的淋巴结设为治疗或预防性治疗的对象，对于防止复发等尤为有用。
此外，在本说明书中，所谓“治疗”是指具有癌症的对象的治疗(实时治疗)，意指使其状态、或因其状态而产生的1种或复数种症状改善、减轻或消失。所谓“预防性治疗”意指虽有成为癌症的风险但目前不具有其状态或症状的对象的治疗。
作为可通过投予本发明的医药组合物而治疗的恶性肿瘤的种类，只要为对本发明的抗癌剂显示敏感性的恶性肿瘤，就没有特别限制，例如，可列举：头颈部癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胆囊-胆管癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫癌、咽癌、食道癌、肾癌、卵巢癌等。尤其对结肠癌、直肠癌、乳腺癌、食道癌、胃癌、头颈部癌、肺癌、胰腺癌、和胆囊-胆管癌可期待较高的效果。
本发明的医药组合物对人体的投予频度和投予量可适当调整或变更，作为投予间隔，例如可列举1～42日1次，优选为1～28日1次，更优选为1～21日1次。
关于单次投予量，以代谢拮抗剂计为1ng～100mg，优选为10ng～10mg，更优选为100ng～1mg，为先前的全身投予所使用的量的1/109～1/3左右。此外，以植物生物碱类抗癌剂计为1ng～20mg，优选为10ng～10mg，更优选为100ng～1mg，为先前的全身投予所使用的量的1/107～2/3左右。
以下，通过实施例更详细地说明本发明，但本发明并不限定于该等实施例。
实施例
实施例1 5-FU的淋巴结内投予的抗肿瘤活性
1.材料
(a)使用动物
依据已经报告(J Immunol Methods 2013；389(1-2):69-78doi 10.1016/j.jim.2013.01.004.)的方法，制作了淋巴结肿胀模型小鼠MXH10/Mo/lpr/lpr(MXH10/Mo/lpr)。在以下实施例中，使用雄雌合计5只的15～18周龄的该模型小鼠。
(b)肿瘤细胞
依据已经报告(PLoS One 2013；8(2):e55797doi 10.1371/journal.pone.0055797)的方法，制作了来自小鼠成纤维细胞的KM-Luc/GFP细胞。KM-Luc/GFP细胞是将pEGFPLuc质粒转染至作为来自MRL/MpTn-gld/gld小鼠的成纤维细胞的肿瘤细胞的MRL/N1细胞而得到的细胞，稳定表达萤光素酶基因和绿色荧光基因。在以下实施例中，使用FBS(胎牛血清)10％、L-Glutamine-P.S.溶液1％(Thermo Fisher Scientific制造)、包含0.5％的G418的Dulbecco's modified Eagle's medium(Sigma-Aldrich制造)培养该细胞并使用。
(c)被试验药
5-FU使用5-FU注射液250mg(Kyowa Hakko Kirin制造)。以相对于小鼠的体重达到0μg/g、0.1μg/g、1μg/g、10μg/g的方式使用生理食盐水进行浓度调整。
2.方法
(a)腋固有淋巴结转移模型小鼠的制作
将－80℃保存的肿瘤细胞融解后，使用PBS(磷酸缓冲生理食盐水)将经总计2次传代的KM-Luc/GFP细胞浓度调整至1.0×106cells/mL。其后，与基质胶(基底膜基质，BectonDickinson and Co.制造)混合而稀释成3.3×105cells/mL后，在小鼠的髂骨下淋巴结中接种60μL(图1)。将接种肿瘤细胞的这一天设为day0。
(b)体内(in vivo)肿瘤细胞增殖评价
使用活体发光成像系统(IVIS，Caliper Life Science制造)对髂骨下淋巴结和腋固有淋巴结的肿瘤细胞的增殖率进行测定。测定日为肿瘤细胞接种后第0、6、9日(day0、day6、day9)。将调整至15mg/mL的萤光素(Promega制造)200μL注射至小鼠的腹腔，在10分钟后使用IVIS测定萤光素酶活性。
(c)从副腋窝淋巴结的药剂投予
对肿瘤细胞接种后day6的小鼠中腋固有淋巴结中的萤光素酶活性为1.0×106photos/sec以上的小鼠，使用注射泵(KDS100，Muromachi制造)以10μL/min的速度将120μL的5-FU投予至副腋窝淋巴结(图1)。
(d)抗肿瘤活性的评价
通过下述[式1]将day6和day9的萤光素酶活性标准化(normalized)。其后，通过下述[式2]算出标准化的day9与day6的萤光素酶活性比。对于所获得的活性比，通过下述[式3]计算将0μg/g投予下的标准化的day9与day6的萤光素酶活性比设为100时的5-FU的各浓度投予下的标准化的day9与day6的萤光素酶活性比。
[式1]
标准化的day6或day9的萤光素酶活性＝((day6或day9的萤光素酶活性)/(day0的萤光素酶活性))
[式2]
标准化的day9与day6的萤光素酶活性比＝((标准化的day9的萤光素酶活性)/(标准化的day6的萤光素酶活性))
[式3]
将0μg/g投予下的标准化的day9与day6的萤光素酶活性比设为100时的5-FU的各浓度投予下的标准化的day9与day6的萤光素酶活性比＝((5-FU的各浓度投予下的标准化的day9与day6的萤光素酶活性比)/(0μg/g投予下的标准化的day9与day6的萤光素酶活性比)×100)
3.结果
将结果示于表1。
[表1]
5-FU的浓度(μg/g) 通过式3计算出的萤光素酶活性比
0 100
0.1 9.27
1 9.12
10 1.49
通过5-FU的投予，萤光素酶活性比大幅降低，可确认肿瘤缩小，并且极少量的投予(0.1μg/g)也具有90％以上的肿瘤缩小效果。5-FU是从位于淋巴结的上游的副腋窝淋巴结投予的，抗肿瘤活性在下游的腋固有淋巴结中得到确认。根据该情况，暗示将少量的5-FU投予至淋巴结、尤其是上游的淋巴结对于癌症的治疗、防止复发、防止转移等有用，尤其对下游的淋巴结的治疗、防止复发等效果较高。此外，由于极少量也具有抗肿瘤活性，故而暗示本方法的副作用较少，安全性较高。
实施例2伊立替康盐酸盐(CPT-11)的淋巴结内投予的抗肿瘤活性
1.材料
使用动物、使用细胞系与实施例1相同。
作为被试验药，CPT-11使用伊立替康盐酸盐(益力多本社制造)。以相对于小鼠的体重达到0μg/g、0.5μg/g、5μg/g的方式使伊立替康盐酸盐溶解于生理食盐水并调整浓度。
2.方法
除了将投予至副腋窝淋巴结的被试验药变更为CPT-11以外，均以与实施例1相同的方法进行。
3.结果
将结果示于表2。
[表2]
CPT-11的浓度(μg/g) 通过式3计算出的萤光素酶活性比
0 100
0.5 6.06
5 3.03
通过CPT-11的投予，萤光素酶活性比大幅降低，且可确认肿瘤缩小，并且极少量的投予(0.5μg/g)也具有90％以上的肿瘤缩小效果。CPT-11是从位于淋巴结的上游的副腋窝淋巴结投予的，抗肿瘤活性在下游的腋固有淋巴结得到确认。根据该情况，暗示将少量的CPT-11投予至淋巴结尤其是上游的淋巴结对癌症的治疗、防止复发等有用，尤其对下游的淋巴结的治疗、防止复发等效果较高。此外，由于极少量也具有抗肿瘤活性，故而暗示本方法的副作用较少，安全性较高。
实施例3多西紫杉醇的淋巴结内投予的抗肿瘤活性
1.材料
(a)使用动物
使用动物系与实施例1相同。
(b)肿瘤细胞
依据已经报告(J Immunol Methods 2013Mar 29；389(1-2):69-78.doi:10.1016/j.jim.2013.01.004.)的方法，制作了来自小鼠乳腺癌细胞的FM3A-Luc。FM3A-Luc细胞是使用电穿孔法将pGL4.51基因导入至FM3A细胞所获得的细胞，稳定表达萤光素酶基因。在以下实施例中，使用FBS(胎牛血清)10％、L-Glutamine-P.S.溶液1％(Thermo FisherScientific制造)、包含0.5％的G418的RPMI-1640(Sigma-Aldrich公司制造)培养该细胞并使用。
(c)被试验药
多西紫杉醇使用泰索帝(Taxotere)点滴静脉注射用80mg(Sanofi制造)。将2mL的泰索帝点滴静脉注射用80mg溶解于13％乙醇6mL而制备10mg/mL的贮存液，其后，以相对于小鼠的体重达到0μg/g、1μg/g、10μg/g的方式使贮存液溶解于灭菌水并调整浓度。
2.方法
(a)腋固有淋巴结转移模型小鼠的制作
将在－80℃保存的肿瘤细胞融解后，使用PBS(磷酸缓冲生理食盐水)将经总计2次传代的FM3A-Luc细胞浓度调整至1.0×106cells/mL。其后，与基质胶(基底膜基质，BectonDickinson and Co.制造)混合而稀释成3.3×105cells/mL后，将60μL接种至小鼠的髂骨下淋巴结(图1)。将接种肿瘤细胞这一天设为day0。
(b)体内(in vivo)肿瘤细胞增殖评价
使用活体发光成像系统(IVIS，Caliper Life Science制造)对髂骨下淋巴结和腋固有淋巴结的肿瘤细胞的增殖率进行测定。测定日为肿瘤细胞接种后第0、7、14、17、20、23、26、29日。将调整至15mg/mL的萤光素(Promega制造)200μL注射至小鼠的腹腔，在10分钟后使用IVIS测定萤光素酶活性。
(c)从副腋窝淋巴结的药剂投予
对确认腋固有淋巴结处的萤光素酶活性为1.0×106photos/sec以上的小鼠，在确认的翌日，使用注射泵(KDS100，Muromachi制造)以10μL/min的速度将多西紫杉醇120μL投予至副腋窝淋巴结(图1)。
(d)抗肿瘤活性的评价
将多西紫杉醇投予日定义为day0T，通过下述[式4]将day3T(多西紫杉醇投予后第3日)和day6T(多西紫杉醇投予后第6日)的萤光素酶活性标准化(normalized)。其后，通过下述[式5]算出标准化的day3T或day6T与day-1T(确认腋固有淋巴结处的萤光素酶活性为1.0×106photos/sec以上的这一天，多西紫杉醇投予的前一日)的萤光素酶活性比。对于所获得的活性比，通过下述[式6]计算将0μg/g投予下的标准化的day3T或day6T与day-1T的萤光素酶活性比设为100时的多西紫杉醇的各浓度投予下的标准化的day3T或day6T与day-1T的萤光素酶活性比。
[式4]
标准化的day3T、day6T或day-1T的萤光素酶活性＝((day3T、day6T或day-1T的萤光素酶活性)/(day0的萤光素酶活性))
[式5]
标准化的day3T或day6T与day-1的萤光素酶活性比＝((标准化的day3T或day6T的萤光素酶活性)/(标准化的day-1T的萤光素酶活性))
[式6]
将0μg/g投予下的标准化的day3T或day6T与day-1T的萤光素酶活性比设为100时的多西紫杉醇的各浓度投予下的标准化的day3T或day6T与day-1T的萤光素酶活性比＝((多西紫杉醇的各浓度投予下的标准化的day3T或day6T与day-1T的萤光素酶活性比)/(0μg/g投予下的标准化的day3T或day6T与day-1T的萤光素酶活性比)×100)
3.结果
将结果示于表3。
[表3]
N.D.:无资料
通过多西紫杉醇的投予，萤光素酶活性比大幅降低，可确认肿瘤缩小，并且极少量的投予(1μg/g)也于治疗后第6日具有90％以上的肿瘤缩小效果。多西紫杉醇是从位于淋巴结的上游的副腋窝淋巴结投予的，抗肿瘤活性在下游的腋固有淋巴结得到确认。根据该情况，暗示将少量的多西紫杉醇投予至淋巴结尤其是上游的淋巴结对癌症的治疗、防止复发、防止转移等有用，尤其对下游的淋巴结的治疗、防止复发等效果较高。此外，由于极少量也具有抗肿瘤活性，故而暗示本方法的副作用较少，安全性较高。
实施例4使多西紫杉醇的粘度变化时的淋巴结内投予的抗肿瘤活性
1.材料
使用动物系与实施例1相同。
使用细胞系与实施例4相同。
多西紫杉醇系使用泰索帝点滴静脉注射用80mg(Sanofi制造)。将2mL的泰索帝点滴静脉注射用80mg溶解于13％乙醇6mL而制备10mg/mL的贮存液。其后，以多西紫杉醇的浓度相对于小鼠的体重达到1μg/g的方式以表4的调配比制备溶液A、溶液B和溶液C。
[表4]
溶液名 溶液A 溶液B 溶液C
Polysorbate 80(μL) 205 830 1455
13％乙醇(μL) 615 2490 4365
蒸馏水(μL) 5000 2500 0
10mg/mL多西紫杉醇(μL) 180 180 180
合计(μL) 6000 6000 6000
※Polysorbate 80(polysorbate80，日油株式会社)
2.方法
(a)腋固有淋巴结转移模型小鼠的制作、(b)体内(in vivo)肿瘤细胞增殖评价、(c)从副腋窝淋巴结的药剂投予为利用与实施例4相同的方法进行。
(d)抗肿瘤活性的评价
对于溶液A、B或C，将投予日定义为day0T，并通过下述[式7]计算相对于day-1T(确认腋固有淋巴结处的萤光素酶活性为1.0×106photos/sec以上的这一天，多西紫杉醇投予的前一日)的day9T的萤光素酶活性。
[式7]
相对于day-1T的day9T的萤光素酶活性＝((day9T的萤光素酶活性)/(day-1T的萤光素酶活性))
(e)粘度的测定
使用音叉振动式粘度计(SV-1A：粘度测定范围：0.3～10,000mPa·s、SV-1H：粘度测定范围：0.3～1,000mPa·s，A&D株式会社制造)，依据日本药典粘度测定法对溶液A、溶液B和溶液C的粘度进行测定。
(f)病理图照片的拍摄
在溶液B或溶液C投予后的day9T时，使用倒置显微镜BX51(奥林巴斯公司制造)利用明视野观察法拍摄腋固有淋巴结和副腋窝淋巴结的病理图照片。拍摄倍率以2倍和10倍进行。
3.结果
(a)粘度与萤光素酶活性的关系
将结果示于表5。
[表5]
通过式7计算出的萤光素酶活性为相对于day-1T的day9T的萤光素酶活性，因此显示出数值越小则day9T时的肿瘤越缩小的情况。显示溶液A和溶液B的萤光素酶活性较低，肿瘤缩小效果较高。另一方面，溶液C几乎未确认到肿瘤缩小效果。根据该情况，认为为了使多西紫杉醇的淋巴结投与显示肿瘤缩小效果，粘度优选为40mPa·s以下，特别优选为1～10mPa·s。
(b)day9T时的溶液B和溶液C的病理图照片
将投予溶液B或溶液C后day9T时的腋固有淋巴结的病理图照片示于图2和图3。
使用溶液B时，在淋巴结皮质表层发现肿瘤细胞的残留，但在相当于淋巴结边缘窦的部位未发现肿瘤细胞。另一方面，使用溶液C时，在淋巴结实质和边缘窦发现肿瘤的浸润、增殖。由此，粘度相关的肿瘤缩小效果也可由腋固有淋巴结的病理图照片进行确认。
此外，利用相同的方法拍摄溶液C的投予部位即副腋窝淋巴结的病理图照片后，以淋巴结髓质为中心发现广泛的坏死和纤维化，变异甚至波及包含淋巴结皮质和输出淋巴管基部在内的淋巴结被膜外，暗示输出淋巴管的通过障碍(图4)。认为其原因在于溶液C为高粘度，因此在投予至位于上游的副腋窝淋巴结时，不流动至下游的淋巴结而滞留于副腋窝淋巴结。因此，认为不仅多西紫杉醇，对于作为相同植物生物碱类抗癌剂的CPT-11或SN-38、作为代谢拮抗剂的5-FU，在进行淋巴结投予的情形时，均需要将药剂的粘度设为40mPa·s以下。比较例阿霉素的淋巴结内的投予的抗肿瘤活性
1.材料
使用动物、使用细胞系与实施例1相同。
作为被试验药，阿霉素使用阿霉素盐酸盐(Wako制造)。以相对于小鼠的体重达到0μg/g、0.1μg/g、1μg/g、10μg/g的方式使用生理食盐水而进行浓度调整。
2.方法
除了将投予至副腋窝淋巴结的被试验药变更为阿霉素以外，均利用与实施例1相同的方法进行。
3.结果
将结果示于表6。为了将阿霉素的抗肿瘤活性与5-FU、CPT-11和多西紫杉醇的抗肿瘤活性进行比较，将实施例1～3的结果一并示于表6。
[表6]
＊5-FU、CPT-11和阿霉素的萤光素酶活性比通过式3计算。多西紫杉醇的萤光素酶活性比通过式6计算。
通过阿霉素的投予，萤光素酶活性比降低，但肿瘤的缩小率较5-FU、CPT-11和多西紫杉醇更小。尤其在使用阿霉素时，在10μg/g下，肿瘤的缩小率为25％左右，在结果最佳的1μg/g下，肿瘤的缩小率也未达60％，但在使用5-FU和CPT-11时，即便在未达1μg/g的投予量下，肿瘤的缩小率也显示90％以上，在使用多西紫杉醇时，在10μg/g的投予下显示80％以上的肿瘤缩小率。由此，暗示5-FU、CPT-11和多西紫杉醇的效果较阿霉素更高。
对癌细胞株的细胞增殖抑制活性(GI50值)如表7所示，已知阿霉素与5-FU和CPT-11相比强约10～1000倍左右(对NIH DTP database(https://dtp.cancer.gov/dtpstandard/cancerscreeningdata/index.jsp)所记载的各细胞株的GI50值取平均值而算出)。此外，关于多西紫杉醇，已知与阿霉素大致为相同程度。
[表7]
化合物名 对癌细胞株的GI<sub>50</sub>值的平均值(M)
阿霉素 6.63×10<sup>-8</sup>
CPT-11 1.35×10<sup>-5</sup>
5-FU 8.99×10<sup>-7</sup>
多西紫杉醇 2.34×10<sup>-8</sup>
如表7所示，先前，认为阿霉素的效果较5-FU和CPT-11更高，与多西紫杉醇为相同程度，但在淋巴结投予的情况下，如表6所示，显示5-FU、CPT-11和多西紫杉醇的抗肿瘤活性较阿霉素的投予更高，由此明确这些药剂尤其适于淋巴结投予。
产业上的可利用性
根据本发明的医药组合物，能够在清除前将抗癌剂投予至淋巴结而使抗癌剂也流入至较所投予的淋巴结更下游的淋巴结，不仅可在目标淋巴结发挥抗癌作用，还可使抗癌剂流入至具有微小的癌转移可能性的其他淋巴结，可通过杀死微小的癌症而防止复发。
此外，在利用手术无法清除的区域的淋巴结中存在癌的情况下，无法利用外科手术治愈，但通过使用本发明的医药组合物，可自上游的淋巴结使抗癌剂流动而进行无法清除的区域的淋巴结的治疗。进而，关于本发明的医药组合物，所使用的抗癌剂的量较先前的全身投予所使用的量更少，因此副作用也较少，安全性较高。

Claims (10)

1.一种供淋巴结内投予的癌症的治疗或预防性治疗用医药组合物，其特征在于：
其将选自代谢拮抗剂和植物生物碱类抗癌剂中的1种以上的抗癌剂作为有效成分。
2.如权利要求1所述的医药组合物，其特征在于：
代谢拮抗剂为5-尿嘧啶或其盐。
3.如权利要求1或2所述的医药组合物，其特征在于：
植物生物碱类抗癌剂选自伊立替康、SN-38、多西紫杉醇以及它们的盐中的1种以上。
4.如权利要求1～3中任一项所述的医药组合物，其特征在于：
投予对象的淋巴结为以治疗或预防性治疗为目的的淋巴结或位于该淋巴结所属的淋巴管网上游的淋巴结。
5.如权利要求1～4中任一项所述的医药组合物，其特征在于：
单次投予量以代谢拮抗剂计为1ng～100mg和/或以植物生物碱类抗癌剂计为1ng～20mg。
6.如权利要求1～5中任一项所述的医药组合物，其特征在于：
粘度为40mPa·s以下。
7.如权利要求1～5中任一项所述的医药组合物，其特征在于：
粘度为1～10mPa·s。
8.选自代谢拮抗剂和植物生物碱类抗癌剂中的1种以上的抗癌剂在用于制造供淋巴结内投予的癌症的治疗或预防性治疗用医药组合物中的用途。
9.一种医药组合物，用于通过淋巴结内投予而进行癌症的治疗或预防性治疗，所述医药组合物的特征在于：
包含选自代谢拮抗剂和植物生物碱类抗癌剂中的1种以上的抗癌剂。
10.一种癌症的治疗或预防性治疗方法，其特征在于：
对患者将包含选自代谢拮抗剂和植物生物碱类抗癌剂中的1种以上的抗癌剂的医药组合物投予至淋巴结内。
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