CN110004231B - 肾癌外泌体标志物组及其应用 - Google Patents

肾癌外泌体标志物组及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及肾癌外泌体标志物组及其应用，所述标志物组包括：外泌体源性VHL基因的mRNA、外泌体源性PBRM1基因的mRNA、外泌体源性ATM基因的mRNA、外泌体源性PTEN基因的mRNA和外泌体源性SETD2基因的mRNA。本发明所述标志物组通过检测外泌体源性VHL基因、PBRM1基因、ATM基因、PTEN基因和SETD2基因的mRNA的检测和相应的诊断模型，可实现肾癌患者与非肾癌患者的区分，尤其是早期肾癌样本（例如临床T1肾癌）与非肾癌样本（例如正常人以及单纯性肾囊肿、错构瘤等肾脏良性占位病变）的区分，解决临床上早期肾癌难以及时、准确诊断的缺陷。

Description

肾癌外泌体标志物组及其应用
技术领域
本发明涉及医学诊断领域，具体而言，涉及肾癌外泌体标志物组及其应用。
背景技术
肾癌是威胁人们健康的常见恶性肿瘤之一。我国肾癌的发病率近年来一直处于显著的上升趋势，其发病率年增长率高达5%，成为我国肿瘤发病率和死亡率增长最快的肿瘤之一。早期肾癌局限于肾脏包膜内，5年生存期高达90%以上；但当肿瘤扩散到包膜外或远处转移时，肿瘤的治疗就相当困难且预后较差，5年生存期仅有15%左右。更为重要的是，由于早期肾癌往往无临床症状，且临床上缺乏肾癌早期诊断分子标志物，有近30%的患者初诊即为晚期。因此，临床上亟需寻找到简便易行的分子标志物，以实现肾癌的早期诊断，从而提高肾癌患者的总体生存期。
总的来说，肾癌的早期诊断存在着以下不足：1）目前临床上尚无行之有效的肾癌早期筛查或诊断的分子标志物；2）临床上最为常用的体检项目-腹部B超，虽然能够早期发现肿瘤，但对于小于2CM的肿瘤，其敏感性较低；3）临床上，有5%~10%的肾脏良性肿瘤，影像学检查如Ct、MRI难以鉴别，从而导致了这部分患者的过度治疗。
外泌体(Exosome)是一类直径30-150nm，具有完整膜结构的细胞外囊泡，主要负责细胞间的物质运输和信息传递，是最重要的一类细胞外囊泡。外泌体在1983年被发现，1987年正式被定名为exosome，最早被认为是细胞的废弃物。后来的研究表明，外泌体中包裹有细胞特异的核酸、蛋白与脂类，并能作为信号分子向其他细胞传递信息。更进一步的研究发现，外泌体在很多生理病理过程中扮演着重要的角色，如免疫中的抗原呈递，肿瘤的生长与迁移等。所有细胞都会分泌外泌体，但是肿瘤细胞会分泌出比正常细胞数量更多的外泌体。因此即使当前技术不能将来源于正常细胞和肿瘤细胞的外泌体完全分开，血液外泌体也可以一定程度上表征肿瘤的发展情况。然而，遗憾的是，现有的研究结果尚未获得能够用于诊断肾癌，尤其是早期肾癌的外泌体。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明提供肾癌标志物组、肾癌诊断试剂和/试剂盒、肾癌诊断系统及其应用，其通过检测外泌体源性VHL基因、PBRM1基因、ATM基因、PTEN基因和SETD2基因的mRNA的检测和相应的诊断模型，可实现肾癌样本与非肾癌样本的区分，尤其是早期肾癌样本与非肾癌样本的区分，解决影像学无法确认早期肾癌与肾囊肿的缺陷。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
标志物组的检测试剂在制备肾癌诊断试剂和/或试剂盒中的应用，所述标志物组包括：
外泌体源性VHL基因的mRNA、外泌体源性PBRM1基因的mRNA、外泌体源性ATM基因的mRNA、外泌体源性PTEN基因的mRNA和外泌体源性SETD2基因的mRNA。
在一些具体的实施方式中，所述VHL基因的mRNA选自第1号~3号外显子。
在一些具体的实施方式中，所述PBRM1基因的mRNA选自第1~3号外显子或第26~28号外显子。
在一些具体的实施方式中，所述ATM基因的mRNA选自第1号外显子、第60~63号外显子。
在一些具体的实施方式中，所述PTEN基因的mRNA选自第1~3号外显子或第8~9号外显子。
在一些具体的实施方式中，所述SETD2基因的mRNA选自第1~3号外显子或第19~21号外显子。
在一些具体的实施方式中，所述VHL基因的mRNA为第3号外显子，所述PBRM1基因的mRNA为第3号外显子，所述ATM基因的mRNA为第61号外显子，所述PTEN基因的mRNA为第8号外显子，所述SETD2基因的mRNA为第21号外显子。
在一些具体的实施方式中，所述肾癌诊断试剂和/或试剂盒用于区分肾癌患者与非肾癌患者。
在一些具体的实施方式中，所述肾癌患者为早期肾癌，所述早期肾癌不晚于临床T2期，例如临床T1期肾癌或T2期肾癌，所述非肾癌患者为正常人、肾脏良性占位病变或其他良性病变。
优选地，所述早期肾癌为临床T1期肾癌。
优选地，所述肾脏良性占位病变可选自肾囊肿、肾良性肿瘤、肾积水、肾结石或肾炎。
在一些具体的实施方式中，所述外泌体源性VHL基因的mRNA、外泌体源性PBRM1基因的mRNA、外泌体源性ATM基因的mRNA、外泌体源性PTEN基因的mRNA和外泌体源性SETD2基因的mRNA获取自全血，血清或血浆。
在一些具体的实施方式中，所述检测试剂包括外外泌体源性VHL基因的mRNA、外泌体源性PBRM1基因的mRNA、外泌体源性ATM基因的mRNA、外泌体源性PTEN基因的mRNA和外泌体源性SETD2基因的mRNA的检测试剂，
以及以下试剂中的一种或多种：外泌体提取试剂、mRNA提取试剂和反转录试剂。
在一些具体的实施方式中，所述外泌体源性mRNA的定量PCR检测试剂包括扩增引物和标记有荧光基团和淬灭基团的检测探针，其中所述扩增引物的核苷酸序列分别如SEQID NO：1-10所示，所述检测探针的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：11-15所示。
本发明还涉及根据前述应用制备而成的肾癌早期诊断试剂和/或试剂盒。
本发明还涉及用于诊断肾癌的系统，所述系统包括计算模块和诊断模块；其中，所述计算模块包括Ct值获取单元和模型计算单元，所述Ct值获取单元用于获取前述标志物组的Ct值检测结果，所述模型计算单元用于将获取的Ct值检测结果带入诊断模型，计算诊断模型值；
所述诊断模块用于根据所述诊断模型值判断样本是否为肾癌样本。
在一些具体的实施方式中，所述诊断模型如下所示：诊断模型值 = k1×VHLCt＋k2×PBRM1Ct＋k3×ATMCt＋k4×PTENCt＋k5×SETD2Ct－28.6；其中，k1取0.5-3.0，k2取0.2-2.4，k3取10.5-22.9，k4取4.5-8.2，k5取0.8-1.9，VHLCt、PBRM1Ct、ATMCt、PTENCt和SETD2Ct分别表示对应外泌体源性mRNA的Ct值检测结果。
优选地，k1取0.5、1、1.5、2、2.5、3。
优选地，k2取0.2、0.5、1、1.5、2、2.4。
优选地，k3取10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5或22.9。
优选地，k4取4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.2。
优选地，k5取0.8、1、1.5、1.9。
优选地，所述k1取0.5，k2取0.2，k3取10.5，k4取4.5，k5取0.8。
在一些具体的实施方式中，所述诊断模块的判断方法如下所示：
如果所述诊断模型值大于122，则所述诊断模块判断所述样本为非肾癌样本，否则，则判断所述样本为肾癌样本，其中，所述非肾癌样本选自正常人样本、肾脏良性占位病变样本或其他良性病变样本；
如果判定所述样本为肾癌样本，则进一步判断所述肾癌样本是否为早期肾癌样本：当所述诊断模型值为104~122，则所述诊断模块判断所述样本为早期肾癌样本；当所述诊断模型值小于104则结合影像学判断所述样本是否为中晚期肾癌，所述中晚期肾癌不早于临床T3期。
在一些具体的实施方式中，所述肾脏良性占位病变样本可选自肾囊肿、肾良性肿瘤、肾积水、肾结石或肾炎。
在一些具体的实施方式中，所述早期肾癌样本为临床T1分期肾癌样本。
在一些具体的实施方式中，所述中晚期肾癌为高于T1分期肾癌样本。
在一些具体的实施方式中，所述诊断模块用于区分根据影像学无法区分的肾脏良性占位病变样本（例如，肾良性肿瘤、肾积水、肾结石或肾炎）和早期肾癌样本（例如，T1分期肾癌样本），如果诊断模型值大于122，则所述诊断模块判断所述样本为肾脏良性占位病变样本，否则，则判断所述样本为早期肾癌样本，（例如，T1分期肾癌样本）。
术语定义
本发明所述“Ct值”是指PCR反应过程中，每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数，其中C代表Cycle，t代表threshold。
本发明所述VHL基因为von Hippel-Lindau tumor suppressor基因，共3个外显子。
本发明所述PBRM1基因为polybromo 1基因，共28个外显子。
本发明所述ATM基因为ATM serine/threonine kinase基因，共63个外显子。
本发明所述PTEN基因为phosphatase and tensin homolog，共9个外显子。
本发明所述SETD2基因为SET domain containing 2，共21个外显子。
本发明所述肾癌包括但不限于：乳头状肾细胞癌、肾透明细胞癌、肾细胞癌。
本发明所述肾良性肿瘤包括但不限于：成人型囊性肾瘤、和肾上腺髓脂肪瘤。
本发明所述其他良性病变包括但不限于：去分化脂肪肉瘤、腹膜后肿瘤、毛细血管瘤、皮脂腺瘤、血管平滑肌脂肪瘤。
本发明所述肾炎包括但不限于：肾间质慢性炎。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
（1）肾癌标志物组、肾癌诊断试剂和/试剂盒、肾癌诊断系统及其应用，其通过检测外泌体源性VHL基因、PBRM1基因、ATM基因、PTEN基因和SETD2基因的mRNA的检测和相应的诊断模型，可实现肾癌样本与非肾癌样本的区分，尤其是早期肾癌样本（例如临床T1肾癌）与非肾癌样本（例如肾囊肿）的区分，解决影像学无法确认早期肾癌与肾囊肿的缺陷。
（2）本发明经研究发现，VHL基因序列的2号和3号外显子；PBRM1基因序列的2号、3号、26号和28号外显子；ATM基因序列的60-63号外显子；PTEN基因序列的1号、2号和8号外显子；SETD2基因序列的1号、20号和21号外显子表现出样本Ct值小、Ct值稳定且肾癌样本与肾囊肿样本之间检测的Ct值差异大的优点，适合本发明所述诊断模型。
（3）本发明经研究还发现，选取Ct值小的外显子以基因系数最小时，本发明所述诊断模型的诊断效果最佳。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例1所述PCR的反应程序；
图2~6为实施例4所述VHL、PBRM1、ATM、PTEN和SETD2基因不同外显子在肾癌样本和肾囊肿样本的血清外泌体中的Ct值；
图7为实施例5中诊断模型的ROC曲线，其中，1为小Ct值模型，2为大Ct值模型，3为参考线；
图8为实施例6中诊断模型的ROC曲线，其中1最小系数，2为中位系数，3为最大系数，4为参考线；
图9为实施例7中诊断模型的ROC曲线，其中1为最小系数模型，2为参考线。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购买获得的常规产品。
实施例1 血清外泌体mRNA的定量分析方法和检测试剂盒
一种检测血清外泌体mRNA的定量分析方法和试剂盒，所述方法包括：
1、用外泌体提取试剂盒(QIAGEN公司：miRCURY Exosome Kits；Thermofisher公司：Total Exosome Isolation Reagent from serum)，将血清中的总外泌体提取出来。
2、随后将提取的外泌体，利用核糖核酸抽提试剂盒(QIAGEN公司：miRNeasy MicroKit；Thermofisher公司：MagMAX™ mirVana™ Total RNA Isolation Kit)，将外泌体中全部的核糖核酸进行提取。
3、提取后的核糖核酸，用反转录试剂盒(Takara公司：PrimeScript™ II 1stStrand cDNA Synthesis Kit)，将核糖核酸转化成cDNA。
4、随后将cDNA依次加入到荧光定量PCR反应液中，共5管反应液，每管反应液中加入2微升的cDNA，并分别加入用于扩增VHL、PBRM1、ATM、PTEN和SETD2基因的引物对和检测探针。将混合好的反应液放入荧光PCR仪器(Thermofisher公司：AB7500荧光PCR仪)上，设置反应程序如图1所示并完成反应。反应完成后读取每个反应孔的Ct值。
所述试剂盒包括前述方法使用的外泌体提取试剂、mRNA提取试剂、cDNA转录试剂和VHL、PBRM1、ATM、PTEN和SETD2基因的定量PCR检测试剂，所述检测试剂包括扩增引物和标记有荧光基团和淬灭基团的检测探针。
实施例2 肾癌诊断模型
本实施例提供一种肾癌诊断模型，所述诊断模型如下所示：诊断模型值 = k1×VHLCt＋k2×PBRM1Ct＋k3×ATMCt＋k4×PTENCt＋k5×SETD2Ct－28.6。其中，k1取0.5-3.0，k2取0.2-2.4，k3取10.5-22.9，k4取4.5-8.2，k5取0.8-1.9，VHLCt、PBRM1Ct、ATMCt、PTENCt和SETD2Ct分别表示对应外泌体源性mRNA的Ct值检测结果。所述诊断模型的分析结果如表1所示。
表1 肾癌诊断模型的分析结果
实施例3 肾癌诊断系统
本实施例提供用于诊断肾癌的系统，所述系统包括计算模块和诊断模块；所述计算模块包括Ct值获取单元和模型计算单元，其中，
所述Ct值获取单元用于获取血清外泌体基因VHL、PBRM1、ATM、PTEN和SETD2的mRNA的Ct值检测结果（检测方法参见实施例1）；
所述模型计算单元用于将获取的Ct值检测结果带入诊断模型（参见实施例2），计算诊断模型值；
所述诊断模块用于根据所述诊断模型值判断样本是否为肾癌样本，所述诊断模块的判断方法如下所示：
如果所述诊断模型值大于122，则所述诊断模块判断所述样本为非肾癌样本，否则，则判断所述样本为肾癌样本，其中，所述非肾癌样本选自正常人样本、肾脏良性占位病变样本或其他良性病变样本；
如果判定所述样本为肾癌样本，则进一步判断所述肾癌样本是否为早期肾癌样本：当所述诊断模型值为104~122，则所述诊断模块判断所述样本为早期肾癌样本；当所述诊断模型值小于104则结合影像学判断所述样本是否为中晚期肾癌。
在一些具体的实施方式中，所述诊断模块用于区分根据影像学无法区分的肾脏良性占位病变样本（例如，肾良性肿瘤、肾积水、肾结石或肾炎）和早期肾癌样本（例如，T1分期肾癌样本），如果诊断模型值大于122，则所述诊断模块判断所述样本为肾脏良性占位病变样本，否则，则判断所述样本为早期肾癌样本，（例如，T1分期肾癌样本）。
实施例4
实施例2所述模型中对应的每个基因外显子在外泌体中存在异质性，需要优化每个基因的检测片段，以获得最理想的模型分析结果。
本实施例针对VHL、PBRM1、ATM、PTEN和SETD2基因设计引物：其中VHL覆盖1-3号外显子；PBRM1覆盖1-3号、26-28号外显子；ATM覆盖1号、60-63号外显子；PTEN覆盖1-3号、8-9号外显子；SETD2覆盖1-3号、19-21号外显子。用10例血清样本(5例肾癌样本和5例肾囊肿样本)在荧光PCR仪器上检测这5个基因在外泌体中的Ct值（检测方法参见实施例1，具体检测结果参见图2~6）。
根据Ct值检测结果，从中优选适合实施例2所述诊断模型的外显子，其中外显子选择标准为：检测样本得到的Ct值更小，检测样本之间的Ct值差异更小，肾癌样本与肾囊肿样本之间检测的Ct值差异更大。
外显子的优选结果为：VHL基因序列的2号和3号外显子；PBRM1基因序列的2号、3号、26号和28号外显子；ATM基因序列的60-63号外显子；PTEN基因序列的1号、2号和8号外显子；SETD2基因序列的1号、20号和21号外显子。
实施例5 外显子优化
本实施例比较在同一系数体系下（实施例2所述模型取每个基因的最小系数），不同Ct值的基因外显子对模型的诊断结果的影响：
小Ct值模型组：VHL选择3号外显子、PBRM1选择3号外显子、ATM选择61号外显子、PTEN选择8号外显子、SETD2选择21号外显子。
大Ct值模型组：VHL选择2号外显子、PBRM1选择2号外显子、ATM选择60号外显子、PTEN选择2号外显子、SETD2选择1号外显子。
40例入组样本检测诊断模型值模型中的基因不同外显子的Ct值，根据入组样本的临床诊断结论，统计用同一系数模型中，每个基因不同外显子Ct值的ROC曲线（具体检测结果参见图7）。图7显示ROC曲线1的AUC值为0.865，ROC曲线2的AUC值为0.796，表明当模型中是Ct值较大的外显子组合时，诊断模型的有效性有明显降低，AUC低于选择Ct值较小的外显子组合，灵敏性和特异性均显著下降。选择Ct值更小的基因外显子作为模型中检测的片段效果更佳。
实施例6 系数优化
本实施例比较在相同外显子的情况下（实施例2所述模型，VHL选择3号外显子、PBRM1选择3号外显子、ATM选择61号外显子、PTEN选择8号外显子、SETD2选择21外显子），不同系数对模型的诊断结果的影响：
系数最小模型为诊断模型值=0.5×VHLCt＋0.2×PBRM1Ct＋10.5×ATMCt＋4.5×PTENCt＋0.8×SETD2Ct－28.6。
系数中位数模型为诊断模型值=1.7×VHLCt＋1.3×PBRM1Ct＋16.7×ATMCt＋6.3×PTENCt＋1.4×SETD2Ct－28.6。
系数最大模型为诊断模型值=3.0×VHLCt＋2.4×PBRM1Ct＋22.9×ATMCt＋8.2×PTENCt＋1.9×SETD2Ct－28.6。
40例入组样本检测诊断模型值模型中的基因Ct值，根据入组样本的临床诊断结论，统计用三种系数模型下得到的ROC曲线（参见图8）。图8显示ROC曲线1的AUC值为0.865，ROC曲线2的AUC值为0.808，ROC曲线3的AUC值为0.783，表明用最小系数模型得到AUC大于中位系数模型和最大系数模型，最小系数模型诊断效果优于使用中位系数或最大系数。
实施例7 提高影像学对肾占位的病理判断
91例影像学中无法确认是早期肾癌或者是肾囊肿的样本需要在病情进一步发展后再结合影像学和病理确定是否为肾癌样本。将91例样本检测诊断模型值(最小系数模型，每个基因所检测的外显子如表2所示)，并根据诊断模型值的结果对91例样本进行初步判断。并最终将肾占位的样本临床病理诊断进行对比，统计该方法是否有益于提前辅助判断样本的病理情况。具体的样本信息参见表3，ROC曲线参见图9。结果表明，当诊断模型值的cutoff为121.70时，该模型的灵敏性是79.0%，特异性是87.8%，AUC为0.896，能够很好地将早期肾癌患者和肾囊肿患者区分。
表2最小系数模型中每个基因检测的外显子用到的引物和探针序列
表3 样本信息
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
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<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 5
gctttgtatt tacagcagag gc 22
<210> 6
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 6
cgtttgcatt cttggtcat 19
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 7
tacattcttc ataccaggac c 21
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 8
tcattatctg cacgctctat 20
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 9
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<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 10
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<210> 11
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 11
ctggacatcg tcaggtcgct cta 23
<210> 12
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 12
cttgatgaaa atccaacaga aac 23
<210> 13
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 13
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<210> 14
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 14
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<210> 15
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 15
ctgtaagaat cctgaggacc t 21

Claims (10)

1.标志物组的检测试剂在制备肾癌诊断试剂和/或试剂盒中的应用，其特征在于，所述标志物组包括：
外泌体源性VHL基因的mRNA、外泌体源性PBRM1基因的mRNA、外泌体源性ATM基因的mRNA、外泌体源性PTEN基因的mRNA和外泌体源性SETD2基因的mRNA。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述VHL基因的mRNA选自第1号~3号外显子；所述PBRM1基因的mRNA选自第1~3号外显子或第26~28号外显子；所述ATM基因的mRNA选自第1号外显子、第60~63号外显子；所述PTEN基因的mRNA选自第1~3号外显子或第8~9号外显子，所述SETD2基因的mRNA选自第1~3号外显子或第19~21号外显子。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述VHL基因的mRNA为第3号外显子，所述PBRM1基因的mRNA为第3号外显子，所述ATM基因的mRNA为第61号外显子，所述PTEN基因的mRNA为第8号外显子，所述SETD2基因的mRNA为第21号外显子。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肾癌诊断试剂和/或试剂盒用于区分肾癌患者与非肾癌患者。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述肾癌为早期肾癌，所述早期肾癌不晚于临床T2期，所述非肾癌患者为正常人、肾脏良性占位病变或其他良性病变。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述外泌体源性VHL基因的mRNA、外泌体源性PBRM1基因的mRNA、外泌体源性ATM基因的mRNA、外泌体源性PTEN基因的mRNA和外泌体源性SETD2基因的mRNA获取自全血，血清或血浆。
7.根据权利要求1~6任一项所述的应用，其特征在于，所述检测试剂包括外泌体源性VHL基因的mRNA、外泌体源性PBRM1基因的mRNA、外泌体源性ATM基因的mRNA、外泌体源性PTEN基因的mRNA和外泌体源性SETD2基因的mRNA的定量PCR检测试剂，
以及以下试剂中的一种或多种：外泌体提取试剂、mRNA提取试剂和反转录试剂，所述定量PCR检测试剂包括扩增引物和标记有荧光基团和淬灭基团的检测探针，其中所述扩增引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1-10所示，所述检测探针的核苷酸序列分别如SEQ IDNO：11-15所示。
8.用于诊断肾癌的系统，其特征在于，所述系统包括计算模块和诊断模块；其中，所述计算模块包括Ct值获取单元和模型计算单元，所述Ct值获取单元用于获取权利要求1所述标志物组的Ct值检测结果，所述模型计算单元用于将获取的Ct值检测结果带入诊断模型，计算诊断模型值；所述诊断模块用于根据所述诊断模型值判断样本是否为肾癌样本；
所述诊断模型如下所示：诊断模型值=k1×VHLCt＋k2×PBRM1Ct＋k3×ATMCt＋k4×PTENCt＋k5×SETD2Ct－28.6；其中，k1取0.5-3.0，k2取0.2-2.4，k3取10.5-22.9，k4取4.5-8.2，k5取0.8-1.9，VHLCt、PBRM1Ct、ATMCt、PTENCt和SETD2Ct分别表示对应外泌体源性mRNA的Ct值检测结果。
9.根据权利要求8所述的系统，其特征在于，所述k1取0.5，k2取0.2，k3取10.5，k4取4.5，k5取0.8。
10.根据权利要求9所述的系统，其特征在于，所述诊断模块的判断方式如下所示：
如果所述诊断模型值大于122，则所述诊断模块判断所述样本为非肾癌样本，否则，则判断所述样本为肾癌样本，其中，所述非肾癌样本选自正常人样本、肾脏良性占位病变样本或其他良性病变样本；
如果判定所述样本为肾癌样本，则进一步判断所述肾癌样本是否为早期肾癌样本：当所述诊断模型值为104~122，则所述诊断模块判断所述样本为早期肾癌样本；当所述诊断模型值小于104则结合影像学判断所述样本是否为中晚期肾癌，所述中晚期肾癌不早于临床T3期。
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