CN109983310B - 自动化载玻片制备中试剂的评估和控制 - Google Patents

Abstract

本公开提供用于自动化控制自动化载玻片制备仪器中载玻片制备的各方面的方法。该方法的各方面包括自动化评估试剂量、质量和性能以及基于该评估而自动化调节试剂，包括调节试剂量例如试剂浴中存在的试剂量、调节试剂组成和替换试剂。本文中也提供可用于执行所描述的方法的装置和系统。

Description

自动化载玻片制备中试剂的评估和控制

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年10月25日提交的美国临时专利申请No.62/412,529的权益，所述美国临时专利申请通过引用整体并入本文。

背景技术

在制备的载玻片上对患者样本的组织学和血液学分析仍然是临床医学的基石。这样的过程，包括样本制备以及分析，正变得越来越自动化。自动化的组织学和血液学增加了样本通量，同时降低了观察者偏倚的发生率以及人类主观性对制备和分析过程的影响。

已经开发了自动化组织学和血液学载玻片制备系统，以操控从向载玻片施加样本到样本染色、甚至成像和分析的载玻片制备程序的所有步骤。这样的装置的通量增加以及整个过程自动化的巨大复杂性对所使用的试剂提出了严格的要求。在自动化组织学和/或血液学分析仪中产生一致的结果需要对包括固定、染色、洗涤等在内的各种步骤中使用的许多试剂进行精细的控制，以确保最佳染色和自动分析算法的正确功能。此外，快速检测试剂质量下降或填充不正确的试剂浴可限制或防止制备出不足以进行分析的载玻片，从而减少重新测试样品的需要。

发明内容

本公开提供用于在自动化载玻片制备仪器中自动化控制载玻片制备的方面的方法。所述方法的方面包括自动评估试剂量、质量和性能以及基于这样的评估自动化调节试剂，包括调节试剂量，例如，试剂浴中存在的试剂量，调节试剂组成以及试剂的替换。本文还提供用于执行所述方法的装置和系统。

本公开的方面包括一种评估浴中存在的液体体积的方法，所述方法包括：沿信号路径向检测器发射信号；将浮子定位在信号路径中、位于立式水平管内，所述立式水平管的一端与含有一定体积液体的浴连接；升高或降低液体的体积来升高或降低浮子以至少部分阻挡信号到达检测器；检测所述至少部分阻挡的信号；基于所检测的部分阻挡信号，评估存在于浴中的液体的体积。

在一些实施方式中，信号是光信号，信号路径是光路径，以及检测器是光检测器。在一些实施方式中，信号是声信号，信号路径是声路径，以及检测器是声检测器。在一些实施方式中，立式水平管包含孔，信号路径穿过所述孔。在一些实施方式中，所述孔是竖向狭缝。在一些实施方式中，评估包括测量所述至少部分阻挡的信号的幅度，其中所述幅度与浴中存在的液体体积线性相关。在一些实施方式中，方法还包括报告评估的结果。在一些实施方式中，浴是试剂浴，并且液体的体积包括载玻片制备试剂。在一些实施方式中，载玻片制备试剂是固定剂。在一些实施方式中，载玻片制备试剂是组织学染色剂。在一些实施方式中，载玻片制备试剂是洗涤剂溶液。

本公开的方面包括确定由载玻片托架保持的载玻片数量的自动化方法，所述方法包括：将由载玻片托架保持的一个或多个载玻片定位在发射器和检测器之间形成的信号路径中；测量当所述一个或多个载玻片在信号路径中时由检测器检测的信号；基于所述测量，确定载玻片托架保持的载玻片的数量。

在一些实施方式中，所述确定包括将测量信号与参考值进行比较。在一些实施方式中，参考值是基于发射器发射的信号的幅度。在一些实施方式中，参考值是预定的传输百分比值。在一些实施方式中，测量包括计算由发射器发射的、传输到检测器的信号的百分比。在一些实施方式中，路径经过浴。在一些实施方式中，该路径经过去往或离开被载玻片托架保持的所述一个或多个载玻片所占据的浴的路线。在一些实施方式中，由载玻片托架保持的所述一个或多个载玻片包括两个或更多个载玻片。在一些实施方式中，方法还包括基于所确定的由载玻片托架保持的载玻片数量来调节浴中存在的液体的体积。在一些实施方式中，调节包括增加浴中存在的液体的体积。在一些实施方式中，调节包括减少浴中存在的液体的体积。在一些实施方式中，调节液体的体积包括将浴中存在的液位升高或降低0.1mm至10mm之间。在一些实施方式中，调节液体的体积包括将浴中存在的液位升高或降低0.5mm至5mm之间。在一些实施方式中，浴是试剂浴，并且液体的体积包括载玻片制备试剂。在一些实施方式中，载玻片制备试剂是固定剂。在一些实施方式中，载玻片制备试剂是组织学染色剂。在一些实施方式中，载玻片制备试剂是洗涤剂溶液。

本公开的方面包括一种调节试剂浴中存在的液体体积的自动化方法，所述方法包括：评估试剂浴中存在的液体体积；确定由载玻片托架保持的载玻片数量；由所评估的液体体积和所确定的载玻片数量计算当所确定的载玻片数量插入试剂浴中时所预计的试剂浴的预测液位；将预测的液位与试剂浴的预定液位进行比较以鉴定调节量；根据调节量来调节试剂浴中存在的液体体积。

在一些实施方式中，调节包括增加试剂浴中存在的液体的体积。在一些实施方式中，调节包括减少试剂浴中存在的液体的体积。在一些实施方式中，确定载玻片托架所保持的载玻片的数量是在所述一个或多个载玻片去往试剂浴的途中的同时进行的。在一些实施方式中，确定载玻片托架所保持的载玻片的数量是当将所述一个或多个载玻片插入与试剂浴分开的初级浴中时进行的。在一些实施方式中，初级浴是固定浴。在一些实施方式中，初级浴是洗涤浴。在一些实施方式中，试剂浴是染色浴。在一些实施方式中，初级浴和试剂浴两个都是染色浴。

本公开的方面包括一种浴体积指示器，包括：发射器；与发射器相对地定位形成信号路径的检测器；以及立式水平管，其一端与浴连接，并包括在信号路径中位于发射器和检测器之间的浮子，其中浮子，当因浴内液体的体积而升高或降低时，至少部分阻挡沿所述路径发射的信号到达检测器。

在一些实施方式中，信号是光信号，信号路径是光路径，以及检测器是光检测器。在一些实施方式中，信号是声信号，信号路径是声路径，以及检测器是声检测器。在一些实施方式中，立式水平管包含孔，其中浮子，当因浴内的液体体积而升高或降低时，至少部分阻挡沿信号路径发射的信号通过孔并到达检测器。在一些实施方式中，孔是立式的狭缝。在一些实施方式中，所述体积指示器还包括与检测器通信的处理器，用于测量由检测器接收的信号的幅度并输出浴内的液体体积。在一些实施方式中，浴是染色浴。在一些实施方式中，浴是固定浴。在一些实施方式中，浴是洗涤浴。

本公开的方面包括一种自动化载玻片计数系统，包括：载玻片托架，包括多个狭槽，各自的尺寸适于保持载玻片；发射器-检测器对，包括由在载玻片托架中保持的载玻片中断的信号路径；与发射器-检测器对中的检测器通信的处理器，其具有指令，所述指令当被执行时导致所述处理器：测量当信号路径被载玻片中断时检测器接收到的信号的幅度；并基于所述测量，确定载玻片托架所保持的载玻片数量。

本公开的方面包括一种体积受控的载玻片染色系统，包括：自动化载玻片计数系统；和包括浴体积指示器的试剂浴；和阀，其中自动化载玻片计数系统的处理器还包括指令，所述指令当被执行时导致所述处理器触发阀，基于所确定的由载玻片托架保持的载玻片数量来调节存在于试剂浴中的液体体积。

在一些实施方式中，试剂浴是染色浴。在一些实施方式中，所述系统还包括与处理器通信的计算机存储器，所述存储器包含与所确定的由载玻片托架保持的载玻片数量相对应的体积调节库。在一些实施方式中，所述阀被触发以增加试剂浴中存在的液体体积。在一些实施方式中，所述阀被触发以减少试剂浴中存在的液体体积。在一些实施方式中，被载玻片托架中保持的载玻片中断的信号路径经过载玻片在输送到试剂浴期间所占据的路径。在一些实施方式中，所述系统还包括初级浴，载玻片托架将载玻片从初级浴输送到试剂浴。在一些实施方式中，被载玻片托架中保持的载玻片中断的信号路径经过初级浴。在一些实施方式中，初级浴是固定浴。在一些实施方式中，初级浴是洗涤浴。在一些实施方式中，初级浴和试剂浴两个都是染色浴。

本公开的方面包括一种评估染色剂的方法；所述方法包括：在所述染色剂中同时染色多个载玻片，其中所述多个载玻片包括至少一个样本载玻片和空白载玻片；使用样本载玻片成像装置获取染色的空白载玻片的数字彩色图像；处理所述数字彩色图像以产生包含至少一个染色剂参数值的背景染色剂特征；以及将背景染色剂特征与参考特征进行比较以评估所述染色剂。

在一些实施方式中，所述至少一个染色剂参数值包括总染色强度值。在一些实施方式中，所述处理包括将数字彩色图像分离成单独的颜色通道。在一些实施方式中，所述至少一个染色剂参数值包括红色染色强度值。在一些实施方式中，所述至少一个染色剂参数值包括绿色染色强度值。在一些实施方式中，所述至少一个染色剂参数值包括蓝色染色强度值。在一些实施方式中，所述获取包括获取染色的空白载片的不同区域的多个数字彩色图像，并且所述处理包括处理所述多个数字彩色图像以产生包括所述多个图像中每一者的至少一个染色剂参数值的背景染色剂特征。在一些实施方式中，所述多个图像中每一者的所述至少一个染色剂参数值包括总染色强度值。在一些实施方式中，染色剂参数值包括总染色均匀度值。在一些实施方式中，所述处理包括将所述多个图像中的每一者分离成单独的颜色通道。在一些实施方式中，所述多个图像中每一者的所述至少一个染色剂参数值包括红色染色强度值。在一些实施方式中，染色剂参数值包括红色染色均匀度值。在一些实施方式中，所述多个图像中每一者的所述至少一个染色剂参数值包括绿色染色强度值。在一些实施方式中，染色剂参数值包括绿色染色均匀度值。在一些实施方式中，所述多个图像中每一者的所述至少一个染色剂参数值包括蓝色染色强度值。在一些实施方式中，染色剂参数值包括蓝色染色均匀度值。在一些实施方式中，染色的空白载玻片的不同区域是相邻区域。在一些实施方式中，染色的空白载玻片的不同区域是不相邻的区域。在一些实施方式中，染色的空白载玻片的不同区域在沿着载玻片中间的路径中。在一些实施方式中，染色的空白载玻片包括长轴和短轴。在一些实施方式中，染色的空白载玻片的不同区域在沿着载玻片长轴的路径中。在一些实施方式中，染色的空白载玻片的不同区域在沿着载玻片短轴的路径中。在一些实施方式中，染色的空白载玻片的不同区域包括沿着短轴的路径和沿着长轴的路径。在一些实施方式中，参考特征是基于使用样本载玻片成像装置获取的未染色载玻片的数字图像。在一些实施方式中，参考特征是基于使用样本载玻片成像装置获取的用已知质量的染色剂染色的空白载玻片的数字图像。在一些实施方式中，所述方法评估染色剂的质量。在一些实施方式中，所述方法还包括输出关于染色剂质量是否超过预定阈值的结果。在一些实施方式中，所述方法评估染色剂中是否存在碎片。在一些实施方式中，所述方法评估所述染色剂是否产生条纹。

本公开的方面包括一种控制染色剂质量的方法，所述方法包括：评估染色剂的质量；输出关于染色剂质量是否超过预定阈值的结果；以及基于所述结果触发染色剂的调节。

在一些实施方式中，所述调节包括增加染色浴中存在的染色剂的量。在一些实施方式中，所述调节包括用染色剂的一种或多种组分补充染色剂。在一些实施方式中，所述调节包括排空染色剂浴并替换染色剂。在一些实施方式中，所述排空和替换还包括洗涤染色剂浴。

本公开的方面包括一种用于评估染色剂的系统，所述系统包括：样本载玻片成像装置；存储参考特征的计算机存储器；与样本载玻片成像装置和计算机存储器通信的处理器，所述处理器具有指令，所述指令当被执行时导致所述处理器：从样本载玻片成像装置接收染色的空白载玻片的数字彩色图像；处理所述数字彩色图像以产生包含至少一个染色剂参数值的背景染色特征；从计算机存储器中检索参考特征；以及将背景染色特征与参考特征进行比较以评估染色剂。

在一些实施方式中，所述系统还包括与所述处理器通信的用户界面，其输出评估结果。在一些实施方式中，所述至少一个染色剂参数值包括总染色强度值。在一些实施方式中，所述处理器还包括指令，所述指令当被执行时导致所述处理器将数字彩色图像分离成单独的颜色通道。在一些实施方式中，所述至少一个染色剂参数值包括红色染色强度值。在一些实施方式中，所述至少一个染色剂参数值包括绿色染色强度值。在一些实施方式中，所述至少一个染色剂参数值包括蓝色染色强度值。在一些实施方式中，所述处理器还包括指令，所述指令当被执行时导致样本载玻片成像装置获取染色的空白载玻片不同区域的多个数字彩色图像。在一些实施方式中，所述处理器还包括指令，所述指令当被执行时导致所述处理器处理所述多个数字彩色图像以产生背景染色剂特征，所述背景染色剂特征包括所述多个图像中每一者的至少一个染色剂参数值。在一些实施方式中，所述多个图像中每一者的所述至少一个染色剂参数值包括总染色强度值。在一些实施方式中，染色剂参数值包括总染色均匀度值。在一些实施方式中，所述处理器还包括指令，所述指令当被执行时导致所述处理器将所述多个数字彩色图像中的每一个分离成单独的颜色通道。在一些实施方式中，所述多个图像中每一者的所述至少一个染色剂参数值包括红色染色强度值。在一些实施方式中，染色剂参数值包括红色染色均匀度值。在一些实施方式中，所述多个图像中每一者的所述至少一个染色剂参数值包括绿色染色强度值。在一些实施方式中，染色剂参数值包括绿色染色均匀度值。在一些实施方式中，所述多个图像中每一者的所述至少一个染色剂参数值包括蓝色染色强度值。在一些实施方式中，染色剂参数值包括蓝色染色均匀度值。在一些实施方式中，参考特征是基于使用样本载玻片成像装置获取的未染色载玻片的数字图像。在一些实施方式中，参考特征是基于使用样本载玻片成像装置获取的用已知质量的染色剂染色的空白载玻片的数字图像。在一些实施方式中，所述处理器还包括指令，所述指令当被执行时导致所述处理器将评估结果与储存在计算机存储器中的预定染色剂质量阈值进行比较，并输出关于染色剂质量是否超过预定染色剂质量阈值的结果。

本公开的方面包括一种用于控制染色剂质量的系统，所述系统包括：用于评估染色剂的系统；包含染色剂的染色浴；一个或多个与处理器通信的阀，其中所述处理器还包括指令，所述指令当被执行时触发所述一个或多个阀基于所述评估来调节染色剂。

在一些实施方式中，所述一个或多个阀包括与包含染色剂的贮存器连接的填充阀，其当被触发时增加染色浴中存在的染色剂的量。在一些实施方式中，所述一个或多个阀包括与包含染色剂的组分的贮存器连接的填充阀，其当被触发时向染色浴添加染色剂的组分。在一些实施方式中，所述一个或多个阀包括与包含洗涤液的贮存器连接的填充阀，其当被触发时向染色浴添加洗涤液。在一些实施方式中，所述一个或多个阀包括与染色浴连接的排出阀，其当被触发时，减少染色浴中存在的染色剂的量。

附图说明

图1描绘了根据本文所述方法的一个实施方式的组织学载玻片制备方法的示意图。

图2描绘了具有染色涂片的载玻片的示意图，标明了载玻片的各个部分并提供了示例性但非限制性的尺寸。

图3描绘了根据本公开一个实施方式的基于水平管的自动化体积指示器系统的示意图。

图4示出了根据本公开一个实施方式的基于水平管的自动化体积指示器系统中的检测器振幅输出和浮子位置之间的线性相关性。

图5描绘了根据本公开的实施方式的载玻片、存在于载玻片托架中的多个载玻片、以及插入试剂浴中的含有多个载玻片的载玻片托架。

图6提供了根据本公开的一个实施方式，相对于存在于载玻片托架中的多个载玻片，由发射器-检测器对限定的信号路径的定位以用于自动化玻片计数的示意图。

图7提供了钠钙玻璃的典型透射光谱。

图8描绘了随着光路径中载玻片数量的增加，光信号的透射逐步减小。

图9提供了根据本公开一个实施方式的组合了自动化体积指示器和自动化载玻片计数器系统的集成系统的示意图。

图10提供了可用于如本文所述的自动化液位评估和调节的实施方式中的逻辑图。

图11提供了显示根据本公开的一个实施方式从空白染色载玻片获得的相对于染色剂质量的计算参数的直方图的例子。

图12提供了显示根据本公开的一个实施方式从空白染色载玻片获得的相对于染色剂质量的计算参数的直方图的另一个例子。

图13提供了显示根据本公开的一个实施方式从空白染色载玻片获得的相对于染色剂质量的计算参数的直方图的另一个例子。

图14提供了显示根据本公开的一个实施方式从未染色的空白载玻片获得的相对于染色剂质量的计算参数的直方图的例子。

图15示出了如本文所述，背景染色对细胞图像、直方图和计算的图像参数的影响。

图16描绘了含有染色涂片的载玻片的长轴和短轴。

图17描绘了沿着图16中描绘的载玻片的长轴获得的图像的拼接蒙太奇图。

图18描绘了沿着图16中描绘的载玻片的短轴获得的图像的拼接蒙太奇图。

图19描绘了根据本公开的一个实施方案使用染色的空白载玻片的强度分布图来检测染色中的局部缺陷。

定义

术语“评估”包括任何形式的测量，并且包括确定元素是否存在。术语“确定”、“测量”、“评价”、“评估”和“测定”可互换使用，包括定量和定性确定。评估可以是相对的或绝对的。“评估...的身份”包括确定特定化合物或制剂或物质的最可能的身份，和/或确定预测的化合物或制剂或物质是否存在。“评估...质量”包括对质量进行定性或定量评估，例如，通过将测定值与已知质量的参考或标准进行比较。

术语“组织学”和“组织学的”用于本文时通常是指从多细胞生物体获得的细胞的细胞解剖学和/或形态学的微观分析，所述多细胞生物体包括但不限于植物和动物。因此，“组织学染色剂”是指用于分析细胞解剖学和/或形态学的染色剂，“组织学分析仪”是指分析从多细胞动物获得的细胞的解剖学和/或形态学的仪器。用于本文时，组织学分析仪将通常是指使用一种或多种组织学染色剂进行组织学评估的仪器。组织学分析仪可以用来或者也可以不用来制备用于组织学分析的载玻片，包括这样的过程可能需要或可能不需要在制备期间由用户手动输入的情况(即，这样的装置在一些情况下可以是自动化的)。

术语“体液”用于本文中时通常是指源自于“生物样品”的流体，其包括从个体或个体群体获得的多种样品类型，并可用于诊断、监测或筛查测定。所述定义包括生物来源的血液和其它液体样品。所述定义还包括在获得后已经以任何方式操作过的样品，例如通过混合或汇集单个样品、用试剂处理、溶解、或富集某些组分例如有核细胞、非有核细胞、病原体等。

术语“生物样品”包括临床样品，并且还包括培养细胞、细胞上清液、细胞裂解物、血清、血浆、生物体液、和组织样品。术语“生物样品”包括尿液、唾液、脑脊液、间质液、眼液、滑液、血液级分例如血浆和血清等。

术语“对照”、“对照测定”、“对照样品”等是指实验或诊断程序或实验设计的样品、测试或其它部分，对其的预期结果是以高确定性已知的，例如，为了表明从相关实验样品获得的结果是否可靠、表明相关实验结果达到何种置信度才能指示真实的结果、和/或为了允许校准实验结果。例如，在一些情况下，对照可以是“阴性对照”测定，使得所述测定的主要组分被排除，使得实验者可以高度确定阴性对照测定不会产生阳性结果。在一些情况下，对照可以是“阳性对照”，使得特定测定的所有组分当组合时被表征和已知，以在正进行的测定中产生特定结果，使得实验者可以高度确定阳性对照测定不会产生阳性结果。对照也可以包括“空白”样品、“标准”样品(例如，“金标准”样品)、验证样品等。

术语“输入”，用在本文中时，用于指示信息进入计算机的任何方式，例如通过使用用户界面。例如，在某些情况下，输入可以涉及选择计算机系统上已经存在的参考光谱或光谱特性或其库。在其它情况下，输入可以涉及例如，通过测量能够与计算机连接的装置上的样品的光谱，为计算机系统添加光谱或光谱特性。输入也可以使用用户界面完成。

“处理器”或“数据处理单元”，用于本文中时，是指将执行对其所要求的功能的任何硬件和/或软件组合。例如，本文中的任何数据处理单元可以是可编程的数字微处理器，例如以电子控制器、主机、服务器或个人计算机(台式或便携式)的形式可用。在数据处理单元是可编程的情况下，合适的编程可以从远程位置传达到数据处理单元，或者先前保存在计算机程序产品中(例如便携式或固定计算机可读存储介质，无论是基于磁性、光学还是固态装置的)。

用于本文中时，术语“执行”用于指示用户启动程序所采取的动作。

详细描述

本公开提供了用于在自动化载玻片制备仪器中自动化控制载玻片制备的方面的方法。所述方法的方面包括自动评估试剂量、质量和性能以及基于这样的评估自动化调节试剂，包括调节试剂量，例如，试剂浴中存在的试剂量，调节试剂组成以及试剂的替换。本文还提供了用于执行所述方法的装置和系统。

在更详细地描述本发明之前，应理解本发明不限于所描述的特定实施方式，因此当然可以变化。还应理解，本文中使用的术语只是为了描述特定实施方式的目的，而不打算是限制性的，因为本发明的范围将仅受所附权利要求的限制。

在提供值的范围的情况下，应理解，在该范围的上限和下限之间的每个居间值，除非上下文另有明确规定否则至下限的单位的十分之一，以及在所陈述范围内的任何其它陈述值或居间值，均包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在更小的小范围中，并且也包括在本发明内，服从所陈述范围内任何具体排除的限制。在所陈述的范围包括一个或两个极限的情况下，不包括那些包括的极限之一或两者的范围也包括在本发明中。

某些范围在本文中给出的数值前面有术语“约”。术语“约”在本文中用于为它前面的确切数字、以及接近或近似该术语前面的数字提供文字支持。在确定数字是否接近或近似具体列举的数字时，接近或近似的未列举数字可以是在其呈现的上下文中提供具体列举的数字的基本等值的数字。

除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语所具有的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同。虽然与本文所描述的类似或等同的任何方法和材料也可以用于本发明的实践或测试，但现在描述的是代表性的说明性方法和材料。

本说明书中援引的所有出版物和专利均通过引用并入本文如同每个单个出版物或专利被专门地和个别地指出通过引用并入本文那样，并通过引用并入本文以公开和描述与所援引的出版物相关的方法和/或材料。援引的任何出版物是为了它在提交日之前的公开内容，并且不应被解释为承认本发明无权借助于在先发明而先于这样的出版物。此外，提供的出版日期可能不同于实际出版日期，实际出版日期可能需要独立地确认。

应注意，用于本文和所附权利要求中时，没有数量指示的单数形式包括复数指示物，除非上下文另有明确规定。还要注意，权利要求可以起草成排除任何任选的元素。因此，该声明旨在充当与权利要求元素的叙述或使用“否定”限制相关使用排他性术语例如“单独”、“仅”等的前提基础。

正如本领域技术人员在阅读本公开内容后将显而易见的，本文中描述和说明的各个实施方式各自具有分立的组分和特征，其可以在不背离本发明的范围或精神下容易地与任何其它若干实施方式的特征分离或组合。任何列举的方法可以按照所列举的事件的顺序或按照逻辑上可能的任何其它顺序进行。

方法

如上所述，本公开提供了用于在自动化载玻片制备仪器、包括例如自动化载玻片涂片和染色仪器中自动化评估和控制载玻片制备的方面的方法。所述方法的方面包括自动化评估试剂量。在一些情况下，所述方法的方面还包括试剂质量和/或性能的评估。在一些情况下，所述方法可包括基于评估自动化调节试剂，包括例如，其中基于评估调节试剂的量、其中基于评估调节试剂的组成、其中评估结果替换试剂，等。

本公开的方法通常将是在自动化载玻片制备仪器的背景下进行的自动化方法，其包括对载玻片涂片和/或染色以进行分析的自动化过程。可以利用所述方法的自动化载玻片制备仪器将是多样的，并且可以包括例如自动化组织学载玻片制备装置、自动化血液学载玻片制备装置、联合组织学载玻片制备和分析装置、联合血液学载玻片制备和分析装置等。

本公开的方法可以提供对载玻片制备过程的各个点的自动化控制。例如，在一些情况下，本公开的方法可以包括评估自动化载玻片染色设备中存在的试剂、包括例如染色浴的量。本方法的其它评估可包括评价自动化载玻片染色设备中特定试剂的性能，包括例如自动化载玻片染色方法中载玻片染色剂的性能。如上所述，本方法还可以包括基于这样的评估调节试剂，包括例如调节自动化载玻片染色设备内特定容器中存在的试剂的体积、调节自动化载玻片染色设备内所用的特定试剂的组成。如下面更详细描述的，这样的调节将变化很大，并且可以范围从轻微调节，例如试剂的体积或试剂组成，到大调节，包括例如替换试剂。

图1中描绘了典型的载玻片制备组织学染色方案的例子。通常在组织学染色方案中，载玻片可以连续地立式插入多个试剂浴中。这样的试剂浴可包括一个或多个用于固定附着于载玻片的细胞/组织的试剂浴(例如，如图1中描绘为“甲醇”浴)、一个或多个用于染色的试剂浴(例如，如图1描绘为“对比度”染色剂浴)、一个或多个试剂浴用于活化染色剂组分的试剂浴(例如，如图1中描绘为“激活鉴别染色剂”的“缓冲液”浴)、一个或多个用于洗涤的试剂浴(例如，如图1中描绘为使用去离子水洗涤并完成染色的“DI水”浴)。在一些情况下，可以省略一个或多个载玻片制备步骤和/或可以使用额外的浴。在载玻片制备之后，通常在成像之前干燥染色的载玻片，其中这样的干燥过程可以被动地(例如，采用被动蒸发)或主动地(例如，采用通过在载玻片上空气移动的对流)进行。在一些情况下，载玻片制备还可以其它步骤(例如，上游或下游步骤)，包括，例如，将样本施加到载玻片上、将样本在载玻片上涂片、使载玻片与一种或多种特异性结合成员(例如抗体、寡核苷酸探针等)接触、标记(例如，标记所述特异性结合成员，如果没有预先标记的话)、后固定等。载玻片制备方法可用于各种样本，包括但不限于，例如，生物样品生物样品、体液等的那些样本。

如上所述，本公开的方法可在评估和控制载玻片制备方案中利用的试剂方面得到应用，包括利用一个或多个试剂浴温育步骤的组织学染色方案。主题方法至少部分地用于评估试剂浴中存在的试剂量、确定需要调节试剂量、鉴定需要试剂调节的类型和量值、评估试剂的质量等。

评估试剂量

在一些情况下，本公开的方法可以包括对用于载玻片制备的自动化设备的特定容器中存在的试剂的量进行评估。为了简单和清楚起见，下面将在用于组织学或血液学分析的组织学或血液学载玻片染色的背景下描述用于评估试剂量的方法；然而，普通技术人员将容易理解，所述方法不限于此并且可以在希望评估存在于容器、例如或类似于染色浴中的试剂量的各种其它背景中得到应用。

在组织学或血液学染色的过程中，首先将样品或样本，例如，从对象收集的，施加到载玻片上，并且样品或样本可以覆盖载玻片的样本区域的很大一部分，即大部分，或者可以铺展或涂抹以覆盖载玻片的样本区域的很大一部分。存在于典型载玻片上的血液涂片的例子在图2中示意。图2中描绘的载玻片具有样本信息区域(200)和包括涂片(202)的样本区域(201)。样本信息区域可以包括关于样本的各种细节，包括，例如，取得样本的患者的身份证明、样本跟踪信息例如条形码、化验信息等。描绘了涂片(202)的示例性尺寸，普通技术人员将理解该尺寸可以变化。还描绘了期望的液位(203)，其表示载玻片可以立式插入其中以用于各种目的包括例如固定、染色、洗涤、去染色等的任何试剂浴的期望水平。

本公开提供了用于维持试剂浴中液位使得整个样本或其涂片浸入液体中但是载玻片的样本信息区域没有浸入液体中的方法。样本完全浸入试剂浴的液体中可以使得在液体含有固定试剂时完全固定整个样本。样本完全浸入试剂浴的液体中可以使得在液体含有染色试剂时完全染色整个样本。样本完全浸入试剂浴的液体中可以使得在液体含有洗涤试剂时完全洗涤整个样本。不将样本信息区域浸入试剂浴中可以防止试剂浴液体中存在的一种或多种试剂使存在于该区域中的信息模糊不清。例如，用于制备组织学样本的许多有机溶剂(例如乙醇、甲醇、异丙醇等)容易溶解普通油墨和/或粘合剂，因此可以避免它们与样本信息区域的接触。

从图2的示意图中可以看出，常用的样本载玻片可以提供的试剂浴液位的变化裕度比较小，其中超出该变化裕度的比较小的偏差就可能导致液体接触样本信息区域或覆盖样本不充分。在一些情况下，本文所述的方法可以评估浴的液位，使得以±5.0mm或更低的精确度确定所评估的液位，所述精确度包括但不限于例如，±5.0mm，±4.5mm或更低，±4.0mm或更低，±3.5mm或更低，±3.0mm或更低，±2.5mm或更低，±2.0mm或更低，±1.5mm或更低，±1.0mm或更低，±0.5mm或更低，等。在一些情况下，液位评估的精确度可以基于一个或多个载玻片的体积排代。例如，准确度可以大于或等于与一个载玻片的排代相关联的液位变化，其中，例如，与一个载玻片相关联的液位变化可以取决于浴的可能构造而异。在一些情况下，浴槽可以构造成使得与一个载玻片相关的液位变化范围从小于0.1mm至5mm或更大，包括但不限于例如，0.1mm至5mm，0.1mm至4mm，0.1mm至3mm，0.1mm至2mm，0.1mm至1mm，0.1mm至0.5mm，0.5mm至1mm，0.5mm，等。

在一些情况下，本文所述的方法可以控制浴的液位，使得液位与预定或期望的液位的偏差不大于约±5.0mm，包括但不限于例如不，大于±5.0mm，不大于±4.5mm，不大于±4.0mm，不大于±3.5mm，不大于±3.0mm，不大于±2.5mm，不大于±2.0mm，不大于±1.5mm，不大于±1.0mm，不大于±0.5mm，等。

用于本文中时，术语“试剂浴”通常是指含有液体的容器，其用于任何载玻片制备过程，包括但不限于例如，在任何染色方案，包括例如组织学染色方案、血液学染色方案、免疫染色方案、DNA/RNA杂交方案等中载玻片可能受到的固定、温育、封闭、染色、杂交、洗涤、去染色、剥色、后固定、标记等。因此，试剂浴的尺寸和构造将变化很大。

通常用于试剂浴中的液体的体积，也称为“填充体积”或“操作体积”，将类似地取决于浴构造而变化，并且可以范围从小于10cc至450cc或更大，包括但不限于，例如，从10cc至450cc，从20cc至450cc，从30cc至450cc，从40cc至450cc，从50cc至450cc，从60cc至450cc，从70cc至450cc，从80cc至450cc，从90cc至450cc，从100cc至450cc，从110cc至450cc，从120cc至450cc，从130cc至450cc，从140cc至450cc，从150cc至450cc，从160cc至450cc，从170cc至450cc，从180cc至450cc，从190cc至450cc，从200cc至450cc，从210cc至450cc，从220cc至450cc，从230cc至450cc，从240cc至450cc，从250cc至450cc，从25cc至400cc，从25cc至350cc，从25cc至300cc，从25cc至250cc，从25cc至200cc，从25cc至150cc，从25cc至100cc，从25cc至50cc，从50cc至400cc，从50cc至350cc，从50cc至300cc，从50cc至250cc，从50cc至200cc，从50cc至150cc，从50cc至100cc，从10cc至200cc，从20cc至200cc，从30cc至200cc，从40cc至200cc，从50cc至200cc，从60cc至200cc，从70cc至200cc，从80cc至200cc，从90cc至200cc，从100cc至200cc，从110cc至200cc，从120cc至200cc，从130cc至200cc，从140cc至200cc，从150cc至200cc等。

试剂浴中的液位将极大地取决于浴的总体积，其中，例如，大体积的浴的液位响应于各种事件(例如，液体蒸发、一个或多个载玻片插入浴中、向浴中添加/除去一定体积的液体等)时与受到相同或等效事件的小体积浴相比变化较小。可用于主题方法的浴的总体积的非限制性例子在下文提供。浴构造将变化很大，并基本上可以采用与其服务目的相容的任何形状，并且在一些情况下可以基本上是矩形的。在一些情况下，浴的构造或尺寸可以与插入浴中的载玻片或多个载玻片相容。

自动化载玻片制备装置可以利用在自动化载玻片制备期间准确评估和/或严格控制试剂浴中的液位的自动化方法。这样的装置包括但不限于例如，与自动化组织学分析仪相关联的载玻片制备装置，制备用于在自动化组织学分析仪中分析的载玻片的装置，与自动化血液学分析仪相关联的载玻片制备装置，制备用于在自动化血液学分析仪中分析的载玻片的装置，等。

本公开的方面包括试剂浴体积的评估。“试剂浴体积的评估”通常是指确定试剂浴中存在的液体体积是否使得当浴中存在载玻片时，浴的液位处于期望或预定的水平或者在期望或预定的范围内。本公开的评估可以或可以不定量浴中存在的液体的实际体积，并且在一些情况下可以确定浴中存在的液体的相对体积，使得可以评估浴的液位或评估浴的液位变化。取决于传感器和检测器的特定环境和/或构造，可以载玻片插入浴中或从浴中取出之前或之后进行评估。在一些情况下，进行试剂浴体积和/或液位的评估，并进一步分析所述评估以确定是否需要调节，这样的调节在下面更详细地描述。在一些情况下，在载玻片插入浴中之前进行评估，并进行任何必要的调节，使得当插入载玻片时，浴的液位达到预定或期望的水平。

在一些情况下，可以通过使用与浴连接的水平管来评估试剂浴体积。用于本文中时，“水平管”通常是指一种包括开口管的测量装置，所述开口管被构造成测量由浴的流体体积变化转换为水平管内液位变化所产生的液体力的变化。在本方法中，水平管通常与试剂浴连接，使得浴内液体体积的变化改变水平管内液位的变化。水平管可以与试剂浴的任何部分连接并且可以是使得水平管的开口端低于试剂浴的液位并且液体体积变化导致水平管内液位的可测量变化的任何构造。水平管可以连接到试剂浴的底部、试剂浴的侧面等。水平管可以或可以不与水平管和浴之间的中间连接器例如管或贮存器连接。

本方法的方面可以包括在水平管内或与水平管连接的浮子，其将水平管内的液位变化转化为浮子的移动。在一些情况下，浮子可以在水平管内。任何方便的材料都可以用于浮子，只要它在试剂浴中使用的液体或液体范围内是有浮力的即可。在一些情况下，浮子可以由耐受试剂浴中使用的一种或多种试剂包括例如醇、例如但不限于例如甲醇、乙醇等的材料制成。在一些情况下，可以构造和/或校准水平管和浮子，使得在浴的特定流体体积下，浮子出现在水平管中或水平管上的水平指示试剂浴中存在的液体的预定体积。在一些情况下，可以构造和/或校准水平管、浮子和试剂，使得在浴的特定流体体积下，浮子出现在水平管中或水平管上的水平指示浴的液位在预定水平处。浮子的水平可以用任何方便的方式确定，包括但不限于例如目视或通过使用一种或多种检测器。

根据本文描述的自动化实施方式，在一些情况下，可以使用信号发射器和信号检测器，在本文中也称为发射器-检测器对，来确定浮子的水平。在一些情况下，用于检测浮子水平的发射器-检测器对可以是光发射器-检测器对，包括例如光发射器和光检测器。在一些情况下，用于检测浮子水平的发射器-检测器对可以是声发射器-检测器对，包括例如声发射器和声检测器。此外，为简单起见，将主要根据光发射器-检测器对和光路径来描述发射器-检测器对和相应的信号路径。然而，本公开不限于此，因为各种其它发射器检测器对(例如，声检测器对)可以容易地构造以供使用并酌情用于主题方法中。普通技术人员将容易理解，其中，例如，限定声路径的声发射器-检测器对(例如，声发射器与适当的声检测器耦合)可以取代所描述的限定光路径的光发射器-检测器对，并且这样的技术人员还将了解为了这样的取代可以重新构造方法和装置的方式。

在本方法中，发射器和检测器彼此相对的放置通常将限定信号路径(例如，光路径、声路径等)。然而，信号路径可以不限于发射器与其相应的传感器/检测器之间的线性路径。例如，关于光路径，可以采用各种修改光路径的机构，包括但不限于例如镜子、透镜等。在不使用任何将光路径重定向或转向的机构的情况下，彼此相对的发射器和检测器之间的光路径可以被穿过或插入发射器和检测器之间的路径的一个或多个物体中断。路径中的中断可以是完全的，即，其中由于路径中存在物体而没有来自发射器的信号到达检测器，或者中断可以是部分的，即，其中路径中的物体仅部分阻挡信号，使得来自发射器的至少一部分信号仍然被检测器接收。

在发射器检测器对中使用的检测器可能能够对信号被部分中断的程度进行积分，使得接收的光信号转化成与中断程度相关的电信号。信号中断可以变化，例如，取决于放置在光路径中的物体是不透明的还是半透明的。例如，在一些情况下，由于存在不透明物体而导致的信号中断可以指示被物体阻挡的信号实体区域的量，例如，一束光被不透明物体部分阻挡的情况就是这样。在一些情况下，由于存在一个或多个半透明物体而导致的信号中断可以指示所述一个或多个半透明物体的性质，包括例如物体的厚度或路径中物体的数量等。作为这样的部分阻挡信号，用于本文中时，可以是指其中只有一部分光路径被不透明物体阻挡的信号、其中整个光路被半透明物体阻挡的信号、其中只有一部分光路径被半透明物体阻挡的信号等。因此，取决于上下文，信号强度或幅度或透射率的检测可以类似地是指这样的部分阻挡的光信号。

在一些情况下，本公开的方法包括定位含有浮子的水平管，使得浮子在发射器-检测器对的光路径内。因此，水平管所连接的试剂浴中存在的液体体积的变化被转换成浮子在光路径中的位置的变化。浮子在光路径中的位置变化进而导致浮子阻挡的光信号量的变化。在一些情况下，光路径可以定位成穿过一个或多个孔，例如，在与干扰物体例如浮子相互作用之前或之后，或者之前和之后。例如，在一些情况下，从发射器产生的信号在到达检测器之前通过含有浮子的水平管并然后穿过孔。在一些情况下，从发射器产生的信号在通过含有浮子的水平管之前穿过孔，然后到达检测器。在一些情况下，从发射器产生的信号在通过含有浮子的水平管之前穿过第一孔，然后在到达检测器之前穿过第二孔。光路径可以从中穿过的孔可以在水平管上，或者可以与水平管分开并在装置的另一个组件上。因此，这样的方法中使用的孔可以按各种构造安排。有用的孔包括具有限定形状和尺寸的孔，包括但不限于例如狭缝孔、圆形孔等。

现在转到图3中描绘的实施方式。水平管(300)与试剂浴(301)连接，使得来自浴的液体(也称为“流体”)流入管中。因试剂浴中液体体积的变化而升高和降低的管中的流体，使位于水平管内的浮子(302)升高和降低。信号发射器(303)发射光信号“光束”(304)，其被引导穿过狭缝孔(305)朝向光学检测器(306)。当连接水平管和试剂浴的开口处的液体力增加、例如通过向试剂浴中添加液体时，浮子上升阻挡更多的光束，防止它穿过孔并到达检测器。检测器由此可以检测和/或定量浴中流体体积的增加。当连接水平管和试剂浴的开口处的液体力减少、例如通过从试剂浴中去除液体时，浮子下降阻挡较少的光束，允许更多的光束穿过孔并到达检测器。检测器由此可以检测和/或定量浴中流体体积的减少。

在一些情况下，检测器检测到的光信号可以与试剂浴中的液位线性相关。光信号的阻挡和浴中的液位之间的线性相关性可以用多种方式实现。在一些情况下，孔可以用来校准系统，使得浴中的液位与检测器检测到的信号量线性相关。例如，在一些情况下，水平管上存在的竖向狭缝孔与发射器-检测器对相关地构造，使得检测器接收的信号量与浴中的液位之间存在线性相关性。在这样的情况下，可以测定浮子的位置在已知的浴液位来校准系统。在一些情况下，线性相关的液位检测系统中浮子的移动可以允许定量评估浴的体积变化、浴的液位变化等，使得由检测器检测到的信号幅度的测量变化可以转换为测量的体积变化、测量的液位变化等。

例如，在图4中描绘了描绘线性相关的检测器输出对比浮子位置的图，例如，如从例如图3中描绘的液位指示器报告的浮子位置。如图4所描绘，在每个渐进的浮子位置(即“1”、“2”和“3”)处，阻挡了更多的通往检测器的信号。随着每个浮子位置处阻挡的信号越多，检测器幅度减小。因此，检测器幅度随浮子的位置线性变化(见图4中的趋势线)。

液位评估、例如根据本文所述的方法进行的液位评估的结果可以报告。例如，在一些情况下，方法可以包括当液位评估结果指示特定条件，例如液位处于预定水平、液位低于预定水平、液位高于预定水平、液位超出预定范围等时，触发指示器。液体体积或液位评估的报告可以用各种形式传送。例如，在一些情况下，报告可以例如通过指示评估结果的指示灯、警报器或其它用户界面(例如，监视器)传达给用户。

在一些情况下，报告可以电传达给自动化试剂控制系统的另一个方面。例如，在一些情况下，报告评估结果的检测器可以与系统的处理器连接或以其它方式与系统的处理器通信，使得报告被发送到处理器并由处理器处理。在一些情况下，在接收到报告时，处理器可以触发系统的一些其它动作，包括例如本文所述的试剂调节中的一种或多种。

本公开的方法的方面可以包括进行同时处理的载玻片数量的自动化计数。自动化载玻片计数可以单独进行或者与本文所述的任何其它一起进行，所述其它包括任何其它本文所述的评估，例如试剂浴体积的评估。

如图1所描绘，载玻片制备方法通常包括将至少一个载玻片插入一个或多个试剂浴中，之后可以将所述至少一个载玻片在试剂浴中温育一定量的时间。由于载玻片具有一定的体积，将载玻片插入试剂浴可对浴的液位有影响。在使用大的浴体积或任一时间插入浴中的载玻片很少的情况下，由于载玻片排代引起的这种液位变化可能不显著。然而，在浴的体积保持低的情况下(例如，为了最小化所用试剂的量)，载玻片的排代可显著影响浴的液位，例如，升高液体超过期望的水平和/或升高液体使其接触载玻片的样本信息区域。相应地，在同时处理多个载玻片的情况下，载玻片的排代可显著影响浴的液位，例如，升高液体超过期望水平和/或升高液体使其接触载玻片的样本信息区域。

在一些情况下，可能希望确定将在自动化仪器中同时制备或处理的载玻片的数量并相应地调节浴的液位，以便在将载玻片插入浴中时，液位达到但不超过期望或预定的水平。在一些情况下，检测同时制备或处理的载玻片的数量可以在自动化仪器中进行，其中每批同时制备或处理的载玻片的数量是可变的。例如，在一些情况下，每批同时制备或处理的载玻片的数量，无论是固定的还是可变的，可以从一个载玻片到20个载玻片或更多不等，包括但不限于例如，1个载玻片，1个载玻片或更多，2个载玻片或更多，3个载玻片或更多，4个载玻片或更多，5个载玻片或更多，6个载玻片或更多，7个载玻片或更多，8个载玻片或更多，9个载玻片或更多，10个载玻片或更多，11个载玻片或更多，12个载玻片或更多，13个载玻片或更多，14个载玻片或更多，15个载玻片或更多，16个载玻片或更多，17个载玻片或更多，18个载玻片或更多，19个载玻片或更多，20个载玻片或更多，2个载玻片，3个载玻片，4个载玻片，5个载玻片，6个载玻片，7个载玻片，8个载玻片，9个载玻片，10个载玻片，等。

在一些情况下，可以批量同时处理的载玻片的范围可以由载玻片托架装置的容量决定。这样的装置通常将包括一个或多个狭槽或接触点，其能够在输送通过自动化载玻片制备装置的一个或多个区域期间保持载玻片。例如，在一些情况下，载玻片托架可包括多个狭槽，其尺寸适于接收和保持载玻片，其中，例如，感兴趣的载玻片尺寸包括但不限于例如本文所述的那些。在一些情况下，载玻片托架可以在两个或多个试剂浴之间输送载玻片和/或输送载玻片进出其它站，包括但不限于例如样本施加站、样本涂抹站、干燥站、成像站等。在一些情况下，单个载玻片托架可以用于自动化装置中，或者可以使用多个载玻片托架。

现在转到图5中描绘的实施方式。载玻片(500)或多个这样的载玻片可以包含在载玻片托架(502)的狭槽(501)中，使得载玻片悬挂或保持垂直方向。然后可以将载玻片托架(502)插入试剂浴(503)中。载玻片托架保持的载玻片的数量可以在载玻片插入试剂浴之前、期间或之后的任何时点评估。

例如，在一些情况下，发射器-检测器对可以定位成使得载玻片插过或穿过由发射器-检测器对形成的光路径。取决于发射器-检测器对的定位，载玻片可以在输送进出试剂浴之前、期间或之后的任何点穿过由发射器-检测器对形成的光路径。在一些情况下，载玻片将在去往试剂浴的途中穿过光路径。在一些情况下，载玻片将在从试剂浴送出时穿过光路径。在一些情况下，载玻片将在插入试剂浴中时穿过光路径。

不管沿着载玻片的路径它们的位置如何，发射器-检测器对通常将被布置成使得当载玻片穿过或插入光路径时，光路径与载玻片的显微镜平面(即，施加样本的表面)正交。例如，如图6的实施方式所描绘，发射器(600)可以相对于检测器(601)定位，并且载玻片(602)保持在载玻片托架(603)中，使得光路径(604)基本上与载玻片的显微镜平面正交。光路径相对于载玻片的显微镜平面的角度不一定是完全正交的，并且可以例如，相对于真正的正交略微锐角，条件是该角度足以使发射器产生的信号在到达检测器之前穿过载玻片托架所保持的所有载玻片。

在一些情况下，发射器-检测器对被定位成使得光路径在试剂浴外部，例如，沿着载玻片进出试剂浴所占据的路径或在一些其它位置，例如，在开始制备过程之前保持载玻片的位置。在一些情况下，发射器-检测器对被定位成使得光路径穿过试剂浴。穿过试剂浴的光路径可以用各种方式实现，包括例如，通过将发射器和检测器中的一方或双方放置在浴的外部并以一种或多种方式使信号通过浴，所述方式包括例如，通过使用光学透明或半透明的浴，通过使用浴壁中的一个或多个孔来允许信号通过载玻片等。在一些情况下，发射器-检测器对可以定位在浴内。

在主题方法中，所采用的载玻片通常对光通过载玻片的透射具有至少一些抵抗。因此，在一些情况下，载玻片可以称为半透明或半透的，其中在此术语“半透明”通常是指材料或物体的半透特性，其至少部分阻止一些光穿过所述材料或物体。载玻片在染色之前可以是半透明的并在染色后可以保持半透明或可以降低透明度，其中透明度降低通常是指光通过载玻片的透射率的降低。

本公开的方法可以在评估载玻片托架中保持的或者插入或待插入试剂浴中的载玻片数量的方法中利用载玻片的半透明性(即，缺乏完全透射)。载玻片的半透明度可以取决于各种因素、包括构成载玻片的材料、载玻片的厚度、测量半透明度的波长等而变化。例如，在图7中，提供了对于2mm厚的钠钙玻璃载玻片的透射光谱，即在各种波长下的透射百分比。从图7的图中可以看出，基本上所有可见光谱波长下的透射百分比均小于100％。因此，使用光学发射器检测器对在例如1000nm下测量半透明度或透射百分比，2mm钠钙玻璃载玻片预计将表现出由检测器接收的信号幅度与发射的幅度相比下降约20％。

用于评估存在的载玻片数量的有用波长将取决于各种参数、包括例如构成载玻片的材料而变化，并且这样的波长可以范围从小于100nm至1mm或更长，包括但不限于例如，从100nm至1mm，从200nm至1mm，从300nm至1mm，从400nm至1mm，从500nm至1mm，从600nm至1mm，从700nm至1mm，从800nm至1mm，从900nm至1mm，从1000nm至1mm，从1100nm至1mm，从1200nm至1mm，从1300nm至1mm，从1400nm至1mm，从1500nm至1mm，从1600nm至1mm，从1700nm至1mm，从1800nm至1mm，从1900nm至1mm，从2000nm至1mm，从2100nm至1mm，从2200nm至1mm，从2300nm至1mm，从2400nm至1mm，从2500nm至1mm，从100nm至0.1mm，从200nm至0.1mm，从300nm至0.1mm，从400nm至0.1mm，从500nm至0.1mm，从600nm至0.1mm，从700nm至0.1mm，从800nm至0.1mm，从900nm至0.1mm，从1000nm至0.1mm，从1100nm至0.1mm，从1200nm至0.1mm，从1300nm至0.1mm，从1400nm至0.1mm，从1500nm至0.1mm，从1600nm至0.1mm，从1700nm至0.1mm，从1800nm至0.1mm，从1900nm至0.1mm，从2000nm至0.1mm，从2100nm至0.1mm，从2200nm至0.1mm，从2300nm至0.1mm，从2400nm至0.1mm，从2500nm至0.1mm，从100nm至3000nm，从200nm至3000nm，从300nm至3000nm，从400nm至3000nm，从500nm至3000nm，从600nm至3000nm，从700nm至3000nm，从800nm至3000nm，从900nm至3000nm，从1000nm至3000nm，从1100nm至3000nm，从1200nm至3000nm，从1300nm至3000nm，从1400nm至3000nm，从1500nm至3000nm，从1600nm至3000nm，从1700nm至3000nm，从1800nm至3000nm，从1900nm至3000nm，从2000nm至3000nm，从2100nm至3000nm，从2200nm至3000nm，从2300nm至3000nm，从2400nm至3000nm，从2500nm至3000nm，从100nm至800nm，从200nm至800nm，从300nm至800nm，从400nm至800nm，从500nm至800nm，从600nm至800nm，从700nm至800nm，从100nm至2500nm，从100nm至2000nm，从100nm至1500nm，从100nm至1000nm，从100nm至900nm，从100nm至700nm，从100nm至600nm，从100nm至500nm，从100nm至400nm，从100nm至300nm，从100nm至200nm，从380nm至750nm，从380nm至620nm，从380nm至590nm，从380nm至570nm，从380nm至495nm，从380nm至450nm，从450nm至750nm，从450nm至620nm，从450nm至590nm，从450nm至570nm，从450nm至495nm，从495nm至750nm，从495nm至620nm，从495nm至590nm，从495nm至570nm，从570nm至750nm，从570nm至620nm，从570nm至590nm，从590nm至750nm，从590nm至620nm，从620nm至750nm等。

因此，在一些情况下，可以使用在一个或多个波长下或在一定波长范围内信号透射百分比的已知或预定下降来检测载玻片的存在和/或可以使用测量的累计下降来确定存在的载玻片数量。如图8所示，通过测量检测器处检测到的幅度，可以使用透射的信号的累计下降来确定载玻片数量，例如在浴中、由载玻片托架保持的载玻片数量等。在图8中可以看出，测得特定幅度，例如，等于发射的信号幅度减去当光路径中存在已知半透明度的载玻片时预期的透射下降，指示浴中存在一个载玻片(“1”)。相应地，当测量的幅度等于发射的信号幅度减去当光路径中存在已知半透明度的载玻片时预期的透射下降的两倍(“2”)时，则系统可以指示存在两个载玻片。类似地，当测得检测器幅度等于根据测量单个载玻片预期的透射下降的三倍(“3”)时，系统可以指示存在三个载玻片，依此类推。

在一些情况下，例如，如上所述，可以将测量的透射与发射信号的幅度进行比较，以确定存在的载玻片的数量。发射信号的幅度可以用各种方式确定，包括例如，当光路径中不存在载玻片时进行在检测器处发射的信号的测量。在一些情况下，发射信号的幅度可以基于测量或者以其它方式确定或控制提供给发射器以发射信号的电流量。

在一些情况下，一个或多个检测器幅度可以储存在计算机存储器中，以供与测量的检测器幅度进行比较，例如，以确定存在的载玻片数量。例如，在一些情况下，在光路径中没有载玻片的情况下的检测器幅度可以储存在存储器中，例如，作为测量值与之比较的基线透射水平。在一些情况下，与特定载玻片参数(例如，特定载玻片材料、特定载玻片厚度等)对应的一个或多个检测器幅度可以储存在存储器中，例如，用于确定当使用具有特定参数的载玻片时存在的载玻片数量。

可以用各种方式实现将测量信号转换为载玻片计数。例如，在一些情况下，可以将光路径中存在的未知数量的载玻片的测量值与检测器幅度值库进行比较，以鉴定路径中存在的载玻片数量。在一些情况下，可以将光路径中存在的未知数量的特定类型载玻片的测量值与所述特定类型的一个载玻片相对应的透射百分比的已知值进行比较，以鉴定路径中存在的载玻片数量。

如下面更详细描述的，在一些情况下，可以基于对存在的载玻片数量的评估来进行调节。例如，在一些情况下，可以基于根据本文所述方法对存在的载玻片数量的评估来调节试剂浴体积，例如，使得当浴中存在载玻片时，维持浴液位在期望或预定的水平。

涉及载玻片数评估的方法可以仅为了载玻片计数的目的而进行，或者可以作为维持试剂浴体积或液位的集成系统的一部分进行。在一些情况下，载玻片数量的评估可以作为维持所评估的载玻片所在的浴的试剂浴体积或液位的集成系统的一部分进行。

在一些情况下，载玻片数量的评估可以在多浴载玻片制备系统中进行，使得利用评估的载玻片数量来调节和/或控制系统的一个或多个浴的液位或体积。.例如，在一些情况下，载玻片数量的评估可以当载玻片与第一浴、本文也称为初级浴相关联时进行，并且所述评估可以用于评估或调节在初级浴之后载玻片被引入的第二浴的液体体积。用于本文中时，关于试剂浴，“与...相关联”意味着载玻片最近将要、正在或已经插入所述浴中，因此，与特定浴相关联的载玻片是在去往所述浴的途中、在所述浴中、或从所述浴中移出。取决于所用的载玻片制备方案，初级浴和二级浴可以是任何试剂浴，包括本文所述的那些，包括但不限于例如，固定浴、洗涤浴、染色浴等。

在一些情况下，本文所述的评估可以组合，包括例如，其中将试剂浴体积的评估与载玻片数量的评估组合。可以相对于单个试剂浴或跨两个或更多个不同的试剂浴进行组合评估。例如，如图9的实施方式中描绘，可以定位第一发射器-检测器对(“S1”和“D1”)以评估试剂浴中存在的载玻片(“载玻片”)的数量，可以定位第二一发射器-检测器对(“S2”和“D2”)以使用上述水平管设计来评估试剂浴中存在的液体体积。在一些情况下，评估试剂浴中存在的载玻片数量的第一发射器-检测器对和评估试剂浴中存在的液体体积的第二发射器-检测器对，二者用于组合评估，可以存在于同一试剂浴上或与之相关联。

在一些情况下，评估试剂浴中存在的载玻片数量的第一发射器-检测器对和评估试剂浴中存在的液体体积的第二发射器-检测器对，二者用于组合评估，可以存在于分开的试剂浴上或与之相关联。例如，第一发射器-检测器对可以与初级浴相关联存在以评估存在的载玻片数量，并且第二发射器-检测器对可以与试剂浴相关联存在，使得在初级浴处评估的载玻片数量与所评估的液体体积组合使用以确定是否需要调节试剂浴的液位。

作为示例，在图10中描绘了与组合评估的一个实施方式相对应的液位控制逻辑图。在逻辑图中，基于所评估去往试剂浴的载玻片数量(“AS1”)确定对应于试剂浴的液位的值(“AS2”)并与试剂浴的计算值进行比较。如果两个值相等，则不需要调节以将浴维持在期望或预定的液位。如果值不相等，则可以基于值之间的差异来确定和/或进行必要的调节并可以相应地触发各种排出/填充回路和/或附加评估，例如，类似于图10中所描绘的那些。

组合评估不限于明确描述的那些，并且可以在本文描述的方法中采用各种评估组合，例如组合任何数量的载玻片数量评估、液体体积评估和/或其组合。组合评估中的各个评估也可以按任何方便和适当的顺序进行，因此也可以取决于例如所用的载玻片制备方案而有很大变化。

评估试剂质量

在一些情况下，本公开的方法可以包括评估用于载玻片制备的自动化装置中所使用的试剂的质量。为了简单和清楚起见，下面将在用于组织学或血液学分析的组织学或血液学载玻片染色的背景下描述用于评估试剂质量的方法；然而，普通技术人员将容易理解，所述方法不限于此并且可以在希望评估用于染色过程、例如或类似于组织学染色中的试剂质量的各种其它背景中得到应用。

本方法的方面包括分析染色的空白载玻片。用于本文中时，术语“染色的空白载玻片”通常是指不含样本但根据用于染色含有样本的载玻片的程序染色的载玻片。因此，在一些情况下，本公开的方法可以包括染色至少一个空白载玻片以产生染色的空白载玻片。空白载玻片的染色可以与一个或多个样本载玻片的染色串行或并行进行。例如，在一些情况下，空白载玻片可以使用与用于染色样本载玻片相同的试剂浴在染色一个或多个样本载玻片之前或之后进行染色。在一些情况下，空白载玻片可以与一个或多个样本载玻片一起处理，因此除了将样本施加于载玻片之外，可以经历与所述一个或多个样本载玻片基本相同的载玻片制备步骤。空白载玻片与一个或多个样本载玻片“一起”处理在本文中也可称为“同时染色”，例如同时染色空白载玻片和一个或多个样本载玻片。

在一些情况下，空白载玻片可以放置在载玻片托架中的指定位置，以与一个或多个样本载玻片一起进行处理。在依次的染色轮次中，载玻片托架中的指定位置可以保持不变或可以变化，包括例如系统地变化、随机地变化等。例如，在具有多个狭槽、例如从前到后编号为1到10的载玻片托架中，空白载玻片可以放置在位置1中，并且在依次染色运行期间不从位置1变化。在一些情况下，空白载玻片可以在初始运行时放置在位置1并之后系统地变化，例如，下一空白载玻片在下一运行期间放置在位置2，在下一运行期间放置在位置3，在下一运行期间放置在位置4，等。在一些情况下，空白载玻片可以在初始运行时放置在位置1并之后随机地变化，例如，下一空白载玻片在下一运行期间放置在位置7，在下一运行期间放置在位置3，在下一运行期间放置在位置10，等。

在一些情况下，与载玻片托架中的其它位置相比，空白载玻片在染色中可以唯一地或更常见地放置在经历较大变化的位置。例如，在一些情况下，空白载玻片可以更常见地或唯一地放置在外部位置，即载有多个载玻片的载玻片托架的一端的位置，例如在具有从前到后编号为1到10的多个狭槽的载玻片托架中的位置1或位置10。如本文中其它地方所述，载玻片托架可以不必具有如上面例子中所述的10个狭槽作为由载玻片托架承载的载玻片的数量，并且载玻片托架的容量可以根据要求、例如根据所使用的特定仪器变化。

本方法将通常包括获取经染色的空白载玻片的一个或多个图像以供进行质量评估中的分析。通过获取染色的空白载玻片的一个或多个图像，可以确定用于制备载玻片的试剂质量的参数。例如，在一些情况下，从染色的空白载玻片的图像获得的参数可用于评估用于制备载玻片的染色剂或染色试剂的质量。作为非限制性例子，评估染色的空白载玻片上的背景染色所对应的参数可以指示用于制备载玻片的染色剂的质量。

评估用于制备载玻片的试剂的质量可产生各种结果。例如，如本文所述的评估可以指示试剂产生的组织学染色载玻片的质量足以用于组织学分析，包括例如，通过自动化分析仪的自动化组织学分析。在一些情况下，例如，如本文所述的评估可以指示试剂产生的组织学染色载玻片的质量不足以用于组织学分析，包括例如，通过自动化分析仪的自动化组织学分析。指示质量不足的分析的特征可以变化并且可以包括但不限于，例如，染色强度超出预定范围(例如，高于预定阈值、低于预定阈值等)、染色变异性超出预定范围(例如，高于预定阈值)、光学透明度超出预定范围(例如，低于预定阈值等)、存在碎片(例如，存在的碎片高于预定阈值)、存在条纹(例如，存在的条纹高于预定阈值)等。通过本文所述方法可测量的染色剂或其它试剂的所有特征可以酌情用于评估本文所述的质量。

如上所述，本方法通常将包括获取染色的空白载玻片的一个或多个图像。在一些情况下，例如，在比较染色的空白载玻片和未染色的载玻片的情况下，所述方法还可以包括获取未染色的载玻片的一个或多个图像，其中术语“未染色的载玻片”通常是指空白载玻片，即不含样本且未经任何染色程序的载玻片。这样的未染色载玻片可以用作对照或基线或参考，例如作为透射百分比的基线参考。

任何方便和适当的成像装置均可在获取如本方法中所述的图像中得到应用，包括例如配备有数字照相机的显微镜，例如，如下面更详细描述的。在一些情况下，用于捕获染色的空白载玻片的所述一个或多个图像的成像装置是用于捕获样本载玻片图像的相同成像装置，在本文中在一些情况下称为“样本载玻片成像装置”。在一些情况下，用于捕获染色的空白载玻片的所述一个或多个图像的成像装置是与用于捕获样本载玻片图像的成像装置分开的装置。

在一些情况下，可以获取染色的空白载玻片的一个图像并用于后续分析。在一些情况下，可以获取染色的空白载玻片的多个图像并用于后续分析。在获取染色的空白幻灯片的多个图像的情况下，获取和使用的图像数量可以变化，并且可以包括2个或更多个但通常不超过100个图像，包括但不限于，例如，2个或更多，3个或更多，4个或更多，5个或更多，6个或更多，7个或更多，8个或更多，9个或更多，10个或更多，15个或更多，20个或更多，25个或更多，30个或更多，35个或更多，40个或更多，45个或更多，50个或更多，60个或更多，70个或更多，80个或更多，90个或更多，从2至100个，从2至90个，从2至80个，从2至70个，从2至60个，从2至50个，从2至45个，从2至40个，从2至35个，从2至30个，从2至25个，从2至20个，从2至19个，从2至18个，从2至17个，从2至16个，从2至15个，从2至14个，从2至13个，从2至12个，从2至11个，从2至10个，从2至9个，从2至8个，从2至7个，从2至6个，从2至5个，从2至4个，从3至100个，从3至90个，从3至80个，从3至70个，从3至60个，从3至50个，从3至45个，从3至40个，从3至35个，从3至30个，从3至25个，从3至20个，从3至19个，从3至18个，从3至17个，从3至16个，从3至15个，从3至14个，从3至13个，从3至12个，从3至11个，从3至10个，从3至9个，从3至8个，从3至7个，从3至6个，从3至5个，从4至100个，从4至90个，从4至80个，从4至70个，从4至60个，从4至50个，从4至45个，从4至40个，从4至35个，从4至30个，从4至25个，从4至20个，从4至19个，从4至18个，从4至17个，从4至16个，从4至15个，从4至14个，从4至13个，从4至12个，从4至11个，从4至10个，从4至9个，从4至8个，从4至7个，从4至6个，从5至100个，从5至90个，从5至80个，从5至70个，从5至60个，从5至50个，从5至45个，从5至40个，从5至35个，从5至30个，从5至25个，从5至20个，从5至19个，从5至18个，从5至17个，从5至16个，从5至15个，从5至14个，从5至13个，从5至12个，从5至11个，从5至10个，从5至9个，从5至8个，从5至7个，从10至100个，从10至90个，从10至80个，从10至70个，从10至60个，从10至50个，从10至45个，从10至40个，从10至35个，从10至30个，从10至25个，从10至20个，从10至19个，从10至18个，从10至17个，从10至16个，从10至15个，从10至14个，从10至13个，从10至12个，从20至100个，从20至90个，从20至80个，从20至70个，从20至60个，从20至50个，从20至45个，从20至40个，从20至35个，从20至30个，从20至25个，等。

可以获取多个图像，使得每个图像表现载玻片的不同区域，其中这样的不同区域可以或可以不部分重叠，以及所获取的图像表现载玻片的多个不同区域。在多个图像中获取的载玻片的不同区域可以相邻或不相邻并且可以按任何方便的方式分布，包括系统地或随机地分布。

在一些情况下，多个不同区域可以沿着载玻片表面上制成的路径分布。沿着载玻片表面的任何方便和适当的路径可以在本文所述的方法中得到应用，所述路径包括但不限于，例如，平行于载玻片的长轴的路径(例如，沿载玻片长轴中间的路径，沿载玻片长轴偏离中心的路径等)、平行于载玻片短轴的路径(例如，沿载玻片短轴中间的路径，沿载玻片短轴偏离中心的路径等)、沿着对角线的路径(例如，从载玻片样本区域的一角到载玻片样本区域的对角)等。在一些情况下，可以采用多个路径，包括多个平行路径、多个非平行路径(例如，两个垂直路径)等。

在一些情况下，可以利用多个非平行路径来更容易地检测可能更常见与载玻片的特定轴相关的染色剂质量的特征。例如，在一些情况下，沿着两个非平行轴捕获的多个图像可以用于检测可以在方向上与载玻片的长轴相关的条纹。在沿着多个非平行路径获取图像的情况下，在一些情况下，可以例如通过比较分别为每个路径计算的参数并比较计算值，来比较所述非平行路径(包括例如，垂直路径)。

根据本方法捕获的图像可以包括单色(数字单色或“灰度”)或彩色(数字彩色图像)的数字图像。“数字图像”，用于本文中时，通常是指二维图像的数字表示(例如，二进制表示)，其可以具有固定或不固定的分辨率。固定分辨率图像在XY方向上具有固定数量的像素行和列。在一些情况下，数字图像可以是在XYZ方向上具有固定数量的体素的三维图像。像素和体素作为以未压缩或压缩的形式传输或储存的光栅图像或光栅图谱、二维或三维小整数阵列储存在计算机存储器中。合适的数字图像文件格式包括但不限于，例如，BMP，BPG，CD5，DEEP，ECW，Exif，FITS，FLIF，GIF，HDR，HEIF，ILBM，ILBM，IMG，IMG，JPEG 2000，JPEG XR，JPEG/JFIF，Layered Image File Format，Nrrd，PAM，PBM，PCX，PGF，PGM，PLBM，PNG，PNM，PPM，SGI，SID，Sun Raster，TGA，TIFF，VICAR，WEBP等。

数字图像取决于例如捕获的特定图像类型(例如，颜色或灰度)以及数字相机或其它图像捕获装置的灵敏度，可以是各种各样的图像位深，并且可以包括但不限于，例如，8位，10位，12位，14位，16位，18位，24位，30位，36位，48位，64位，等。在一些情况下，彩色图像的通道可以各自是，或可以分割成，单独的8位灰度图像。在一些情况下，彩色图像的通道可以各自是，或可以分割成，单独的16位灰度图像。在一些情况下，数字彩色图像可以从多个单独捕获的灰度图像生成，通过将所述单独捕获的灰度图像分配给单个图像的不同颜色通道而将它们组合成单个图像。在其它情况下，数字彩色图像的所有颜色是同时捕获的，例如，通过使用具有分配给不同颜色的多个光电检测器的图像捕获装置和用于将不同颜色的光引导到不同光电检测器的一个或多个光学装置。

数字图像可以是二值(例如，黑色和白色)、灰度或彩色格式，并且可以通过合适的图像处理算法在格式之间转换。例如，彩色图像可以“分割”成单独的颜色通道，以产生每个颜色通道的单独灰度图像。例如，红色、绿色和蓝色图像(RGB)可以被分割成单独的红色、绿色和蓝色通道，以产生红色通道的灰度图像、绿色通道的灰度图像和蓝色通道的灰度图像。彩色图像可以在色空间之间转换并分割成特定色空间的任何方便和适当的颜色通道，所述色空间包括但不限于，例如，RGB色空间、CMYK色空间、HSV色空间、CIE色空间、Lab色空间、CIELUV色空间、YCbCr色空间等。二值图像和灰度图像可以应用于彩色图像的通道，并且例如，在多个二值或灰度图像应用于彩色图像的多个通道的情况下，彩色图像可以从二值或灰度图像构造或“合并”而来。在将彩色图像分割成单独的颜色通道以产生灰度图像的情况下，单个灰度图像可以由其先前的通道名称来指称，例如，从红色通道产生的灰度图像在后续步骤中可以被称为“红色”和/或从“红色”通道生成的任何值可以由它们的先前通道名称来指称，例如，平均“红色”强度是指从红色通道产生的灰度图像得来的平均强度值。I从其它色空间得来的图像和值可以使用相应的命名法来指称。

可以使用任何合适的彩色启用图像捕获装置来捕获所获取的数字彩色图像。合适的数字彩色图像捕获装置将是独立的图像捕获单元，或者可以是集成的图像捕获装置，其是更大的分析系统包括例如组织学分析仪、自动化显微镜系统、血液分析仪等的一部分。合适的数字彩色图像捕获装置将取决于特定的成像环境、图像捕获的目的以及整个设备或系统的相关组件而变化很大。

用于所述方法的最低限度的合适彩色图像捕获装置，将包括能够捕获数字彩色图像的数字彩色相机以及储存数字彩色图像和/或将图像转移到附设图像处理电路或用于以后转移到图像处理电路的附设存储装置的机构。合适的数字彩色相机将各不相同并将通常包括具有足够高的分辨率和足够的颜色捕获的任何数字彩色相机，以捕获可根据本文所述方法处理的图像。

因此，数字彩色图像可以作为彩色图像(即，作为多通道图像)处理，或者可以作为图像处理的一部分被转换或分割成两个或更多个单独的颜色通道。当分成两个或更多个单独的颜色通道时，任何数量的所得分割图像可以用于进一步处理步骤，包括但不限于所有分割图像(即，图像的所有单独通道)或仅一个分割图像(即，图像的单独通道中的仅一个)或者一个或多个包括但不限于两个或更多个、三个或更多个、两个、三个等分割图像(即图像的单独通道)。

所获取的图像的处理通常将包括从用于如本文所述的评估方法中的图像提取至少一个参数值。在一些情况下，可以从单个图像提取两个或更多个参数值。在一些情况下，可以从取自相同的经染色空白载玻片的两个或更多个图像提取两个或更多个参数值。从相同图像或从相关图像(即，从相同的空白染色载玻片获得的图像、沿相同成像路径获得的图像、沿相关(例如，垂直)路径获得的图像等)提取的多个参数值可以组合，例如，组合成代表性的特征。通过编译多个参数值生成的代表性特征可以是包括过程的一种或多种试剂在内的载玻片制备过程的各种代表性特征。

在一些情况下，可以组合多个参数以生成用于制备组织学染色载玻片的染色剂的代表性特征，包括从所使用的染色剂产生背景的代表性特征(即背景染色剂特征)的情况。特征可以取决于特征代表什么而包括任何数量的单个参数值，其中特征中的单个参数值的数量可以变化，并且可以范围从2至20或更多，包括但不限于例如，2个单个值，3个单个值，4个单个值，5个单个值，6个单个值，7个单个值，8个单个值，9个单个值，10个单个值，11个单个值，12个单个值，13个单个值，14个单个值，15个单个值，16个单个值，17个单个值，18个单个值，19个单个值，20个单个值，等。

在图像处理期间提取的参数值将取决于待做的评估而变化。可以提取的参数值的非限制性例子包括但不限于强度值、均匀度值等。这样的参数值可以通过任何方便和适当的手段提取，包括例如，通过分析图像直方图。在生成参数值中可以进行统计计算，其中有用的统计计算的非限制性例子可以包括，例如，基于从图像获得的数据计算平均值，基于从图像获得的数据计算中位数，基于从图像获得的数据计算最小值，基于从图像获得的数据计算最大值，基于从图像获得的数据计算标准偏差，基于从图像获得的数据计算模式，等。

可以针对整个图像、图像的一部分、多个图像、多个图像的多个部分等提取或计算参数值。类似地，可以计算彩色图像或其部分的所有通道或者灰度图像或其部分的参数值。例如，可以将计算的彩色图像或其部分或者灰度图像或其部分的强度值称为总染色强度。可以将计算的彩色图像或其部分或者灰度图像或其部分的标准偏差称为总标准偏差。计算的彩色图像的单个通道的参数值可以相对于从中导出数据的通道来指称。例如，计算的图像或其部分的红色通道的强度值可以称为红色染色强度。计算的图像或其部分的绿色通道的强度值可以称为绿色染色强度。计算的图像或其部分的蓝色通道的强度值可以称为蓝色染色强度。这样的图像的相应平均值、中位数、标准偏差等也可以在如本文所述提取参数值中获得。

方差、例如标准偏差等的测量可以用于提取均匀度值，并且将通常涉及评估多个图像和/或单个图像或多个图像的多个区域。例如，染色强度的总均匀度值可以从由染色的空白载玻片获取的多个彩色图像中提取并计算所述多个图像的强度的标准偏差。例如，红色染色强度的均匀度值可以从由染色的空白载玻片获取的多个红色通道图像中提取并计算所述多个图像的红色强度的标准偏差。其它方差相关的参数值的计算，例如，对于其它通道的、对于其它统计测量的等，将是容易理解的。

在一些情况下，参数值将相对于参考值来计算。例如，在一些情况下，在未染色的载玻片上测量的参数所对应的参考值将用于计算相对参数值。用于确定这样的相对参数值的参考值可以预先测量并储存在例如计算机存储器中，或者可以是新测量的，例如，在获取染色的空白载玻片的图像之前、期间或之后从未染色的载玻片测量。利用来自未染色载玻片的参考值的相对参数值的一个非限制性例子是光学透明度系数。在确定光学透明度系数时，可以通过将染色的空白载玻片的强度测量值与对未染色的载玻片获得的强度的参考值进行比较，来确定从染色的空白载玻片获得的图像的光学透明度。光学透明度系数可以表示为与未染色的参考相比，染色的空白载玻片的透射百分比。

染色剂特征的比较可以通过获得染色的空白载玻片的染色剂特征并将所述特征与参考染色剂特征进行比较而进行。这样的参考染色剂特征可以预先测量并储存在例如计算机存储器中，或者可以是新测量的，例如，在获取用未知质量的染色剂制备的经染色空白载玻片的图像之前、期间或之后，从已知染色剂质量的经染色空白载玻片测量。用已知质量的染色剂染色的参考载玻片将各不相同。在一些情况下，可以使用用已知质量足以产生组织学可分析的染色样本的染色剂制备的经染色空白载玻片。在这样的情况下，可以比较从染色的空白载玻片与参考比较而获得的特征，以确定所述特征是否在与参考相比的某个质量裕度内。在一些情况下，可以使用用已知质量不足以产生组织学可分析的染色样本的染色剂制备的经染色空白载玻片。用已知质量不足的染色剂制备的载玻片的非限制性例子包括但不限于，例如，已知对细胞染色的强度抑制精确分析(例如，过强、强度不足等)的染色剂，已知对细胞染色的变异性抑制精确分析的染色剂，已知碎片过量抑制精确分析的的染色剂，已知促进条纹形成的染色剂，等。

在一些情况下，可以利用一个或多个参数值来将空白染色的载玻片与质量阈值进行比较。因此，可以利用各个参数值或组合特征来与阈值、例如参数阈值或特征阈值进行比较。阈值将各不相同并且通常可表示根据自动化组织学分析系统足以用于精确评估含有样本的载玻片的染色的最小或最大单一值或多个参数值。例如，最大背景染色强度阈值可以表示可以在自动化组织学分析系统中分析样本载玻片以实现准确细胞分类的最大背景强度，超过该阈值则不能实现准确的细胞分类。作为另一个例子，最大变异性阈值可以表示可以在自动化组织学分析系统中分析样本载玻片以实现准确细胞分类的最大染色变异性，超过该阈值则不能实现准确的细胞分类。

在一些情况下，可以采用表示各个参数值阈值的组合的总质量特征阈值。可以将评估的染色特征与总质量特征阈值进行比较，并且当评估的染色特征超过所述质量阈值时，可以确定染色剂的质量足以用于精确的自动化组织学分析。这样的总质量特征阈值可以包含任何数量的上述参数值，其中例如，实际测量值可以被转换为质量得分的分量。例如，染色剂特征的总质量得分可以包括总染色强度的得分、单独通道染色强度的得分、总染色剂变异性的得分、单独通道染色剂变异性的得分、光学透明度的得分、碎片存在与否或水平的得分、条纹存在与否或水平的得分等的某种组合。总质量特征阈值可以基于对使用已知质量的染色剂制备的空白载玻片获得的参数值的类似组合。

本方法的一个或多个评估的结果可以用于进一步的过程或直接报告给用户或自动化载玻片制备和/或分析系统的自动化组件。例如，在一些情况下，报告可以例如通过指示评估结果的指示灯、警报器或其它用户界面(例如，监视器)传达给用户。

在一些情况下，报告可以电传达给自动化系统的另一个方面。例如，在一些情况下，报告评估结果的处理器可以触发系统的一些其它动作，包括例如一种或多种本文所述的试剂调节。

基于本方法的一个或多个评估，可以进行调节，下面将更详细地描述。例如，当评估染色剂并发现质量不足以产生准确的自动化组织细胞分类时，可以排出和替换制备方案中的一种或多种试剂。这样的调节不必限于排出和/或替换载玻片制备方案的一种或多种组分，例如染色剂，并且可以包括例如向染色剂添加一种或多种组分、改变过程计时或环境等。

调节

在一些情况下，本公开的方法可以包括调节载玻片制备过程或步骤或者用于载玻片制备的自动化设备中的试剂。为了简单和清楚起见，下面将在制备用于组织学或血液学分析的组织学或血液学载玻片的背景下描述基于本文所述的各种评估中的一种或多种来调节例如处理步骤的长度、处理步骤的速度、试剂的体积、试剂的组成、替换试剂等的方法；然而，普通技术人员将容易理解，所述方法不限于此并且可以在期望基于评估调节染色过程、例如或类似于其它组织学染色过程的其它环境中得到应用。

本方法的评估可包括固定浴的调节，例如，填充、排出、补充、清洗等。取决于评估，这样的调节可以包括替换固定浴的一些或全部内容物。在一些情况下，这样的调节可包括调节试剂浴液体的组分，包括但不限于例如，醇固定剂(甲醇、乙醇、异丙醇等)或含有醇固定剂、甲醛基固定剂的溶液或含有甲醛基固定剂的溶液。

本方法的评估可包括洗涤浴的调节，例如，填充、排出、补充、清洗等。取决于评估，这样的调节可以包括替换洗涤浴的一些或全部内容物。在一些情况下，这样的调节可包括调节试剂浴液体的组分，包括但不限于例如，洗涤剂或含有洗涤剂、洗涤缓冲液、水等的溶液。

本方法的评估可包括染色浴的调节，例如，填充、排出、补充、清洗等。取决于评估，这样的调节可以包括替换染色浴的一些或全部内容物。在一些情况下，这样的调节可包括调节试剂浴液体的组分，包括但不限于例如，染色剂的一种或多种染料组分或含有染色剂的染料组分的溶液。在一些情况下，主题染色剂包括组织学染色剂，其可以如同所述通过含有组织学染色剂的染色浴的填充、排出、补充、清洗等和/或调节这样的染色剂的任何一种或多种组分来进行调节。

用于本文中时，组织学染色是指用于从多细胞生物体得的细胞的细胞解剖学和/或形态的微观分析中使用的那些染色剂。组织学染色剂通常包括至少一种染料，其给一种或多种细胞类型和/或一种或多种细胞类型的组分染成对比色。组织学染色剂也可以包括至少一种反染色剂，其将其余的细胞或细胞的其余部分染成不同的颜色。组织学技术、染色剂和染色方法是公知的，包括但不限于在下列文献中描述的那些：Kierman.组织学和组织化学方法：理论与实践(Histological and histochemical methods:Theory andpractice).Oxford：Butterworth/Heinemann，1999，和Bancroft&Stevens.组织学技术的理论与实践(Theory and practice of histological techniques).New York，N.Y.：Churchill Livingstone，1996；它们的公开内容通过引用整体并入本文。

组织学染色技术可以是特异性的，以特异性方式染色一种或多种特定细胞，或非特异性的，以相同或相似的方式基本上染色所有细胞或大多数细胞。组织学染色剂包括但不限于，例如，阿尔新(Alcian)蓝染色剂，苯胺蓝染色剂，Azan染色剂，Biebrich猩红色酸性品红染色剂，Carbol品红染色剂，Chrome明矾/苏木精染色剂，刚果红染色剂，结晶紫染色剂，坚牢红染色，苏木精和曙红(H&E)染色剂，铁苏木精染色剂，Isamin蓝/曙红染色剂，Jenner's染色剂，马洛里(Mallory's)磷钨酸苏木精(PTAH)染色剂，马洛里三色染色剂，Masson染色剂，孔雀绿染色剂，甲基绿-派洛宁(MGP)染色剂，Nissl和亚甲蓝染色剂，Nissl染色剂，油红O染色剂，地衣红染色剂，锇酸染色剂，四氧化锇染色剂，巴氏(Papanicolaou)染色剂，过碘酸-Schiff(PAS)染色剂，网硬蛋白染色剂，罗氏(Romanowsky)染色剂，番红O染色剂，银染色剂，苏丹黑和锇染色剂，甲苯胺蓝染色剂，三色AB，三色LG，台盼蓝染色剂，vanGieson染色剂，Verhoff's染色剂，Weigert's间苯二酚品红染色剂等。

组织学染色剂中包含的染料将取决于染色剂制剂和期望的染色结果而异。在一些情况下，可用于组织学染色剂中的染料可包括但不限于，例如，酸性品红钙盐，酸性品红，阿尔新蓝，茜素红，苯胺蓝，苯胺蓝二铵盐，金胺O染料，天青，天青A氯化物，天青B，碱性品红，俾斯麦(Bismarck)棕Y，灿烂甲酚蓝，亮绿，洋红，刚果红，甲酚紫乙酸盐，结晶紫，达罗(Darrow)红，曙红，曙红B，曙红Y，曙红Y二钠盐，赤藓红B，Erythrosin extra bluish，乙基曙红，坚牢绿FCF，苏木精，靛蓝胭脂红，贾纳斯(Janus Green)绿B，淡绿SF淡黄，孔雀绿草酸盐，甲基蓝，甲基绿，甲基绿氯化锌，甲基橙，甲基紫2B，亚甲蓝，亚甲紫(Bernthsen)，中性红，苯胺黑，尼罗(Nile)蓝A，油红O，橙G，橙II钠盐，合成地衣红，荧光桃红B染料，派洛宁(Pyronin)B，派洛宁G，派洛宁Y，刃天青钠盐，虎红钠盐，番红O，苏丹黑B，苏丹III，苏丹IV，硫堇乙酸盐，甲苯胺，甲苯胺蓝O等。

组织学染色剂包括罗氏染色剂。罗氏染色剂通常是由各种组分包括但不限于亚甲基蓝(例如，天青B)和曙红(例如曙红Y)染料组成的中性染色剂。天青是碱性染料，其结合酸性细胞核并产生蓝色至紫色。曙红是酸性染料，其被碱性细胞质吸引，产生红色着色。罗氏染色剂各不相同，并包括各种制剂，包括含有各种天青和曙红类似物的制剂。罗氏染色剂及其染色机制是公知的，并在例如下列文献中描述：Horobin&Walter.组织化学(Histochemistry)(1987)86：331-336；Marshall等人J Clin Pathol(1978)31(3)：280-2；Marshall等人J Clin Pathol.(1975)28(11)：920-3；J Clin Pathol(1975)28(8)：680-5；其公开内容通过引用并入本文。

罗氏染色剂包括但不限于吉姆萨(Giemsa)染色剂、瑞氏(Wright)染色剂、瑞氏吉姆萨染色剂、詹纳尔(Jenner)染色剂、詹纳尔-吉姆萨染色剂、利什曼(Leishman)染色剂、迈格林华(May Grunwald)染色剂、迈格林华吉姆萨染色剂等。每种罗氏染色剂可以各种制剂存在，所述制剂或者源自于各种不同的配方，或者来自各种供应商。罗氏染色剂制剂可包含各种染色剂组分，包括但不限于例如，亚甲蓝，天青A，天青B，天青C，甲苯胺蓝，硫堇，Bernthsen亚甲紫，甲基硫堇啉(methyl thionoline)，硫堇啉，曙红，曙红Y，三溴荧光素，荧光素，噻嗪染料，等。罗氏染色剂制剂可包含溶解染色剂组分的各种溶剂，包括水和有机溶剂，包括但不限于例如水和醇，所述醇包括但不限于例如甲醇、乙醇、异丙醇等。

组织学染色剂及其组分包括可从这样的包括但不限于例如下列供应商商购的那些：Sigma Aldrich，Thermo Fisher Scientific，Avantor Proformance Materials，VWRInternational，Polysciences Inc.等。

在一些情况下，本方法还可以包括基于评估的浴体积和/或基于影响浴液位的计数的载玻片数量进行的调节。在一些情况下，所述方法包括基于评估的染色浴体积进行的调节和/或基于影响染色浴液位的计数的载玻片数量进行的调节。因此，本方法的调节包括各种浴、包括例如染色浴的增加浴体积和减少浴体积。在涉及自动化系统的方法中，液位的调节可以包括评估结果自动化触发调节，例如通过一个或多个阀的触发动作导致试剂浴的填充、排出等。

如上所述，本公开的调节可以是基于多个评估的调节。例如，在一些情况下，调节可以基于评估的浴液体积、计数的载玻片数量、试剂质量及其组合。基于调节的评估可以在将载玻片插入进行调节的试剂浴之前、期间或之后进行。类似地，根据需要或由评估触发的调节可以在将载玻片插入主题试剂浴之前、期间或之后进行。

本公开的方法可以提供在自动化载玻片制备系统中一个或多个试剂浴中的液位的精细控制和/或完全替换主题浴中的液体。因此，主题方法的液体体积调节可以范围从小于1ml至1L或更大，包括但不限于，例如，从1ml至1L，从2ml至1L，从3ml至1L，从4ml至1L，从5ml至1L，从6ml至1L，从7ml至1L，从8ml至1L，从9ml至1L，从10ml至1L，从11ml至1L，从12ml至1L，从13ml至1L，从14ml至1L，从15ml至1L，从16ml至1L，从17ml至1L，从18ml至1L，从19ml至1L，从20ml至1L，从21ml至1L，从22ml至1L，从23ml至1L，从24ml至1L，从25ml至1L，从30ml至1L，从35ml至1L，从40ml至1L，从45ml至1L，从50ml至1L，从55ml至1L，从60ml至1L，从65ml至1L，从70ml至1L，从75ml至1L，从80ml至1L，从85ml至1L，从90ml至1L，从95ml至1L，从100ml至1L，从150ml至1L，从200ml至1L，从250ml至1L，从300ml至1L，从350ml至1L，从400ml至1L，从450ml至1L，从500ml至1L，从600ml至1L，从700ml至1L，从800ml至1L，从900ml至1L，从1ml至500ml，从2ml至500ml，从3ml至500ml，从4ml至500ml，从5ml至500ml，从6ml至500ml，从7ml至500ml，从8ml至500ml，从9ml至500ml，从10ml至500ml，从11ml至500ml，从12ml至500ml，从13ml至500ml，从14ml至500ml，从15ml至500ml，从16ml至500ml，从17ml至500ml，从18ml至500ml，从19ml至500ml，从20ml至500ml，从21ml至500ml，从22ml至500ml，从23ml至500ml，从24ml至500ml，从25ml至500ml，从30ml至500ml，从35ml至500ml，从40ml至500ml，从45ml至500ml，从50ml至500ml，从55ml至500ml，从60ml至500ml，从65ml至500ml，从70ml至500ml，从75ml至500ml，从80ml至500ml，从85ml至500ml，从90ml至500ml，从95ml至500ml，从100ml至500ml，从150ml至500ml，从200ml至500ml，从250ml至500ml，从300ml至500ml，从350ml至500ml，从400ml至500ml，从450ml至500ml，从1ml至250ml，从2ml至250ml，从3ml至250ml，从4ml至250ml，从5ml至250ml，从6ml至250ml，从7ml至250ml，从8ml至250ml，从9ml至250ml，从10ml至250ml，从11ml至250ml，从12ml至250ml，从13ml至250ml，从14ml至250ml，从15ml至250ml，从16ml至250ml，从17ml至250ml，从18ml至250ml，从19ml至250ml，从20ml至250ml，从21ml至250ml，从22ml至250ml，从23ml至250ml，从24ml至250ml，从25ml至250ml，从30ml至250ml，从35ml至250ml，从40ml至250ml，从45ml至250ml，从50ml至250ml，从55ml至250ml，从60ml至250ml，从65ml至250ml，从70ml至250ml，从75ml至250ml，从80ml至250ml，从85ml至250ml，从90ml至250ml，从95ml至250ml，从100ml至250ml，从150ml至250ml，从200ml至250ml等。

相应地，本方法的液位调节将取决于所指示调节的类型和浴的尺寸而变化，并且可以范围从0.1mm至10mm或更大，包括但不限于，例如，0.1mm至10mm，0.2mm至10mm，0.3mm至10mm，0.4mm至10mm，0.5mm至10mm，0.6mm至10mm，0.7mm至10mm，0.8mm至10mm，0.9mm至10mm，1mm至10mm，1.5mm至10mm，2mm至10mm，2.5mm至10mm，3mm至10mm，3.5mm至10mm，4mm至10mm，4.5mm至10mm，5mm至10mm，5.5mm至10mm，6mm至10mm，6.5mm至10mm，7mm至10mm，7.5mm至10mm，8mm至10mm，8.5mm至10mm，9mm至10mm，9.5mm至10mm，0.1mm至5mm，0.2mm至5mm，0.3mm至5mm，0.4mm至5mm，0.5mm至5mm，0.6mm至5mm，0.7mm至5mm，0.8mm至5mm，0.9mm至5mm，1mm至5mm，1.5mm至5mm，2mm至5mm，2.5mm至5mm，3mm至5mm，3.5mm至5mm，4mm至5mm，4.5mm至5mm，1.5mm至7.5mm，2mm至7mm，2.5mm至6.5mm，3mm至6mm，3.5mm至5.5mm，4mm至5mm等。

在一些情况下，液位调节可以基于在载玻片计数评估中检测到的载玻片数量，其中每个载玻片的排代是已知的，这是基于已知的载玻片尺寸计算的，包括例如可商购的载玻片、包括但不限于例如本文所述的载玻片的那些载玻片尺寸。在一些情况下，基于上述一个或多个评估来进行主题方法的液位调节以实现期望的液位，其中期望的液位可以变化并且可以包括，例如，对浴确定的液位使得液体充分覆盖载玻片的样本区域而不接触样本信息区域。在一些情况下，基于上述一个或多个评估来进行主题方法的液位调节以实现预定的液位，其中预定的液位可以变化并且可以包括，例如，对特定的浴载玻片组合确定的液位，使得液体充分覆盖载玻片的样本区域而不接触样本信息区域。

本方法的调节包括基于染色剂质量的评估来调节染色浴，例如，如本文所述。将会指示和/或触发调节的染色剂质量评估包括但不限于，例如，高于或低于质量阈值的染色剂评估(例如，低于染色剂强度阈值，高于染色剂变异性阈值，低于染色剂透明度阈值等)、指示碎片水平高于预定阈值的染色剂评估、指示条纹水平高于预定阈值的评估等。通过使用下面描述的一个或多个装置或集成系统，连同其它手段，可以实现本方法的调节，例如基于如本文所述的一个或多个评估的调节。

附加于或代替所述试剂调节，本文描述的评估可指示改动载玻片制备程序期间进行的物理操作的必要性。例如，指示缺乏染色剂质量的评估可以指示需要增加或减少在特定染色剂内的温育时间。作为另一个例子，基于如本文所述的评估鉴定的条纹存在可以指示可能需要改变加工步骤的速度，例如，可以增加或降低从一个或多个试剂浴中插入或移除载玻片的速度。可以基于本文描述的一个或多个评估指示的对物理操纵载玻片处理程序的这类调节可以手动或自动地实现，包括例如在一个或多个本文描述的装置和系统中自动化实现。

装置和系统

如上所述，本公开提供了用于在自动化组织学或血液学仪器中自动化评估和控制载玻片制备的方面的装置和系统。本公开的装置和系统可以进行试剂量的自动化评估和/或试剂性能的自动化评估的全部或一部分。主题装置和系统也可以基于本文所述的一个或多个评估来进行一种或多种调节，例如载玻片染色试剂或载玻片染色过程的调节，包括例如，试剂量的调节，例如试剂浴中存在的试剂量，试剂组成的调节，试剂的替换，等。

本公开的装置和系统可包括一个或多个显微镜载玻片。可以在主题装置和系统中使用的载玻片包括样本载玻片和非样本载玻片(即空白载玻片)。空白载玻片可以各种方式在主题设备和系统中使用。例如，在一些情况下，可以将空白载玻片装入载玻片托架中并与一个或多个样本载玻片并行或串行染色，例如，用于评估用于制备进行血液学分析的载玻片的载玻片染色试剂的质量。在一些情况下，未染色的空白载玻片可用于主题装置或系统中，例如，作为染色的空白载玻片与之比较的参考或对照。

载玻片(即，显微镜载玻片)的形状和尺寸，虽然便捷可得，但是可以各不相同，并且因此载玻片的分析表面，也称为“显微镜平面”，可以基本上是正方形、基本上是长方形等。通常可利用的是有显微镜平面尺寸的载玻片，包括但不限于例如，25mm x 25mm，25mm x75mm，25mm x 76mm，26mm x 75mm，26mm x 76mm，27mm x 46mm，28mm x 48mm，38mm x 75mm，50mm x 75mm，51mm x 75mm，51mm x 76mm，52mm x 76mm，76mm x 102mm，83mm x 102mm，102mm x 127mm，114mm x 152mm，127mm x 178mm，等。长方形载玻片可以被指为具有长轴和短轴，其中这样的轴是相对于载玻片的显微镜平面规定的。载玻片厚度将各不相同，并且可以范围从0.5mm或更小到2mm或更大，包括但不限于，例如，0.5mm厚，1mm厚，1.2mm厚，1.4mm厚，1.6mm厚，等。载玻片可以具有或不具有“磨砂区域”，其中磨砂区域通常是指被构造用于向载玻片添加(书写、印刷、蚀刻、粘附等)信息(例如，样本信息、患者信息、测定信息、日期、时间等)的任何载玻片区域，无论该区域是否实际上是“磨砂的”。载玻片将通常由玻璃构成，但在一些情况下，也可由各种聚合物构成，包括但不限于塑料(例如，聚苯乙烯、丙烯酸类树脂等)。

本公开的装置和系统可包括载玻片托架，其具有一个或多个尺寸适于保持载玻片的狭槽。这样的装置通常将包括一个或多个狭槽或接触点，其能够在输送通过自动化载玻片制备装置的一个或多个区域期间保持载玻片。

载玻片托架的载玻片保持容量将取决于特定构造而变化，例如载玻片托架具有一个载玻片至20个或更多的容量，包括但不限于，例如，从1至20个载玻片，从1至19个载玻片，从1至18个载玻片，从1至17个载玻片，从1至16个载玻片，从1至15个载玻片，从1至14个载玻片，从1至13个载玻片，从1至12个载玻片，从1至11个载玻片，从1至10个载玻片，从1至9个载玻片，从1至8个载玻片，从1至7个载玻片，从1至6个载玻片，从1至5个载玻片，从1至4个载玻片，从1至3个载玻片，1或2个载玻片，从2至20个载玻片，从2至19个载玻片，从2至18个载玻片，从2至17个载玻片，从2至16个载玻片，从2至15个载玻片，从2至14个载玻片，从2至13个载玻片，从2至12个载玻片，从2至11个载玻片，从2至10个载玻片，从2至9个载玻片，从2至8个载玻片，从2至7个载玻片，从2至6个载玻片，从2至5个载玻片，从2至4个载玻片，2或3个载玻片，从5至20个载玻片，从5至19个载玻片，从5至18个载玻片，从5至17个载玻片，从5至16个载玻片，从5至15个载玻片，从5至14个载玻片，从5至13个载玻片，从5至12个载玻片，从5至11个载玻片，从5至10个载玻片，从5至9个载玻片，从5至8个载玻片，从5至7个载玻片，5或6个载玻片，从10至20个载玻片，从10至19个载玻片，从10至18个载玻片，从10至17个载玻片，从10至16个载玻片，从10至15个载玻片，从10至14个载玻片，从10至13个载玻片，从10至12个载玻片，10或11个载玻片，等。

在一些情况下，本方法的载玻片托架可以在垂直方向上保持一个或多个载玻片以插入试剂浴中。载玻片托架在插入浴中后可以或可以不维持与载玻片的接触，例如在温育期间释放载玻片并在从浴中取出载玻片后重新建立接触。普通技术人员将容易理解，用于将载玻片保持在载玻片托架和/或浴中的器具可以各不相同，并且不限于狭槽，并且可以包括，例如，任何接触点或夹具或能够将载玻片保持在期望的方向、例如立垂直方向的其它机构。

本公开的装置和系统可包括一个或多个试剂浴。主题装置和系统的试剂浴可以用于任何载玻片制备过程，包括但不限于例如，在任何染色方案，包括例如组织学染色方案、血液学染色方案、免疫染色方案、DNA/RNA杂交方案等中载玻片可能受到的固定、温育、封闭、染色、杂交、洗涤、去染色、剥色、后固定、标记等。因此，试剂浴的尺寸和构造将变化很大，并且主题浴可以被称为固定浴、温育浴、封闭浴，染色浴、杂交浴、洗涤浴、去染色浴、剥色浴、后固定浴、标记浴等。

试剂浴通常将设计成具有超过浴中通常使用的液体体积的液体容量，例如，试剂浴的液体容量可以比浴中使用的液体体积大50％或更低，包括但不限于，例如，大5％至50％之间，大10％至50％之间，大15％至50％之间，大20％至50％之间，大25％至50％之间，大30％至50％之间，大35％至50％之间，大40％至50％之间，大5％至40％之间，大5％至35％之间，大5％至30％之间，大5％至25％之间，大5％至20％之间，大5％至15％之间，大5％至10％之间，大10％至40％之间，大15％至35％之间，大20％至30％之间，等。

在一些情况下，主题方法的试剂浴的体积容量将范围从小于10cc至500cc或更多，包括但不限于，例如，从10cc至500cc，从20cc至500cc，从30cc至500cc，从40cc至500cc，从50cc至500cc，从60cc至500cc，从70cc至500cc，从80cc至500cc，从90cc至500cc，从100cc至500cc，从110cc至500cc，从120cc至500cc，从130cc至500cc，从140cc至500cc，从150cc至500cc，从160cc至500cc，从170cc至500cc，从180cc至500cc，从190cc至500cc，从200cc至500cc，从210cc至500cc，从220cc至500cc，从230cc至500cc，从240cc至500cc，从250cc至500cc，从50cc至450cc，从50cc至400cc，从50cc至350cc，从50cc至300cc，从50cc至250cc，从50cc至200cc，从50cc至150cc，从50cc至100cc，从100cc至450cc，从100cc至400cc，从100cc至350cc，从100cc至300cc，从100cc至250cc，从100cc至200cc，从100cc至150cc，从10cc至250cc，从20cc至250cc，从30cc至250cc，从40cc至250cc，从50cc至250cc，从60cc至250cc，从70cc至250cc，从80cc至250cc，从90cc至250cc，从100cc至250cc，从110cc至250cc，从120cc至250cc，从130cc至250cc，从140cc至250cc，从150cc至250cc，从160cc至250cc，从170cc至250cc，从180cc至250cc，从190cc至250cc，从200cc至250cc，等。

本公开的装置和系统可以包括一个或多个发射器-检测器对，其中基本上可以采用能够实现上述方法的检测过程的任何发射器-检测器对。在一些情况下，主题发射器-检测器对的发射器和检测器可以是光发射器和光检测器，并且这样的组件可以限定装置和/或系统的光路径。

光发射器通常将产生可由光检测器检测的电磁信号，其可包括例如红外光、可见光、紫外光等。在一些情况下，有用的光学发射器可包括白炽发射器、荧光发射器、发光二极管(LED)、激光器等。有用的光检测器，也称为光学传感器，包括能够检测从相应传感器产生的信号或从相应传感器产生的信号变化并将信号或信号变化转换成电子信号的任何检测器。有用的光学传感器包括但不限于，例如，光敏电阻器、光伏电池、光电二极管、光电晶体管等。可用于本方法的光学传感器可包括数字或模拟传感器。

发射器-检测器对可以按任何有用的构造定位在主题装置和系统内，从而建立可以被另一个组件完全或部分中断的光学路径。例如，可以定位发射器-检测器对以建立光路径，所述光路径被载玻片托架承载的一个或多个载玻片、插入试剂浴中的一个或多个载玻片、附设于或包含在水平管内的浮子等中断。取决于环境，主题装置和系统的发射器和检测器可以或可以不包括用于成形、引导或以其它方式控制发射或接收的光路径的附加相应光学组件。有用的附加光学组件可包括但不限于，例如，光学孔、光学镜、光学透镜、滤光器等。

主题装置和系统的组件可以与一个或多个处理器连接或以其它方式与之通信。如下面更详细描述的，基本上任何电路都可以被构造成所述装置和系统内的功能布局，从而允许组件之间以及与用于执行本文公开的方法的一个或多个处理器的连接性。

在一些情况下，如本文所述的装置和系统还包括用于指示如本文所述的评估的结果的组件或系统，其中所述组件或系统可以被构造成以任何方便和适当的方式报告评估结果。这样的组件或系统将取决于所述装置和/或系统的特定构造而异，并且可以包括但不限于，例如，警报器、指示灯、显示器(例如，计算机监视器图形用户界面(GUI)等)、被构造成打印到例如有形介质(包括例如纸或带)上的打印机等。在一些情况下，所述组件或系统向用户指示，例如以声音、照亮或以其它方式显示，是否需要调节一个或多个试剂浴。在一些情况下，所述组件或系统向用户指示，例如以声音、照亮或以其它方式显示，主题染色超过还是未超过预定的质量阈值。

在一些情况下，无论装置或系统是否包括向用户报告评估结果的机构，所述设备或系统都可以包括连接或能够将评估结果传播到所述设备或系统的其它组件的其它方式，例如，以触发所述设备或系统基于评估进行调节。

在一些情况下，所述装置或系统可包括一个或多个组件，其被构造成基于如本文所述的一个或多个评估的结果从一个或多个试剂浴添加或移除液体试剂。在一些情况下，这样的组件包括但不限于阀。这样的阀，其中的一个或多个可以用于主题装置和系统中，可以与处理器链接或以其它方式与之通信，从而允许基于本文所述的一个或多个评估的结果来控制所述一个或多个阀。任何方便和适当的阀都可在主题系统和装置中得到应用，包括但不限于，例如，角阀，气动阀，球阀，蝶阀，止回阀，汽缸阀，隔膜阀，闸门阀，截止阀，旋塞阀，旋转阀，截止止回阀，等。在一些情况下，主题装置和系统的阀可以是电动阀，包括本文所述的一种或多种阀的电动型式。

正如将容易理解的，在一些情况下，泵可以代替阀或与阀组合使用，例如，在液体将被输送到或输送出试剂浴的情况下。有用的泵包括但不限于，例如，正排量泵(例如，齿轮泵、螺杆泵、渐进腔式泵、罗茨泵、蠕动泵、柱塞泵、双隔膜泵、绳泵等)，脉冲泵，速度泵，重力泵等。在一些情况下，电控泵可以代替本文所述的电控阀。

在一些情况下，主题装置和系统的电控阀可以与一个或多个处理器通信，使得本文所述的评估的结果触发电控阀以向试剂浴添加试剂。因此，本公开的系统和装置可以包括与处理器通信的一个或多个填充阀，其当被启动时，引起试剂浴的液位增加。填充阀可以例如递增地或连续地增加液位，包括其中通过启动和停用所述阀将液位增加到期望或预定的液位。

填充阀可以与一个或多个贮存器相连，所述贮存器含有待添加到试剂浴中的试剂。填充阀可与之相连的贮存器基本上包括任何载玻片制备试剂的任何组分，包括但不限于，例如，本文所述的一种或多种载玻片制备组分。本文描述的系统和装置中有用的贮存器包括但不限于，例如，染色剂贮存器，染色剂组分贮存器，固定试剂贮存器，洗涤剂贮存器，缓冲液贮存器，水贮存器，等。在一些情况下，试剂从贮存器通过填充阀的流动可以至少部分通过重力进行操作。在一些情况下，试剂从贮存器通过填充阀的流动可以至少部分通过非重力产生的压力、包括例如由与填充阀可操作地连接的泵产生的压力进行操作。

在一些情况下，主题装置和系统的电控阀可以与一个或多个处理器通信，使得本文所述的评估的结果触发电控阀以减少试剂浴中试剂的体积。因此，本公开的系统和装置可以包括与处理器通信的一个或多个排出阀，其当被启动时，引起试剂浴的液位降低。排出阀可以例如递增地或连续地降低液位，包括其中通过启动和停用所述阀将液位降低到期望或预定的液位。

在一些情况下，排出阀可以与废物容器相连。在一些情况下，试剂从试剂浴通过排出阀、例如进入废物容器中的流动可以至少部分通过重力进行操作。在一些情况下，试剂从试剂浴通过排出阀、例如进入废物容器中的流动可以至少部分通过非重力产生的压力、包括例如由与排出阀可操作地连接的泵产生的压力进行操作。

本公开的装置和系统可包括一个或多个自动化体积指示器，用于评估试剂浴的体积和/或液位。自动化体积指示器将通常包括与试剂浴连接的水平管。水平管可以连接到试剂浴的底部、试剂浴的侧面等。水平管可以与或可以不与水平管和浴之间的中间连接器、例如管或贮存器连接。在一些情况下，水平管可包括浮子和发射器-检测器对，它们的定位使得当试剂浴被填充或排出时，试剂浴的液升高或降低位，浮子在发射器-检测器对的路径内移动。这样的浮子，当与光发射器-检测器对对组合使用时，将子通常是至少半透明的，如果不是接近或完全不透明的话。如上所述，在一些情况下，用于自动化体积指示器中的光发射器-检测器对的各个组件可包括一个或多个孔。

本公开的自动化体积指示器将通常包括在发射器-检测器对中的检测器之间的一个或多个有线或无线连接，用于传输如在主题方法中描述的体积评估的结果。自动化体积指示器，当传输指示需要调节液体体积或液位的结果时，可基于必要的调节触发一个或多个阀的打开和/或关闭。

本公开的装置和系统可包括一个或多个自动化载玻片计数器，用于进行载玻片、例如存在于载玻片托架、试剂浴或其组合中的载玻片的自动化计数。自动化载玻片计数器将通常包括发射器-检测器对，其定位使得在载玻片穿越载玻片制备过程期间，由发射器-检测器对限定的光路径在某个点穿过载玻片。因此，发射器-检测器对可以定位在自动化载玻片制备仪器内沿着载玻片路径的各个点处，包括但不限于，例如，在一个或多个试剂浴之前的位置、与试剂浴相关的位置、一个或多个试剂浴之后的位置等。

本公开的自动化载玻片计数器将通常包括在发射器-检测器对中的检测器之间的一个或多个有线或无线连接，用于传输如在主题方法中描述的载玻片数量评估的结果。自动化载玻片计数器，当传输指示所鉴定的载玻片的数量需要调节液体体积或液位的结果时，可以基于必要的调节触发一个或多个阀的打开和/或关闭。

本公开的装置和系统可包括一个或多个体积受控的载玻片染色系统，用于控制自动化载玻片制备装置中的一个或多个试剂浴的体积和/或液位。本公开的体积受控的载玻片染色系统将通常包括与一个或多个自动载玻片计数器集成的一个或多个自动化体积指示器，用于对自动载玻片染色程序中使用的试剂浴的体积和/或液位进行综合评估。体积受控的载玻片染色系统的各个组件可以共享处理器或包括用于所述系统的一个或多个组件的一个或多个指定处理器。无论是采用单个还是多个处理器，主题系统都可以将系统组件的各个评估集成到一组简单的命令或单个命令中，例如，在需要时触发试剂浴的调节，例如通过控制或如本文所述的一个或多个阀。

在一些情况下，体积受控的载玻片染色系统可以持续监测载玻片染色系统的一个或多个试剂浴的体积和/或液位。在一些情况下，体积受控的载玻片染色系统可以定期评估载玻片染色系统的一个或多个试剂浴的体积和/或液位。这样的定期评估可以由所述装置或系统以规则的时间间隔或以事件相关的间隔进行，包括例如，每载玻片制备运行或批次进行一次或多次、在载玻片插入特定的试剂浴(例如，染色浴)中之前进行一次或多次等。

本公开的装置和系统可包括一个或多个试剂评估系统，用于评估自动化载玻片制备系统中使用的试剂的质量和/或性能。在一些情况下，这样的装置和系统可以评估在自动化组织学载玻片制备系统中使用的染色剂的质量和/或性能。主题试剂评估系统将通常包括载玻片成像装置，包括例如，一个或多个上述的数字显微镜装置。本公开的装置和系统可以包括用于对样本载玻片以及空白载玻片、包括例如染色的空白载玻片或未染色的载玻片成像的单个成像装置。在一些情况下，装置或系统可包括指定的成像装置，包括但不限于指定的样本成像装置、指定的空白载玻片成像装置，包括例如，其中这样的装置或系统包括两个或更多个指定的成像装置。

自动化试剂评估系统的成像装置通常将与处理器通信，以执行对试剂进行评估的一个或多个功能，包括但不限于例如，一个或多个在上述试剂评估方法中描述的功能或步骤。在一些情况下，试剂评估系统也可以包括共享或指定处理器附设的计算机存储器。附设的计算机存储器可存储各种数据，包括但不限于，例如，一个或多个参考参数值和/或参考特征。存储的参考值和/或特征可用于比较所获得的参数值和/或所获得的特征以进行试剂评估，例如，如上述方法中所述。

自动化试剂评估系统的处理器可以能够执行各种功能和/或触发系统的其它组件以执行各种功能，例如，由于其上储存的可以由处理器执行的指令所致。在一些情况下，处理器能够从成像装置接收图像并且可包括用于从成像装置接收图像的指令。在一些情况下，处理器能够处理图象并且可包括用于处理图像的指令，例如，通过执行一个或多个图像处理步骤，包括例如，一个或多个上述图像处理步骤。在一些情况下，处理器能够从图像数据提取参数值并且可以包括用于从图像数据中提取参数值的指令。在一些情况下，处理器能够产生染色剂特征并且可包括用于产生染色剂特征的指令，例如，从两个或更多个参数值导出。在一些情况下，处理器能够从存储器储存和检索各种数据并且可包括用于从存储器储存和检索各种数据的指令，包括但不限于参考值和特征、测量值和特征等。在一些情况下，处理器能够在数据之间进行比较并且可包括用于在数据之间进行比较的指令，包括但不限于，例如，参考参数值和测量参数值之间的比较、参考染色剂特征与测量的染色剂特征之间的比较等。

在一些情况下，如本文中所述的系统的组件可以通过有线数据连接来连接。任何合适且适当的有线数据连接均可在连接所述系统的组件中得到应用，例如，如本文所述，所述有线数据连接包括但不限于，例如，商用电缆、如USB电缆，同轴电缆，串行电缆，C2G或Cat2电缆，Cat5/Cat5e/Cat6/Cat6a电缆，令牌环网电缆(Cat4)，VGA电缆，HDMI电缆，RCA电缆，光纤电缆，等。在一些情况下，例如，在不太关心数据安全性的情况下，可以采用无线数据连接，包括但不限于，例如，射频连接(例如，PAN/LAN/MAN/WAN无线网络、UHF无线电连接等)、红外数据传输连接、无线光学数据连接等。

本公开的设备和系统还可以包括“存储器”，其能够存储信息使得计算机在以后可访问和检索该信息。可以基于用于访问存储信息的机构来选择任何方便的数据存储结构。在某些方面，信息可以储存在“永久性存储器”(即，不会因终止对计算机或处理器的供电而被擦除的存储器)或“永久性存储器”中。计算机硬盘驱动器、CD-ROM、软盘、便携式闪存驱动器和DVD都是永久性存储器的例子。随机存取存储器(RAM)是非永久性存储器的例子。永久存储器中的文件可以是可编辑和可重写的。

基本上任何电路都可以被配置成用于执行本文公开的方法的设备和系统内的功能布居。这样的电路的硬件架构，包括例如专门配置的计算机，是本领域技术人员公知的，并可包括硬件组件，包括一个或多个处理器(CPU)、随机存取存储器(RAM)、只读存储器(ROM)、内部或外部数据存储介质(例如，硬盘驱动器)。这样的电路也可以包含一个或多个图形板，用于处理图形信息并将其输出到显示机构。上述组件可经由电路内的总线适当地互连，例如在专用计算机内。所述电路还可以包括合适的接口用于与通用外部组件例如监视器、键盘、鼠标、网络等通信。在一些实施方式中，所述电路能够并行处理，或者可以是被配置用于并行或分布式计算的网络的一部分，以增加本方法和程序的处理能力。在一些实施方式中，从存储介质读出的程序代码可以写入在所述电路中插入的扩展板、或与所述电路连接的扩展单元中提供的存储器，并且所述扩展板或扩展单元中提供的CPU等可以根据编程的指令实际执行部分或全部操作，以完成所描述的功能。

除了本公开的装置和系统的组件、例如如上所述的组件之外，本公开的系统可以包括多个附加组件，例如数据输出装置例如监视器和/或扬声器，数据输入装置例如接口端口、键盘等，可致动组件，电源，等。

计算机可读介质

本公开包括计算机可读介质，包括非暂时性计算机可读介质，其存储用于本文描述的方法的指令。本公开的方面包括存储指令的计算机可读介质，所述指令当由计算装置执行时，使所述计算装置执行如本文所述的方法的一个或多个步骤。本公开的方面还包括参考值和/或参考特征，其可以储存在计算机可读介质上并且可以在执行一个或多个本文所述的方法时由计算装置进行访问。

在某些实施方式中，根据本文所述的方法的指令可以“编程”的形式被编码到计算机可读介质上，其中如本文所用的术语“计算机可读介质”是指参与向计算机提供指令和/或数据以供执行和/或处理的任何存储或传输介质。存储介质的例子包括软盘、硬盘、光盘、磁光盘，CD-ROM，CD-R，磁带，非易失性存储卡，ROM，DVD-ROM，蓝光盘，固态盘和网络附加存储(NAS)，无论这样的装置是在计算机的内部还是外部。含有信息的文件可以“储存”在计算机可读介质上，其中“储存”意味着记录信息，使得计算机在以后可以访问和检索该信息。

本文中所述的计算机实现的方法可以使用可用任何数量的计算机编程语言中的一种或多种编写的编程来执行。这样的语言包括，例如，Java(Sun Microsystems，Inc.，Santa Clara，CA)、Visual Basic(Microsoft Corp.，Redmond，WA)、和C++(AT&T Corp.，Bedminster，NJ)，以及其它许多。

提供以下实施例为了说明而不是为了限制。

实施例

实施例1：来自染色的空白载玻片的表征参数

处理空白载玻片，即不含样本的载玻片，以根据自动化载玻片制备装置中用于样本染色的正常组织学染色程序进行组织学染色。然后使用数字显微镜分析染色的空白载玻片。沿着每个载玻片的显微镜表面上的各种路径拍摄多个图像。使用软件处理图像以生成用于分析载玻片染色质量的各种参数。

提供了从三个不同的经染色空白载玻片(图11、图12和图13)和一个未染色的载玻片(图14)获得的示例性直方图。可以获得各种统计测量，如直方图所描绘，包括例如，平均强度值(对应于染色强度的量度)，对应于a的标准偏差(染色均匀度的量度；例如，更均匀染色的载玻片将通常具有较低的标准偏差值)，光透射率(“T”)(对应于相对透明度的量度(报告为透射百分比)，其可相对于对未染色的载玻片测量的基线透射率来确定；例如，染色较深的载玻片将通常具有较低的光透射值)。这些参数可以针对获取的彩色(例如，RBG)图像中的所有通道集体评估，或者可以针对一个或多个特定颜色通道(R，B，G，或其组合)个别评估。在本实施例中，将从染色的空白载玻片获得的参数与从未染色的空白载玻片获得的相应参数的参考值进行比较。

基于参数的比较和分析结果，控制自动化载玻片染色仪器的软件指示一个或多个试剂浴的一种或多种调节的必要性或触发所述调节，包括例如，排空浴、清洗浴、替换一种或多种试剂、补充一种或多种试剂等。

作为背景染色对测量的样本染色强度的影响的一个例子，在用甲醇清洁载玻片底部之前和之后对样本的相同染色细胞进行成像和分析(参见图15；左边是初始获得的图像和直方图以及右边是用甲醇清洗载玻片底部后获得的图像和直方图)。在组织学染色程序中，带有样本的载玻片在含有样本的表面和非样本(即“背面”或“底部”)表面上均染色。这两个表面都贡献了在分析的细胞中测量的染色强度。在图15中表现了背景贡献对染色的这种作用，无论是测量细胞核还是细胞质都会发生。初始的和背面清洁的载玻片之间的差异表示背表面背景对代表性细胞的测量染色强度的贡献。如本实施例中所证明的，通过连续几轮染色，试剂浴或缓冲液可能被过量的残留染色剂污染。因此，在某些时候，即使在载玻片的背面上，背景染色也会影响样本染色的强度。

实施例2：使用染色的空白载玻片鉴定条纹

处理空白载玻片，即不含样本的载玻片，以根据自动化载玻片制备装置中的正常组织学染色程序进行组织学染色。沿着染色的空白载玻片的长轴和短轴收集图像。图16中提供了鉴定了长轴(“长”)和短轴(“短”)的染色的空白载玻片的例子。沿着长轴和短轴各拍摄多个图像并将它们拼接在一起成为相应的蒙太奇图(例如，参见图17和图18)。从长轴和短轴中各自的拼接蒙太奇图像生成直方图，并用于鉴定条纹的存在。

为了进一步证明强度图在提供有关背景染色均匀度的信息和鉴定局部缺陷例如条纹和污迹的存在中的用途，将染色的空白载玻片并排排列，并沿载玻片的短轴拍摄强度分布图(图19)。拍摄强度分布图(1900)所沿着的路径(1901)在图19中指出。存在于载玻片上的局部缺陷(1902)在强度分布图中显示为可检测的变化(例如，峰)(1903)。因此，本实施例证明，通过获取染色的空白载玻片的图像，处理和分析图像沿着载玻片的轴的图像参数(例如，灰度值或强度)变化，可以自动化鉴定染色中的局部缺陷并且可以评估背景染色的均匀度。

虽然为了清楚理解的目的已经通过说明和示例较详细地描述了前述发明，但是根据本发明的教导，可以在不脱离所附权利要求的精神或范围的情况下对其进行某些改变和修改，对于本领域普通技术人员来说是显而易见的。

因此，前面仅说明了本发明的原理。应领会，本领域技术人员将能够设计出各种布置，其虽然未在本文中明确描述或显示，但体现了本发明的原理并且包括在其精神和范围内。此外，本文所列举的所有示例和条件性语言主要旨在帮助读者理解本发明的原理和发明人为推进本领域而贡献的概念，并且应被解释为不限于这样具体列举的示例和条件。此外，在本文中叙述本发明的原理、方面和实施例以及其具体示例的所有陈述旨在涵盖其结构和功能等同体。另外，意图这样的等同体包括当前已知的等同体和将来开发的等同体二者，即，开发的执行相同功能的任何元件，而不管结构如何。因此，本发明的范围不打算限于在本文中显示和描述的示例性实施方式。相反，本发明的范围和精神由所附权利要求体现。

Claims (32)

1.一种评估染色剂的方法；所述方法包括：

在所述染色剂中同时染色多个载玻片，其中所述多个载玻片包括至少一个样本载玻片和空白载玻片；

使用样本载玻片成像装置获取经染色的空白载玻片的数字彩色图像；

处理所述数字彩色图像以产生包含至少一个染色剂参数值的背景染色剂特征；以及

将所述背景染色剂特征与参考特征进行比较以评估所述染色剂，

其中所述参考特征是基于：

使用所述样本载玻片成像装置获取的未染色的载玻片的数字图像，和

用于参考空白载玻片的获得的一个或多个参数值，所述参考空白载玻片使用已知质量的染色剂制备。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一个染色剂参数值包括总染色强度值。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述处理包括将所述数字彩色图像分离成单独的颜色通道。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述至少一个染色剂参数值包括红色染色强度值。

5.根据权利要求1-2和4中任一项所述的方法，其中所述至少一个染色剂参数值包括绿色染色强度值。

6.根据权利要求1-2和4中任一项所述的方法，其中所述至少一个染色剂参数值包括蓝色染色强度值。

7.根据权利要求1-2和4中任一项所述的方法，其中所述获取包括获取经染色的空白载玻片的不同区域的多个数字彩色图像，并且所述处理包括处理所述多个数字彩色图像以产生背景染色剂特征，所述背景染色剂特征包含所述多个数字彩色图像中每一者的至少一个染色剂参数值。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述多个图像中每一者的所述至少一个染色剂参数值包括总染色强度值。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述染色剂参数值包括总染色均匀度值。

10.根据权利要求8-9中任一项所述的方法，其中所述处理包括将所述多个图像中的每一者分离成单独的颜色通道。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述多个图像中每一者的所述至少一个染色剂参数值包括红色染色强度值。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述染色剂参数值包括红色染色均匀度值。

13.根据权利要求11-12中任一项所述的方法，其中所述多个图像中每一者的所述至少一个染色剂参数值包括绿色染色强度值。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述染色剂参数值包括绿色染色均匀度值。

15.根据权利要求11-12和14中任一项所述的方法，其中所述多个图像中每一者的所述至少一个染色剂参数值包括蓝色染色强度值。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述染色剂参数值包括蓝色染色均匀度值。

17.根据权利要求8-9、11-12、14和16中任一项所述的方法，其中经染色的空白载玻片的所述不同区域是相邻的区域。

18.根据权利要求8-9、11-12、14和16中任一项所述的方法，其中经染色的空白载玻片的所述不同区域是不相邻的区域。

19.根据权利要求8-9、11-12、14和16中任一项所述的方法，其中经染色的空白载玻片的所述不同区域在沿着所述载玻片的中间的路径中。

20.根据权利要求1-2、4、8-9、11-12、14和16中任一项所述的方法，其中经染色的空白载玻片包括长轴和短轴。

21.根据权利要求20所述的方法，其中经染色的空白载玻片的所述不同区域在沿着所述载玻片的长轴的路径中。

22.根据权利要求20所述的方法，其中经染色的空白载玻片的所述不同区域在沿着所述载玻片的短轴的路径中。

23.根据权利要求20所述的方法，其中经染色的空白载玻片的所述不同区域包括沿着所述短轴的路径和沿着所述长轴的路径。

24.根据权利要求1-2、4、8-9、11-12、14、16和21-23中任一项所述的方法，其中进一步包括评估所述染色剂的质量。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述方法还包括输出关于所述染色剂质量是否超过预定阈值的结果。

26.根据权利要求1-2、4、8-9、11-12、14、16、21-23和25中任一项所述的方法，其中进一步包括评估所述染色剂中碎片的存在。

27.根据权利要求1-2、4、8-9、11-12、14、16、21-23和25中任一项所述的方法，其中进一步包括评估所述染色剂是否产生条纹。

28.一种控制染色剂质量的方法，所述方法包括：

根据权利要求24至27中的任一项所述的方法评估所述染色剂质量；

输出关于所述染色剂质量是否超过预定阈值的结果；以及

基于所述结果触发所述染色剂的调节。

29.根据权利要求28所述的方法，其中所述调节包括增加存在于染色浴中的所述染色剂的量。

30.根据权利要求28或29所述的方法，其中所述调节包括用所述染色剂的一种或多种组分补充所述染色剂。

31.根据权利要求28或29所述的方法，其中所述调节包括排空所述染色剂浴并替换所述染色剂。

32.根据权利要求31所述的方法，其中所述排空和替换还包括洗涤所述染色剂浴。

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