CN109983006A - 赖氨酰氧化酶样2抑制剂的结晶形式及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本文描述了赖氨酰氧化酶样2(LOXL2)抑制剂(3‑(4‑(氨基甲基)‑6‑(三氟甲基)吡啶‑2‑基氧基)苯基)((3R,4R)‑3‑氟‑4‑羟基吡咯烷‑1‑基)甲酮的药学上可接受的盐的结晶形式。还描述了制备该LOXL2抑制剂的方法，包含该LOXL2抑制剂的药物组合物和药物，以及使用该LOXL2抑制剂治疗与LOXL2活性相关的病况、疾病或病症的方法。
Description
交叉引用
本申请要求于2016年9月7日提交的名称为“CRYSTALLINE FORMS OF A LYSYLOXIDASE-LIKE 2 INHIBITOR AND METHODS OF MAKING”的美国临时专利申请62/384,596的权益，该美国临时专利申请通过引用整体并入本文。
技术领域
本文描述了赖氨酰氧化酶样2(LOXL2)抑制剂(3-(4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基氧基)苯基)((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮的结晶形式，其药学上可接受的盐、其溶剂化物，及其药物组合物，以及其用于治疗或预防与LOXL2活性相关的疾病或病况的方法。
背景技术
赖氨酰氧化酶样-2(LOXL2)是催化细胞外基质蛋白交联的胺氧化酶。LOXL2也参与细胞内加工，如介导细胞的上皮至间充质转换。例如，LOXL2信号传导与纤维化疾病和癌症有关。
发明内容
在一个方面，本文描述了(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮的药学上可接受的盐，其中该药学上可接受的盐是甲磺酸盐、盐酸盐、硫酸盐、马来酸盐、磷酸盐、L-酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐或乙酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是甲磺酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是盐酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是硫酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是马来酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是磷酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是L-酒石酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是富马酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是琥珀酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是乙酸盐。
在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐是甲磺酸盐，并具有化合物2的结构：
在一些实施方案中，化合物2是非晶形的。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的。在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在13.6°2-θ、16.9°2-θ、19.4°2-θ、20.1°2-θ、20.3°2-θ、20.6°2-θ、23.1°2-θ、23.6°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图1所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约231℃和约236℃处具有吸热；或者
(d)DSC热分析图与图2所示基本上相同；
(e)在0至90％RH之间的可逆吸水率(约2.1％w/w)；
(f)经GVS分析后XRPD未改变。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在13.6°2-θ、16.9°2-θ、19.4°2-θ、20.1°2-θ、20.3°2-θ、20.6°2-θ、23.1°2-θ、23.6°2-θ处具有特征峰。在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图1所示基本上相同。在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图在约231℃和约236℃处具有吸热。在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图与图2所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在2.6°2-θ、3.2°2-θ、6.3°2-θ、9.4°2-θ、15.7°2-θ、22.1°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图3所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约121.7℃、231.1℃和236.1℃处具有三个吸热；或者
(d)DSC热分析图与图4所示基本上相同；
(e)是无水的；
(f)当加热至150℃以上时转化为化合物2(1型)；
(g)在经GVS分析并在40℃/75％RH下7天后转化为化合物2(1型)；
(h)在25℃/97％RH下7天后转化为化合物2(1型)。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在2.6°2-θ、3.2°2-θ、6.3°2-θ、9.4°2-θ、15.7°2-θ、22.1°2-θ处具有特征峰。在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图3所示基本上相同。在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图在约121.7℃、231.1℃和236.1℃处具有三个吸热。在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图与图4所示基本上相同。在一些实施方案中，化合物2是结晶的且无水的。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在2.9°2-θ、3.2°2-θ、3.3°2-θ、15.8°2-θ、16.9°2-θ、20.2°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图5所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约132.2℃和238.8℃处具有两个吸热；
(d)DSC热分析图与图6所示基本上相同；
(e)与二甲基亚砜(DMSO)发生溶剂化；
(f)当加热至130℃以上时转化为化合物2(1型)；
(g)在经GVS分析并在40℃/75％RH下7天后转化为化合物2(1型)；
(h)在40℃和75％RH下7天后转化为化合物2(1型)。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在2.9°2-θ、3.2°2-θ、3.3°2-θ、15.8°2-θ、16.9°2-θ、20.2°2-θ处具有特征峰。在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图5所示基本上相同。在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图在约132.2℃和238.8℃处具有两个吸热。在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图与图6所示基本上相同。在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且与二甲基亚砜(DMSO)发生溶剂化。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在13.9°2-θ、16.6°2-θ、18.8°2-θ、19.1°2-θ、19.7°2-θ、19.9°2-θ、20°2-θ、21.2°2-θ、22.3°2-θ、22.7°2-θ、23.4°2-θ、23.8°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图7所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约233℃处具有吸热；或者
(d)DSC热分析图与图8所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在13.9°2-θ、16.6°2-θ、18.8°2-θ、19.1°2-θ、19.7°2-θ、19.9°2-θ、20°2-θ、21.2°2-θ、22.3°2-θ、22.7°2-θ、23.4°2-θ、23.8°2-θ处具有特征峰。在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图7所示基本上相同。在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图在约233℃处具有吸热。在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图与图8所示基本上相同。
在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐是盐酸盐，并具有化合物1的结构
在一些实施方案中，化合物1是非晶形的。在一些实施方案中，化合物1是非晶形的，并在40℃/75％RH下潮解。
在一些实施方案中，化合物1是结晶的。在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在5.5°2-θ、7.5°2-θ、18.5°2-θ、19.4°2-θ、21.8°2-θ、23.5°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图9所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约153℃处具有吸热；或者
(d)DSC热分析图与图10所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在5.5°2-θ、7.5°2-θ、18.5°2-θ、19.4°2-θ、21.8°2-θ、23.5°2-θ处具有特征峰。在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与9图所示基本上相同。在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其DSC热分析图在约153℃处具有吸热。在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其DSC热分析图与图10所示基本上相同。在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且是吸湿性固体。
在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在6.6°2-θ、13.2°2-θ、19.7°2-θ、22.3°2-θ、22.5°2-θ、23.7°2-θ、24.5°2-θ、26.4°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图11所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约43℃和约119℃处具有吸热；或者
(d)DSC热分析图与图12所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在6.6°2-θ、13.2°2-θ、19.7°2-θ、22.3°2-θ、22.5°2-θ、23.7°2-θ、24.5°2-θ、26.4°2-θ处具有特征峰。在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图11所示基本上相同。在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其DSC热分析图在约43℃和约119℃处具有吸热。在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其DSC热分析图与图12所示基本上相同。
在一个方面，本文描述了一种药物组合物，其包含上述实施方案中任一项的药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，该药物组合物被配制用于通过静脉内给药、皮下给药、口服给药、吸入、经鼻给药、皮肤给药或眼部给药而施用于哺乳动物。在一些实施方案中，该药物组合物被配制用于通过口服给药而施用于哺乳动物。在一些实施方案中，该药物组合物被配制用于以片剂、丸剂、胶囊、悬浮液或溶液的形式通过口服给药而施用于哺乳动物。在一些实施方案中，该药物组合物为固体形式药物组合物的形式。在一些实施方案中，该药物组合物为片剂、丸剂或胶囊的形式。在一些实施方案中，该药物组合物包含约1mg至约2000mg的(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮。在一些实施方案中，该药物组合物为片剂的形式，并且每片包含约50mg或约250mg的(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮。
在另一个方面，本文描述了一种合成(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮(化合物I)的方法，其包括以下步骤：在适当的腈还原条件下对具有以下结构的腈化合物A-7进行还原：
以得到(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮(化合物I)
在一些实施方案中，所述适当的腈还原条件包括催化氢化条件。
在一些实施方案中，所述催化氢化条件包括：钯催化剂、铂催化剂、铁催化剂、钴催化剂、镍催化剂、钌催化剂、铑催化剂、铱催化剂或锇催化剂；以及氢气。在一些实施方案中，该催化氢化条件包括：负载于活性炭、Al2O3、TiO2、ZrO2或SiO2上的钯催化剂或铂催化剂；以及氢气。在一些实施方案中，该催化氢化条件包括：乙酸、炭载氢氧化钯；以及氢气。
在一些实施方案中，腈化合物A-7
通过使苯甲酸化合物A-6
与(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇在适当的偶合条件下进行偶合来制备。
在一些实施方案中，适当的偶合条件包括：将苯甲酸化合物A-6转化为相应的酰氯；并且使相应的苯甲酸化合物A-6的酰氯与(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇进行偶合。
在一些实施方案中，将苯甲酸A-6转化为相应的酰卤包括用亚硫酰氯(SOCl2)、草酰氯((COCl)2)、三氯化磷(PCl3)、三氯氧磷(POCl3)或五氯化磷(PCl5)处理苯甲酸C。
在一些实施方案中，使相应的苯甲酸A-6的酰氯与(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇进行偶合包括使用非亲核叔胺碱。在一些实施方案中，非亲核叔胺为三乙胺、三丁胺、N,N-二异丙基乙胺、8-二氮杂双环十一碳-7-烯、1,2,2,6,6-五甲基哌啶、N-甲基吗啉或吡啶。
在一些实施方案中，适当的偶合条件包括：使用二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺·HCl(EDC HCl)、苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐(BOP)、苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基-鏻六氟磷酸盐(PyBOP)、溴-三吡咯烷基-鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)、7-氮杂-苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyAOP)、氰基(羟基亚氨基)乙酸乙酯基-O2)-三-(1-吡咯烷基)-鏻六氟磷酸盐(PyOxim)、3-(二乙氧基-磷酰氧基)-1,2,3-苯并[d]三嗪-4(3H)-酮(DEPBT)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基铵四氟硼酸盐/六氟磷酸盐(TBTU(BF4 -))、2-(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基六氟磷酸铵(HCTU)、N-[(5-氯-1H-苯并三唑-1-基)-二甲基氨基-吗啉基]-脲鎓六氟磷酸盐N-氧化物(HDMC)、2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基六氟磷酸铵(HATU)、1-[1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉基]-脲鎓六氟磷酸盐(COMU)、2-(1-氧基-吡啶-2-基)-1,1,3,3-四甲基异硫脲鎓四氟硼酸盐(TOTT)、四甲基氟代甲脒六氟磷酸盐(TFFH)、N-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)、2-丙烷膦酸酐(T3P)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓盐(DMTMM)、双-三氯甲基碳酸酯(BTC)或1,1′-羰基二咪唑(CDI)。在一些实施方案中，该适当的偶合条件进一步包括一种或多种选自下组的添加剂：1-羟基苯并三唑(HOBt)、1-羟基苯并三唑-6-磺酰胺基甲基树脂·HCl(HOBt-6-磺酰胺基甲基树脂·HCl)、羟基-3,4-二氢-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪(HOOBt)、N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)、1-羟基-7-氮杂-1H-苯并三唑(HOAt)、2-氰基-2-(羟基亚氨基)乙酸乙酯和4-(N,N-二甲基氨基)吡啶(DMAP)。
在一些实施方案中，苯甲酸A-6
通过使2-氯-6-(三氟甲基)异烟腈
与3-羟基苯甲酸
在适当的反应条件下进行偶合来制备。
在一些实施方案中，适当的反应条件包括亲核芳香族取代(SNAr)反应条件。在一些实施方案中，适当的反应条件包括在合适的溶剂中的有机碱或无机碱。在一些实施方案中，适当的反应条件包括选自氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢铯、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、乙酸钠、乙酸钾、磷酸钠和磷酸钾的无机碱；以及选自二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、四氢呋喃、四氟吡喃和二氧杂环己烷的合适的溶剂。
在另一些实施方案中，本文描述了一种合成(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮甲磺酸盐(化合物2)的方法，其包括以下步骤：在合适的溶剂中用甲磺酸处理化合物C：
以得到化合物2：
在一些实施方案中，所述合适的溶剂为二氯甲烷。
在一些实施方案中，化合物C
通过使苯甲酸化合物A
与(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐在适当的偶合条件下进行偶合来制备。
在一些实施方案中，适当的偶合条件包括：将苯甲酸化合物A转化为相应的酰氯；并且使相应的苯甲酸化合物A的酰氯与(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐进行偶合。
在一些实施方案中，将苯甲酸化合物A转化为相应的酰卤包括用亚硫酰氯(SOCl2)、草酰氯((COCl)2)、三氯化磷(PCl3)、三氯氧磷(POCl3)或五氯化磷(PCl5)处理苯甲酸化合物A。
在一些实施方案中，使相应的苯甲酸化合物A的酰氯与(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐进行偶合包括使用非亲核叔胺碱。在一些实施方案中，所述非亲核叔胺为三乙胺、三丁胺、N,N-二异丙基乙胺、8-二氮杂双环十一碳-7-烯、1,2,2,6,6-五甲基哌啶、N-甲基吗啉或吡啶。
在一些实施方案中，适当的偶合条件包括：使用二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺·HCl(EDC HCl)、苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐(BOP)、苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基-鏻六氟磷酸盐(PyBOP)、溴-三吡咯烷基-鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)、7-氮杂-苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyAOP)、氰基(羟基亚氨基)乙酸乙酯基-O2)-三-(1-吡咯烷基)-鏻六氟磷酸盐(PyOxim)、3-(二乙氧基-磷酰氧基)-1,2,3-苯并[d]三嗪-4(3H)-酮(DEPBT)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基铵四氟硼酸盐/六氟磷酸盐(TBTU(BF4 -))、2-(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基六氟磷酸铵(HCTU)、N-[(5-氯-1H-苯并三唑-1-基)-二甲基氨基-吗啉基]-脲鎓六氟磷酸盐N-氧化物(HDMC)、2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基六氟磷酸铵(HATU)、1-[1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉基]-脲鎓六氟磷酸盐(COMU)、2-(1-氧基-吡啶-2-基)-1,1,3,3-四甲基异硫脲鎓四氟硼酸盐(TOTT)、四甲基氟代甲脒六氟磷酸盐(TFFH)、N-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)、2-丙烷膦酸酐(T3P)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓盐(DMTMM)、双-三氯甲基碳酸酯(BTC)或1,1′-羰基二咪唑(CDI)。在一些实施方案中，该适当的偶合条件进一步包括一种或多种选自下组的添加剂：1-羟基苯并三唑(HOBt)、1-羟基苯并三唑-6-磺酰胺基甲基树脂·HCl(HOBt-6-磺酰胺基甲基树脂·HCl)、羟基-3,4-二氢-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪(HOOBt)、N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)、1-羟基-7-氮杂-1H-苯并三唑(HOAt)、2-氰基-2-(羟基亚氨基)乙酸乙酯和4-(N,N-二甲基氨基)吡啶(DMAP)。
在另一个方面，本文描述了一种合成(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮甲磺酸盐(化合物2)的方法，其包括以下步骤：在乙腈中用0.92当量的甲磺酸处理(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮(化合物I)，然后通过过滤分离化合物2并在真空下干燥。在一些实施方案中，在乙腈中用甲磺酸处理化合物I的步骤进一步包括在环境温度下搅拌该溶液，然后将该溶液回流。
在另一个方面，本文描述了一种合成(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐的方法，其包括：
(a)对外消旋-(反式-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)(苯基)甲酮进行酶生物催化，以得到((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)(苯基)甲酮；并且
(b)切割((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)(苯基)甲酮的酰胺键，以得到(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐。
在一些实施方案中，酶生物催化包括使用合适的脂肪酶。在一些实施方案中，该合适的脂肪酶能够进行脂肪酶催化的仲醇的酯交换反应。在一些实施方案中，该合适的脂肪酶为真菌脂肪酶或细菌脂肪酶。在一些实施方案中，该真菌脂肪酶来源于皱褶假丝酵母(Candida rugose)(CRL)、南极假丝酵母A(Candida antarctica A)(CAL-A)、南极假丝酵母B(Candida Antarctica B)(CAL-B)、疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)(TLIL)或米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)(RL IM)。在一些实施方案中，该细菌脂肪酶来源于荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)(AK,PFL)、洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderiacepacia)(PS)、粘性色杆菌(Chromobacterium viscosum)(CVL)。在一些实施方案中，该合适的脂肪酶为Novozyme 435、Novocor AD L和Lipozyme CALB L。在一些实施方案中，该脂肪酶催化的酯交换反应在酰基供体的存在下进行。在一些实施方案中，该酰基供体为不可逆酰基供体。在一些实施方案中，该酰基供体为烯醇酯或酸酐。在一些实施方案中，该烯醇酯为乙烯酯、异戊二烯酯或乙氧基乙烯酯。在一些实施方案中，该烯醇酯为选自下组的乙烯酯：乙酸乙烯酯、新戊酸乙烯酯、4-戊烯酸乙烯酯、巴豆酸乙烯酯、甲基丙烯酸乙烯酯、苯甲酸乙烯酯、肉桂酸乙烯酯、N-Boc甘氨酸乙烯酯和苯基(硫代)乙酸乙烯酯。在一些实施方案中，该酶生物催化在有机溶剂中进行。在一些实施方案中，该有机溶剂为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、丁醇、二乙醚、TBME、DIPE、甲苯、环己烷、己烷或庚烷。在一些实施方案中，该有机溶剂为丙酮、四氢呋喃、二乙醚、叔戊醇、DIPE或甲苯。
在一些实施方案中，步骤b)包括在合适的溶剂中用酸处理((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)(苯基)甲酮。在一些实施方案中，该酸为盐酸。在一些实施方案中，该合适的溶剂为有机溶剂。在一些实施方案中，该有机溶剂为醚溶剂。在一些实施方案中，该有机溶剂为1,4-二氧杂环己烷、四氢呋喃、四氢吡喃、二甲氧基乙烷或二乙醚。
上述方面中的任何方面是进一步的实施方案，其中将有效量的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐：(a)全身施用于哺乳动物；和/或(b)口服施用于哺乳动物；和/或(c)静脉内施用于哺乳动物；和/或(d)通过吸入施用；和/或(e)通过经鼻给药而施用；和/或(f)通过注射施用于哺乳动物；和/或(g)局部施用于哺乳动物；和/或(h)通过眼部给药而施用；和/或(i)经直肠施用于哺乳动物；和/或(j)非全身性地或局部地施用于哺乳动物。
上述方面中的任何方面是包括单次施用有效量的所述化合物的其他实施方案，包括这样的其他实施方案，其中将所述化合物每日一次施用于哺乳动物或将所述化合物在一天的时间段内多次施用于哺乳动物。在一些实施方案中，所述化合物依照连续给药时间表施用。在一些实施方案中，所述化合物依照连续每日给药时间表施用。
涉及疾病或病况的治疗的任何上述方面是这样的其他实施方案，其包括除了施用本文所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐之外还施用至少一种其他药剂。在各个实施方案中，各种药剂以任意次序施用，包括同时施用。
在本文公开的任何实施方案中，所述哺乳动物是人。
在一些实施方案中，将本文提供的化合物施用于人。
在一些实施方案中，口服施用本文提供的化合物。
提供了这样的制品，其包括包装材料，在该包装材料内的本文所述化合物或其药学上可接受的盐，以及标签，该标签指示该化合物或组合物或者其药学上可接受的盐、药学活性代谢物、药学上可接受的前药或药学上可接受的溶剂化物用于抑制LOXL2的活性，或用于治疗、预防或改善将会从LOXL2活性抑制或降低中受益的疾病或病况的一种或多种症状。
本文所述化合物、方法和组合物的其他目标、特征和优点通过以下详述将变得明显。然而，应当理解，详述和具体实施例尽管说明了具体实施方案，但仅以说明性方式给出，因为在本发明的精神和范围内的各种变化和修改通过该详述将对本领域技术人员变得明显。
附图说明
图1示出了化合物2的1型的X射线粉末衍射图谱。
图2示出了化合物2的1型的代表性DSC热分析图。
图3示出了化合物2的2型的X射线粉末衍射图谱。
图4示出了化合物2的2型的代表性DSC热分析图。
图5示出了化合物2的3型的X射线粉末衍射图谱。
图6示出了化合物2的3型的代表性DSC热分析图。
图7示出了化合物2的4型的X射线粉末衍射图谱。
图8示出了化合物2的4型的代表性DSC热分析图。
图9示出了化合物1的1型的X射线粉末衍射图谱。
图10示出了化合物1的1型的代表性DSC热分析图。
图11示出了化合物1的2型的X射线粉末衍射图谱。
图12示出了化合物1的2型的代表性DSC热分析图。
具体实施方式
赖氨酰氧化酶样-2(LOXL2)是赖氨酰氧化酶(LOX)家族的成员，该家族包括Cu2+和赖氨酸酪氨酰醌(tyrosylquinone)(LTQ)依赖性胺氧化酶。该家族包括五个基因：lox(LOX)、loxl1(赖氨酰氧化酶样-1，LOXL1)、loxl2(LOXL2)、loxl3(赖氨酰氧化酶样-3，LOXL3)和loxl4(赖氨酰氧化酶样-4，LOXL4)。已知LOX家族催化胶原蛋白和弹性蛋白中赖氨酸和羟基赖氨酸的ε-氨基的氧化脱氨，以促进这些分子的交联。胶原蛋白和弹性蛋白的交联对于维持细胞外基质的抗张强度而言是必不可少的。
病理性基质的发展在疾病中起重要作用。病理性基质由活化的基质细胞、胶原性基质、生长因子和血管发生结构组成。在诸如纤维发生等病理性状况期间，成纤维细胞被募集并活化，从而导致产生微环境，该微环境促进细胞外基质蛋白的合成和沉积增加，从而导致纤维化的发展。
在纤维化疾病和癌症中的疾病相关的成纤维细胞活化导致细胞外基质的重塑，这最终导致细胞外基质蛋白(包括I型和III型胶原蛋白)过度沉积、新沉积的胶原蛋白的交联增加以及组织硬度增强。此外，活化的成纤维细胞表达许多促血管发生、促血管生成和促增殖生长因子和细胞因子，如转化生长因子β(TGF-β)、结缔组织生长因子(CTGF)、基质细胞衍生因子1(SDF-1)和血管内皮生长因子(VEGF)，从而在疾病进展中的旁分泌信号传导中发挥重要作用。通过抑制成纤维细胞活化和募集和/或其信号传导途径来破坏该病理性基质的发展代表了针对纤维化疾病的新型治疗策略。
尽管具有类似的催化活性，但已报道每种赖氨酰氧化酶具有独特的表达和功能活性。通过活化并向病理部位募集成纤维细胞，LOXL2在纤维化疾病中的病理性基质发展中起关键作用。
已证明LOXL2除了在细胞外基质重塑中的作用之外还具有细胞内功能。LOXL2通过促进上皮至间充质转换(EMT)转导物——Snail1——的稳定性和功能活性而正面地调节Snail1。LOXL2对黏着斑激酶(FAK)信号传导途径的活化具有积极的贡献，并且参与黏着斑复合物的组织化。LOXL2基因的沉默导致上皮细胞极性的重新获取，并且降低乳腺细胞系的迁移和侵袭能力。已报道细胞粘附和细胞极性的调节是由细胞内LOXL2介导的。LOXL2通过依赖Snail1的和不依赖Snail1的机制在转录上阻抑E-钙粘蛋白以及紧密连接和细胞极性基因。最近描述LOXL2将与染色质缔合，并且报道其参与组蛋白H3三甲基脱氨，这是依赖于LOXL2催化域的功能。
LOXL2参与纤维化过程。纤维化过程包括细胞外基质组分如胶原蛋白的过度沉积，这改变了物理、生物化学和生物力学基质性质，从而导致器官功能缺陷和器官衰竭。组织纤维化也通过直接促进细胞转化和转移而与癌症进展相关。肿瘤一般比正常组织更硬，并且肿瘤硬度影响肿瘤转移。
过度LOXL2酶活性与肿瘤硬度增加有关。升高的LOXL2水平也与罹患Wilson病、原发性胆汁性肝硬化和NASH的患者的肝纤维化病变相关。另外，施用LOXL2特异性单克隆抗体AB0023在减轻纤维化模型中的疾病方面是有效的。显示AB0023抑制生长因子和交联的胶原性基质的产生以及TGF-β信号传导。
LOXL2促进I型胶原蛋白交联，并且是各种病因和各种器官中的纤维发生的核心调节物。循环LOXL2水平与纤维化阶段相关。LOXL2是纤维化疾病中的核心途径靶标。Mehal等人"Expressway to the core of fibrosis,"Nat Med.2011.17:552-553。
在一些实施方案中，本文公开了化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物在治疗或预防哺乳动物的纤维化中的用途。
如本文所用的“纤维化”是指在创伤、炎症、组织修复、免疫反应、细胞增生和瘤形成之后发生的细胞外基质成分的积累。
在一些实施方案中，本文公开了减少组织的纤维化的方法，该方法包括使纤维化细胞或组织与足以减少或抑制该纤维化的量的本文公开的化合物接触。在一些实施方案中，该纤维化包括纤维化病况。
一些实施方案中，所述纤维化包括肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、心脏纤维化、腹膜纤维化、眼纤维化、骨髓纤维化或皮肤纤维化。在一些实施方案中，所述纤维化包括肺纤维化。在一些实施方案中，所述纤维化包括肝纤维化。在一些实施方案中，所述纤维化包括肾纤维化。在一些实施方案中，所述纤维化包括心脏纤维化。在一些实施方案中，所述纤维化包括腹膜纤维化。在一些实施方案中，所述纤维化包括眼纤维化。在一些实施方案中，所述纤维化包括皮肤纤维化。
LOXL2表达增加与结肠肿瘤、食道肿瘤、口腔鳞状细胞癌、喉鳞状细胞癌和头颈鳞状细胞癌患者的不良预后相关。已经提出LOXL2参与乳腺癌、结肠癌、胃癌、头颈癌、肺癌和黑素瘤。
在一些实施方案中，本文公开了用本文公开的化合物治疗癌症的方法。
如本文所用的术语“癌症”是指倾向于以不受控的方式增殖并在一些情况下倾向于转移(扩散)的细胞异常生长。癌症的类型包括但不限于处于疾病的任何阶段的、有或没有转移的实体瘤(如膀胱、肠、脑、乳房、子宫内膜、心脏、肾、肺、肝、子宫、淋巴组织(淋巴瘤)、卵巢、胰腺或其他内分泌器官(甲状腺)、前列腺、皮肤(黑素瘤或基底细胞癌)的实体瘤)或血液肿瘤(如白血病和淋巴瘤)。
在一些实施方案中，本文公开了治疗哺乳动物中的类风湿性关节炎、幼年特发性关节炎、骨关节炎、银屑病关节炎或强直性脊柱炎的方法，该方法包括向有需要的哺乳动物施用化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2，或其药学上可接受的盐)。
(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基
吡咯烷-1-基)甲酮(化合物I)
“化合物I”或“(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮”或“(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)-吡啶-2-基)氧基)苯基)(3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮”或者任何其他类似名称是指具有以下结构的化合物：
在一些实施方案中，化合物I基本上不含(S,S)-异构体(即，化合物I基本上不含“(S,S)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮”或“(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)-吡啶-2-基)氧基)苯基)(3S,4S)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮”或者任何其他类似名称)。
与对映异构体关联使用的“基本上不含”意指所提及的对映异构体不存在，或者存在少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的所提及的对映异构体。
“化合物Ent-I”或“(S,S)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮”或“(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)-吡啶-2-基)氧基)苯基)(3S,4S)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮”或者任何其他类似名称是指具有以下结构的化合物：
在一些实施方案中，使用外消旋-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮代替化合物I。外消旋化合物I(化合物Rac-I)描述如下：
化合物I是有效的且基于机制的LOXL2抑制剂。化合物I是LOXL2的高亲和力、选择性、假不可逆的小分子抑制剂。在一些实施方案中，化合物I的氨基甲基吡啶部分与酶活性位点相互作用，以形成时间依赖性的、假不可逆的抑制性复合物。概况分析研究提示，化合物I的两种对映异构体(即(R,R)和(S,S))在药理学和药代动力学谱上彼此极为相似并且与外消旋化合物I极为相似。在体外试验中，化合物I比(S,S)-异构体更有效。在一些实施方案中，在体外试验中，化合物I的效力是(S,S)-异构体效力的不到2倍。
在一些实施方案中，化合物I特异性地抑制和/或结合LOXL2。在一些实施方案中，化合物I特异性地抑制和/或结合LOXL2，并且基本上不抑制和/或结合任何其他赖氨酰氧化酶。其他赖氨酰氧化酶包括LOX、LOXLl、LOXL3和LOXL4。在一些实施方案中，化合物I对LOXL2具有特异性。在一些实施方案中，化合物I抑制LOXL2的活性，并且基本上不抑制LOX的活性。在一些实施方案中，化合物I抑制LOXL2的活性，并且基本上不抑制另一种赖氨酰氧化酶样蛋白的活性。
如本文所用的，“选择性LOXL2抑制剂”是指LOXL2的小分子抑制剂，其基本上不抑制和/或结合任何其他赖氨酰氧化酶。其他赖氨酰氧化酶包括LOX、LOXL1、LOXL3和LOXL4。在一些实施方案中，选择性LOXL2抑制剂基本上不抑制和/或结合LOX或LOXL3。在一些实施方案中，选择性LOXL2抑制剂对LOXL2的选择性是对LOX的选择性的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、至少100倍、至少120倍、至少140倍、至少160倍、至少180倍、至少200倍、至少250倍、至少300倍、至少350倍、至少400倍、至少450倍、至少500倍、至少550倍、至少600倍、至少650倍、至少700倍、至少800倍、至少900倍或至少1000倍。在一些实施方案中，选择性LOXL2抑制剂对LOXL2的选择性是对LOX的选择性的至少400倍。在一些实施方案中，选择性LOXL2抑制剂对LOXL2的选择性是对LOXL3的选择性的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、至少100倍、至少120倍、至少140倍、至少160倍、至少180倍、至少200倍、至少250倍、至少300倍、至少350倍、至少400倍、至少450倍、至少500倍、至少550倍、至少600倍、至少650倍、至少700倍、至少800倍、至少900倍或至少1000倍。在一些实施方案中，选择性LOXL2抑制剂对LOXL2的选择性是对LOXL3的选择性的至少5倍。
在本文公开的任何实施方案(包括方法、用途、制剂、联合疗法等)中，化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物被替代为：a)更低手性纯度的化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物；b)任何光学纯度的“(S,S)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮”或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或者c)外消旋-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
关于化合物I的术语“药学上可接受的盐”是指化合物I的盐，其不会对施用它的哺乳动物产生显著刺激，并且基本上不会消除该化合物的生物活性和性质。Handbook ofPharmaceutical Salts:Properties,Selection and Use.International Union of Pureand Applied Chemistry,Wiley-VCH 2002。S.M.Berge,L.D.Bighley,D.C.Monkhouse,J.Pharm.Sci.1977,66,1-19。P.H.Stahl和C.G.Wermuth编著,Handbook ofPharmaceutical Salts:Properties,Selection and Use,Weinheim/Zürich:Wiley-VCH/VHCA,2002。相比于非离子型物质，药用盐通常在胃液和肠液中溶解度更大且溶解更迅速，因此其固体剂型是有用的。而且，因为其溶解度通常为pH的函数，所以在消化道的一个或另一个部分中的选择性溶出是可能的，并且这种能力可作为延迟和持续释放性质的一个方面而被操控。同样，因为成盐分子可以与中性形式平衡，所以可以调节生物膜通过。
应当理解，提及药学上可接受的盐包括溶剂加成形式(溶剂化物)。溶剂化物含有化学计量或非化学计量的量的溶剂，并且在采用药学上可接受的溶剂如水、乙醇、甲基叔丁基醚、异丙醇、乙腈、庚烷等的产物形成或分离过程中形成。在一个方面，使用但不限于3类溶剂来形成溶剂化物。溶剂的类别在例如人用药品注册技术要求国际协调会(theInternational Conference on Harmonization of Technical Requirements forRegistration of Pharmaceuticals for Human Use)(ICH),“Impurities:Guidelinesfor Residual Solvents,Q3C(R3),(2005年11月)中定义。当溶剂为水时形成水合物，或者当溶剂为醇时形成醇化物。在一个实施方案中，化合物I或其药学上可接受的盐的溶剂化物在制备化合物I或其药学上可接受的盐的过程中方便地制备或形成。此外，化合物I或其药学上可接受的盐以非溶剂化的形式存在。在一些实施方案中，化合物I或其药学上可接受的盐是水合的。
多种药学上可接受的盐由化合物I形成，并且包括：
-当用无机酸处理化合物I(即游离碱形式)时所形成的盐。无机酸包括但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸和偏磷酸；
-当用有机酸处理化合物I(即游离碱形式)时所形成的盐。有机酸包括但不限于：1-羟基-2-萘甲酸；2,2-二氯乙酸；2-羟基乙磺酸；2-氧代戊二酸；4-乙酰氨基苯甲酸；4-氨基水杨酸；乙酸；己二酸；抗坏血酸(L)；天冬氨酸(L)；苯磺酸；苯甲酸；樟脑酸(+)；樟脑-10-磺酸(+)；羊蜡酸(癸酸)；羊油酸(己酸)；羊脂酸(辛酸)；碳酸；肉桂酸；柠檬酸；环拉酸；十二烷基硫酸；乙烷-1,2-二磺酸；乙磺酸；甲酸；富马酸；半乳糖二酸；龙胆酸；葡庚糖酸(D)；葡糖酸(D)；葡糖醛酸(D)；谷氨酸；戊二酸；甘油磷酸；乙醇酸；马尿酸；异丁酸；乳酸(DL)；乳糖酸；月桂酸；马来酸；苹果酸(-L)；丙二酸；扁桃酸(DL)；甲磺酸；富马酸单甲酯；萘-1,5-二磺酸；萘-2-磺酸；烟酸；油酸；草酸；棕榈酸；帕莫酸；磷酸；丙酸；焦谷氨酸(-L)；水杨酸；癸二酸；硬脂酸；琥珀酸；硫酸；酒石酸(+L)；硫氰酸；甲苯磺酸(对位)；和十一碳烯酸。
化合物I的药学上可接受的盐包括盐酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、马来酸盐、磷酸盐、L-酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐或乙酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是盐酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是硫酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是甲磺酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是马来酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是磷酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是L-酒石酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是富马酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是琥珀酸盐。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是乙酸盐。
在一些实施方案中，将化合物I在溶剂中用硫酸处理以形成相应的硫酸盐。在一些实施方案中，将化合物I在溶剂中用磷酸处理以形成相应的磷酸盐。在一些实施方案中，将化合物I在溶剂中用L-酒石酸处理以形成相应的L-酒石酸盐。在一些实施方案中，将化合物I在溶剂中用柠檬酸处理以形成相应的柠檬酸盐。在一些实施方案中，该溶剂为乙腈或乙醇。
在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐是非晶形的。在一些实施方案中，该药学上可接受的盐是结晶的。
在一些实施方案中，将本文所述的化合物I制备为氯盐、硫酸盐、溴盐、甲磺酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐。在一些实施方案中，将本文所述的化合物I制备为盐酸盐。在一些实施方案中，将本文所述的化合物I制备为甲磺酸盐。
如本文所用，“MsO-”是甲磺酸根阴离子CH3S(O)2O-的缩写。
(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基
吡咯烷-1-基)甲酮盐酸盐(化合物1)
“化合物1”或“(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮盐酸盐”或“(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)-吡啶-2-基)氧基)苯基)(3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮盐酸盐”或者任何其他类似名称是指具有以下结构的化合物：
化合物1的(S,S)-对映异构体(化合物Ent-1)具有以下结构：
外消旋化合物1(化合物Rac-1)如以下所示：
非晶形化合物1
在一些实施方案中，化合物1是非晶形的。在一些实施方案中，化合物1的非晶相的XRPD图谱显示出缺乏结晶性。
非晶形化合物1在40℃/75％RH下潮解。
化合物1的1型
在一些实施方案中，化合物1是结晶的。在一些实施方案中，化合物1为结晶1型。在一些实施方案中，化合物1为结晶1型，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在5.5°2-θ、7.5°2-θ、18.5°2-θ、19.4°2-θ、21.8°2-θ、23.5°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图9所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约153℃处具有吸热；或者
(d)DSC热分析图与图10所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物1为结晶1型，并且至少具有选自(a)、(b)、(c)和(d)的性质。在一些实施方案中，化合物1为结晶1型，并且具有至少三种选自(a)、(b)、(c)和(d)的性质。在一些实施方案中，化合物1为结晶1型，并且具有性质(a)、(b)、(c)和(d)。
在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在5.5°2-θ、7.5°2-θ、18.5°2-θ、19.4°2-θ、21.8°2-θ、23.5°2-θ处具有特征峰。
在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图9所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其DSC热分析图在约153℃处具有吸热。
在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其DSC热分析图与图10所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物1为结晶1型，并且从四氢呋喃、乙酸乙酯、乙腈、二甲氧基乙烷或四氢呋喃/水(95:5)的溶液获得。
1型为吸湿性固体，当其在40℃/75％RH下储存一周时转化为2型。
化合物1的2型
在一些实施方案中，化合物1是结晶的。在一些实施方案中，化合物1为结晶2型。在一些实施方案中，化合物1为结晶2型，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在6.6°2-θ、13.2°2-θ、19.7°2-θ、22.3°2-θ、22.5°2-θ、23.7°2-θ、24.5°2-θ、26.4°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图11所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约43℃和约119℃处具有吸热；或者
(d)DSC热分析图与图12所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物1为结晶2型，并且至少具有选自(a)、(b)、(c)和(d)的性质。在一些实施方案中，化合物1为结晶2型，并且具有至少三种选自(a)、(b)、(c)和(d)的性质。在一些实施方案中，化合物1为结晶2型，并且具有性质(a)、(b)、(c)和(d)。
在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在6.6°2-θ、13.2°2-θ、19.7°2-θ、22.3°2-θ、22.5°2-θ、23.7°2-θ、24.5°2-θ、26.4°2-θ处具有特征峰。
在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图11所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其DSC热分析图在约43℃和约119℃处具有吸热。
在一些实施方案中，化合物1是结晶的，并且其DSC热分析图与图12所示基本上相同。
2型是热稳定的，但随时间推移转化为不适于制备的蜡状固体。
化合物1的合成
在一些实施方案中，通过使用遵循以下方案的手性分离的合成路线来制备化合物1：
方案1.通过手性分离的制备
如上述方案所示，在一些实施方案中，在适当的偶合条件下用外消旋反式-4-氟-3-羟基吡咯烷盐酸盐处理3-(4-((叔丁氧羰基氨基)甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基氧基)苯甲酸(化合物A)，得到外消旋-反式-((2-(3-(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物B)。
在一些实施方案中，适当的偶合条件包括使用EDC、DCC、BOP、HATU等。在一些实施方案中，该适当的偶合条件包括使用碱。在一些实施方案中，该碱为有机碱。在一些实施方案中，该碱为受阻碱，如三甲胺(TEA)、二异丙基乙胺(DIEA或DIPEA)、N-甲基吗啉、吡啶等。在一些实施方案中，该适当的偶合条件包括使用溶剂。合适的溶剂包括二氯甲烷、二氯乙烷、四氢呋喃、二甲氧基乙烷等。在一些实施方案中，适当的偶合条件包括在室温下在DCM/DMF中的HATU和DIEA。在一些实施方案中，使用适当的手性HPLC方法，将外消旋-反式-((2-(3-(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物B)分离为单独的对映异构体，得到(2-(3-((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲基氨基甲酸叔丁酯(化合物C)。在合适的溶剂中用合适的酸处理(2-(3-((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲基氨基甲酸叔丁酯(化合物C)，得到(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮盐酸盐(化合物1)。在一些实施方案中，该合适的酸为盐酸(HCl)、甲磺酸、三氟乙酸、苯磺酸或甲苯磺酸。在一些实施方案中，该合适的酸为盐酸(HCl)。在一些实施方案中，该合适的溶剂为二乙醚(Et2O)。
在一些实施方案中，通过遵循以下方案的合成路线来制备化合物1：
方案2.无需手性分离的化合物1制备。
如上述方案所示，在一些实施方案中，使2-氯-6-(三氟甲基)异烟腈(化合物A-1)经受适当的反应条件，以得到3-((4-氰基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物A-2)。在一些实施方案中，适当的反应条件包括亲核芳香族取代(SNAr)反应条件。亲核芳香族取代是其中亲核体替换芳环上的良好离去基团如卤化物基团的取代反应。在一些实施方案中，适当的反应条件包括在THF/DMF中的3-羟基苯甲酸甲酯与K2CO3。
形成芳族醚的方法包括本文所述或本领域所述的那些方法，包括但不限于UlmanEther合成、Chan-Lam偶合和Buchwald-Hartwig合成(D.Ma,Q.Cai,Org.Lett.,2003,5,3799-3802；C.G.Bates等人,Org.Lett.,2002,4,2803-2806；C.H.Burgos等人,Angew.Chem.Int.Ed.,2006,45,4321-4326；C.H.Burgos等人,Angew.Chem.Int.Ed.,2006,45,4321-4326；D.M.T.Chan等人,Tetrahedron Lett.,1998,39,2933-2936；Z.Liu,R.C.Larock,J.Org.Chem.,2006,71,3198-3209；Y.-J.Chen,H.-H.Chen,Org.Lett.,2006,8,5609-5612；F.Li,Q.等人,Org.Lett.,2003,5,2169-2171；D.A.Evans等人,TetrahedronLetters,1998,39,2937-2940；C.-E.Yeom等人,Synlett,2007,146-150)。
在一些实施方案中，在适当的反应条件下用CoCl2和NaBH4处理3-((4-氰基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物A-2)，得到3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物A-3)。在一些实施方案中，该适当的反应条件包括在0℃下的THF/MeOH。在一些实施方案中，用二碳酸二叔丁酯将3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物A-3)转化为3-((4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物A-4)。在一些实施方案中，通过用LiOH处理，将3-((4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物A-4)水解成相应的酸，即3-((4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸(化合物A-5)。在一些实施方案中，在适当的反应条件下，用(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐处理3-((4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸(化合物A-5)，得到((2-(3-((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物C)。在一些实施方案中，适当的反应条件包括在DCM/DMF中的HATU和DIPEA。在一些实施方案中，在适当的酸性反应条件下处理((2-(3-((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物C)，得到(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮盐酸盐(化合物1)。在一些实施方案中，适当的反应条件包括在DCM中的HCl/MTBE。
在一些实施方案中，化合物1的样品的纯度大于90％。在一些实施方案中，化合物1的样品的纯度大于95％、大于96％、大于97％、大于98％或大于99％。
在一些实施方案中，化合物1的样品具有大于90％的手性纯度。在一些实施方案中，化合物1的样品具有大于95％、大于96％、大于97％、大于98％或大于99％的手性纯度。
在一些实施方案中，化合物1的样品包含可检测量的化合物1的(S,S)-对映异构体。
在一些实施方案中，化合物1的样品含有少于5％的(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇。在一些实施方案中，化合物1的样品含有少于5％、4％、3％、2％或1％的(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇。
(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基
吡咯烷-1-基)甲酮甲磺酸盐(化合物2)
“化合物2”或“(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮甲磺酸盐”或“(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)-吡啶-2-基)氧基)苯基)(3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮甲磺酸盐”或者任何其他类似名称(例如化合物2，甲磺酸盐)是指具有以下结构的化合物：
化合物2的(S,S)-对映异构体(化合物Ent-2)具有以下结构：
外消旋化合物2(化合物Rac-2)如以下所示：
非晶形化合物2
在一些实施方案中，化合物2是非晶形的。在一些实施方案中，化合物2的非晶相的XRPD图谱显示出缺乏结晶性。
化合物2的1型
在一些实施方案中，化合物2是结晶的。在一些实施方案中，化合物2为结晶1型。在一些实施方案中，化合物2为结晶1型，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在13.6°2-θ、16.9°2-θ、19.4°2-θ、20.1°2-θ、20.3°2-θ、20.6°2-θ、23.1°2-θ、23.6°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图1所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约231℃和约236℃处具有吸热；或者
(d)DSC热分析图与图2所示基本上相同；
(e)在0至90％RH之间的可逆吸水率(约2.1％w/w)；
(f)经GVS分析后XRPD未改变。
在一些实施方案中，化合物2为结晶1型，并且至少具有选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶1型，并且具有至少三种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶1型，并且具有至少四种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶1型，并且具有至少五种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶1型，并且具有性质(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在13.6°2-θ、16.9°2-θ、19.4°2-θ、20.1°2-θ、20.3°2-θ、20.6°2-θ、23.1°2-θ、23.6°2-θ处具有特征峰。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图1所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图在约231℃和约236℃处具有吸热。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图与图2所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且在0至90％RH之间的可逆吸水率约为2.1％w/w。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且经GVS分析后XRPD未改变。
在一些实施方案中，化合物2为结晶1型，并且从乙醇或乙腈的溶液获得。
化合物2的2型
在一些实施方案中，化合物2是结晶的。在一些实施方案中，化合物2为结晶2型。在一些实施方案中，化合物2为结晶2型，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在2.6°2-θ、3.2°2-θ、6.3°2-θ、9.4°2-θ、15.7°2-θ、22.1°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图3所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约121.7℃、231.1℃和236.1℃处具有三个吸热；
(d)DSC热分析图与图4所示基本上相同；
(e)是无水的；
(f)当加热至150℃以上时转化为化合物2(1型)；
(g)在经GVS分析并在40℃/75％RH下7天后转化为化合物2(1型)；
(h)在25℃/97％RH下7天后转化为化合物2(1型)。
在一些实施方案中，化合物2为结晶2型，并且具有至少两种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)和(h)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶2型，并且具有至少三种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)和(h)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶2型，并且具有至少四种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)和(h)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶2型，并且具有至少五种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)和(h)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶2型，并且具有至少六种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)和(h)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶2型，并且具有至少七种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)和(h)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶2型，并且具有性质(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)和(h)。
2型在湿度下转化为1型。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在2.6°2-θ、3.2°2-θ、6.3°2-θ、9.4°2-θ、15.7°2-θ、22.1°2-θ处具有特征峰。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图3所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图在约121.7℃、231.1℃和236.1℃处具有三个吸热。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图与图4所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的并且是无水的。
在一些实施方案中，化合物2为结晶2型，并且从乙醇和正庚烷的溶液获得。
化合物2的3型
在一些实施方案中，化合物2是结晶的。在一些实施方案中，化合物2为结晶3型。在一些实施方案中，化合物2为结晶3型，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在2.9°2-θ、3.2°2-θ、3.3°2-θ、15.8°2-θ、16.9°2-θ、20.2°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图5所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约132.2℃和238.8℃处具有两个吸热；
(d)DSC热分析图与图6所示基本上相同；
(e)与二甲基亚砜(DMSO)发生溶剂化；
(f)当加热至130℃以上时转化为化合物2(1型)；
(g)在经GVS分析并在40℃/75％RH下7天后转化为化合物2(1型)；
(h)在40℃和75％RH下7天后转化为化合物2(1型)。
在一些实施方案中，化合物2为结晶3型，并且具有至少两种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)和(h)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶3型，并且具有至少三种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)和(h)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶3型，并且具有至少四种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)和(h)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶3型，并且具有至少五种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)和(h)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶3型，并且具有至少六种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)和(h)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶3型，并且具有至少七种选自(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)和(h)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶3型，并且具有性质(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)和(h)。
3型是DMSO溶剂化物。当将3型加热至130℃并在储存条件下时，XRPD变为1型，这可表明3型是转化为1型的亚稳态溶剂化物。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在2.9°2-θ、3.2°2-θ、3.3°2-θ、15.8°2-θ、16.9°2-θ、20.2°2-θ处具有特征峰。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图5所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图在约132.2℃和238.8℃处具有两个吸热。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图与图6所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且与二甲基亚砜(DMSO)发生溶剂化。
在一些实施方案中，化合物2为结晶3型，并且从二甲基亚砜(DMSO)和乙腈(MeCN)的溶液获得。
化合物2的4型
在一些实施方案中，化合物2是结晶的。在一些实施方案中，化合物2为结晶4型。在一些实施方案中，化合物2为结晶4型，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在13.9°2-θ、16.6°2-θ、18.8°2-θ、19.1°2-θ、19.7°2-θ、19.9°2-θ、20°2-θ、21.2°2-θ、22.3°2-θ、22.7°2-θ、23.4°2-θ、23.8°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图7所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约233℃处具有吸热；或者
(d)DSC热分析图与图9所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物2为结晶4型，并且至少具有选自(a)、(b)、(c)和(d)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶4型，并且具有至少三种选自(a)、(b)、(c)和(d)的性质。在一些实施方案中，化合物2为结晶4型，并且具有性质(a)、(b)、(c)和(d)。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在13.9°2-θ、16.6°2-θ、18.8°2-θ、19.1°2-θ、19.7°2-θ、19.9°2-θ、20°2-θ、21.2°2-θ、22.3°2-θ、22.7°2-θ、23.4°2-θ、23.8°2-θ处具有特征峰。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图7所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图在约233℃处具有吸热。
在一些实施方案中，化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图与图8所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物2为结晶4型，并且从化合物2在乙腈中的浆液中分离。
化合物2的合成
在一些实施方案中，通过如以下方案所示的合成路线来制备化合物2：
方案3.化合物2的制备。
如上述方案所示，使2-氯-6-(三氟甲基)异烟腈(化合物A-1)和3-羟基苯甲酸在适当的反应条件下进行反应，得到3-((4-氰基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸(化合物A-6)。在一些实施方案中，适当的反应条件包括亲核芳香族取代(SNAr)反应条件。亲核芳香族取代是其中亲核体替换芳环上的良好离去基团如卤化物基团的取代反应。在一些实施方案中，适当的反应条件包括使用在DMF中的Cs2CO3。
形成芳族醚的方法包括本文所描述或本领域所描述的那些方法，包括但不限于Ulman Ether合成、Chan-Lam偶合和Buchwald-Hartwig合成(D.Ma,Q.Cai,Org.Lett.,2003,5,3799-3802；C.G.Bates,等人,Org.Lett.,2002,4,2803-2806；C.H.Burgos等人,Angew.Chem.Int.Ed.,2006,45,4321-4326；C.H.Burgos等人,Angew.Chem.Int.Ed.,2006,45,4321-4326；D.M.T.Chan等人,Tetrahedron Lett.,1998,39,2933-2936；Z.Liu,R.C.Larock,J.Org.Chem.,2006,71,3198-3209；Y.-J.Chen,H.-H.Chen,Org.Lett.,2006,8,5609-5612；F.Li,Q.等人,Org.Lett.,2003,5,2169-2171；D.A.Evans等人,TetrahedronLetters,1998,39,2937-2940；C.-E.Yeom等人,Synlett,2007,146-150)。
在一些实施方案中，在适当的偶合条件下用(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐处理3-((4-氰基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸(化合物A-6)，得到2-(3-((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)异烟腈(化合物A-7)。
在一些实施方案中，适当的偶合条件包括使用EDC、DCC、BOP、HATU等。在一些实施方案中，该适当的偶合条件包括使用碱。在一些实施方案中，该碱为有机碱。在一些实施方案中，该碱为受阻碱，如三甲胺(TEA)、三乙胺(TEA)、二异丙基乙胺(DIEA)、N-甲基吗啉、吡啶等。在一些实施方案中，该适当的偶合条件包括使用溶剂。合适的溶剂包括二氯甲烷、二氯乙烷、四氢呋喃、二甲氧基乙烷等。
在一些实施方案中，适当的偶合条件包括使用二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺·HCl(EDC HCl)、苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐(BOP)、苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基-鏻六氟磷酸盐(PyBOP)、溴-三吡咯烷基-鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)、7-氮杂-苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyAOP)、氰基(羟基亚氨基)乙酸乙酯基-O2)-三-(1-吡咯烷基)-鏻六氟磷酸盐(PyOxim)、3-(二乙氧基-磷酰氧基)-1,2,3-苯并[d]三嗪-4(3H)-酮(DEPBT)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基铵四氟硼酸盐/六氟磷酸盐(TBTU(BF4 -))、2-(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基六氟磷酸铵(HCTU)、N-[(5-氯-1H-苯并三唑-1-基)-二甲基氨基-吗啉基]-脲鎓六氟磷酸盐N-氧化物(HDMC)、2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基六氟磷酸铵(HATU)、1-[1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉基]-脲鎓六氟磷酸盐(COMU)、2-(1-氧基-吡啶-2-基)-1,1,3,3-四甲基异硫脲鎓四氟硼酸盐(TOTT)、四甲基氟代甲脒六氟磷酸盐(TFFH)、N-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)、2-丙烷膦酸酐(T3P)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓盐(DMTMM)、双-三氯甲基碳酸酯(BTC)或1,1′-羰基二咪唑(CDI)。
在一些实施方案中，所述偶合反应包括一种或多种选自下组的添加剂：1-羟基苯并三唑(HOBt)、1-羟基苯并三唑-6-磺酰胺基甲基树脂·HCl(HOBt-6-磺酰胺基甲基树脂·HCl)、羟基-3,4-二氢-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪(HOOBt)、N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)、1-羟基-7-氮杂-1H-苯并三唑(HOAt)、2-氰基-2-(羟基亚氨基)乙酸乙酯和4-(N,N-二甲基氨基)吡啶(DMAP)。
在一些实施方案中，适当的反应条件包括两步法，包括首先将酸转化为酰卤，然后与(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐偶合。在一些实施方案中，用于将酸转化为酰卤的合适的试剂包括使用亚硫酰氯(SOCl2)、草酰氯((COCl)2)、三氯化磷(PCl3)、三氯氧磷(POCl3)和五氯化磷(PCl5)。通常通过添加催化量的二甲基甲酰胺(DMF)来促进这些反应。
用于将酸转化为酰卤的其他合适的试剂包括在三甲胺、三苯基膦(TPP)和氯来源(例如四氯化碳、三氯乙腈)以及四甲基-α-氯烯胺的存在下使用氰尿酰氯(2,4,6-三氯-1,3,5-三嗪)。
与酰氯的偶合反应通常需要使用另外的碱来捕获所形成的HCl。通常在非亲核叔胺(NEt3、iPr2NEt[也被称为Hunig碱]或N-甲基吗啉)的存在下在惰性无水溶剂中进行偶合。在一些实施方案中，用催化量的吡啶或N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)来加速该偶合反应。在一些情况下，使用吡啶作为溶剂。在一些实施方案中，使用金属锌还可在室温下加速该偶合。
在一些实施方案中，适当的反应条件包括在添加(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐之前用草酰氯预处理苯甲酸C。
在一些实施方案中，使2-(3-((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)异烟腈(化合物A-7)经受适当的还原条件，以得到3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮(化合物I)。用于将腈还原为胺的适当的腈还原条件是已知的(Nishimura,Shigeo(2001).Handbook ofHeterogeneous Catalytic Hydrogenation for Organic Synthesis(第1版).Wiley-Interscience.pp.254–277；March,Jerry(1985),Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure(第3版),Wiley)。
在一些实施方案中，适当的腈还原条件包括腈的催化氢化(Karsten等人,(2000).“Amines,Aliphatic".Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry)。作为使腈官能团氢化为相应的胺的催化剂，可以使用包含元素周期表的一种或多种过渡族元素例如但不限于铁、钴、镍、钌、铑、钯、铂、铱或锇的催化剂。该催化剂可掺杂有促进剂，该促进剂包括例如铬、铁、钴、锰、钼、钛、锡、碱金属族的金属、碱土金属族的金属和/或磷。
还考虑通过浸析(活化)氢化活性金属的合金和其他组分(例如铝)而获得的骨架催化剂(也被称为雷尼(Raney)型，即雷尼催化剂)。这类催化剂包括雷尼镍催化剂和雷尼钴催化剂。
在一些实施方案中，使用负载的钯或铂催化剂作为催化剂。在一些实施方案中，负载材料包括但不限于活性炭、Al2O3、TiO2、ZrO2和SiO2。
在一些实施方案中，所述催化氢化催化剂包括使用雷尼镍、钯黑或二氧化铂。还考虑其他催化剂，如硼化钴。
氢化的其他重要因素包括溶剂选择、溶液pH、空间效应、温度和氢化容器内氢的压力。
在一些实施方案中，适当的氢化条件包括AcOH 5％、Pd(OH)2/C和H2。
在一些实施方案中，用于将腈非催化转化为胺的非催化还原试剂包括氢化铝锂、硼氢化锂、乙硼烷或醇溶剂中的元素钠。
在一些实施方案中，在适当的反应条件下处理3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮(化合物I)，得到(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮甲磺酸盐(化合物2)。在一些实施方案中，适当的反应条件包括在ACN中稀释化合物I、缓慢添加甲磺酸(MSA)以及根据HPLC纯度调节MSA浓度。在一些实施方案中，将反应溶液在约20±5℃下老化约1小时，并加热至回流(约82℃-85℃)保持约2小时。在一些实施方案中，使混合物在室温下搅拌过夜，并重复加热循环3次以上直至符合DSC。
在一些实施方案中，通过如以下方案所示的合成路线来制备化合物2：
方案4.化合物2的备选制备。
如上述方案所示，在一些实施方案中，使(3-(4-((叔丁氧羰基)甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基氧基)苯甲酸)(化合物A)和((3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐((R,R)-FP)在适当的偶合条件下进行反应，得到((2-(3-((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物C)。适当的偶合条件如以上所述。在一些实施方案中，适当的偶合条件包括HATU、DIPEA和DCM/DMF。
在一些实施方案中，在适当的反应条件下用甲磺酸处理化合物C，得到(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮甲磺酸盐(化合物2)。在一些实施方案中，适当的反应条件包括在DCM中溶解化合物C、将该溶液转移至反应器中以及用DCM稀释。在一些实施方案中，充入甲磺酸，并将反应加热至回流，并搅拌过夜直至确认反应完成。在一些实施方案中，将所得浓稠白色浆状物用DCM稀释，冷却并过滤，并用甲基叔丁基醚(MTBE)冲洗。
在一些实施方案中，化合物2的样品的纯度大于90％。在一些实施方案中，化合物2的样品的纯度大于95％、大于96％、大于97％、大于98％或大于99％。
在一些实施方案中，化合物2的样品包含可检测量的至少一种以下化合物：
在一些实施方案中，化合物2的样品具有大于90％的手性纯度。在一些实施方案中，化合物2的样品具有大于95％、大于96％、大于97％、大于98％或大于99％的手性纯度。
在一些实施方案中，化合物2的样品包含可检测量的化合物2的(S,S)-对映异构体。
在一些实施方案中，化合物2的样品含有少于5％的(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇。在一些实施方案中，化合物2的样品含有少于5％、4％、3％、2％或1％的(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇。
结晶形式的制备
在一些实施方案中，“(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮的药学上可接受的盐(例如(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮盐酸盐或(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮甲磺酸盐)”的结晶形式如实施例中所概述的那样制备。值得注意的是，本文提出的溶剂、温度和其他反应条件可以不同。
合适的溶剂
必须通过遵循监管指南来制备可施用于哺乳动物如人的治疗剂。此类政府监管指南被称为良好生产规范(GMP)。GMP指南概述了活性治疗剂的可接受的污染水平，例如最终产品中残留溶剂的量。优选的溶剂为适合于在GMP设施中使用并符合工业安全关注问题的那些溶剂。溶剂的类别在例如人用药品注册技术要求国际协调会(ICH),“Impurities:Guidelines for Residual Solvents,Q3C(R3),(2005年11月)中定义。
将溶剂分为三类。第1类溶剂有毒，并应避免使用。第2类溶剂为在制备治疗剂期间有限使用的溶剂。第3类溶剂为具有低毒性且对人类健康风险较低的溶剂。第3类溶剂的数据表明它们在急性或短期研究中毒性较小，并且在遗传毒性研究中呈阴性。
应避免使用的第1类溶剂包括：苯、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、1,1-二氯乙烯和1,1,1-三氯乙烷。
第2类溶剂的实例为：乙腈、氯苯、氯仿、环己烷、1,2-二氯乙烯、二氯甲烷、1,2-二甲氧基乙烷、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、1,4-二氧杂环己烷、2-乙氧基乙醇、乙二醇、甲酰胺、己烷、甲醇、2-甲氧基乙醇、甲基丁基酮、甲基环己烷、N-甲基吡咯烷、硝基甲烷、吡啶、环丁砜、四氢化萘、甲苯、1,1,2-三氯乙烯和二甲苯。
具有低毒性的第3类溶剂包括：乙酸、丙酮、苯甲醚、1-丁醇、2-丁醇、乙酸丁酯，甲基叔丁基醚(MTBE)、枯烯、二甲基亚砜、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、甲酸乙酯、甲酸、庚烷、乙酸异丁酯、乙酸异丙酯、乙酸甲酯、3-甲基-1-丁醇、甲基乙基酮、甲基异丁基酮、2-甲基-1-丙醇、戊烷、1-戊醇、1-丙醇、2-丙醇、乙酸丙酯和四氢呋喃。
活性药物成分(API)中的残留溶剂源自API的制备。在一些情况下，通过实用制备技术无法完全去除该溶剂。适当选择用于合成API的溶剂可提高产率或者确定诸如晶形、纯度和溶解度等特性。因此，溶剂是合成过程中的关键参数。
在一些实施方案中，包含化合物I的盐的组合物包含有机溶剂。在一些实施方案中，包含化合物I的盐的组合物包含残留量的有机溶剂。在一些实施方案中，包含化合物I的盐的组合物包含残留量的第2类溶剂。在一些实施方案中，该第2类溶剂选自乙腈、氯苯、氯仿、环己烷、1,2-二氯乙烯、二氯甲烷、1,2-二甲氧基乙烷、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、1,4-二氧杂环己烷、2-乙氧基乙醇、乙二醇、甲酰胺、己烷、甲醇、2-甲氧基乙醇、甲基丁基酮、甲基环己烷、N-甲基吡咯烷、硝基甲烷、吡啶、环丁砜、四氢化萘、甲苯、1,1,2-三氯乙烯和二甲苯。在一些实施方案中，该第2类溶剂为二氯甲烷、乙腈和N,N-二甲基甲酰胺。在一些实施方案中，包含化合物I的盐的组合物包含残留量的第3类溶剂。在一些实施方案中，该有机溶剂为第3类溶剂。在一些实施方案中，该第3类溶剂选自乙酸、丙酮、苯甲醚、1-丁醇、2-丁醇、乙酸丁酯、甲基叔丁基醚、枯烯、二甲基亚砜、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、甲酸乙酯、甲酸、庚烷、乙酸异丁酯、乙酸异丙酯、乙酸甲酯、3-甲基-1-丁醇、甲基乙基酮、甲基异丁基酮、2-甲基-1-丙醇、戊烷、1-戊醇、1-丙醇、2-丙醇、乙酸丙酯和四氢呋喃。在一些实施方案中，该第3类溶剂选自乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、庚烷和丙酮。
在一些实施方案中，包含化合物I的盐的组合物包含可检测量的有机溶剂。在一些实施方案中，该化合物I的盐为盐酸盐(即化合物1)。在一些实施方案中，该化合物I的盐为甲磺酸盐(即化合物2)。在一些实施方案中，该有机溶剂为第2类溶剂。在一些实施方案中，该有机溶剂为第3类溶剂。
(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇
在一些实施方案中，如方案5所述制备(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇-盐酸盐。
方案5.(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐(化合物C6)的制备
在一些实施方案中，使用酶生物催化由外消旋(反式-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)(苯基)甲酮制备(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇。在一些实施方案中，该酶生物催化包括使用合适的脂肪酶。脂肪酶是生物催化中最常用的酶类别之一。它们已在多种底物上使用，并显示出非常广泛的底物特异性。脂肪酶催化三酰基甘油水解为二酰基甘油、单酰基甘油、甘油和游离脂肪酸。该反应在无水条件下逆转，并且酶能够通过酯化、醇解和酯交换来合成新的分子。所有反应均可在温和的反应条件下以高区域选择性和对映选择性来进行。
脂肪酶的合成应用利用其化学选择性、区域选择性和立体选择性。脂肪酶催化多官能化合物的区域选择性和化学选择性反应，其包括保护和脱保护技术。
脂肪酶催化的酯交换的立体选择性用于通过相应的外消旋物的动力学拆分制备对映体纯的醇。尽管对于羟基官能团而言脂肪酶催化得到维持，但在醇结构中接受其他官能团。与用伯醇或叔醇所观察到的相比，用仲醇获得的对映选择性通常很高。针对仲醇的脂肪酶催化指向直接附接至不对称中心的羟基官能团。
分别通过脂肪酶催化的酰化和醇解，在有机溶剂中进行仲醇和仲酯的动力学拆分。这导致形成一个作为醇的对映异构体以及另一个作为酯的对映异构体。每个对映异构体的最大理论产率为50％。
在酰基供体的存在下进行脂肪酶催化的醇拆分。在一些实施方案中，在准不可逆或不可逆的酰基供体的存在下进行脂肪酶催化的醇拆分。在一些实施方案中，在作为不可逆的酯交换试剂的烯醇酯的存在下进行脂肪酶催化的醇拆分。
准不可逆和不可逆的酰基供体属于活化的酰基供体，并且它们有助于提高酶促反应的速率。准不可逆酰基供体包括但不限于2,2,2-三氟乙基酯、氰基甲基酯和肟酯。不可逆酰基供体包括但不限于酸酐和烯醇酯。烯醇酯包括但不限于乙烯酯、异戊二烯酯和乙氧基乙烯酯。乙烯酯包括但不限于乙酸乙烯酯、新戊酸乙烯酯、4-戊烯酸乙烯酯、巴豆酸乙烯酯、甲基丙烯酸乙烯酯、苯甲酸乙烯酯、肉桂酸乙烯酯、N-Boc甘氨酸乙烯酯和苯基(硫代)乙酸乙烯酯。
当可逆酰基供体(烷基酯和硫酯)用于酰化时，可通过使用过量的酰基供体或通过去除反应混合物中形成的产物，将热力学平衡转向产物形成。
在一些实施方案中，所述酶促反应在有机溶剂中进行。在一些实施方案中，该有机溶剂为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、丁醇、二乙醚、TBME、DIPE、甲苯、环己烷、己烷或庚烷。在一些实施方案中，该有机溶剂为丙酮、四氢呋喃、乙醚、叔戊醇、DIPE或甲苯。在一些实施方案中，该有机溶剂为丙酮。
在合成反应中使用的脂肪酶通常来源于微生物。真菌脂肪酶包括皱褶假丝酵母(CRL)、南极假丝酵母A(CAL-A)、南极假丝酵母B(CAL-B)、疏棉状嗜热丝孢菌(TL IL)、米黑根毛霉(RL IM)。细菌脂肪酶包括荧光假单胞菌(AK,PFL)、洋葱伯克霍尔德菌(PS)、粘性色杆菌(CVL)。
脂肪酶包括南极假丝酵母脂肪酶B、洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶和疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶。酵母南极假丝酵母产生两种不同的脂肪酶，即A(CAL-A)和B(CAL-B)。这两种脂肪酶均已被纯化、表征，并且可以固定化形式获得。CAL-B是分子量为33kDa且pI为6.0的蛋白质。该酶在pH范围为3.5-9.5的水性介质中是稳定的。变性温度为50-60℃。最常用的CAL-B制品为Novozyme 435，其含有根据未公开的方案固定在大孔丙烯酸聚合物树脂上的酶。含有CAL-B的其他酶制品包括但不限于IMMCALB-T1-1500、IMMCALB-T2-150、IMMCALB-T2-350、IMMCALB-T3-150、IMMCALBY-T1-1500、IMMCALBY-T2-150、IMMCALBY-T2-350、IMMCALBY-T3-150。固定方法是在干燥的聚丙烯珠子上吸附或共价附接至干燥或湿润的丙烯酸珠子上。珠子的大小可以不同(150-300μm、350-700μm、<1500μm)。
洋葱伯克霍尔德菌(先前被命名为洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia))脂肪酶具有细菌来源。洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶是由320个氨基酸组成的蛋白质，分子量为33kDa。该脂肪酶可以游离形式(脂肪酶SL和脂肪酶AH)获得，通过吸附在硅藻土(PS-D)上而固定，或通过强吸附力固定在陶瓷Toyonite 200(PS-C II)上。
疏棉状嗜热丝孢菌(先前被命名为疏绵状毛腐质霉(Humicola lanuginose))脂肪酶具有真菌来源。该蛋白质具有30kDa的分子量和269个氨基酸。最适pH为11-12，并保持热稳定性直至55-60℃。疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶是商业制品的活性成分。来自疏棉状嗜热丝孢菌的脂肪酶制品包括Lipozyme TL IM(固定在二氧化硅上的脂肪酶)、IMMTLL-T1-1500(通过吸附在聚丙烯上而固定的脂肪酶)和IMMTLL-T2-150(共价固定在聚丙烯酸珠子上的脂肪酶)。
此外，已证明一种哺乳动物脂肪酶(猪胰腺(PPL))是有用的。
在一些实施方案中，预期用于本文的脂肪酶包括固定化脂肪酶。脂肪酶在固体载体上的固定化导致对生物催化有许多益处。固定化脂肪酶的优点包括：在非水溶剂中具有更好的性能，有效回收和分离反应产物，可以循环使用以节省成本，最大限度地减少产品的蛋白质污染，增强对热、有机溶剂或自溶的稳定性，对成本效益而言更高的催化剂生产力，以及便利性和更安全的操作。
固定化酶可用于酯的对映选择性拆分，使醇酰化以形成酯，敏感性底物的温和水解或酰化，通过外消旋醇的酯交换反应进行的动力学拆分，通过外消旋酯的水解进行的动力学拆分。
在有机溶剂中，脂肪酶以干燥形式使用，该干燥形式通过冻干获得，并且越来越多地通过固定化获得。使用固定化脂肪酶的优点是来源于异质催化作用的那些优点，如易于回收、可循环性和开发连续工艺的可能性。固定化用于增加在有机溶剂中的稳定性。此外，活性、底物特异性和对映选择性可通过固定化得到改善。可用于固定化的方法是在载体上吸附以及包封或共价附接至载体。酶的交联是基于在不使用载体的情况下形成共价键的固定化的具体情况。
在一些实施方案中，使用435作为通过外消旋醇C2的酯交换反应来进行动力学拆分的脂肪酶。435是固定在疏水载体(丙烯酸树脂)上的CALB脂肪酶。预期用于外消旋醇C2的拆分的其他脂肪酶包括AD L(来自南极假丝酵母A(CALA))和CALB L(来自南极假丝酵母B(CALB))。
在一些实施方案中，在丙酮中用乙酸乙烯酯和435处理外消旋醇C2，得到未反应的醇C3和酯C4。对醇C3和酯C4进行分离。在一些实施方案中，通过柱色谱法来分离醇C3和酯C4。
在一些实施方案中，通过使醇C3在丙酮中经受第二轮乙酸乙烯酯和435来提高醇C3的手性纯度。在确认反应完成后，对醇C3进行纯化。在一些实施方案中，通过柱色谱法来纯化C3醇。
然后对化合物C3的酰胺进行水解，以得到(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇。在一些实施方案中，在合适的溶剂中用酸处理化合物C3，以得到(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇。在一些实施方案中，该酸为盐酸。在一些实施方案中，该合适的溶剂为有机溶剂。在一些实施方案中，该有机溶剂为醚溶剂。在一些实施方案中，该有机溶剂为1,4-二氧杂环己烷、四氢呋喃、四氢吡喃、二甲氧基乙烷或二乙醚。在一些实施方案中，该有机溶剂为1,4-二氧杂环己烷。
某些术语
除非另有说明，否则在本申请中所用的下列术语具有以下给出的定义。术语“包括”以及其他形式如“包含”的使用是非限制性的。本文所用的章节标题仅用于组织的目的，而不应理解为限制所描述的主题。
如本文所用的，与制剂、组合物或成分有关的术语“可接受的”意指对所治疗的受试者的总体健康没有持续有害的影响。
如本文所用的术语“调节”意指与靶标直接或间接地相互作用，以改变该靶标的活性，仅举例而言，包括增强靶标的活性、抑制靶标的活性、限制靶标的活性或延伸靶标的活性。
如本文所用的术语“调节剂”是指与靶标直接或间接地相互作用的分子。该相互作用包括但不限于激动剂、部分激动剂、反向激动剂、拮抗剂、降解剂或其组合的相互作用。在一些实施方案中，调节剂为拮抗剂。在一些实施方案中，调节剂是降解剂。
如本文所用的，术语“施用”、“给药”及类似用语是指可用于使化合物或组合物能够递送至期望的生物作用部位的方法。这些方法包括但不限于口服途径、十二指肠内途径、肠胃外注射(包括静脉内、皮下、腹膜内、肌内、血管内或输注)、局部和经直肠给药。本领域技术人员熟悉可以与本文所述的化合物和方法一起使用的给药技术。在一些实施方案中，口服施用本文所述的化合物和组合物。
如本文所用的，术语“共同施用”或类似用语意在包括选定治疗剂向单个患者的施用，并且旨在包括通过相同或不同的给药途径或在相同或不同的时间施用药剂的治疗方案。
如本文所用的，术语“有效量”或“治疗有效量”是指所施用的药剂或化合物的足够量，该量将在一定程度上减轻所治疗的疾病或病况的一种或多种症状。结果包括疾病的指征、症状或病因的减轻和/或缓解，或生物系统的任何其他期望的变化。例如，用于治疗用途的“有效量”是对于提供疾病症状的临床显著减少所需的、包含本文公开的化合物的组合物的量。在任何单独情况下的适当的“有效”量任选地采用诸如剂量递增研究等技术进行确定。
如本文所用的，术语“增强”意指增加或延长所需效果的效力或持续时间。因此，就增强治疗剂的效果而言，术语“增强”是指在效力或持续时间方面增加或延长其他治疗剂对系统的效果的能力。如本文所用的“增强有效量”是指足以在所需的系统中增强另一种治疗剂的效果的量。
如本文所用的术语“药物组合”意指由多于一种活性成分混合或组合而产生的产物，并且其包括活性成分的固定和非固定组合。术语“固定组合”意指活性成分例如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐以及助剂(co-agent)均以单个实体或剂量的形式同时施用于患者。术语“非固定组合”意指活性成分例如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐以及助剂作为分开的实体同时、共同或者在没有特定间隔时间限制的情况下依次施用于患者，其中这样的施用在患者体内提供这两种化合物的有效水平。后者还适用于鸡尾酒疗法，例如，三种或更多种活性成分的施用。
术语“药盒”和“制品”作为同义词使用。
术语“受试者”或“患者”包括哺乳动物。哺乳动物的实例包括但不限于哺乳动物纲的任何成员：人，非人灵长类动物如黑猩猩，以及其他猿类和猴类；农场动物，如牛、马、绵羊、山羊、猪；家养动物，如兔、狗和猫；实验室动物，包括啮齿动物，如大鼠、小鼠和豚鼠，等等。在一个方面，该哺乳动物是人。
如本文所用的，术语“治疗”或“处理”包括预防性地和/或治疗性地缓解、缓和或改善疾病或病况的至少一种症状，预防其他症状，抑制疾病或病况，例如，阻止疾病或病况的发展、减轻疾病或病况、引起疾病或病况的消退、减轻由疾病或病况引起的状况，或终止疾病或病况的症状。
药物组合物/制剂
采用一种或多种生理学上可接受的载体以常规方式配制药物组合物，该载体包括赋形剂和助剂，其有利于将活性化合物加工成药学上使用的制剂。合适的技术、载体和赋形剂包括在例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第十九版(Easton,Pa.:Mack Publishing Company,1995)；Hoover,John E.,Remington’s PharmaceuticalSciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania 1975；Liberman,H.A.和Lachman,L.编著,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980；以及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,第七版.(LippincottWilliams&Wilkins1999)中所见的那些，这些文献通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，对于口服给药，通过将活性化合物与药学上可接受的载体或赋形剂进行组合来配制化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)。此类载体使化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)能够被配制成片剂、粉末、丸剂、锭剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、酏剂、浆液、悬浮液等，以供待治疗的患者口服摄取。在一些实施方案中，对于口服给药，在不将活性化合物与药学上可接受的载体或赋形剂进行组合的情况下配制化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)，并将其直接置于胶囊中以供向哺乳动物施用。
本文所述的药物组合物包含化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物包含化合物1。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物包含非晶形化合物1。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物包含结晶化合物1。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物包含化合物2。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物包含非晶形化合物2。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物包含结晶化合物2。
在一些实施方案中，本文所述的药物组合物包含：(a)化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)；以及以下一种或多种：(b)粘合剂；(c)崩解剂；(d)填充剂(稀释剂)；(e)润滑剂；(f)助流剂(流动增强剂)；(g)压片助剂；(h)颜料；(i)甜味剂；(j)防腐剂；(k)悬浮/分散剂；(l)成膜剂/包衣剂；(m)调味剂；(o)印刷油墨；(p)增溶剂；(q)碱化剂；(r)缓冲剂；(s)抗氧化剂；(t)泡腾剂。
在一些实施方案中，本文所述的药物组合物包含：(a)化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)；以及(b)胶囊壳。
在一些实施方案中，除化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)之外，本文所述的药物组合物还包含以下一种或多种：(a)硬脂酸镁；(b)乳糖；(c)微晶纤维素；(d)硅化微晶纤维素；(e)甘露醇；(f)淀粉(玉米)；(g)二氧化硅；(h)二氧化钛；(i)硬脂酸；(j)羟基乙酸淀粉钠；(k)明胶；(l)滑石；(m)蔗糖；(n)阿斯巴甜；(o)硬脂酸钙；(p)聚维酮；(q)预胶化淀粉；(r)羟丙基甲基纤维素；(s)OPA产品(包衣和油墨)；(t)交联羧甲纤维素；(u)羟丙基纤维素；(v)乙基纤维素；(w)磷酸钙(二碱式)；(x)交聚维酮；(y)虫胶(和釉)；(z)碳酸钠；(aa)羟丙甲纤维素。
在一个实施方案中，用于口服使用的药物制剂通过以下方法获得：将一种或多种固体赋形剂与一种或多种本文所述的化合物混合，任选地研磨所得混合物，并在添加合适的助剂(如果需要)后对颗粒混合物进行加工，以得到片剂。特别地，合适的赋形剂是填充剂，如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、微晶纤维素、硅化微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠；或其他赋形剂，如：聚乙烯吡咯烷酮(PVP或聚维酮)或磷酸钙。如果需要，添加崩解剂，如交联的交联羧甲纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐如海藻酸钠。
在一个实施方案中，将本文所述的药物组合物配制成任何合适的剂型，包括但不限于水性口服分散体、固体口服剂型、快速熔解制剂、泡腾制剂、冻干制剂、片剂、胶囊、丸剂、控制释放制剂、肠溶包衣片剂、吸入型粉末、吸入型分散体、IV制剂。
在进一步的实施方案中，本文提供的药物组合物可作为压制片剂、模印片剂、快速溶解片剂、多重压制片剂或者肠溶包衣片剂、糖衣片剂或薄膜衣片剂来提供。
药物剂型可以以多种方法来配制，并且可以提供多种药物释放曲线，包括立即释放、持续释放和延迟释放。在一些情况下，可能需要在药物施用后阻止药物释放，直至经过一定的时间(即定时释放)，以提供在预定的一段时间内基本上连续的释放(即持续释放)或提供在药物施用后的立即释放(即立即释放)。
在一些实施方案中，制剂提供治疗有效量的化合物I或其药物上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)，如果需要，使其能够例如每周一次、每周两次、每周三次，每周四次、每周五次、每隔一日一次、每日一次、每日两次(b.i.d.)或每日三次(t.i.d.)给药。在一个实施方案中，该制剂提供治疗有效量的化合物I或其药物上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)，使其能够每日一次给药。
在一个实施方案中，将化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)配制成立即释放形式，其提供每日一次给药。一般而言，人们希望施用一定量的化合物I或其药物上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)，其有效地达到与发现在体内有效的浓度相当的血浆水平，持续一段有效引发治疗效果的时间。
在一些实施方案中，将化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)和一种或多种赋形剂进行干混并压制成块状物，如片剂，其硬度足以提供在口服给药后少于约10分钟、少于约15分钟、少于约20分钟、少于约25分钟、少于约30分钟、少于约35分钟或少于约40分钟内基本上崩解的药物组合物，从而将化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)制剂释放到胃肠液中。
在一些实施方案中，本文提供的立即释放剂型的药物组合物能够释放不少于75％的治疗活性成分或组合，和/或满足包含在片芯中的特定治疗剂或组合的立即释放片剂的崩解或溶出要求，如在USP XXII,1990(美国药典)中所阐述的。立即释放药物组合物包括胶囊、片剂、丸剂、口服溶液、粉末、珠粒、丸粒、颗粒等。
药物组合物中使用的赋形剂应基于与化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)的相容性和所需剂型的释放曲线来选择。示例性赋形剂包括，例如粘合剂、悬浮剂、崩解剂、填充剂、表面活性剂、增溶剂、稳定剂、润滑剂、润湿剂、稀释剂等。
粘合剂赋予固体口服剂型制剂粘结性：对于粉末填充的胶囊制剂，它们有助于形成填充到软壳或硬壳胶囊中的塞状物(plug)，而对于片剂制剂，它们确保片剂在压片后保持完整并有助于在压片或填充步骤之前确保混合物均匀性。
在一些实施方案中，所述粘合剂选自淀粉、糖、聚维酮、纤维素或改性纤维素(如微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素)、乳糖或糖醇(如木糖醇、山梨糖醇或麦芽糖醇)。在一些实施方案中，该粘合剂为羟丙基甲基纤维素。在一些实施方案中，该粘合剂为羟丙甲纤维素(例如，Methocel E5)。
通常，在粉末填充的明胶胶囊制剂中使用20-70％的粘合剂水平。无论是直接压片、湿法制粒、辊压制粒还是使用其他赋形剂(如本身作为中等粘合剂的填充剂)，在片剂制剂中的粘合剂使用水平各不相同。
分散剂和/或粘度调节剂包括通过液体介质或制粒方法或混合方法来控制药物的扩散和均一性的材料。在一些实施方案中，这些试剂还有助于包衣或溶蚀性骨架的有效性。
稀释剂增加组合物的体积以有利于压片，或者对用于胶囊填充的均匀混合物产生足够的体积。
术语“崩解”包括当与胃肠液接触时剂型的溶解和分散。“崩解剂”促进物质的分解或崩解。在一些实施方案中，一方面，固体口服剂型包含最高15％w/w的崩解剂。在一些实施方案中，该崩解剂为交联羧甲基纤维素钠。在另一个方面，该崩解剂为羟基乙酸淀粉钠或交聚维酮。
填充剂包括诸如乳糖、碳酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、硫酸钙、微晶纤维素、纤维素粉、右旋糖、葡萄糖结合剂、葡聚糖、淀粉、预胶化淀粉、蔗糖、木糖醇、乳糖醇、甘露醇、山梨糖醇、氯化钠、聚乙二醇等化合物。
在一个方面，所述填充剂为乳糖(例如一水合物)。在另一个方面，该填充剂为甘露醇或磷酸二钙。在另一个方面，该填充剂为甘露醇、微晶纤维素、磷酸二钙或山梨糖醇。
胃肠液是受试者的胃分泌物的流体或在口服施用本文所述的组合物后受试者的唾液，或其等同物。“胃分泌物的等同物”包括，例如具有与胃分泌物类似的含量和/或pH的体外流体，如1％十二烷基硫酸钠溶液或0.1N HCl水溶液。此外，模拟肠液(USP)是pH 6.8的水性磷酸盐缓冲液体系。
润滑剂和助流剂是防止、减少或抑制材料的粘附或摩擦的化合物。在一个方面，固体口服剂型包含约0.25％w/w至约2.5％w/w的润滑剂。在另一方面，固体口服剂型包含约0.5％w/w至约1.5％w/w的润滑剂。
在一些实施方案中，本文所述的固体剂型为片剂(包括立即释放片剂、延长释放片剂、持续释放片剂、肠溶包衣片剂、悬浮片剂、快速溶解片剂、咬合崩解片剂、快速崩解片剂、泡腾片剂或囊片)、丸剂、粉末(包括无菌包装粉末、可分散粉末或泡腾粉末)、胶囊(包括软胶囊或硬胶囊，例如由动物来源的明胶或植物来源的HPMC制成的胶囊，或“撒布胶囊”)、固体分散体、多颗粒剂型、丸粒或颗粒剂的形式。
在其他实施方案中，所述药物制剂为粉末形式。在其他实施方案中，该药物制剂为片剂形式，包括但不限于立即释放片剂。另外，本文所述的药物制剂以单剂量或多剂量施用。在一些实施方案中，该药物制剂以两片、三片或四片片剂施用。
在一些实施方案中，通过将化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)与一种或多种药物赋形剂混合以形成块状混合物组合物来制备固体剂型，例如片剂、泡腾片剂和胶囊。当将这些块状混合物组合物称为均匀物时，这意味着化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)颗粒均匀地分散在整个组合物中，使得该组合物能够容易地被细分为等效的单位剂型，如片剂、丸剂或胶囊。在一个实施方案中，单个单位剂量还包含薄膜包衣，其在口服摄入时或在与稀释剂接触时崩解。在一个实施方案中，这些制剂通过常规技术来制备。
常规技术包括，例如以下方法中的一种方法或组合方法：(1)干混，(2)直接压片，(3)研磨，(4)干法或非水性制粒，(5)湿法制粒，或(6)熔融。参见，例如Lachman等人,TheTheory and Practice of Industrial Pharmacy(1986)。其他方法包括，例如喷雾干燥法、锅包衣法、熔融制粒、制粒、流化床喷雾干燥法或包衣法(例如，wurster包衣法)、切线包衣法、顶喷法、压片法、挤出法等。
压制片剂是通过压实以上所述块状混合物制剂而制备的固体剂型。在各个实施方案中，被设计为在口中溶解的压制片剂将包含一种或多种调味剂。在其他实施方案中，该压制片剂将包含围绕最终压制片剂的薄膜。在一些实施方案中，该薄膜包衣有助于患者的依从性(例如，包衣或糖衣)。包含的薄膜包衣通常在片剂重量的约1％至约5％范围内。在其他实施方案中，该压制片剂包含一种或多种赋形剂。
本文提供了薄膜包衣剂型的药物组合物，其包含活性成分或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药以及一种或多种压片赋形剂的组合，以使用常规压片工艺形成片芯，随后包覆该片芯。可使用常规制粒方法(例如湿法或干法制粒)来生产片芯，其中任选地将颗粒粉碎并随后进行压片和包衣。
本文进一步提供了肠溶包衣剂型的药物组合物，其包含活性成分或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药以及一种或多种用于肠溶包衣剂型的控制释放赋形剂的组合。该药物组合物还包含非控制释放赋形剂。
肠溶衣是抵抗胃酸作用但在肠中溶解或崩解的包衣。
在一个方面，本文公开的口服固体剂型包含肠溶衣。肠溶衣包含以下一种或多种：醋酸纤维素邻苯二甲酸酯；丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物；醋酸纤维素琥珀酸酯；羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯；醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯)；聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯(PVAP)；甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物；甲基丙烯酸共聚物、醋酸纤维素(及其琥珀酸酯和邻苯二甲酸酯形式)；苯乙烯马来酸共聚物；聚甲基丙烯酸/丙烯酸共聚物；羟乙基乙基纤维素邻苯二甲酸酯；醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯；醋酸纤维素四氢邻苯二甲酸酯；丙烯酸树脂；虫胶。
肠溶衣是涂在片剂、丸剂、胶囊、丸粒、珠粒、微粒、颗粒等上的包衣，使得它在到达小肠之前不溶解。
糖衣片剂是由糖衣包围的压制片剂，其可有益于掩盖令人讨厌的味道或气味并保护片剂免于氧化。
薄膜包衣片剂是覆盖有水溶性材料的薄层或薄膜的压制片剂。薄膜包衣包括但不限于羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇4000和醋酸纤维素邻苯二甲酸酯。薄膜包衣赋予与糖衣相同的一般特征。多重压制片剂是通过多于一个压片循环制成的压制片剂，包括分层片剂以及压制包衣片剂或干燥包衣片剂。在一些实施方案中，用水溶性的pH非依赖性的薄膜包衣包覆片剂，其允许立即崩解以便快速、有效释放(例如Opadry产品)。
在一些实施方案中，本文提供的药物组合物是控制释放剂型的形式。如本文所用的，术语“控制释放”是指当口服施用时，活性成分的释放速率或位置与立即释放剂型的释放速率或位置不同的剂型。控制释放剂型包括延迟释放、延长释放、延缓释放、持续释放、脉冲释放、改进释放、靶向释放、程序性释放。使用多种改进释放装置和方法来制备控制释放剂型的药物组合物，该装置和方法包括但不限于基质控制释放装置、渗透控制释放装置、多颗粒控制释放装置、离子交换树脂、肠溶衣、多层包衣及其组合。还可以通过改变颗粒大小来改变活性成分的释放速率。
与立即释放组合物相比，控制释放组合物允许根据预定的曲线在延长的一段时间内向人递送药剂。这样的释放速率可提供治疗有效水平的药剂达延长的一段时间，从而提供更长的药理学反应时间。这种更长的反应时间提供了许多固有益处，这些益处是相应的立即释放制剂所无法实现的。在一个方面，化合物I或其药学上可接受的盐的控制释放组合物提供治疗有效水平的化合物I达延长的一段时间，从而提供更长的药理学反应时间。
如本文所用的延迟释放是指这样的递送，使得释放可以在肠道中的一些通常可预测的位置处完成，该位置更远离在没有进行延迟释放改变时将完成释放的位置。在一些实施方案中，用于延迟释放的方法是包衣法。应将任何包衣施加至足够的厚度，使得整个包衣在低于约5的pH下不溶于胃肠液，但在高于约5的pH下溶于胃肠液。
在一些实施方案中，本文提供的药物组合物是使用基质控制释放装置制造的改进释放剂型(参见，Takada等人,“Encyclopedia of Controlled Drug Delivery,”第2卷,Mathiowitz ed.,Wiley,1999)。
在一个实施方案中，使用溶蚀性骨架质装置来配制本文提供的改进释放剂型的药物组合物，该溶蚀性骨架装置是吸水膨胀的、易蚀的或可溶的聚合物，包括合成聚合物以及天然存在的聚合物和衍生物，如多糖和蛋白质。
在一些实施方案中，基质控制释放体系包括肠溶衣，使得药物不会在胃中释放。
本文提供的药物组合物可以以单位剂量形式或多剂量形式来提供。如本文所用的，单位剂量形式是指适合施用于人和动物受试者并且如本领域已知的那样单独包装的物理上离散的单位。每个单位剂量含有足以与所需的药物载体或赋形剂组合产生所需治疗效果的预定量的活性成分。单位剂量形式的实例包括单独包装的片剂和胶囊。单位剂量形式可按其分数或倍数施用。多剂量形式是包装在单个容器中的以分开的单位剂量形式施用的多个相同的单位剂量形式。多剂量形式的实例包括片剂瓶或胶囊瓶。
在其他实施方案中，将包含本文所述化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)制剂的粉末配制成包含一种或多种药物赋形剂和调味剂。另外的实施方案还包含悬浮剂和/或润湿剂。将这种块状混合物均匀地细分为单位剂量包装或多剂量包装单位。术语“均匀”意指在包装过程中基本上保持块状混合物的均一性。
在其他实施方案中，制备泡腾粉末。已经使用泡腾盐来将药物分散在水中以供口服给药。泡腾盐是在干燥混合物中含有药剂的颗粒或粗粉，其通常由碳酸氢钠、柠檬酸和/或酒石酸组成。
制备本文所述的泡腾颗粒的方法采用三种基本工艺：湿法制粒、干法制粒和熔融法。该熔融方法用于制备大多数商业泡腾粉末。应当注意的是，尽管这些方法旨在用于制备颗粒，但在一个实施方案中，根据片剂制备技术，也可将本文所述的泡腾盐制剂制备成片剂。
在一个实施方案中，可口服使用的药物组合物包括由明胶制成的推入配合(push-fit)胶囊以及由明胶和塑化剂如甘油或山梨糖醇制成的密封软胶囊。在一个实施方案中，该推入配合胶囊含有与诸如乳糖的填充剂、诸如淀粉的粘合剂和/或诸如滑石或硬脂酸镁的润滑剂以及可选的稳定剂混合的活性成分。在一个实施方案中，该推入配合胶囊仅含有活性成分而不含其他非活性成分。在一个实施方案中，在软胶囊中，该活性化合物可溶解于或悬浮于合适的液体如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇中。此外，在一个实施方案中，添加稳定剂。在其他实施方案中，将制剂置于撒布胶囊中，其中该胶囊可整个吞服或者在进食前将该胶囊打开并将内容物撒在食物上。
用于口服给药的所有制剂应该是适于此类给药的剂量。
在一些实施方案中，提供了包含化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)和至少一种分散剂或悬浮剂的药物制剂，以供向受试者口服给药。在一个实施方案中，该制剂是用于悬浮的粉末和/或颗粒，并且在与水混合时获得基本上均匀的悬浮液。
当悬浮液大部分均匀时，即当悬浮液在整个悬浮液中的任何一点均由大约相同浓度的化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)组成时，该悬浮液是“基本上均匀的”(USP第905章)。
用于口服给药的液体制剂剂型是水性悬浮液或非水性悬浮液。
用于口服给药的液体制剂剂型是选自但不限于药学上可接受的水性口服分散体、乳液、溶液和糖浆的水性悬浮液。参见，例如，Singh等人,Encyclopedia ofPharmaceutical Technology,第2版,pp.754-757(2002)。除包含化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)之外，该液体剂型还包含添加剂，如：(a)崩解剂；(b)分散剂；(c)润湿剂；(d)防腐剂；(e)增粘剂；(f)甜味剂；(g)调味剂；(h)增溶剂(生物利用度增强剂)。
在一个实施方案中，如以上USP第905章所定义，本文所述的水性悬浮液和分散体保持均匀状态至少4小时。
液体组合物说明性地采用液体形式，其中药剂(例如化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2))存在于溶液、悬浮液或两者中。在一个实施方案中，该液体组合物是水性的。
液体组合物说明性地采用液体形式，其中药剂(例如化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2))存在于溶液、悬浮液或两者中。在一个实施方案中，该液体组合物是非水的。
在一个实施方案中，所述水性悬浮液还含有一种或多种聚合物作为悬浮剂。有用的聚合物包括水溶性聚合物如纤维素聚合物(例如，羟丙基甲基纤维素)和水不溶性聚合物如交联的含羧基聚合物。在一个实施方案中，有用的组合物还包含粘膜粘着聚合物，其选自例如羧甲基纤维素、卡波姆(丙烯酸聚合物)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚丙烯酰胺、聚卡波非、丙烯酸/丙烯酸丁酯共聚物、海藻酸钠和葡聚糖。
在一个实施方案中，药物组合物还包含一种或多种pH调节剂或缓冲剂，包括酸，如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱，如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、碳酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠和三羟甲基氨基甲烷；以及缓冲液，如柠檬酸盐/右旋糖、碳酸钠、碳酸氢钠和氯化铵。这类酸、碱和缓冲剂的含量是将组合物的pH维持在可接受范围内所需的量。
在一个实施方案中，液体药物组合物还包含使组合物的重量摩尔渗透压浓度达到可接受的范围所需的量的一种或多种盐。这类盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯离子、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐；合适的盐包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。
在一个实施方案中，药物组合物还包含一种或多种防腐剂以抑制微生物活性。
其他组合物包含一种或多种表面活性剂以增强物理稳定性或用于其他目的。合适的非离子表面活性剂包括聚氧化乙烯脂肪酸甘油酯和植物油，例如聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油；和聚氧化乙烯烷基醚和烷基苯基醚，例如辛苯昔醇10、辛苯昔醇40。
其他组合物包含一种或多种抗氧化剂以在需要时增强化学稳定性。仅举例而言，合适的抗氧化剂包括抗坏血酸、生育酚和焦亚硫酸钠。
在一个实施方案中，将水性组合物包装在不可重新封闭的单剂量容器中。或者，使用可重新封闭的多剂量容器，在这种情况下，通常在组合物中包含防腐剂。
在一些实施方案中，水性药物组合物不包含防腐剂，并且在制备后24小时内使用。
在一些实施方案中，水性药物组合物包含一种或多种增溶剂，其有助于提高活性药物成分的生物利用度。在一些实施方案中，该增溶剂选自Labrasol、Lutrol(大粒凝胶、泊洛沙姆)和本领域已知的其他增溶剂。
本文所述的口服药物溶液有益于向婴儿(小于2岁)、10岁以下的儿童和任何无法吞咽或摄取固体口服剂型的患者群体给药。
在一个实施方案中，对于颊部或舌下给药，所述组合物采用以常规方式配制的片剂、锭剂或凝胶的形式(参见例如美国专利4,229,447；4,596,795；4,755,386；和5,739,136)。
在一个实施方案中，用合适的包衣制备糖锭芯。为达到该目的，使用浓缩的糖溶液，其任选地含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆(carbopol)凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。在一个实施方案中，将染料或颜料添加至片剂或糖锭包衣中，以用于标识或表征活性化合物剂量的不同组合。
应当理解，即使在同一制剂中，许多载体和赋形剂也可发挥多种作用。
在一些实施方案中，将化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)配制成适合于吸入/经鼻递送的药物组合物的形式。在一些实施方案中，该药物组合物为溶液、悬浮液、乳液、胶体分散体、喷雾剂、干粉、气雾剂或其组合的形式。在一些实施方案中，该药物组合物包含至少一种通常用于经鼻/可吸入药物组合物的药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，使用雾化器、吹入器、喷雾器、汽化器或定量吸入器施用该药物组合物。在一些实施方案中，该药物组合物经鼻吸入或口服吸入。在一些实施方案中，在该药物组合物中使用结晶化合物1。在一些实施方案中，在该药物组合物中使用结晶化合物2。在一些实施方案中，在该药物组合物中使用非晶形化合物1。在一些实施方案中，在该药物组合物中使用非晶形化合物2。
代表性的经鼻/吸入制剂描述于例如Ansel,H.C.等人,Pharmaceutical DosageForms and Drug Delivery Systems,第6版(1995)；REMINGTON:THE SCIENCE ANDPRACTICE OF PHARMACY,第21版,2005。
在一些实施方案中，将化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)配制成鼻喷雾剂、鼻薄雾剂等形式。
对于吸入给药，将化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)配制成用作气雾剂、薄雾剂或粉末。
在一些实施方案中，使用合适的推进剂，以气雾剂喷雾呈现的形式从加压包装或喷雾器中方便地递送适合于经鼻/吸入给药的药物组合物。可将用于吸入器或吹入器的胶囊和药筒配制为包含本文所述化合物和合适的粉末基底如乳糖或淀粉的粉末混合物。
在一些实施方案中，所述药物组合物是用于经鼻/吸入递送至哺乳动物的粉末形式。在一些实施方案中，粉末包含化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)的微粒化和/或纳米大小的颗粒，将其与防止聚集的较大载体颗粒进行混合。例如，在一个实施方案中，如下制备干粉制剂：将化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)进行喷射研磨。将乳糖进行喷射研磨，并将这两种成分混合，并将最终混合物包装在无菌吹入器中。在一些情况下，本文所述的粉末可吸入制剂包含化合物1的结晶颗粒。在一些情况下，本文所述的粉末可吸入制剂包含化合物2的结晶颗粒。在一些实施方案中，本文所述的粉末可吸入制剂包含化合物1的非晶形颗粒。在一些实施方案中，本文所述的粉末可吸入制剂包含化合物2的非晶形颗粒。
剂量
在某些实施方案中，化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)的有效量为约1mg至约2.5g/剂、1mg至约2g/剂、约1mg至约1.5g/剂、约1mg至约1g/剂、约5mg至约600mg/剂或约50mg至约250mg/剂。在一些实施方案中，化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)的有效量为约1mg至约5g/天、约5mg至约2g/天、约5mg至约1g/天、约5mg至约0.6g/天或约5mg至约0.5g/天。
在一些实施方案中，化合物I的有效量为约50mg/剂、约100mg/剂、约150mg/剂、约200mg/剂、约250mg/剂、约300mg/剂、约350mg/剂、约400mg/剂、约450mg/剂、约500mg/剂、约550mg/剂、约600mg/剂、约650mg/剂、约700mg/剂、约750mg/剂、约800mg/剂、约850mg/剂、约900mg/剂、约950mg/剂、约1000mg/剂、约1050mg/剂、约1100mg/剂、约1150mg/剂、约1200mg/剂、约1250mg/剂、约1300mg/剂、约1350mg/剂、约1400mg/剂、约1450mg/剂、约1500mg/剂、约1550mg/剂、约1600mg/剂、约1650mg/剂、约1700mg/剂、约1750mg/剂、约1800mg/剂、约1850mg/剂、约1900mg/剂、约1950mg/剂或约2000mg/剂。
在一些实施方案中，口服药物溶液包含约6mg/mL至约63mg/mL的化合物2。在一些实施方案中，口服药物溶液包含约1mg/mL至约100mg/mL的化合物2。在一些实施方案中，口服药物溶液包含约1mg/mL至约100mg/mL的化合物1。
在一个方面，片剂包含约5％w/w至约50％w/w的化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)。在一些实施方案中，立即释放片剂包含约5％w/w至约40％w/w的化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)。在一些实施方案中，立即释放片剂包含约5％w/w、约10％w/w、约15％w/w、约20％w/w、约25％w/w、约30％w/w、约33％w/w、约35％w/w、约40％w/w的化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)。
在一些实施方案中，胶囊仅包含化合物I或其药学上可接受的盐(例如化合物1或化合物2)和胶囊壳。
给药方法和治疗方案
在一个实施方案中，化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物制备用于治疗哺乳动物中将会从LOXL2活性的抑制或降低中受益的疾病或病况的药物。在需要这种治疗的哺乳动物中治疗本文所述的任何疾病或病况的方法包括以治疗有效量向所述哺乳动物施用包含化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物、活性代谢物、前药的药物组合物。
在某些实施方案中，施用含有本文所述化合物的组合物以用于预防性和/或治疗性治疗。在某些治疗性应用中，将组合物以足以治愈或至少部分阻止疾病或病况的至少一种症状的量施用于已经患有该疾病或病况的患者。对该用途有效的量取决于疾病或病况的严重程度和进程、既往治疗、患者的健康状况、体重和对药物的反应以及治疗医师的判断。任选地通过包括但不限于剂量递增和/或剂量范围临床试验的方法来确定治疗有效量。
在预防性应用中，将含有化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的组合物施用于易患特定疾病、病症或病况或以其他方式处于其风险下的患者。将这样的量定义为“预防有效量或剂量”。在该用途中，精确的量还取决于患者的健康状况、体重等。当用于患者时，用于该用途的有效量将取决于疾病、病症或病况的严重程度和进程、既往治疗、患者的健康状况和对药物的反应以及治疗医师的判断。在一个方面，预防性治疗包括向哺乳动物(该哺乳动物之前经历过待治疗的疾病的至少一种症状并且目前正在缓解中)施用包含化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的药物组合物，以便预防疾病或病况的症状的复发。
在患者的状况没有改善的某些实施方案中，根据医生的判断，长期施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物，即持续延长的一段时间，包括患者的整个生命期，以便缓解或以其他方式控制或限制患者的疾病或病况的症状。
在患者的状况得到改善的某些实施方案中，将所施用的药物的剂量暂时减少或暂时中止某一段时间(即，“休药期”)。在具体的实施方案中，休药期的长度为2天到1年，仅举例而言，包括2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天或多于28天。仅举例而言，休药期期间剂量减少10％-100％，仅举例而言，包括10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％和100％。
一旦患者的病况出现改善，如有必要，施用维持剂量。随后，在具体的实施方案中，根据症状的变化，将给药剂量或频率或两者降低至该改善的疾病、病症或病况得以保持的水平。然而，在某些实施方案中，在任何症状复发时，患者需要长期的间歇治疗。
在一个方面，向需要用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物进行治疗的人每天施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，每日一次施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，每日两次施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，每日三次施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，每隔一日施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，每周两次施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
通常，用于治疗人类中本文所述疾病或病症的化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的剂量通常在约0.1mg至约10mg/kg体重/剂的范围内。在一个实施方案中，所需的剂量方便地以单剂量或以分剂量呈现，该分剂量同时(或在较短的一段时间内)施用或以适当的间隔施用，例如每天2、3、4个或更多个亚剂量。在一些实施方案中，化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物方便地以分剂量呈现，该分剂量每日一次同时(或在较短的一段时间内)施用。在一些实施方案中，化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物方便地以分剂量呈现，该分剂量每日两次以等份施用。
在一些实施方案中，化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物以约0.1mg至约10mg/kg体重/剂的剂量口服施用于人。在一些实施方案中，依照连续每日给药时间表将化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物施用于人。
术语“连续给药时间表”是指以规律的间隔施用特定治疗剂。在一些实施方案中，连续给药时间表是指以规律的间隔施用特定治疗剂而没有任何特定治疗剂的休药期。在其他一些实施方案中，连续给药时间表是指循环施用特定治疗剂。在其他一些实施方案中，连续给药时间表是指在药物施用循环中施用特定治疗剂，随后为特定治疗剂的休药期(例如，清除期或其他不施用药物的这一段时间)。例如，在一些实施方案中，该治疗剂的施用是每日一次、每日两次、每日三次、每周一次、每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次、每周七次、每隔一日一次、每隔三日一次、每隔四日一次、每天一次持续一周随后一周不施用治疗剂、每天一次持续两周随后一或两周不施用治疗剂、每天一次持续三周随后一周、两周或三周不施用治疗剂、每天一次持续四周随后一周、两周、三周或四周不施用治疗剂、每周一次施用治疗剂随后一周不施用治疗剂、每两周一次施用治疗剂随后两周不施用治疗剂。在一些实施方案中，每日施用是每天一次。在一些实施方案中，每日施用是每天两次。在一些实施方案中，每日施用是每天三次。在一些实施方案中，每日施用是每天超过三次。
术语“连续每日给药时间表”是指每天在大致相同的时间每天施用特定治疗剂。在一些实施方案中，每日施用是每天一次。在一些实施方案中，每日施用是每天两次。在一些实施方案中，每日施用是每天三次。在一些实施方案中，每日施用是每天超过三次。
在一些实施方案中，每日一次施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的量。在其他一些实施方案中，每日两次施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的量。在其他一些实施方案中，每日三次施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的量。
在未观察到人类疾病或病况的状态得到改善的某些实施方案中，增加化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的每日剂量。在一些实施方案中，将每日一次给药时间表改为每日两次给药时间表。在一些实施方案中，采用每日三次给药时间表来增加所施用的化合物I或其药物上可接受的盐或溶剂化物的量。在一些实施方案中，增加吸入给药的频率，以便更规律地提供重复高Cmax水平。在一些实施方案中，增加给药频率，以便提供维持的或更规律的对化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的暴露。在一些实施方案中，增加给药频率，以便更规律地提供重复高C max水平，并提供维持的或更规律的对化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的暴露。
上述任何方面是这样的进一步的实施方案，其中将有效量的化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物：(a)全身施用于哺乳动物；和/或(b)口服施用于哺乳动物；和/或(c)静脉内施用于哺乳动物；和/或(d)通过注射施用于哺乳动物；和/或(e)局部施用于哺乳动物；和/或(f)非全身性地或局部地施用于哺乳动物。
上述任何方面是包括单次施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的进一步的实施方案，包括这样的进一步的实施方案，其中(i)化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物每日施用一次；或者(ii)将化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物在一天的时间段内多次施用于哺乳动物。
上述任何方面是包括多次施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的进一步的实施方案，包括这样的进一步的实施方案，其中(i)化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物连续或间歇地施用：如以单剂量施用；(ii)多次施用之间的时间为每6小时；(iii)每8小时向哺乳动物施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物；(iv)每12小时向哺乳动物施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物；(v)每24小时向哺乳动物施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在进一步的或替代的实施方案中，所述方法包括休药期，其中暂时中止化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的施用或暂时减少所施用的化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的剂量；在休药期结束时，恢复化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的给药。在一个实施方案中，休药期的长度从2天到1年不等。
通常，用于成人治疗的剂量通常在1mg-5000mg/天的范围内。在一些实施方案中，用于成人治疗的剂量为约1mg至约4000mg/天、约150mg至约4000mg/天或约150mg至约2000mg/天。在一些实施方案中，向成人施用50mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg、1050mg、1100mg、1150mg、1200mg、1250mg、1300mg、1350mg、1400mg、1450mg、1500mg、1550mg、1600mg、1650mg、1700mg、1750mg、1800mg、1850mg、1900mg、1950mg或2000mg的化合物I。在一些实施方案中，所需的剂量方便地以单剂量或以分剂量呈现，该分剂量同时施用或以适当的间隔施用，例如每天2、3、4个或更多个亚剂量。
在一些实施方案中，基于与单个治疗方案有关的多个变量，每日剂量或在剂型中的活性物质的量比本文指出的范围更低或更高。在各个实施方案中，每日剂量和单位剂量根据多个变量而改变，该变量包括但不限于待治疗的疾病或病况、给药模式、受试个体的需求、所治疗的疾病或病况的严重程度、该人的特征(例如，体重)和所施用的其他特定治疗剂(如果适用)以及执业医师的判断。
此类治疗方案的毒性和治疗功效通过在细胞培养物或实验动物中的标准药学程序来确定，包括但不限于LD50和ED50的确定。毒性效果与治疗效果之间的剂量比为治疗指数，并且将其表示为LD50与ED50之间的比值。在某些实施方案中，使用从细胞培养试验和动物研究中获得的数据来制定用于包括人类在内的哺乳动物的治疗有效的每日剂量范围和/或治疗有效的单位剂量。在一些实施方案中，化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的每日剂量处于包括具有最小毒性的ED50的循环浓度的范围内。在某些实施方案中，每日剂量范围和/或单位剂量根据采用的剂型和使用的给药途径在该范围内变化。
在一些实施方案中，施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的大鼠的7日NOAEL为至少约200、300、400、500、600、700、800、900或1000mpk。在一些实施方案中，施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的犬的7日NOAEL为至少约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300和至多500mpk。
联合治疗
在某些情况下，将化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物与一种或多种其他治疗剂联合施用或联合配制是合适的。
药盒和制品
本文描述了用于治疗与LOXL2活性相关的病况、疾病或病症的药盒，其包括向所述个体施用化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
为了在本文描述的治疗应用中使用，本文还描述了药盒和制品。在一些实施方案中，这样的药盒包括载具、包装或被区室化为接纳一个或多个容器如小瓶、管等的容器，每个容器包含将在本文所述的方法中使用的一个单独要素。合适的容器包括，例如，瓶、小瓶、注射器和试管。容器可由诸如玻璃或塑料的多种材料形成。
本文提供的制品含有包装材料。药物包装材料的实例包括但不限于泡罩包装、瓶、管、吸入器、泵、袋、小瓶、容器、注射器、瓶和适于所选制剂以及预期给药和治疗方式的任何包装材料。考虑了本文提供的化合物和组合物的宽范围的制剂，其用于对任何病症的多种治疗，这些病症通过抑制LOXL2而获益，或者其中LOXL2是症状或病因的介导物或贡献者。
所述容器任选地具有无菌进入口(例如，该容器可以是静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。这样的药盒任选地包含化合物以及关于其在本文所述方法中的应用的标识性描述或标签或说明。
药盒通常会包括一个或多个附加容器，每个附加容器具有从商业和用户角度考虑对于使用本文所述化合物而言所需要的一种或多种不同材料(诸如试剂，任选地为浓缩形式，和/或装置)。这样的材料的非限制性实例包括但不限于缓冲液、稀释剂、过滤器、针、注射器；载具、包装、容器、小瓶和/或管标签(列出内容物)和/或使用说明，以及具有使用说明的包装插页。通常也将会包括一组说明。
在一些实施方案中，标签处于容器上或与容器相关联。当构成标签的字母、数字或其他字符附着、模制或蚀刻在容器本身上时，该标签可处于该容器上；当标签存在于也容纳容器的接纳器或载具内(例如作为包装插页)时，该标签可与该容器相关联。可使用标签来指示内容物将用于具体治疗应用。标签也可指示关于内容物例如在本文所述方法中的使用的指导。
在某些实施方案中，包含化合物I或其药学上可接受的盐或溶剂化物的药物组合物在可含有一个或多个单位剂量形式的包装或分配器装置中提供。例如，该包装可包含金属箔或塑料箔，例如泡罩包装。该包装或分配器装置可伴随有给药说明。该包装或分配器也可伴随有由监管药物制造、使用或销售的政府机构所规定形式的、与容器相关联的公告，该公告反映出该机构批准该药物形式用于人类或兽医给药。这样的公告例如可为由美国食品和药品管理局批准用于处方药物的标记或已批准的产品插页。还可制备含有在相容性药物载体中配制的本文提供的化合物的组合物，将该组合物置于适当容器中，并标出用于治疗所示出的病况。
应当理解，如本文使用的，被描述为包含本文所述的药学上可接受的盐(例如，液体溶液)的药物组合物包括含有该盐的缔合和/或解离形式的药物组合物。因此，例如，本文所述的含有化合物2水溶液的药物组合物包括含有甲磺酸根阴离子群和(2-(3-((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲铵阳离子群的组合物。
实施例
提供以下实施例仅仅是为了说明目的，而并非限制此处提供的权利要求的范围。
实施例1：通过手性分离制备化合物1
如下所示通过手性分离制备化合物1和化合物Ent-1。
步骤1：外消旋-反式-((2-(3-(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(B)
如下建立两个单独的相等反应批次：向化合物A(750mg，1.82mmol)在DCM/DMF混合物(3:1，11mL)中的搅拌溶液中添加HATU(1.0g，2.63mmol)，并将混合物在室温下搅拌20min。添加外消旋-反式-4-氟-3-羟基吡咯烷盐酸盐(Synthonix；304mg，2.14mmol)和DIEA(938mg，7.27mmol)，并将混合物在室温下搅拌2.5h。此刻将两个反应批次合并，并减压蒸发DCM。将剩余的反应混合物在水(200mL)与EtOAc(200mL)之间分配。将有机层分离，干燥(Na2SO4)，过滤，然后减压浓缩。将粗残余物纯化(硅胶；用在己烷中的10-100％EtOAc洗脱)，得到呈白色固体的化合物B(1.58g，87％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ7.60(m,1H),7.47–7.56(m,2H),7.36–7.44(m,2H),7.31(m,1H),7.14(s,1H),5.56(m,1H),4.93(m,1H),4.10–4.30(m,3H),3.45–3.90(m,4H),1.38(s,9H)；LCMS质量:522.0(M++Na)。
步骤2：(R,R)-反式-((2-(3-(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(C)和(S,S)-反式-((2-(3-(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(D)
通过手性HPLC分离(手性Pak ADH，250x 20mm，5μm柱，用10％MeOH:异丙醇(1:1)和90％己烷(含0.1％DEA)进行等度洗脱，流速18mL/min)由化合物B(300mg，0.60mmol)得到化合物C(102mg)和化合物D(88mg)，其中化合物C先洗脱出来，化合物D第二个洗脱出来。
化合物C：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.59(m,1H),7.47–7.56(m,2H),7.35–7.45(m,2H),7.31(m,1H),7.16(s,1H),5.56(m,1H),4.94(m,1H),4.25–4.30(m,2H),4.17(m,1H),3.45–3.90(m,4H),1.39(s,9H)；LCMS质量:500.0(M++1)。手性HPLC分析：Rt＝11.84min(手性Pak ADH，250x 4.6mm，5μm柱，在25min内用10％MeOH:EtOH(1:1)和90％己烷(含0.1％DEA)进行等度洗脱；流速1.0mL/min)。
化合物D：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.59(m,1H),7.47–7.56(m,2H),7.35–7.45(m,2H),7.31(m,1H),7.16(s,1H),5.56(m,1H),4.95(m,1H),4.25–4.30(m,2H),4.17(m,1H),3.45–3.90(m,4H),1.39(s,9H)；LCMS质量:500.0(M++1)。手性HPLC分析：Rt＝14.71min(手性Pak ADH，250x 4.6mm，5μm柱，在25min内用10％MeOH:EtOH(1:1)和90％己烷(含0.1％DEA)进行等度洗脱；流速1.0mL/min)。
步骤3：(S,S)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮盐酸盐(化合物Ent-1)
如下制备标题化合物(化合物Ent-1)(77mg，100％)：在室温下，将化合物D溶解在DCM(27mL)中。添加在Et2O中的2M HCl(9.69mL，19.38mmol)，并将混合物在室温下搅拌18h。另外添加在Et2O中的2M HCl(9mL，18.0mmol)，并将混合物另外搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到标题化合物(88mg，0.176mmol)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.61(br s,3H),7.84(s,1H),7.51–7.57(m,2H),7.43(m,1H),7.28–7.37(m,2H),5.57(br m,1H),4.95(m,1H),4.12–4.30(br m,3H),3.30–3.92(m,4H)；LCMS质量:400.0(M++1)。
步骤4：(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮盐酸盐(1)
如下制备标题化合物(化合物1)(89mg，100％)：在室温下，将化合物D溶解在DCM(27mL)中。添加在Et2O中的2M HCl(9.69mL，19.38mmol)，并将混合物在室温下搅拌18h。另外添加在Et2O中的2M HCl(9mL，18.0mmol)，并将混合物另外搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到标题化合物(102mg，0.204mmol)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.61(br s,3H),7.84(s,1H),7.51–7.57(m,2H),7.43(m,1H),7.28–7.37(m,2H),5.62(br m,1H),4.95(m,1H),4.12–4.30(br m,3H),3.30–3.92(m,4H)；LCMS质量:400.0(M++1)。
实施例2：用对映体纯的(R,R)-4-氟-3-羟基吡咯烷盐酸盐制备化合物1
如下所示使用对映体纯的(R,R)-4-氟-3-羟基吡咯烷盐酸盐合成化合物1。使用相同的方法，由(S,S)-4-氟-3-羟基吡咯烷盐酸盐制备化合物Ent-1。
步骤1：3-((4-氰基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物A-2)
向2-氯-6-(三氟甲基)异烟腈(化合物A-1)(4.0g，19.4mmol)和3-羟基苯甲酸甲酯(3.24g，21.3mmol)在THF/DMF混合物(4:1，55ml)中的溶液中添加K2CO3(8.0g，58mmol)。将反应混合物在60℃下加热2h。减压蒸发THF，并将剩余的混合物在水(200mL)与EtOAc(100mL)之间分配。分离有机层，并用EtOAc(1x 100mL)反萃取水层。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，随后减压浓缩。将粗残余物纯化(硅胶；用己烷中的0-50％EtOAc洗脱)，得到呈浅黄色固体的化合物A-2(5.63g，91％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.21(m,1H),8.07(m,1H),7.87(m,1H),7.77(m,1H),7.64(m,1H),7.55(m,1H),3.85(s,3H)；LCMS质量：323.0(M++1)。
步骤2：3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物A-3)
向0℃的3-((4-氰基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物A-2)(1.5g，4.65mmol)在THF/MeOH(1:1，140mL)中的搅拌溶液中分批添加CoCl2(1.8g，13.98mmol)，随后添加NaBH4(1.77g，46.5mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟。用EtOAc(100mL)稀释混合物并通过celite过滤。将滤液浓缩并将所得的残余物在水(200mL)与EtOAc(200mL)之间分配。通过celite过滤水-有机层，并将有机层分离，干燥(Na2SO4)，过滤，随后减压浓缩，获得呈琥珀色油状物的化合物A-3(1.38g，92％)，其无需进一步纯化。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ7.83(m,1H),7.67(m,1H),7.65(br m,1H),7.60(m,1H),7.47(m,1H),7.33(br m,1H),3.80–3.83(m,5H)；LCMS质量：327.0(M++1)。
步骤3：3-((4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物A-4)
向0℃的酯化合物A-3(1.38g，4.24mmol)在THF(25mL)中的搅拌溶液中添加二碳酸二叔丁酯(1.29g，5.94mmol)和DIEA(2.21mL，12.74mmol)。使混合物升温至室温并另外搅拌4h。将混合物浓缩并将残余物在EtOAc(50mL)与(50mL)之间分配。将有机层分离，干燥(Na2SO4)，过滤，并真空浓缩。将残余物纯化(硅胶；在己烷中的0-60％EtOAc)，得到呈琥珀色油状物的化合物A-4(1.42g，78％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ7.85(m,1H),7.69(m,1H),7.58–7.62(m,2H),7.48–7.51(m,2H),7.13(br m,1H),4.20(m,2H),3.84(s,3H),1.36(s,9H)；LCMS质量：427.0(M++1)。
步骤4：3-((4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸(化合物A-5)
向酯化合物A-4(1.42g，3.34mmol)在THF/H2O混合物(6:1，21mL)中的搅拌溶液中添加4M LiOH水溶液(17mL，68mmol)。将混合物在室温下搅拌16h，然后用水(30ml)稀释并采用饱和柠檬酸水溶液酸化至pH 3-4。用EtOAc(2x 50mL)对混合物进行萃取，并将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，并减压浓缩，得到呈灰白色固体的化合物A-5(1.2g，87％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ13.17(br s,1H),7.83(m,1H),7.66(br m,1H),7.53–7.62(m,2H),7.44–7.51(m,2H),7.12(br m,1H),4.25(m,2H),1.36(s,9H)；LCMS质量:413.0(M++1)。
步骤5：((2-(3-((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物C)
向化合物A-5(160g，0.388mol，1.0当量)在DCM(2.40L，15体积)和DMF(0.56L，3.5体积)的混合物中的溶液中添加HATU(177g，0.466mol，1.2当量)。将混合物在环境温度下搅拌10min，然后向上述溶液中添加(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐(71.5g，0.466mol，1.3当量)和DIPEA(0.226L，1.37mol，3.5当量)。将所得混合物在环境温度下搅拌1.5h。通过HPLC分析确认反应完成后，减压除去DCM。
将残余物在水(1.0L)与EtOAc(1.0L)之间分配。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，并减压浓缩滤液。将粗残余物通过色谱法(硅胶：用在PE中的20-50％EtOAc洗脱)纯化。减压浓缩洗脱液，得到无色油状物。用EtOAc(3.0L)稀释该油状物，然后用5％NaHCO3溶液洗涤。减压浓缩有机层，得到呈白色固体的化合物C(160g)。产率：82％，HPLC纯度：95.1％面积。
步骤6：(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮盐酸盐(化合物1)
向化合物C(151g，0.3mol，1.0当量)在DCM(3.37L，22体积)中的溶液中添加在MTBE中的6.6N HCl(695mL，6.9mol，23当量)。将反应混合物在环境温度下搅拌过夜。通过HPLC分析确认反应完成后，减压浓缩该混合物，得到黄色固体。将固体在MTBE(400mL)中进行浆化，并过滤。将湿滤饼用MTBE洗涤，并干燥，得到呈黄色固体的化合物1(110g)。产率：83％，HPLC纯度：98.4％面积，ee：100％。(DAICEL Chiralcel AD-H柱：5μm x 4.6*150mm，80％己烷/10％MeOH/含0.1％DEA的10％EtOH)。
实施例3：化合物2的制备
在一些实施方案中，如下使用对映体纯的R,R-4-氟-3-羟基吡咯烷盐酸盐制备化合物2。
步骤1：3-((4-氰基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸(化合物A-6)
在反应器中使20g的2-氯-6-(三氟甲基)异烟腈(化合物A-1)和Cs2CO3(78g，0.242mol，2.5当量)悬浮于80mL DMF中。向该反应器中缓慢添加3-羟基苯甲酸(13.4g，0.096mol，1.0当量)在40mL DMF中的溶液，将温度保持在30℃以下。将反应器的内容物加热至30±5℃，并进行老化直至反应完成(69小时)。确认反应完成，其中化合物A-1＝1％。将反应混合物用1L经纯化处理的H2O稀释，并用2x 200mL EtOAc洗涤。该水溶液的pH为约9，并通过添加97mL的3M HCl(水溶液)调节至pH约3-4，同时将温度保持在20±5℃。将水层用2x300mL EtOA萃取，并将有机层用150mL盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并浓缩至干，得到化合物A-6。外观：棕褐色固体。质量＝29.98g。
步骤2：2-(3-((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)异烟腈(化合物A-7)
基于化合物A-6的理论产量，通过将步骤1得到的3-((4-氰基-6-三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸(化合物A-6)浓缩至100mL来将其压缩至DCM中。将温度保持在0±5℃，向反应器中充入草酰氯(1.2当量)，并使其在1小时内缓慢升温至室温。2小时后，确认转化完成。将(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐与150mL DMF和350mL DCM合并。将温度保持在0±5℃，将A-6的酰氯添加至(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐的溶液中，随后缓慢添加3.5当量DIPEA。
用40mL H2O猝灭反应，并蒸馏出DCM，得到化合物A-7的DMF/H2O混合物，将其用720mL MTBE稀释，然后用3x 600mL H2O、1x 400mL盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并浓缩至100ml。使浓缩物在20小时内结晶，然后充入15体积的庚烷，随后另外老化20小时。通过过滤收集固体，然后用2x 50mL庚烷冲洗，并在45℃下干燥至恒重，得到化合物A-7。外观＝白色固体；质量＝16.5，理论产量为18.94g；HPLC＝98％。
步骤3：3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮(化合物I)
将16g化合物A-7、350mL AcOH、5％Pd(OH)2/C合并至经250 PSI H2(气态)加压的脱气反应器中3小时。将该材料抛光过滤(polish filter)，用0±5℃的700mL H2O冲洗，并用50％NaOH猝灭—使用16.9体积至pH为约11。用2x 20体积EtOAc萃取，老化2小时，然后分离各层，并升温至25±5°(高于25℃时，盐溶于溶液)，得到化合物I。HPLC＝91.1％，7.026min；质量＝16.44g；产率＝101％-定量。
步骤4：(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮甲磺酸盐(化合物2)
通过在160mL ACN中稀释化合物I，缓慢添加MSA，并根据HPLC纯度调节MSA浓度，将8.0g化合物I转化为MSA盐(化合物2)。将溶液在20±5℃下老化1小时，并加热至回流(约82°-85℃)保持2小时。将混合物在室温下搅拌过夜，并将该加热循环重复3次以上直至符合DSC(总计回流保持时间为10小时)，得到化合物2。HPLC＝99.5％；质量＝7.36g；ee＝99.7％(DAICEL Chiralcel OD-H柱：5μm x 4.6*150mm，90％己烷/含0.1％DEA的10％IPA)。
实施例4：(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇-盐酸盐(C6)的制备
在一些实施方案中，如下所示制备化合物C6。
步骤1：((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)(苯基)甲酮(化合物C3)
将190.0kg丙酮充入反应器中，随后充入50kg化合物C2。将反应混合物在20-25℃下混合15分钟。将15.6kg乙酸乙烯酯和2kg435充入反应器中。将反应混合物在20-25℃下混合37小时。通过手性HPLC监测反应进程直至化合物C3(ee％)>95.0％。将混合物过滤，并用10kg丙酮洗涤滤饼。在40-50℃下11小时减压去除丙酮，得到10.5kg粗化合物C3。将该粗化合物C3充入反应器中，随后充入16.0kg硅胶和14.0kg DCM，并将浆状物在20-25℃下混合15分钟。向色谱柱上加载3.60kg硅胶，随后加载6.3kg石油醚。向柱上加载0.90kg Na2SO4，随后另外加载6.3kg石油醚，保持30分钟。向柱上加载60L的DCM(70.2kg)和EtOAc(5.34kg)的混合物。蒸发后得到2.9kg化合物C3(ee％＝94.9DAICEL Chiralcel OD-H柱：5μm x 4.6*150mm，90％己烷/含0.1％DEA的10％IPA)。
步骤2：(3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)(苯基)甲酮(化合物C3)
将75kg丙酮充入反应器中，随后充入2.9kg化合物C3。将反应混合物在20-25℃下混合15分钟。将6.0kg乙酸乙烯酯和2.8kg435充入反应器中。将反应混合物在20-25℃下混合54小时。通过手性HPLC监测反应进程直至化合物C3(ee％)>99.5％。将混合物过滤，并用5.5kg丙酮洗涤滤饼。在40-50℃下6小时减压去除丙酮，得到2.5kg粗化合物C3。将2.5kg化合物C3充入反应器中，随后充入3.8kg硅胶和14.0kg DCM，并将浆状物在20-25℃下混合30分钟。向色谱柱上加载3.60kg硅胶，随后加载5.3kg石油醚。向柱上加载0.50kg Na2SO4，随后另外加载6.3kg石油醚，保持30分钟。向柱上加载60L的DCM(70.2kg)和EtOAc(5.34kg)的混合物，随后加载50L的EtOAc(重复3次)。蒸发后得到2.0kg化合物C3(ee％＝99.1 DAICEL Chiralcel OD-H柱：5μm x 4.6*150mm，90％己烷/含0.1％DEA的10％IPA)。
步骤3：(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐(化合物C6)
将12.0kg的1,4-二氧杂环己烷充入反应器中，随后充入2.40kg化合物C3。将反应混合物在20-25℃下混合15分钟，并将12.0kg浓盐酸充入反应器中，并将1,4-二氧杂环己烷在65-75℃下减压蒸发5小时。将15.0kg的DCM充入反应器中，并将反应混合物在20-25℃下混合15分钟，然后减压蒸发(重复4次)。在65-75℃下5小时减压去除剩余的水。将20.0kg甲苯添加至旋转汽蒸瓶中，并在40-50℃下6小时将其减压去除，得到1.54kg化合物C6(ee％＝99.1DAICEL Chiralcel OD-H柱：5μm x 4.6*150mm，90％己烷/含0.1％DEA的10％IPA)。
实施例5：(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐(化合物C6)的绝对构型的确定
在一些实施方案中，通过C7的X射线晶体学分析来确定(R,R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐(化合物C6)的绝对构型。
步骤1：外消旋-反式-3-氟-4-羟基吡咯烷(rac-C6FB)
向NaOH(2.83g，70.6mmol)的EtOH(100mL)溶液中添加外消旋-反式-3-氟-4-羟基吡咯烷盐酸盐(rac-C6)(10g，70.6mmol)。然后将上述溶液在室温下搅拌1h。过滤沉淀物，并浓缩滤液，得到呈棕色液体的游离碱(rac-C6FB)(7.0g)。
步骤2：(3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-鎓(2S,3S)-2,3-双(苯甲酰氧基)-3-羧基丙酸盐C7
通过用(2S,3S)-2,3-双(苯甲酰氧基)-3-羧基丙酸处理外消旋-反式-3-氟-4-羟基吡咯烷(rac-C6FB)来形成(3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-鎓(2S,3S)-2,3-双(苯甲酰氧基)-3-羧基丙酸盐，并从甲醇中反复重结晶，通过手性HPLC得到对应于C6的基本上纯的对映异构体(94.4％ee；
DAICEL Chiralcel AD-H柱：5μm x 4.6*150mm，90％己烷/含0.1％DEA的10％IPA)。X射线晶体学证实为(R,R)构型。
实施例6：化合物2的备选合成方法
在一些实施方案中，如下所示制备化合物2。
将3-(4-((叔丁氧羰基)甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基氧基)苯甲酸(1.0当量)(化合物A)、(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐((R,R)-FP)(1.4当量)、HATU(1.2当量)和二氯甲烷(DCM)(32kg)合并。在缓慢搅拌的同时添加5.2kg的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和3.5当量N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)。将反应加热至回流，直至反应完成。然后在真空下去除DCM。将在DMF中的化合物C用EtOAc稀释，并用水和盐水洗涤。将粗化合物C浓缩至干，并通过硅胶柱使用最终洗脱溶剂比为7:3EtOAc/庚烷的梯度进行纯化。将所有的化合物C级分浓缩，并用碳酸氢钠溶液、水、盐水洗涤，并用Na2SO4干燥。浓缩有机物，得到化合物C，其高效液相色谱(HPLC)纯度为98％，且产率为98.5％。
将(2-(3-((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲基氨基甲酸叔丁酯(化合物C)溶解在DCM中，转移至反应器中，并用DCM稀释。充入甲磺酸(0.93当量)，并将反应加热至回流，并搅拌过夜直至确认反应完成。此时将该浓稠白色浆状物用DCM稀释，冷却并过滤，并用甲基叔丁基醚(MTBE)冲洗。浓缩有机物，得到化合物2，其HPLC纯度为98.5％，且产率为91％。
将化合物2在乙腈中研磨，并加热大约4小时，然后冷却至20℃。取出固体样品并干燥，以检测残留的DCM和乙腈(ACN)。重复研磨直至残留的DCM和ACN分别低于百万分之1200(ppm)和820ppm的限值。通过HPLC监测化合物2的纯度以控制杂质形成。该过程产生化合物2，其HPLC纯度为99.3％，且回收率为91％。
实施例7：化学纯度测定
开发了反相HPLC方法来测定纯度和相关物质。
表1.用于化学纯度测定的HPLC方法参数
| 柱 | Agilent Eclipse XDB-C<sub>8</sub>，5μm柱(4.6mm x 150mm) |
| 流动相A： | 在水中的0.1％TFA：90％至0％ |
| 流动相B： | 在乙腈中的0.1％TFA：10％至100％ |
| 检测 | UV：λ＝275nm |
| 柱温 | 25℃ |
| 注射体积 | 5.0μL |
| 流速 | 1.0mL/min |
| 收集时间 | 20分钟 |
测得化合物2的样品的纯度大于90％。在一些实施方案中，测得化合物2的样品的纯度大于95％、大于96％、大于97％、大于98％或大于99％。
在一些实施方案中，化合物2的样品包含可检测量的至少一种以下化合物：
在一些实施方案中，化合物2的样品不包含可检测量的上述化合物。
实施例8：手性纯度测定
使用手性HPLC来测定手性纯度。使用以下条件。
表2.用于光学纯度测定的HPLC方法参数
| 柱 | ChiralPak IC-3，3μm柱(4.6mm x 250mm) |
| 流动相： | 在己烷/EtOH(75:25v/v)中的0.05％ESA |
| 检测 | UV：λ＝220nm |
| 柱温 | 15℃ |
| 注射体积 | 10μL |
| 流速 | 1.0mL/min. |
| 收集时间 | 45分钟 |
根据每个对映异构体的峰面积响应来确定手性纯度(面积％)。
化合物2的样品具有大于90％对映体过量(e.e.)的手性纯度。在一些实施方案中，化合物2的样品具有大于95％、大于96％、大于97％、大于98％或大于99％e.e.的手性纯度。在一些实施方案中，化合物2的样品具有100％e.e.的手性纯度。
在一些实施方案中，化合物2的样品包含可检测量的化合物2的(S,S)-对映异构体。在一些实施方案中，化合物2的样品不包含可检测量的化合物2的(S,S)-对映异构体。
实施例9：残留(R,R)-FP测定
开发了反相HPLC方法以测定残留(R,R)-FP[(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇]。
表3.用于残留(R，R)-FP测定的HPLC方法参数
化合物2的样品含有少于5％的(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇。在一些实施方案中，化合物2的样品含有少于5％、4％、3％、2％或1％的(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇。
实施例10：残留溶剂
使用配置有火焰离子化检测器(FID)的USP G43毛细管柱，通过气相色谱法来测定残留溶剂。在NMP中制备10mg/mL的样品溶液。
潜在残留溶剂包括甲醇、丙酮、异丙醇、乙腈、二氯甲烷、叔丁基甲基醚、己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷、庚烷、二氧杂环己烷、异丁基甲基酮、甲苯和二甲基甲酰胺。
在一些实施方案中，化合物2含有可检测量的至少一种以下物质：二氯甲烷、乙酸乙酯、庚烷、叔丁基甲基醚、丙酮、二甲基甲酰胺和乙腈。
实施例11：化合物1的多晶型物筛选
初步溶解度评估
用体积渐增的溶剂处理非晶形化合物1(30mg)，直至该化合物完全溶解或者直至使用了最多100体积。每次添加溶剂后，将体系在50℃下轻轻振荡10分钟，然后使其在室温下静置5分钟，随后添加新的溶剂份。评估完成后，将任何得到的悬浮液熟化，并将澄清溶液在5℃下冷却。表4示出了这些研究的结果。
表4.溶解度评估
熟化
将溶解度评估后得到的悬浮液在熟化室中在25-50℃之间振荡(循环8h)。3天后，将固体过滤并风干。通过XRPD对得到的固体进行初步分析，如表5中所示。
表5.由熟化(在25-50℃之间循环)得到的多晶型物筛选结果
冷却
将溶解度评估后得到的溶液置于冰箱(5℃)中3天。将固体风干，并通过XRPD对残留物进行分析，如表6所示。
表6.通过在5℃下冷却得到的多晶型物筛选结果
蒸发
使来自熟化的上清液在环境条件下缓慢蒸发。没有固体被回收。
结果讨论
在溶解度评估期间，在添加溶剂后，一些样品表现出明显的可见变化(参见表4)。固体没有溶解但具有不同的质地。故而取出少量固体并通过XRPD进行分析，随后继续进行溶解度评估。所有衍射图谱均显示出结晶模式，被称为化合物1的1型。在这类情况下的溶解度值与以mg/ml为单位的绝对值无关，而与发生结晶时的体积相关。在XRPD分析后，将固体在40℃和75％RH下储存，24小时后潮解。
通过几种方法进行另外的结晶尝试，包括加热/冷却循环、冷却和缓慢蒸发。通过在5℃下熟化来获得化合物1的1型。蒸发上清液后没有固体被回收，因此表明所形成的化合物1的1型在那些溶剂中不可溶。
将所有从结晶尝试中取出的固体在40℃和75％RH下储存。12天后，它们转化成围绕有一些小液滴的玻璃状固体。通过XRPD可见，它们仍保持结晶，但显示出新的模式——化合物1的2型。
将化合物1的2型在储存条件下静置1周。它保持不变。
新的结晶形式的表征
在多晶型物筛选期间鉴别出两种新的结晶模式——化合物1的1型和2型。除了非晶形形式之外，这两种形式的表征结果也总结在表7中。
表7.化合物1的多晶型物的表征
1H-NMR未显示出所研究的任何结晶固体有任何相关量的溶剂或降解。对化合物1的1型所观察到的DSC迹线证实了该结果，其中在相对较高熔点(153.1℃)之前未观察到显著事件，这表明化合物1的1型更可能是无水形式。
在化合物1的2型的情况下，在118.9℃处的吸热(表示固体熔融)之前观察到在43℃处的宽事件。这表明化合物1的2型更可能是水合物形式。
基于这些结果，化合物1的1型是吸湿形式，其自身重新排列以容纳水，从而将其结构改变为化合物1的2型。一旦水被释放，DSC数据显示出与化合物1的1型不同的熔点，其更低，这表明它不会恢复为化合物1的1型。通过化合物1的2型的脱水过程可能会形成新的无水形式。
另外，为了快速估计化合物1的1型在水中的水溶解度，进行了简短的溶解度评估。如表8中所示，将1型样品的混合物称重至小瓶中，并在25℃下添加等份水。1型显示出至少1000mg/mL的溶解度。
表8.化合物1的1型的水溶解度
| 样品(mg) | 水(μL) | 结果 |
| 30 | 150μL(2.5体积) | 溶解 |
| 10 | 10μL(1体积) | 溶解 |
实施例12：化合物I的盐筛选
商业化学品和溶剂购自Aldrich或Fluka。如表9中所示，制备在筛选中使用的酸储备溶液。
表9.盐筛选中使用的储备溶液
| 反荷离子 | 浓度 | 溶剂 |
| 硫酸-SO<sub>4</sub> | 1.0M | THF |
| 甲磺酸-MSA | 1.0M | THF |
| 马来酸-MEA | 1.0M | THF |
| 磷酸-PHOA | 1.0M | THF |
| L-酒石酸-TAR | 1.0M | THF |
| 富马酸-FUA | 0.5M | MeOH:THF 1:1 |
| 琥珀酸-SUCA | 1.0M | 甲醇 |
| 乙酸-AcOH | 1.0M | THF |
初步游离碱溶解度评估
用体积递增的溶剂处理化合物1(10mg)，直至材料完全溶解或直至使用了最多50体积。每次添加溶剂后，将该体系在50℃下振荡10分钟，然后使其在室温下静置5min，随后添加新的溶剂份。
评估完成后，将体系加热至50℃，并用1.1当量HCl(在THF中1M，27.5μL)进行处理。将溶液/悬浮液在50℃下放置1小时，然后以0.1℃/min冷却至5℃，并在该温度下搅拌过夜。使回收的溶液在环境条件下蒸发至干。
表10示出了溶解度评估的初始结果。
表10.化合物I的溶解度评估
| 溶剂 | 溶解度 | 溶液蒸发后 |
| 甲苯 | >20mg/mL | 胶状物 |
| 二氯甲烷 | >100mg/mL | 胶状物 |
| 四氢呋喃 | >100mg/mL | 胶状物 |
| 2-丙醇 | >100mg/mL | 胶状物 |
| 乙醇 | >100mg/mL | 胶状物 |
| 乙酸乙酯 | >100mg/mL | 胶状物 |
| 己烷 | >100mg/mL | 胶状物 |
| 乙腈 | >100mg/mL | 胶状物 |
未从任何初始实验中回收到结晶物质。进行另外的技术/方法以回收结晶固体，并在下文中进行描述。
超声处理
将胶状物置于超声波浴中。1小时后未发现变化。添加100μl的每种溶剂，并将它们在超声波浴中再放置1小时以促进沉淀。它们仍然是胶状物。
熟化
将从超声处理(仍然使用100μl溶剂)回收的胶状物熟化12小时(在25-50℃之间循环)。回收溶液。
冷却
熟化后，将溶液置于冰箱(-20℃)中过夜。未发生沉淀，但是回收了胶状物。
在真空下干燥
使在-20℃下得到的溶液和胶状物在室温下干燥，并将它们置于烘箱(25℃/真空)中一周末。分别从EtOH和ACN中回收了两种固体。这些固体是非晶形的，并且在1H-NMR中观察到的相对于游离碱的峰位移提示盐形成已发生。基于这些结果，选择乙醇和乙腈用于盐筛选。
通用程序(EtOH)
将化合物I(15mg)在50℃下溶解在EtOH中。将溶液用所选择的反荷离子处理，并在50℃下搅拌1小时。然后将溶液以0.1℃/min冷却至5℃，并在该温度下搅拌一周末。使悬浮液在室温下干燥。在环境条件下蒸发溶液，并将回收的油状物置于烘箱(室温/真空)中。通过XRPD分析所有固体。表11示出了盐筛选的结果。
表11.盐筛选结果(EtOH)
1在真空下1周后回收固体。
通用程序(乙腈)
将化合物I(15mg)在50℃下溶解在乙腈中。用所选择的反荷离子处理溶液。将溶液在50℃下搅拌1小时，以0.1℃/min冷却至5℃，并在该温度下搅拌过夜。使悬浮液在室温下干燥。将胶状物置于熟化室(在25-50℃之间循环，循环8h)中24小时，然后在烘箱中(室温/真空)中干燥。在环境条件下蒸发溶液，并将回收的油状物置于烘箱(室温/真空)中。通过XRPD分析所有固体。表12示出了盐筛选的结果。
表12.盐筛选结果(乙腈)
实施例13：化合物2的1型的制备
将化合物I(500mg)溶解在乙腈(3623μL)中。通过蠕动泵(Vt＝5mL，10体积)缓慢添加1.1当量的甲磺酸(1380μL)。得到非常粘稠的悬浮液，因而另外添加5mL溶剂以促进搅拌。将悬浮液在25℃下搅拌1小时，并设定24小时循环：
-以0.2℃/min斜变至5℃
-在5℃下2H
-以0.2℃/min斜变至25℃
-在25℃下2H。
在25℃下，回收白色悬浮液。将其过滤(0.45μm)，并风干一周末。得到471.6mg化合物2的1型(产率76％)，并通过XRPD分析进行确认。
在另一个实施方案中，通过将1.0g化合物2溶解在10体积ACN中回流24小时来获得化合物2的1型。将溶液冷却，过滤，并在真空下干燥，得到标题化合物。
在表13中示出了化合物2的结晶1型的性质。
表13.化合物2的1型的表征细节
实施例14：化合物2的结晶研究
将化合物2(20mg)称重至小瓶中，并添加溶剂(100μL，5体积)，目的是获得浆状物。将悬浮液置于熟化室(在25-50℃之间循环)中24小时，并通过XRPD分析回收的固体。表14总结了该结晶研究。
表14.结晶研究
| 盐(mg) | 溶剂 | 体积(μL) | XRPD |
| 20 | 甲苯 | 100 | 1型，化合物2 |
| 20 | 二氯甲烷 | 100 | 1型，化合物2 |
| 20 | 四氢呋喃 | 100 | 1型，化合物2 |
| 20 | 2-丙醇 | 100 | 1型，化合物2 |
| 20 | 乙醇 | 100 | 1型，化合物2 |
| 20 | 乙酸乙酯 | 100 | 1型，化合物2 |
| 20 | 硝基甲烷 | 100 | 1型，化合物2 |
| 20 | 乙腈 | 100 | 1型，化合物2 |
| 20 | 1,2-二甲氧基乙烷 | 100 | 1型，化合物2 |
| 20 | 四氢呋喃:水95:5 | 100 | 1型，化合物2 |
实施例15：化合物I的其他潜在盐的筛选
形成其他盐的程序
将化合物I(100/50mg)溶解在乙腈/乙醇(10体积)中。缓慢添加1.1当量的反荷离子，并将悬浮液在25℃下搅拌1小时。设定24小时循环：
-以0.2℃/min斜变至5℃
-在5℃下2H
-以0.2℃/min斜变至25℃
-在25℃下2H。
在25℃下，回收溶液、胶状物和白色固体的混合物，其在室温下干燥后转化为胶状物。将胶状物置于烘箱(25℃/真空)中，并且回收黄色固体，并通过XRPD进行分析。表15示出了制备这些盐的程序。
表15.制备其他盐的程序
其他盐的结晶研究程序
将非晶形盐研磨，称重至小瓶中，并添加溶剂(5体积)。将悬浮液置于熟化室(在25-50℃之间循环)中24小时。蒸发溶液，并通过XRPD分析回收的固体。表16示出了制备这些盐的结果。
表16.其他盐的结果
1针对该盐的吸湿性指示
在添加反荷离子后，仅形成一种白色粘稠悬浮液(磷酸盐)，然而其在熟化后转化为胶状物。酒石酸盐在熟化循环后结晶，但其在干燥后变成胶状物，这表明其具有吸水的能力。剩余的盐为溶液或胶状物。
使用硫酸来形成化合物I的硫酸盐。使用以下溶剂对化合物I的硫酸盐进行结晶研究：甲苯、二氯甲烷、四氢呋喃、2-丙醇、乙醇、乙酸乙酯、硝基甲烷、乙腈、1,2-二甲氧基乙烷和四氢呋喃/水(95:5)。得到油状物。
使用磷酸来形成化合物I的磷酸盐。使用以下溶剂对化合物I的磷酸盐进行结晶研究：甲苯、二氯甲烷、四氢呋喃、2-丙醇、乙醇、乙酸乙酯、硝基甲烷、乙腈、1,2-二甲氧基乙烷和四氢呋喃/水(95:5)。用甲苯和二氯甲烷得到非晶形化合物；而用其他溶剂得到油状物。
使用L-酒石酸来形成化合物I的酒石酸盐。使用以下溶剂对化合物I的酒石酸盐进行结晶研究：甲苯、二氯甲烷、四氢呋喃、2-丙醇、乙醇、乙酸乙酯、硝基甲烷、乙腈、1,2-二甲氧基乙烷和四氢呋喃/水(95:5)。由乙醇和四氢呋喃:水(95:5)得到油状物，而由其他溶剂得到非晶形化合物。
使用柠檬酸来由乙腈形成化合物I的柠檬酸盐。使用以下溶剂对化合物I的柠檬酸盐进行结晶研究：甲苯、二氯甲烷、四氢呋喃、2-丙醇、乙醇、乙酸乙酯、硝基甲烷、乙腈、1,2-二甲氧基乙烷和四氢呋喃/水(95:5)。由甲苯和二氯甲烷得到非晶形化合物，而由其他溶剂得到油状物。
使用柠檬酸来由乙醇形成化合物I的柠檬酸盐。使用以下溶剂对化合物I的柠檬酸盐进行结晶研究：甲苯、二氯甲烷、四氢呋喃、2-丙醇、乙醇、乙酸乙酯、硝基甲烷、乙腈、1,2-二甲氧基乙烷和四氢呋喃/水(95:5)。得到油状物。
实施例16：化合物2的2型的制备
如下得到化合物2的结晶2型：将化合物2(700mg)在50℃下溶解在EtOH(49mL)中。将溶液在50℃下搅拌，并在15min后停止搅拌。添加正庚烷(70mL)，并将该体系置于干冰/丙酮浴中2小时。将固体过滤，风干，并进行表征。
实施例17：化合物2的3型的制备
如下得到化合物2的结晶3型：将化合物2在50℃下溶解在DMSO中。将溶液在50℃下搅拌，并在15min后停止搅拌。添加MeCN，并将该体系冷却至室温或5℃或者置于干冰/丙酮中。
实施例18：化合物2的4型的制备
如下得到化合物2的结晶4型：用0.92当量的甲磺酸处理在160mL ACN中的8.0g的(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮(化合物I)。使溶液在20±5℃下静置1小时，然后加热至回流(约82°-85℃)保持2小时，使其在室温下搅拌过夜，重复加热循环3次以上直至符合DSC，总回流保持时间为10小时。通过过滤来分离结晶化合物，并在真空下干燥。
实施例19：化合物2的1型和4型混合物转化为化合物2的1型
将化合物2(1型和4型的混合物)用冷的IPA:水(95:5；1mL)处理，并以0.5℃/min的速率从-8℃加热至70℃。然后将样品以相同的速率从70℃冷却回-8℃。使用Crystal 16仪器记录加热时的澄清点(100％透射时)和再冷却时的浊点(<100％透射)，并且数据显示在表17中。对冷却后得到的所有固体进行XRPD分析。对冷却后分离的固体进行的XRPD分析显示出1型是唯一的分离形式。
表17.溶解度和亚稳极限曲线的总结
实施例20：稳定性研究
根据表18中所示的条件进行稳定性研究。根据外观、纯度、相关物质、手性纯度、含水量、DSC和XRPD来分析化合物。
表18：稳定性研究
ICH＝国际协调会；RH＝相对湿度。
化合物1
化合物1显示，在3个月加速条件(40℃/75％RH)下，其纯度或水分吸收没有显著变化。
化合物2
对于化合物2，1年ICH研究和2年ICH研究的长期和加速条件的1个月数据在所有所测属性的限度内，没有明显的化学或物理变化。
实施例21：强制降解研究
使用实施例7的HPLC化学纯度条件进行化合物2的强制降解研究。
固体状态
化合物2作为固体在暴露于热(100℃，24小时)和光(最大365nm，24小时)时是稳定的。
液体状态
当化合物2在溶液中加热(50℃下24小时)时是稳定的。没有发现相关物质或纯度的显著改变。
实施例22：X射线粉末衍射(XRPD)
Bruker AXS C2 GADDS
使用Cu Kα辐射(40kV，40mA)、自动XYZ工作台、用于自动样品定位的激光视频显微镜和HiStar二维区域检测器，在Bruker AXS C2 GADDS衍射仪上采集X射线粉末衍射图谱。X射线光学器件由单个多层反射镜与耦联的0.3mm针孔准直器组成。使用经认证的标准NIST 1976 Corundum(平板)每周进行性能检查。
光束发散，即样品上X射线束的有效尺寸，为大约4mm。采用θ-θ连续扫描模式，其中样品-检测器距离为20cm，得出有效的2θ范围为3.2°–29.7°。通常，将样品暴露于X射线束120秒。用于数据收集的软件是针对XP/2000的GADDS 4.1.43，并使用Diffrac Plus EVAv15.0.0.0对数据进行分析和呈现。
使用未经研磨而得到的粉末，将在环境条件下运行的样品制备成平板样本。将大约1-2mg的样品轻轻压在载玻片上以获得平坦表面。
Bruker AXS D8 Advance
使用Cu Kα辐射(40kV，40mA)、θ-2θ测角器以及V4和接收狭缝的发散、Ge单色器和Lynxeye检测器，在Bruker D8衍射仪上采集X射线粉末衍射图谱。使用经认证的Corundum标准(NIST 1976)对该仪器进行性能检查。用于数据收集的软件是Diffrac Plus XRDCommander v2.6.1，并使用Diffrac Plus EVA v15.0.0.0对数据进行分析和呈现。
使用得到的粉末，将样品在环境条件下作为平板样本运行。将样品轻轻地装入被切成抛光的零背景(510)硅晶片的腔室中。在分析期间，使样品在其自己的平面中旋转。数据收集的细节如下：
·角度范围：2至42°2θ
·步长：0.05°2θ
·收集时间：0.5秒/步
化合物1的1型
1型的X射线粉末衍射图谱在图9中示出。特征峰包括下表中列出的峰：
| 角度2-θ° | 强度％ |
| 5.5 | 100 |
| 7.5 | 61 |
| 18.5 | 40.5 |
| 19.4 | 41.9 |
| 20.2 | 27.7 |
| 21.8 | 54.6 |
| 23.5 | 48.7 |
| 25.2 | 27.1 |
| 26.6 | 27.5 |
化合物1的2型
2型的X射线粉末衍射图谱在图11中示出。特征峰包括下表中列出的峰：
| 角度2-θ° | 强度％ |
| 6.6 | 34.9 |
| 13.2 | 37.1 |
| 19.7 | 100 |
| 22.3 | 45.5 |
| 22.5 | 53.4 |
| 23.7 | 40.2 |
| 24.5 | 45 |
| 26.4 | 49.3 |
图11示出了2型在40℃和75％RH下储存7天后的X射线粉末衍射图谱。
化合物2的1型
1型的X射线粉末衍射图谱在图1中示出。特征峰包括下表中列出的峰：
化合物2的2型
2型的X射线粉末衍射图谱在图3中示出。特征峰包括下表中列出的峰：
| 角度(2-θ°) | 强度(％) |
| 2.6 | 38.5 |
| 3.2 | 100 |
| 6.3 | 12.9 |
| 9.4 | 13.2 |
| 15.7 | 96.3 |
| 22.1 | 14.6 |
化合物2的3型
3型的X射线粉末衍射图谱在图5中示出。特征峰包括下表中列出的峰：
化合物2的4型
4型的X射线粉末衍射图谱在图7中示出。特征峰包括下表中列出的峰：
| 角度2-θ° | 强度％ |
| 11.3 | 27.9 |
| 13.3 | 30.4 |
| 13.9 | 45.6 |
| 16.6 | 98.1 |
| 18.8 | 100 |
| 19.1 | 44.4 |
| 19.7 | 56.5 |
| 19.9 | 70.7 |
| 20 | 43.7 |
| 21.2 | 83.7 |
| 22.3 | 60 |
| 22.7 | 59.4 |
| 23.4 | 74.5 |
| 23.8 | 81.9 |
实施例23：差示扫描量热法(DSC)和热重分析(TGA)
在配备有50位自动进样器的TA Instruments Q2000上收集DSC数据。使用蓝宝石进行热容量的校准，并使用经认证的铟进行能量和温度的校准。通常将0.5-3mg每种样品在针孔铝盘中以10℃/min从25℃加热至300℃。在样品上保持50ml/min的干燥氮气吹扫。
仪器控制软件是针对Q Series的Advantage v2.8.0.394和Thermal Advantagev5.5.3，并使用Universal Analysis v4.5A对数据进行分析。
在配备有16位自动进样器的TA Instruments Q500 TGA上收集TGA数据。使用经认证的镍铝金(Alumel)和镍(Nickel)对仪器进行温度校准。通常将5-10mg每种样品加载至预先配衡的铝DSC盘上，并以10℃/min从环境温度加热至350℃。在样品上保持60ml/min的氮气吹扫。
仪器控制软件是针对Q Series的Advantage v2.5.0.256和Thermal Advantagev5.5.3，并使用Universal Analysis v4.5A对数据进行分析。
非晶形化合物1
观察到温度为约66.8℃的吸热。观察到在约200℃处开始的宽吸热。TGA显示从25℃至130℃的重量损失为约2％，并且从约280℃开始观察到降解。该事件对应于在DSC中观察到的70℃处的吸热。通过1H NMR明显看出没有显著量的溶剂(小于0.02当量的二乙醚)，因此表明，基于TGA重量损失，化合物1更可能含有约0.5分子的水。
化合物1的1型
观察到温度为约153.1℃的吸热，其中在相对较高的熔点之前未观察到显著事件。基于此，1型更可能是无水形式。1型的代表性热分析图在图10中示出。
化合物1的2型
在代表固体熔融的118.9℃处吸热之前观察到43.1℃处的宽事件。这表明2型更可能是水合物形式。2型的代表性热分析图在图12中示出。
化合物2的1型
在约230.5℃处观察到吸热，并且观察到小肩峰。1型的代表性热分析图在图2中示出。TGA分析显示，从78℃至约243℃损失0.7％w/w，并且在250℃以上观察到降解。
1型为无水甲磺酸盐。
化合物2的2型
三个吸热在约121.7℃、231.1℃和236.1℃处。2型的代表性热分析图在图4中示出。
2型最可能是无水甲磺酸盐。
在热分析下，其显示三个吸热峰：第一个峰与1型匹配，接着是呈现出两个峰的熔融峰。第二个吸热被认为是2型的熔融峰。熔融热规则指向1型与2型之间的对映异构体系。
当加热至150℃以上时，2型可转化为1型。
1H-NMR显示约0.1当量的乙醇，其与通过TGA观察到的重量损失大致匹配。第一个事件可能是乙醇的去溶剂化。
化合物2的3型
在约132.2℃和238.8℃处观察到两个吸热。3型的代表性热分析图在图6中示出。
3型被怀疑是DMSO溶剂化物。当将样品加热至130℃且在储存条件下时观察到XRPD变为1型，这可能表明3型是转变为1型的亚稳态溶剂化物。
化合物2的4型
在约232.8℃处观察到吸热，并且观察到小肩峰。4型的代表性热分析图在图8中示出。
4型是无水甲磺酸盐。
实施例24：重量法蒸汽吸附(GVS)
使用由DVS Intrinsic Control软件v1.0.1.2(或v 1.0.1.3)控制的SMS DVSIntrinsic水分吸收分析仪在0％至90％相对湿度(RH)的范围内获得重量法蒸汽吸附(GVS)等温线。
化合物2的1型
对化合物2的1型进行的测试显示出0至90％RH之间的可逆吸水率(约2.1％w/w)。经GVS分析后，XRPD未发生变化。
化合物2的2型
在经GVS分析并在40℃/75％RH下7天后，2型经历朝向1型的相变(尽管不完全相同)。在25℃/97％RH下7天后也发生该变化。
实施例A-1：化合物1的胶囊制剂
将化合物1直接添加至9号胶囊(Torpac,Inc.,New Jersey)中。
实施例A-2：化合物2的片剂制剂
以50mg和250mg规格(基于化合物I的量)制备两种不同的片剂制剂。使用标准压片技术来制备片剂。
表19：制剂A
表20：制剂B
以50mg和250mg规格(基于化合物I的量)制备两种不同规格的片剂制剂。根据标准压片技术来制备片剂，并将其在20℃至25℃下储存。将片剂配制成直接混合物并压制成900mg胶囊形片剂。
表21.化合物2片剂50mg(化合物I)的组成
| 组分 | 量/片-(％wt) |
| 化合物2 | 62.46mg(6.94％) |
| 硅化微晶纤维素 | 756.5mg(84.1％) |
| 交联羧甲基纤维素钠 | 45.00mg(5.0％) |
| 羟丙基纤维素 | 27.00mg(3.0％) |
| 胶态二氧化硅 | 4.50mg(0.5％) |
| 硬脂酸镁 | 4.50mg(0.5％) |
| 总计 | 900mg |
表21：化合物2片剂250mg(化合物I)的组成
简言之，在如下条件下制备化合物2片剂批次：将赋形剂(润滑剂除外)和化合物2添加至V型壳混合器中。添加顺序：一半填充剂、超级崩解剂、干粘合剂、助流剂、化合物2，最后为剩余的填充剂。混合10分钟。然后通过813μm圆形平面筛以50％功率或2000至3000转/分钟(rpm)进行共研磨。将共研磨的混合物返回至V型壳混合器中并另外混合10分钟。筛选硬脂酸镁。将过筛的硬脂酸镁添加至混合物中，并在V型壳混合器中混合2分钟。采用0.400”x 0.750”胶囊片形状、表面平摊的工具压制重量为900mg的片剂。将片剂包装在HDPE瓶中，并用CRC密封。
除了硬脂酸镁之外，在混合并研磨混合物之后进行混合均匀性检查。制得混合物后，产生合适重量(900mg)和硬度(18kp；范围15-21kp)的片剂。测量脆性，其为≤1.0％。对片剂进行随机重量检查，容差为±5％。目视检查每个片剂的瑕疵，如帽化、开裂或变形，并淘汰观察到任何瑕疵的片剂。
片剂包含白色至灰白色的胶囊形片剂。
实施例B-1：浓缩条件培养基(CCM)的制备
将人LOXL2/CHO和人LOX/HEK稳定细胞系在15cm组织培养板中在正常生长条件下进行培养，直至细胞约80％汇合。然后用PBS洗涤细胞，随后添加25-30mL无血清培养基(含有青霉素/链霉素、10-100μM CuCl2±0.1％BSA、含有glutamax、不含酚红的DMEM/F12)。将细胞在无血清培养基中在37℃、5％CO2下温育40-48小时，随后移除条件培养基，并在4℃下以2000rpm离心5分钟以沉淀细胞/碎片。使用10-30MWCO centriprep柱，根据制造商的说明书(EMD Millipore,Billerica,MA)将培养基浓缩10-20X，随后进行等分并在-80℃下储存。
实施例B-2：人LOXL2
CCM试验
通过使用来自稳定表达人LOXL2的CHO细胞的10-20倍浓缩条件培养基(不含BSA)测量Amplex Red荧光，来评估LOXL2胺氧化酶活性。为了测定胺氧化酶活性，将10μL的浓缩条件培养基与2μL在DMSO中的测试化合物以及73μL测定缓冲液(50mM硼酸盐缓冲液，pH8)一起在37℃下温育2h。在2h的温育后，添加5μL在测定缓冲液中稀释的10mM 1,5-二氨基戊烷(DAP)和10ul的Amplex Red Mix(8.5μL测定缓冲液+0.5μL的10mM Amplex Red+1μL的500U/ml辣根过氧化物酶)，并将板混合，并立即放置在FlexStaion上进行荧光测量。以激发＝544且发射＝590，在动力模式下每2min读取一次荧光，持续0.5-1小时。由曲线的线性部分的斜率计算胺氧化酶活性。含有媒介物(DMSO)的孔表示最大活性，并将其设定为0％抑制，而含有100μM βAPN(3-氨基丙腈)的孔表示无活性，并将其设定为100％抑制。
表23.
| 化合物 | IC<sub>50</sub> |
| Rac-1 | A |
| Ent-1 | A |
| 1 | A |
| 2 | A |
A为<300nM。
本文所述的实施例和实施方案仅用于说明性目的，并且向本领域技术人员建议的各种修改或变化都将包含在本申请的精神和范围以及所附权利要求书的范围内。
Claims (96)
1.(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮的药学上可接受的盐，其中所述药学上可接受的盐是甲磺酸盐、盐酸盐、硫酸盐、马来酸盐、磷酸盐、L-酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐或乙酸盐。
2.根据权利要求1所述的药学上可接受的盐，其中所述药学上可接受的盐是甲磺酸盐，并具有化合物2的结构：
3.根据权利要求2所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是非晶形的。
4.根据权利要求2所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的。
5.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在13.6°2-θ、16.9°2-θ、19.4°2-θ、20.1°2-θ、20.3°2-θ、20.6°2-θ、23.1°2-θ和23.6°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图1所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约231℃和约236℃处具有吸热；或者
(d)DSC热分析图与图2所示基本上相同；
(e)在0至90％RH之间的可逆吸水率为约2％w/w；或者
(f)经GVS分析后XRPD图谱未改变。
6.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在13.6°2-θ、16.9°2-θ、19.4°2-θ、20.1°2-θ、20.3°2-θ、20.6°2-θ、23.1°2-θ和23.6°2-θ处具有特征峰。
7.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图1所示基本上相同。
8.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图在约231℃和约236℃处具有吸热。
9.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图与图2所示基本上相同。
10.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在2.6°2-θ、3.2°2-θ、6.3°2-θ、9.4°2-θ、15.7°2-θ和22.1°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图3所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约121.7℃、231.1℃和236.1℃处具有三个吸热；
(d)DSC热分析图与图4所示基本上相同；
(e)是无水的；
(f)当加热至150℃以上时转化为化合物2的1型；
(g)在经GVS分析并在40℃/75％RH下7天后转化为化合物2的1型；或者
(h)在25℃/97％RH下7天后转化为化合物2的1型。
11.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在2.6°2-θ、3.2°2-θ、6.3°2-θ、9.4°2-θ、15.7°2-θ和22.1°2-θ处具有特征峰。
12.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图3所示基本上相同。
13.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图在约121.7℃、231.1℃和236.1℃处具有三个吸热。
14.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图与图4所示基本上相同。
15.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的且无水的。
16.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在2.9°2-θ、3.2°2-θ、3.3°2-θ、15.8°2-θ、16.9°2-θ和20.2°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图5所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在132.2℃和238.8℃处具有两个吸热；
(d)DSC热分析图与图6所示基本上相同；
(e)与二甲基亚砜(DMSO)发生溶剂化；
(f)当加热至130℃以上时转化为化合物2的1型；
(g)在经GVS分析并在40℃/75％RH下7天后转化为化合物2的1型；或者
(h)在40℃和75％RH下7天后转化为化合物2的1型。
17.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在2.9°2-θ、3.2°2-θ、3.3°2-θ、15.8°2-θ、16.9°2-θ和20.2°2-θ处具有特征峰。
18.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图5所示基本上相同。
19.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图在132.2℃和238.8℃处具有两个吸热。
20.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图与图6所示基本上相同。
21.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且与二甲基亚砜(DMSO)发生溶剂化。
22.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在13.9°2-θ、16.6°2-θ、18.8°2-θ、19.1°2-θ、19.7°2-θ、19.9°2-θ、20°2-θ、21.2°2-θ、22.3°2-θ、22.7°2-θ、23.4°2-θ和23.8°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图7所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约233℃处具有吸热；或者
(d)DSC热分析图与图8所示基本上相同。
23.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在13.9°2-θ、16.6°2-θ、18.8°2-θ、19.1°2-θ、19.7°2-θ、19.9°2-θ、20°2-θ、21.2°2-θ、22.3°2-θ、22.7°2-θ、23.4°2-θ和23.8°2-θ处具有特征峰。
24.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图7所示基本上相同。
25.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图在约233℃处具有吸热。
26.根据权利要求4所述的药学上可接受的盐，其中：化合物2是结晶的，并且其DSC热分析图与图8所示基本上相同。
27.根据权利要求1所述的药学上可接受的盐，其中所述药学上可接受的盐是盐酸盐，并具有化合物1的结构：
28.根据权利要求27所述的药学上可接受的盐，其中：化合物1是非晶形的。
29.根据权利要求28所述的药学上可接受的盐，其中：化合物1是非晶形的，并在40℃/75％RH下潮解。
30.根据权利要求2所述的药学上可接受的盐，其中：化合物1是结晶的。
31.根据权利要求30所述的药学上可接受的盐，其中：化合物1是结晶的，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在5.5°2-θ、7.5°2-θ、18.5°2-θ、19.4°2-θ、21.8°2-θ和23.5°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图9所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约153℃处具有吸热；或者
(d)DSC热分析图与图10所示基本上相同。
32.根据权利要求30所述的药学上可接受的盐，其中：化合物1是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在5.5°2-θ、7.5°2-θ、18.5°2-θ、19.4°2-θ、21.8°2-θ和23.5°2-θ处具有特征峰。
33.根据权利要求30所述的药学上可接受的盐，其中：化合物1是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图9所示基本上相同。
34.根据权利要求30所述的药学上可接受的盐，其中：化合物1是结晶的，并且其DSC热分析图在约153℃处具有吸热。
35.根据权利要求30所述的药学上可接受的盐，其中：化合物1是结晶的，并且其DSC热分析图与图10所示基本上相同。
36.根据权利要求30所述的药学上可接受的盐，其中：化合物1是结晶的，并且是吸湿性固体。
37.根据权利要求30所述的药学上可接受的盐，其中：化合物1是结晶的，并且具有以下性质中的至少一种：
(a)X射线粉末衍射(XRPD)图谱在6.6°2-θ、13.2°2-θ、19.7°2-θ、22.3°2-θ、22.5°2-θ、23.7°2-θ、24.5°2-θ和26.4°2-θ处具有特征峰；
(b)X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图11所示基本上相同；
(c)DSC热分析图在约43℃和约119℃处具有吸热；或者
(d)DSC热分析图与图12所示基本上相同。
38.根据权利要求30所述的药学上可接受的盐，其中：化合物1是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱在6.6°2-θ、13.2°2-θ、19.7°2-θ、22.3°2-θ、22.5°2-θ、23.7°2-θ、24.5°2-θ和26.4°2-θ处具有特征峰。
39.根据权利要求30所述的药学上可接受的盐，其中：化合物1是结晶的，并且其X射线粉末衍射(XRPD)图谱与图11所示基本上相同。
40.根据权利要求30所述的药学上可接受的盐，其中：化合物1是结晶的，并且其DSC热分析图在约43℃和约119℃处具有吸热。
41.根据权利要求30所述的药学上可接受的盐，其中：化合物1是结晶的，并且其DSC热分析图与图12所示基本上相同。
42.一种药物组合物，其包含权利要求1-41中任一项所述的药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的赋形剂。
43.根据权利要求42所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制用于通过静脉内给药、皮下给药、口服给药、吸入、经鼻给药、皮肤给药或眼部给药而施用于哺乳动物。
44.根据权利要求42所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制用于通过口服给药而施用于哺乳动物。
45.根据权利要求42所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制用于以片剂、丸剂、胶囊、悬浮液或溶液的形式通过口服给药而施用于哺乳动物。
46.根据权利要求45所述的药物组合物，其中所述药物组合物为固体形式药物组合物的形式。
47.根据权利要求46所述的药物组合物，其中所述药物组合物为片剂、丸剂或胶囊的形式。
48.根据权利要求42-47中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含约1mg至约2000mg的(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮。
49.根据权利要求46所述的药物组合物，其中所述药物组合物为片剂的形式，并且每片包含约50mg或约250mg的(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮。
50.一种合成(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮(化合物I)的方法，其包括在腈还原条件下对具有以下结构的腈化合物A-7进行还原：
以得到(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮(化合物I)：
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述腈还原条件包括催化氢化条件。
52.根据权利要求51所述的方法，其中所述催化氢化条件包括：
钯催化剂、铂催化剂、铁催化剂、钴催化剂、镍催化剂、钌催化剂、铑催化剂、铱催化剂或锇催化剂；以及
氢。
53.根据权利要求51所述的方法，其中所述催化氢化条件包括：
负载于活性炭、Al2O3、TiO2、ZrO2或SiO2上的钯催化剂或铂催化剂；以及
氢。
54.根据权利要求51所述的方法，其中所述催化氢化条件包括：
乙酸；
炭载氢氧化钯；以及
氢。
55.根据权利要求50所述的方法，其中腈化合物A-7
通过使苯甲酸化合物A-6
与(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇在偶合条件下进行偶合来制备。
56.根据权利要求55所述的方法，其中偶合条件包括：
1)将苯甲酸化合物A-6转化为相应的苯甲酸化合物A-6的酰氯；并且
2)使相应的苯甲酸化合物A-6的酰氯与(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇进行偶合。
57.根据权利要求56所述的方法，其中：将苯甲酸化合物A-6转化为相应的苯甲酸化合物A-6的酰氯包括用亚硫酰氯(SOCl2)、草酰氯((COCl)2)、三氯化磷(PCl3)、三氯氧磷(POCl3)或五氯化磷(PCl5)处理苯甲酸化合物A-6。
58.根据权利要求56所述的方法，其中：使相应的苯甲酸化合物A-6的酰氯与(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇进行偶合以得到腈化合物A-7包括使用非亲核叔胺碱。
59.根据权利要求58所述的方法，其中：所述非亲核叔胺碱为三乙胺、三丁胺、N,N-二异丙基乙胺、8-二氮杂双环十一碳-7-烯、1,2,2,6,6-五甲基哌啶、N-甲基吗啉或吡啶。
60.根据权利要求55所述的方法，其中使相应的苯甲酸化合物A-6的酰氯与(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇进行偶合以得到腈化合物A-7包括使用二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺·HCl(EDC HCl)、苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐(BOP)、苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基-鏻六氟磷酸盐(PyBOP)、溴-三吡咯烷基-鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)、7-氮杂-苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyAOP)、氰基(羟基亚氨基)乙酸乙酯基-O2)-三-(1-吡咯烷基)-鏻六氟磷酸盐(PyOxim)、3-(二乙氧基-磷酰氧基)-1,2,3-苯并[d]三嗪-4(3H)-酮(DEPBT)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基铵四氟硼酸盐/六氟磷酸盐(TBTU(BF4 -))、2-(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基六氟磷酸铵(HCTU)、N-[(5-氯-1H-苯并三唑-1-基)-二甲基氨基-吗啉基]-脲鎓六氟磷酸盐N-氧化物(HDMC)、2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基六氟磷酸铵(HATU)、1-[1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉基]-脲鎓六氟磷酸盐(COMU)、2-(1-氧基-吡啶-2-基)-1,1,3,3-四甲基异硫脲鎓四氟硼酸盐(TOTT)、四甲基氟代甲脒六氟磷酸盐(TFFH)、N-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)、2-丙烷膦酸酐(T3P)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓盐(DMTMM)、双-三氯甲基碳酸酯(BTC)或1,1′-羰基二咪唑(CDI)。
61.根据权利要求60所述的方法，其中所述偶合进一步包括使用一种或多种选自下组的添加剂：1-羟基苯并三唑(HOBt)、1-羟基苯并三唑-6-磺酰胺基甲基树脂·HCl(HOBt-6-磺酰胺基甲基树脂·HCl)、羟基-3,4-二氢-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪(HOOBt)、N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)、1-羟基-7-氮杂-1H-苯并三唑(HOAt)、2-氰基-2-(羟基亚氨基)乙酸乙酯和4-(N,N-二甲基氨基)吡啶(DMAP)。
62.根据权利要求55所述的方法，其中所述苯甲酸化合物A-6如下制备：使2-氯-6-(三氟甲基)异烟腈
与3-羟基苯甲酸
在适当的反应条件下进行偶合，以得到苯甲酸化合物A-6。
63.根据权利要求62所述的方法，其中：所述偶合包括亲核芳香族取代(SNAr)反应条件。
64.根据权利要求62或权利要求63所述的方法，其中：适当的反应条件包括在合适的溶剂中的有机碱或无机碱。
65.根据权利要求64所述的方法，其中：所述无机碱选自氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢铯、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、乙酸钠、乙酸钾、磷酸钠和磷酸钾；并且所述溶剂选自二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、四氢呋喃、四氢吡喃和二氧杂环己烷。
66.一种合成(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮甲磺酸盐(化合物2)的方法，其包括以下步骤：在合适的溶剂中用甲磺酸处理化合物C：
以得到化合物2
67.根据权利要求66所述的方法，其中：所述合适的溶剂为二氯甲烷。
68.根据权利要求66所述的方法，其中化合物C
通过使苯甲酸化合物A
与(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐在合适的偶合条件下进行偶合来制备。
69.根据权利要求68所述的方法，其中合适的偶合条件包括：
1)将苯甲酸化合物A转化为相应的酰氯；并且
2)使相应的苯甲酸化合物A的酰氯与(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐进行偶合，以得到化合物C。
70.根据权利要求69所述的方法，其中：将苯甲酸化合物A转化为相应的苯甲酸化合物A的酰氯包括用亚硫酰氯(SOCl2)、草酰氯((COCl)2)、三氯化磷(PCl3)、三氯氧磷(POCl3)或五氯化磷(PCl5)处理苯甲酸化合物A。
71.根据权利要求69所述的方法，其中：使相应的苯甲酸化合物A的酰氯与(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐进行偶合包括使用非亲核叔胺碱。
72.根据权利要求71所述的方法，其中：所述非亲核叔胺碱为三乙胺、三丁胺、N,N-二异丙基乙胺、8-二氮杂双环十一碳-7-烯、1,2,2,6,6-五甲基哌啶、N-甲基吗啉或吡啶。
73.根据权利要求68所述的方法，其中偶合包括使用二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺·HCl(EDC HCl)、苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐(BOP)、苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基-鏻六氟磷酸盐(PyBOP)、溴-三吡咯烷基-鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)、7-氮杂-苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyAOP)、氰基(羟基亚氨基)乙酸乙酯基-O2)-三-(1-吡咯烷基)-鏻六氟磷酸盐(PyOxim)、3-(二乙氧基-磷酰氧基)-1,2,3-苯并[d]三嗪-4(3H)-酮(DEPBT)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基铵四氟硼酸盐/六氟磷酸盐(TBTU(BF4 -))、2-(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基六氟磷酸铵(HCTU)、N-[(5-氯-1H-苯并三唑-1-基)-二甲基氨基-吗啉基]-脲鎓六氟磷酸盐N-氧化物(HDMC)、2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基六氟磷酸铵(HATU)、1-[1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉基]-脲鎓六氟磷酸盐(COMU)、2-(1-氧基-吡啶-2-基)-1,1,3,3-四甲基异硫脲鎓四氟硼酸盐(TOTT)、四甲基氟代甲脒六氟磷酸盐(TFFH)、N-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)、2-丙烷膦酸酐(T3P)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓盐(DMTMM)、双-三氯甲基碳酸酯(BTC)或1,1′-羰基二咪唑(CDI)。
74.根据权利要求73所述的方法，其中所述偶合进一步包括使用一种或多种选自下组的添加剂：1-羟基苯并三唑(HOBt)、1-羟基苯并三唑-6-磺酰胺基甲基树脂·HCl(HOBt-6-磺酰胺基甲基树脂·HCl)、羟基-3,4-二氢-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪(HOOBt)、N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)、1-羟基-7-氮杂-1H-苯并三唑(HOAt)、2-氰基-2-(羟基亚氨基)乙酸乙酯和4-(N,N-二甲基氨基)吡啶(DMAP)。
75.一种合成(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮甲磺酸盐(化合物2)的方法，其包括以下步骤：在乙腈中用0.92当量的甲磺酸处理(R,R)-反式-(3-((4-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯基)(3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲酮(化合物I)，然后通过过滤分离化合物2并在真空下干燥。
76.根据权利要求75所述的方法，其中所述在乙腈中用甲磺酸处理化合物I的步骤进一步包括在环境温度下搅拌该溶液，然后将该溶液回流。
77.一种合成(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐的方法，其包括：
(a)对外消旋-(反式-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)(苯基)甲酮进行酶生物催化，以得到((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)(苯基)甲酮；以及
(b)切割((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)(苯基)甲酮的酰胺键，以得到(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐。
78.根据权利要求77所述的方法，其中：酶生物催化包括使用合适的脂肪酶。
79.根据权利要求78所述的方法，其中：所述合适的脂肪酶能够进行脂肪酶催化的仲醇的酯交换反应。
80.根据权利要求79所述的方法，其中：所述合适的脂肪酶为真菌脂肪酶或细菌脂肪酶。
81.根据权利要求80所述的方法，其中：所述真菌脂肪酶来源于皱褶假丝酵母(CRL)、南极假丝酵母A(CAL-A)、南极假丝酵母B(CAL-B)、疏棉状嗜热丝孢菌(TL IL)或米黑根毛霉(RL IM)。
82.根据权利要求80所述的方法，其中：所述细菌脂肪酶来源于荧光假单胞菌(AK，PFL)、洋葱伯克霍尔德菌(PS)或粘性色杆菌(CVL)。
83.根据权利要求78-81中任一项所述的方法，其中：所述合适的脂肪酶为Novozyme435、Novocor AD L或Lipozyme CALB L。
84.根据权利要求79所述的方法，其中：所述脂酰酶催化的酯交换反应在酰基供体的存在下进行。
85.根据权利要求84所述的方法，其中：所述酰基供体为不可逆酰基供体。
86.根据权利要求84或权利要求85所述的方法，其中：所述酰基供体为烯醇酯或酸酐。
87.根据权利要求86所述的方法，其中：所述烯醇酯为乙烯酯、异戊二烯酯或乙氧基乙烯酯。
88.根据权利要求87所述的方法，其中：所述烯醇酯为选自下组的乙烯酯：乙酸乙烯酯、新戊酸乙烯酯、4-戊烯酸乙烯酯、巴豆酸乙烯酯、甲基丙烯酸乙烯酯、苯甲酸乙烯酯、肉桂酸乙烯酯、N-Boc甘氨酸乙烯酯和苯基(硫代)乙酸乙烯酯。
89.根据权利要求77-88中任一项所述的方法，其中：所述酶生物催化在有机溶剂中进行。
90.根据权利要求89所述的方法，其中：所述有机溶剂为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、丁醇、二乙醚、TBME、DIPE、甲苯、环己烷、己烷或庚烷。
91.根据权利要求89所述的方法，其中：所述有机溶剂为丙酮、四氢呋喃、二乙醚、叔戊醇、DIPE或甲苯。
92.根据权利要求77所述的方法，其中：步骤b)包括在合适的溶剂中用酸处理((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)(苯基)甲酮。
93.根据权利要求92所述的方法，其中：所述酸为盐酸。
94.根据权利要求92或权利要求93所述的方法，其中：所述合适的溶剂为有机溶剂。
95.根据权利要求94所述的方法，其中：所述有机溶剂为醚溶剂。
96.根据权利要求95所述的方法，其中：所述醚溶剂为1,4-二氧杂环己烷、四氢呋喃、四氢吡喃、二甲氧基乙烷或二乙醚。
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