CN109957510A - 一种高效率同步化培养生物饵料的方法 - Google Patents

一种高效率同步化培养生物饵料的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种高效率同步化培养生物饵料的方法：首先通过分组试验获取生物饵料（例如微藻）同步化生长的最适宜条件，从而在短时间内获得高密度的生物饵料细胞群体；然后在生物饵料细胞密度较大的时候进行目标产物的诱导，从而在短期内就得到较高产量的目标产物。因此本发明的同步化培养生物饵料的方法具有明显的效率高、周期短、用料少、同步化代数更多的优点。

Description

一种高效率同步化培养生物饵料的方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种高效率同步化培养生物饵料的方法。
背景技术
在生物饵料的培养过程中，由于细胞生长的非同步化，导致细胞生长缓慢、糖转化率低、细胞产量小。同步化培养技术是通过一定的物理或化学方法，使细胞群体处于比较一致的生理状态生长，这是反映细胞代谢的有效方式，也是细胞规模化培养，实现稳定、高产的有效保证。
细胞同步化可分为自然同步化和人工同步化。生物饵料规模化培养时，主要采用人工同步化培养的方法，其又可细分为选择同步法与诱导同步法。
选择同步法是根据细胞的物理性质，如细胞大小、密度、形状、电荷差异性，选择细胞分裂后的细胞形态有明显转变的生长阶段，主要包括密度梯度离心法、过滤法、膜吸附法。选择同步法需要一定的特殊设备，如密度梯度离心法需要特殊的梯度离心设备，且该方法操作繁琐，耗时长，易污染，制备量少，难以满足工业化生产的需求，仅停留在实验室研究阶段。
诱导同步法通过改变细胞生长的环境变量和操作变量，使细胞状态停留在某一生长阶段，随后解除变量的抑制作用，细胞立即开始同步生长。诱导同步法可阻断细胞周期，获得较高的同步化效率。但现有的诱导同步法中使用的化学物质较为昂贵，繁殖效率低，周期长，且对操作人员和水产养殖动物有害，不适合生物饵料大规模的培养应用。
此外，以上无论哪种方法，同步化处理的细胞传代培养2-3代后，细胞生长趋向于混乱生长。
因此，需要一种适宜大规模高效率同步化培养生物饵料的新方法。
发明内容
本发明提供一种高效率同步化培养生物饵料的方法，通过对生物饵料进行细胞生长同步化预处理和同步化的诱导，从而在短期内就可得到生长同步化并且高密度的生物饵料细胞。具体包括以下步骤：
（1）将生物饵料以10%接种量接种于含有葡萄糖的培养基中，15-45℃，100-300rpm，50-500μmol/m2/s的光照条件下培养1-2天；
（2）将步骤（1）获得的生物饵料的培养温度迅速降至4℃进行低温诱导培养1-3个月；
（3）将步骤（2）获得的生物饵料的培养温度重新升至15-45℃，继续培养1-5天，以获得基本处于同步化生长的细胞；
（4）将步骤（3）获得的细胞利用分批培养方式培养，按10%的接种量接种于生物反应器中，培养条件为：接种量为10%，装液系数0.70，培养温度15-45℃，气液比0.2-2.0 vvm，初始转速50-200rpm；
（5）当步骤（4）获得的细胞密度达到80-100g/L时，流加补料培养基；
（6）流加培养10-48小时后停止补料，使细胞饥饿一定时间，调控细胞代谢处于饥饿状态，细胞溶氧迅速上升，恢复补料后，溶氧迅速下降，调控细胞代谢恢复至营养代谢状态；
（7）重复步骤（6）若干次，直至细胞密度达到预期值。
通过上述步骤（1）-（7）可在短期内获得高密度生物饵料，并且用料少，成本低，周期短。
进一步地，在本发明的一些实施例中，在步骤（1）后、步骤（2）之前，在培养基中补加保护剂，以避免低温处理对细胞的损伤。
进一步地，在本发明的一些实施例中，饥饿时间为2-8小时，当溶氧开始上升时，记为饥饿开始时间，溶氧开始下降时，记为饥饿结束时间。
进一步地，在本发明的一些实施例中，每转接1次为1代，传代次数限制在5代以内。
进一步地，在本发明的一些实施例中，包括以下步骤：
（1）将生物饵料以10%接种量接种于含有葡萄糖的培养基中，30℃，200rpm，100μmol/m2/s的光照条件下培养2天；
（2）将步骤（1）获得的生物饵料的培养温度迅速降至4℃进行低温诱导培养1个月；
（3）将步骤（2）获得的生物饵料的培养温度重新升至30℃，继续培养3天，以获得基本处于同步化生长的细胞；
（4）将步骤（3）获得的细胞利用分批培养方式培养，按10%的接种量接种于生物反应器中，培养条件为：接种量为10%，装液系数0.70，培养温度30℃，气液比1.0 vvm，初始转速200rpm；
（5）当步骤（4）获得的细胞密度达到80-100g/L时，流加补料培养基；
（6）流加培养10-48小时后停止补料，调控细胞代谢处于饥饿状态，细胞溶氧迅速上升，恢复补料后，溶氧迅速下降，调控细胞代谢恢复至营养代谢状态；
（7）重复步骤（6）若干次，直至细胞密度达到100g/L。从而在最有利于生物饵料生长的条件下获得最高密度并且同步化的生物饵料群体。
进一步地，在本发明的一些实施例中，进一步包括步骤：（8）当步骤（7）中的细胞密度达到预期值时，例如100g/L，更换补料培养基，以诱导目标产物的合成。从而使得在生物饵料细胞密度最大的时候进行诱导其代谢目标产物，从而实现高效率获得目标产物的技术效果，无毒，成本低，时间短，效率高。
进一步地，在本发明的一些实施例中，当步骤（7）中的细胞密度达到100g/L以上时，补料速率调整为步骤（5）中流加补料速率的0.1-0.9倍，或控制培养温度，以抑制细胞生长，促进目标产物合成。并且每隔一定时间取样测定细胞干重、蛋白质含量，蛋白质含量测定采用凯氏定氮法。
进一步地，在本发明的一些实施例中，所述诱导温度为所述培养温度±（1-10）℃。
进一步地，在本发明的一些实施例中，细胞经过步骤（7）后，培养96h，干重达108g/L，最终蛋白质含量达55%。
进一步地，在本发明的一些实施例中，所述生物饵料是指微藻中的一种或几种，所述微藻包括：小球藻，组囊藻，聚球藻，集胞藻，绿球藻，三角褐指藻，螺旋藻，微星藻属，雨生红球藻，微绿球藻，咸胞藻属，衣藻，栅藻，鞭毛藻，筒柱藻，舟形藻，鱼腥藻，金藻，前沟藻属，隐甲藻，眼虫藻属。
本发明附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从下面结合附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1是诱导前细胞活性的变化图；
图2是诱导温度为25℃时细胞活性的变化图；
图3是诱导温度为4℃时细胞活性的变化图；
图4是诱导温度为-80℃时细胞活性的变化图；
图5 显示的是低温诱导1个月后，不同温度实验组的细胞在培养3天后细胞浓度对比图；
图6显示细胞经过4℃低温诱导和营养物质循环饥饿后的干重变化图。
图7显示培养基中糖处于匮乏状态时的蛋白质含量变化图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能解释为对本发明的限制。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语 “上”、“下”、“底”、“顶”、“前”、“后”、“内”、“外”、“横”、“竖”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“联接”、“连通”、“相连”、“连接”、“配合”应做广义理解，例如，可以是固定连接，一体地连接，也可以是可拆卸连接；可以是两个元件内部的连通；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连；“配合”可以是面与面的配合，也可以是点与面或线与面的配合，也包括孔轴的配合，对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
本发明的发明构思如下，首先通过分组试验获取生物饵料（例如微藻）同步化生长的最适宜条件，从而在短时间内获得高密度的生物饵料细胞群体，然后在同步化生物饵料细胞密度较高的时候进行目标产物的诱导，从而在短期内就得到最高产量的目标产物。因此本发明的同步化培养生物饵料的方法具有明显的效率高、周期短、用料少，同步化代数更多的优点。
本发明为克服现有技术的不足，提供了一种高效率同步化培养生物饵料的方法，具体的步骤如下：
首先，细胞生长同步化预处理，具体步骤如下：
（1）将生物饵料以10%接种量接种于含有葡萄糖的培养基中，15-45℃，100-300rpm，50-500μmol/m2/s的光照条件下培养1-2天；
（2）将步骤（1）获得的生物饵料的培养温度迅速降至4℃的诱导温度进行低温诱导培养1-3个月；
（3）将步骤（2）获得的生物饵料的培养温度重新升至15-45℃，继续培养1-5天，以获得基本处于同步化生长的细胞。
其中，步骤（3）中所获得的基本处于同步化生长的细胞将用于两个用途：一是作为细胞生物反应器培养的藻种，在本申请中的细胞生物反应器培养包括细胞生长同步化的诱导过程和目标产物同步化诱导过程；另一个是用于藻种的传代培养，作为下一批细胞生物反应器培养和下一次传代培养的藻种。即每转接一次为一代，每一代都有两个用途，一是作为当前批次细胞生物反应器培养的藻种，二是进行传代。
其次，细胞生长同步化的诱导，具体步骤如下：
（4）将步骤（3）获得的细胞利用分批培养方式培养，按10%的接种量接种于生物反应器中，培养条件为：接种量为10%，装液系数0.70，培养温度15-45℃，气液比0.2-2.0 vvm，初始转速50-200rpm；
（5）当步骤（4）获得的细胞密度达到80-100g/L时，流加补料培养基；
（6）流加培养10-48小时后停止补料，使细胞饥饿一定时间，调控细胞代谢处于饥饿状态，细胞溶氧迅速上升，恢复补料后，溶氧迅速下降，调控细胞代谢恢复至营养代谢状态；
（7）重复步骤（6）若干次，直至细胞密度达到预期值。
通过步骤（1）-（7）可在短期内就获得高密度的生物饵料细胞，并且生长同步化代数更多，用料省。
最后，细胞目标产物同步化的诱导，具体步骤如下：
（8）当步骤（7）中的细胞密度达到预期值时，更换补料培养基，以诱导目标产物的合成。
在本发明的一些实施例中，当步骤（7）中的细胞密度达到达到预期值时，例如100g/L或以上时，转至目标产物诱导阶段，通过控制流加补料速率（补料速率调整为步骤（5）中流加补料速率的0.1-0.9倍）或培养温度，抑制细胞生长，促进目标产物合成。
在本发明的实施例中，所述的生物饵料主要是指微藻中的一种或几种，包括：Chlorella小球藻，Anacystis组囊藻，Synechococcus聚球藻，Synechocystis集胞藻，Chlorococcum绿球藻，Phaeodactylum三角褐指藻，Spirulina螺旋藻，Micractinium微星藻属，Haematococcus雨生红球藻，Nannochloropsis微绿球藻，Brachiomonas咸胞藻属，Chlamydobonas衣藻，Scenedemus栅藻，Tetraselmis鞭毛藻，Cylindrotheca筒柱藻，Navicula舟形藻，Anabaena鱼腥藻，Poterioochromonas金藻，Amphidinium 前沟藻属，Crypthecodinium隐甲藻，Euglena眼虫藻属。
在本发明的一些实施例中，本发明优先选用绿藻实施。
在本发明的一些实施例中，本发明优先选用小球藻实施。
在本发明的一些实施例中，所述的细胞生长同步化预处理过程，低温诱导的时间为1-3个月。
在本发明的一些实施例中，为避免低温处理对细胞的损伤，低温诱导前，培养基中补加1-50%的甘油、二甲基亚砜、甲醇、乙醇、乙二醇。还可以采用其它保护剂。
在本发明的一些实施例中，所述的细胞生长同步化预处理过程，每转接1次为1代，传代次数限制在5代以内。
在本发明的一些实施例中，所述的细胞目标产物同步化的诱导过程，每转接1次为1代，传代次数限制在5代以内。
在本发明的一些实施例中，所述的细胞生长同步化诱导过程，饥饿时间为2-8小时。溶氧开始上升时，记为饥饿开始时间；溶氧开始下降时，记为饥饿结束时间。
在本发明的一些实施例中，所述的细胞生长同步化诱导过程，诱导温度为培养温度±1~10℃。
在本发明的一些实施例中，所述目标产物同步化诱导过程，诱导温度为培养温度±1~10℃。
生物饵料的高密度培养是个复杂的生化反应过程，存在时空变异性，这种变化可通过细胞在不同生长阶段的代谢活动获得。通过细胞同步化培养，使细胞各级种子达到同步生长，从而完成了细胞生长到目标产物积累的转变，使细胞密度最高，目标产物含量最高，缩短了培养周期。
现以高密度高效培养小球藻及其代谢的蛋白质为例，详细说明本发明的优点：
实施例一
如图1-4所示，考察细胞生长同步化预处理过程中，不同诱导温度对细胞活性的影响，具体的方法如下：
（a）将细胞以10%接种量接种于含有葡萄糖的培养基，30℃，200rpm，100μmol/m2/s的光照条件下培养2天，将培养温度迅速降至25℃、4℃和-80℃进行低温诱导1个月。诱导前后测定细胞活性。
（b）25℃、4℃和-80℃诱导的细胞，按10%接种量直接接入装有葡萄糖培养基的500mL摇瓶（装液量150ml）中，在30 °C、200 rpm摇床上异养培养。3天后结束培养，测定细胞干重。
藻细胞活性测定采用碘化丙啶（PI）染色的方法。藻细胞染色时，向藻液中加入PI储备液（0.2μm滤膜过滤，于4℃保存），最终浓度为10μmol/L，在黑暗室温条件下孵育20min。PI染料无法标记活细胞，而死亡细胞胞内PI染料被488nm激光激发后发射红荧光，被FL2通道（585nm）接收，FL2通道至少检测到10000个细胞。样品的分析流速为60 μL/min，上样体积为10 μL。
细胞干重测定时，取一定体积（V）的藻液于50ml离心管中，8000 rpm离心5 min，去除上清液，然后加入一定体积蒸馏水悬浮藻泥，再离心5 min，弃上清液，加入少量蒸馏水刮洗出藻泥，倒入已称重的洁净称量皿（M2）中。再将称量皿置于80℃烘箱中烘干24 小时。将该称量皿（M1）取出放于干燥箱中冷却再称量。并重复以上操作至前后两次质量差不超过2mg，即为恒重。藻液的干重按下列公式计算：X=（M1-M2）/V。
由图2-4可知，保藏1个月后，25℃和-80℃实验组的细胞活力并未发生变化，而4℃实验组活力下降。
由图5可知，4℃实验组显优于其它实验组。在低温诱导1个月后，4℃实验组的细胞在培养3天后细胞浓度还可以达到11g/L左右。
实施例二
考察细胞生长同步化预处理过程中，4℃低温下不同传代次数对细胞活性和细胞生长活力的影响。
具体的方法如下：
（a）将细胞以10%接种量接种于含有葡萄糖的培养基，30℃，200rpm，100μmol/m2/s的光照条件下培养2天，将培养温度迅速降至4℃进行低温诱导1个月。
（b）将在低温诱导后获得处于同步化生长的细胞，按10%接种量直接接入装有葡萄糖培养基的500 mL摇瓶（装液量150ml）中，在30 °C、200 rpm摇床上异养培养，3天后结束培养，得到第1代种子。将第1代种子取出一部分作为第一批细胞生物反应器培养（包括细胞生长同步化的诱导、目标产物同步化诱导）的种子，另一部份按照10%（或者是其他合适的百分比）接种量，转入含150mL新鲜种子培养基的500 mL摇瓶中，在30 °C、200 rpm摇床上异养培养，3d后结束培养，得到第2代种子。将第2代种子取出一部分作为第二批细胞生物反应器培养的种子，另一部份按照10%接种量，转入含150mL新鲜种子培养基的500 mL摇瓶中，在30 °C、200 rpm摇床上异养培养，3d后结束培养，得到第3代种子。以此类推得到第5代种子。其中每一代种子都由其上代种子按10%接种量，转入含150mL新鲜培养基的500 mL摇瓶培养。每转接1次为1代。传代培养前后测定细胞活性和细胞干重。
表1 4℃低温下传代次数对细胞活性和细胞生长活力的影响
传代次数 最终细胞干重（g/L） 活细胞比例（%）
0代 14.26 99.88
1代 11.14 99.92
2代 11.48 99.97
3代 11.56 99.49
4代 11.86 99.52
5代 10.98 99.60
6代 10.19 94.29
7代 9.82 94.73
从表1可知，传至5代，活细胞比例并未发生改变，即藻细胞活性未发生改变；当传至第6代时，活细胞比例下降了5.33%。因此，在传代培养时其传代次数应控制在5代以内。
传至5代以上后，细胞生长趋向于混乱生长，可能基于以下原因：细胞传代培养过程中，随着分裂次数的增加，DNA的错误逐渐累积，最后造成细胞生长紊乱。细胞增殖与端粒DNA长度有关。藻细胞染色体的端粒DNA会随细胞分裂次数的增加而不断缩短。DNA复制一次端粒就缩短一段，当缩短到一定程度至Hayflick点时，细胞停止复制，而走向衰亡。
实施例三
考察4℃低温诱导和营养物饥饿诱导对细胞同步化生长的影响，具体的方法如下：
（a）细胞生长同步化预处理
将细胞以10%接种量接种于含有葡萄糖的培养基，30℃，200rpm，100μmol/m2/s的光照条件下培养2d，将培养温度迅速将至4℃进行低温诱导培养1个月。将温度重新升至30℃，培养3d，获得基本处于同步生长的细胞。
（b）细胞生长同步化的诱导
将步骤（a）获得的细胞按10%的接种量接种于生物反应器，培养条件为：装液系数0.70，接种量为10%，温度30℃，气液比1.0 vvm，初始转速200rpm。首先利用分批培养方式培养，当细胞密度达到一定值时，例如100g/L时，流加补料培养基。流加培养10-48h后停止补料，调控细胞代谢处于饥饿状态；细胞溶氧迅速上升，恢复补料后，溶氧迅速下降，调控细胞代谢恢复至营养代谢状态，如此循环往复培养。
（c）细胞目标产物同步化的诱导
当步骤（b）中的细胞密度达到预期值时，转至目标产物诱导阶段，更换补料培养基（配方见表2），诱导蛋白质合成。
表2补料培养基配方
培养基组分 浓度 单位
glucose 500 g/L
KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> 8.08 g/L
K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub> 6.24 g/L
MgSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O 11.025 g/L
柠檬酸三钠 1.8 g/L
CaCl<sub>2</sub> ·2H<sub>2</sub>O 945 mg/L
FeSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O 144 mg/L
EDTA 18.9 mg/L
硼酸（H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub>） 46.68 mg/L
ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O 3.62 mg/L
MnCl<sub>2</sub>.4H<sub>2</sub>O 29.54 mg/L
Na<sub>2</sub>MoO<sub>4</sub> 0.34 mg/L
CuSO<sub>4</sub>.5H<sub>2</sub>O 1.14 mg/L
每隔一定时间取样测定细胞干重、蛋白质含量。
蛋白质含量测定采用凯氏定氮法（宁正祥. 食品成分分析手册[J]. 1998.）。
由图6和7可知，细胞经过4℃低温诱导和营养物质循环饥饿后，细胞生长达到同步，更换补料培养基，使培养基中糖处于匮乏状态，促使细胞内蛋白质大幅积累，培养96小时，细胞干重达108g/L，蛋白质含量高达55%。
值得一提地是，本发明的最终目标产物并非只有蛋白质这一种物质，还有其他代谢物质，例如脂类等物质，为了显示采用本发明的同步化培养方法的突出的技术效果，本申请中仅以蛋白质为例。换句话说，采用本发明的同步化培养生物饵料的方法不仅生物饵料的同步化生长密度高，而且代谢产物产量高，总而言之，是一种高效率同步化培养生物饵料的方法。
以上发明实例描述了本发明的具体内容，但对于本技术领域的技术人员来说是明显的，即在不脱离本发明的精神和范围的前提下，对本发明作各种变化和改动。因此，所述的权利要求覆盖了所有在本发明范围内的变动。
任何提及“一个实施例”、“实施例”、“示意性实施例”等意指结合该实施例描述的具体构件、结构或者特点包含于本发明的至少一个实施例中。在本说明书各处的该示意性表述不一定指的是相同的实施例。而且，当结合任何实施例描述具体构件、结构或者特点时，所主张的是，结合其他的实施例实现这样的构件、结构或者特点均落在本领域技术人员的范围之内。
尽管参照本发明的多个示意性实施例对本发明的具体实施方式进行了详细的描述，但是必须理解，本领域技术人员可以设计出多种其他的改进和实施例，这些改进和实施例将落在本发明原理的精神和范围之内。具体而言，在前述公开、附图以及权利要求的范围之内，可以在零部件和/或者从属组合布局的布置方面作出合理的变型和改进，而不会脱离本发明的精神。除了零部件和/或布局方面的变型和改进，其范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种高效率同步化培养生物饵料的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将生物饵料以10%接种量接种于含有葡萄糖的培养基中，培养温度为15-45℃，初始转速100-300rpm，50-500μmol/m2/s的光照条件下培养1-2天；
（2）将步骤（1）获得的生物饵料的培养温度迅速降至4℃的诱导温度进行低温诱导培养1-3个月；
（3）将步骤（2）获得的生物饵料的培养温度重新升至15-45℃，继续培养1-5天，以获得基本处于同步化生长的细胞；
（4）将步骤（3）获得的细胞利用分批培养方式培养，按10%的接种量接种于生物反应器中，接种量为10%，装液系数0.70，培养温度15-45℃，气液比0.2-2.0 vvm，初始转速50-200rpm；
（5）当步骤（4）获得的细胞密度达到80-100g/L时，流加补料培养基；
（6）流加培养10-48小时后停止补料，使细胞饥饿一定时间，调控细胞代谢处于饥饿状态，细胞溶氧迅速上升，恢复补料后，溶氧迅速下降，调控细胞代谢恢复至营养代谢状态；
（7）重复步骤（6）若干次，直至细胞密度达到预期值。
2.根据权利要求1所述的高效率同步化培养生物饵料的方法，其特征在于，在步骤（1）后、步骤（2）之前，在培养基中补加保护剂，以避免低温处理对细胞的损伤。
3.根据权利要求2所述的高效率同步化培养生物饵料的方法，其特征在于，饥饿时间为2-8小时，当溶氧开始上升时，记为饥饿开始时间，溶氧开始下降时，记为饥饿结束时间。
4.根据权利要求3所述的高效率同步化培养生物饵料的方法，其特征在于，步骤（1）中的培养温度为30℃，初始转速为200rpm，光照条件为100μmol/m2/s，培养时间为2天；步骤（2）中的低温诱导培养时间为1个月；步骤（3）中的培养温度升至30℃，继续培养3天；步骤（4）中的培养温度30℃，气液比1.0 vvm，初始转速200rpm；步骤（7）中的细胞密度预期值为100g/L。
5.根据权利要求1所述的高效率同步化培养生物饵料的方法，其特征在于，进一步包括步骤：（8）当步骤（7）中的细胞密度达到预期值时，诱导目标产物的合成。
6.根据权利要求4或5所述的高效率同步化培养生物饵料的方法，其特征在于，当步骤（7）中的细胞密度达到100g/L以上时，补料速率调整为步骤（5）中流加补料速率的0.1-0.9倍，或控制培养温度，以抑制细胞生长，促进目标产物合成，每隔一定时间取样测定细胞干重、蛋白质含量。
7.根据权利要求6所述的高效率同步化培养生物饵料的方法，其特征在于，每转接1次为1代，传代次数限制在5代以内。
8.根据权利要求7所述的高效率同步化培养生物饵料的方法，其特征在于，所述诱导温度为所述培养温度±1～10℃。
9.根据权利要求8所述的高效率同步化培养生物饵料的方法，其特征在于，生物饵料经过步骤（7）后，培养96h，细胞干重达108g/L，蛋白质含量达55%。
10.根据权利要求9所述的高效率同步化培养生物饵料的方法，其特征在于，所述生物饵料是指微藻中的一种或多种，所述微藻包括：小球藻，组囊藻，聚球藻，集胞藻，绿球藻，三角褐指藻，螺旋藻，微星藻属，雨生红球藻，微绿球藻，咸胞藻属，衣藻，栅藻，鞭毛藻，筒柱藻，舟形藻，鱼腥藻，金藻，前沟藻属，隐甲藻，眼虫藻属。
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