CN109943579B - 一种岷江百合LrCCoAOMT基因及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种岷江百合LrCCoAOMT基因及其应用，所述LrCCoAOMT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，本发明将含有LrCCoAOMT基因的过表达载体转入拟南芥中，获得的转基因拟南芥比野生型植株茎段更加粗壮，莲座叶片更大，木质素含量明显增加。本发明通过功能基因组学研究还证明LrCCoAOMT基因能够提高植物抗倒伏及其增强对病原真菌的抗性，尤其是灰葡萄孢菌和链格孢菌，在植物的育种工作中发挥着重大作用，有助于提高作物的产量和品质，对植物品质改良以及作物其它关键农艺性状的改良也具有重要的理论及实践意义，同时，还为利用基因工程调控抗逆性提供了新的途径。

Description

一种岷江百合LrCCoAOMT基因及其应用

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，特别的涉及一种岷江百合LrCCoAOMT基因及其应用。

背景技术

倒伏是作物生产中普遍存在的问题，已成为高产稳产优质的重要限制因素之一。由于作物倒伏后，打乱了叶片在空间的正常分布秩序，破坏了植物的群体结构，使叶片的光合效率锐减，茎折则破坏了茎秆的输导系统，影响根系向叶片输送水分和养分，产量大减，增加了作物收割难度，会极大地影响了作物收获产量和品质，同时也大大降低了植株的观赏价值。因此预防和提高作物倒伏对保证作物高产、稳产、优质和观赏具有重大意义。

植物真菌病害一直以来也是在农业生产中是一个非常棘手的问题，尤其是灰霉病和链格孢叶枯病，灰霉病是由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)引起的死体营养型真菌病害。灰霉病发病严重时可导致作物减产甚至绝收，是我国乃至全世界威胁作物安全生产的重要因素。链格孢叶枯病为我国农作物生产上另一类重要病害，在多雨年份和潮湿地区发生尤其严重，感染链格孢菌后为害叶片，从下部叶片向上扩展。初染病时，产生卵形至椭圆形褪绿小斑，后变黑至褐灰色，边缘黄色，湿度大时病斑上生暗色霉层，严重时叶鞘和叶片早枯。影响耔粒灌浆，造成穗粒数减少，千粒重下降。可见，灰霉病和链格孢叶枯病严重影响着农作物的产量和品质。

尽管传统防治方法在植物抗倒伏和抗病害方面取得了一定成效，但是它主要依靠传统育种方法培育抗性品种和使用化学农药，或是采取轮作等耕作制度，这些方法均存在或多或少的弊端，如使用起来费时费力、化学农药残留高且易对环境造成污染、育种周期长等，也给生态环境和食品安全带来了严重威胁，所以传统控制植物病害和植物倒伏的方法不能彻底解决问题。随着重组DNA技术的创立和发展，利用基因工程技术来培育植物新品种以应对真菌病害和植物倒伏已取得初步成效，但这些基因往往具有病菌生理小种特异性，在广谱抗病材料育种中应用起来具有一定局限性，因此深入探究植物抗倒伏、抗病性等农艺性状的机制，扩大抗病和抗倒伏的基因库并对植物进行遗传改良具有重要意义。

咖啡酰辅酶A-O－甲基转移酶(CCoAOMT)是植物木质素合成过程中的一个关键酶，能够催化咖啡酰辅酶A生成阿魏酰辅酶A，对木质素组成和结构有重要的作用。而木质素是由多种不同的木质素单体氧化偶联形成的异质性细胞聚合物，为植物次生壁主要成分，在木本植物中约占13％～35％，在植物体机械支撑、水分输送、抵御外界侵袭等方面起着重要的作用。因此，CCoAOMT基因的研究价值和应用前景极高。目前已在拟南芥(Arabidopsisthaliana)(Do C T,et al.Both caffeoyl Coenzyme A3-O-methyltransferase1andcaffeic acid O-methyltransferase1are involved in redundant functions forlignin,flavonoids and sinapoyl malate biosynthesis inArabidopsis.Planta,2007,226(5):1117-1129.)、玉米(Zea mays)(Li X,et al.Downregulation of Caffeoyl-CoAA-methyltransferase(CCoAOMT)by RNA interference leads to reduced ligninproduction in maize straw.Genet.Mol.Biol.,2013,36(4):540-546.)、慈竹(Neosinocalamus affinis)(吴晓宇等，慈竹CCoAOMT基因的克隆及生物信息学分析.南京林业大学学报.自然科学版,2012,36(3):17-22.)、水稻(Oryza sativa)、棉花(Anemonevitifolia)、烟草(Nicotiana tabacum)等20多种植物中克隆获得了CCoAOMT基因。但有关岷江百合CCoAOMT基因的研究未见报道，其生物学功能及作用机制存在空白。

岷江百合(Lilium regale Wilson)是百合科百合属中重要的野生种质资源，分布于我国四川岷江流域海拔800～2700m的河谷到山腰的岩石缝中(杨利平和符勇耀著，中国百合资源利用研究[M]，哈尔滨：东北林业大学出版社,2018.11)。相对于模式植物，岷江百合的生长发育调控机制具有复杂性和特殊性。前人研究表明，岷江百合对百合真菌病和病毒病具有较强的抗性，目前已经从岷江百合中获得多个逆境胁迫相关基因，如Lr14-3-3、LrPR10、LrbZIP1和LrWRKY1等(Li H,et al.,Sci.Hort.2014,168:9-16；He H,et al.,Genes Genom.2014,36:497-507；Zhang N N,Genes Genom.et al.,2014,36:789-798；HanQ,et al.,Sci.Hort.2016,198:370-378；专利申请号201610001896.4)。但目前在岷江百合中还未报道过同时具有抗真菌和抗倒伏作用的基因。

发明内容

针对现有技术存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种从岷江百合中克隆获得的LrCCoAOMT基因，该基因具有使植株更加粗壮、提高木质素含量、增加抗倒伏和抗真菌的生物学功能，为以后通过分子手段改良百合花卉及其他植物的遗传性状奠定基础。

本发明还提供了LrCCoAOMT基因的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种岷江百合LrCCoAOMT基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述岷江百合LrCCoAOMT基因编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明提供了上述岷江百合LrCCoAOMT基因的生物材料，所述生物材料为表达载体、表达盒、宿主细胞或工程菌。

本发明提供了上述岷江百合LrCCoAOMT基因或其编码蛋白或含有该基因的生物材料在提高植物抗倒伏中的应用。

本发明提供了上述岷江百合LrCCoAOMT基因或其编码蛋白或含有该基因的生物材料在防治由灰葡萄孢引起的植物病害中的应用。

本发明提供了上述岷江百合LrCCoAOMT基因或其编码蛋白或含有该基因的生物材料在防治由链格孢引起的植物病害中的应用。

本发明提供了岷江百合LrCCoAOMT基因或其编码蛋白或含有该基因的生物材料在促进植物莲座叶片增大中的应用。

本发明提供了岷江百合LrCCoAOMT基因或其编码蛋白或含有该基因的生物材料在促进植物木质素增加中的应用。

本发明提供了岷江百合LrCCoAOMT基因或其编码蛋白或含有该基因的生物材料在促进植物茎段粗壮中的应用。

优选的，所述植物为拟南芥、烟草或百合。

相比现有技术，本发明具有如下有益效果：

1、本发明首次克隆了岷江百合LrCCoAOMT基因全长序列如SEQ ID No.1所示，获得其编码的蛋白序列如SEQ ID No.2所示，将岷江百合LrCCoAOMT基因导入拟南芥中过表达，得到含有LrCCoAOMT基因的转基因拟南芥株系，结果发现转基因植物比野生型植株茎段更加粗壮，莲座叶片更大，木质素含量明显增加，同时本发明通过功能基因组学还研究证明LrCCoAOMT基因具有提高植物抗倒伏及其增强了对病原真菌的抗性，尤其是灰葡萄孢菌和链格孢菌，在植物的育种工作中发挥着重大作用，有助于提高作物的产量和品质。

2、本发明提供一种可以同时改良植物茎段粗壮、木质素含量、抗倒伏和抗真菌的新方法。该方法通过分子手段定向培育转基因植物，具有育种周期短，操作简单，容易获得目标材料等优点。利用该方法可获得如观赏花卉(尤其是百合属花卉)、农作物以及苗木等新材料或新品种。本发明对植物品质改良以及作物其他关键农艺性状的改良也具有重要的理论及实践意义，同时，还为利用基因工程调控抗逆性提供了新的途径。

附图说明

图1为植物过表达载体pBI121-35S::LrCCoAOMT的图谱示意图；

图2为转基因拟南芥基因组DNA的PCR扩增nptII基因的电泳图；

M为DL2000，CK为空白对照，WT为野生型，L1-L4为T0代转基因株系；

图3为转基因拟南芥中LrCCoAOMT基因转录水平的表达分析示意图；

WT是野生型拟南芥，OX-L1、OX-L2和OX-L3分别为转基因拟南芥阳性株系；

图4为转基因拟南芥与野生型植株的表型图；

图A为生长30d的拟南芥植株：从左往右依次是转基因株系OX-L1、OX-L2和野生型植株；图B为生长45d的拟南芥植株：从左往右依次是转基因株系OX-L1、OX-L2和野生型植株；

图5为转基因拟南芥与野生型植株茎段的周长大小比较柱状图；

图6为转基因拟南芥与野生型植株莲座叶片大小比较照片；

A为转基因拟南芥，B为野生型植株，标尺代表实际长度8mm；

图7为转基因拟南芥与野生型拟南芥叶片的木质素染色分析照片；

A和C分别为1倍和10倍物镜下转基因拟南芥叶片；B和D分别为1倍和10倍物镜野生型拟南芥叶片。

图8为转基因拟南芥与野生型拟南芥的离体叶片受真菌侵染时的图片；

A和C分别为野生型拟南芥和转基因拟南芥的离体叶片受灰葡萄孢菌侵染后的图片；B和D分别为野生型拟南芥和转基因拟南芥的离体叶片受链格孢菌侵染后的图片。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内容。实施例中所述原料如无特殊说明，均为普通市售产品。实施例中所述的实验方法无特别说明，即按常规分子生物学实验方法操作。

实施例1岷江百合LrCCoAOMT全长基因克隆及序列分析

课题组前期利用灰葡萄孢侵染岷江百合(现蕾期)，以处理24h后的叶片为材料，采用TRIzol^TMPlus RNAPurification Kit(12183555，Invitrogen^TM)，按说明书步骤提取总RNA，利用DNase I(18047019，Invitrogen^TM)去除残余的微量DNA，并用分光光度计测定RNA的浓度，备用。

取约2.0μg岷江百合叶片总RNA，按照PrimeScript II first-strand cDNAsynthesis kit(6210A,Takara)说明书步骤合成第一链cDNA。

PCR扩增体系为高保真扩增酶Prime STAR HS(R010A,TaKaRa)0.25μL，5×PrimeSTAR Buffer(Mg²⁺Plus)5μL，正向引物(LrCCoAOMT-F,10μM)0.5μL，反向引物(LrCCoAOMT-R,10μM)0.5μL，模板(DNA)1μL，dNTP(2.5mM)2μL，无菌ddH₂O补足至25μL。

正向引物和反向引物序列如下：

LrCCoAOMT-F：5’-GCATCAACTATGTCGACAGCC-3’

LrCCoAOMT-R：5’-GCAACATATCACTTGATGCGG-3’

PCR反应程序为：预变性94℃，3min；94℃，30s；60℃，45s；72℃，30s，35个循环；72℃，10min。

获得PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳分析，按胶回收试剂盒(9672，Takara)纯化后备用。

利用平末端加A试剂将纯化的DNA片段加A，通过TA克隆将其与pMD20-T vector(6019，Takara)相连，连接产物转化大肠杆菌DH5a，从含有氨苄霉素(100mg/L)的LB培养板上挑取2-3个阳性克隆测序进行测序分析，结果表明，岷江百合LrCCoAOMT全长基因序列如SEQ ID NO.1所示，含有741bp的开放阅读框(含终止密码)。

根据SEQ ID NO.1，通过DNAman软件翻译，获得岷江百合LrCCoAOMT的蛋白质序列如SEQ ID NO.2所示，含有246个氨基酸(*表示终止信号)。借助蛋白亚细胞定位在线分析(WoLF PSORT)显示，LrCCoAOMT在植物细胞中的表达定位可能性依次为cyto:9.5,cyto_E.R.:5.5,plas:2,nucl:1,cysk:1。通过cNLS Mapper在线预测表明，在LrCCoAOMT蛋白没有核定位信号序列。通过ExPASy ProtParam在线分析表明，LrCCoAOMT的分子量约为27.65KDa，等电点为5.38。将LrCCoAOMT全长核苷酸序列和氨基酸序列在NCBI数据库中进行BLAST比对，发现其与RNA测序获得的拼接序列岷江百合CCoAOMT-like protein(GenBank:KX842497.1和ASV46323.1)，相似度分别为73.86％(565bp/765bp)和84.25％(214aa/254aa)，分别存在200个核苷酸和40个氨基酸序列的区别。

实施例2植物过表达载体的构建

根据岷江百合LrCCoAOMT全长基因序列(SEQ ID NO.1)，设计引物LrCCoAOMT-inf-F和LrCCoAOMT-inf-R，引物中引入无缝克隆(In-fusion)载体接头序列。以实施例1中TA连接的阳性克隆质粒为模板，以LrCCoAOMT-inf-F和LrCCoAOMT-inf-R为引物进行基因LrCCoAOMT的特异性扩增。

所述引物序列如下：

LrCCoAOMT-inf-F:

LrCCoAOMT-inf-R:

其中，正向引物的加粗序列为Xba I酶切位点，反向引物的加粗序列为Sac I酶切位点。下划线处为In-fusion克隆载体接头序列。

PCR扩增体系为高保真酶PrimeSTAR HS(R010A,TaKaRa)0.5μL，5xPrimeSTARBuffer(Mg²⁺Plus)10μL，正向引物(10μM)1μL，反向引物(10μM)1μL，模板(30倍稀释的质粒)1μL，dNTP(2.5mM)4μL，无菌ddH₂O补足至50μL。

PCR反应程序为：预变性94℃，3min；94℃，30s；60℃，45s；72℃，30s，35个循环；72℃，10min。

将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。扩增得到的目的片段与预期片段大小相同，按照胶回收试剂盒(9672，Takara)的说明书步骤回收纯化，即获得目的基因片段。

用Xba I和Sac I双酶切植物双元表达载体pBI121质粒。酶切体系为：pBI121vector1μg；Xba I1μL；Sac I1μL；10xBuffer M2μL；无菌ddH₂O补足至20μL；37℃反应3h。酶切结束后，根据Takara琼脂糖凝胶回收试剂盒回收pBI121载体大片段。

利用无缝克隆技术(In-fusion HD Cloning Kit，Takara)构建pBI121-35S::LrCCoAOMT过表达载体。

重组反应体系为：

Purifed PCR fragment(回收的LrCCoAOMT目的片段)50ng；Linearized vector(pBI121载体大片段)100-150ng；5x In-fusion HD Enzyme Premix2μL；无菌ddH₂O补足至10μL。然后按照分子克隆实验指南将上述重组反应体系转化大肠杆菌DH5a，并涂布于含有卡纳霉素(100μg/mL)的LB培养基上，通过阳性克隆筛选和测序，获得正确的含LrCCoAOMT基因片段的重组表达载体pBI121-35S::LrCCoAOMT(图1)。重组表达载体中目的基因LrCCoAOMT的5’端位于组成型启动子P_35S下游，它能使LrCCoAOMT基因过量表达；LrCCoAOMT的3’端组装有NOS终止子，可以有效终止基因的转录。在重组表达载体上组装有nptII基因，作为转基因植物的筛选标记，可以用卡纳霉素进行转基因植株的筛选。在重组表达载体上组装有LB和RB序列，促使组装于其间的表达框架和筛选标记基因nptII整合至植物基因组中。

采用TIANprep Mini Plasmid Kit质粒抽提试剂盒(DP103,TIANGEN)提取并纯化上述大肠杆菌中的pBI121-35S::LrCCoAOMT质粒。用液氮冻融法将上述构建的pBI121-35S::LrCCoAOMT过表达载体转入农杆菌EHA105(AC1010,上海唯地)感受态细胞，获得阳性克隆加入20％左右的甘油置于-80℃保存备用。

实施例3农杆菌介导的拟南芥遗传转化及转基因阳性系筛选

拟南芥的遗传转化采用浸花法(Zhang X.,et al.,Nat Protoc.2006,1:641-646)。将携带pBI121-35S::LrCCoAOMT载体的农杆菌导入哥伦比亚Col型拟南芥。用卡那霉素(100mg/L)筛选具抗性的拟南芥再生幼苗，采用CTAB法提取基因组DNA，用PCR扩增检测阳性植株。

PCR扩增引物如下：

nptII-F:5'-TTGGGTGGAGAGGCTATTCGG-3'

nptII-R:5'-GCCACAGTCGATGAATCCAG-3'

PCR反应试剂选用大连宝生物(TaKaRa)产品(RR001A)，具体包括：DNA1μL，10×Buffer(含20mM Mg²⁺)2μL，2.5mM/L dNTP2μL，10uM/L正反向引物各0.5μL，5U/μL Taq DNA聚合酶0.2μL，13.8μL ddH2O；扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃退火45s，72℃延伸45s，共35个循环；72℃延伸10min；12℃保存。

PCR检测结果如图2所示，在野生型植株(WT)中检测不到nptII标记基因的存在，只有在T0转基因植株中扩增nptII标记基因，表明重组表达框已经导入拟南芥基因组。

从验证的转基因拟南芥中收取种子，继续播种，直到获得T2或T3代稳定株系。进一步，通过半定量RT-PCR鉴定得到表现型良好的转基因过表达株系，采用Trizol试剂(Invitrogen^TM)，按说明书步骤提取拟南芥叶片总RNA，利用DNase I(Invitrogen^TM)去除残余DNA，采用cDNA反转录试剂(Takara)并按照说明书步骤合成第一链cDNA。以拟南芥β–actin基因为内参，通过半定量RT-PCR方法分析转基因株系与野生型中LrCCoAOMT基因的表达水平。

检测β–actin基因引物为：

β–actin-F:5'-CACTTGCACCAAGCAGCATGAAGA-3'

β–actin-R:5'-AATGGAACCACCGATCCAGACACT-3'

检测目的基因引物为：

CaMV35S-F:5'-AGAAGACGTTCCAACCACGTCT-3'

LrCCoAOMT-R：5'-GCAACATATCACTTGATGCGG-3'

结果如图3所示，在3个代表转基因株系(OX-L1、OX-L2和OX-L3)中目的基因岷江百合LrCCoAOMT均显著上调表达，而在野生型植株(WT)中检测不到LrCCoAOMT的表达，表明LrCCoAOMT已经导入拟南芥基因组并成功转录表达。

实施例4：转基因拟南芥的表型观察及木质素染色分析

鉴定了土壤中生长约30天左右的拟南芥植株表型，结果如图4A所示，相对于野生型植株，过表达LrCCoAOMT的转基因植株表现为稍微矮化，但茎段更加粗壮。统计30株转基因拟南芥和对照组的茎段周长数据如图5，结果表明，过表达LrCCoAOMT的植株茎段周长平均为7.49mm和7.54mm，明显大于野生型对照4.44mm。在温室中继续培养至45天左右的拟南芥植株表型，如图4B所示，过表达LrCCoAOMT的植株仍然保持直立生长，而野生型对照发生倒伏，表明转基因株系更加坚硬，具有抗倒伏的功能，推测其与木质素含量有关。

观察转基因拟南芥和野生型植株的莲座叶发现，过表达LrCCoAOMT的植株莲座叶明显大于野生型对照(图6)。分别取转基因拟南芥和野生型对照的莲座叶为处理对象，采用间苯三酚染色方法(Li C,et al.PtoMYB92 is a transcriptional activator of thelignin biosynthetic pathway during secondary cell wall formation in Populustomentosa.Plant Cell Physiol.2015,56(12):2436-2446.)对其进行木质素染色分析，结果如图7所示，转基因拟南芥(图7A和7C)叶片中木质素染色比野生型对照(图7B和7D)更深，同时前者的叶脉也更粗，表明过表达LrCCoAOMT有利于木质素的合成。

实施例5转基因拟南芥的抗真菌验证

以温室中正常培养45天左右的拟南芥植株为材料，选取转基因株系和野生型的基部莲座叶片，根据前人报道(Chen X,et al.Overexpression ofAtWRKY28 and AtWRKY75in Arabidopsis enhances resistance to oxalic acid and Sclerotiniasclerotiorum.Plant Cell Rep.2013,32(10):1589-1599.)的方法进行抗菌试验分析。将病原真菌灰葡萄孢(Botrytis cinerea)和链格孢(Alternaria alternate)分别接种到离体的转基因拟南芥莲座叶片和野生型拟南芥莲座叶片上，保湿后在光照培养箱正常培养，2～3d后观察病原真菌的侵染情况。结果如图8所示。

从图中可以看出，转LrCCoAOMT基因拟南芥的叶片接种灰葡萄孢菌和链格孢菌后，叶片仍为深绿色，且菌斑直径于接种时无明显变化(图8C和图8D)，说明转基因植株没有被灰葡萄孢菌和链格孢菌侵染；而野生型拟南芥(WT)的叶片接种灰葡萄孢菌后，叶片表现出发黑和腐烂现象，菌斑直径明显扩大(图8A)，野生型拟南芥(WT)的叶片接种链格孢菌后，叶片表现出发黄和腐烂现象，菌斑直径明显扩大(图8B)。该结果表明，过表达LrCCoAOMT基因的转基因材料对灰葡萄孢菌和链格孢菌的生长均有较强的抑制作用。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

SEQUENCE LISTING

<110> 长江师范学院；

<120> 一种岷江百合LrCCoAOMT基因及其应用

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 741

<212> DNA

<213> 岷江百合（Lilium regale Wilson）

<400> 1

atgtcgacag ccatcgctaa cggagagcag aagagcaggc accaggaggt aggccacaag 60

agcctcctcc agagcgatgc tctctatcag tatatcctcg aaaccagtgt ttacccccgc 120

gaacctgccg ccatgaaaga actccgtgac atcactgcca accatccctg gaacatcatg 180

accacctccg ccgacgaggg acagttcctc aacatgcttc tcaagctcat caatgccaag 240

aacaccatgg agattggcgt cttcaccggc tactccctcc tcgccactgc tctcgccctt 300

ccggacgacg gaaagatctt ggcaatggat atcaaccgtg acaactacga acttggactt 360

cctgtgatcg agaaggctgg ggttgcccac aagatcgatt tccgagaggg gccagctctt 420

ccagtgctgg accagatgct ggaggacccc cagaatcatg gctcgtttga ctttgtgttt 480

gtcgatgccg acaaggacaa ttaccttaac tatcaccgcc ggctgctgga cctggtgaag 540

gtgggcgggt tgatcggcta cgacaacacg ctctggaacg gctcggttgt ggccccgcca 600

gatgcgccgc tgcggaagta tgtgcgatac taccggtact tcgtgttgga gctgaacaac 660

gcccttgctg cggatccacg cattgaaatc tgccagctcc cagttggcga cggcatcacc 720

ctctgccgcc gcatcaagtg a 741

<210> 2

<211> 246

<212> PRT

<213> 岷江百合（Lilium regale Wilson）

<400> 2

MSTAIANGEQ KSRHQEVGHK SLLQSDALYQ YILETSVYPR EPAAMKELRD ITANHPWNIM 60

TTSADEGQFL NMLLKLINAK NTMEIGVFTG YSLLATALAL PDDGKILAMD INRDNYELGL 120

PVIEKAGVAH KIDFREGPAL PVLDQMLEDP QNHGSFDFVF VDADKDNYLN YHRRLLDLVK 180

VGGLIGYDNT LWNGSVVAPP DAPLRKYVRY YRYFVLELNN ALAADPRIEI CQLPVGDGIT 240

LCRRIK 246

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

gcatcaacta tgtcgacagc c 21

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

gcaacatatc acttgatgcg g 21

<210> 5

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

cacgggggac tctagagcat caactatgtc gacagcc 37

<210> 6

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

gatcggggaa attcgagctc gcaacatatc acttgatgcg g 41

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

ttgggtggag aggctattcg g 21

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

gccacagtcg atgaatccag 20

<210> 9

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

cacttgcacc aagcagcatg aaga 24

<210> 10

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

aatggaacca ccgatccaga cact 24

<210> 11

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

cagaagacgtt ccaaccacgt ct 22

<210> 12

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

gcaacatatc acttgatgcg g 21

Claims (10)

1.一种岷江百合LrCCoAOMT基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述岷江百合LrCCoAOMT基因编码的蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一种生物材料，其特征在于，所述生物材料包括含有权利要求1所述岷江百合LrCCoAOMT基因的表达载体、表达盒或工程菌。

4.权利要求1所述的岷江百合LrCCoAOMT基因或权利要求2所述的蛋白或权利要求3所述的生物材料在提高植物抗倒伏中的应用。

5.权利要求1所述的岷江百合LrCCoAOMT基因或权利要求2所述的蛋白或权利要求3所述的生物材料在防治由灰葡萄孢引起的植物病害中的应用。

6.权利要求1所述的岷江百合LrCCoAOMT基因或权利要求2所述的蛋白或权利要求3所述的生物材料在防治由链格孢引起的植物病害中的应用。

7.权利要求1所述的岷江百合LrCCoAOMT基因或权利要求2所述的蛋白或权利要求3所述的生物材料在促进植物莲座叶片增大中的应用。

8.权利要求1所述的岷江百合LrCCoAOMT基因或权利要求2所述的蛋白或权利要求3所述的生物材料在促进植物木质素增加中的应用。

9.权利要求1所述的岷江百合LrCCoAOMT基因或权利要求2所述的蛋白或权利要求3所述的生物材料在促进植物茎段粗壮中的应用。

10.如权利要求4~9任一项所述应用，其特征在于，所述植物为拟南芥、烟草或百合。

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