CN109939132A - 一种增加人参中稀有人参皂苷含量的炮制方法及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种增加人参中稀有人参皂苷含量的炮制方法，主要涉及采用双歧杆菌对鲜人参或复水后的生晒人参或冻干人参进行发酵处理，发酵后清洗、加热灭菌后晾晒干燥或烘干即得成品，该炮制方法可以显著提高人参中稀有人参皂苷的含量，且可以增加多种新的稀有人参皂苷种类。该炮制方法得到的人参制品具有一定的的抗肿瘤效果和增强免疫力功能，有望成为开发保健食品和抗肿瘤药物的原料。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种增加人参中稀有人参皂苷含量的炮制方法及其用途。
背景技术
研究表明人参皂苷单体可以提高常用传统化疗药物的疗效，并且保护正常组织以免受化疗伤害，实现“增效减毒”。比如具有抗癌活性的人参皂苷Rg3可以和多烯紫杉醇、顺铂和多柔比星等化疗药联用，显著提高治疗效果。
其中，二醇组稀有人参皂苷，例如人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg3和人参皂苷Rh2，人参皂苷CK、人参皂苷Rk1和人参皂苷Rg5都被陆续证实具有良好的抗肿瘤作用和增强免疫力功能。传统的人参炮制方法主要有生切片、焙制、烘制和蜜炙等，现代应用最广泛的是生切片、蒸制、糖制等，目前人参炮制品中含有的稀有人参皂苷含量极低，创新炮制技术，使人参中的人参皂苷特定转化为生物活性更强的稀有人参皂苷，增加人参中稀有人参皂苷含量，是亟需解决的问题。
发明内容
本发明提供一种人参制品的炮制方法，该炮制方法可以显著提高人参中稀有人参皂苷的含量，且可以增加多种新的稀有人参皂苷种类，该炮制方法得到的人参制品具有良好的抗肿瘤效果和增强免疫力功能，可以作为开发保健食品和抗肿瘤药物的原料。
一种增加人参中稀有人参皂苷含量的炮制方法，包括如下步骤：
（1）原料制备：将新鲜人参用清水清洗干净或将复水后的生晒参或冻干人参清洗干净备用；
（2）菌种培养：将双歧杆菌置于2～8℃下冷藏，厌氧培养箱37℃活化菌种后接种于种子培养基中≥12h；
（3）接种：培养后的液体双歧杆菌种子按照5%～10%（V/V）的接种量接种于发酵培养基（同种子培养基）中，将步骤（1）中的人参按照质量比1:2～1:5接种于发酵培养基中。
（4）发酵：接种后于35℃～40℃发酵24h～120h；
（5）后处理：将发酵完成的人参用清水冲洗后，在121℃，灭菌15min后晾晒或烘干至含水量至5%～8%即得成品炮制品。
在上述实施方案中，所述步骤（2）中种子培养基制备过程：称取半胱氨酸 0.5g，酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉 4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸镁 0.2 g，乙酸钠 5.0 g，柠檬酸三铵 2.0 g，磷酸氢二钾 2.0 g，硫酸锰 0.05 g，吐温-80 1.0 g，L-半胱氨酸盐0.5g，加蒸馏水 1000mL，在pH 6.2±0.2，温度 121℃下，灭菌15min即可。
在上述实施方案中，所述步骤（2）中双歧杆菌为长双歧杆菌或短双歧杆菌或青春双歧杆菌中的任何一种。
在上述实施方案中，所述炮制品中稀有人参皂苷包含有人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2、人参皂苷Rk1、人参皂苷Rg5、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd。
在上述实施方案中，所述人参炮制品可用于制备抗肿瘤药物。
在上述实施方案中，所述人参炮制品了用于制备增强免疫力保健食品。
本发明的人参炮制工艺为区别于传统炮制方法的全新工艺，设计思路为利用益生菌双歧杆菌在发酵过程中对人参中含有的人参皂苷成分进行代谢转化，得到新的稀有人参皂苷，并且可显著增加稀有人参皂苷的含量，该方法炮制后人参经过细胞学试验和动物学试验，具有显著增强动物免疫力和抑制体外肿瘤细胞增殖的作用，可成为抗肿瘤药物和多种保健食品的原料。
附图说明
图1 人参皂苷Rb1的结构式 ；
图2 人参皂苷Rd的结构式；
图3 20(R)-人参皂苷Rg3的结构式；
图4 20(S)-人参皂苷Rh2的结构式；
图5 人参皂苷Rk1的结构式 ；
图6 人参皂苷Rg5的结构式；
图7 生晒参的HPLC检测结果；
图8 炮制后人参的HPLC检测结果。
具体实施方式
下面给出的实施例，是为了更清楚理解本发明的设计思路和呈现本发明得到人参炮制品的新的特性，并不限定本发明的权利要求和相关发明内容。
实施例1
按照下列步骤炮制人参：
（1）将新采挖的人参的用清水清洗干净后备用；
（2）以一株青春双歧杆菌为菌种，使用前置于冰箱2-8℃冷藏。厌氧培养箱37℃活化菌种后接种于种子培养基（MRS培养基，配方：半胱氨酸 0.5g，酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉 4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸镁 0.2 g，乙酸钠 5.0 g，柠檬酸三铵 2.0 g，磷酸氢二钾2.0 g，硫酸锰 0.05 g，吐温-80 1.0 g，L-半胱氨酸盐 0.5g，蒸馏水 1000mL。pH6.2±0.2。121℃，15min灭菌）12h；
（3）培养后的液体双歧杆菌种子按照5%（V/V）的接种量接种于发酵培养基（同种子培养基）中，将步骤1中的人参按照质量比1:2接种于发酵培养基中；
（4）接种后于35℃发酵120h；
（5）发酵完成的人参清水冲洗后121℃，15min灭菌后晾晒至含水量8%即得人参炮制成品。
实施例2
按照下列步骤炮制人参：
（1）将新采挖的人参的用清水清洗干净后备用；
（2）以一株长双歧杆菌为菌种，使用前置于冰箱2-8℃冷藏。厌氧培养箱37℃活化菌种后接种于种子培养基（MRS培养基，配方：半胱氨酸 0.5g，酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸镁 0.2 g，乙酸钠 5.0 g，柠檬酸三铵 2.0 g，磷酸氢二钾 2.0g，硫酸锰 0.05 g，吐温-80 1.0 g，L-半胱氨酸盐 0.5g，蒸馏水 1000mL。pH6.2±0.2。121℃，15min灭菌）12h；
（3）培养后的液体双歧杆菌种子按照10%（V/V）的接种量接种于发酵培养基（同种子培养基）中，将步骤1中的人参按照质量比1:4接种于发酵培养基中；
（4）接种后于37℃发酵48h；
（5）发酵完成的人参清水冲洗后121℃，15min灭菌后烘干至含水量8%即得人参炮制成品。
实施例3
按照下列步骤炮制人参：
（1）将生晒参复水后用清水清洗干净后备用；
（2）以一株长双歧杆菌为菌种，使用前置于冰箱2-8℃冷藏。厌氧培养箱37℃活化菌种后接种于种子培养基（MRS培养基，配方：半胱氨酸 0.5g，酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸镁 0.2 g，乙酸钠 5.0 g，柠檬酸三铵 2.0 g，磷酸氢二钾 2.0g，硫酸锰 0.05 g，吐温-80 1.0 g，L-半胱氨酸盐 0.5g，蒸馏水 1000mL。pH6.2±0.2。121℃，15min灭菌）12h；
（3）培养后的液体双歧杆菌种子按照7%（V/V）的接种量接种于发酵培养基（同种子培养基）中，将步骤1中的人参按照质量比1:3接种于发酵培养基中；
（4）接种后于36℃发酵24h；
（5）发酵完成的人参清水冲洗后121℃，15min灭菌后晾晒至含水量7%即得人参炮制成品。
实施例4
按照下列步骤炮制人参：
（1）将生晒参复水后用清水清洗干净后备用；
（2）以一株短双歧杆菌为菌种，使用前置于冰箱2-8℃冷藏。厌氧培养箱37℃活化菌种后接种于种子培养基（MRS培养基，配方：半胱氨酸 0.5g，酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸镁 0.2 g，乙酸钠 5.0 g，柠檬酸三铵 2.0 g，磷酸氢二钾 2.0g，硫酸锰 0.05 g，吐温-80 1.0 g，L-半胱氨酸盐 0.5g，蒸馏水 1000mL。pH6.2±0.2。121℃，15min灭菌）12h；
（3）培养后的液体双歧杆菌种子按照9%（V/V）的接种量接种于发酵培养基（同种子培养基）中，将步骤1中的人参按照质量比1:5接种于发酵培养基中；
（4） 接种后于40℃发酵96h；
（5）发酵完成的人参清水冲洗后121℃，15min灭菌后晾晒至含水量6%即得人参炮制成品。
实施例5
按照下列步骤炮制人参：
（1）将冻干人参复水后用清水清洗干净后备用；
（2）以一株青春双歧杆菌为菌种，使用前置于冰箱2-8℃冷藏。厌氧培养箱37℃活化菌种后接种于种子培养基（MRS培养基，配方：半胱氨酸 0.5g，酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉 4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸镁 0.2 g，乙酸钠 5.0 g，柠檬酸三铵 2.0 g，磷酸氢二钾2.0 g，硫酸锰 0.05 g，吐温-80 1.0 g，L-半胱氨酸盐 0.5g，蒸馏水 1000mL。pH6.2±0.2。121℃，15min灭菌）12h；
（3）培养后的液体双歧杆菌种子按照6%（V/V）的接种量接种于发酵培养基（同种子培养基）中，将步骤1中的人参按照质量比1:3接种于发酵培养基中；
（4）接种后于38℃发酵72h；
（5）发酵完成的人参清水冲洗后121℃，15min灭菌后晾晒至含水量7%即得人参炮制成品。
实施例6
按照下列步骤炮制人参：
（1）将冻干人参复水后用清水清洗干净后备用；
（2）以一株短双歧杆菌为菌种，使用前置于冰箱2-8℃冷藏。厌氧培养箱37℃活化菌种后接种于种子培养基（MRS培养基，配方：半胱氨酸 0.5g，酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸镁 0.2 g，乙酸钠 5.0 g，柠檬酸三铵 2.0 g，磷酸氢二钾 2.0g，硫酸锰 0.05 g，吐温-80 1.0 g，L-半胱氨酸盐 0.5g，蒸馏水 1000mL。pH6.2±0.2。121℃，15min灭菌）12h；
（3）培养后的液体双歧杆菌种子按照8%（V/V）的接种量接种于发酵培养基（同种子培养基）中，将步骤1中的人参按照质量比1:4接种于发酵培养基中；
（4）接种后于39℃发酵48h；
（5）发酵完成的人参清水冲洗后121℃，15min灭菌后烘干至含水量5%即得人参炮制成品。
实施例7
按照实施例1炮制得到的人参粉碎至50-100目后用无水甲醇超声提取30分钟，取上清真空浓缩后干燥得到稀有人参皂苷粗品。以此粗品为供试样品，以20(R)-人参皂苷Rg3和20(S)-人参皂苷Rh2为阳性对照品，检测其对小鼠NK细胞活性的影响。
将不同剂量的供试样品、20(R)-人参皂苷Rg3和20(S)-人参皂苷Rh2对小鼠进行28d灌胃，以常规方法收集实验组、阳性对照组和空白对照组小鼠脾细胞，经洗涤后用10%FCS 1640培养液配成3×106个/mL的细胞悬液，加于96孔细胞培养板内，每只小鼠6孔（3孔为试验组，3孔为效应细胞对照组）每孔100μL。在试验孔内加100μL已制备好的靶细胞悬液，同时另设3孔作为靶细胞对照组；混匀，置培养箱内37℃孵育2h，然后每孔加10μL MTT(5mg/mL)，继续孵育4h，轻轻吸弃培养上清液，加二甲基亚砜150μL，充分振荡10min，置酶联免疫检测仪于570nm波长处测OD值。按下述公式换算成NK细活性的百分率。
表1 各组样品对小鼠NK细胞活性的影响
由表1可以看出，用本明工艺得到的人参炮制品具有增强小鼠NK细胞活性的显著作用。
实施例8
按照实施例7炮制得到的人参粉碎至50-100目后用无水甲醇超声提取30分钟，取上清真空浓缩后干燥得到稀有人参皂苷粗品。以此粗品为供试样品，以20(R)-人参皂苷Rg3和20(S)-人参皂苷Rh2为阳性对照品，检测其肺癌和乳腺癌细胞的抑制活性。
分别通过供试样品和对照样品对人乳腺癌细胞 MCF-7和肺癌细胞 NCI-H460培养时的抑制作用评价其抑制癌细胞的功效。按照常规方法复苏培养肿瘤细胞，MTT法检测细胞活性，对肿瘤细胞的抑制作用如表2和表3。
表2 各组样品对人乳腺癌细胞 MCF-7的抑制作用
表3 各组样品对人肺癌细胞 NCI-H460的抑制作用
实验结果表明，炮制人参提取皂苷在体外对人乳腺癌细胞 MCF-7和肺癌细胞 NCI-H460具有良好的抑制作用，且抑制效果优于20(R)-人参皂苷Rg3和20(S)-人参皂苷Rh2。
实施例9
将生晒参和按照实施例3炮制的人参均粉碎后用无水甲醇提取浓缩干燥，按照2mg/mL的浓度溶解于90%甲醇中进行液相色谱检测，进样20μL，检测波长203nm，检测条件如表4
表4 HPLC检测流动相条件
检测结果见附图7和图8，图7（20min后信号值超过100mAU的7个峰依次为：人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2和人参皂苷Rd），图8（45min后8个峰依次为：20(S)-人参皂苷Rh1、20(R)-人参皂苷Rh1、人参皂苷Rk3、人参皂苷Rh4、20(S)-人参皂苷Rg3、20(R)-人参皂苷Rg3、人参皂苷Rk1和人参皂苷Rg5）由检测结果可知，生晒参中极性大的人参皂苷皂炮制后转化为低极性的人参皂苷Rg3、人参皂苷Rk1和人参皂苷Rg5。
Claims (6)
1.一种增加人参中稀有人参皂苷含量的炮制方法，其特征在于，包括如下步骤：
原料制备：将新鲜人参用清水清洗干净或将复水后的生晒参或冻干人参清洗干净备用；
菌种培养：将双歧杆菌置于2～8℃下冷藏，厌氧培养箱37℃活化菌种后接种于种子培养基中≥12h；
接种：培养后的液体双歧杆菌种子按照5%～10%（V/V）的接种量接种于发酵培养基（同种子培养基）中，将步骤（1）中的人参按照质量比1:2～1:5接种于发酵培养基中；
发酵：接种后于35℃～40℃发酵24h～120h；
后处理：将发酵完成的人参用清水冲洗后，在121℃，灭菌15min后晾晒或烘干至含水量至5%～8%即得成品炮制品。
2.根据权利要求1所述的一种增加人参中稀有人参皂苷含量的炮制方法，其特征在于，所述步骤（2）中种子培养基制备过程：称取半胱氨酸 0.5g，酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉 4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸镁 0.2 g，乙酸钠 5.0 g，柠檬酸三铵 2.0 g，磷酸氢二钾2.0 g，硫酸锰 0.05 g，吐温-80 1.0 g，L-半胱氨酸盐 0.5g，加蒸馏水 1000mL，在pH 6.2±0.2，温度 121℃下，灭菌15min即可。
3.权利要求1一种增加人参中稀有人参皂苷含量的炮制方法，其特征在于，所述步骤（2）中双歧杆菌为长双歧杆菌或短双歧杆菌或青春双歧杆菌中的任何一种。
4.权利要求1一种增加人参中稀有人参皂苷含量的炮制方法，其特征在于，所述炮制品中稀有人参皂苷包含有人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2、人参皂苷Rk1、人参皂苷Rg5、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd。
5.一种根据权利要求1～4任意一项所述炮制人参的方法制备人参炮制品的应用，其特征在于，所述人参炮制品用于制备抗肿瘤药物。
6.一种根据权利要求1～4任意一项所述炮制人参的方法制备人参炮制品的应用，其特征在于，所述人参炮制品用于制备增强免疫力保健食品。
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2019
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| CN111973645A (zh) * | 2020-08-28 | 2020-11-24 | 天津盛实百草中药科技有限公司 | 一种人参水提取物、其制备方法和人参饮品 |
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