CN109922798A - 包括乳香胶的酸性提取物的组合物及其用于治疗视神经病变的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包括乳香胶的分离的酸性级分的组合物和制剂，及其用于治疗视神经病变状况的用途。

Description

包括乳香胶的酸性提取物的组合物及其用于治疗视神经病变 的用途
发明领域
本发明涉及乳香胶的分离的酸性级分用于治疗视神经病变例如视神经缺血和青光眼的治疗用途。更特别地，本发明涉及使用包括乳香胶的分离的酸性级分的组合物治疗此类视神经病变状况的方法。
发明背景
乳香，也被称为乳香胶(gum mastric)或乳香胶(mastric gum)，是作为来自漆树科家族(family Anacardiaceae)的成员乳香黄连木(Pistacia lentiscus L.)的流出物获得的树木树脂。乳香在古代地中海世界中用于治疗各种状况，例如肠胃紊乱，例如胃痛、消化不良和消化性溃疡。已经公开了向患有十二指肠溃疡的人类患者和患有诱导的胃溃疡和十二指肠溃疡的实验大鼠口服施用乳香具有治疗效果(Al-Habbal等人(1984)Clin ExpPharmacop Physio 11(5):541-4；Said等人(1986)J Ethnopharmacol 15(3):271-8)。
美国专利申请公布第2005/0238740号涉及乳香及其组分用于控制微生物感染的用途。
欧洲专利申请第1520585号公开了从黄连木属(genus Pistacia)的植物中获得的产物用于制造治疗或预防癌症的药剂的用途。
国际专利申请公布第WO 2005/112967号公开了从乳香中纯化具有抗增殖效果的抗癌材料，该抗癌材料存在于通过将乳香悬浮在溶剂中并且除去不溶性级分而获得的可溶性级分中，所述溶剂选自非酸性脂肪族烃、含有至少25％的水溶性非酸性脂肪族烃的水溶液、或其组合。
本发明的一些发明人的国际专利申请公布第WO 2010/100650号涉及乳香胶级分的治疗用途。
本发明的一些发明人的国际专利申请公布第WO 2010/100651号涉及聚合物月桂烯的组合物。
本发明的一些发明人的国际专利申请公布第WO 2012/032523号涉及包括乳香胶的酸性提取物的组合物。
国际专利申请公布第WO 2005/094837号涉及乳香二烯酮酸(masticadienonicacid)作为DNA聚合酶-β的抑制剂用于治疗癌症、肿瘤和神经退行性疾病的用途。
Marner等人(1991)公开了从乳香黄连木(P.lentiscus)的乳香胶中识别各种三萜类(Marner等人(1991)Phytochemistry，30,3709-3712)。
Giner-Larza等人(2002)公开了来自红脂乳香树瘿(pistacia terebinthusgall)的抗炎三萜烯类(Planta Med(2002)，68,311-315)。
视神经含有神经细胞的轴突，所述神经细胞的轴突从视网膜显露，在视盘(opticdisc)处离开眼睛，并且到达视觉皮质，在该处来自眼睛的输入被加工成视力。视神经病变是指由于任何原因对视神经的损伤。这些神经细胞的损伤和死亡导致视神经病变的特性特征。主要症状是视力丧失，其中颜色在受影响的眼睛中出现巧妙地褪色(washed out)。基于医学检查，视神经头(optic nerve head)可以通过检眼镜可视化。苍白的盘是长期视神经病变的特性。在许多情况下，仅一只眼被影响，并且患者可能未意识到色觉的丧失，直至医生要求他们遮盖健康的眼睛。
视神经病变可以由各种原因引起，例如缺血性视神经病变、视神经炎、压迫性视神经病变、浸润性视神经病变、创伤性视神经病变、线粒体视神经病变、营养性视神经病变、毒性视神经病变、遗传性视神经病变以及类似的。目前使用非常少的视神经病变治疗，并且大部分对特定类型的视神经病变具有有限的效果。
因此，本领域对于治疗由各种原因引起的视神经病变的状况有用并且有效的组合物存在需求。本领域没有提供乳香胶的分离的酸性级分可以用于治疗视神经病变状况的任何教导。
发明概述
本发明提供：包括乳香胶的分离的酸性级分的药物组合物，所述乳香胶的分离的酸性级分含有可溶于极性有机溶剂和非极性有机溶剂两者中的酸性化合物，并且具有视神经神经再生性质；以及使用该药物组合物治疗视神经病变状况的方法，所述视神经病变状况例如视神经缺血状况、青光眼以及类似状况。更具体地，公开了包括从乳香胶中提取的分离的酸性级分的组合物能够治疗相关状况，例如由视神经的缺血和/或创伤引起的状况。
在一些实施方案中，本发明部分地基于出乎意料的发现：乳香胶的分离的酸性级分呈现出这样的增强的视神经再生生物学活性。本发明的分离的酸性级分呈现出可以用于各种治疗应用的多种有益的生物学活性。
根据一些实施方案，因此提供了包括乳香胶的分离的酸性级分和药学上可接受的载体的组合物用于治疗视神经病变状况的用途。
根据一些实施方案，提供了治疗需要其的受试者中的视神经病变状况的方法，该方法包括施用包括有效量的乳香胶的分离的酸性级分和药学上可接受的载体的组合物，其中该级分的特征在于其可溶于至少一种极性有机溶剂中和至少一种非极性有机溶剂中，并且其中所述级分大体上不含可溶于所述极性有机溶剂中但不溶于所述非极性有机溶剂中的化合物。
在一些实施方案中，通过酸-碱提取从乳香胶的可溶于至少一种极性有机溶剂和至少一种非极性有机溶剂中的分离的级分获得酸性级分，从而将分离的酸性级分与乳香胶的可溶于至少一种极性有机溶剂和至少一种非极性有机溶剂中的非酸性级分分离。
在一些实施方案中，分离的酸性级分包括以下中的至少两种：乳香二烯醇酸(masticadienolic acid)；乳香二烯酮酸；异乳香二烯酮酸(isomasticadienonic acid)、异乳香二烯醇酸(isomasticadienolic acid)、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸(oleanonic acid)和模绕酮酸(moronic acid)。
根据另外的实施方案，提供了乳香胶的分离的酸性级分用于制备用于治疗视神经病变的药剂的用途。
根据另一方面，提供了用于在治疗视神经病变中使用的乳香胶的分离的酸性级分。
根据一些实施方案，提供了用于在治疗视神经病变中使用的药物组合物，该药物组合物包括乳香胶的分离的酸性级分和药学上可接受的载体。
在各种实施方案中，组合物可以通过肠胃外途径施用。根据一些实施方案，施用途径可以是经由肠胃外注射。在各种实施方案中，通过选自由以下组成的组的肠胃外途径来进行施用的步骤：静脉内(i.v.)、肌内、皮下(sc)、皮内、腹膜内、动脉内、脑内、脑室内、骨内、眼内、玻璃体内和鞘内。
在一些实施方案中，视神经病变状况包括其中视神经被损伤的任何状况。在一些实施方案中，视神经病变状况可以选自例如但不限于以下的状况：创伤性神经病变(可以由视神经的任何类型的创伤引起)；缺血性神经病变(例如，诸如，非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)、前部缺血性视神经病变(AION)、后部缺血性视神经病变)；放射性视神经病变(RON))、青光眼、视神经炎、压迫性视神经病变、浸润性视神经病变、线粒体视神经病变、营养性视神经病变、毒性视神经病变、遗传性视神经病变以及类似状况；或其组合。每种可能性是单独的实施方案。
在一些实施方案中，视神经病变状况由视神经中脂蛋白物质的沉积导致的视神经的损伤引起，或与该视神经的损伤相关。
在一些实施方案中，视神经病变状况由视神经中脂蛋白物质的沉积导致的视神经的损伤引起，或与该视神经的损伤相关，其中脂蛋白物质的沉积是贮积症(storagedisease)的结果。
在一些实施方案中，视神经病变状况由视神经中脂蛋白物质的沉积导致的视神经的损伤引起，或与该视神经的损伤相关，其中脂蛋白物质的沉积是贮积症的结果，并且其中脂蛋白物质是脂褐质。
根据一些实施方案，本发明还提供了包括来自乳香胶的分离的酸性级分的分离的化合物的组合物，该分离的化合物具有治疗活性。在一些实施方案中，组合物可以包括多种分离的化合物，该分离的化合物选自根据本发明的乳香胶的酸性级分中存在的个体酸性化合物。根据一些实施方案，组合物包括至少三种选自以下的分离的化合物：乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸、乳香二烯醇酸、异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸、模绕酮酸和3-氧代-羽扇-20(29)-烯-28-酸。根据一些实施方案，组合物包括至少三种选自以下的分离的化合物：乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸、乳香二烯醇酸、异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸、模绕酮酸。根据一些实施方案，组合物包括至少三种选自以下的分离的化合物：乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸、乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸和模绕酮酸。在一些实施方案中，组合物包括至少乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸和齐墩果酮酸。与单独的个体化合物相比，这些组合物出乎意料地呈现出协同效果，由此化合物的组合在视神经病变状况的治疗中呈现出显著改进的治疗效果。
根据一些实施方案，组合物包括至少两种选自以下的分离的化合物：乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸、乳香二烯醇酸、异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸、模绕酮酸和3-氧代-羽扇-20(29)-烯-28-酸。根据一些实施方案，组合物包括至少两种选自以下的分离的化合物：乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸、乳香二烯醇酸、异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸和模绕酮酸。根据一些实施方案，组合物包括至少两种选自以下的分离的化合物：乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸、乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸、模绕酮酸。在一些示例性实施方案中，组合物包括至少乳香二烯酮酸和异乳香二烯酮酸。与单独的个体化合物相比，这些组合物出乎意料地呈现出协同效果，由此化合物的组合在视神经病变状况的治疗中呈现出显著改进的治疗效果。
根据本发明的实施方案的乳香酸性级分可以区别于现有技术中公开的乳香级分，因为根据本发明的实施方案的乳香酸性级分的制备涉及使用极性溶剂和非极性溶剂两者，而现有技术仅教导使用极性溶剂。通过仅使用极性溶剂制备的酸性级分含有不溶于非极性溶剂例如己烷中的化合物，而这些化合物不存在于本发明的酸性级分中。因此，本发明的级分包括不同于现有技术中公开的化合物的化合物的组合。此外，本发明的发明人已经发现，本发明的酸性级分出乎意料地具有现有技术未提出的出乎意料的治疗活性，特别是治疗一系列视神经病变状况的治疗活性。
本发明的教导已经用通过三步提取程序制备的乳香胶提取物来例示，以便获得可溶于极性溶剂和非极性溶剂两者中的酸性级分，并且其中消除了来自乳香胶的可溶于极性溶剂中但不溶于非极性溶剂中的材料。在另外的实施方案中，分离的酸性级分中的主要化合物已经被分离和识别。这些化合物中的一些的各种组合在视神经病变状况的治疗中呈现出出乎意料的协同效果。
还应理解，本文公开的级分和组合物的生物学活性受某些化合物的存在所抑制，这些化合物存在于在没有应用如本文公开的前两个提取步骤的情况下制备的酸性级分中。
根据一些实施方案，本发明提供了用于在治疗视神经病变状况中使用的组合物，该组合物包括有效量的乳香胶的分离的酸性级分和药学上可接受的载体；其中所述级分的特征在于其可溶于至少一种极性有机溶剂中并且可溶于至少一种非极性有机溶剂中，并且其中所述级分大体上不含可溶于所述极性有机溶剂中但不溶于所述非极性有机溶剂中的化合物。
在一些实施方案中，组合物可以通过包括以下步骤的工艺来获得：
(a)用极性有机溶剂处理乳香胶；
(b)分离可溶于所述极性有机溶剂中的级分；
(c)任选地除去所述极性有机溶剂；
(d)用非极性有机溶剂处理步骤(b)或(c)中获得的可溶性级分；
(e)分离可溶于所述非极性有机溶剂中的级分；
(f)任选地除去所述非极性有机溶剂；
(g)将步骤(f)中获得的级分溶解于有机溶剂中；
(h)用碱性溶液处理步骤(g)中获得的溶液，以便获得碱性级分；以及
(i)用酸溶液酸化步骤(h)中获得的碱性级分；
在一些实施方案中，步骤(d)至(f)可以在步骤(a)至(c)之前。
在一些实施方案中，在步骤(h)中用碱性溶液的处理(碱化)包括用一种或更多种合适的碱性水溶液提取步骤(g)中获得的溶液；或将步骤(g)中获得的溶液与碱性离子交换树脂接触。
在一些实施方案中，步骤(h)包括将步骤(g)中获得的溶液与碱性离子交换树脂接触，并且之后通过过滤除去碱性离子交换树脂。在这些实施方案中，步骤(i)包括用酸性溶液处理碱性离子交换树脂。
在一些实施方案中，工艺还包括以下步骤：
(j)用有机溶剂提取步骤(i)中获得的酸化的级分；
(k)任选地将步骤(j)中获得的有机级分与干燥剂接触，以便除去剩余的水；
(l)从步骤(i)、(j)或(k)中任一个中获得的级分中除去有机溶剂和/或过量的酸；以及
(m)将步骤(l)中获得的分离的级分溶解于载体中。
在一些实施方案中，步骤(a)至(c)在步骤(d)至(f)之前进行；或步骤(d)至(f)在步骤(a)至(c)之前进行。在一些实施方案中，(a)至(c)和/或步骤(d)至(f)被重复多个循环。
在一些实施方案中，步骤(c)、(f)和(l)中的任一个包括通过选自由以下组成的组的手段除去溶剂：旋转蒸发、应用高真空及其组合。
在一些实施方案中，步骤(h)包括用碱性水溶液提取步骤(g)中获得的溶液，并且收集由此获得的有机级分。在一些实施方案中，工艺还包括将从步骤(h)中获得的有机级分与步骤(i)、(j)或(k)中任一个中获得的级分组合。
在一些实施方案中，将步骤(h)中获得的有机级分与以在从步骤(h)中获得的有机级分的从约0.1％至约50％的范围内的量的步骤(i)、(j)或(k)中任一个中获得的级分组合。在一些实施方案中，该量在从0.5％至50％的范围内；或在2％至25％的范围内；或在0.1％至10％的范围内。
适合用于本发明的极性有机溶剂可以选自醇、醚、酯、酰胺、醛、酮、腈、及其组合。
合适的极性有机溶剂的具体实例包括甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、1-丁醇、2-丁醇、仲丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、新戊醇、3-甲基-1-丁醇、2-甲基-1-丁醇、3-甲基-2-丁醇、2-甲基-2-丁醇、乙二醇、乙二醇单甲基醚、二乙醚、甲基乙基醚、乙基丙基醚、甲基丙基醚、1,2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃、二氢呋喃、呋喃、吡喃、二氢吡喃、四氢吡喃、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙醛、甲酸甲酯、甲酸乙酯、丙酸乙酯、丙酸甲酯、二氯甲烷、氯仿、二甲基甲酰胺、乙酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、丙酮、乙基甲基酮、二乙基酮、乙腈、丙腈及其组合。
在一些实施方案中，极性有机溶剂选自甲醇和乙醇或其组合。在一些实施方案中，极性溶剂是乙醇。
适合用于本发明的非极性有机溶剂可以选自无环的或环状的、饱和的或不饱和的脂族烃和芳香族烃及其组合，它们中的每一种任选地被一个或更多个卤素取代。在一些实施方案中，非极性有机溶剂选自C5-C10烷烃、C5-C10环烷烃、C6-C14芳香族烃和C7-C14全氟烷烃、及其组合。
在一些实施方案中，非极性有机溶剂选自戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、癸烷、环戊烷、环己烷、环庚烷、苯、甲苯、二甲苯、及其异构体和混合物。
在一些实施方案中，C5-C10烷烃选自由以下组成的组：戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、癸烷、环己烷、及其异构体和混合物。在一些实施方案中，非极性有机溶剂是己烷。
在一些实施方案中，步骤(g)中和步骤(j)中的有机溶剂独立地选自由以下组成的组；二烷基醚、烷基芳基醚、二芳基醚、酯、酮、卤代烃、C5-C14芳香族烃、C5-C14全氟烷烃。
在一些实施方案中，步骤(g)中和步骤(j)中的合适的有机溶剂是相同或不同的。
在一些实施方案中，有机溶剂包括二烷基醚。在一些实施方案中，有机溶剂是二乙醚。
在一些实施方案中，极性有机溶剂包括乙醇，非极性有机溶剂包括己烷，并且有机溶剂包括二乙醚。
在一些实施方案中，步骤(h)包括用碱性水溶液碱化。在一些实施方案中，碱性水溶液通过将无机碱溶解于水中来制备。
在一些实施方案中，无机碱选自由以下组成的组：碳酸钠、氢氧化钠、碳酸钾、氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸氢钠、磷酸钠、氢氧化锂、碳酸锂和磷酸钾。
在一些实施方案中，无机碱是碳酸钠。在一些实施方案中，碳酸钠在水中的浓度在从2％w/w至20％w/w的范围内。在一些实施方案中，碳酸钠的浓度在从3％w/w至15％w/w的范围内。在一些实施方案中，碳酸钠的浓度是约5％w/w。
在一些实施方案中，无机碱是氢氧化钠。
在一些实施方案中，碱性水溶液通过将水溶性有机碱溶解于水中来制备。
在一些实施方案中，第一无机碱是约5％w/w含水碳酸钠，接着是约4％w/w含水氢氧化钠。
在一些实施方案中，步骤(h)中的碱化包括将步骤(g)中获得的溶液与碱性离子交换树脂接触。在一些实施方案中，碱性离子交换树脂包括苯乙烯二乙烯基苯、聚丙烯酸或甲醛酚共聚物(formophenolic copolymer)。
在一些实施方案中，将溶液碱化进行至高于约7的pH。
在一些实施方案中，将溶液碱化进行至8-10的pH范围。
在一些实施方案中，将溶液碱化进行至10-13的pH范围。
在一些实施方案中，将溶液碱化进行至>13的pH。
在一些实施方案中，步骤(i)中的酸性溶液包括酸性水溶液或酸性非水溶液。
在一些实施方案中，步骤(i)中的酸性水溶液通过将无机酸溶解于水中或通过将浓矿物酸溶液稀释来制备。
在一些实施方案中，酸性水溶液是盐酸或磷酸的溶液。
在一些实施方案中，酸性水溶液是盐酸的溶液。
在一些实施方案中，步骤(i)中的酸性水溶液通过将有机酸溶解于水中或通过将浓矿物酸溶液稀释来制备。
在一些实施方案中，将酸化进行至低于约7的pH。在一些实施方案中，将酸化进行至低于约6的pH。在一些实施方案中，将酸化进行至低于约5的pH。在一些实施方案中，将酸化进行至低于约4的pH。在一些实施方案中，将酸化进行至低于约3的pH。
在一些实施方案中，将酸化进行至在1-3的范围内的pH。
在一些实施方案中，步骤(i)中的酸性非水溶液通过将有机酸溶解于选自醇、酯、醚、酰胺或其混合物的非水性有机溶剂中来制备。在一些实施方案中，非水性溶剂是甲醇或乙醇或其混合物。
在一些实施方案中，有机酸选自由以下组成的组：甲酸、乙酸、丙酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸和对甲苯磺酸。
在一些实施方案中，步骤(k)中使用的干燥剂选自以下的组：硫酸钠、硫酸镁、硫酸钙、氯化钙、氯化镁、硫酸钾。
在一些实施方案中，组合物大体上不含可溶于所述极性有机溶剂中并且不溶于所述非极性有机溶剂中的萜烯化合物。
在一些实施方案中，基于组合物的总重量，组合物包括从约0.01％至约25％(w/w)的乳香胶的分离的酸性级分。在一些实施方案中，基于组合物的总重量，组合物包括从约0.01％至约12％(w/w)的乳香胶的分离的酸性级分。
在一些实施方案中，分离的酸性级分包括以下中的至少一种：乳香二烯酮酸、乳香二烯醇酸、异乳香二烯酮酸、异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸、模绕酮酸和3-氧代-羽扇-20(29)-烯-28-酸。每种可能性是本发明的单独的实施方案。
在一些实施方案中，分离的酸性级分包括以下中的至少一种：乳香二烯酮酸、乳香二烯醇酸、异乳香二烯酮酸、异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸和模绕酮酸。每种可能性是本发明的单独的实施方案。
在一些实施方案中，分离的酸性级分还包括齐墩果酸(oleanolic acid)、熊果酸(ursonic acid)和乌索酸(ursolic acid)中的至少一种。每种可能性是本发明的单独的实施方案。
在一些实施方案中，分离的酸性级分可以大体上不含精油。
在一些实施方案中，分离的酸性级分包括至少一种萜酸。在一些实施方案中，分离的酸性级分包括至少一种三萜酸。在一些实施方案中，至少一种萜酸包括至少一种三萜酸。在一些实施方案中，至少一种三萜酸选自由以下组成的组：乳香二烯醇酸、异乳香二烯酮酸、异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸、模绕酮酸、3-氧代-羽扇-20(29)-烯-28-酸及其组合。每种可能性是本发明的单独的实施方案。
在一些实施方案中，至少一种萜酸呈单体形式。在一些实施方案中，至少一种萜酸呈低聚形式。在一些实施方案中，低聚形式选自由以下组成的组：二聚体、三聚体及其组合。每种可能性是本发明的单独的实施方案。
在一些实施方案中，分离的酸性级分包括单体三萜酸和二聚三萜酸的组合。在一些实施方案中，分离的酸性级分包括单体三萜酸、二聚三萜酸和三聚三萜酸的组合。
在一些实施方案中，组合物包括以下中的至少一种：乳香二烯酮酸、乳香二烯醇酸、异乳香二烯酮酸、异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸、模绕酮酸和3-氧代-羽扇-20(29)-烯-28-酸。每种可能性是本发明的单独的实施方案。
在一些实施方案中，组合物还包括以下中的至少一种：齐墩果酸、熊果酸和乌索酸。每种可能性是本发明的单独的实施方案。
在一些实施方案中，组合物包括至少一种萜酸。萜酸的实施方案如前文所描述。
在一些实施方案中，组合物包括至少一种三萜酸。三萜酸的实施方案如前文所描述。
在一些实施方案中，乳香胶源自分类在漆树科家族中的植物。合适的植物包括分类在选自由以下组成的组的属中的那些植物：黄连木属(Pistacia)、松属(Pinus)、云杉属(Picea)、刺柏属(Juniperus)、Alsies、落叶松属(Larix)、金鱼草属(Antirrhinum)、乳香属(Boswellia)、柑橘属(Citrus)和菊三七属(Gynura)。在一些实施方案中，合适的植物选自黄连木属。在一些实施方案中，黄连木属的物种选自由以下组成的组：乳香黄连木、大西洋黄连木(P.atlantica)、巴勒氏登黄连木(P.palestina)、P.saportae、黑黄连木(P.terebinthus)、阿月浑子(P.vera)和全缘黄连木(P.integerrima)。在一些实施方案中，黄连木属的物种是Pistacia lentiscus var.Chia。在一些实施方案中，黄连木属的物种是乳香黄连木。在一些实施方案中，黄连木属的物种是Pistacia lentiscusL.var.latifolius Coss。
在一些实施方案中，分离的酸性级分源自选自由以下组成的组的植物材料：树脂、叶、枝条、根、花、种子、芽、树皮、坚果和根。
在一些实施方案中，乳香胶的分离的酸性级分通过包括以下步骤的工艺来获得：
(a)用极性有机溶剂处理乳香胶；
(b)分离可溶于所述极性有机溶剂中的级分；
(c)任选地除去所述极性有机溶剂；
(d)用非极性有机溶剂处理步骤(b)或(c)中获得的可溶性级分；
(e)分离可溶于所述非极性有机溶剂中的级分；
(f)任选地除去所述非极性有机溶剂；
(g)将步骤(f)中获得的级分溶解于有机溶剂中；
(h)用碱性溶液处理步骤(g)中获得的溶液，以便获得碱性级分；
(i)用酸溶液酸化步骤(h)中获得的碱性级分；
(j)用有机溶剂提取步骤(i)中获得的酸化的级分；
(k)任选地将步骤(j)中获得的有机级分与干燥剂接触，以便除去剩余的水；
(l)从步骤(i)、(j)或(k)中任一个中获得的级分中除去有机溶剂和/或过量的酸；以及
(m)将步骤(l)中获得的分离的级分溶解于载体中。
在另外的实施方案中，本发明提供了包括至少一种三萜酸和药学上可接受的载体的药物组合物。在一些实施方案中，至少一种三萜酸选自由以下组成的组：乳香二烯醇酸、异乳香二烯酮酸、异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、乳香二烯酮酸、齐墩果酮酸、模绕酮酸、3-氧代-羽扇-20(29)-烯-28-酸及其组合。每种可能性是本发明的单独的实施方案。
根据一些实施方案，本发明提供了药物组合物，该药物组合物基本上由作为药学上活性成分的异乳香二烯酮酸和乳香二烯酮酸；以及药学上可接受的载体组成。当与个体化合物的功效相比时，两种化合物的组合存在导致关于组合物在治疗视神经病变状况中的功效的增强/协同效果。异乳香二烯酮酸和乳香二烯酮酸中的任一种可以从天然来源例如乳香胶中被分离，或可以是化学合成的产物。
在一些实施方案中，异乳香二烯酮酸和乳香二烯酮酸之间的比率是约1:1w/w。
根据一些实施方案，本发明提供了用于在治疗视神经病变中使用的药物组合物，该药物组合物基本上由作为唯一的药学上活性成分的齐墩果酮酸、异乳香二烯酮酸和乳香二烯酮酸；以及药学上可接受的载体组成。
根据一些实施方案，本发明提供了用于治疗视神经病变状况的药物组合物，该药物组合物基本上由作为唯一的药学上活性成分的异乳香二烯酮酸和乳香二烯酮酸；以及药学上可接受的载体组成。当与个体化合物的功效相比时，这两种化合物的组合存在导致关于组合物在治疗视神经病变状况中的功效的协同效果。
齐墩果酮酸、异乳香二烯酮酸和乳香二烯酮酸中的任一种可以从天然来源例如乳香胶中被分离，或可以是化学合成的产物。在一些实施方案中，异乳香二烯酸和乳香二烯酮酸和齐墩果酮酸之间的比率是约1:1:1w/w/w。
在一些实施方案中，至少一种三萜酸是单体。在一些实施方案中，组合物包括齐墩果酮酸和模绕酮酸的单体。在一些实施方案中，齐墩果酮酸和模绕酮酸的单体是化学合成反应的产物。
在一些实施方案中，至少一种三萜酸包括低聚形式。在一些实施方案中，低聚形式选自由以下组成的组：二聚体、三聚体及其组合。每种可能性是本发明的单独的实施方案。在一些实施方案中，低聚形式是二聚体。在一些实施方案中，至少一种三萜酸是化学合成的产物。
在一些实施方案中，至少一种包括低聚形式的三萜酸是化学合成的产物。在一些实施方案中，至少一种三萜酸是二聚形式，并且是化学合成的产物。
在一些实施方案中，至少一种三萜酸源自天然来源，特别是植物来源。
在一些实施方案中，组合物包括不同三萜酸的组合，其中至少一种三萜酸是化学合成的产物，并且至少一种其他三萜酸源自植物来源。
天然来源包括分类在漆树科家族中的植物。合适的植物包括分类在选自由以下组成的组的属中的那些植物：黄连木属、松属、云杉属、刺柏属、Alsies、落叶松属、金鱼草属、乳香属、柑橘属和菊三七属。在一些实施方案中，合适的植物选自黄连木属。在一些实施方案中，黄连木属的物种选自由以下组成的组：乳香黄连木、大西洋黄连木、巴勒氏登黄连木、P.saportae、黑黄连木、阿月浑子和全缘黄连木。在一些实施方案中，黄连木属的物种是乳香黄连木。
在一些实施方案中，天然来源是选自由以下组成的组的植物材料：树脂、叶、枝条、根、花、种子、芽、树皮、坚果和根。
在一些实施方案中，天然来源是分类在选自由以下组成的组的属中的植物：罗勒属(Ocimum)、月桂属(Laurus)和薰衣草属(Lavendula)。
在一些实施方案中，药学上可接受的载体包括疏水性载体。在一些实施方案中，疏水性载体包括至少一种油。在一些实施方案中，油选自由以下组成的组：矿物油、植物油及其组合。在一些实施方案中，植物油选自由以下组成的组：棉籽油、橄榄油、杏仁油、菜籽油、椰子油、玉米油、葡萄籽油、花生油、藏花油、芝麻油、大豆油、及其组合。在一些实施方案中，矿物油是轻质矿物油。在一些实施方案中，疏水性载体包括至少一种蜡。在一些实施方案中，疏水性载体包括至少一种油和至少一种蜡的组合。在一些实施方案中，组合物是药物组合物。
在一些实施方案中，受试者是人类。在一些实施方案中，受试者是非人类哺乳动物。
在一些实施方案中，提供了治疗视神经病变状况的方法，该方法包括施用组合物，该组合物基本上由包括至少两种三萜酸的三萜类的混合物和药学上可接受的载体组成，所述至少两种三萜酸选自由以下组成的组：乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸、异乳香二烯醇酸、乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸、模绕酮酸及其组合。
在一些实施方案中，提供了包括有效量的乳香胶的分离的酸性级分和药学上可接受的载体的组合物用于治疗视神经病变状况的用途；其中所述级分的特征在于其可溶于至少一种极性有机溶剂中并且可溶于至少一种非极性有机溶剂中，并且其中所述级分大体上不含可溶于所述极性有机溶剂中但不溶于所述非极性有机溶剂中的化合物。
在一些实施方案中，提供了用于在治疗需要其的受试者中的视神经病变状况中使用的组合物，该组合物基本上由包括至少两种三萜酸的三萜类的混合物和药学上可接受的载体组成，所述至少两种三萜酸选自由以下组成的组：乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸、异乳香二烯醇酸、乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸、模绕酮酸及其组合。
在一些实施方案中，提供了试剂盒，该试剂盒包括：包括有效量的乳香胶的分离的酸性级分和药学上可接受的载体的药物组合物；以及使用该试剂盒用于治疗需要其的受试者中的视神经病变状况的使用说明。
在一些实施方案中，提供了试剂盒，该试剂盒包括：基本上由包括至少两种三萜酸的三萜类的混合物和药学上可接受的载体组成的药物组合物，所述至少两种三萜酸选自由以下组成的组：乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸、异乳香二烯醇酸、乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸、模绕酮酸及其组合；以及使用该试剂盒用于治疗需要其的受试者中的视神经病变状况的使用说明。
本发明的其他目的、特征和优点从以下描述和附图将变得清楚。
附图简述
示例性实施方案在参考图中被图示。图中示出的部件和特征的尺寸通常为了呈现的方便和清楚而选择，并且不一定按比例示出。下文列出了附图。
图1-条形图，示出了与对照经媒介物治疗的组相比，在随访第28天进行的经治疗的大鼠(眼睛激光辐照)的平均振幅的pERG测量相对变化。
图2-条形图，示出了整装视网膜(whole-mounted retina)中的Brn3a+RGC计数。
图3-条形图，示出了与未作过实验对象的大鼠相比，各种经治疗的大鼠组的每视神经区域的视神经轴突的数目(％)；以及
图4-从用指定制剂(D、E)治疗的大鼠、经媒介物治疗的大鼠或未经治疗的大鼠(未作过实验对象的)获得的视神经的半薄横截面的图像。
发明详述
根据一些实施方案，提供了包括从乳香胶提取的分离的酸性级分的组合物、其中包括的化合物、及其用于治疗视神经病变的用途。
本文首次公开了，如本文所描述的乳香胶的所公开的分离的酸性级分可以用作用于治疗视神经病变(由各种后果引起)的药物组合物中的活性成分，所述视神经病变是可以导致受折磨的受试者的视力丧失的严重状况。
定义
如本文所使用的，术语“乳香”、“乳香树脂”、“乳香胶(gum mastic)”和“乳香胶(mastic gum)”可互换地被使用，以指作为来自分类在漆树科家族的任何树的流出物获得的树的树脂(也称为油树脂)。黄连木属中的树，最显著地乳香黄连木，并且特别是品种P.lentiscus L.cv.Chia(在希俄斯的希腊岛上种植的)，以其高的乳香收率而闻名。其他种类包括P.lentiscus L.var.emarginata Engl.和P.lentiscus L.var.latifolia Coss。另外的种类的黄连木(Pistacia)包括例如大西洋黄连木、巴勒氏登黄连木、P.saportae、黑黄连木、阿月浑子和全缘黄连木。
如本文所使用的，术语“乳香二烯酸(masticadienoic acid)”、“乳香二烯酮酸(masticadienonic acid)”、“乳香二烯酸的(masticadienoic)”和“乳香二烯酮酸的(masticadienonic)”可以可互换地被使用。
为了提供关于本申请中经常提到的并且涉及的化合物的分子结构的清晰度，下文呈现本申请中使用的具有名称和首字母缩略词的结构清单。
乳香二烯酮酸是指24-Z-乳香二烯酮酸，本申请中使用的首字母缩略词MDA是指该化合物。24-Z-乳香二烯酮酸的化学结构如下：
24-Z-乳香二烯酮酸(MDA)
异乳香二烯酮酸指24-Z-异乳香二烯酮酸，本申请中使用的首字母缩略词IMDA是指该化合物。24-Z-异乳香二烯酮酸的化学结构如下：
24-Z-异乳香二烯酮酸(IMDA)
齐墩果酮酸(OLN或OA)具有以下分子结构：
齐墩果酮酸(OLN或OA)
模绕酮酸(MO或MA)具有以下分子结构：
模绕酮酸(MA)
24-Z-乳香二烯醇酸(MLA)具有以下结构，3-羟基基团具有β-构型：
MLA(3-β-MLA；β-MLA)
24-Z-表乳香二烯醇酸(表-MLA)具有以下结构，3-羟基基团具有α-构型：
表-MLA(3-α-MLA；α-MLA)
24-Z-异乳香二烯醇酸(IMLA)具有以下结构，3-羟基基团具有β-构型：
IMLA(3-β-IMLA；β-IMLA)
24-Z-表-异乳香二烯醇酸(表-IMLA)具有以下结构，3-羟基基团具有β-构型：
表-IMLA(3-α-IMLA；α-IMLA)
24-Z-3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸具有以下分子结构：
24-Z-3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸(3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸；3-OAc-乳香二烯醇酸；3-OAc-MLA)
24-Z-3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸具有以下分子结构：
24-Z-3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸(3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸；3-OAc-表乳香二烯醇酸；3-OAc-表-MLA)
24-Z-3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸具有以下分子结构：
24-Z-3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸(3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸；3-OAc-异乳香二烯醇酸；3-OAc-IMLA)
24-Z-3-O-乙酰基-表异乳香二烯醇酸具有以下分子结构：
24-Z-3-O-乙酰基-表异乳香二烯醇酸(3-O-乙酰基-表异乳香二烯醇酸；3-OAc-表异乳香二烯醇酸；3-OAc-表-IMLA)
如本文所使用的，术语“乳香胶的分离的酸性级分”是指在以下之后获得的级分：用至少一种极性有机溶剂和至少一种非极性有机溶剂提取乳香胶，然后酸-碱提取由此获得的材料的溶液并且分离所得到的酸性级分。本发明的分离的酸性级分可溶于极性有机溶剂和非极性有机溶剂两者。
如本文所使用的，术语“多个”是指多于一个，优选地多于两个。如本文所使用的，术语“协同的”意指多于相加的。
如本文所使用的，术语“酸-碱提取”是指一种程序，在该程序中用一种或更多种碱性水溶液处理/提取含有有机酸性组分和有机非酸性组分的有机溶剂溶液。其结果是，有机酸性组分被去质子化并且因此被转化为它们的相应的离子盐形式，并且因此将溶解于所述碱性水溶液中。非酸性有机组分将滞留在原始有机溶液中。随后，含有酸性组分的盐形式的碱性水溶液被酸化，导致有机酸性组分的质子化的酸形式的再形成。取决于酸性化合物的性质，这些质子化的酸形式(酸性级分)可以以若干方式从酸化的水溶液中被除去。用于从酸化的溶液中除去酸性级分的一种选择是通过提取到合适的有机溶剂中。实施例1是如以上所描述的酸-碱提取的非限制性实例。
取决于酸化的水溶液中酸性化合物的溶解度，酸性级分可以经由酸化的水溶液的过滤被分离。
除了使用碱性水溶液进行酸-碱提取，还可以使用碱性形式的离子交换树脂。在这些情况下，酸性有机组分(酸性级分)以其去质子化的阴离子形式被树脂所捕获。随后从初始的溶液中除去树脂，留下非酸性组分。随后通过用合适的酸性溶液处理树脂将酸性组分(酸性级分)从树脂中释放。
用于酸-碱提取的离子交换树脂的用途特别适合用于工艺规模扩大，并且可以被用于开发(半)连续提取工艺。
以上酸-碱提取和其他变型的实例可以在许多教科书和其他出版物中被发现，并且被认为是本领域技术人员的常识。有用的教科书的实例是“Vogel’s Textbook ofPractical Organic Chemistry”，第5版，1989，(第162-163页)。
如本文所使用的，术语“纯度”是指制品中特定化学化合物的含量，被表示为相对于制品中其他化学化合物的按特定化学化合物的重量基础的重量百分比。
如本文所使用的，“萜烯化合物”是指以头尾取向具有异戊二烯单元(CH2＝C(CH3)CH＝CH2)的含异戊二烯的烃。萜烯烃通常具有分子式(C5H8)n，并且包括半萜烯类(C5)、单萜烯类(C10)、倍半萜烯类(C15)、二萜烯类(C20)、三萜烯类(C30)和四萜烯类(C40)，它们分别具有1、2、3、4、6和8个异戊二烯单元。萜烯类可以进一步被分类为无环的或环状的。
如本文所使用的，“萜类(terpenoids)”和“萜类化合物(terpenoid compound)”可互换地是指萜烯相关的化合物，除异戊二烯单元外其还含有氧，并且因此包括醇、醛和酮。以类似于萜烯的方式根据碳原子数目将萜类细分，并且因此包括半萜类(C5)、单萜类(C10)、倍半萜类(C15)、二萜类(C20)、三萜类(C30)和四萜类(C40)，它们分别具有1、2、3、4、6和8个异戊二烯单元。通过通常为甲基基团的片段的丢失或移位，萜类的骨架可以与异戊二烯单元的严格相加性不同。单萜类的实例包括樟脑、丁子香酚和冰片。二萜类的实例包括植醇和紫杉醇。三萜类的实例包括鲨烯和羊毛甾醇。
如本文所使用的，“萜酸(terpenoic acid)”是指含有至少一个羧酸基团的萜类化合物。萜酸另外可以含有一个或更多个其他含氧官能团，包括羟基、酮基、醛、醚(环状和非环状)以及酯(环状和非环状)基团。
如本文所使用的，“三萜酸”是指含有至少一个羧酸基团的三萜类化合物。三萜酸另外可以含有一个或更多个其他含氧官能团，包括羟基、酮基、醛、醚(环状和非环状)和酯(环状和非环状)基团。
如本文所使用的，“萜酸的低聚形式”是指低聚萜酸，其中单体单元是相同的萜酸或不同的萜酸，并且以任何可能的排列连接并且通过任何可能的键或官能团例如C-C键、酯基团或醚基团彼此连接。
如本文所使用的，“三萜酸的低聚形式”是指低聚三萜酸，其中单体单元是相同的三萜酸或不同的三萜酸，并且以任何可能的排列连接，并且通过任何可能的键或官能团例如C-C键、酯基团或醚基团彼此连接。
如本文所使用的，术语“乳香二烯酸(masticadienoic acid)”、“乳香二烯酮酸(masticadienonic acid)”、“乳香二烯酸的(masticadienoic)”和“乳香二烯酮酸的(masticadienonic acid)”可以可互换地被使用。
如本文所使用的，术语“异乳香二烯酸(isomasticadienoic acid)”、“异乳香二烯酮酸(isomasticadienonic acid)”、“异乳香二烯酸的(isomasticadienoic)”和“异乳香二烯酮酸的(isomasticadienonic)”可以可互换地被使用。
如本文所使用的，“大体上不含”意指根据本发明的制品或药物组合物通常含有小于约5％的所陈述物质。例如，小于约3％、小于1％、小于0.5％、小于0.1％。
如本文所使用的，术语“基本上由...组成”意指治疗特定状况的制剂或方法中唯一的活性药物成分是特定实施方案中具体列举的治疗成分。不排除其他成分例如赋形剂和/或润滑剂等的存在。也不排除另外的其他药学上活性剂的存在，只要后者对所述状况没有实际影响。
如本文所使用的，“治疗有效量”是指大体上诱导、促进或导致期望的治疗效果的药物成分的量。
如本文所使用的，“药学上可接受的载体”是指稀释剂或媒介物，其用于增强用其配制的药物成分的递送性质和/或药代动力学性质，但其本身没有治疗效果，它在受试者中也不诱导或引起任何不合意的或不良的效果或不良反应。
如本文所使用的，“药学上可接受的疏水性载体”是指乳香级分溶解或悬浮于其中的疏水性非极性稀释剂或媒介物。
如本文所使用的，术语“视神经病变”和“视神经萎缩”可以可互换地使用。这些术语是指由于任何原因造成的对于视神经的损伤。术语还包括由视神经病变引起或与视神经病变相关的任何状况或紊乱，例如，缺血性视神经病变(包括非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)、前部缺血性视神经病变(AION)、后部缺血性视神经病变)；放射性视神经病变(RON)；创伤性视神经病变、青光眼、视神经炎、压迫性视神经病变、浸润性视神经病变、线粒体视神经病变、营养性视神经病变、毒性视神经病变、遗传性视神经病变、由贮积症引起的损伤以及类似状况；或其组合。每种可能性是单独的实施方案。
如本文所使用的，术语“贮积症”是指导致正常性质或异常性质的物质例如脂质、蛋白质、脂蛋白、碳水化合物以及其他的过度积累的任何类型的代谢紊乱。特别重要的是与视神经的病理性损伤相关的脂褐质的积累。
本文所陈述的数值应当被理解为所陈述的值+/-10％。
术语“约”涉及包括所陈述的值的所陈述的值±10％。
在一些实施方案中，本发明提供了包括特定的萜酸的组合的组合物，所述萜酸例如在乳香胶的分离的酸性级分中存在的萜酸。在一些实施方案中，本发明提供了由特定的三萜酸化合物组成的组合物，与相同的单独的三萜酸化合物相比，这些组合物在视神经病变的治疗中示出具有出乎意料的协同效果。三萜酸化合物可以来自植物来源，特别是乳香胶，或可以是化学合成反应的产物。在一些情况下，组合物可以对应于其中一些是化学合成的并且一些是源自植物来源的化合物的组合。
在一些实施方案中，三萜酸中的任何一种可以是生物化学反应的产物或是由微生物有机体产生的产物。在一些实施方案中，三萜酸中的任何一种可以是发酵工艺的产物。在一些实施方案中，三萜酸中的任何一种可以通过化学合成和生物化学反应的组合来产生。在一些实施方案中，三萜酸中的任何一种可以通过化学合成和发酵工艺的组合来产生。在一些实施方案中，三萜酸中的任何一种可以通过任何的上述选项的组合来产生。在生物化学反应或微生物工艺的情况下，生物化学剂和微生物剂可以是天然存在的剂或可以是非天然存在的改性的剂。这些剂的改性可以使用现代生物化学方法例如诸如基因工程来实现。所述非天然存在的生物化学剂和微生物剂也可以使用合成生物学方法来产生。
在一些实施方案中，从天然来源获得可以包括从天然来源分离。在一些实施方案中，从天然来源分离可以包括作为单独的化合物或作为化合物的组的分离。在一些实施方案中，天然来源可以包括选自由以下组成的组的植物材料：树脂、树胶、叶、枝条、根、花、种子、芽、树皮、坚果和根。每种可能性是单独的实施方案。在一些实施方案中，天然来源可以包括从至少一种植物中提取的树脂。在一些实施方案中，天然来源可以包括乳香胶。
在一些实施方案中，天然来源可以包括至少一种植物。在一些实施方案中，植物可以被分类在漆树科家族中。在一些实施方案中，植物可以包括至少一种被分类在黄连木属和/或胡椒木属(Schinus)中的植物。在一些实施方案中，黄连木属可以包括选自由以下组成的组的物种：乳香黄连木(P.lentiscus)、大西洋黄连木、巴勒氏登黄连木、P.saportae、黑黄连木、阿月浑子、全缘黄连木和乳香黄连木(P.lentiscus L.)。每种可能性是单独的实施方案。在一些实施方案中，黄连木属可以包括物种乳香黄连木。在一些实施方案中，胡椒木属可以包括物种秘鲁胡椒木(S.molle)。在一些实施方案中，黄连木属可以包括物种Pistacia Lentiscus var.Chia。在一些实施方案中，黄连木属可以包括物种Pistacialentiscus L.var.latifolius Coss。每种可能性是本发明的单独的实施方案。
对于获得本发明的组合物有用的植物物种包括但不限于黄连木属、松属、云杉属、刺柏属、Alsies、落叶松属、罗勒属、月桂属和薰衣草属的植物物种。
黄连木属的有用的物种包括但不限于乳香黄连木、大西洋黄连木、巴勒氏登黄连木、P.saportae、黑黄连木、阿月浑子和全缘黄连木。
用于获得乳香胶的分离的酸性级分的方法可以描述如下。通过一般描述的方式，收集的植物材料，例如乳香胶，在合适的容器中与合适的溶剂组合，该合适的溶剂通常是极性溶剂。合适的极性溶剂包括例如醇、醚、酯、酰胺、醛、酮、腈及其组合。
极性有机溶剂的特定实例是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、1-丁醇、2-丁醇、仲丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、新戊醇、3-甲基-1-丁醇、2-甲基-1-丁醇、3-甲基-2-丁醇、2-甲基-2-丁醇、乙二醇、乙二醇单甲基醚、二乙醚、甲基乙基醚、乙基丙基醚、甲基丙基醚、1,2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃、二氢呋喃、呋喃、吡喃、二氢吡喃、四氢吡喃、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙醛、甲酸甲酯、甲酸乙酯、丙酸乙酯、丙酸甲酯、二氯甲烷、氯仿、二甲基甲酰胺、乙酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、丙酮、乙基甲基酮、二乙基酮、乙腈、丙腈及其组合。
乳香胶和溶剂优选地组合，使得溶剂大过量，例如10:1或20:1。混合物可以在从几分钟至许多小时范围内的时间内周期性地或连续地被搅动。可以在没有任何处理的情况下倾析溶剂，或任选地混合物可以首先经受低速离心，例如在100rpm至2000rpm，如本领域已知的。从提取物中回收不溶性材料，并且向不溶性材料添加新鲜的等份溶剂，使得提取和溶解过程被重复持续许多循环，以便获得尽可能多的极性溶剂可溶性化合物。在最终溶解步骤之后，将含有极性溶剂可溶性材料的提取物组合，并且蒸发极性溶剂(例如通过使用如本领域已知的旋转蒸发)，以便得到极性溶剂可溶性材料，极性溶剂可溶性材料可以被称为粗提取物或“第一步”提取物。
将第一步提取材料与非极性有机溶剂组合，并且通过摇动1小时至2小时的时间来提取。合适的非极性溶剂包括无环或环状的、饱和或不饱和的脂族烃和芳香族烃，例如C5-C10烷烃、C5-C10环烷烃、C6-C14芳香族烃及其组合。前述中的每一种可以任选地被一个或更多个卤素取代，例如C7-C14全氟烷烃。非极性有机溶剂的特定实例是戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、癸烷、环戊烷、环己烷、环庚烷、苯、甲苯、二甲苯、及其异构体和混合物。在非极性溶剂的存在下保持不溶性或沉淀的材料被除去并且被丢弃。然后通过蒸发非极性溶剂(例如通过旋转蒸发)获得非极性溶剂可溶性级分。该级分可以被称为纯化的提取物或“两步”提取物，对应于乳香胶的分离的级分，其特征为以下事实：该级分可溶解于极性溶剂和非极性溶剂两者中，而可溶于极性溶剂中但不溶于非极性溶剂中的材料已经被除去。
第二步提取材料随后被溶解于有机溶剂中，并且该溶液用碱性水溶液重复地提取(例如四次)。可以进行用不同碱性水溶液的第二提取。将由此获得的碱性级分用稀释的酸水溶液酸化至酸性pH。将酸化的水溶液用有机溶剂提取若干次。将由此获得的组合的有机溶剂提取物(也被称为“三步提取物”)用干燥剂处理。乳香胶的这种分离的酸性级分然后通过蒸发有机溶剂(例如通过旋转蒸发)获得。该级分被称为乳香胶的分离的酸性级分。干燥和/或溶剂除去的另外的中间步骤可以在其他步骤之间进行，如本领域已知的。可选择地，第二步提取材料可以与碱性离子交换树脂例如A26组合。将分离的离子交换树脂用非水性酸性溶液处理，以便从树脂中释放酸性级分。然后通过蒸发非水性溶剂和任何过量的酸来获得分离的酸性级分。
将本发明的分离的酸性级分与现有技术的乳香胶提取物相区别的特征是，某些酸性化合物已经在程序的前两个步骤中被除去，否则这些酸性化合物将最终留在最终的酸性级分中。根据本发明的教导，在分离程序的前两个步骤期间除去的酸性化合物对本文公开的分离的酸性级分的有益生物学活性具有有害的影响。
三步提取物可以被进一步干燥，例如通过高真空处理(例如<0.01毫巴持续长达若干天)以除去残余溶剂和其他挥发性材料，被称重并且与非极性有机溶剂或其他载体组合以实现其溶解。
在一些实施方案中，本发明的分离的级分可以通过包括以下步骤中的一个或更多个的工艺来获得：
(a)用极性有机溶剂处理乳香胶；
(b)分离可溶于所述极性有机溶剂中的级分；
(c)任选地除去所述极性有机溶剂；
(d)用非极性有机溶剂处理步骤(b)或(c)中获得的可溶性级分；
(e)分离可溶于所述非极性有机溶剂中的级分；
(f)任选地除去所述非极性有机溶剂；
(g)将步骤(f)中获得的级分溶解于有机溶剂中；
(h)用碱性溶液处理步骤(g)中获得的溶液，以便获得碱性级分；以及
(i)用酸溶液酸化步骤(h)中获得的碱性级分。
在一些实施方案中，在步骤(h)中用碱性溶液的处理(碱化)包括用一种或更多种合适的碱性水溶液提取步骤(g)中获得的溶液；或将步骤(g)中获得的溶液与碱性离子交换树脂接触。在碱性离子交换树脂的情况下，可以随后用酸性溶液处理树脂，以便释放捕获的酸性级分。然后通过使用例如应用真空除去任何挥发物来获得分离的酸性级分。
在一些实施方案中，步骤(h)包括将步骤(g)中获得的溶液与碱性离子交换树脂接触，并且之后通过过滤除去碱性离子交换树脂。碱性离子交换树脂可以随后用酸性溶液处理，以便释放捕获的酸性级分。然后通过使用例如应用真空除去任何挥发物来获得分离的酸性级分。
在一些实施方案中，工艺还包括以下步骤：
(j)用有机溶剂提取步骤(i)中获得的酸化的级分；
k)任选地将步骤(j)中获得的有机级分与干燥剂接触，以便除去剩余的水；
(l)从步骤(i)、(j)或(k)中任一个中获得的级分中除去有机溶剂和/或过量的酸；以及
(m)将步骤(l)中获得的分离的级分溶解于载体中。
工艺还可以包括在步骤(c)、(f)或(l)中的任一个之后除去溶剂。溶剂除去可以通过本领域已知的任何手段进行，例如旋转蒸发、应用高真空及其组合。在一些实施方案中，步骤(a)至(c)在步骤(d)至(f)之前进行，或反之亦然。在一些实施方案中，极性有机溶剂包括乙醇，非极性有机溶剂包括己烷，并且用于酸-碱提取的有机溶剂包括二乙醚。如本领域技术人员容易理解的，步骤(a)至(c)和步骤(d)至(f)可以各自独立地进行许多循环，以优化提取工艺和产物的纯化程度。
在一些实施方案中，步骤(h)包括用碱性水溶液提取步骤(g)中获得的溶液，并且收集由此获得的有机级分。在一些实施方案中，工艺还可以包括将步骤(h)中获得的有机级分与步骤(i)、(j)或(k)中任一个中获得的级分组合。
在一些实施方案中，将步骤(h)中获得的有机级分与以在从步骤(h)中获得的有机级分的从约0.1％至50％的范围内的量的步骤(i)、(j)或(k)中任一个中获得的级分组合。在一些实施方案中，该量在从约0.5-50％的范围内；或在2％至25％的范围内；或在0.1％至10％的范围内。
分离的酸性级分可以包括至少一种萜酸，例如各种三萜酸组合的组合。三萜酸包括例如，乳香二烯酮酸；异乳香二烯酮酸；异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表-乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸；乳香二烯醇酸；齐墩果酮酸；齐墩果酸；熊果酸；乌索酸；模绕酮酸和3-氧代-羽扇-20(29)-烯-28-酸。
分离的酸性级分可以包括至少一种萜酸，例如各种三萜酸组合的组合。三萜酸包括例如，乳香二烯酮酸；异乳香二烯酮酸；乳香二烯醇酸；异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表-乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸；齐墩果酮酸；齐墩果酸；熊果酸；乌索酸；模绕酮酸和3-氧代-羽扇-20(29)-烯-28-酸。
在一些实施方案中，分离的酸性级分可以包括至少两种萜酸化合物，该萜酸化合物选自，例如，乳香二烯酮酸；异乳香二烯酮酸；乳香二烯醇酸；异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸；齐墩果酮酸；齐墩果酸；熊果酸；乌索酸；模绕酮酸和3-氧代-羽扇-20(29)-烯-28-酸。
在一些实施方案中，分离的酸性级分可以包括至少两种萜酸化合物，该萜酸化合物选自，例如，乳香二烯酮酸；异乳香二烯酮酸；异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸；齐墩果酮酸；齐墩果酸；熊果酸；乌索酸；模绕酮酸。
在一些实施方案中，分离的酸性级分可以包括至少两种萜酸化合物，该萜酸化合物选自，例如，乳香二烯酮酸；异乳香二烯酮酸；乳香二烯醇酸；异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸；齐墩果酮酸；齐墩果酸；熊果酸；乌索酸；模绕酮酸和3-氧代-羽扇-20(29)-烯-28-酸。
在一些实施方案中，分离的酸性级分可以包括至少两种萜酸化合物，该萜酸化合物选自，例如，乳香二烯酮酸；异乳香二烯酮酸；乳香二烯醇酸；异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸；齐墩果酮酸；齐墩果酸；熊果酸；乌索酸；模绕酮酸。
在一些实施方案中，分离的酸性级分可以包括至少三种萜酸化合物，该萜酸化合物选自，乳香二烯酮酸；异乳香二烯酮酸；异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸；齐墩果酮酸；齐墩果酸；熊果酸；乌索酸；模绕酮酸和3-氧代-羽扇-20(29)-烯-28-酸。
在一些实施方案中，分离的酸性级分可以包括至少两种萜酸化合物，该萜酸化合物选自，乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸和齐墩果酮酸。
在一些实施方案中，分离的酸性级分可以大体上不含特定的三萜酸，例如，诸如，乳香二烯醇酸或模绕酮酸。每种可能性是单独的实施方案。
在一些实施方案中，分离的酸性级分可以大体上不含精油。
此外，分离的酸性级分中的萜酸和/或三萜酸可以呈单体形式，或呈低聚形式，例如二聚体、三聚体或其组合。
用于本发明的组合物包括治疗有效量的本文所描述的乳香胶的分离的酸性级分和药学上可接受的疏水性载体。
本发明还提供了包括至少一种三萜酸和药学上可接受的载体的组合物。如前文所描述，三萜酸可以从植物产品例如乳香胶中分离，或三萜酸可以是化学合成的产物。此外，组合物可以包括三萜酸的组合，其中的一些是化学合成的，并且其中的一些是从一种或更多种植物产品中分离的。在一些实施方案中，组合物可以由至少两种作为药学上活性成分的三萜酸化合物和药学上可接受的载体组成。此外，组合物可以包括二聚形式、三聚形式和更高低聚形式的三萜酸；低聚物可以由相同和不同的单体三萜酸形成。在一些实施方案中，组合物可以由至少三种作为药学上活性成分的三萜酸化合物和药学上可接受的载体组成。
为了制备用于治疗用途的组合物，可以使用合适的载体，例如疏水性载体，包括药学上可接受的油，任选地与蜡组合，如本文所描述。
疏水性载体包括至少一种油，例如诸如矿物油、植物油或其组合。
术语“矿物油”是指从石油的蒸馏中获得的透明无色的几乎无臭无味的液体。它也可以被称为白油、白矿物油、液体凡士林、液体石蜡或白石蜡油。根据本发明的一些实施方案，矿物油是轻质矿物油，其是可商购的产品，可以作为NF(美国国家处方集)等级产品或作为USP(美国药典)等级产品而获得。为了用于本发明，矿物油优选地不含芳香族化合物和不饱和化合物。
合适的植物油包括但不限于棉籽油、橄榄油、杏仁油、菜籽油、椰子油、玉米油、葡萄籽油、花生油、藏花油、芝麻油，大豆油或其组合。在一些实施方案中，矿物油是轻质矿物油。
药学上可接受的载体可以可选择地或另外地包括油替代物。油替代物包括具有至少10个碳的烷烃(例如异十六烷)、苯甲酸酯、脂族酯、不阻塞毛孔的酯(noncomodogenicester)，挥发性有机硅化合物(例如环甲硅油)和挥发性有机硅取代物。苯甲酸酯的实例包括苯甲酸C12-C15烷基酯、苯甲酸异硬脂基酯、苯甲酸-2-乙基己基酯、苯甲酸二丙二醇酯、苯甲酸辛基十二烷基酯、苯甲酸硬脂基酯和苯甲酸山嵛醇酯。脂族酯的实例包括辛酸C12-C15烷基酯和马来酸二辛基酯。不阻塞毛孔的酯的实例包括异壬酸异壬基酯、异壬酸异癸基酯、二聚二亚油酸二异硬脂基酯、丙酸花生醇酯和异壬酸异十三烷基酯。挥发性有机硅取代物的实例包括癸酸异己酯、异壬酸辛酯、辛酸异壬酯和二辛酸二乙二醇酯。
环甲硅油是蒸发性有机硅，它可以被包括在载体中以帮助使组合物适合从喷雾分配器中喷出。此外，由于其蒸发性质，环甲硅油可以帮助将制剂保留并且固定在制剂被喷雾的表面上，例如伤口部位。
疏水性载体还可以包括至少一种蜡。蜡包括例如蜂蜡、植物蜡、甘蔗蜡、矿物蜡和合成蜡。植物蜡包括例如巴西棕榈蜡、小烛树蜡、小冠巴西棕榈蜡和霍霍巴蜡(jojobawax)。矿物蜡包括例如石蜡、褐煤蜡、微晶蜡和地蜡。合成蜡包括例如聚乙烯蜡。
药物组合物可以被配制成许多形式中的任一种，例如诸如胶囊(包括软凝胶胶囊)、片剂、凝胶、脂质体、栓剂、悬浮液、软膏、溶液、乳液或微乳液、膜、胶合剂、粉末、胶水、气雾剂、喷雾剂和凝胶。
为了制备药物组合物，乳香胶的分离的酸性级分可以适当地被配制为包合复合物、纳米乳液、微乳液、粉末和脂质体。在一些实施方案中，包合复合物包括至少一种环糊精。在一些实施方案中，环糊精包括羟丙基-β-环糊精。在一些实施方案中，纳米乳液包括具有小于800nm的平均粒度的液滴。在一些实施方案中，液滴具有小于500nm的平均粒度。在一些实施方案中，液滴具有小于200nm的平均粒度。在一些实施方案中，粉末是喷雾干燥的粉末。在一些实施方案中，脂质体包括多层囊泡。在一些实施方案中，微乳液包括非离子型表面活性剂。非离子型表面活性剂包括但不限于，聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯(聚山梨醇酯)、泊洛沙姆、维生素E衍生物、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯硬脂酸酯、饱和聚乙二醇化的甘油酯或其组合。
根据一些实施方案，在本文实施例1中公开了分离的酸性级分的各种制剂及其制备。本发明的药物组合物可以通过实现其预期目的的任何手段施用。在一些实施方案中，施用通过肠胃外途径。在一些实施方案中，施用是肠胃外的局部施用。在一些实施方案中，肠胃外施用可以选自但不限于：静脉内、肌内、皮下、皮内、腹膜内、动脉内、子宫内、尿道内、心内、脑内、脑室内、肾内、肝内、腱内(intratendon)、骨内、眼内和鞘内施用途径。
施用的剂量将取决于受试者的年龄、健康和体重，同时治疗的使用(如果有的话)，治疗的频率以及所需效果的性质。以任何单位剂型的本发明的乳香胶的分离的酸性级分的量包括治疗有效量，治疗有效量可以取决于受体对象、施用途径和频率而变化。
存在于药物组合物中的乳香胶的分离的酸性级分的量可以在从约0.01％至约99％的范围内。通常，基于组合物的总重量，按重量/重量的基础计，药物组合物中存在的乳香胶的分离的酸性级分的量可以便利地在从约0.01％至约50％，例如0.01％至约25％，例如0.01％至约12％的范围内。对于局部使用，组合物中的乳香胶的分离的酸性级分的百分比可以在从约0.05％至约2.5％的范围内。对于通过注射施用，组合物中的乳香胶的分离的酸性级分的百分比可以便利地在从约0.1％至约7％的范围内。
在一些实施方案中，三萜酸可以构成组合物的总活性成分的从约1％至约80％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成组合物的总活性成分的高达99％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成组合物的总活性成分的从约10％至约80％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成组合物的总活性成分的从约20％至约80％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成组合物的总活性成分的从约30％至约70％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成组合物的总活性成分的从约35％至约65％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成组合物的总活性成分的从约40％至约60％。
在一些实施方案中，三萜酸可以构成总组合物的从约0.01％至约80％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成总组合物的从约0.01％至约50％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成总组合物的从约0.01％至约10％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成总组合物的从约0.1％至约10％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成总组合物的从约0.5％至约4％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成总组合物的从约0.1％至约0.5％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成总组合物的从约0.1％至约1.0％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成总组合物的从约0.1％至约2％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成总组合物的从约1％至约3.5％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成总组合物的从约1.5％至约3％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成总组合物的从约1.75％至约2.75％。在一些实施方案中，三萜酸可以构成总组合物的从约2％至约2.5％。
在一些实施方案中，三萜酸的组合可以包括作为主要化合物的以下中的一种或更多种：模绕酮酸、齐墩果酮酸、24-Z-乳香二烯酮酸、24-Z-异乳香二烯酮酸、24-Z-3-β-OAc-乳香二烯醇酸和/或24-Z-3-β-OAc-异乳香二烯醇酸。每种可能性是单独的实施方案。
在一些实施方案中，三萜酸的组合可以包括作为主要化合物的：模绕酮酸(12-15％)、齐墩果酮酸(18-20％)、24-Z-乳香二烯酮酸(20-22％)、24-Z-异乳香二烯酮酸(22-26％)、24-Z-3-β-OAc-乳香二烯醇酸(4-7％)和/或24-Z-3-β-OAc-异乳香二烯醇酸(4-7％)。每种可能性是单独的实施方案。
在一些实施方案中，三萜酸的这些组合还可以包括(除了主要化合物之外)少量的另外的其他三萜酸，通常少于5％。这样的另外的可能的其他三萜酸可以选自以下中的一种或更多种：MLA：3-β-乳香二烯醇酸、IMLA：3-β-异乳香二烯醇酸、3-β-OAc-表乳香二烯醇酸、3-β-OAc-表-异乳香二烯醇酸、表乳香二烯醇酸(3-α-乳香二烯醇酸)、表-异乳香二烯醇酸(3-α-异乳香二烯醇酸)、二氢乳香二烯酮酸和/或二氢异乳香二烯酮酸。每种可能性是单独的实施方案。
在一些实施方案中，乳香胶的分离的酸性级分中的三萜酸可以包括作为主要化合物的以下中的一种或更多种：模绕酮酸、齐墩果酮酸、24-Z-乳香二烯酮酸、24-Z-异乳香二烯酮酸、24-Z-3-β-OAc-乳香二烯醇酸和/或24-Z-3-β-OAc-异乳香二烯醇酸。每种可能性是单独的实施方案。
在一些实施方案中，乳香胶的分离的酸性级分中的三萜酸可以包括作为主要化合物的：模绕酮酸(12-15％)、齐墩果酮酸(18-20％)、24-Z-乳香二烯酮酸(20-22％)、24-Z-异乳香二烯酮酸(22-26％)、24-Z-3-β-OAc-乳香二烯醇酸(4-7％)和/或24-Z-3-β-OAc-异乳香二烯醇酸(4-7％)。每种可能性是单独的实施方案。
在一些实施方案中，乳香胶的分离的酸性级分中的这些三萜酸还可以包括(除了主要化合物之外)少量的另外的其他三萜酸，通常少于5％。这样的另外的可能的其他三萜酸可以选自以下中的一种或更多种：MLA：3-β-乳香二烯醇酸、IMLA：3-β-异乳香二烯醇酸、3-β-OAc-表乳香二烯醇酸、3-β-OAc-表-异乳香二烯醇酸、表乳香二烯醇酸(3-α-乳香二烯醇酸)、表-异乳香二烯醇酸(3-α-异乳香二烯醇酸)、二氢乳香二烯酮酸和/或二氢异乳香二烯酮酸。每种可能性是单独的实施方案。
在一些实施方案中，乳香二烯酮酸和异乳香二烯酮酸在由这两种化合物作为活性成分组成的组合物中的量可以对于每种化合物在从约0.05％至约45％的范围内。在示例性实施方案中，乳香二烯酮酸和异乳香二烯酮酸在由这两种化合物作为活性成分组成的组合物中的量可以对于每种化合物在从约0.05％至约20％的范围内。对于通过注射施用，每种的量可以在从约0.1％至约10％的范围内。对于局部施用，每种的量可以在从约0.5％至约12％的范围内。对于口服施用，每种的量可以在从约0.5％至约15％的范围内。
在一些实施方案中，齐墩果酮酸、乳香二烯酮酸和异乳香二烯酮酸在由这三种化合物作为活性成分组成的组合物中的量可以对于每种化合物在约0.05％至约30％的范围内。在示例性实施方案中，齐墩果酮酸、乳香二烯酮酸和异乳香二烯酮酸在由这三种化合物作为活性成分组成的组合物中的量可以对于每种化合物在约0.05％至约15％的范围内。对于通过注射施用，每种的量可以在从约0.1％至约10％的范围内。对于局部施用，每种的量可以在从约0.5％至约12％的范围内。对于口服施用，每种的量可以在从约0.5％至约15％的范围内。
本发明的药物组合物可以以本身为本领域技术人员所知的方式被制造，例如借助于常规混合工艺、制粒工艺、糖衣丸制造工艺、软凝胶包封工艺、溶解工艺、提取工艺或冻干工艺。用于口服使用的药物组合物可以通过将活性化合物与固体赋形剂和半固体赋形剂以及合适的防腐剂和/或抗氧化剂组合来获得。任选地，可以将得到的混合物研磨并且加工。如果需要，在添加合适的助剂之后，可以使用得到的粒剂的混合物以获得片剂、软凝胶、胶囊或糖衣丸芯。
合适的赋形剂特别地是填充剂，例如糖类，例如乳糖或蔗糖，甘露醇或山梨醇；纤维素制品和/或磷酸钙，例如磷酸三钙或磷酸氢钙；以及粘合剂，例如淀粉糊剂，使用例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可以添加崩解剂，例如以上提及的淀粉以及羧甲基淀粉、交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或海藻酸或其盐例如海藻酸钠。助剂是流动调节剂和润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其盐例如硬脂酸镁或硬脂酸钙和/或聚乙二醇。糖衣丸芯提供有合适的涂层，如果需要，该涂层是耐胃液的。为此目的，可以使用浓缩的糖溶液，其可以任选地含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了产生耐胃液的涂层，使用合适的纤维素制品例如乙酰基纤维素邻苯二甲酸酯或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的溶液。可以将染料或颜料添加到片剂或糖衣丸涂层，例如用于识别或为了表征活性化合物剂量的组合。
视情况而定，用于肠胃外施用的制剂包括活性化合物的悬浮液和微粒分散体。在一些实施方案中，可以施用油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油，例如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，例如油酸乙酯、甘油三酯、聚乙二醇-400、克列莫佛或环糊精。注射悬浮液可以含有增加悬浮液的粘度的物质，包括例如羧甲基纤维素钠、山梨醇和/或右旋糖酐。任选地，悬浮液还可以含有稳定剂。
药物组合物也可以使用包括活性成分的脂质体来制备。如本领域中已知的是，脂质体通常源自磷脂或其他的脂质物质。脂质体由分散在水性介质中的单层状或多层状的水合的液晶形成。可以使用能够形成脂质体的任何无毒的生理学上可接受的且可代谢的脂质。通常，优选的脂质是磷脂以及天然的和合成的磷脂酰胆碱(卵磷脂)两者。形成脂质体的方法是本领域已知的，如例如在Prescott，编辑，Methods in Cell Biology，第XIV卷，Academic Press，New York，N.Y.(1976)中公开的。
药物组合物可以包括水包油乳液或微乳液以便有利于其配置成用于肠胃外使用。这样的乳液/微乳液通常包括脂质、表面活性剂、任选地湿润剂和水。合适的脂质包括通常已知对于产生水包油乳液/微乳液有用的那些脂质，例如脂肪酸甘油酯。合适的表面活性剂包括通常已知对于产生水包油乳液/微乳液有用的那些表面活性剂，其中脂质被用作乳液中的油组分。非离子型表面活性剂可以是优选的，例如诸如乙氧基化蓖麻油、磷脂以及环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物。如果使用，合适的湿润剂包括例如丙二醇或聚乙二醇。
药物组合物可以配制成凝胶形式，例如从形成凝胶的聚合物例如角叉菜胶、黄原胶、刺梧桐树胶、金合欢胶、刺槐豆胶、瓜尔豆胶形成的水凝胶。水凝胶可以与包括活性成分的水包油乳液组合。
药物组合物可以配制成胶合剂的形式，例如包括聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)或磷酸钙的胶合剂，如在整形外科手术中使用的。
药物组合物可以配制成粉末的形式。
根据一些实施方案，提供了治疗视神经病变的治疗用途和方法。方法包括向受试者施用治疗有效量的如本文所描述的组合物，该组合物包括乳香胶的分离的酸性级分，或分离的酸性化合物的组合。在一些实施方案中，方法包括向受试者施用治疗有效量的如本文所描述的组合物，该组合物包括乳香胶的分离的酸性级分。在一些实施方案中，方法包括向受试者施用治疗有效量的组合物，该组合物包括至少两种选自以下的三萜酸的组合：乳香二烯酮酸；异乳香二烯酮酸；异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸；齐墩果酮酸和模绕酮酸。在一些实施方案中，方法包括向受试者施用治疗有效量的组合物，该组合物包括至少两种选自以下的三萜酸的组合：乳香二烯酮酸；异乳香二烯酮酸；3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸；齐墩果酮酸和模绕酮酸。在一些实施方案中，方法包括向受试者施用治疗有效量的组合物，该组合物包括至少两种选自以下的三萜酸的组合：乳香二烯酮酸；异乳香二烯酮酸；乳香二烯醇酸；异乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸；3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸；齐墩果酮酸和模绕酮酸。在另外的实施方案中，方法包括向受试者施用治疗有效量的组合物，该组合物包括至少两种选自以下的三萜酸的组合：乳香二烯酮酸；异乳香二烯酮酸和齐墩果酮酸。在一些实施方案中，方法包括向受试者施用治疗有效量的组合物，该组合物包括由乳香二烯酮酸和异乳香二烯酮酸组成的三萜酸。在另外的示例性实施方案中，方法包括向受试者施用治疗有效量的组合物，该组合物包括由齐墩果酮酸、乳香二烯酮酸和异乳香二烯酮酸组成的三萜酸。
在一些实施方案中，施用组合物的步骤可以包括任何可接受的途径，包括肠胃外途径。肠胃外施用包括，例如，静脉内、肌内、皮下、皮内、腹膜内、动脉内、子宫内、尿道内、心内、脑内、脑室内、肾内、肝内、腱内、骨内、眼内和鞘内施用途径。每种可能性是单独的实施方案。
在一些实施方案中，本文公开的组合物可以通过任何合适的施用途径基于任何合适的施用方案以任何合适的剂量来施用，这取决于受试者特性(包括，例如，年龄、性别、治疗的状况、状况的严重程度以及类似特性)。例如，施用可以一周进行1-7次。例如，施用可以一天进行多于一次。例如，组合物可以以每周两次的时间表以均匀间隔(even intervals)被施用。在一些实施方案中，组合物可以以每隔一天的时间表被施用。在一些实施方案中，组合物可以以每七天一次(每周一次)的时间表被施用。在一些实施方案中，组合物可以每天一次被施用。
在一些实施方案中，组合物可以以每周两次的时间表以均匀间隔被施用。在一些实施方案中，组合物可以以每隔一天的时间表被施用。在一些实施方案中，组合物可以以每七天一次(每周一次)的时间表被施用。在一些实施方案中，组合物可以每天一次被施用。
在一些实施方案中，组合物可以作为在棉籽油中的乳香胶的分离的酸性级分或三萜酸的组合的5％(w/w)制剂被施用。在一些实施方案中，组合物可以作为在稳定化的棉籽油中的乳香胶的分离的酸性级分或三萜酸的组合的5％(w/w)制剂被施用。
在一些实施方案中，组合物可以作为在BHT稳定的棉籽油中的乳香胶的分离的酸性级分或三萜酸的组合的5％(w/w)制剂被施用。在一些实施方案中，组合物可以作为在棉籽油中的乳香胶的分离的酸性级分或三萜酸的组合的5％(w/w)制剂，每周两次的时间表以均匀间隔被施用。在一些实施方案中，组合物可以作为在棉籽油中的乳香胶的分离的酸性级分或三萜酸的组合的5％(w/w)制剂，每周一次(每七天一次)的时间表以均匀间隔被施用。在一些实施方案中，组合物可以作为在棉籽油中的乳香胶的分离的酸性级分或三萜酸的组合的5％(w/w)制剂，以每天一次的时间表以均匀间隔被施用。
在一些实施方案中，组合物可以以0.4毫升(ML)剂量的乳香胶的分离的酸性级分或三萜酸的组合的5％(w/w)制剂被施用。在一些实施方案中，组合物可以以0.2毫升(ML)剂量的5％(w/w)制剂被施用。在一些实施方案中，组合物可以以0.8毫升(ML)剂量的5％(w/w)制剂被施用。在一些实施方案中，组合物可以作为在棉籽油中的乳香胶的分离的酸性级分或三萜酸的组合的5％(w/w)制剂以0.4毫升(ML)的剂量，每周两次以均匀间隔被施用。在一些实施方案中，组合物可以作为在棉籽油中的乳香胶的分离的酸性级分或三萜酸的组合的5％(w/w)制剂，以0.2毫升(ML)的剂量，每周两次以均匀间隔被施用。在一些实施方案中，组合物可以作为在棉籽油中的乳香胶的分离的酸性级分或三萜酸的组合的5％(w/w)制剂，以0.8毫升(ML)的剂量，每周两次以均匀间隔被施用。
对于本领域技术人员清楚的是，可以设想和设计以上指示的施用途径、时间表、剂量和方案的许多变化。应理解，施用途径、时间表、剂量和方案的这些变化也在本发明的范围内。
根据一些实施方案，本文公开的用于治疗视神经病变的方法对于罹患由视神经的损伤引起或与其相关的状况的受试者特别有利，所述状况例如诸如，青光眼、创伤性神经病变、缺血性视神经病变(例如诸如，NAION和AION)、青光眼、由肿瘤引起的神经病变、由感染引起的神经病变、线粒体视神经病变、营养性视神经病变、放射性视神经病变、毒性视神经病变、视网膜糖尿病并发症、由沉积疾病引起的损伤以及类似状况或其组合。
在一些实施方案中，本文公开的用于治疗视神经病变的用途和方法对于罹患由沉积疾病导致的视神经的损伤引起或与其相关的状况的受试者特别有利，所述沉积疾病例如视神经中脂蛋白物质的沉积、脂褐质的沉积。
在一些实施方案中，本文公开的用于治疗视神经病变的用途和方法对于罹患由视神经中脂蛋白物质的沉积引起或与其相关的状况的受试者特别有利。
在一些实施方案中，本文公开的用于治疗视神经病变的用途和方法对于罹患由视神经中脂蛋白物质的沉积导致的视神经的损伤引起或与其相关的状况的受试者特别有利，其中脂蛋白物质的沉积是贮积症的结果。
在一些实施方案中，本文公开的用于治疗视神经病变的用途和方法对于罹患由视神经中脂蛋白物质的沉积导致的视神经的损伤引起或与其相关的状况的受试者特别有利，其中脂蛋白物质的沉积是贮积症的结果，并且其中沉积的脂蛋白物质是脂褐质。
在一些实施方案中，本文公开的用于治疗视神经病变的用途和方法对于罹患由视神经中矿物物质的沉积导致的视神经的损伤引起或与其相关的状况的受试者特别有利，其中矿物物质的沉积是贮积症的结果，并且其中在视神经中沉积的矿物物质含有钙和/或铁。
在一些实施方案中，本文公开的用于治疗视神经病变的用途和方法对于罹患青光眼的受试者特别有利。
在一些实施方案中，本文公开的用途和治疗方法适合用于人类和非人类哺乳动物中的应用。
根据一些实施方案，本发明的方法可以包括使用并入如本文所描述的包括乳香胶的分离的酸性级分的组合物的制造的物品。
在一些实施方案中，药物组合物可以呈制造的物品上的涂层的形式，或可以被包含在与制造的物品成一体的容器内。
在一些实施方案中，可以将药物组合物并入递送装置，例如针、注射装置或喷雾分配器，组合物从该递送装置递送至需要治疗的身体部位。
在一些实施方案中，制造的物品包括但不限于针、微针、注射装置和喷雾分配器。
以下实施例被呈现以便更充分地说明本发明的某些实施方案。然而，它们决不应当被解释为限制本发明的宽范围。在不背离本发明的范围的情况下，本领域技术人员可以容易地设想本文公开的原理的许多变型和修改。
实施例
实施例1A：乳香胶的分离的酸性级分的制备。
向50克量的乳香胶添加无水乙醇(800ML)，并且将混合物静置持续24小时。将混合物以150rpm摇动持续30分钟并且静置持续2小时。将获得的乙醇溶液从不溶性材料中倾析至3L圆底烧瓶中。向不溶性材料添加400ML的新鲜乙醇，并且将混合物再次以150rpm摇动30分钟，并且静置持续30分钟。将获得的乙醇溶液倾析并且添加至第一乙醇溶液。使用200ML无水乙醇再次重复该步骤。这给出1.4L的乙醇溶液。使用旋转蒸发器蒸发乙醇，并且向剩余的材料添加正己烷(1.2升)，并且将混合物以150rpm摇动持续4小时。然后静置持续4小时，并且将己烷溶液从不溶性材料中倾析至3L锥形瓶中。向剩余的不溶性材料添加800ML新鲜己烷，并且将混合物以150rpm摇动持续6小时，并且静置持续12小时。将己烷溶液倾析至含有第一1.2L的己烷溶液的3L锥形瓶中。在干净的3L圆底烧瓶中蒸发己烷，以给出约30克的提取物。(取决于使用的乳香胶的寿命和粒度，收率范围通常从50％至70％。)
随后将获得的提取的材料溶解于二乙醚(500ML)中，并且用5％碳酸钠水溶液(4×100ML)提取，将碱性水层和油性层/乳液层小心地从二乙醚层分离。然后用0.4N含水氢氧化钠(3×100ML)另外地提取二乙醚层，并且再次从二乙醚层中小心地分离碱性水层和油性层/乳液层。通过缓慢添加10％含水盐酸将两种碱性水性提取物(包括油性层/乳液层)单独地酸化至pH 1-2，并且随后用新鲜二乙醚(3×200ML)提取。将由此获得的醚级分合并，并且经无水硫酸钠干燥。在滤除硫酸钠之后，使用旋转蒸发器除去二乙醚。对应于基于乙醇/己烷提取之后获得的中间提取物的约50％收率，此程序给出约15克的作为白色固体的乳香胶的分离的酸性级分。这种特定的分离的酸性级分在本文被称为“酸性混合物1”或“酸性-1”。
基于起始50克的乳香胶，该酸性级分的收率是约30％。来自乳香胶的这种特定的酸性级分的典型收率在从约25％至约35％的范围内。不希望受任何理论或机制所束缚，收率的这些变化可以由于乳香胶的组成的自然的(例如季节性的)波动而发生，并且还可以受乳香胶的寿命和储存条件影响。
实施例1B
根据与实施例1A相同的方法，但使用甲醇代替乙醇作为极性溶剂，制备乳香胶的另外的分离的酸性级分。己烷被用作非极性溶剂，并且二乙醚被用作用于酸-碱提取步骤的溶剂。
实施例1C
根据与实施例1A相同的方法，但使用异丙醇作为极性溶剂，制备乳香胶的另外的分离的酸性级分。己烷被用作非极性溶剂，并且二乙醚被用作用于酸-碱提取步骤的溶剂。
实施例1D
根据与实施例1A相同的方法，但使用正庚烷代替己烷作为非极性溶剂，制备乳香胶的另外的分离的酸性级分。乙醇被用作极性溶剂，并且二乙醚被用作用于酸-碱提取的溶剂。
实施例1E
根据与实施例1A相同的方法，但使用正庚烷代替己烷作为非极性溶剂，制备乳香胶的另外的分离的酸性级分。甲醇被用作极性溶剂，并且二乙醚被用作用于酸-碱提取的溶剂。
实施例1F
根据与实施例1A相同的方法，但使用己烷作为非极性溶剂，制备乳香胶的另外的分离的酸性级分。乙醇被用作极性溶剂，并且甲基叔丁基醚(MTBE)被用作用于酸-碱提取的溶剂。
实施例G-使用离子交换树脂的乳香胶的分离的酸性级分和中性级分。
向50克量的乳香胶添加无水乙醇(800ML)，并且将混合物静置持续24小时。将混合物以150rpm摇动持续30分钟并且静置持续2小时。将获得的乙醇溶液从不溶性材料中倾析至3L圆底烧瓶中。向不溶性材料添加400ML的新鲜乙醇，并且将混合物再次以150rpm摇动30分钟，并且静置持续30分钟。将获得的乙醇溶液倾析并且添加至第一乙醇溶液。使用200ML无水乙醇再次重复该步骤。这给出1.4L的乙醇溶液。使用旋转蒸发器蒸发乙醇，并且向剩余的材料添加正己烷(1.2升)，并且将混合物以150rpm摇动持续4小时。然后将其静置持续4小时，并且将己烷溶液从不溶性材料中倾析至3L锥形瓶中。向剩余的不溶性材料添加800ML新鲜己烷，并且将混合物以150rpm摇动持续6小时，并且静置持续12小时。将己烷溶液倾析至含有第一1.2L的己烷溶液的3L锥形瓶中。在干净的3L圆底烧瓶中蒸发己烷，以给出约30克的提取物。(取决于使用的乳香胶的寿命和粒度，收率范围通常从50％至70％。)
将获得的提取物溶解于乙醇(0.5L)中，并且在摇动器上用100克的强碱性离子交换树脂(例如Dowex-1X8-400；Amberlite IRA400；Diaion SA10A)处理。将离子交换树脂滤除并且用甲醇洗涤，直至TLC不显示任何明显的斑点。然后用10％乙醇乙酸溶液处理树脂，以便从树脂中释放羧酸。将乙醇乙酸混合物蒸发以得到分离的羧酸级分。典型的收率是起始提取物的约50％(15克)。如上文所描述的从乳香胶获得的这种特定的分离的酸性级分被称为“酸性混合物3”或“酸性-3”。
为了比较，根据WO2003/092712或Parachos等人，(2007)，Antimacrobial Agentsand Chemotherapy，51(2)，551的教导准备己烷向酸性级分的添加，显示出大量的该酸性级分不溶于己烷中。
实施例2.在棉籽油中的不同制剂的制备
实施例2A：在USP/NF级棉籽油中的乳香胶的分离的酸性级分的5％(w/w)组合物。
向1克的来自实施例1A的所获得的分离的酸性级分(“酸性-1”)添加19克的棉籽油(USP/NF)，并且将混合物以150rpm摇动，直至获得澄清且均质的组合物(约2小时)。
以相同的方式，棉籽油制剂可以由从实施例1B-1F获得的分离的酸性级分来制备。
2B：由单独的三萜酸制备的棉籽油制剂。
一般程序：将所需量的三萜酸称重至圆底烧瓶中，并且将混合物溶解于合适的溶剂中。合适的溶剂的非限制性实例是二乙醚、二氯甲烷和乙醇。向该溶液添加所需量的棉籽油。从所获得的混合物中蒸发溶剂，提供三萜酸的棉籽油制剂。
作为具体的实施例，将200mg的MDA和IMDA中的每一种溶解于100ML圆底烧瓶中的30ML二乙醚中。向澄清溶液添加19.6克的棉籽油，并且将混合物搅拌持续几分钟以便均质化。使用旋转蒸发器从混合物中除去二乙醚，提供20克的MDA和IMDA中的每一种在棉籽油中的1％(w/w)制剂。可以经由制剂的高真空处理来除去另外痕量的二乙醚。
使用该一般程序，制备表1中示出的制剂(组合物)。
表1-通过实施例2B的一般程序制备的在棉籽油中的三萜酸的制剂
对于本领域技术人员清楚的是，该程序可以用于制备另外的在棉籽油中的三萜酸的制剂。此外，对于本领域技术人员还清楚的是，除了棉籽油之外，其他合适的油和疏水性载体也可以与该程序一起使用，以制备三萜酸的相应的制剂。
实施例3A.乳香胶的分离的酸性级分的分离和化学表征。
根据实施例1A-1F所描述的任何方法从乳香黄连木中提取乳香树脂，以获得通过反相HPLC分析的级分，以便识别主要成分。基于与分析标准的比较，HPLC分析与分离的级分中模绕酮酸和齐墩果酮酸的分离的级分的存在一致。
为了分离和确定分离的酸性级分的另外的主要成分的结构，开发了制备型HPLC方法。使用该方法，随后通过制备型HPLC将分离的酸性级分(例如根据实施例1A获得的“酸性-1”)的6种主要成分分离。在30×250mm制备柱(ACE-121-2530)上开发了制备型HPLC方法。分离的级分的样品(每次运行约75mg)使用5ML环路被注射。
识别的化合物包括这样的化合物，如模绕酮酸、齐墩果酮酸、乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸和3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、乳香二烯醇酸和异乳香二烯醇酸。
进一步的分离努力得到若干种另外的次要成分(<5％的分离的级分)，它们的存在在来自不同乳香胶批次的分离的酸性级分制品中不同。分离的酸性级分中可能存在或可能不存在以下次要成分化合物：
-MLA：3-β-乳香二烯醇酸
-IMLA：3-β-异乳香二烯醇酸
-表乳香二烯醇酸(3-α-乳香二烯醇酸)
-表-异乳香二烯醇酸(3-α-异乳香二烯醇酸)
-二氢乳香二烯酮酸
-二氢异乳香二烯酮酸
实施例3B乳香胶的分离的酸性级分中存在的一些三萜酸的合成。
齐墩果酮酸(OA)
齐墩果酮酸由可商购的齐墩果酸以三步获得。
通过用在二甲基甲酰胺(DMF)中的甲基碘和碳酸钾处理来将齐墩果酸首先转化为相应的甲酯。使用在二氯甲烷(DCM)中的戴斯-马丁高碘烷试剂进行齐墩果酸甲酯向齐墩果酮酸甲酯的氧化。用在含水THF中的氢氧化锂将齐墩果酮酸甲酯水解，在酸化后给出期望的齐墩果酮酸。
乳香二烯醇酸(MLA)
将乳香二烯酮酸(500mg)溶解于甲醇(30ML)中并且冷却至0℃。添加NaBH4(83mg；2.0当量)并且将混合物在室温搅拌过夜。在TLC(己烷:乙酸乙酯)显示完全转化之后，将反应混合物冷却至0℃并且通过添加20ML冷水猝灭。将甲醇从混合物中蒸发，然后用二乙醚提取该混合物。粗产物通过柱色谱法经过硅胶纯化(DCM:MeOH＝95:5至90:10)以给出作为白色固体的MLA(400mg；80％)。
异乳香二烯醇酸(IMLA)
将异乳香二烯酮酸(500mg)溶解于甲醇(30ML)中并且冷却至0℃。添加NaBH4(83mg；2.0当量)并且将混合物在室温搅拌过夜。在TLC(己烷:乙酸乙酯)显示完全转化之后，将反应混合物冷却至0℃并且通过添加20ML冷水猝灭。将甲醇从混合物中蒸发，然后用二乙醚提取该混合物。粗产物通过柱色谱法经过硅胶纯化(DCM:MeOH＝95:5至90:10)以给出作为白色固体的IMLA(420mg；82％)。
3-OAc-MLA
将MLA(400mg)溶解于无水吡啶(5ML)中，并且一次性添加乙酸酐(160mg；3.55当量)。将混合物在室温搅拌过夜，并且通过TLC(己烷/乙酸乙酯)监测。用乙酸乙酯(15ML)和1M含水HCl(20ML)稀释反应混合物，并且将混合物剧烈搅拌持续1小时。将层分离，将有机层经MgSO4干燥并且蒸发。粗产物通过柱色谱法经过硅胶纯化(己烷/乙酸乙酯＝10:1至9:1)以得到作为白色固体的3-OAc-MLA(220mg；55％)。
3-OAc-IMLA
将IMLA(400mg)溶解于无水吡啶(5ML)中，并且一次性添加乙酸酐(160mg；3.55当量)。将混合物在室温搅拌过夜，并且通过TLC(己烷/乙酸乙酯)监测。用乙酸乙酯(15ML)和1M含水HCl(20ML)稀释反应混合物，并且将混合物剧烈搅拌持续1小时。将层分离，将有机层经MgSO4干燥并且蒸发。粗产物通过柱色谱法经过硅胶纯化(己烷/乙酸乙酯＝10:1至9:1)以得到作为白色固体的3-OAc-IMLA(190mg；47％)。
3-OAc-表-MLA
将MLA(400mg)溶解于无水吡啶(5ML)中，并且一次性添加乙酸酐(160mg；3.55当量)，然后添加4-N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP；20mg)。将混合物在室温搅拌过夜，并且通过TLC(己烷/乙酸乙酯)监测。用乙酸乙酯(15ML)和1M含水HCl(20ML)稀释反应混合物，并且将混合物剧烈搅拌持续1小时。将层分离，将有机层经MgSO4干燥并且蒸发。粗产物通过柱色谱法经过硅胶纯化(己烷/乙酸乙酯＝10:1至9:1)以得到作为白色固体的3-OAc-MLA和3-OAc-表-MLA的混合物(330mg；％)。使用制备型HPLC分离异构体，以提供作为白色固体的3-OAc-表-MLA(120mg)。
3-OAc-表-IMLA
将IMLA(400mg)溶解于无水吡啶(5ML)中，并且一次性添加乙酸酐(160mg；3.55当量)，然后添加4-N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP；20mg)。将混合物在室温搅拌过夜，并且通过TLC(己烷/乙酸乙酯)监测。用乙酸乙酯(15ML)和1M含水HCl(20ML)稀释反应混合物，并且将混合物剧烈搅拌持续1小时。将层分离，将有机层经MgSO4干燥并且蒸发。粗产物通过柱色谱法经过硅胶纯化(己烷/乙酸乙酯＝10:1至9:1)以得到作为白色固体的3-OAc-IMLA和3-OAc-表-IMLA的混合物(310mg；％)。使用制备型HPLC分离异构体，以提供作为白色固体的3-OAc-表-IMLA(110mg)。
通过用在含水THF中的LiOH水解相应的乙酸酯来制备表-MLA和表-IMLA。标准后处理以分别45％和53％的收率提供作为白色固体的化合物。
二氢乳香二烯酮酸和二氢异乳香二烯酮酸可以根据D.Barton,E.Seoane.J.Chem.Soc.1956，4150；和E.Seoane ibid.4158来制备。
实施例4-视神经轴突切开术后使用本发明的分离的酸性级分和/或分离的酸性级 分组合物的特定三萜类化合物对视网膜神经节细胞(RGC)的效果。
视神经的轴突切开术在深度麻醉的大鼠(每组19只大鼠)的右眼上进行。测试组接受在后颈区域中皮下注射各种测试的组合物(0.025ml/注射)，并且对照组被类似地注射有相同体积的媒介物。第一注射在手术之后直接给予所有动物。随后的注射(相同的剂量和施用方法)以每周两次，每3至4天一次施用。
在轴突切开术之后14天，荧光逆行神经示踪剂(Di-Asp)被插入轴突切开的视神经中，以便染色存活的视网膜神经节细胞(RGC)，并且在24小时之后，大鼠在CO2饱和室中被处死，并且受伤的右眼被摘除。将视网膜分离，并且在载玻片上展平，并且用基于二甲苯的封固剂固定。
用荧光显微镜评估整装视网膜。染色细胞被手动计数。
使用的组合物包括：
-乳香胶的分离的酸性级分(例如来自实施例1A的“酸性-1”以及根据实施例2A制备的其相应的棉籽油制剂)，
-测试根据实施例2B制备的以下化合物和组合：
OA：齐墩果酮酸
MDA：乳香二烯酮酸
IMDA：异乳香二烯酮酸
以下制剂用于注射：
-媒介物：棉籽油
-IMDA：在棉籽油中1％(w/w)
-MDA：在棉籽油中1％(w/w)
-IMDA和MDA：在棉籽油中各自1％(w/w)
-IMDA、MDA和OA：在棉籽油中各自1％(w/w)
实施例5-视网膜脱离(RD)模型–使用本发明的分离的酸性级分和/或分离的酸性 级分组合物的特定三萜类化合物的效果。
在用托吡卡胺滴液0.5％扩张瞳孔之后，对深度麻醉的动物(赛拉嗪50mg/kg和氯胺酮35mg/kg)的右眼进行视网膜脱离(RD)。通过在锯齿缘(ora serata)处在视网膜中产生小开口，随后用30G注射器针在视网膜下注射5μl盐水来诱导RD。约一半的视网膜区域通过该程序被脱离。
具有RD的大鼠被分成六个实验组，五个测试组接受在后颈区域中皮下注射如实施例4中公开的药物组合物，并且注射的对照组被施用相同体积的媒介物。第一注射在手术之后直接给予所有动物。第二注射(相同的剂量和施用方法)在手术之后48小时施用。
在RD之后的第3天和第14天，在CO2饱和室中对经手术的大鼠实施安乐死。受伤的右眼和未处理的左眼被摘除。视网膜被分离，在干冰上冷冻并且被加工用于蛋白质印迹分析或免疫组织化学分析。左眼视网膜用作非手术对照。
测定脑信号蛋白(Semaphorin)3A(Sema3A)、神经纤毛蛋白1(NP1)和GAP43的表达水平。半胱天冬酶3被用作凋亡标记物，并且检查米勒细胞(Müller cell)和小神经胶质细胞的形态学变化。
通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的染色来研究米勒细胞的形态学变化。GFAP标记视网膜中的米勒细胞，并且通常被用作应力指示剂。小神经胶质细胞的入侵和激活被认为对于神经元有害或有益。急性CNS损伤之后的小神经胶质细胞激活主要是反应性和适应性的神经胶质细胞响应，该神经胶质细胞响应通过受伤的神经元触发，并且被设计为减轻原发性组织损伤，并且促进随后作为结果的修复和神经胶质增生(神经胶质瘢痕)。小神经胶质细胞通常在受伤之后变得在视网膜中激活，刺激并且募集内皮细胞和成纤维细胞。用IB4标记并且用核染料PI染色的脱离的和非受伤的视网膜的切片的免疫组织化学分析被用于识别视网膜中激活的小神经胶质细胞的任何迹象。
实施例6：rAION，NAION(非动脉炎性前部缺血性视神经病变)的啮齿动物模型–本 发明的分离的酸性级分和/或分离的酸性级分组合物的特定三萜类化合物的效果
被NAION影响的视神经缺血导致髓鞘和轴突损伤。在NAION的啮齿动物模型(rAION)中，使用nd-YAG激光器，利用500微米光斑尺寸和50mW功率，利用1秒脉冲在532nm激光诱导视神经缺血(在麻醉大鼠中)。这导致视神经缺血而不引起直接的热损伤。诱导在接下来的几天内导致梗塞后脱髓鞘(postinfarct demyelation)和少突细胞死亡。脱髓鞘导致释放可以抑制轴突再生的可溶性因子。这些因子包括髓鞘相关糖蛋白(MAG)和NOGO66。这些因子激活轴突膜蛋白复合物(LINGO-1)，轴突膜蛋白复合物又经由磷酸化激活轴突激酶RAS同源物A(RhoA)。激活的RhoA抑制细胞骨架聚合，这导致轴突生长锥萎陷(axonalgrowth cone collapse)。
动物被分至若干组，其中每组10-12只动物。
在诱导后三天，开始用本发明的不同组合物和安慰剂对照(如实施例4中详细描述)治疗动物组。应用50微升皮下注射的每周两次的方案。治疗被引发持续28天或56天。
通过GAP43免疫染色检测轴突再生的改进。在治疗之后评估视神经超微结构，以便检测不同轴突纤维尺寸的髓鞘化概况。治疗组和安慰剂组的结果被比较。
实施例7-体外青光眼模型-各种组合物的效果
从成年Wistar大鼠制备原代急性离解的视网膜细胞培养物。测试组合物(组合)对RGC存活的神经保护效果通过营养因子剥夺(trophic factor withdrawal)之前的预处理来确定。通过双标记免疫细胞化学评价细胞活力。
成年Wistar大鼠被实施安乐死，并且视网膜细胞悬浮液通过解剖视网膜以及在含有补充有2mg/mL木瓜蛋白酶、0.4mg/mL dl-半胱氨酸和0.4mg/mL牛血清白蛋白(BSA)的神经基础介质的消化缓冲液中孵育(37℃，30min)来制备。
视网膜被加工以便获得单细胞的悬浮液。视网膜细胞被接种在聚-d-赖氨酸涂布的和层粘连蛋白涂布的8孔培养载玻片上，以约1x106个细胞/孔的密度，用0.5mL/孔RGC培养介质，并且在95％空气和5％CO2中在37℃培养持续3天。
细胞在离解之后立即用测试组合物或媒介物(对照)处理，并且暴露于如以上的RGC培养基，但不含BDNF、CNTF和bFGF(TFW RGC介质)。
表2
在第3天，使视网膜细胞的培养物经受双标记免疫细胞化学。培养物与针对Thy-1和神经纤维细丝-1 68kDa的初级抗体发生免疫反应。细胞被DAPI共同标记以可视化细胞核。
基于对于Thy-1和神经纤维细丝-1 68kDa两者的双重阳性免疫反应性，以及以下四个形态学标准来识别健康的RGC：连续膜的存在；没有空泡化的迹象；没有核周膨胀(perikaryal swelling)的迹象；以及没有核固缩或核碎裂的迹象。细胞被手动计数。
实施例8-使用本发明的各种组合物治疗青光眼
各种组合物被测试它们在大鼠的青光眼治疗中的功效。青光眼症状通过以下在大鼠中诱导：眼内(玻璃体内)注射兴奋性毒性剂例如N-甲基-d-天冬氨酸(NMDA)、α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异噁唑丙酸(AMPA)或红藻氨酸，或通过其他手段例如光凝，例如，通过用激光束辐照。这些剂诱导类似于青光眼的眼睛的退行性状况。本发明的组合物能够减轻和/或逆转由兴奋性毒性剂引起的退行性症状的程度是它们在青光眼治疗中的效果的量度。
人类的视网膜神经节细胞(RGC)退化和实验性青光眼伴随着涉及视网膜小神经胶质细胞的神经炎性过程以及增加的炎性介导物产生。此外，早期和加剧的视网膜小神经胶质细胞激活已经被提出以有助于退行性过程，这表明控制小神经胶质反应性可以防止RGC的青光眼性损失。青光眼的多种多样的动物模型，包括猪、狗、猴和啮齿动物，这些模型中的大部分涉及通过高眼压介导的视神经损伤。其他确立的可用于研究青光眼的模型依赖于基因突变的RGC诱导的死亡、视神经的机械创伤、视网膜神经元的毒性侵害或视网膜缺血的诱导。
在本研究中，使用大鼠激光光凝(GL)模型以便评估测试组合物的神经保护效果和神经再生效果。
研究设计：
简言之，在第0天和第7天，通过巩膜静脉的激光光凝单侧地诱导高IOP。对侧眼作为对照。仅在具有16mmHg或更高的IOP的动物中在第1天开始每周两次皮下(s.c)递送组合物。在激光作用之后的第二天(研究第1天)、第4天、第7天以及之后每周一次监测IOP。在基线、第14天和第28天，使用图形视网膜电图(pattern electroretinography)(pERG)在体内评估视网膜神经节细胞(RGC)的功能。第28天的测量用作2-4周的任选跟踪期的里程碑决策(milestone decision)，在该期间结束时，进行另外的pERG测量。视网膜和视神经被收集并且加工用于视网膜神经节细胞计数和视神经轴突计数。此外，进行视网膜组织的免疫组织化学评估，以用于炎症的标记物。
使用以下治疗组(treatment arm)(每组中n＝12只大鼠)：
组1：未作过实验对象的大鼠(n＝12)；(未作过实验对象的)
组2：经媒介物治疗的GL模型(n＝12)；(媒介物)
组3：测试制剂1-经治疗的GL模型(n＝12)；如实施例2B中所描述制备的组合物D(MDA(1％w/w)+IMDA(1％w/w))。
组4：测试制剂2-经治疗的GL模型(n＝12)；组合物E(实施例1A的酸性混合物1(“酸性-1”)，作为在棉籽油中的2.5％(w/w)制剂，如实施例2A中所描述制备)
材料与方法
大鼠青光眼模型
如先前所描述的，通过巩膜外静脉的激光光凝单侧地诱导IOP的实验增加(Kalesnykas等人，2007，Neuroscience 150：692-704)。对侧眼用作对照。使用5-7月龄的Long Evans大鼠。在基线、激光作用之后的第一天(第1天)、第4天、第7天以及在剩余的跟踪期内每周一次监测眼内压(IOP)。如在第1天评价的仅具有16mmHg或更高的IOP的大鼠被允许进入研究组。
施用
测试组合物从第1天开始每周两次皮下(s.c.)施用。
pERG测量
使用Celeris系统(Diagnosys LLC)进行记录。将一滴滴剂奥布卡因(Santen，芬兰)应用至角膜以用于局部麻醉。动物被放置在受控的加热垫上，以将体温保持在约37℃。
动物处死和组织收集
在研究结束时，通过首先用0.9％NaCl溶液，然后用在pH 7.4的0.1M磷酸盐缓冲溶液中的4％多聚甲醛的经心脏灌注来处死大鼠。眼球和视神经(来自每组n＝4只大鼠，以随机方式收集)被收集，并且被嵌入到最佳切割温度(OCT)中，以便制备冷冻切片/视网膜全样载片(retinal wholemounts)(来自每组n＝8只大鼠)，以用于进一步评估RGC的总数。
视神经的形态学评价
在将视神经(来自8只大鼠/治疗组)后固定于4％PFA(在0.1M磷酸盐缓冲液中，pH7.4)溶液中之后，将它们放置于1％锇中，以上升的醇浓度脱水，并且放置于在100％乙醇中的1％乙酸铀酰(uranyl acetate)中持续1小时(Cone等人，2012.Exp Eye Res.6月；99:27-35.；Ragauskas等人，2014，PLoS One.3；9(12))。然后，将视神经在60℃嵌入环氧树脂混合物中持续48小时，并且将视神经的半薄切片(1μm厚)连续地切片通过视神经损伤部位。在光学显微镜下评估视神经损伤/轴突数目。
结果：
在跟踪第14天和第28天，进行反映RGC功能的pERG测量(记录)。结果在以下表3中和图1中所示的条形图中呈现，证明与经媒介物治疗的组相比，用指定组合的治疗呈现出两个跟踪日的平均振幅的增大。
表3-调整至基线的在跟踪第28天的经激光的眼睛的平均振幅的相对增大。
Brn3-a阳性RGC的总数的分析(相对于未作过实验对象的大鼠)揭示了测试组合物的效果。例如，与经媒介物治疗的组相比，用测试组合物治疗的大鼠具有较高的RGC计数(图2)。较高的Brn3a阳性细胞的数目指示较低的细胞损失，其中细胞损失由激光光凝触发。这些结果与pERG测量结果一致，并且支持测试组合物对RGC存活的神经保护效果。
接着，在光学显微镜下对来自测试大鼠的样品中的视神经轴突进行计数，以评估视神经损伤。结果在图3中呈现。如所示，施用测试组合物D和E倾向于保护轴突免于由激光光凝触发的退化。
证明测试组合物的保护效果的另外的支持结果可以在图4中看到，图4显示了视神经的半薄切片的代表性图像。结果清楚地证明治疗组和经媒介物处理的组之间退化过程的差异(图4)。
结论：本文呈现的研究证明测试组合物在治疗青光眼中的神经保护效果和神经退行性效果。
具体实施方案的前述描述将如此完全地揭示本发明的一般性质，使得其他人可以通过应用现有的知识，容易地为各种应用修改和/或调整此类具体实施方案，而不需要过度实验且不背离一般理念，并且因此，此类调整和修改应当并且预期被包含在公开的实施方案的等效物的含义和范围内。应理解，本文采用的措辞或术语是为了描述而非限制的目的。用于进行各种公开的功能的手段、材料和步骤可以采取多种可选择的形式而不偏离本发明。

Claims (42)

1.一种治疗需要其的受试者中的视神经病变状况的方法，所述方法包括施用包括有效量的乳香胶的分离的酸性级分和药学上可接受的载体的组合物，其中所述级分的特征在于所述级分可溶于至少一种极性有机溶剂中和至少一种非极性有机溶剂中，并且其中所述级分大体上不含可溶于所述极性有机溶剂中但不溶于所述非极性有机溶剂中的化合物。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述酸性级分通过酸-碱提取从乳香胶的可溶于至少一种极性有机溶剂和至少一种非极性有机溶剂中的分离的级分中获得，从而将所述分离的酸性级分与乳香胶的可溶于至少一种极性有机溶剂和至少一种非极性有机溶剂中的非酸性级分分离。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述分离的酸性级分包括以下中的至少两种：乳香二烯醇酸、乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸、异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸和模绕酮酸。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述视神经病变状况选自创伤性神经病变、缺血性神经病变；放射性视神经病变(RON)、青光眼、视神经炎、压迫性视神经病变、浸润性视神经病变、线粒体视神经病变、营养性视神经病变、毒性视神经病变、遗传性视神经病变及其组合。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述缺血性视神经病变选自：非动脉炎性缺血性视神经病变(NAION)、前部缺血性视神经病变(AION)和后部缺血性视神经病变。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述视神经病变状况由贮积症引起。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述贮积症引起视神经中脂蛋白物质的沉积。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物通过肠胃外途径被施用。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述肠胃外途径选自由以下组成的组：静脉内、肌内、皮下、皮内、腹膜内、动脉内、子宫内、尿道内、心内、脑内、脑室内、肾内、肝内、腱内、骨内、眼内和鞘内。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种极性有机溶剂选自由以下组成的组：醇、醚、酯、酰胺、醛、酮、腈及其组合。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述极性有机溶剂选自由以下组成的组：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、1-丁醇、2-丁醇、仲丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、新戊醇、3-甲基-1-丁醇、2-甲基-1-丁醇、3-甲基-2-丁醇、2-甲基-2-丁醇、乙二醇、乙二醇单甲基醚、二乙醚、甲基乙基醚、乙基丙基醚、甲基丙基醚、1,2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃、二氢呋喃、呋喃、吡喃、二氢吡喃、四氢吡喃、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙醛、甲酸甲酯、甲酸乙酯、丙酸乙酯、丙酸甲酯、二氯甲烷、氯仿、二甲基甲酰胺、乙酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、丙酮、乙基甲基酮、二乙基酮、乙腈、丙腈及其组合。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种非极性有机溶剂选自由以下组成的组：无环的或环状的、饱和或不饱和的脂族烃和芳香族烃、及其组合，所述无环的或环状的、饱和或不饱和的脂族烃和芳香族烃中的每一种任选地被一个或更多个卤素取代。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述非极性有机溶剂选自由以下组成的组：C5-C10烷烃、C5-C10环烷烃、C6-C14芳香族烃和C7-C14全氟烷烃、及其组合。
14.根据权利要求12所述的方法，其中所述非极性有机溶剂选自由以下组成的组：戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、癸烷、环戊烷、环己烷、环庚烷、苯、甲苯、二甲苯、及其异构体和混合物。
15.根据权利要求1所述的方法，其中基于所述组合物的总重量，所述组合物包括从约0.01％至约50％(w/w)、或约0.01％至约12％(w/w)的所述乳香胶的分离的酸性级分。
16.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物通过包括以下步骤的工艺获得：
(a)用极性有机溶剂处理所述乳香胶；
(b)分离可溶于所述极性有机溶剂中的级分；
(c)任选地除去所述极性有机溶剂；
(d)用非极性有机溶剂处理步骤(b)或(c)中获得的可溶性级分；
(e)分离可溶于所述非极性有机溶剂中的级分；
(f)任选地除去所述非极性有机溶剂；
(g)将步骤(f)中获得的级分溶解于有机溶剂中；
(h)用碱性水溶液处理步骤(g)中获得的溶液，以便获得碱性水性级分；以及
(i)用酸溶液酸化步骤(h)中获得的所述碱性水性级分，以便获得酸化的水溶液。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述工艺还包括以下步骤：
(j)用有机溶剂提取步骤(i)中获得的所述酸化的水性级分；
(k)任选地将步骤(j)中获得的所述有机级分与干燥剂接触，以便除去剩余的水；
(l)从步骤(i)、(j)或(k)中任一个中获得的级分中除去有机溶剂和/或过量的酸；以及
(m)将步骤(l)中获得的分离的级分溶解于药学上可接受的载体中。
18.根据权利要求17所述的方法，其中步骤(a)至(c)在步骤(d)至(f)之前进行；或其中步骤(d)至(f)在步骤(a)至(c)之前进行。
19.根据权利要求16所述的方法，其中所述极性有机溶剂包括乙醇，所述非极性有机溶剂包括己烷，并且用于所述酸-碱提取的所述有机溶剂包括二乙醚。
20.根据权利要求1所述的方法，其中所述载体是选自由以下组成的组的疏水性载体：至少一种油、至少一种蜡及其组合。
21.一种治疗视神经病变状况的方法，所述方法包括施用基本上由包括至少两种三萜酸的三萜类的混合物；以及药学上可接受的载体组成的组合物，所述至少两种三萜酸选自由以下组成的组：乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸、异乳香二烯醇酸、乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸、模绕酮酸及其组合。
22.如权利要求21所述的方法，基本上由乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸组成。
23.如权利要求21所述的方法，基本上由乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸和齐墩果酮酸组成。
24.如权利要求21所述的方法，其中所述三萜酸中的至少一种源自植物来源。
25.如权利要求21所述的方法，其中所述视神经病变状况选自创伤性神经病变、缺血性神经病变；放射性视神经病变(RON)、青光眼、视神经炎、压迫性视神经病变、浸润性视神经病变、线粒体视神经病变、营养性视神经病变、毒性视神经病变、遗传性视神经病变和其组合。
26.如权利要求21所述的方法，其中所述缺血性视神经病变选自：非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)、前部缺血性视神经病变(AION)和后部缺血性视神经病变。
27.如权利要求21所述的方法，其中所述组合物呈适合于经由肠胃外途径施用的形式。
28.包括有效量的乳香胶的分离的酸性级分和药学上可接受的载体的组合物用于治疗视神经病变状况的用途；其中所述级分的特征在于所述级分可溶于至少一种极性有机溶剂中和至少一种非极性有机溶剂中，并且其中所述级分大体上不含可溶于所述极性有机溶剂中但不溶于所述非极性有机溶剂中的化合物。
29.根据权利要求28所述的用途，其中所述酸性级分通过酸-碱提取从乳香胶的可溶于至少一种极性有机溶剂和至少一种非极性有机溶剂中的分离的级分中获得，从而将所述分离的酸性级分与乳香胶的可溶于至少一种极性有机溶剂和至少一种非极性有机溶剂中的非酸性级分分离。
30.根据权利要求28所述的用途，其中所述分离的酸性级分包括以下中的至少两种：乳香二烯醇酸、乳香二烯酸、异乳香二烯酸、异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸和模绕酮酸。
31.根据权利要求28所述的用途，其中所述视神经病变状况选自创伤性神经病变、缺血性神经病变；放射性视神经病变(RON)、青光眼、视神经炎、压迫性视神经病变、浸润性视神经病变、线粒体视神经病变、营养性视神经病变、毒性视神经病变、遗传性视神经病变及其组合。
32.根据权利要求31所述的用途，其中所述缺血性视神经病变选自：非动脉炎性缺血性视神经病变(NAION)、前部缺血性视神经病变(AION)和后部缺血性视神经病变。
33.根据权利要求28所述的用途，其中所述视神经病变状况由贮积症引起。
34.根据权利要求33所述的用途，其中所述贮积症引起视神经中脂蛋白物质的沉积。
35.根据权利要求28所述的用途，其中所述组合物通过肠胃外途径被施用。
36.基本上由包括至少两种三萜酸的三萜类的混合物和药学上可接受的载体组成的组合物用于治疗需要其的受试者中的视神经病变状况的用途，所述至少两种三萜酸选自由以下组成的组：乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸、异乳香二烯醇酸、乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-异乳香二烯醇酸、3-O-乙酰基-表-异乳香二烯醇酸、齐墩果酮酸、模绕酮酸及其组合。
37.根据权利要求36所述的用途，基本上由乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸组成。
38.根据权利要求36所述的用途，基本上由乳香二烯酮酸、异乳香二烯酮酸和齐墩果酮酸组成。
39.根据权利要求36所述的用途，其中所述三萜酸中的至少一种源自植物来源。
40.根据权利要求36所述的用途，其中所述视神经病变状况选自创伤性神经病变、缺血性神经病变；放射性视神经病变(RON)、青光眼、视神经炎、压迫性视神经病变、浸润性视神经病变、线粒体视神经病变、营养性视神经病变、毒性视神经病变、遗传性视神经病变及其组合。
41.根据权利要求36所述的用途，其中所述缺血性视神经病变选自：非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)、前部缺血性视神经病变(AION)和后部缺血性视神经病变。
42.根据权利要求36所述的用途，呈适合于经由肠胃外途径施用的形式。
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