CN109863993B - 一种紫菜贝壳丝状体的原位观察方法 - Google Patents

一种紫菜贝壳丝状体的原位观察方法 Download PDF

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李�杰
杨慧超
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Abstract

本发明提供一种紫菜贝壳丝状体的原位观察方法，方法包括：选择合适贝壳，打磨去除内表面珍珠层；平铺壳体；将丝状体附着在壳体上；钻壳成功后进行观察；与现有技术相比，本发明的有益效果在于：(1)可直接观察紫菜丝状体。(2)操作方法简单，成本低廉。

Description

一种紫菜贝壳丝状体的原位观察方法
技术领域
本发明涉及紫菜养殖的发育学及病害学领域，具体涉及一种紫菜贝壳丝状体的原位观察方法。
背景技术
紫菜是我国广泛栽培的一类海水养殖经济藻类，自福建至山东沿海均有较多的养殖，是我国水产养殖的重要组成部分，我国养殖产量和面积居世界第一。紫菜具有极高的营养价值和鲜美的口味，深受各国人民喜爱。紫菜生长在潮间带，能够吸收海水中大量的氮、磷，具有十分重要的生态意义。紫菜生活史分为二倍体的丝状体时期和单倍体的叶状体时期。其中丝状体能够溶解钙质，钻入表面富含钙质的贝壳中，形成贝壳丝状体渡过夏季高温。贝壳丝状体在秋季成熟膨大并释放壳孢子，其放散量和附着程度直接影响紫菜海区栽培生产的顺利进行。紫菜贝壳丝状体病害常发生于育苗中期，特别是高温天气，其传播速度快、影响范围广，对紫菜的育苗造成巨大损失。
及时观察贝壳丝状体的发育状态，对判断壳孢子采苗时间、保证海区栽培生产的顺利进行具有重要意义。目前，养殖场或研究机构观察贝壳丝状体的膨大成熟状态或患病贝壳丝状体组织病理情况，多通常采用柏兰尼液(Braney solution)等酸性液体浸泡的方法，利用其中的酸性成分，溶解贝壳珍珠层，腐蚀贝壳的碳酸钙结构，将藻体尽可能无损伤、完整的从贝壳上刮下，再进行显微观察。但我们在研究中发现，柏兰尼液浸泡后，会对紫菜细胞造成较大的损伤，未浸泡柏兰尼液的紫菜丝状体细胞圆润，胞质充盈，内有明显液泡；浸泡柏兰尼液的紫菜丝状体液泡均消失，胞质浓缩，出现质壁分离的现象；浸泡时间过长会导致细胞颜色由棕红色转变为黄色，影响显微观察效果，也很难用于判断发病紫菜丝状体的病理变化。同时，由于柏兰尼液的配置需要用到硝酸、铬酸等强酸性或重金属含量较高的成分，若不妥善处理，也会对环境造成一定的影响。
发明内容
为了解决现有紫菜贝壳丝状体观察困难的问题，我们提出了一种紫菜贝壳丝状体原位观察的方法啊及其应用。
本发明是通过以下技术方案实现的：
为实现上述目的，本发明提供一种紫菜贝壳丝状体的原位观察方法，观察方法如下：
(1)选取一种杂质相对较少、壳体平整的贝壳，将其外表面深色表层和内表面反光珍珠层轻轻打磨去除，留下半透明的壳体；
(2)将半透明壳体利用海水进行清洗，清洗后平铺在水槽或水池底部，贝壳之间尽量不要互相遮挡，加入海水5-30cm，利用加热棒或其他温控设备调整至合适的水温，作为紫菜丝状体的附着基；
(3)选择条斑紫菜、坛紫菜、长紫菜、圆紫菜、半叶紫菜等紫菜品种，收集紫菜自由丝状体，利用PES海水培养基等培养成分对紫菜丝状体进行扩大培养，获得足够的自由丝状体后，使用搅碎机等设备打碎丝状体，均匀泼洒于铺有贝壳的水槽或水池，采用日光灯或自然光，静置培养。每半个月添加一次PES营养液。培养条件为：温度20℃、盐度28-30‰、自然海水pH(7.5-8.0)、光强20μmol/m2s、光周期L:D＝12:12；
(4)待贝壳上观察到细密的紫黑色小点时，说明丝状体钻壳成功，轻轻擦掉表面未钻入贝壳的丝状体，更换海水后继续培养，直至整个贝壳呈现紫黑色，长满丝状体的贝壳即可用于后续实验，此阶段每半个月更换一次海水并刷拭贝壳。
优选地，上述贝壳可选择镜贝、贻贝、扇贝、蛤蜊、牡蛎、鱿鱼鞘、海螺、鲍鱼等多种软体动物的贝壳。
优选地，上述观察方法可发挥以下功能：
(1)使用显微镜直接观察紫菜丝状体的生长情况；
(2)使用显微镜直接观察紫菜丝状体的膨大发育情况；
(3)使用显微镜直接观察紫菜丝状体的病理变化情况。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)可直接观察紫菜丝状体。
(2)操作方法简单，成本低廉。
附图说明
图1为本发明透明贝壳中生长的紫菜丝状体显微观察；
图2为本发明文蛤壳和半透明的贝壳用于病理观察；
图3为本发明紫菜贝壳丝状体黄斑病感染显微镜观察；
其中：图3-a为病斑过渡区；图3-b为病斑过渡区；图3-c为病斑中央。
具体实施方式
下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通或改变都落入本发明保护范围；且下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例1：
将实验室养殖的条斑紫菜贝壳丝状体与黄斑病样品在同一养殖水体内培养，培养条件为：温度25℃、盐度28-30‰、自然海水pH、光强20μmol/m2s、光周期L:D＝12:12。黄斑病:健康贝壳丝状体＝10:1，每天其观察病理变化。
条斑紫菜贝壳丝状体共培养7天后出现3-5个肉眼可见的黄色细小斑点，随后斑点逐渐扩大，并不断出现新的细小斑点，病斑逐渐联合扩大，中央由黄色变成白色。整个共感染过程中有一个病斑爆发式出现的时期，短时间内(3-5天)出现大量细小黄色斑点布满整个贝壳，且整个贝壳丝状体的颜色由紫黑色转变为黑黄色(图2)。显微镜观察透明贝壳上条斑紫菜丝状体，丝状体从棕红色向橙色、黄色逐步过渡，最终藻丝崩解，内容物消失(图3)。低倍镜下观察到最初出现的病斑中央呈现透明，无存活的丝状体，病斑边缘有一圈黄绿色的丝状体带将病斑与健康丝状体分隔开，随着共感染时间的增加，病斑逐渐增大，与周围的病斑联合，在病斑爆发式增加期间，丝状体整体颜色由棕红或棕黄色变为橙黄色(图3)。

Claims (3)

1.一种紫菜贝壳丝状体的原位观察方法，其特征在于，观察方法如下：
(1)选取一种杂质相对较少、壳体平整的贝壳，将其外表面深色表层和内表面反光珍珠层轻轻打磨去除，留下半透明的壳体；
(2)将半透明壳体利用海水进行清洗，清洗后平铺在水槽底部，贝壳之间尽量不要互相遮挡，加入海水5-30cm，利用加热棒或其他温控设备调整至合适的水温，作为紫菜丝状体的附着基；
(3)选择条斑紫菜、坛紫菜、长紫菜、圆紫菜或半叶紫菜，收集紫菜自由丝状体，利用PES海水培养基对紫菜丝状体进行扩大培养，获得足够的自由丝状体后，使用搅碎机打碎自由丝状体，均匀泼洒于铺有贝壳的水槽，采用日光灯或自然光，静置培养；每半个月添加一次PES营养液；培养条件为：温度20℃、盐度28-30‰、自然海水pH、光强20μmol/m2·s、光周期L:D＝12:12；
(4)待贝壳上观察到细密的紫黑色小点时，说明丝状体钻壳成功，轻轻擦掉表面未钻入贝壳的丝状体，更换海水后继续培养，直至整个贝壳呈现紫黑色，长满丝状体的贝壳即可用于后续原位观察，此阶段每半个月更换一次海水并刷拭贝壳。
2.如权利要求1所述的一种紫菜贝壳丝状体的原位观察方法，其特征在于，所述贝壳可选择镜贝、贻贝、扇贝、蛤蜊、牡蛎、鱿鱼鞘、海螺和鲍鱼的贝壳。
3.如权利要求1所述的一种紫菜贝壳丝状体的原位观察方法，其特征在于，所述观察方法可发挥以下功能：
(1)使用显微镜直接观察紫菜丝状体的生长情况；
(2)使用显微镜直接观察紫菜丝状体的膨大发育情况；
(3)使用显微镜直接观察紫菜丝状体的病理变化情况。
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