CN109836458A

CN109836458A - 一种阿德福韦酯异构体杂质及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN109836458A
Application number: CN201711191361.9A
Authority: CN
Inventors: 朱建强; 郭心富; 王志鹏; 刘兆国
Original assignee: Tianjin Taipu Pharmaceutical Science & Technology Development Co Ltd
Current assignee: Tianjin Taipu Pharmaceutical Science & Technology Development Co Ltd
Priority date: 2017-11-24
Filing date: 2017-11-24
Publication date: 2019-06-04

Abstract

本发明公开了一种阿德福韦酯异构体杂质1及其制备方法，它是以腺嘌呤和碳酸亚乙酯为起始原料经烷基化、缩合、水解、酯化等多步反应合成阿德福韦酯异构体杂质1，并经MS和¹H NMR等进行了结构确证。阿德福韦酯异构体杂质1不同于已有文献报道的阿德福韦酯杂质，其属于阿德福韦酯的同分异构体，结构与阿德福韦酯主成分类似，其理化性质也可能与阿德福韦酯主成分比较类似，工艺步骤对其清除能力相对其他杂质难度较大，阿德福韦酯成品中残留的可能性也较大。因此阿德福韦酯及其中间体的异构体杂质的合成研究对于阿德福韦酯的质量控制具有重要意义。

Description

一种阿德福韦酯异构体杂质及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于化学制药技术领域，涉及一种阿德福韦酯异构体杂质及其制备方法与应用。

背景技术

阿德福韦酯 (adefovir dipivoxil)，化学名为7-[2-[二（特戊酰氧基）甲基]氧膦基]甲氧基]乙基]腺嘌呤，是腺嘌呤膦酸酯类化合物阿德福韦的前药，是美国GileadScience公司研发的新型核苷类抗病毒药，2002年首次在美国上市，商品名Hepsera。本品在体内转化为阿德福韦后，可与腺苷酸竞争性掺入病毒DNA链，抑制DNA聚合酶，终止DNA链的合成，从而抑制病毒的复制。本品具有广谱抗病毒活性，对逆转录病毒、痘病毒、疱疹病毒和肝炎病毒均有较强的抑制作用。国内于2003年首次由天津药物研究院药业有限公司提交阿德福韦酯原料及片剂新药申请，于2005年取得国家一类新药证书和生产批件。目前国内己有三十余家生产企业获得该原料药及制剂的生产许可。根据当前国内正在开展的一致性评价的原则，按照Qbd的理念进行质量控制，从安全、有效、质量可控的角度分析，阿德福韦酯杂质限度的制定对于质量的控制尤为重要，尤其是阿德福韦酯及其中间体的同分异构体杂质，这类杂质的结构与主成分类似，可随主成分一同进行后续的化学反应，且理化性质也可能与主成分比较接近，后续工艺步骤对其清除能力相对其他杂质比较有限，在阿德福韦酯成品中残留的可能性也较大。因此阿德福韦酯及其中间体的异构体杂质的合成研究具有重要意义。但是国内外对于阿德福韦酯的杂质合成报道较少，关于阿德福韦酯异构体也未见报道。本发明涉及阿德福韦酯及其各步中间体的异构体合成方法和结构确认。

阿德福韦酯异构体杂质1的结构式

阿德福韦酯异构体杂质1的合成路线如下：

发明内容

为实现上述目的，本发明公开了如下的技术方案：

一种阿德福韦酯异构体杂质，其结构式如下：

本发明进一步公开了阿德福韦酯异构体杂质的制备方法，包括以腺嘌呤和碳酸亚乙酯为起始原料经烷基化反应制备得到7-（2-羟乙基）腺嘌呤4；经缩合反应制备得到7- [2-（二乙氧磷酰甲氧基）乙基]腺嘌呤3；再经水解反应制备得到7-(2-膦酰甲氧基乙基）腺嘌呤2。其特征在于按如下方法进行酯化反应制备得到阿德福韦酯异构体杂质1：将7-(2-膦酰甲氧基乙基）腺嘌呤2与特戊酸氯甲酯在碱性条件下进行反应，其中7-(2-膦酰甲氧基乙基）腺嘌呤2与特戊酸氯甲酯的摩尔比为1:3-10，优选的摩尔比为1:3-5。碱性条件由三乙胺、二乙胺或吡啶提供。

本发明更进一步公开了阿德福韦酯异构体杂质1作为对照品在用于控制阿德福韦酯质量方面的应用。其中所述的控制阿德福韦酯质量指的是对于阿德福韦酯有关物质的研究。实验结果显示：采用本发明发现的7-[2-[二（特戊酰氧基）甲基]氧膦基]甲氧基]乙基]腺嘌呤（1）作为对照品用于阿德福韦酯有关物质研究，可以明确阿德福韦酯异构体杂质的相对保留时间，并且可以对其进行准确的定量（加校正因子主成分自身对照法）。本发明的发现可以有效地解决阿德福韦酯异构体杂质不能在阿德福韦酯有关物质研究中准确定量的问题。这对于阿德福韦酯药品质量控制方面具有重要的应用价值。

本发明公开的阿德福韦酯异构体杂质及其制备方法与应用所具有的积极效果在于：

（1）可以在阿德福韦酯有关物质研究中对于阿德福韦酯异构体杂质进行定位及准确定量；

（2）通过对于阿德福韦酯异构体杂质的有效控制，可以进一步提升阿德福韦酯的产品质量；

（3）通过对于阿德福韦酯产品质量的提升，可以进一步改善患者的用药安全。

附图说明

图1为阿德福韦酯异构体杂质1的结构式。

具体实施方式

下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。本发明所用到原料：腺嘌呤、碳酸亚乙酯、钠氢、三甲基溴硅烷、特戊酸氯甲酯、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇等原料和溶剂均有市售。

实施例1

7-（2-羟乙基）腺嘌呤的合成（4）

在一个1000ml反应瓶中，加入162.0g（1.2mol）腺嘌呤，600mlDMF，116.4g(1.32mol)碳酸亚乙酯和1.8gNaOH，110-120℃反应4h，然后冷却至0-5℃搅拌2h。过滤，干燥，得淡黄色粉末状固体204.0g，用EA：MeOH=5:1的混合溶剂做为洗脱液进行硅胶柱层析分离得到10.5g7-（2-羟乙基）腺嘌呤为白色固体。

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ：3.93 (t, J= 6.0 Hz, 2H, CH₂O), 4.45 (t, J=6.0Hz, 2H, CH₂N), 7.89 (s, 1H, HC₂), 8.23 (s, 1H, HC₈); MS (m/z) 180.29[M+H]⁺.

实施例2

7- [2-（二乙氧磷酰甲氧基）乙基]腺嘌呤的合成（3）

在干燥的250ml反应瓶中加入6.0g(33.5mmol)7-（2-羟乙基）腺嘌呤，90.0ml DMF搅拌冷却至0℃，加入2.1g(87.5mmol)氢钠，搅拌20min。0℃滴加15.1g（46.9mmol）对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯与30.0mlDMF的溶液，加毕，0℃ 反应1-2h。然后用冰乙酸调节反应液pH=5-6。旋蒸除去DMF，加入二氯甲烷和水的混合液，搅拌，静置分层，分出有机层。旋蒸除去二氯甲烷，剩余油状物用EA：MeOH=8:1的混合溶剂做为洗脱液进行硅胶柱层析分离得到4.5g 类白色固体，收率40.1%。

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ：1.21 (t, J= 6.8Hz, 6H, 2 CH₃), 3.72 (d, J=8.9 Hz, 2H, CH₂P), 3.92-4.01 (m, 6 H, CH₂O + 2 CH₂OP), 4.57 (t, J= 6.3 Hz, 2H,CH₂N), 7.91 (s, 1H, HC₂), 8.25 (s, 1H, HC₈); MS (m/z) 330.41[M+H]⁺.

实施例3

7-（2-膦酰甲氧基乙基）腺嘌呤的合成（2）

在250ml三口瓶中投入3.0g（9.1mmol）7-[2-（二乙氧磷酰甲氧基）乙基]腺嘌呤，150ml乙腈和3.6g（23.5mmol）三甲基溴硅烷，升温至65℃反应2h。旋蒸除去溶剂，加入甲醇水淬灭反应，旋蒸除去溶剂，剩余油状物用EA:MeOH=1:1的混合溶剂做为洗脱液进行硅胶柱层析分离得到1.8g黄色固体，收率72.3%。

¹H NMR (400MHz, CD₃OD) δ：3.75 (d, J = 8.8 Hz, 2H, CH₂P), 4.05(t, J =6.3Hz, 2H, CH₂O), 4.68 (t, J= 6.2 Hz, 2H, CH₂N), 8.48(s, 1H, HC₂), 8.60(s, 1H,HC₈); MS (m/z) 274.34 [M+H]⁺.

实施例4

7-[2-[二（特戊酰氧基）甲基]氧膦基]甲氧基]乙基]腺嘌呤（1）

方法（1）

在50ml三口瓶中，加入0.5g（1.8mmol）7-（2-膦酰甲氧基乙基）腺嘌呤、20 ml N-甲基吡咯烷酮、0.82g(5.5mmol)特戊酸氯甲酯和0.5g三乙胺，60~65℃搅拌反应4h。过滤除去不溶物，剩余物加入10ml乙酸异丙酯和水的混合液（体积比2:1），室温搅拌20min，静置分层，分出有机层，旋蒸除去溶剂，剩余黄色油状物用EA：MeOH=8:1的混合溶剂做为洗脱液进行硅胶柱层析分离得到0.4g黄色油状物，收率43.7%。

1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ：1.21 (m, 18H, 6 CH3), 3.78(d, J= 8.8 Hz,2H, CH2P), 4.04 (t, J= 6.3 Hz, 2H, CH2O), 4.57 (t, J= 6.3 Hz, 2H, CH2N), 5.61(m, 4H, CH2O),8.03 (s, 1H, HC2), 8.14 (s, 1H, HC8); MS (m/z) 502.52[M+H]+.

方法（2）

在50ml三口瓶中，加入0.5g（1.8mmol）7-（2-膦酰甲氧基乙基）腺嘌呤、20 ml N-甲基吡咯烷酮、1.36g(9.0mmol)特戊酸氯甲酯和0.5g三乙胺，60~65℃搅拌反应3h。过滤除去不溶物，剩余物加入10ml乙酸异丙酯和水的混合液（体积比2:1），室温搅拌20min，静置分层，分出有机层，旋蒸除去溶剂，剩余黄色油状物用EA：MeOH=8:1的混合溶剂做为洗脱液进行硅胶柱层析分离得到0.38g黄色油状物，收率41.4%。

方法（3）

在50ml三口瓶中，加入0.5g（1.8mmol）7-（2-膦酰甲氧基乙基）腺嘌呤、20 ml N-甲基吡咯烷酮、1.36g(9.0mmol)特戊酸氯甲酯和0.5g吡啶，60~65℃搅拌反应5h。过滤除去不溶物，剩余物加入10ml乙酸异丙酯和水的混合液（体积比2:1），室温搅拌20min，静置分层，分出有机层，旋蒸除去溶剂，剩余黄色油状物用EA：MeOH=8:1的混合溶剂做为洗脱液进行硅胶柱层析分离得到0.18g黄色油状物，收率19.6%。

实施例5

7-[2-[二（特戊酰氧基）甲基]氧膦基]甲氧基]乙基]腺嘌呤（1）在阿德福韦酯质量控制方面的应用，是指在阿德福韦酯有关物质研究中的应用，具体的阿德福韦酯有关物质方法如下：

实施例6

阿德福韦酯有关物质测定方法比较

通过与中国药典收载的阿德福韦酯质量标准进行对比发现，中国药典与本发明采用的液相色谱条件均为本领域技术人员熟知的方法。阿德福韦酯异构体杂质做为阿德福韦酯的同分异构体，属于阿德福韦酯重要的工艺杂质之一，利用其进行有关物质方法学研究的意义在于，可以明确阿德福韦酯异构体杂质的相对保留时间，并且可以对其进行准确的定量（加校正因子主成分自身对照法）。根据ICH Q3等指导原则以及国内药品技术审评的要求，对于药品相关杂质谱应进行系统研究，以保证药品的质量可控性，进而更好的保证患者的用药安全。因此，阿德福韦酯异构体杂质的发现及制备方法的研究，对于阿德福韦酯药品质量控制具有重要的应用价值和现实意义。

Claims

1.一种阿德福韦酯异构体杂质，其结构式如下：

。

2.权利要求1所述阿德福韦酯异构体杂质的制备方法，包括烷基化反应、缩合反应、水解反应、酯化反应；其特征在于将7-(2-膦酰甲氧基乙基）腺嘌呤2与特戊酸氯甲酯在碱性条件下60~65℃搅拌3-6h进行反应，其中7-(2-膦酰甲氧基乙基）腺嘌呤2与特戊酸氯甲酯的摩尔比为1：3-10；

权利要求2所述阿德福韦酯异构体杂质的制备方法，其中7-(2-膦酰甲氧基乙基）腺嘌呤2与特戊酸氯甲酯的摩尔为1:3-5。

3.权利要求2所述阿德福韦酯异构体杂质的制备方法，其中碱性条件由三乙胺、二乙胺或吡啶提供。

4.权利要求1所述阿德福韦酯异构体杂质1作为对照品在用于控制阿德福韦酯质量方面的应用。

5.权利要求5所述的应用，其中所述的控制阿德福韦酯质量指的是对于阿德福韦酯有关物质的研究。