CN109828052B - 一种快速鉴别羌活种类、真伪或有无的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种快速鉴别羌活种类、真伪或有无的方法,通过对待测羌活或待测产品中的标识化合物阿魏酸、异欧前胡素、苯乙基阿魏酸酯、6‑O‑丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素、对羟基苯乙基阿魏酸酯中至少一种的有无检测来鉴别。本发明通过高效液相色谱法和电喷雾质谱法联用对标识化合物进行检测,并结合OPLS‑DA分析,制定具有用于区别羌活种类、真品和伪品、或判断有无的鉴定标准图谱,再采用同样的方法对待测羌活或产品进行检测,通过将检测图谱与鉴定标准图谱进行对比鉴别鉴别羌活种类、真伪或有无。本发明检测方法高效快捷,准确性高,可高效地对羌活或含羌活的产品进行鉴定及质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及羌活鉴别方法领域,特别是涉及快速鉴别羌活种类、真伪或有无的方法。
背景技术
羌活,别名羌青、护羌使者、胡王使者、羌滑、退风使者、黑药,伞形科、羌活属植物,多年生草本,高60~120厘米,根茎粗壮,伸长呈竹节状。根颈部有枯萎叶鞘。茎直立,圆柱形,中空,有纵直细条纹,带紫色。其性温,解表散寒、祛寒湿,用于外感风寒、头痛无汗、寒湿痹、上肢风湿疼痛。生长于海拔2000~4000米的林缘及灌丛内;分布于中国的陕西、四川、甘肃、青海、西藏。
药典规定羌活包括宽叶羌活Notopterygium franchetii(NF)和羌活Notopterygium incisum(NI)两个种,由于近年来羌活的价格日益上涨,野生资源逐渐减少甚至濒危,因此,市场出现了较多羌活的伪品,一些保健品、药品中虽然声称含有羌活,但实际并未添加,欺骗消费者。
而现有的鉴定羌活的种类、真伪或有无的方法,通常需要对比不同种类中的十几中特定物质及各自的含量,较为繁琐,无法直观快速的得出鉴定结论。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种快速鉴别羌活种类及其真伪的方法,能够快速鉴别药材羌活的种类、鉴定市售羌活的真伪,并能检测出各类产品中是否还有羌活。
为解决上述技术问题,本发明采用的一个技术方案是:
提供一种羌活的快速鉴定方法,通过对待测羌活或待测产品中的标识化合物阿魏酸、异欧前胡素、苯乙基阿魏酸酯、6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素、对羟基苯乙基阿魏酸酯中至少一种的有无进行检测,从而进行羌活种类鉴别,或羌活真伪鉴别,或鉴定产品中是否含有羌活。
所述待测羌活可以是待鉴定种类的羌活,也可以是待鉴定真伪的羌活。所述待测产品为标识含有羌活的产品。所述标识化合物为阿魏酸、异欧前胡素、苯乙基阿魏酸酯、6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素、对羟基苯乙基阿魏酸酯这六种化合物。
进一步地,所述方法是对待测羌活或待测产品中是否同时具有阿魏酸、异欧前胡素和苯乙基阿魏酸酯三种物质,或是否同时具有6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素和对羟基苯乙基阿魏酸酯三种物质进行检测。
具体地,检测结果包括以下内容的一项或多项:
(1)同时含有阿魏酸、异欧前胡素和苯乙基阿魏酸酯三种物质,待测羌活为羌活Notopterygium incisum。
(2)同时含有6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素和对羟基苯乙基阿魏酸酯三种物质,待测羌活为宽叶羌活Notopterygium franchetii。
(3)同时含有阿魏酸、异欧前胡素和苯乙基阿魏酸酯三种物质,或同时含有6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素和对羟基苯乙基阿魏酸酯三种物质,待测羌活为真品。
此时还可以同时鉴别出所鉴定出的真品羌活的种类:若同时含有阿魏酸、异欧前胡素和苯乙基阿魏酸酯三种物质,则为羌活Notopterygium incisum;若同时含有6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素和对羟基苯乙基阿魏酸酯三种物质,则为宽叶羌活Notopterygiumfranchetii。
反之,若既不同时含有阿魏酸、异欧前胡素和苯乙基阿魏酸酯三种物质,也不同时含有6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素和对羟基苯乙基阿魏酸酯三种物质,待测羌活为伪品。
(4)将标示含有羌活的产品通过检测后,同时含有阿魏酸、异欧前胡素和苯乙基阿魏酸酯三种物质,或/和同时含有6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素和对羟基苯乙基阿魏酸酯三种物质,所检测产品中含有羌活。
此时还可以同时鉴别出所含有的羌活的种类:若同时含有阿魏酸、异欧前胡素和苯乙基阿魏酸酯三种物质,所检测产品中含有的羌活为羌活Notopterygium incisum;若同时含有6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素和对羟基苯乙基阿魏酸酯三种物质,所检测产品中含有的羌活为宽叶羌活Notopterygium franchetii;若6种所述标识化合物均含有,所检测产品中同时含有羌活Notopterygium incisum和宽叶羌活Notopterygium franchetii。
反之,若标示含有羌活的产品不同时具有阿魏酸、异欧前胡素和苯乙基阿魏酸酯三种物质,也不同时具有6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素和对羟基苯乙基阿魏酸酯三种物质的,所检测产品中无羌活。
在本发明的具体实施方式中,采用高效液相色谱法和电喷雾质谱法联用的方法对所述标识化合物进行检测。
进一步地,所述液相色谱仪采用超高效液相色谱仪,质谱采用电喷雾电离离子源,正、负离子模式下采集数据;
所述液相色谱条件包括:
色谱柱:烷基硅烷键合硅胶柱或等效色谱柱;
流动相:水相、有机相;
其中,水相为质量分数为0.1%的甲酸水溶液;有机相选自乙腈;流动相采用如下梯度洗脱程序:
时间(min) | 水相(vol.%) | 有机相(vol.%) |
0 | 88~92 | 8~12 |
10 | 78~82 | 18~22 |
20 | 68~72 | 28~32 |
30 | 58~62 | 38~42 |
33 | 40~45 | 55~60 |
43 | 8~12 | 88~92 |
48 | 8~12 | 88~92 |
49 | 88~92 | 8~12 |
54 | 88~92 | 8~12 |
。
在本发明的具体实施方式中,流动相采用如下梯度洗脱程序:
进一步地,所述液相色谱检测条件还包括以下的i~iv中的一项或多项:
i色谱柱规格:2.1×100mm,1.8μm,或等效色谱柱;
ii柱温:20~35℃;
iii流速:0.25~0.50ml/min;
iv检测波长:300~360nm。
进一步地,所述液相色谱检测条件还包括以下的i~iv中的一项或多项:
i色谱柱规格:2.1×100mm,1.8μm;
ii柱温:30℃;
iii流速:0.30ml/min;
iv检测波长:330nm。
进一步地,质谱条件包括以下的①~⑥中的一项或多项:
①离子源参数毛细管电压为2500~4000V;
②锥孔电压为30~45kV;
③离子源温度为80~120℃;
④脱溶剂气温度为250~400℃;
⑤脱溶剂气体积流量为700L/h;
⑥碰撞能量为30~45V。
进一步地,质谱条件包括以下的①~⑥中的一项或多项:
①离子源参数毛细管电压为3200V;
②锥孔电压为40kV;
③离子源温度为100℃;
④脱溶剂气温度为350℃;
⑤脱溶剂气体积流量为700L/h;
⑥碰撞能量为30~45V。
进一步地,质量扫描范围m/z为100~1000,所述脱溶剂气为氮气。
在本发明的具体实施方式中,对液质联用的数据进行OPLS-DA分析,制定具有用于区别羌活种类、真品和伪品、或判断有无的鉴定标准图谱,再采用同样的方法对待测羌活进行检测,通过将检测图谱与鉴定标准图谱进行对比鉴别羌活种类、真伪或有无。
通过OPLS-DA分析数据后,能够更加清楚明确的观测标志化合物是否存在,高效准确。
本发明的有益效果是:
(1)本发明检测方法可有效分别得到羌活及宽叶羌活的特征峰,只需一次检测,即可快速分辨羌活的种类,同时还可鉴定羌活的真伪。
(2)本发明检测方法还可应用于含羌活的产品的检测,例如中成药、保健品等,可检测出产品中是否含有羌活以及所含羌活的种类,可高效地对此类产品进行鉴定及质量控制。
附图说明
图1是本发明检测方法的代表性总离子流图谱,A(NI),B(NF),C(伪品);
图2是OPLS-DA分析图;
图3是本发明检测的羌活A1样品的总离子流图谱;
图4是本发明检测的羌活A2样品的总离子流图谱;
图5是本发明检测的羌活A3样品的总离子流图谱;
图6是本发明检测的羌活A4样品的总离子流图谱;
图7是本发明检测的羌活A5样品的总离子流图谱;
图8是本发明检测的羌活A6样品的总离子流图谱;
图9是本发明检测的羌活A7样品的总离子流图谱;
图10是本发明检测的羌活A8样品的总离子流图谱;
图11是本发明检测的羌活A9样品的总离子流图谱;
图12是本发明检测的羌活A10样品的总离子流图谱;
图13是本发明检测的羌活A11样品的总离子流图谱;
图14是本发明检测的羌活A12样品的总离子流图谱;
图15是本发明检测的羌活A13样品的总离子流图谱;
图16是本发明检测的羌活A14样品的总离子流图谱;
图17是本发明检测的宽叶羌活B1样品的总离子流图谱;
图18是本发明检测的宽叶羌活B2样品的总离子流图谱;
图19是本发明检测的宽叶羌活B3样品的总离子流图谱;
图20是本发明检测的宽叶羌活B4样品的总离子流图谱;
图21是本发明检测的宽叶羌活B5样品的总离子流图谱;
图22是本发明检测的宽叶羌活B6样品的总离子流图谱;
图23是本发明检测的宽叶羌活B7样品的总离子流图谱;
图24是本发明检测的宽叶羌活B8样品的总离子流图谱;
图25是本发明检测的宽叶羌活B9样品的总离子流图谱;
图26是本发明检测的宽叶羌活B10样品的总离子流图谱;
图27是本发明检测的伪品C1样品的总离子流图谱;
图28是本发明检测的伪品C2样品的总离子流图谱。
具体实施方式
实施例1
本实施例进行羌活种类、真伪的鉴别。
(1)供试品溶液制备
取本品粉末(过三号筛)0.2g,置50mL容量瓶中,精密加入甲醇30mL,密塞,超声处理(功率100W,频率40kHz)30min,放冷,加甲醇定容至刻度,摇匀,经0.22μm微孔滤膜过滤,取续滤液作为供试品溶液。
(2)采用高效液相色谱法和电喷雾质谱法联用进行鉴别标准图谱的制定。
色谱质谱条件:
Agilent 1290超高效液相色谱仪;
色谱柱:Agilent Acquity HSS-T3(1.8μm,2.1×100mm);
检测波长:330nm;
流速:0.3mL/min;
柱温:30℃;
进样量:1μL;
流动相:乙腈(B)-0.1%甲酸水(A),梯度洗脱,梯度如表1。
表1梯度洗脱程序
质谱条件:
电喷雾电离(ESI)离子源,正、负离子模式下采集数据,质量扫描范围m/z 100~1000,离子源参数毛细管电压为3200V,锥孔电压40kV,离子源温度为100℃,脱溶剂气温度350℃,脱溶剂气(N2)体积流量700L/h,碰撞能量(CE)30~45V。
采用本发明方法分析测定了14批羌活(NI)和10批宽叶羌活(NF)和2批伪品,所测羌活及宽叶羌活和伪品的来源见表2,测定的代表性的总粒子流图谱见图1,全部检测图谱见图3~28。
表2羌活、宽叶羌活采集来源
从检测图中可以看出,NI、NF和伪品通过本发明的检测方法得到的谱图完全不同,可轻松辨别。NI和NF分别具有不同的特征峰,NI的特征峰为16、44和47三个特征峰,NF的特征峰为30、38和40三个特征峰,而市售伪品羌活则不具有上述任意一组特征峰。
对14批NI和10批NF的数据通过SIMCA-P 14.1 software再进行OPLS-DA分析,见图2,得到6个特征峰,3个峰属于NI即:peak 16:阿魏酸Ferulic Acid(f),peak 44:异欧前胡素Isoimperatorin(d),peak 47:苯乙基阿魏酸酯bomyl ferulate(c);另3个峰属于NF,即:peak 30:6-O-丙二酸紫花前胡苷6-O-Propanedioic nodakenin(a),peak 38:欧前胡素imperatorin(e),和peak 40:对羟基苯乙基阿魏酸酯p-Hydroxyphenethyl ferulate(b)。
NI和NF分别具有不同的特征峰,NI的特征峰为16、44和47三个特征峰(即图2中c、d、f三个峰),NF的特征峰为30、38和40三个特征峰(即图2中a、b、e三个峰),而市售伪品羌活则不具有上述任意一组特征峰。
(2)通过步骤(1)得到用于鉴别羌活种类及真伪的具有鉴别特征峰的标准鉴别图谱。然后采用本发明方法对待测羌活进行检测,将待测羌活的检测图谱与标准鉴别图谱进行对比:如果待测羌活的检测图谱同时具有16、44和47(或c、d、f)三个特征峰,则待测羌活的品种为NI;如果待测羌活的检测图谱同时具有30、38和40(或a、b、e)三个特征峰,则待测羌活的品种为NF;如果待测羌活的检测图谱不具有NI的3个峰或者NF的3个峰,则判定为伪品。
可以看出,本发明方法可以用于快速鉴别羌活种类及其伪品,方便有效。
实施例2
本实施例进行市售含羌活的中成药中羌活有无的鉴定。
(1)鉴定标准图谱的制定同实施例1。
(2)将市售含羌活的中成药按照实施例1相同的方法进行检测鉴定,鉴别是否含羌活,其中,制备供试品溶液时溶液的质量浓度为实施例1中的5倍。
通过本发明方法检测了15种按照药典规定均应含有羌活的中成药,检测结果见表3:
表3
从上述数据可以看出,样品2,5,6明显不含NI或者NF,其余的样品均含有羌活,其中追风透骨丸中既含有NI,也含有NF。
以上所述仅为本发明的实施例,并非因此限制本发明的专利范围,凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换,或直接或间接运用在其他相关的技术领域,均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (2)
1.一种羌活的检测方法,其特征在于,通过对待测羌活或待测产品中的标识化合物阿魏酸、异欧前胡素、苯乙基阿魏酸酯、6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素、对羟基苯乙基阿魏酸酯的有无进行检测,从而进行羌活种类鉴别,或羌活真伪鉴别,或鉴定产品中是否含有羌活,包括以下内容的一项或多项:
(1)同时含有阿魏酸、异欧前胡素和苯乙基阿魏酸酯三种物质,待测羌活为羌活Notopterygium incisum;
(2)同时含有6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素和对羟基苯乙基阿魏酸酯三种物质,待测羌活为宽叶羌活Notopterygium franchetii;
(3)同时含有阿魏酸、异欧前胡素和苯乙基阿魏酸酯三种物质,或同时含有6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素和对羟基苯乙基阿魏酸酯三种物质,待测羌活为真品;
(4)将标示含有羌活的产品通过检测后,同时含有阿魏酸、异欧前胡素和苯乙基阿魏酸酯三种物质,或/和同时含有6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素和对羟基苯乙基阿魏酸酯三种物质,所检测产品中含有羌活;若同时含有阿魏酸、异欧前胡素和苯乙基阿魏酸酯三种物质,所检测产品中含有的羌活为羌活Notopterygium incisum;若同时含有6-O-丙二酸紫花前胡苷、欧前胡素和对羟基苯乙基阿魏酸酯三种物质,所检测产品中含有的羌活为宽叶羌活Notopterygium franchetii;若6种所述标识化合物均含有,所检测产品中同时含有羌活Notopterygium incisum和宽叶羌活Notopterygium franchetii;
采用超高效液相色谱-电喷雾质谱法联用的方法对所述标识化合物进行检测:
超高效液相色谱仪,质谱采用电喷雾电离离子源,正、负离子模式下采集数据;
所述液相色谱条件包括:
色谱柱:Agilent Acquity HSS-T3 ,1.8 µm,2.1×100 mm;
流动相:水相、有机相;
其中,水相为质量分数为0.1%的甲酸水溶液;有机相选自乙腈;流动相采用如下梯度洗脱程序:
色谱柱规格:2.1×100mm,1.8μm;
柱温:30℃;
流速:0.30 ml/min;
检测波长:330 nm;
质谱条件:
①离子源参数毛细管电压为3200V;
②锥孔电压为40 kV;
③离子源温度为100 ℃;
④脱溶剂气温度为350 ℃;
⑤脱溶剂气体积流量为700 L/h;
⑥碰撞能量为30~45 V;
供试品溶液制备:取待测羌活或待测产品粉末0.2 g,置50 mL容量瓶中,精密加入甲醇30 mL,密塞,超声处理30 min,放冷,加甲醇定容至刻度,摇匀,经0.22 μm微孔滤膜过滤,取续滤液作为供试品溶液。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,质量扫描范围m/z 为100~1000,所述脱溶剂气为氮气。
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