CN109810940A - 一种可提高离体动物精子活力的方法及其应用 - Google Patents

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本发明公开了一种可提高离体动物精子活力的方法及其应用，属于微生物技术领域。本发明的组合物可显著提高离体动物精子的前向运动活力，进而改善妊娠结局，提高受精率，因此，本发明的组合物在人工授精和体外受精领域均有极大的应用前景；将正常人的正常活力精子置于本发明的组合物中孵育1.5～2h，可使正常活力精子的平均前向运动精子比例提高15％左右；将弱精症患者的弱活力精子置于本发明的组合物中孵育1.5～2h，可使弱活力精子的平均前向运动精子比例提高23％左右，效果较为显著。

Description

一种可提高离体动物精子活力的方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种可提高离体动物精子活力的方法及其应用，属于微生物技术领域。
背景技术
据世界卫生组织数据显示，全球约15％的育龄夫妇面临着不孕不育的威胁，我国近期调查结果显示国内不孕症者占已婚夫妇人数的10％，而且发病率呈上升趋势。其中，占据人类不孕不育症患者一半左右的是男性不育症的患者，而弱精症则是常见男性不育的原因之一。
临床常通过人工授精治疗男性不育，但是，人工授精常因男性精子动力不足而失败，因此，提高精子动力是提高辅助生殖技术成功率的一个重要条件。
精液的主要成分是精子和精浆，精子来源于睾丸，是受精的主体，其质膜上含有多种脂肪酸，它们对于精子的活动具有非常重要的作用。在辅助生殖技术操作实施过程中，常规处理精子的方法是洗去精浆，活力低的精子及死精子，然后用人工合成如BWW、mHTF、台式液等的培养液培养精子。
不过，上述培养液仅能够为精子提供了一个缓冲和基本供能环境，基本无提高精子活力的作用，因此，在开发一种提高精子活力的方法就显得尤为重要。
发明内容
[技术问题]
本发明要解决的技术问题是提供一种可提高离体动物精子活力的组合物及其使用方法。
[技术方案]
为解决上述问题，本发明提供了一种可提高离体动物精子活力的组合物，所述组合物的成分包含屎肠球菌(Enterococcus Faecium)。
在本发明的一种实施方式中，所述组合物中，屎肠球菌(Enterococcus Faecium)的活菌数为1×105～1×107CFU/mL。
在本发明的一种实施方式中，所述组合物的成分包含屎肠球菌(EnterococcusFaecium)以及基液；所述基液的成分包含配子准备液(Modified Human Tubal Fluid，简称mHTF)和血清替代物(Serum Substitute Supplement，简称SSS)。
在本发明的一种实施方式中，所述基液中，配子准备液(Modified Human TubalFluid，简称mHTF)和血清替代物(Serum Substitute Supplement，简称SSS)的体积比为9:1。
本发明还提供了含有上述组合物的产品。
在本发明的一种实施方式中，所述产品为试剂盒。
本发明还提供了一种可提高离体动物精子活力的方法，所述方法为使用上述组合物，将离体动物精子添加入上述组合物中进行孵育。
在本发明的一种实施方式中，所述孵育的条件为温度37℃、时间90～120min。
在本发明的一种实施方式中，所述离体动物精子在组合物中的添加量为1×105～1×107CFU/mL。
在本发明的一种实施方式中，所述离体动物精子在组合物中的添加量为1×107CFU/mL。
在本发明的一种实施方式中，所述方法为使用上述组合物，先将上述的组合物于温度37℃的条件下平衡2～3h，然后将离体动物精子添加入上述组合物中于37℃的条件下进行孵育90～120min。
本发明还提供了上述组合物或上述产品或上述方法在提高离体动物精子活力方面的应用。
[有益效果]
(1)本发明的组合物可显著提高离体动物精子的前向运动活力，进而改善妊娠结局，提高受精率，因此，本发明的组合物在人工授精和体外受精领域均有极大的应用前景。
(2)将正常人的正常活力精子置于本发明的组合物中孵育1.5～2h，可使正常活力精子的平均前向运动精子比例提高15％左右；将弱精症患者的弱活力精子置于本发明的组合物中孵育1.5～2h，可使弱活力精子的平均前向运动精子比例提高23％左右，效果较为显著。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的阐述。
下述实施例中涉及的屎肠球菌(Enterococcus Faecium)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)以及大肠杆菌(Escherichia coli)均购自北纳生物，产品编号分别为：BNCC336951、BNCC186652、BNCC130878、BNCC185972以及BNCC185254。
下述实施例中涉及的Modified Human Tubal Fluid(mHTF)、Serum SubstituteSupplement(SSS)以及精子分离上层梯度介质(Isolate)均购自美国Irvine公司。
下述实施例中涉及的正常活力精液标本(标准按WHO五版)以及弱精症患者精液标本(标准按WHO五版)来源于医院门诊病人标本。
下述实施例中涉及的检测方法如下：
精子活力检测方法：使用CASA精子分析仪。
实施例1：弱活力精子的孵育及活力检测
具体步骤如下：
(1)按照表1中A-H组的配方拿取组合物原材料；
(2)将组合物原材料进行混合，得到组合物A-H；
(3)将组合物A-H于温度37℃的条件下平衡2～3h，得到平衡后的组合物A-H；
(4)将精子分离上层梯度介质(Isolate)于37℃预热2～3h，得到预热后的精子分离上层梯度介质(Isolate)；
(5)将收集有弱活力精液的取精杯置于37℃水浴0.5h，得到液化后的精液；
(6)将预热后的精子分离上层梯度介质(Isolate)与液化后的精液混匀，300g离心10分钟，得到分离后的弱活力精子；
(7)将分离后的弱活力精子按照1×107CFU/mL的添加量分别添加至平衡后的组合物A-H中，于37℃的条件下进行孵育90～120min，得到孵育后的精子。
以步骤(6)中未经孵育的分离后的精子为空白对照，分别检测空白对照组精子与步骤(7)中经组合物A-H孵育后的精子的活力，检测结果如表2。
表1组合物配方
表2空白对照组的精子与经组合物A-H孵育后的精子的活力
组别 前向运动精子比例
空白对照组 34.1％
A组 57.3％
B组 51.6％
C组 46.7％
D组 35.2％
E组 32.7％
F组 35.0％
G组 32.3％
H组 33.9％
由表2可知，组合物A-C可明显改善弱活力精子的前向运动精子比例，其中，组合物A效果最佳，可将弱活力精子的前向运动精子比例由34.1％提高至57.3％；而组合物D提升效果不明显；组合物E-H则无提升效果。
实施例2：正常活力精子的孵育及活力检测
具体步骤如下：
(1)按照表1中A组的配方拿取组合物原材料；
(2)将组合物原材料进行混合，得到组合物A；
(3)将组合物A于温度37℃的条件下平衡2～3h，得到平衡后的组合物A；
(4)将精子分离上层梯度介质(Isolate)于37℃预热2～3h，得到预热后的精子分离上层梯度介质(Isolate)；
(5)将收集有正常活力精液的取精杯置于37℃水浴0.5h，得到液化后的精液；
(6)将预热后的精子分离上层梯度介质(Isolate)与液化后的精液混匀，300g离心10分钟，得到分离后的正常活力精子；
(7)将分离后的正常活力精子按照1×107CFU/mL的添加量分别添加至平衡后的组合物A-H中，于37℃的条件下进行孵育90～120min，得到孵育后的精子。
以步骤(6)中未经孵育的分离后的精子为空白对照，分别检测空白对照组精子与步骤(7)中经组合物A孵育后的精子的活力，检测结果为：空白对照组精子的前向运动精子比例为63.1％、经组合物A孵育后精子的前向运动精子比例为78.5％。
可见，组合物A可明显改善正常活力精子的前向运动精子比例，将正常活力精子的前向运动精子比例由63.1％提高至78.5％。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一种可提高离体动物精子活力的组合物，其特征在于，所述组合物的成分包含屎肠球菌(Enterococcus Faecium)。
2.如权利要求1所述的一种可提高离体动物精子活力的组合物，其特征在于，所述组合物中，屎肠球菌(Enterococcus Faecium)的活菌数为1×105～1×107 CFU/mL。
3.如权利要求1或2所述的一种可提高离体动物精子活力的组合物，其特征在于，所述组合物的成分包含屎肠球菌(Enterococcus Faecium)以及基液；所述基液的成分包含配子准备液(mHTF)以及血清替代物(SSS)。
4.如权利要求3所述的一种可提高离体动物精子活力的组合物，其特征在于，所述基液中，配子准备液(mHTF)与血清替代物(SSS)的体积比为9:1。
5.含有权利要求1-4任一所述组合物的产品。
6.一种可提高离体动物精子活力的方法，其特征在于，所述方法为使用权利要求1-4任一所述的组合物，将离体动物精子添加入权利要求1-4任一所述的组合物中进行孵育。
7.如权利要求6所述的一种可提高离体动物精子活力的方法，其特征在于，所述孵育的条件为温度37℃、时间90～120min。
8.如权利要求6或7所述的一种可提高离体动物精子活力的方法，其特征在于，所述离体动物精子在组合物中的添加量为1×105～1×107 CFU/mL。
9.如权利要求6-8任一所述的一种可提高离体动物精子活力的方法，其特征在于，所述方法为使用权利要求1-4任一所述的组合物，先将权利要求1-4任一所述的组合物于温度37℃的条件下平衡2～3h，然后将离体动物精子添加入权利要求1-4任一所述的组合物中于37℃的条件下进行孵育90～120min。
10.权利要求1-4任一所述组合物或权利要求5所述产品或权利要求6-9任一所述方法在提高离体动物精子活力方面的应用。
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