CN109804765A - 一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于植物种植领域，涉及一种施肥方法，具体涉及一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法，包括春季施肥和秋季施肥。秋季施肥时，按照幼树的发育阶段和特点，分别设计了适合该阶段的施肥方法。秋季施肥步骤之后，还加入了低浓度钙离子水溶液浇灌步骤，以降低病害对澳洲坚果幼树造成的负面影响。所述施肥方法可促进非丰产期幼树的营养生长，并为幼树进入丰产期做好营养准备。本技术方案可以应用于澳洲坚果的种植栽培实践活动中。

Description

一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法

技术领域

本发明属于植物种植领域，涉及一种施肥方法，具体涉及一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法。

背景技术

澳洲坚果(Macadamia integrifolia F.Muell)又名夏威夷果，原产澳大利亚，其人工栽培历史仅150多年，是一种新兴果树。澳洲坚果20世纪60～70年代开始引入中国。近年来，在我国云南省形成初步产业，特别在德宏州引种栽培后，已规模化种植，并将逐步成为德宏州主要经济林产品。澳洲坚果属多年生的常绿高大乔木果树，年可抽生3～4次新梢，生长速度较快，一般种植3～4年后可开花结果，种植5年后的树开始转向以生殖生长为主。

中国专利CN108886936A-一种澳洲坚果水肥一体化施肥方法公布了一种针对澳洲坚果的施肥方法，具体为：分别在澳洲坚果果树生长结果的四个时期(抽穗前期、谢花期、果实生长期和果实采摘后)以喷灌、滴灌或沟施等方式对澳洲坚果果树施加水肥。现有技术中的施肥方法存在以下缺点：(1)该施肥方式主要针对的是以生殖生长为主的澳洲坚果果树，施肥主要是促进生殖生长，该施肥方案并不适合处于所有生长时期的澳洲坚果果树；(2)使用该施肥方式需要在果树生长发育的四个时期进行施肥作业，操作过程复杂，工作量大，增加了果农的工作负担。定植后1～5年属幼树管理阶段，此时果树以营养生长为主，需要采取与已进入丰产期的果树不同的施肥方法，才能促进果树幼树的生长，为澳洲坚果果树的丰产优质打下基础。目前对澳洲坚果种植栽培的研究集中在丰产期果树上，缺少对幼树栽培施肥方法的研究。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法，所述施肥方法可促进非丰产期幼树的营养生长，并为幼树进入丰产期做好营养准备。

为达到上述目的，本发明提出了以下技术方案：

一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法，包括以下步骤，

春季施肥：施肥时间为每年2月-3月，采用的肥料为高氮低磷复合肥；

秋季施肥：施肥时间为每年10月-11月；对澳洲坚果的未挂果幼树进行施肥时，对幼树分别施加高氮低磷复合肥和生物菌肥两种肥料；对树龄为5年以及5年以下的澳洲坚果的挂果树进行施肥时，对挂果树分别施加高氮低磷缓释肥、微量元素肥和生物菌肥三种肥料；所述生物菌肥均为含微生物菌剂的有机肥。

采用上述技术方案，技术原理为：

对澳洲坚果果树于每年2月-3月开展春季施肥，采用的肥料为高氮低磷复合肥。高氮低磷肥料促进果树的营养生长，春季施肥与枝梢生长的物候期结合进行，可以促进澳洲坚果果树枝梢快速生长，形成结果树冠。

对澳洲坚果果树于每年10月-11月开展秋季施肥，针对未挂果幼树，采用的肥料为高氮低磷复合肥和生物菌肥。高氮低磷复合肥可为果树生长补充提供营养物质，促进其营养生长，为来年树冠生长提供物质基础。生物菌肥为含微生物菌剂的有机肥。有机肥含有丰富的有机质和各种养分，所含养分全面平衡，并可在较长时间内对果树提供营养支持。

在秋季施肥中针对树龄为5年以及5年以下的挂果树，采用肥料包括高氮低磷缓释肥、微量元素肥和生物菌肥。虽然部分小于等于5年树龄的果树已经开始开花结果，但其营养生长还未充分进行，果树积蓄的营养还不充足，所结果实的质量和数量欠佳。本技术方案促进5年以及5年以下的挂果树的营养生长，并提供强化营养物质，缓释肥保证了营养元素不会快速流失并强化营养生长促进作用，增加了肥料利用率。

在本发明中，高氮低磷复合肥是指复合肥料中总氮和有效五氧化二磷的质量比大于1；高氮低磷缓释肥是指缓释肥料中总氮和有效五氧化二磷的质量比大于1。

本技术方案的有益效果，具体如下：

现有技术中，对澳洲坚果幼树的施肥方案并未区分幼树和成树，对两种果树采取同一施肥方案，但该施肥方式会导致幼树过早成熟并开始开花结果，但幼树过早成熟对澳洲坚果产量和质量的提高有较大的负面作用。本技术方案针对澳洲坚果生长发育特点，制定了适合处于幼树管理阶段的澳洲坚果果树的施肥方法，该方法可促进果树幼树的营养生长，并形成结果树冠，为澳洲坚果果树进入丰产期打下良好的物质基础。

现有技术中，对一般果树的幼树施肥时，并未根据幼树的生长阶段制定不同的施肥方式，施肥方案为：每年施肥3次施完，分别在果树的春梢、夏梢、秋梢进行。澳洲坚果一般种植3～4年后可开花结果，5年以及5年以下树龄的澳洲坚果果树属幼树管理阶段。通常情况，在对处于幼树管理阶段的果树进行施肥时，不论果树是否开始挂果，采用的肥料为有机肥和复合肥。在发现果树生长状况欠佳时，一般都是增加追肥，而不是对施肥方式进行改进。增加追肥既浪费肥料又会对土壤环境造成一定污染。经研究发现不同时期的幼树的生长发育方式和对营养的需求有较大的不同，若采用普通果树幼树的施肥方式，会导致澳洲坚果幼树的营养生长不充分，并导致澳洲坚果果树进入丰产期后，出现大量落花落果现象，或出现果实质量欠佳的现象，严重影响了澳洲坚果的产量和质量。本技术方案对已挂果幼树和未挂果幼树在施肥肥料种类上进行了区分，并且简化了施肥步骤，对澳洲坚果幼树施加了高氮低磷的肥料促进果树的营养生长，为果树进入盛果期打好物质基础。

在秋季施肥中针对树龄为5年以及5年以下的挂果树，采用肥料包括高氮低磷缓释肥、微量元素肥和生物菌肥。上述方案可以促进树龄为5年以及5年以下的挂果树的营养生长，并且减少其进入丰产期之后的落花落果的现象，提高果实的质量和数量。已经开始开花结果的幼树对营养的需求增加，本技术方案增加了微量元素肥的施加。由于生殖生长的开始，需要进一步加强对已经开花结果的幼树的营养生长的促进，采用高氮低磷缓释肥可以较长时间对幼树的营养生长促进作用。

在每年10月-11月进行秋季施肥，还具有以下优点：可以增加树体内养分的积累，对翌年的树势极为有利；利于铲伤根系的愈合和发生新根，这些新根对翌年早春营养的吸收起到重要作用；可使有机肥适时发挥肥效，供果树越冬和春季生长之用。在秋季施肥时施加生物菌肥，该生物菌肥中包括有机肥，有机肥不仅可以为作物直接提供养分，而且可以活化土壤中的潜在养分，增强微生物活性促进物质转化。施用有机肥料还能改善土壤理化性状，提高土壤肥力，防治土壤污染。

现有技术中，培育澳洲坚果果树所用的肥料大多是农家有机肥，有机肥存在肥料中易滋生各种有害微生物的问题，导致果树易出现病害，最终导致果树存活率降低或结实率降低等后果。微生物菌剂可拮抗土壤中有害菌群，防止澳洲坚果果树根部病变，并减少农用抑菌制剂的使用减少了环境污染。

综上所述，本法明的有益效果为：

(1)本方案克服了现有技术中施肥方案缺少幼树和成树的区分的缺陷，是适合处于幼树管理阶段的澳洲坚果果树的施肥方法，该方法可促进果树幼树的营养生长，并形成结果树冠，为澳洲坚果果树进入丰产期打下良好的物质基础。

(2)本方案未根据幼树的生长阶段制定不同的施肥方式，对树龄为5年以及5年以下的挂果树和未挂果幼树采取不同施肥方案，促进澳洲坚果的营养生长，并为其进入丰产阶段打下了物质基础。

(3)对树龄为5年以及5年以下的挂果树，本技术方案采取了高氮低磷缓释肥、微量元素肥和生物菌肥的施肥方案，满足了该阶段的果树的营养需求，并能够长时间刺激果树进行营养生长，避免果树将营养用于生殖生长。

(4)在每年10月-11月进行秋季施肥，施加的生物菌肥在果树越冬、形成树势等方面，对果树的生长有促进作用。

(5)加入了微生物菌剂，可拮抗土壤中有害菌群，防止澳洲坚果果树根部病变，并减少农用抑菌制剂的使用减少了环境污染。

进一步，在所述秋季施肥步骤中，所述未挂果幼树的树龄为1年-4年。

采用上述技术方案，澳洲坚果是以内膛2年生的枝作为结果枝，花序抽生在树的内膛枝上，果树定植后3～4年开始开花结果。

进一步，在所述春季施肥步骤中，采用的施肥方式为淋施或撒施；在所述秋季施肥步骤中，采用的施肥方式为环状沟施，所述环状沟施的挖沟深度为25-30厘米。

采用上述技术方案，春季施肥时，采取撒施的施肥方式，只需将肥料直接均匀的泼撒在农田土壤上即可完成，能均匀分布到土壤耕作层，有利作物的根系早期吸收利用，操作方便，且不需要额外的机械、工具投入。采用淋施的施肥方式，把肥料溶解于水中形成肥溶液，而后，淋入作物根系较集中的土表上。淋施的施肥方式对移动性较好氮肥的施加较为有益，淋施方式简单易行，且适合于化学肥料快速作用促进植物新梢抽出。

秋季施肥时，采用沟施的施肥方式，使得肥料近根，容易被吸收利用，因而肥料利用率较高；采用沟施的施肥方式，肥料与土壤接触面小，营养元素被固定的程度低，有效时间比撒施和淋施长。沟施方法使肥料集中，可以实现深施，能促进根系向下深扎，有利于抗旱。

环状沟施肥就是在树冠投影边缘以外挖环状沟，将肥料与表土混匀填入沟内。澳洲坚果属浅根系作物，主根不发达，以侧根为主，根系分布浅范围窄，吸收养分不足与地上生长快的枝梢形成矛盾。沟施的沟深度为25-30厘米，可保证施加的肥料可深达根系集中分布层，增加肥料的生物利用率。

进一步，在所述秋季施肥步骤之后还包括浇水步骤；所述浇水步骤为：秋季施肥结束后，对澳洲坚果果树的根系施加钙离子水溶液，所述钙离子水溶液的钙离子浓度为0.55-1.25重量％。

采用上述技术方案，秋季施肥后进行浇水作业与不进行浇水作业相比，具有如下的有益效果：防止挖土后根漏出后被空气风干；防止有机肥由于过于干燥而出现的不易被果树根系吸收的情况；施肥回填后土体高出和比较虚，须要加水来沉降；稀释溶解肥料更快的让全部毛细根吸收，极早极时恢复树势；防止入冬气温降低后出现的果树冻害。

现有技术中，为促进树木的营养生长，往往采取施加高氮低磷肥料的方法。高氮低磷肥料虽然促进了澳洲坚果果树营养生长，但是也会导致供果树吸收的磷肥量减少。磷能够促进澳洲坚果果树根表皮细胞形成较为致密的排列，从而阻挡病原菌的入侵，并且能够刺激根系分泌对病原菌有抑制作用的抗性物质，进一步阻挡病原菌。为促进营养生长抑制生殖生长，采用了低氮高磷的复合肥，这势必会对果树的病害抗性降低，进而会影响到果树正常生长，甚至导致澳洲坚果幼树不能正常发育成结果成树或导致幼树死亡，从而造成严重的经济损失。本技术方案在秋季施肥之后，向澳洲坚果果树根系施加钙离子水溶液，钙离子参与根表皮细胞细胞壁的构建，并具有促进澳洲坚果根表皮细胞之间形成相对致密排列的作用，另外，一定浓度水平的钙离子还可以诱导澳洲坚果根系分泌抗性物质，加强对病原菌的抑制作用。

进一步，在春季施肥步骤中，高氮低磷复合肥的用量为100g/株-500g/株；在秋季施肥步骤中，对澳洲坚果的未挂果幼树施肥时，高氮低磷复合肥的用量为100g/株-300g/株，生物菌肥用量为4000g/株-8000g/株；在秋季施肥步骤中，对树龄为5年以及5年以下的澳洲坚果的挂果树施肥时，高氮低磷缓释肥的用量为400g/株-500g/株，微量元素肥的用量为80g/株-150g/株，生物菌肥10000g/株-12000g/株。

采用上述技术方案，根据澳洲坚果果树的树龄、营养状态、树势等选取适当的施肥量，可有效促进果树的营养生长，并且减少肥料对环境的污染。

进一步，所述生物菌肥由下列重量份的原料制成：2-5份的微生物菌剂、含澳洲坚果青皮的有机肥30-45份、氮肥15-22份、磷肥5-8份、钾肥10-20份、中微量元素肥3-7份、腐植酸4-8份、植物促生物质1-3份和膨润土3-7份。

采用上述技术方案，生物菌肥中包括了澳洲坚果果树生长发育所需各种营养物质和植物生长调节物质，各种元素协同作用并实现对果树生长发育的促进。微生物菌剂的加入能够预防真菌或细菌等引起的果树病害。含澳洲坚果青皮的有机肥为澳洲坚果果树生长提供养分，并同时抑制树间杂草生长，从而提高肥料利用率。

该技术方案，有益效果具体如下：

澳洲坚果果树生长速度较快，例如，3年生的树，树高可达3m，冠幅可达2.5m×2.5m。并且澳洲坚果属浅根系作物，主根不发达，以侧根为主，根系分布浅范围窄。从而导致澳洲坚果果树根系吸收养分不足与地上生长快的枝梢形成矛盾，需要加大肥料的施加量以满足地上部分的生长需求。现有技术中，为满足果树生长和开花结果的营养需求，大量并在较大范围内施用有机肥，有机肥的使用不仅为果树提供营养物质，也促进了果园内杂草的生长。由于澳洲坚果树冠大和根系分布广的特点，需要在定植幼树时保留较宽树间距。杂草利用肥料中的养分在树间大量生长，由于间距大，杂草的生长空间也随之变大，对澳洲坚果的营养竞争作用更强，大大降低了施肥效率。随之而来的就是，坚果幼树的营养生长受到抑制，不能形成足够大的结果树冠，成树生殖生长缺乏营养，产生大量落花落果的现象。为解决上述问题，现有技术中使用人工定期除草或除草剂等方法，但上述方法增加了劳动强度，并有可能导致环境污染，此外除草剂本身也会对澳洲坚果生长产生一定负面作用。

本技术方案采用了含澳洲坚果青皮的有机肥作为澳洲坚果专用生物菌肥成分之一，可解决上述技术问题。经发明人研究发现澳洲坚果青皮中有效成分对果园中常见杂草具有生长抑制作用，但对澳洲坚果果树本身不具有抑制影响并可以为果树生长提供营养物质，因此将澳洲坚果青皮用在有机肥的制备中。青皮含有较为丰富的蛋白质和总糖等，含青皮的有机肥可以为果树生长提供营养元素。使用含澳洲坚果青皮的有机肥料不但可以为果树提供必要的营养物质，还可以抑制杂草生长，从而避免了杂草在营养物质方面对果树的竞争抑制作用。现有技术中对青皮的综合利用都是针对青皮中的营养物质，没有发现青皮的其他用途。在本发明中，发明人发现了青皮中含有抑制杂草的成分，将青皮添加在肥料中，可实现抑制杂草和提供营养的双重作用，为青皮的综合利用提供了新的方向。

现有技术中，培育澳洲坚果果树所用的肥料大多是农家有机肥，采用甘蔗渣、蔬菜渣等有机生活垃圾混合动物粪便以及发酵菌，经长时间发酵制得。但是现有技术中存在有机肥的营养不全面，营养成分不易控制的问题。本发明提供的生物菌肥在有机肥料的基础上添加了大量元素、中微量元素等物质可以增加肥料营养的全面性，营养成分更为可控。

现有技术中的农家肥，肥效慢，在促进植物生长方面效果较差，缺少植物生长调节物质的添加。本技术方案提供的肥料添加了植物促生物质，植物促生物质作为一种植物生长调节物质，通过果树根系吸收，促进果树的生长发育。

现有技术中，培育澳洲坚果果树所用的肥料大多是农家有机肥，有机肥存在肥料中易滋生各种有害微生物的问题，导致果树易出现病害，最终导致果树存活率降低或结实率降低等后果。微生物菌剂可拮抗土壤中有害菌群，防止澳洲坚果果树根部病变，并减少农用抑菌制剂的使用减少了环境污染。

综上所述，该技术方案的有益效果为：

(1)采用含澳洲坚果青皮的有机肥，在为澳洲坚果果树生长和结果提供营养物质的同时，抑制了果园中杂草的生长，从而保证了肥料利用率，减少了杂草在营养物质方面对果树的竞争抑制作用；

(2)添加了大量元素、中微量元素等物质可以增加肥料营养的全面性，营养成分更为可控；

(3)添加了植物促生物质，调节植物生长，促进果树的生长发育；

(4)加入了微生物菌剂，可拮抗土壤中有害菌群，防止澳洲坚果果树根部病变，并减少农用抑菌制剂的使用减少了环境污染。

进一步，所述有机肥由下列重量份的原料制成：所述含澳洲坚果青皮的有机肥由下列重量份的原料制成：菜叶5份、澳洲坚果青皮5份、动物粪便5份、豆粕1份、酒糟0.5份和食用菌菌渣0.5份。

采用上述技术方案，澳洲坚果青皮为坚果加工过程中弃用的部分，本技术方案将青皮进行综合利用，减少环境污染。

现有技术中，大多采用澳洲坚果果壳作为澳洲坚果有机肥料的主要组成部分，但是澳洲坚果果壳的主要成分为纤维素、木质素等，仅可提供C、H、O等元素，成分较为单一。并且纤维素和木质素通过发酵也较难实现完全分解，营养元素利用率低。本发明的技术方案中使用到了澳洲坚果青皮作为有机肥发酵的原材料，青皮含有较为丰富的蛋白质和总糖等，实现了废弃物的综合利用。

进一步，所述含澳洲坚果青皮的有机肥由如下方法制得：将菜叶、澳洲坚果青皮、动物粪便、豆粕、酒糟、食用菌菌渣按比例混合，加入EM菌剂，调节水分含量为30-35重量％，调节pH值为6.5-7.5，腐熟30-45天，即得。

采用上述技术方案，经过发酵有机生活垃圾中蛋白、糖类等营养物质被分解，可供果树根系吸收。其中澳洲坚果青皮中含有植物生长抑制成分，经发酵后对果树不产生生长抑制作用，但对草本植物的种子萌发、生长均有一定程度的抑制作用。本技术方案采用的有机肥与现有技术的有机肥不同，不仅为果树提供了营养物质，还可以抑制周围植物在营养方面对果树产生的竞争抑制。

进一步，所述微生物菌剂包括下列重量份的原料菌株：地衣芽胞杆菌2-3份、巨大芽孢杆菌1-2份、短小芽孢杆菌1-2份、蜡样芽孢杆菌2-3份和胶质芽孢杆菌3-5份。

采用上述技术方案，含有地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)和胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)的微生物菌剂可改善土壤微生态环境，使用后微生物菌剂所含细菌可成为土壤中的优势菌群，从而抑制土壤中有害病菌的繁殖。

其中，本方案使用的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)的保藏编号为：14580D-5^TM，该菌种购自美国模式培养物集存库(American type culturecollection，ATCC)，为地衣芽胞杆菌模式菌种(Bacillus licheniformis(Weigmann)Chester)；

本方案使用的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的保藏编号为：14581，该菌种购自美国模式培养物集存库，为巨大芽孢杆菌模式菌种(Bacillus megaterium deBary)；

本方案使用的短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)的保藏编号为：7061^TM，该菌种购自美国模式培养物集存库，为短小芽孢杆菌模式菌种(Bacillus pumilus Meyerand Gottheil)；

本方案使用的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的保藏编号为：14579D-5^TM，该菌种购自美国模式培养物集存库，为蜡样芽孢杆菌模式菌种(Bacillus cereusFrankland and Frankland)；

本方案使用的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)的保藏编号为：10792，该菌种购自美国模式培养物集存库，为胶质芽孢杆菌模式菌种(Bacillusmucilaginosus Berliner)。

本技术方案的有益效果具体如下：

(1)刺激澳洲坚果果树主根增长，使得根系向土壤深层生长

本方案的生物菌剂可调控澳洲坚果果树根部的生长素分泌、运输和分布，从而刺激果树根部向土壤深层生长，使果树能够对土壤深层的水分和养分进行摄取，同时由于根部的深扎，进一步加强果树的抗风能力，从而提高了果树适应环境的能力。

澳洲坚果根系分布在土壤浅层，澳洲坚果果树主根不发达，主要根系均分布于土壤浅层。在干旱的春季花期，果树无法从深层土壤中获得水分和养分供幼果生长；由于根系分布浅果树抗风能力弱，遇到强风会使成年果树倒覆，从而造成产量损失。现有技术一般采用向土壤中施加植物生长调节物质的方法，来刺激果树根系生长，如外源生长素、赤霉素等。现有技术的方案存在种种缺点。缺点一：对侧根生长刺激作用过大。生长调节物质同时促进侧根和主根的发育，由于侧根数量较多且分布较浅，生长调节物质对侧根的诱导作用比对主根的诱导作用更强，这就导致主根增长不多，但侧根大量生长。在空间有限的果园中，由于侧根的大量生长，果树的侧根之间相互影响，共同竞争浅层的营养物质，也会导致果树营养不良或施肥量增加等问题。根系在水平方向上大量发展，也会对开沟施肥造成一定的困难，因为开沟需要避开根密集的区域以减少机械作用和浓度过大的肥料对根的损伤。缺点二：对主根生长刺激作用有限。主根增长不够也不能很好解决澳洲坚果果树抗风能力差和不能充分利用垂直空间上的营养的问题。缺点三：作用时间过短。生长调节物质虽然能快速作用，但作用持续时间较短，需要多次施加经常施加，才能保持其对根生长的刺激作用。缺点四：环境污染。过多的施用人造生长调节物质还会对生态环境造成一定负面影响。

本技术方案可以解决现有技术中存在的以上的技术问题。本方案的微生物菌剂可作用于澳洲坚果果树内源生长激素合成分泌通路，可对内源生长激素的合成产生轻微抑制作用。植物根对生长激素较为敏感，较低浓度的生长激素可以促进根的生长，较高浓度的生长激素对根的生长表现为抑制作用。根尖根冠区和分生区的细胞合成的生长激素，在重力的作用下运输至根系中位置较低的部分，在主根中积累的生长激素较多，对主根的生长产生了抑制作用，生长激素在侧根部位的量较小，正好适合侧根的生长。本方案的微生物菌剂轻微抑制了内源生长素的合成，使得主根中积累的生长素减少，抑制作用减小，甚至产生了一定的促进作用，从而促进主根生长。由于内源生长激素合成减少，侧根部分的生长激素水平降低，生长激素对侧根的刺激作用也随之降低，侧根的生长水平被控制在一定范围内。

(2)减轻病害，降低农药残留

施入土壤后，本微生物菌剂中各种芽孢杆菌迅速繁殖成为优势菌，控制了根际的营养和其他资源，致使病原菌在相当程度上丧失生存空间和条件。本微生物菌剂中各种芽孢杆菌的次生代谢产物使果树根表皮细胞壁增厚、纤维化、木质化程度提高，加强了果树的防病害的能力。现有技术通常使用农药来处理澳洲坚果的果树病害，对环境具有一定程度的破坏作用，并且农药也会刺激有害微生物产生药物抗性。本技术方案克服了现有技术的缺陷，具有生物防治的作用。

(3)提高肥效

本方案的微生物菌剂可分解土壤或肥料中的有机物，分解后的物质有利于果树吸收，增大的肥料或营养物质的利用率。本方案的微生物菌剂还能够分泌合成多种有机酸、酶、生理活性物质等，把无效态磷、钙、镁等营养物质转化为有效态，进一步提高了营养物质利用率。

进一步，还包括追加施肥，所述追加施肥的施肥方式为叶面施肥。

采用上述技术方案，根据澳洲坚果果树树体生长情况适时适量追肥，以保证果树以促进枝梢快速生长，形成结果树冠。叶面施肥又叫叶面喷肥或根外追肥,这种施肥方法的突出优点是针对性强,吸收速度快,不受土壤环境因素影响,养分利用率高,且施肥量少,增产效果显著,尤其在土壤环境不良造成根系吸收作用受阻、作物急需营养以及作物生长后期根系活力衰退时,采用叶面追肥可以弥补根系吸肥的不足。

附图说明

图1为施肥方法流程图；

图2为实验例1数据的柱状图：采用实施例1-3和对比例1-4中制备的肥料进行大田随机区组试验，监测不同施肥下澳洲坚果幼苗叶片数(片)的变化；

图3为实验例1数据的柱状图：采用实施例1-3和对比例1-4中制备的肥料进行大田随机区组试验，监测不同施肥下澳洲坚果幼苗叶鲜重(g)的变化；

图4为实验例1数据的柱状图：采用实施例1-3和对比例1-4中制备的肥料进行大田随机区组试验，监测不同施肥下澳洲坚果幼苗主根长(cm)的变化；

图5为实验例1数据的柱状图：采用实施例1-3和对比例1-4中制备的肥料进行大田随机区组试验，监测不同施肥下澳洲坚果幼苗根鲜重(g)的变化；

图6为实验例2数据的柱状图：用澳洲坚果青皮二氯甲烷提取物对林间常见杂草的种子进行处理，监测提取物对杂草的化感作用。

图7为实验例1数的据柱状图：本技术方案的微生物菌剂对澳洲坚果根系内源生长素含量的影响(图中星号表示：与空白对照相比有显著差异，P<0.05)。

具体实施方式

下面通过具体实施方式进一步详细说明，其中：

实施例1-3为本方案生物菌肥的制备实例；实施例4为本方案施肥方法的实施实例；对比例1为现有技术中农家肥的制备实例；对比例2-4为分别将实施例1-3中要素省略(青皮、壳聚糖、微生物菌剂)的肥料制备实例；对比例5为使用现有技术中的施肥方法进行澳洲坚果施肥的实例；实验例1为对实施例4和对比例5的施肥方案的施肥效果进行的评估和对比；实验例2为硝酸钙对根系分泌物的影响实验；实验例3为采用实施例1-3和对比例1-4中制备的肥料进行大田随机区组试验；实验例4为澳洲坚果青皮提取物的化感作用实验；实验例5为微生物菌剂对澳洲坚果根系内源生长素含量的影响；实验例6为微生物菌剂对澳洲坚果根系生长发育的影响。

实施例1：生物菌肥制备实例

(1)原料准备以及制备

(1.1)含大量元素的肥料

氮肥：选用铵态氮肥和硝态氮肥按照质量比2:1混合(绿川生物)；磷肥：采用五氧化二磷为活性成分的磷肥(河南正道)；钾肥：采用硫酸钾为活性成分的钾肥(鲁西化肥)。

(1.2)中微量元素肥：中微量元素肥为自制，各中微量元素终浓度为：螯合态锌2g/L、螯合态锰2g/L、硼5g/L、硫2g/L、镁2g/L、钙2g/L、铁1g/L、钼1g/L。

(1.3)腐殖酸(成都盖尔盖司)，经检测含水量4.1重量％，有机质含量为82重量％。

(1.4)植物促生物质：将壳聚糖(成都盖尔盖司)2kg、氨基酸肥(泓通肥业)2kg、海藻素(青岛奥福隆)0.1kg、生根粉(山东梁山鼎圣)0.4kg混合，制得植物促生物质混合物。

(1.5)微生物菌剂：微生物菌剂包括地衣芽胞杆菌(A)、巨大芽孢杆菌(B)、短小芽孢杆菌(C)、蜡样芽孢杆菌(D)、胶质芽孢杆菌(E)；其制作方法为5种菌株分别扩接培养发酵后，菌液用无菌的固体吸附剂吸附，按重量比A：B：C：D：E＝3：1：2：3：5充分混匀后，25℃恒温静置暗培养2天，然后在30℃条件下烘干，水分含量为30重量％，即得微生物菌剂。

(1.6)膨润土(四川和鑫润达)。

(1.7)有机肥：菜叶5kg、澳洲坚果青皮5kg、动物粪便5kg、豆粕1kg、酒糟0.5kg、食用菌菌渣0.5kg混合，加入终浓度为2重量％的EM菌剂(山东有机肥料厂)，调节水分含量为30重量％，调节pH值为7.0，腐熟40天，即得所述有机肥。

(2)生物菌肥制备：取微生物菌剂2kg、有机肥40kg、氮肥19kg、磷肥6kg、钾肥17kg、中微量元素肥5kg、腐植酸6kg、植物促生物质2kg、膨润土5kg，将上述物质充分搅拌混合均匀；在温度25℃-30℃，pH 6.0-6.8条件下，经筛分和烘干制得生物菌肥。

(3)生物菌肥技术指标

按照农业部标准NY/T798-2015对本实施例中制得的生物菌肥进行检测，结果如下：生物菌肥的产品外观、技术指标和无害化指标均符合NY/T798-2015的规定。

实施例2：生物菌肥制备实例

(1)原料准备以及制备

(1.1)含大量元素的肥料

氮肥：选用铵态氮肥，铵态氮肥采用碳酸氢铵为活性成分的氮肥(绿川生物)；磷肥：采用五氧化二磷为活性成分的磷肥(河南正道)；钾肥：采用氧化钾为活性成分的钾肥(鲁西化肥)。

(1.2)中微量元素肥：中微量元素肥为自制，各中微量元素终浓度为：螯合态锌1g/L、螯合态锰1g/L、硼4g/L、硫2g/L、镁2g/L、钙5g/L、铁1g/L、钼0.5g/L。

(1.3)腐殖酸(成都盖尔盖司)，经检测含水量4.1重量％，有机质含量为82重量％。

(1.4)植物促生物质：将壳聚糖(成都盖尔盖司)2kg、氨基酸肥(泓通肥业)1kg、海藻素(青岛奥福隆)0.2kg、生根粉(山东梁山鼎圣)0.2kg混合，制得植物促生物质混合物。

(1.5)微生物菌剂：微生物菌剂包括地衣芽胞杆菌(A)、巨大芽孢杆菌(B)、短小芽孢杆菌(C)、蜡样芽孢杆菌(D)、胶质芽孢杆菌(E)；其制作方法为5种菌株分别扩接培养发酵后，菌液用无菌的固体吸附剂吸附，按重量比A：B：C：D：E＝2：2：2：2：3充分混匀后，25℃恒温静置暗培养2天，然后在30℃条件下烘干，水分含量为32重量％以内，即得微生物菌剂。

(1.6)膨润土(四川和鑫润达)。

(1.7)有机肥：菜叶5kg、澳洲坚果青皮5kg、动物粪便5kg、豆粕1kg、酒糟0.5kg、食用菌菌渣0.5kg混合，加入终浓度为1重量％的EM菌剂(山东有机肥料厂)，调节水分含量为35重量％，调节pH值为7.0，腐熟45天，即得所述有机肥。

(2)生物菌肥制备：取微生物菌剂5kg、有机肥45kg、氮肥22kg、磷肥8kg、钾肥20kg、中微量元素肥7kg、腐植酸8kg、植物促生物质3kg、膨润土7kg，将上述物质充分搅拌混合均匀；在温度25℃，pH6.0条件下，经筛分和烘干制得生物菌肥。

(3)生物菌肥技术指标：按照农业部标准NY/T798-2015对本实施例中制得的生物菌肥进行检测，结果如下：生物菌肥的产品外观、技术指标和无害化指标均符合NY/T798-2015的规定。

实施例3：生物菌肥制备实例

(1)原料准备以及制备

(1.1)含大量元素的肥料

氮肥：选用铵态氮肥和硝态氮肥按照质量比2:1混合(绿川生物)；磷肥：采用五氧化二磷为活性成分的磷肥(河南正道)；钾肥：采用硫酸钾为活性成分的钾肥(鲁西化肥)。

(1.2)中微量元素肥：中微量元素肥为自制，各中微量元素终浓度为：螯合态锌2g/L、螯合态锰2g/L、硼5g/L、硫2g/L、镁2g/L、钙2g/L、铁1g/L、钼1g/L。

(1.3)腐殖酸(成都盖尔盖司)，经检测含水量4.1重量％，有机质含量为82重量％。

(1.4)植物促生物质：将壳聚糖(成都盖尔盖司)1kg、氨基酸肥(泓通肥业)1kg、海藻素(青岛奥福隆)0.1kg、生根粉(山东梁山鼎圣)0.4kg混合，制得植物促生物质混合物。

(1.5)微生物菌剂：微生物菌剂包括地衣芽胞杆菌(A)、巨大芽孢杆菌(B)、短小芽孢杆菌(C)、蜡样芽孢杆菌(D)、胶质芽孢杆菌(E)；其制作方法为5种菌株分别扩接培养发酵后，菌液用无菌的固体吸附剂吸附，按重量比A：B：C：D：E＝3：1：1：2：3充分混匀后，30℃恒温静置暗培养2天，然后在30℃条件下烘干，水分含量为35％，即得微生物菌剂。

(1.6)膨润土(四川和鑫润达)。

(1.7)有机肥：菜叶5kg、澳洲坚果青皮5kg、动物粪便5kg、豆粕1kg、酒糟0.5kg、食用菌菌渣0.5kg混合，加入终浓度为3重量％的EM菌剂(山东有机肥料厂)，调节水分含量为35重量％，调节pH值为7.5，腐熟30天，即得所述有机肥。

(2)生物菌肥制备：取微生物菌剂2kg、有机肥30kg、氮肥15kg、磷肥5kg、钾肥10kg、中微量元素肥3kg、腐植酸4kg、植物促生物质1kg、膨润土3kg，将上述物质充分搅拌混合均匀；在温度30℃，pH6.5条件下，经筛分和烘干制得生物菌肥。

(3)生物菌肥技术指标：按照农业部标准NY/T798-2015对本实施例中制得的生物菌肥进行检测，结果如下：生物菌肥的产品外观、技术指标和无害化指标均符合NY/T798-2015的规定。

实施例4：采用本发明的施肥方案，对澳洲坚果果树进行栽培

选取树龄为2年的澳洲坚果幼树和树龄为4年的澳洲坚果已挂果幼树进行施肥实验，澳洲坚果品种为澳大利亚引种树种OC(Own Choice)。根据实验当年物候情况确定具体施肥时间为春季施肥的时间为3月中旬，秋季施肥的时间为10月中旬，施肥时间和方式如下表(表1)所示：

表1本发明施肥方案

春季施肥的施肥时间为3月中旬，采用的肥料为高氮低磷复合肥；秋季施肥的施肥时间为10月中旬；对澳洲坚果的未挂果幼树进行施肥时，采用的肥料包括高氮低磷复合肥和生物菌肥；对树龄为5年以及5年以下的澳洲坚果的挂果树进行施肥时，采用的肥料包括高氮低磷缓释肥、微量元素肥和生物菌肥。生物菌肥为实施例1制备的生物菌肥；高氮低磷复合肥和高氮低磷缓释肥购于潍坊齐辉化工有限公司；微量元素肥购于潍坊齐辉化工有限公司。采用淋施的施肥方式是把肥料溶解于水中形成肥溶液，而后淋入作物根系较集中的土表上。环状沟施肥就是在树冠投影边缘以外挖环状沟(沟施的深度为27cm)，将肥料与表土混匀填入沟内。

对比例1：普通农家肥为当地常用的牛粪，腐熟晒干后碾碎。

对比例2：本对比例肥料制备方法基本如实施例1，不同点在于制备有机肥时，不添加澳洲坚果青皮。

对比例3：本对比例肥料制备方法基本如实施例1，不同点在于制备植物促生物质时。

对比例4：本对比例肥料制备方法基本如实施例1，不同点在于本对比例不添加微生物菌剂。

对比例5：采用现有技术中的施肥方案，对澳洲坚果果树进行栽培

选取树龄为2年的澳洲坚果幼树和树龄为4年的澳洲坚果已挂果幼树进行施肥实验，澳洲坚果品种为澳大利亚引种树种OC(Own Choice)。春季施肥的时间为2月中旬，夏季施肥时间为6月中旬，秋季施肥的时间为10月中旬，施肥时间与施肥方式如下表(表2)以及图1所示：

表2现有技术施肥方案

普通农家肥为对比例1制备的普通农家肥；三元复合肥为氮磷钾三者含量相当的复合肥，购于潍坊齐辉化工有限公司。采用淋施的施肥方式是把肥料溶解于水中形成肥溶液，而后淋入作物根系较集中的土表上。环状沟施肥就是在树冠投影边缘以外挖环状沟(沟施的深度为27cm)，将肥料与表土混匀填入沟内。

实验例1；对实施例4和对比例5的施肥效果进行的评估和对比

对实施例4和对比例5中种植的澳洲坚果幼树的生长情况进行评估(一个施肥周期依次为秋季施肥，春季施肥和夏季施肥，下述测试时间为夏季施肥后)。生长量数据采集包括新梢长度、新梢粗度和树干周长增长量。每处理选取5株试验树(F1-F8八种处理，每种5株实验树，见表1、表2)，每株树不同方位各随机选取6个新梢并标记，避免用内膛徒长枝。调查于8月底进行，分别用钢卷尺、数显游标卡尺测量新梢长度和新梢基部直径，使用全自动叶面积仪测叶面积。施肥周期开始前分别于距树干基部1m处用卷尺测量树干周长。并在采果后测量各处理鲜果的质量，以及青皮率和出仁率，每组10个果实，每个处理测量3组。结果如下表(表3-表5)所示：

表3不同施肥处理下2年树龄澳洲坚果树叶面积、干周差、新梢长度和粗度(mean±SD)

处理类型	叶面积(cm2)	干周增长量(cm)	新梢长度(cm)	新梢粗度(cm)
					F1	122.66±21.19	4.21±0.59	41±4	0.89±0.05
F2	133.21±32.11	4.56±0.87	45±5	1.02±0.07
					F5	103.78±45.34	3.54±0.67	32±10	0.67±0.11
F6	118.46±22.82	3.97±0.79	39±6	0.66±0.08

表4不同施肥处理下4年树龄澳洲坚果树叶面积、干周差、新梢长度和粗度(mean±SD)

表5不同处理下4年树龄澳洲坚果的产量(mean±SD)

处理类型	单株鲜果质量(g)	青皮率(％)	出仁率(％)
				F3	1546.491±79.223	54.3	56.9
F4	1646.287±49.447	58.9	59.1
				F7	1973.789±56.234	69.5	46.3
F8	2015.098±79.496	67.2	51.3

由表3可知，针对2年幼树，本发明技术方案(F1、F2)能较好地促进澳洲坚果生长量的提升。由表4可知，针对4年幼树，本发明技术方案(F3、F4)能较好地促进澳洲坚果生长量的提升。由表5可知，现有技术中的施肥方法(F7、F8)在幼树还未完全成熟时，就开始促进澳洲坚果的生殖生长，此时幼树在营养以及结构等方面还未为开花结果做好充足准备，导致青皮率较高，出仁率较低。而本发明技术方案(F3、F4)，幼树并未在生殖生长上投入过多能量，为其营养生长保留了更多营养，为其进入丰产期创造了条件。

实验例2：硝酸钙对根系分泌物的影响实验

(1)实验方案

本研究采用土柱法:取长1.5m、直径0.2m的工程塑料硬管，立于深1.5m的土坑中,管内装入模拟土壤，在土壤中加入有机质7.7g/kg，氮元素50mg/kg，磷元素3.8mg/kg，钾元素12.3mg/kg,pH5.2。每个根管装模拟土壤25kg。

9月栽植一年生无性繁殖幼苗,每个根管1株；栽前将澳洲坚果苗根用清水漂洗干净并灭菌(0.5％次氯酸钠),再用蒸馏水漂洗后栽植,每个处理10株。次年9月取出测试各项指标。培养期间对澳洲坚果幼苗进行常规施肥(秋肥、春肥和夏肥三次施加固体肥料，固体肥料为有机肥)，每次施加固体肥料后，用不同浓度硝酸钙溶液处理幼苗(钙离子质量浓度为0、0.55％、0.75％、1.00％、1.25％)，浇透施肥后的根系。

(2)根系分泌物收集和测量

将澳洲坚果幼苗整个根系用去离子水洗净,后用缓冲液冲洗3次后,用黑塑料布将整个根系盖住,然后将根系转至盛有培养液并持续通气的烧杯中进行根系分泌物的收集,光照下收集4小时后,取约10mL收集液,加入微生物抑制剂抑制微生物对有机酸的分解,然后迅速置于-18℃冰箱冷冻保存备用；各处理重复3次。根系分泌物中有机酸使用高效液相色谱检测。

(3)实验结果

从澳洲坚果幼苗排根及非排根的根系分泌物中分泌的有机酸分别为:柠檬酸、酒石酸、草酸、苹果酸、乳酸、乙酸和丁二酸等7种，对三种主要有机酸进行测量。

表6不同有机酸产生速率

由表6可知，用硝酸钙水溶液可促进澳洲坚果根分泌有机酸，从而对果园中致病菌产生一定抗性，从而弥补了磷肥施肥量较少带来的负面影响。

实验例3：采用实施例1-3和对比例1-4中制备的肥料进行大田随机区组试验

(1)澳洲坚果幼苗施肥处理方案

设8个不同施肥处理(表7)，不施肥组为对照组，每个处理3个重复，每个重复设置一个试验小区，每个小区面积12m*20m，随机区组排列。小区四周设宽5m的两行保护行。采用幼苗带土移栽的方法，起垄栽植幼苗。田间管理同当地常规栽培。移栽后，将抑菌剂按1:500比例稀释，均匀浇施在澳洲坚果幼苗根部表层土壤湿润为止(根部周围半径5cm范围)，每株澳洲坚果幼苗的浇入量一致，再根据实际生长需要，浇足定根水，其余处理浇等量的水。每种处理的施肥量均为1.5kg/m²。

表7澳洲坚果幼苗大田施肥试验设计

(2)检测指标以及数据处理方法

澳洲坚果幼苗植株定植后，从7月1日至12月1日，每月1日对各小区内澳洲坚果幼苗的生长状况进行抽样调查。每个小区取5株澳洲坚果幼苗。调查测定内容为澳洲坚果幼苗的地上部分(叶片数和鲜重、干重)和地下部分(根长、最大根直径和鲜重、干重)的性状特征。在测量形状特征参数时，观察试验小区中杂草生长情况。参数解释如下：叶片数：长度≥2cm的新鲜澳洲坚果幼苗叶片数；根长：澳洲坚果幼苗的主根的长度；鲜重：将澳洲坚果幼苗根和叶分开，清除多余泥土后测定各部分鲜重。

(3)试验结果

不同施肥下澳洲坚果幼苗叶片数(片)的变化情况见图2，横坐标为取样时间，纵坐标为叶片数量(片)；不同施肥下澳洲坚果幼苗叶鲜重(g)的变化，见图3，横坐标为取样时间，纵坐标为叶片重量(克)；不同施肥下澳洲坚果幼苗主根长(cm)的变化，见图4，横坐标为取样时间，纵坐标为主根长度(cm)。不同施肥下澳洲坚果幼苗根鲜重(g)的变化，见图5，横坐标为取样时间，纵坐标为根鲜重(g)。

由试验结果可知，实施例1中所制得的生物菌肥对澳洲坚果幼苗的生长发育有较好的促进作用，这种促进作用体现在对叶片数量以及重量，主根长度以及根总重上。实施例1中菌肥可以全面提供澳洲坚果幼苗所需营养物质，有效防治病害，并有促进生长的效果。实施例1/2/3中菌肥的效果明显好于普通农家肥、不添加澳洲坚果青皮的肥料、不添加生物菌剂的肥料、不添加壳聚糖的肥料。实验结果显示，本发明公开的生物菌肥可以较好的促进澳洲坚果幼苗生长，促进作用表现在促进幼苗叶片数量增长、叶片增大、主根以及侧根的生长。在测量形状特征参数时，观察试验小区中杂草生长情况，T2-T4、T6-T7实验小区中，在整个试验周期杂草生长较少；而T0、T1和T5实验小区中，在整个试验周期有较多的杂草生长，从而对澳洲坚果幼树的生长有竞争性抑制的作用。

实验例4：澳洲坚果青皮提取物化感作用的研究

(1)原料、试剂和实验仪器

澳洲坚果果皮采自云南省德宏州，经风干、粉碎(60目)，冷藏备用。供试化感受体杂草稗草(Echinochloa crusgalli(L.)Beauv)、田旋花(Convolvulus arvensis L.)、荠菜(Capsella bursa-pastoris(Linn.)和马齿苋(Portulaca oleracea L.)种子由本实验室提供。

石油醚(分析纯)(天津市风船化学试剂科技有限公司)、氯仿(分析纯)(天津市致远化学试剂有限公司)、乙酸乙酯(分析纯)(天津市化学试剂六厂三分厂)、正丁醇(分析纯)(重庆九龙化学试剂厂)、95％乙醇(工业纯)、次氯酸纳(分析纯)(天津市风船化学试剂科技有限公司)、无菌水，实验室自制。

旋转蒸发仪(RE-52)(上海亚荣生化仪器厂)、循环式多用真空泵(SHB－Ⅲ)(郑州长城科工贸有限公司)、高压灭菌锅、电热恒温鼓风干燥箱(DH-9140A型)(上海恒科技有限公司)、超声波清洗器、数显恒温水浴锅(HH-2)(国华电器有限公司)、冰箱、冷凝管、1/10000分析天平、1000ml分液漏斗、1000ul移液枪、枪头、500ml烧杯、500ml锥形瓶、100ml锥形瓶、1000ml圆底烧瓶、500ml圆底烧瓶、培养皿、5ml，50ml，100ml量筒、定性滤纸、直尺、毛线。

(2)实验方法

(2.1)澳洲坚果青皮萃取物的制备

本实验为得到精确的结果，用澳洲坚果青皮的醇提液经二氯甲烷萃取回流对澳洲坚果青皮化感作用成分进行提取。

称取澳洲坚果青皮干样100g，将其粉碎加入100mL体积分数为95％的乙醇置于200mL圆底烧瓶中水浴加热回流3小时后过滤、抽滤，收集滤液。再加体积分数为95％的乙醇回流，共处理3次。然后将得到的青皮醇液烘干至膏状，冷却后称重，得膏状青皮提取物10.91g。用500ml蒸馏水将所得青皮浸膏溶解成水溶液，备用。

将所得的石油醚萃取后的溶液倒入分液漏斗中，加入等体积的二氯甲烷，摇匀，静置萃取5小时，取下层溶液。再向上层溶液中加入等体积的二氯甲烷进行萃取，重复三次。将三次得到的二氯甲烷萃取层溶液混合，用旋转蒸发仪旋干，称重得二氯甲烷提取物：1.5g，然后加蒸馏水稀释成0.1g/mL的二氯甲烷萃取物原液，密封，置于4℃冰箱保存备用。

(2.2)提取液的梯度处理

将澳洲坚果青皮提取液原液分别稀释为10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg/mL的七个不同质量浓度梯度，以蒸馏水为对照(CK)。

(2.3)供试种子的处理

将稗草(Echinochloa crusgalli(L.)Beauv)、田旋花(Convolvulus arvensisL.)、荠菜(Capsella bursa-pastoris L)和马齿苋(Portulaca oleracea L.)种子都冲洗干净，分别用体积分数为5％的次氯酸钠浸泡20min，再用无菌水冲洗4－5次，最后用蒸馏水浸泡2h，使种子吸胀利于发芽。

(2.4)种子萌发实验

从处理好的4种供试种子中挑选颗粒饱满、无裂口完好无损的种子进行实验，分别放入铺有滤纸的培养皿(直径15cm)中，每皿均放20粒。分别倒入10mL各浓度的处理液，每种处理都设3个重复。将平皿放在恒温培养床上培养，温度设为25℃，自置床起计时，到发芽时定期观察。每24h观察一次种子的生长情况并补充处理液，始终保持滤纸浸湿。种子发芽第3天时统计种子发芽数，计算发芽势；第5天时再统计发芽数，计算发芽率。

发芽势＝前3d正常发芽的种子数/供试种子数×100％

发芽率＝前5d正常发芽的种子数/供试种子数×100％

(2.5)数据分析方法

测量计算种子的发芽率、发芽势，用Excel分析作图。

(3)实验结果

由图6可知，不同质量浓度的澳洲坚果青皮二氯甲烷萃取物对几种供试作物进行处理后，其发芽势和发芽率均比对照组有所下降，说明澳洲坚果青皮二氯甲烷萃取物对种子萌发有一定的抑制作用，且处理液的质量浓度越高，抑制作用越强。不同质量浓度的澳洲坚果青皮二氯甲烷萃取物处理后，稗草和田旋花种子的发芽率与对照组差异不显著，但其他作物种子的发芽势和发芽率与对照组都有显著差异，且越高质量浓度的二氯甲烷萃取物处理后与对照组差异越显著。二氯甲烷萃取物质量浓度为10mg/ml、5mg/ml、2.5mg/ml时，荠菜种子的发芽势与发芽率均为0，说明其对荠菜有很强的抑制作用，可至其死亡，我们可以依据此推测对二氯甲烷萃取物对十字花科植物的影响较大。从整体上来说，澳洲坚果二氯甲烷取萃物对四种子萌发的影响：荠菜抑制作用最强，马齿苋次之，田旋花和稗草最弱。

实验例5：微生物菌剂对根系内源生长激素含量的影响

(1)实验设计以及材料处理

本研究采用土柱法:取长1.5m、直径0.2m的工程塑料硬管，立于深1.5m的土坑中,管内装入模拟土壤，在土壤中加入有机质7.7g/kg，氮元素50mg/kg，磷元素3.8mg/kg，钾元素12.3mg/kg,pH5.2。每个根管装模拟土壤25kg。

当年9月栽植一年生无性繁殖幼苗,每个根管1株；栽前将澳洲坚果苗根用清水漂洗干净并灭菌(0.5％次氯酸钠),再用蒸馏水漂洗后栽植,每个处理10株。次年9月取出测试各项指标。栽植时，在管内土壤中挖出土坑，将微生物菌剂1kg均匀散布于土坑中，然后放入幼苗，回填土壤，浇适量水。其中，微生物菌剂A：衣芽胞杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌的质量比为3:2:1:3:3；微生物菌剂B：衣芽胞杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌的质量比为3:2:2:3:5；微生物菌剂C：衣芽胞杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌的质量比为2:1:1:2:3。空白对照直接将幼苗定植于土柱中。培养期间对澳洲坚果幼苗进行常规施肥。实验设计如下表(表8)所示：

表8：实验例5和实验例6的实验设计

培养结束后，取澳洲坚果幼苗根系，将材料用液氮速冻，随后放入-80℃超低温冰箱内保存，待后续激素测定。

(2)内源生长激素提取

将事先收集好的样品材料从-80℃超低温冰箱中取出，准确称量0.5g于研钵中，加入液氮研磨至粉碎；将样品粉末倒入离心管中，并向离心管中加入预冷80％甲醇，黑暗条件下4℃浸提24h；浸提完毕后4℃下10,000rpm离心10min；吸上清于新离心管中，残渣重新用4mL提取液浸提2h，4℃10,000rpm离心10min；合并两次上清液。

取混合阴离子交换反相固相萃取柱Cleanert SAX上清液进行分离纯化处理，得含内源生长激素的溶液，采用高效液相质谱测量内源生长素含量。

(3)实验结果

澳洲坚果果树根系内源生长素(IAA)分析结果如图7所示。由图7可知，使用微生物菌剂A/B/C可以微微降低根系中内源生长素水平，可以使得主根中积累的生长素水平微微降低，从而消除较高浓度生长素对主根生长的抑制作用，从而促进根系向土壤深层生长。

实验例5：微生物菌剂对根系生长发育的影响

(1)实验设计

本研究采用土柱法:取长1.5m、直径0.2m的工程塑料硬管，立于深1.5m的土坑中,管内装入模拟土壤，在土壤中加入有机质7.7g/kg，氮元素50mg/kg，磷元素3.8mg/kg，钾元素12.3mg/kg,pH5.2。每个根管装模拟土壤25kg。

当年9月栽植一年生无性繁殖幼苗,每个根管1株；栽前将澳洲坚果苗根用清水漂洗干净并灭菌(0.5％次氯酸钠),再用蒸馏水漂洗后栽植,每个处理10株。次年9月取出测试各项指标。栽植时，在管内土壤中挖出土坑，将微生物菌剂1kg均匀散布于土坑中，然后放入幼苗，回填土壤，浇适量水。其中，微生物菌剂A：衣芽胞杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌的质量比为3:2:1:3:3；微生物菌剂B：衣芽胞杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌的质量比为3:2:2:3:5；微生物菌剂C：衣芽胞杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌的质量比为2:1:1:2:3。阳性对照组用150mg/L吲哚乙酸溶液浸泡澳洲坚果幼苗根系48小时，之后取幼苗定植到土柱中。空白对照直接将幼苗定植于土柱中。培养期间对澳洲坚果幼苗进行常规施肥。实验设计如表8所示。

(2)根系及生理参数测定

将小心收获后的根系样品立即保存于25％的酒精溶液中,再通过数字化扫描仪小心将完整的根系图像扫描存入计算机,之后用与扫描仪配套的根系分析系统软件对主根长度、侧根总长度、侧根数量进行定量分析。根系参数分析完成后,测定根部生理参数。将根系用水清洗干净后,于110℃杀青15min,在75℃下烘干至恒重,测量根系总重，将主根和侧根分离后分别测干重。

(3)结果及其分析

实验结果详见表9，由实验结果可知微生物菌剂对澳洲坚果主根生长有促进作用，并且可显著提高主根干重的比例。主根的增长使得澳洲坚果果树可以在土壤中更稳的扎根，提高抗风能力。侧根从主根上长出，由于主根长度的加长提供了更多的空间供侧根的形成，侧根数目增多。根的根尖部位是吸收养分和水分的主要部位，侧根数目增多，意味着产生了更多根尖来吸收养分和水分，从而促进植物对水分和养分的吸收。编号为2T1、2T2、2T3的实验组和编号为2T0的实验组相比，侧根总长度区别较小，但使用微生物菌剂处理澳洲坚果树苗，可使侧根的有效养分水分吸收部位增多(根尖增多)，从而促进了澳洲坚果树木的发育生长。另外，由于主根的增长，侧根可以在更大的竖直空间里分布，可以利用土壤深层的营养物质和水分，避免了侧根只在土壤浅层过多生长，减少了出现不同果树的侧根相互交叠的现象，降低了果树之间的种内竞争。

表9：根系及生理参数测定结果

编号	主根长(cm)	主根干重占比(％)	侧根总长度(cm)	侧根数(根)	侧根比重(％)
						2T1	51.48±2.89	34.1	8917±297	6015±312	75.2
2T2	49.63±4.28	30.7	8749±314	5789±179	78.4
						2T3	50.21±5.22	29.1	8694±155	5487±215	79.2
2T0	42.36±10.70	13.6	8713±284	4584±158	85.3
						2CK	37.51±2.85	17.1	6537±163	4089±263	82.7

以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法，包括以下步骤，

春季施肥：施肥时间为每年2月-3月，采用的肥料为高氮低磷复合肥；

秋季施肥：施肥时间为每年10月-11月；对澳洲坚果的未挂果幼树进行施肥时，对幼树分别施加高氮低磷复合肥和生物菌肥两种肥料；对树龄为5年以及5年以下的澳洲坚果的挂果树进行施肥时，对挂果树分别施加高氮低磷缓释肥、微量元素肥和生物菌肥三种肥料；所述生物菌肥均为含微生物菌剂的有机肥。

2.根据权利要求1所述的一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法，其特征在于，在所述秋季施肥步骤之后还包括浇水步骤；所述浇水步骤为：秋季施肥结束后，对澳洲坚果果树的根系施加钙离子水溶液，所述钙离子水溶液的钙离子浓度为0.55-1.25重量％。

3.根据权利要求2所述的一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法，其特征在于，在所述秋季施肥步骤中，所述未挂果幼树的树龄为1年-4年。

4.根据权利要求3所述的一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法，其特征在于，在所述春季施肥步骤中，采用的施肥方式为淋施或撒施；在所述秋季施肥步骤中，采用的施肥方式为环状沟施，所述环状沟施的挖沟深度为25-30厘米。

5.根据权利要求1-4中任一项权利要求所述的一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法，其特征在于，在春季施肥步骤中，高氮低磷复合肥的用量为100g/株-500g/株；在秋季施肥步骤中，对澳洲坚果的未挂果幼树施肥时，高氮低磷复合肥的用量为100g/株-300g/株，生物菌肥用量为4000g/株-8000g/株；在秋季施肥步骤中，对树龄为5年以及5年以下的澳洲坚果的挂果树施肥时，高氮低磷缓释肥的用量为400g/株-500g/株，微量元素肥的用量为80g/株-150g/株，生物菌肥10000g/株-12000g/株。

6.根据权利要求1-4中任一项权利要求所述的一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法，其特征在于，所述生物菌肥由下列重量份的原料制成：2-5份的微生物菌剂、含澳洲坚果青皮的有机肥30-45份、氮肥15-22份、磷肥5-8份、钾肥10-20份、中微量元素肥3-7份、腐植酸4-8份、植物促生物质1-3份和膨润土3-7份。

7.根据权利要求6所述的一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法，其特征在于，所述含澳洲坚果青皮的有机肥由下列重量份的原料制成：菜叶5份、澳洲坚果青皮5份、动物粪便5份、豆粕1份、酒糟0.5份和食用菌菌渣0.5份。

8.根据权利要求7所述的一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法，其特征在于，所述含澳洲坚果青皮的有机肥由如下方法制得：将菜叶、澳洲坚果青皮、动物粪便、豆粕、酒糟、食用菌菌渣按比例混合，加入EM菌剂，调节水分含量为30-35重量％，调节pH值为6.5-7.5，腐熟30-45天，即得。

9.根据权利要求1、2、3、4、7或8所述的一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法，其特征在于，所述微生物菌剂包括下列重量份的原料菌株：地衣芽胞杆菌2-3份、巨大芽孢杆菌1-2份、短小芽孢杆菌1-2份、蜡样芽孢杆菌2-3份和胶质芽孢杆菌3-5份。

10.根据权利要求1、2、3、4、7或8所述的一种澳洲坚果生物菌肥的施肥方法，其特征在于：还包括追加施肥，所述追加施肥的施肥方式为叶面施肥。