CN109799311A - 一种复方四季青片的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种复方四季青片的检测方法，本发明的方法包括：1)复方四季青片的鉴别；2)复方四季青片中鱼腥草素钠的含量测定，其中，含量测定部分，步骤如下：步骤1，对照品溶液的制备，步骤2，供试品溶液的制备，步骤3，测定，吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算鱼腥草素钠的含量，其中所述高效液相色谱的色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈‑0.01mol/L四丁基溴化铵一二乙胺＝30：40：0.028为流动相，检测波长为283nm，理论板数按鱼腥草素钠峰计算应不低于3000。

Description

一种复方四季青片的检测方法

技术领域：

本发明涉及一种药物制剂的检测方法，特别涉及一种复方四季青片的检测方法

背景技术：

复方四季青片由四季青干浸膏和癸酰乙醛(合成鱼腥草素)为药物活性成分制备的一种中药制剂，功能主治为：清热解毒。用于风热感冒，咳嗽痰多，咽喉肿痛。其为糖衣片或薄膜衣片，除去包衣后，片芯显棕褐色；味腥、涩。服用方法为：口服，一次2～4片，一日3次。

其制备方法如下：取四季青干叶，加水煎煮2次，每次煎煮1小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩成稠膏，低温干燥，粉碎。取四季青干浸膏粉与癸酰乙醛混匀，加辅料适量，压制成1000片，包糖衣或薄膜衣，即得。

四季青是属于冬青科的植物。分布于我国长江以南各地，常生长于疏林中。其根、叶均可制药，主要功效是清热解毒；生肌敛疮；活血止血。四季青叶中主要成分为冬青三萜甙(ilexoside)A，亦即3β-O-(β-D-吡喃木糖基)泰国树脂酸[3β-O-(β-D-xylopyranosyl)siaresinolic acid]和冬青三萜甙B甲酯(ilexosideB methylester)亦即3β-O-(β-D-吡喃木糖基)坡模醇酸甲酯[3β-O-(β-D-xylopyranosyl)pomolic acid methyl ester]。此外，还含原儿茶酸(protocatechuic acid)，原儿茶醛(pro-tocatechuic aldehyde)，熊果酸(ursolic acid)，鞣质(tannin)，黄酮甙(flavone glycoside)和糖类(sugar)等。

癸酰乙醛(鱼腥草素)提取工艺流程：鱼腥草→干燥→粉碎→乙醇提取→过滤→滤液浓缩→氯仿去杂→干燥→鱼腥草素提取物。癸酰乙醛对流感杆菌、耐药金葡菌、结核杆菌等有一定抑制作用，并能增强体内白细胞吞噬能力和提高血清备介素，因此能调动机体免疫力。用于消炎抗菌，用于慢性气管炎、慢性宫颈炎、附件炎、小儿肺炎。制剂有针剂，片剂，外用片(宫颈炎片)。

但由于复方四季青片化学成分种类较多且理化性质差异较大，现有技术没有对有关的成分进行含量测定。因此有必要选择有关化学成分作为检测指标。以控制产品质量，本发明选择了关化学成分作为检测指标，并经过筛选获得了检测方法，为控制产品质量提供了保证。

发明内容：

本发明针对中药制剂复方四季青片，建立了新的检测方法，实现对制剂的质量评价体系。

本发明公开一种复方四季青片的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)复方四季青片的鉴别：

方法(1)，取复方四季青片研细，加乙醇，滤过，滤液滴加三氯化铁试液即显黑绿色；

方法(2)，取复方四季青片研细，加氢氧化钠溶液溶解，滤过，加二硝基苯肼试液加热，即生成红棕色沉淀；

方法(3)色层

步骤1，供试品溶液的配制：取复方四季青片研细，加水及氢氧化钠溶液溶解，加醋酸乙酯和盐酸溶液，静置，分离出醋酸乙酯层；

步骤2，对照品溶液的配制：取癸酰乙醛对照品，加水及氢氧化钠溶液溶解，加醋酸乙酯和盐酸溶液，分离出醋酸乙酯层作为癸酰乙醛对照品溶液，取原儿茶酸对照品，加无水乙醇制成溶液，作为原儿茶酸对照品溶液；

步骤3，色层：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液点于同一经活化的硅胶G薄层板上，以甲苯－无水乙醇－正己烷－36％乙酸＝9：6：6：0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇试液；

2)复方四季青片中鱼腥草素钠的含量测定：

步骤1，对照品溶液的制备：称取鱼腥草素钠对照品加氢氧化钠溶液溶解，加水稀释；

步骤2，供试品溶液的制备：取复方四季青片研细，称取后加入氢氧化钠溶液，滤过。量取续滤液，加流动相稀释；

步骤3，测定：吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算鱼腥草素钠的含量；

其中所述高效液相色谱的色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.01mol/L四丁基溴化铵一二乙胺＝30：40：0.028为流动相，检测波长为283nm，理论板数按鱼腥草素钠峰计算应不低于3000。

优选的，本发明所述的测定方法，步骤如下：

1)复方四季青片的鉴别：

方法(1)，取复方四季青片1片，研细，加乙醇搅拌滤过，滤液滴加三氯化铁试液即显黑绿色；

方法(2)，取复方四季青片2片，研细，加氢氧化钠溶液使溶解，滤过，滤液加二硝基苯肼试液加热，即生成红棕色沉淀；

方法(3)色层

步骤1，供试品溶液的配制：取复方四季青片2片，去包衣，片芯研细，加水及氢氧化钠溶液4滴，搅拌溶解，置分液漏斗中，加醋酸乙酯和盐酸溶液，振摇10分钟，静置，分取醋酸乙酯提取液；

步骤2，对照品溶液的配制：取癸酰乙醛对照品，置小分液漏斗中，加水及氢氧化钠溶液4滴，轻轻振摇使溶解，加醋酸乙酯和盐酸溶液6滴，振摇10分钟，静置，分取醋酸乙酯提取液，作为癸酰乙醛对照品溶液；再取原儿茶酸对照品，加无水乙醇制成溶液，作为原儿茶酸对照品溶液；

步骤3，色层：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一经活化的硅胶G薄层板上，以甲苯－无水乙醇－正己烷－36％乙酸＝9：6：6：0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇试液；

2)复方四季青片中鱼腥草素钠的含量测定：

步骤1，对照品溶液的制备：称取五氧化二磷干燥至恒重的鱼腥草素钠对照品加氢氧化钠溶液适量使溶解，加水至刻度，摇匀，取少量容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；

步骤2，供试品溶液的制备：取复方四季青片研细，称取1片的重量加氢氧化钠溶液，超声处理，放至室温，滤过，量取续滤液加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；

步骤3，测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15-25μl，注入液相色谱仪，测定鱼腥草素钠的含量。

最优选的，本发明所述的测定方法，步骤如下：

1)复方四季青片的鉴别：

方法(1)，取复方四季青片1片，研细，加乙醇5ml，微热后滤过，滤液滴加三氯化铁试液即显黑绿色；

方法(2)，取复方四季青片2片，研细，加0.2％氢氧化钠溶液20ml使溶解，滤过。取滤液1ml，加二硝基苯肼试液1ml，加热，即生成红棕色沉淀；

方法(3)色层

步骤1，供试品溶液的配制：取复方四季青片2片，去包衣，片芯研细，加水5ml及8％氢氧化钠溶液4滴，搅拌溶解，置分液漏斗中，加醋酸乙酯10ml，7％盐酸溶液6滴，振摇10分钟，静置，分取醋酸乙酯提取液；

步骤2，对照品溶液的配制：取癸酰乙醛对照品40mg，置小分液漏斗中，加水5ml及8％氢氧化钠溶液4滴，轻轻振摇使溶解，加醋酸乙酯10ml，7％盐酸溶液6滴，振摇10分钟，静置，分取醋酸乙酯提取液，作为癸酰乙醛对照品溶液；再取原儿茶酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为原儿茶酸对照品溶液；

步骤3，色层：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一经活化的硅胶G薄层板上，以甲苯－无水乙醇－正己烷－36％乙酸＝9：6：6：0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

2)复方四季青片中鱼腥草素钠的含量测定：

步骤1，对照品溶液的制备：精密称取五氧化二磷干燥至恒重的鱼腥草素钠对照品约8mg，置100ml容量瓶中，加0.2mol/L的氢氧化钠溶液适量使溶解，加水至刻度，摇匀，取4.0ml置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

步骤2，供试品溶液的制备：取本品20片，研细，精密称取相当于1片的重量置具塞锥形瓶中，精密加0.2mol/L氢氧化钠溶液100ml，密塞，称定重量，功率250W，频率30kHz超声处理30min，放至室温，再称定重量，用0.2mol/L氢氧化钠溶液补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液1ml置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；

步骤3，测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定鱼腥草素钠的含量；

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.01mol/L四丁基溴化铵一二乙胺＝30：40：0.028为流动相，检测波长为283nm，理论板数按鱼腥草素钠峰计算应不低于3000。

本发明复方四季青片有效成分众多，本发明为此进行了研究，对不同成分的检测表明，其他有效成分含量的检测操作过程复杂，周期较长，灵敏度等不高，最终确定以测定复方四季青片中鱼腥草素钠的含量为优选方案，提出了用高效液相色谱法检测样品中的鱼腥草素钠含量的方法，该法操作简便、准确、灵敏，可用于瓜蒌片质量控制。

本发明的检测方法是经过筛选获得的，筛选过程如下：

1.测定条件的选择

仪器HPLC型号：日本岛津LC-10ATVP

检测器型号：日本岛津SPD-10AVP

检测波长：283nm

流速：1.0ml/min

2.检测波长的选择

取鱼腥草素钠对照品，精密称取五氧化二磷干燥至恒重的鱼腥草素钠对照品约8mg，置100ml容量瓶中，加0.2mol/L的氢氧化钠溶液适量使溶解，加水至刻度，摇匀，取4.0ml置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得约8ug/mL的溶液。进行紫外扫描。鱼腥草素钠能完全溶解并在283nm处有最大吸收，故以此波长为检测波长。

3.流动相的选择

本发明选择以乙腈-0.01mol/L四丁基溴化铵-二乙胺(30：40：0.028)为流动相，本发明曾采用不同的流动相，如甲醇和不同碱性物质的组合，乙腈和不同碱性物质的组合，选择了四丁基氢氧化铵，氢氧化钠，二乙胺，三乙胺及其组合等作为碱性物质，另对流动相的比例进行了筛选，最终确定碱性物质为四丁基溴化铵一二乙胺，两者体积比例为40：0.028，筛选结果表明在该条件下待测主峰和样品中其他色谱峰均能达到基线分离，保留时间合适，且峰型良好，因此选择该条件。

4.供试品制备方法的选择

样品的供试品溶液的制备方法分别考虑用0.2mol/L和0.3mol/L氢氧化钠溶液直接超声处理的方法，结果表明用0.2mol/L和0.3mol/L氢氧化钠溶液直接超声处理的方法制备的样品效果相近，故选择前者为供试品的处理方法。

取本品同一批的样品三份，在供试品溶液的制备过程中，分别超声处理15分钟，30分钟和60分钟，考察样品中有效成分通过超声处理完全提取出来所需要的时间。结果表明，超声30分钟样品中有效成分就能完全提取出来，15分钟样品中有效成分未能完全提取出来，而超声60分钟与超声30分钟效果相近。因此选择超声30分钟。测定结果见下表。

表1：不同溶液不同超声时间提取的样品含量

最后供试品制备方法确定如下：

取本品20片，研细，精密称取适量(约相当于1片的重量)置具塞锥形瓶中，精密加0.2mol/L氢氧化钠溶液100ml，密塞，称定重量，超声处理30min(功率250W，频率30kHz)，放至室温，再称定重量，用0.2mol/L氢氧化钠溶液补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液1ml置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

5.对照品溶液的制备

精密称取五氧化二磷干燥至恒重的鱼腥草素钠对照品约8mg，置100ml容量瓶中，加0.2mol/L的氢氧化钠溶液适量使溶解，加水至刻度，摇匀，取4.0ml置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

6.主峰的定性

取鱼腥草素钠对照品溶液进样，确定鱼腥草素钠主峰的保留时间。

7.阴性样品考察

按工艺制备不含四季青药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备，作为阴性对照品溶液。阴性无干扰。

8.线性关系和线性范围的考察

精密称取五氧化二磷干燥至恒重的鱼腥草素钠对照品8.89mg，置100ml容量瓶中，加0.2mol/L的氢氧化钠溶液适量使溶解，加水至刻度，摇匀，分别取0.5ml、1.0rnl、2.0ml、4.0ml、8.0ml置5个10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述5份对照品溶液20μl进样。按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积纵坐标，以进样量为横坐标作图，绘制标准曲线。数据如表2。

表2：复方四季青片标准曲线数据表

进样量(ug)	4.445	8.89	17.78	35.56	71.12
						峰面积A	357026.188	716633.313	1425520	2848346.5	5599905

结果表明鱼腥草素钠在4.44μg/ml～71.12μg/ml范围内，峰面积值与进样量具有良好的线性关系。

9.样品精密度考察

取本品约0.5g，精密称定，按供试品的制备方法处理样品，照含量测定方法重复进样6次，记录峰面积。结果如表3。

表3：样品精密度试验

由表可知，6次测定结果的相对标准偏差RSD％＜2.0％，本方法重现性良好。

10.样品重复性考察

取本品的同一批样品5份，精密称定，按供试品的制备方法处理样品，测定含量。

结果如表4。

表4：样品重复性试验

实验次数	1	2	3	4	5	平均	RSD％
								含量(mg/片)	26.1	26.5	26.3	26.2	26.4	26.3	0.60

由表可知，6次测定结果的相对标准偏差RSD％＜2.0％，本方法重现性良好。

11.供试品溶液稳定性考察

取供试品溶液，分别在0，3，6小时分别进样记录峰面积，结果见表5：

表5：稳定性试验

时间(小时)	0	3	6	RSD％
					20121001峰面积	2313293.5	2295098.5	2273430.5	0.87
20121002峰面积	2299409.25	2293848.25	2263139.5	0.85
					20121003峰面积	2307284	2292019.5	2260648.25	1.04

由表可知，各批的峰面积的RSD％＜2.0％，供试品在6小时内稳定。

12.样品回收率考察

采用加样回收法测定。

取已知含量的样品(20121001)(鱼腥草素钠含量0.570mg/g，)，分别加添加鱼腥草素钠对照品，按上述色谱条件测定。依下列公式计算回收率，结果见下表。

表6：鱼腥草素钠回收率试验

鱼腥草素钠平均回收率：97.9％，RSD％：0.61。结果表明：本法具有良好的回收率。

13.最小检出

取本品已知含量的样品制备一份供试品溶液，精密量取1ml置100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取2ml置10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取20μl进样，得鱼腥草素钠最小检出量为：1.2ng。

14.样品的测定

分别按拟定的含量测定方法对三批样品进行测定含量,结果见下表。

表7：三批样品含量测定

15.限(幅)度

根据多批含量测定结果，考虑到鱼腥草素钠原料的含量，以及制剂生产过程、贮藏等因素，暂定本品每片含鱼腥草素钠，应为24.0mg～34.0mg。

附图说明：

图1为复方四季青片标准曲线

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1

复方四季青片中鱼腥草素钠的含量测定：

步骤1，对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥至恒重的鱼腥草素钠对照品约8mg，置100ml容量瓶中，加0.2mol/L的氢氧化钠溶液适量使溶解，加水至刻度，摇匀，取4.0ml置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

步骤2，供试品溶液的制备取本品20片，研细，精密称取适量(约相当于1片的重量)置具塞锥形瓶中，精密加0.2mol/L氢氧化钠溶液100ml，密塞，称定重量，超声处理30min(功率250W，频率30kHz)，放至室温，再称定重量，用0.2mol/L氢氧化钠溶液补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液1ml置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

步骤3，测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定鱼腥草素钠的含量。

三批样品含量测定

Claims (3)

1.一种复方四季青片的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)复方四季青片的鉴别：

方法(1)，取复方四季青片研细，加乙醇，滤过，滤液滴加三氯化铁试液即显黑绿色；

方法(2)，取复方四季青片研细，加氢氧化钠溶液溶解，滤过，加二硝基苯肼试液加热，即生成红棕色沉淀；

方法(3)色层

步骤1，供试品溶液的配制：取复方四季青片研细，加水及氢氧化钠溶液溶解，加醋酸乙酯和盐酸溶液，静置，分离出醋酸乙酯层；

步骤2，对照品溶液的配制：取癸酰乙醛对照品，加水及氢氧化钠溶液溶解，加醋酸乙酯和盐酸溶液，分离出醋酸乙酯层作为癸酰乙醛对照品溶液，取原儿茶酸对照品，加无水乙醇制成溶液，作为原儿茶酸对照品溶液；

步骤3，色层：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液点于同一经活化的硅胶G薄层板上，以甲苯－无水乙醇－正己烷－36％乙酸＝9：6：6：0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇试液；

2)复方四季青片中鱼腥草素钠的含量测定：

步骤1，对照品溶液的制备：称取鱼腥草素钠对照品加氢氧化钠溶液溶解，加水稀释；

步骤2，供试品溶液的制备：取复方四季青片研细，称取后加入氢氧化钠溶液，滤过。量取续滤液，加流动相稀释；

步骤3，测定：吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算鱼腥草素钠的含量；

其中所述高效液相色谱的色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.01mol/L四丁基溴化铵一二乙胺＝30：40：0.028为流动相，检测波长为283nm，理论板数按鱼腥草素钠峰计算应不低于3000。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述方法步骤如下：

1)复方四季青片的鉴别：

方法(1)，取复方四季青片1片，研细，加乙醇搅拌滤过，滤液滴加三氯化铁试液即显黑绿色；

方法(2)，取复方四季青片2片，研细，加氢氧化钠溶液使溶解，滤过，滤液加二硝基苯肼试液加热，即生成红棕色沉淀；

方法(3)色层

步骤1，供试品溶液的配制：取复方四季青片2片，去包衣，片芯研细，加水及氢氧化钠溶液4滴，搅拌溶解，置分液漏斗中，加醋酸乙酯和盐酸溶液，振摇10分钟，静置，分取醋酸乙酯提取液；

步骤2，对照品溶液的配制：取癸酰乙醛对照品，置小分液漏斗中，加水及氢氧化钠溶液4滴，轻轻振摇使溶解，加醋酸乙酯和盐酸溶液6滴，振摇10分钟，静置，分取醋酸乙酯提取液，作为癸酰乙醛对照品溶液；再取原儿茶酸对照品，加无水乙醇制成溶液，作为原儿茶酸对照品溶液；

步骤3，色层：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一经活化的硅胶G薄层板上，以甲苯－无水乙醇－正己烷－36％乙酸＝9：6：6：0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇试液；

2)复方四季青片中鱼腥草素钠的含量测定：

步骤1，对照品溶液的制备：称取五氧化二磷干燥至恒重的鱼腥草素钠对照品加氢氧化钠溶液适量使溶解，加水至刻度，摇匀，取少量容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；

步骤2，供试品溶液的制备：取复方四季青片研细，称取1片的重量加氢氧化钠溶液，超声处理，放至室温，滤过，量取续滤液加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；

步骤3，测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15-25μl，注入液相色谱仪，测定鱼腥草素钠的含量。

3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述方法步骤如下：

1)复方四季青片的鉴别：

方法(1)，取复方四季青片1片，研细，加乙醇5ml，微热后滤过，滤液滴加三氯化铁试液即显黑绿色；

方法(2)，取复方四季青片2片，研细，加0.2％氢氧化钠溶液20ml使溶解，滤过。取滤液1ml，加二硝基苯肼试液1ml，加热，即生成红棕色沉淀；

方法(3)色层

步骤1，供试品溶液的配制：取复方四季青片2片，去包衣，片芯研细，加水5ml及8％氢氧化钠溶液4滴，搅拌溶解，置分液漏斗中，加醋酸乙酯10ml，7％盐酸溶液6滴，振摇10分钟，静置，分取醋酸乙酯提取液；

步骤2，对照品溶液的配制：取癸酰乙醛对照品40mg，置小分液漏斗中，加水5ml及8％氢氧化钠溶液4滴，轻轻振摇使溶解，加醋酸乙酯10ml，7％盐酸溶液6滴，振摇10分钟，静置，分取醋酸乙酯提取液，作为癸酰乙醛对照品溶液；再取原儿茶酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为原儿茶酸对照品溶液；

步骤3，色层：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一经活化的硅胶G薄层板上，以甲苯－无水乙醇－正己烷－36％乙酸＝9：6：6：0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

2)复方四季青片中鱼腥草素钠的含量测定：

步骤1，对照品溶液的制备：精密称取五氧化二磷干燥至恒重的鱼腥草素钠对照品约8mg，置100ml容量瓶中，加0.2mol/L的氢氧化钠溶液适量使溶解，加水至刻度，摇匀，取4.0ml置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

步骤2，供试品溶液的制备：取本品20片，研细，精密称取相当于1片的重量置具塞锥形瓶中，精密加0.2mol/L氢氧化钠溶液100ml，密塞，称定重量，功率250W，频率30kHz超声处理30min，放至室温，再称定重量，用0.2mol/L氢氧化钠溶液补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液1ml置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；

步骤3，测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定鱼腥草素钠的含量；

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.01mol/L四丁基溴化铵一二乙胺＝30：40：0.028为流动相，检测波长为283nm，理论板数按鱼腥草素钠峰计算应不低于3000。