CN109797133A - 多潜能细胞培养组合物及制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及化妆品技术领域、生物技术领域、皮肤医学技术领域，公开了一种多潜能细胞培养复合物及其皮肤细胞和皮肤干细胞修复更新作用与美容应用。多潜能细胞培养复合物，系对各种细胞培养基进行优化，保持了其在体外对成体细胞和干细胞的营养、分裂和增殖的能力，同时又适合功能护肤品的配方特性，应用于皮肤医学和皮肤美容上，易于被皮肤吸收，作用于皮肤细胞和皮肤干细胞，提供细胞生长的环境，给予其生长修复所必需的条件，具有促进皮肤细胞修复更新和改善皮肤新陈代谢的作用，从而从根本上产生皮肤的新生和修复等美容功效，使皮肤保持年轻、美丽、健康的状态。

Description

多潜能细胞培养组合物及制备方法和应用

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及多潜能细胞培养组合物及制备方法和应用。

背景技术

人体衰老是细胞衰老的最终结果，皮肤皱纹是皮肤细胞衰老的表现形式。随着年龄变大，皮肤代谢减慢，自由基和脂质过氧化物增加，胶原纤维和弹力纤维变性，皱纹加深加长。同时黑色素细胞酶活性减低等多种原因导致色素沉着和多种斑块形成。人体皮肤衰老是由内在因素和外在因素共同引起的。内在因素是指人体生命周期中自然发生的功能退化现象，例如随着年龄增加细胞端粒逐渐缩短，而有氧细胞代谢所引起的氧化损伤却逐渐增多。具体表现为皮肤表皮层和真皮层变薄、网脊变平、血管网络减少、血管壁变薄、真皮层成纤维细胞数量减少和功能紊乱、胶原纤维合成速度逐渐减慢的同时胶原蛋白被基质金属蛋白酶(MMP-1)酶解的速度却在慢慢增加。外在因素中，除了生活方式和营养状况外，紫外线所引起的光损伤是导致皮肤衰老的主要外在因素。随着人们对皮肤好坏关注程度的增加和现代生物医学的发展，可以通过活化皮肤细胞，促进皮肤干细胞的增殖、分化，最终达到修复或替代衰老皮肤细胞的目的。

干细胞是一种具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能的APSC多能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞。

典型的干细胞培养基中包括必需氨基酸、盐类、维生素、矿物质、痕量金属、糖、脂质和核苷。干细胞培养基提供足以满足细胞在人工控制的体外环境中生长的营养需求组分。一旦培养基与细胞共同孵育，就成为本领域技术人员熟知的“消耗”或“条件培养基”。条件培养基含有多种培养基中的原有组分，以及多种细胞代谢产物和分泌蛋白，包括，例如，具有生物活性的细胞因子，炎症介质和其他细胞外蛋白。最常规的培养干细胞培养基是添加有胎牛血清的培养基，然而，采用这种培养基培养的干细胞，不仅生长比较缓慢，而且传递次数超过5代之后其分化成功能细胞的潜能大大降低，同时牛血清批次存在潜在的不可重复性也大大影响了其规模化。已有研究表明，干细胞的条件培养基对肺、肝、肾等损伤器官具有一定的修复治疗作用，目前尚无可以用于皮肤细胞修复更新的培养基。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明的目的之一在于提供一种多潜能细胞培养组合物。

本发明的目的之二在于提供上述组合物的制备方法。

本发明的目的之三在于提供上述组合物的应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

多潜能细胞培养组合物，包括以下重量份计的原料：

氯化钠6500～7500份，

葡萄糖2500～3500份，

氯化钾300～350份，

氯化钙100～150份，

磷酸氢二钠100～150份，

硫酸镁40～60份，

氯化镁20～35份，

泛酸钙1～5份，

硫酸锌0.1～1份，

硫酸铜0.001～0.01份，

超氧化物歧化酶20～80份，

氢离子缓冲剂3000～4000份，

营养强化剂1500～2500份，

pH缓冲剂1000～1500份，

维生素2000～2500份，

脂肪酸4000～5000份，

类氨基酸20～50份，

解毒剂10～30份，

细胞因子10～20份，

第一复合氨基酸500～1000份，

第二复合氨基酸100～300份，

第三复合氨基酸10～50份。

优选地，所述氢离子缓冲剂为羟乙基哌嗪乙烷磺酸。

优选地，所述营养强化剂为生育酚乙酸酯。

优选地，所述pH缓冲剂为碳酸氢钠和/或丙酮酸钠。

优选地，所述维生素为生育酚、视黄醇乙酸酯、生物素、盐酸吡哆素和核黄素按质量比为(100～300)：(10～30)：0.1：0.1：0.01。

进一步优选地，所述维生素还包括质量比为1:1的叶酸和盐酸硫胺素。

优选地，所述第一复合氨基酸包括谷氨酰胺、盐酸精氨酸、盐酸赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸和缬氨酸。

优选地，所述第二复合氨基酸包括苯丙氨酸、盐酸组氨酸、丝氨酸、乙醇胺、甘氨酸、盐酸半胱氨酸、脯氨酸和蛋氨酸。

优选地，所述第三复合氨基酸包括色氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸和烟酰胺。

上述多潜能细胞培养组合物的制备方法，按配比称取各原料，混匀。

优选地，所述脂肪酸为亚油酸和亚麻酸按质量比为1:1的混合。

优选地，所述类氨基酸为肉碱。

优选地，所述解毒剂为谷胱甘肽。

优选地，所述细胞因子为肌醇。

优选地，所述辅酶为硫辛酸。

上述组合物在化妆品中和/或医用产品中的应用。

优选地，所述化妆品包括洁面乳、化妆水、喷雾、精华液、面膜、凝胶、美容冻干粉、溶媒、乳液和膏霜，所述医用产品包括医用冻干粉、溶媒、敷料、软膏和冷敷贴。

随着社会经济的发展，不少国家已经步入老龄化社会，因此抗衰老产品备受重视,抗衰老是女性最关心和最热门的美容服务项目，皮肤位于体表，是机体衰老过程中最显著的器官之一。

本发明针对皮肤衰老的机理，采用技术靶向定位，开发多潜能细胞培养组合物，并对多潜能细胞培养组合物的抗衰老功效进行评价。

衰老是随着时间的推移所有个体将发生的功能和器质性衰退的渐进过程。而真皮结构改变是皮肤老化的主要原因。在皮肤衰老的内原性和外源性因素的共同作用下，合成纤维细胞数量逐渐减少，合成胶原蛋白，弹性蛋白能力下降，细胞外间质中氨基多糖含量下降，同时蛋白水解酶增加，使胶原及细胞外基质成分降解增多，真皮乳头的弹力纤维网消失，弹性纤维降解变性、变细甚至片段化，从而导致皮肤松弛，形成皱纹。

根据上述机理，本发明的组合物从以下途径来延缓皮肤衰老，改善皮肤松弛状态，紧致肌肤，改善肌肤纹理，减少皱纹的长度和深度。

首先，增强细胞的增殖、代谢能力。衰老的实质是组织细胞功能的衰退。因此，促进细胞的活性即增殖代谢能力，从而延缓皮肤衰老是关键的根本对策。本发明从皮肤的必须和非必须氨基酸角度出发，采用三种复合氨基酸进行复配，通过三种氨基酸的复配作用促进表皮细胞的转换增殖能力。

其次，重建皮肤的细胞外基质。皮肤组织的细胞外间质，主要是胶原蛋白，弹性蛋白，粘多糖以及结构糖蛋白等结缔组织，也包括类脂质及某些天然保湿因子，他们维持着皮肤的屏障功能与水合作用。皮肤中细胞外基质在含量与质量上，随着皮肤衰老时的种种变化而改变，是皮肤衰老的重要特征之一。因此，重建细胞外基质结构，使其在质和量两个方面都趋向年轻时的构成，也是皮肤延缓衰老的对策之一。抗衰老要从表皮到真皮增强弹力，弹力是体现肌肤年龄的一大要素，紧致而有弹力的肌肤能使人看上去年轻很多岁。弹力的缺乏主要原因是固定蛋白质的合成减少与胶原蛋白纤维的流失，导致真皮与表皮交界处的倒塌，细纹便生成。氨基酸实际上被称为化学单位，它们构成蛋白质。蛋白质提供给所有生命的物体以结构。总共有20种不同的氨基酸构成蛋白，氨基酸占人体大约75％，它们对几乎每个身体机能都是必不可少的。本发明采用的三种氨基酸复合物，加入了相同或相似的组成角质层的组分，以达到保持皮肤水分，提供细胞营养，使皮肤纤维母细胞增殖并预防衰老的目的。本发明采用的氨基酸均起保湿作用，其中，甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸是胶原蛋白和弹性蛋白的组成成分；丝氨酸、天冬氨酸是组成皮肤细胞的必须氨基酸，对皮肤细胞的增殖和激活起重要作用；盐酸半胱氨酸可以去除雀斑；苯丙氨酸、色氨酸、盐酸组氨酸起防护紫外线的作用；谷氨酸对谷胱甘肽的合成有促进作用；烟酰胺、谷氨酰胺可以增强皮肤的免疫能力。由于氨基酸分子量小，所以它们能轻易渗透入皮肤，大部分能够通过皮脂腺和卵泡进入皮肤。氨基酸是胶原蛋白合成的重要活性之一，蛋白质占有我们体重16～20％，而胶原蛋白占蛋白质的三之分一，氨基酸中的甘氨酸，脯氨酸，丙氨酸是胶原蛋白的合成原料，保持皮肤弹性。蛋白质是生长，发育，保养和修理人体内所有细胞组织的基本物质，并可产生激素，酶，抗体和神经递质，氨基酸是组成这些蛋白质的最基本成分。氨基酸，作为皮肤和人体能量供应的一种来源，供给营养素给每个细胞来增殖纤维母细胞，促进皮肤中胶原蛋白和弹性蛋白的合成，来提供抗衰老的功效。

第三，抗表情纹。人面部前额，眼睛，眼眶周围和嘴唇处的皱纹是衰老的证据，这也是皮肤紧致抗衰老的主要问题。这些细纹会在30岁左右出现，主要基于位置压力和反复的面部运动导致。而肽类是人体重要生理调节物，可全面调节人体生理功能，激发细胞与胶原蛋白新生，有效抗击衰老。本发明采用的谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成的三肽，能够帮助人体保持正常的免疫功能，并具有抗氧化及整合解毒作用，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品中广泛应用。本发明的谷胱甘肽在其它组分的协同作用下，吸收率增加，能够被皮肤直接快速吸收，可以有效渗入皮肤表皮层、真皮层和皮下组织，疗效显著，可以改善肌肤暗沉、暗黄、黄褐斑、晒斑等问题，使皮肤白皙细腻，并能增强机体免疫能力。

第四，抗自由基。对抗离子和低能辐射产生的活性氧自由基对皮肤脂质、蛋白质，生物膜的损害作用。目前对抗和消除自由基，防止自由基的损伤作用，往往通过抗氧化剂得以实现。氧化是对肌肤最大威胁，饮食不健康，日晒，压力，环境污染等都能让肌肤自由基泛滥，从而产生面色氨氮，缺水等氧化现象。对于化妆品而言，抗氧化剂分为物理抗氧化剂和活性抗氧化剂。前者主要用于稳定产品基质，后者负责在化妆品中发挥作用功效。本发明采用了生育酚，它产生于人类的皮脂腺，是皮肤内发现的含量最为丰富的抗氧化剂。当皮肤的生育酚含量减少时，皮脂腺内分泌α-生育酚以及β-生育酚便会通过皮脂传递到皮肤的表面，作为第一道防线抵御外环境压力。当皮脂腺分泌量低于皮肤的消耗量时，皮肤便出现一系列的氧化损害。皮脂腺和皮脂在产生和运输生育酚过程中发挥作用或许可以解释油性皮肤比干性皮肤老得慢的现象。生育酚可以渗透皮肤并不断累积，使得皮肤变得平滑柔嫩，延缓衰老，抑制日晒红斑，减少皱纹，润肤消炎等功效，是延缓衰老的良好活性物质。

第四是细胞修复。真皮层胶原蛋白减少，皮肤弹性就会下降，产生皱纹。因此促进胶原蛋白生长也能缓解皮肤衰老。本发明采用视黄醇乙酸酯进行抗衰修复，皮肤内维生素A最广泛存在形式是视黄醇，它可以通过皮肤吸收，有助于减少细纹和皱纹，保持皮肤柔软和丰满，改进皮肤作为水的阻隔层的功能，还可以增加皮肤弹性，改善肤色和皮肤纹理。在年龄增长过程中，皮肤内胶原蛋白的结构由螺旋形成可溶胶原蛋白逐渐转变成相互交织的不可溶胶原蛋白，同时成纤维细胞的合成能力下降，使皮肤出现干燥，失去柔性，弹性降低的现象。本发明的组合物能被皮肤吸收并填充在皮肤基质之间，从而使皮肤丰满，皱纹得到舒展，同时胶原蛋白还能提高皮肤密度，增加皮肤弹性，刺激皮肤微循环和促进皮肤新陈代谢，使皮肤光滑，亮泽，皱纹减少。

超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，简称SOD)是一类广泛存在于生物体内的金属酶，是催化超氧阴离子自由基歧化反应的酶类，是超氧阴离子自由基的清除剂，也是一种具有重要临床应用价值的药用酶，它能治疗被超氧阴离子自由基伤害的有关疾病。临床上用于治疗氧自由基诱发的肿瘤，炎症，缺血-再灌注损伤，氧中毒、帕金斯综合症，老年痴呆症，类风湿关节炎、衰老、多种皮肤病等。天然的SOD存在着半衰期短、稳定性较差、长期存放失活、遇热失活、具有免疫原性等问题。上述问题国内外均主要通过对SOD进行化学修饰解决。主要修饰剂为聚乙二醇、多糖类物质、小分子脂肪酸等，但大分子修饰的SOD不易透过皮肤与细胞膜。本发明中，SOD在其它试剂的协同作用下解决了这一问题。

本发明公开了一种多潜能细胞培养复合物及其皮肤细胞和皮肤干细胞修复更新作用与美容应用。多潜能细胞培养复合物，系对各种细胞培养基进行优化，保持了其在体外对成体细胞和干细胞的营养、分裂和增殖的能力，同时又适合功能护肤品的配方特性，应用于皮肤医学和皮肤美容上，易于被皮肤吸收，作用于皮肤细胞和皮肤干细胞，提供细胞生长的环境，给予其生长修复所必需的条件，具有促进皮肤细胞修复更新和改善皮肤新陈代谢的作用，从而从根本上产生皮肤的新生和修复等美容功效，使皮肤保持年轻、美丽、健康的状态。

本发明的有益效果

1、本发明的多潜能细胞培养组合物，易被皮肤吸收，作用于皮肤细胞和干细胞之后，可以为细胞生长提供模拟的环境，给予细胞生长所需的营养，对皮肤细胞的修复更新具有促进作用，适合用作功能护肤品；

2、本发明的多潜能细胞培养组合物，对保持人体皮肤的年轻健康状态效果显著。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例，并结合实施例对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。

实施例1

本例提供了一种多潜能细胞培养组合物，包括以下重量份计的原料：

氯化钠6500份，葡萄糖2500份，氯化钾300份，氯化钙100份，磷酸氢二钠100份，硫酸镁40份，氯化镁20份，泛酸钙1份，硫酸锌0.1份，超氧化物歧化酶20份，硫酸铜0.001份，氢离子缓冲剂3000份，营养强化剂1500份，pH缓冲剂1000份，维生素2000份，脂肪酸4000份，类氨基酸20份，解毒剂10份，细胞因子10份，第一复合氨基酸500份，第二复合氨基酸100份，第三复合氨基酸10份。

其中，氢离子缓冲剂为羟乙基哌嗪乙烷磺酸，营养强化剂为生育酚乙酸酯，pH缓冲剂为碳酸氢钠和/或丙酮酸钠，维生素为生育酚、视黄醇乙酸酯、生物素、盐酸吡哆素和核黄素按质量比为100：10：0.1：0.1：0.01，维生素还包括质量比为1:1的叶酸和盐酸硫胺素。脂肪酸为亚油酸和亚麻酸按质量比为1:1的混合，类氨基酸为肉碱，解毒剂为谷胱甘肽，细胞因子为肌醇，辅酶为硫辛酸。

第一复合氨基酸包括谷氨酰胺、盐酸精氨酸、盐酸赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸和缬氨酸。

第二复合氨基酸包括苯丙氨酸、盐酸组氨酸、丝氨酸、乙醇胺、甘氨酸、盐酸半胱氨酸、脯氨酸和蛋氨酸。

第三复合氨基酸包括色氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸和烟酰胺。

实施例2

本例提供了一种多潜能细胞培养组合物，包括以下重量份计的原料：

氯化钠7500份，葡萄糖3500份，氯化钾350份，氯化钙150份，磷酸氢二钠150份，硫酸镁60份，氯化镁35份，泛酸钙5份，硫酸锌1份，超氧化物歧化酶80份，硫酸铜0.01份，氢离子缓冲剂4000份，营养强化剂2500份，pH缓冲剂1500份，维生素2500份，脂肪酸5000份，类氨基酸50份，解毒剂30份，细胞因子20份，第一复合氨基酸1000份，第二复合氨基酸300份，第三复合氨基酸50份。

其中，氢离子缓冲剂为羟乙基哌嗪乙烷磺酸，营养强化剂为生育酚乙酸酯，pH缓冲剂为碳酸氢钠和/或丙酮酸钠，维生素为生育酚、视黄醇乙酸酯、生物素、盐酸吡哆素和核黄素按质量比300：30：0.1：0.1：0.01，维生素还包括质量比为1:1的叶酸和盐酸硫胺素。脂肪酸为亚油酸和亚麻酸按质量比为1:1的混合，类氨基酸为肉碱，解毒剂为谷胱甘肽，细胞因子为肌醇，辅酶为硫辛酸。

第一复合氨基酸包括谷氨酰胺、盐酸精氨酸、盐酸赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸和缬氨酸。

第二复合氨基酸包括苯丙氨酸、盐酸组氨酸、丝氨酸、乙醇胺、甘氨酸、盐酸半胱氨酸、脯氨酸和蛋氨酸。

第三复合氨基酸包括色氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸和烟酰胺。

实施例3

本例提供了一种多潜能细胞培养组合物，包括以下重量份计的原料：

氯化钠7000份，葡萄糖3000份，氯化钾325份，氯化钙125份，磷酸氢二钠125份，硫酸镁50份，氯化镁25份，泛酸钙3份，硫酸锌0.5份，超氧化物歧化酶50份，硫酸铜0.005份，氢离子缓冲剂3500份，营养强化剂2000份，pH缓冲剂1300份，维生素2200份，脂肪酸4500份，类氨基酸35份，解毒剂20份，细胞因子15份，第一复合氨基酸750份，第二复合氨基酸200份，第三复合氨基酸30份。

其中，氢离子缓冲剂为羟乙基哌嗪乙烷磺酸，营养强化剂为生育酚乙酸酯，pH缓冲剂为碳酸氢钠和/或丙酮酸钠，维生素为生育酚、视黄醇乙酸酯、生物素、盐酸吡哆素和核黄素按质量比为200：20：0.1：0.1：0.01，维生素还包括质量比为1:1的叶酸和盐酸硫胺素。脂肪酸为亚油酸和亚麻酸按质量比为1:1的混合，类氨基酸为肉碱，解毒剂为谷胱甘肽，细胞因子为肌醇，辅酶为硫辛酸。

第一复合氨基酸包括谷氨酰胺、盐酸精氨酸、盐酸赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸和缬氨酸。

第二复合氨基酸包括苯丙氨酸、盐酸组氨酸、丝氨酸、乙醇胺、甘氨酸、盐酸半胱氨酸、脯氨酸和蛋氨酸。

第三复合氨基酸包括色氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸和烟酰胺。

对比例1

本例提供了一种多潜能细胞培养组合物，包括以下重量份计的原料：

氯化钠6500份，葡萄糖2500份，氯化钾300份，氯化钙100份，磷酸氢二钠100份，硫酸镁40份，氯化镁20份，泛酸钙1份，硫酸锌0.1份，超氧化物歧化酶20份，硫酸铜0.001份，氢离子缓冲剂3000份，营养强化剂1500份，pH缓冲剂1000份，维生素2000份，脂肪酸4000份，类氨基酸20份，解毒剂10份，细胞因子10份，第二复合氨基酸100份，第三复合氨基酸10份。本例中不含第一复合氨基酸。

其中，氢离子缓冲剂为羟乙基哌嗪乙烷磺酸，营养强化剂为生育酚乙酸酯，pH缓冲剂为碳酸氢钠和/或丙酮酸钠，维生素为生育酚、视黄醇乙酸酯、生物素、盐酸吡哆素和核黄素按质量比100：10：0.1：0.1：0.01，维生素还包括质量比为1:1的叶酸和盐酸硫胺素。脂肪酸为亚油酸和亚麻酸按质量比为1:1的混合，类氨基酸为肉碱，解毒剂为谷胱甘肽，细胞因子为肌醇，辅酶为硫辛酸。

第二复合氨基酸包括苯丙氨酸、盐酸组氨酸、丝氨酸、乙醇胺、甘氨酸、盐酸半胱氨酸、脯氨酸和蛋氨酸。

第三复合氨基酸包括色氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸和烟酰胺。

对比例2

本例提供了一种多潜能细胞培养组合物，包括以下重量份计的原料：

氯化钠7500份，葡萄糖3500份，氯化钾350份，氯化钙150份，磷酸氢二钠150份，硫酸镁60份，氯化镁35份，泛酸钙5份，硫酸锌1份，超氧化物歧化酶80份，硫酸铜0.01份，氢离子缓冲剂4000份，营养强化剂2500份，pH缓冲剂1500份，维生素2500份，脂肪酸5000份，类氨基酸50份，解毒剂30份，细胞因子20份，第一复合氨基酸1000份，第三复合氨基酸50份。

其中，氢离子缓冲剂为羟乙基哌嗪乙烷磺酸，营养强化剂为生育酚乙酸酯，pH缓冲剂为碳酸氢钠和/或丙酮酸钠，维生素为生育酚、视黄醇乙酸酯、生物素、盐酸吡哆素和核黄素按质量比为300：30：0.1：0.1：0.01，维生素还包括质量比为1:1的叶酸和盐酸硫胺素。脂肪酸为亚油酸和亚麻酸按质量比为1:1的混合，类氨基酸为肉碱，解毒剂为谷胱甘肽，细胞因子为肌醇，辅酶为硫辛酸。本例不含第二复合氨基酸。

第一复合氨基酸包括谷氨酰胺、盐酸精氨酸、盐酸赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸和缬氨酸。

第三复合氨基酸包括色氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸和烟酰胺。

对比例3

本例提供了一种多潜能细胞培养组合物，包括以下重量份计的原料：

氯化钠7000份，葡萄糖3000份，氯化钾325份，氯化钙125份，磷酸氢二钠125份，硫酸镁50份，氯化镁25份，泛酸钙3份，硫酸锌0.5份，超氧化物歧化酶50份，硫酸铜0.005份，氢离子缓冲剂3500份，营养强化剂2000份，pH缓冲剂1300份，维生素2200份，脂肪酸4500份，类氨基酸35份，解毒剂20份，细胞因子15份，第一复合氨基酸750份，第二复合氨基酸200份。

其中，氢离子缓冲剂为羟乙基哌嗪乙烷磺酸，营养强化剂为生育酚乙酸酯，pH缓冲剂为碳酸氢钠和/或丙酮酸钠，维生素为生育酚、视黄醇乙酸酯、生物素、盐酸吡哆素和核黄素按质量比为200：20：0.1：0.1：0.01，维生素还包括质量比为1:1的叶酸和盐酸硫胺素。脂肪酸为亚油酸和亚麻酸按质量比为1:1的混合，类氨基酸为肉碱，解毒剂为谷胱甘肽，细胞因子为肌醇，辅酶为硫辛酸。

第一复合氨基酸包括谷氨酰胺、盐酸精氨酸、盐酸赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸和缬氨酸。

第二复合氨基酸包括苯丙氨酸、盐酸组氨酸、丝氨酸、乙醇胺、甘氨酸、盐酸半胱氨酸、脯氨酸和蛋氨酸。

本例不含第三复合氨基酸。

实施例4

本例提供了多潜能细胞培养组合物的制备方法，具体为：按配比称取各原料，混匀。

检测例

本例提供了一种含有多潜能细胞培养组合物的化妆水，具体为将实施例3和对比例1～3配方的组合物，根据实施例4的方法制备好以后，分别直接加入到常见市售化妆水中，制备得到四种对应编号的化妆水。

(1)皮肤弹性测试

本测试方法根据标准方法采用德国Courage+Khazaka公司(德国CK公司)制造的弹性探头PVM600与MPA主机连接，并配合CutometerQ分析软件使用。

测试原理是基于吸力和拉伸原理，在被测试的皮肤表面产生一个负压将皮肤吸进一个特定测试探头内，皮肤被吸进测试探头内的深度是通过一个非接触式的光学测试系统测得的。测试探头内包括光的发射器和接收器，光的比率(发射光和接收光之比)同被吸入皮肤的深度成正比，这样就得到了一条皮肤被拉伸的长度和时间的关系曲线，然后通过MPA软件分析来确定皮肤的弹性性能。

皮肤弹性测试探头技术参数指标：

主机外形尺寸：27*25.5*7cm，探头：2*10cm；

探头测试孔直径：2mm；

压力：(20～500)mbar；

测试时间：(0.1～60)s；

精度：穿透深度在100um以上约3％，100um以下无线性；

电源：100～240V/50-60Hz/0.3A；

接口：USB；

测试负压模式：持续负压模式；

曲线显示方式：拉伸长度-时间表；

皮肤弹性测试模式-保持恒定的负压；

测试模式：1；

负压：450mbar；

On-time：2.0s；

Off-time：2.0s；

循环次数：10；

预备时间：5.0s。

皮肤弹性测试方法：打开Cutometer Q软件，点击工具栏Measurement或者直接点击右上角Measurement按钮，待泵启动结束后，把探头盖取下，点击OK，在30秒的倒数时间内把探头垂直轻轻接触待测试皮肤区域(皮肤表面应作清洁，如涂抹产品，因待产品吸收完毕后再测，以免污染探头孔)，以探头顶端弹簧全部缩进为宜，开始测试，直至测试循环时间结束后方可把探头挪开，并盖上探头盖。在手臂上腕部区域划出2.5*2.5cm的区域内取3点测试，最后核算取皮肤弹性的平均值，同时根据测得数据可以得到皮肤的抗疲劳程度值。之后在该区域用面膜布覆盖后，往膜布中注入0.5ml的待测样，敷20分钟之后除去面膜布，等5分钟之后洗去化妆水，皮肤干燥之后测试该区域的皮肤弹性值(如表1所示)和皮肤的抗疲劳程度值(如表2所示)，对照组为某款市售化妆水。

表1皮肤弹性增长(％)

时间/min	实施例3	对比例1	对比例2	对比例3	空白	对照样
							0	0	0	0	0	0	0
30	16.17	12.16	13.540	10.87	1.23	2.35
							60	19.52	15.64	15.49	12.99	1.2	3.25
120	21.59	17.84	17.65	14.88	1.15	3.83
							180	24.13	19.78	20.61	16.57	1.1	4.21

表2皮肤抗疲劳程度增长

时间/min	实施例3	对比例1	对比例2	对比例3	空白	对照样
							0	0	0	0	0	0	0
30	21.35	16.52	13.47	12.98	0.54	1.36
							60	22.57	17.32	14.51	14.93	0.6	1.32
120	24.01	19.06	15.21	16.41	0.6	1.35
							180	24.96	20.02	16.08	17.04	0.6	1.34

由表1和表2可知，通过随时间变化，相对于空白样和对照样，皮肤的弹性和皮肤的抗疲劳程度经本发明组合物处理后明显提升，在连续长时间的测量时效果更好，本发明的组合物对皮肤的弹性和抗疲劳度具有明显的改善效果。而对比例1～3的皮肤弹性增长和抗疲劳程度均较实施例3差，说明三种复合氨基酸的协同作用效果明显。

(2)羟自由基清除测定

皮肤老化是极其复杂的过程，即是内源性的机体衰老的一部分，又受外源性的光热辐射、生活方式、饮食、情绪、激素水平等多重因素的影响。皮肤老化过程中，由活性氧造成的损伤，在皮肤老化中起着重要作用。当皮肤直接暴露于阳光、宇宙射线、空气及物理化学性污染物种时，就会使皮肤产生自由基，加速皮肤老化。本例测试了四种对应编号的化妆水清除羟自由基的效果。

原理：邻二氮菲可与Fe²⁺形成络合物，该络合物在510nm处有最大吸收峰，是一常用的氧化还原指示剂，其颜色变化可敏锐地反映溶液氧化还原状态的改变。H₂O₂/Fe²⁺体系可通过Fenton反应产生羟自由基，邻二氮菲－Fe²⁺水溶液被羟自由基氧化为邻二氮菲－Fe³⁺后，其在510nm处的最大吸收峰消失。如果反应体系中同时存在羟自由基清除剂，则Fenton反应产生的羟自由基将被此清除剂全部或部分清除，邻二氮菲－Fe²⁺络合物受到的破坏将会随之减少。根据这一原理，可建立以A510变化反映自由基清除剂对羟自由基清除作用的比色测定法。

操作步骤：10mL反应体系中，依次加入5mmol/L邻二氮菲1.5mL，0.5mol/L的pH7.4磷酸盐缓冲液3.0mL，7.5mmol/L的FeSO₄ 1.0mL，立即混匀。再加入待测样品3.0mL，0.1％H₂O₂ 1.0mL，用蒸馏水定容至10mL。混匀后，于37℃恒温水浴60min，然后在510nm波长下测其吸光度值。每一样品一式三份，取平均值。

计算方法：羟自由基清除率(％)＝[(A_s-A₀)/(A₁-A₀)]×100

其中，A_s为加了待测样品和H₂O₂所测得的吸光度值，A₁为没有加待测样品和H₂O₂所测得的吸光度值，A₀为没有加样品、加了H₂O₂所测得的吸光度值。

结果：参见表3。

表3对羟自由基的清除率(％)

编号	实施例3	对比例1	对比例2	对比例3	对照样
						清除率	97.6％	65.3％	51.4％	77.6％	33.8％

从表3，可以看出不含本发明组合物的试验组对羟自由基的清除率极低，并且对比例1～3的对羟自由基的清除率低于实施例3，说明三种复合氨基酸的协同作用提升了对羟自由基的清除率。

Claims (10)

1.多潜能细胞培养组合物，其特征在于，包括以下重量份计的原料：

氯化钠6500～7500份，

葡萄糖2500～3500份，

氯化钾300～350份，

氯化钙100～150份，

磷酸氢二钠100～150份，

硫酸镁40～60份，

氯化镁20～35份，

泛酸钙1～5份，

硫酸锌0.1～1份，

硫酸铜0.001～0.01份，

超氧化物歧化酶20～80份，

氢离子缓冲剂3000～4000份，

营养强化剂1500～2500份，

pH缓冲剂1000～1500份，

维生素2000～2500份，

脂肪酸4000～5000份，

类氨基酸20～50份，

解毒剂10～30份，

细胞因子10～20份，

第一复合氨基酸500～1000份，

第二复合氨基酸100～300份，

第三复合氨基酸10～50份。

2.根据权利要求1所述的多潜能细胞培养组合物，其特征在于，所述pH缓冲剂为碳酸氢钠和/或丙酮酸钠。

3.根据权利要求1所述的多潜能细胞培养组合物，其特征在于，所述维生素为生育酚、视黄醇乙酸酯、生物素、盐酸吡哆素和核黄素按质量比为(100～300)：(10～30)：0.1：0.1：0.01的混合。

4.根据权利要求3所述的多潜能细胞培养组合物，其特征在于，所述维生素还包括质量比为1:1的叶酸和盐酸硫胺素。

5.根据权利要求1所述的多潜能细胞培养组合物，其特征在于，所述第一复合氨基酸包括谷氨酰胺、盐酸精氨酸、盐酸赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸和缬氨酸。

6.根据权利要求1所述的多潜能细胞培养组合物，其特征在于，所述第二复合氨基酸包括苯丙氨酸、盐酸组氨酸、丝氨酸、乙醇胺、甘氨酸、盐酸半胱氨酸、脯氨酸和蛋氨酸。

7.根据权利要求1所述的多潜能细胞培养组合物，其特征在于，所述第三复合氨基酸包括色氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸和烟酰胺。

8.根据权利要求1～7任一项所述多潜能细胞培养组合物的制备方法，其特征在于，所述方法为：按配比称取各原料，混匀。

9.根据权利要求1～7任一项所述多潜能细胞培养组合物或权利要求8所述方法制备的组合物在化妆品中和/或医用产品中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述化妆品包括洁面乳、化妆水、喷雾、精华液、面膜、凝胶、美容冻干粉、溶媒、乳液和膏霜，所述医用产品包括医用冻干粉、溶媒、敷料、软膏和冷敷贴。