CN109790213B - 用于鉴定lilrb阻断抗体的方法 - Google Patents

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Abstract

本申请提供了用于鉴定ApoE诱导的LILRB激活的调节剂的方法和组合物。本申请还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括施用ApoE诱导的LILRB激活的抑制剂。还提供了治疗自身免疫性疾病或抑制移植排斥出现或治疗炎性病症的方法，所述方法包括向对象施用ApoE诱导的LILRB激活的激动剂。

Description

用于鉴定LILRB阻断抗体的方法
本发明是在由美国国立卫生研究院提供的基金号1R01 CA172268的政府支持下进行的。政府享有本发明的某些权益。
本申请要求2016年07月29日提交的美国临时申请系列号62/368,672的优先权，其全部内容通过引用并入本申请。
序列表包含在名称为“UTFHP0332WO_ST25.txt”的文件中，其为176KB(在Microsoft Windows中测量的)，在2017年07月27日创建，该文件通过电子方式随本申请提交，并通过引用并入本申请。
背景技术
1.技术领域
本公开内容一般地涉及分子生物学领域。更具体地，其涉及用于鉴定LILRB抗体的方法和组合物。
2.相关技术的描述
急性髓性白血病(AML)是最常见的成人急性白血病和常见的儿科癌症。目前对AML的治疗涉及强化细胞毒性化疗，通常随后进行清髓性预处理和干细胞移植。然而，尽管进行了治疗，但是大部分患者将在5年内复发或死于疾病1。已有超过30年的时间没有批准针对AML的新疗法。为了有效治疗AML，必须鉴定新的分子靶点和治疗方法。最近，已经发现抑制性白细胞免疫球蛋白样受体(LILRB)和含有相关的基于免疫受体酪氨酸的抑制性基序(ITIM)的受体LAIR1在多种造血和实体癌细胞中具有肿瘤促进功能2,3,4-18,19。含有ITIM的受体在多种免疫细胞中表达并且通过募集磷酸酶SHP-1、SHP-2或SHIP传导信号，导致对免疫细胞激活产生负向调控20,21,22。与CTLA4和PD-1类似23，认为LILRB是免疫检验点因子22。
LILRB可以抑制促进肿瘤免疫逃逸的多种免疫细胞类型的活性22。LILRB4在单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞上表达，可以以细胞自主方式抑制先天免疫，并通过间接机制抑制T细胞活化24,25。LILRB4是包括难治性和复发性疾病在内的单核细胞AML的特异性标记物26。LILRB1-5是灵长类和人特异性的，但是有两个小鼠的直系同源物：配对免疫球蛋白样受体B(PirB)27和gp49B128。含有相关的基于免疫受体酪氨酸的抑制性基序(ITIM)的受体LAIR1具有人和小鼠版本的蛋白。由于小鼠模型的价值有限并且针对包括LILRB4在内的若干LILRB的配体仍是未知的，因而对这些受体的生物学功能和临床意义仍知之甚少。
发明内容
本公开内容的实施方式提供了涉及通过其配体调控LILRB激活的方法和组合物。在第一个实施方式中，提供了一种鉴定LILRB激活的调节剂的方法，所述方法包括：(a)将报告细胞与LILRB的配体和候选物质接触；和(b)在所述报告细胞中检测LILRB激活的水平，其中与参照水平相比LILRB激活的水平的变化表明所述候选物质是LILRB激活的调节剂。在某些方面中，所述报告细胞是小鼠T-细胞杂交瘤细胞。
在一些方面中，所述报告细胞表达包含LILRB的胞外域的受体。在某些方面中，所述LILRB的胞外域被进一步定义为LILRB1、LILRB2、LILRB3、LILRB4、LILRB5、LAIR1(人或小鼠)、PirB或gp49B1的胞外域。在特定的方面中，所述LILRB被进一步定义为LILRB4。在某些方面中，LILRB4的配体是ApoE或LFA-1。在某些方面中，LILRB的配体是MHC I、UL18、S100A8、S100A9、Angptls、β-淀粉样蛋白、髓鞘抑制剂、CD1d、胶原或整合素αvβ3。在其他方面中，受体是包含配对免疫球蛋白样受体β(PILRβ)的胞内域的嵌合受体。
在某些方面中，所述嵌合受体通过病毒表达载体在报告细胞中表达。在一些方面中，病毒表达载体是逆转录病毒表达载体。在特定的方面中，基于细胞的形态或迁移率对LILRB激活的水平进行检测。在某些方面中，报告细胞还包含报告基因，所述报告基因编码可检测标记并与由所述受体的激活所调控的启动子可操作地连接。在特定的方面中，启动子是活化T细胞核因子(NFAT)启动子。在特定的方面中，启动子是CCL2启动子、CCL4启动子、CCL5启动子、IL-6R启动子、IL-8启动子、gp130启动子、OSM启动子、TIMP-1/2启动子、TNF-R1/II启动子、uPAR启动子或精氨酸酶-1启动子。
在一些方面中，可检测标记是比色标记、荧光标记、生物发光标记或化学发光标记。在某些方面中，可检测标记是GFP、YFP、RFP或D-萤光素。在特定的方面中，可检测标记是GFP。在一些方面中，检测步骤包括流式细胞术分析或发光定量。
在某些方面中，候选化合物是抗体。在一些方面中，抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、、CDR移植抗体、人源化抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv或scFv。在特定的方面中，抗体是单克隆抗体。
在一些方面中，参照水平从仅与ApoE接触的报告细胞获得。在某些方面中，ApoE是重组的。在特定的方面中，ApoE是人ApoE。在一些方面中，人ApoE分离自血清。在某些方面中，将ApoE进一步定义为ApoE2、ApoE3或ApoE4。
在某些方面中，与参照水平相比，LILRB激活的水平增加表明所述调节剂是激动剂。在某些方面中，与参照水平相比，LILRB激活的水平降低表明所述调节剂是拮抗剂。
在某些方面中，候选物质与底物连接。在某些方面中，候选物质与表达FcR的细胞连接。
一个进一步的实施方式提供了一种用于鉴定LILRB激活的调剂剂的组合物。在一个方面中，所述组合物包含候选LILRB调节剂，LILRB的配体和表达受体的报告细胞，所述受体包含LILRB的胞外域，其中所述报告细胞具有提示LILRB激活的表型。在某些方面中，所述报告细胞还包含报告基因，所述报告基因编码可检测标记并与由所述受体的激活所调控的启动子可操作地连接。在一些方面中，所述受体还包含PILRβ的胞内域。在某些方面中，候选LILRB抑制剂是抗体。在一些方面中，可检测标记是GFP。在某些方面中，所述组合物还包含表达FcR的细胞。
一个进一步的实施方式提供了一种用于在不存在其已知配体的条件下鉴定LILRB激活的调节剂的组合物。在一个方面中，所述组合物包含候选LILRB调节剂和表达受体的报告细胞，所述受体包含LILRB的胞外域，其中所述报告细胞具有提示LILRB激活的表型。在某些方面中，所述报告细胞还包含报告基因，所述报告基因编码可检测标记并与由所述受体的激活所调控的启动子可操作地连接。在一些方面中，所述受体还包含PILRβ的胞内域。在某些方面中，所述候选LILRB抑制剂是抗体。在一些方面中，所述可检测标记是GFP。在某些方面中，所述组合物还包含表达FcR的细胞。
一个更进一步的实施方式提供了一种在对象中治疗癌症的方法，所述方法包括向对象施用有效量的ApoE-诱导的LILRB激活的抑制剂(例如，通过本申请所公开的实施方式鉴定的)。在一些方面中，ApoE-诱导的LILRB激活的抑制剂是抗体。在特定的方面中，癌症是AML。
一个更进一步的实施方式提供了一种在对象中治疗自身免疫性疾病或抑制移植排斥出现或治疗炎性病症的方法，所述方法包括向对象施用有效量的ApoE-诱导的LILRB激活的激动剂。
根据下述详细说明书，本公开内容的其他目的、特征和优点将变得显而易见。然而，应当理解的是，示出本公开内容的优选实施方式的详细说明书和特定实施例仅以说明的方式给出，因为在不脱离本公开内容的主旨和范围的前提下各种改变和修订对本领域技术人员而言将是从本详细说明书中显而易见的。
附图说明
下述附图构成了本说明书的一部分，并且包括其以进一步说明本公开内容的某些方面。通过参考这些附图中的一个或多个以及结合本申请中对特定实施方式的描述可以更好地理解本公开内容。
图1–LILRB4报告系统的示意图。
图2–LILRB及其配体的图。
图3–用于鉴定阻断ApoE诱导的LILRB4激活的抗体测定的图示。在左侧的报告细胞是GFP-阴性，表明抗体能够阻断ApoE与LILRB4结合，或者与ApoE竞争与LILRB4结合并阻断ApoE对GFP的诱导。在右侧，抗体与LILRB4的区域结合，但不阻断ApoE对GFP的诱导，导致产生GFP阳性的报告细胞。
图4–用于鉴定活化LILRB4的抗体测定的图示。在左侧，抗体能够与K562细胞上的FcR结合并且能够与报告细胞上的LILRB4结合。但是其不诱导GFP。在右侧，抗体能够以诱导GFP的方式与K562细胞上的FcR结合并与报告细胞上的LILRB4结合。结果表明右侧的抗体是活化抗体。
图5a-5b-TCGA数据库中的免疫调节分子与AML患者总体生存期之间相关性的分析。图5a：针对每个基因对患者生存曲线的个体分析；图5b：全部50个基因的p值总结。
图6–对来自TCGA数据库的mRNA表达数据的分析表明与其他亚型相比在M4和M5AML细胞中存在更高浓度的LILRB4mRNA。**，p<0.01，***，p<0.001。
图7a-7m–在白血病细胞上表达的LILRB4在体外直接抑制T细胞增殖。图7a：通过对来自UT Southwestern的105名患者的样品进行流式细胞术分析对LILRB4的表面表达进行定量。“其他”类别包括来自急性未分化细胞白血病(AUL)患者的细胞和肿瘤相关巨噬细胞。图7b-c：对分别来自健康供体(n＝25)和AML患者(n＝53)(图7b)，或者来自同一AML患者(n＝6)(如图7c中所示)的正常单核细胞和肿瘤性单核细胞上LILRB4的表面表达进行比较。MFI：平均荧光强度。图7d：在所示E:T比下，将从健康供体中分离的T细胞与经照射lilrb4-调节THP-1细胞共同孵育。在使用抗-CD3/CD28/CD137包被的小珠和rhIL-2培养5天后，使用倒置显微镜对代表性的细胞拍照。E细胞是效应细胞；T，THP-1细胞是靶细胞。图7e：使用抗-CD3抗体对总T细胞染色，并通过流式细胞术进行分析。图7f：利用流式细胞术使用抗-CD3、抗-CD8和抗-CD28抗体染色确定的CTL细胞百分率。图7g-h：在96孔transwell板的下室中孵育从健康供体中分离的T细胞。在上室中孵育经照射的所示THP-1细胞。Transwell膜的孔径为3μm。E:T＝2:1。在使用抗-CD3/CD28包被的小珠和rhIL-2培养7天后，使用倒置显微镜对代表性的细胞拍照(图7g)，以及使用抗-CD3、抗-CD4和抗-CD8抗体对T细胞染色并通过流式细胞术分析(图7h)。图7i：将通过抗-CD3/CD28/CD137包被的小珠刺激的CD8+T细胞与稳定表达GFP的THP-1细胞共培养，并使用抗-LILRB4抗体或对照IgG对其进行处理。GFP+细胞是THP-1白血病细胞，CD8+CD28+是活化的CTL，以及CD8+CD28-细胞是无活性的T细胞或抑制性T细胞。图7j-l：对所示细胞的定量表明抗-LILRB4抗体逆转LILRB4介导的由CD8+CD28+细胞上调导致的T细胞激活抑制，并导致LILRB4+AML细胞的杀伤。图7m：抗-LILRB4抗体增加CTL细胞因子产生。数字1～10分别表示加入GM-CSF、IFNγ、IL-13、IL-1β、IL-5、MCP-3、MCP-4、MIP-3α、RANTES和TNFβ的transwell板。红框表示抗-LILRB4抗体处理后导致的增加和绿框表示抗-LILRB4抗体处理后导致的减少；蓝框表示在细胞因子阵列中的内部对照。
图8–LILRB4在正常CD34+HSC上不表达。显示的是人脐血单核细胞(hCB MNC)的LILRB4和CD34共染色模式。N/G，中性粒细胞和粒细胞；M/D，单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞；L/P，淋巴细胞、造血干细胞和祖细胞。
图9a-9f–表达LILRB4的原代AML细胞抑制T细胞增殖。图9a-9b：将从个体AML(图9a)或B-ALL(图9b)患者分离的T细胞与来自同一患者的经辐射处理的lilrb4-阳性或阴性原代白血病细胞共同孵育。图9c-图9f：将从健康供体分离的T细胞与来自所示AML(图9c，图9e)或B-ALL(图9d，图9f)患者的经辐射处理的lilrb4-阳性或阴性原代白血病细胞共同孵育。E:T＝10:1。在使用抗-CD3/CD28/CD137包被的小珠和rhIL-2培养5天后，使用抗-CD3、抗-CD4和抗-CD8抗体对T细胞染色并通过流式细胞术分析
图10a-10c-抗-LILRB4抗体阻断人血清诱导的LILRB4激活。图10a：LILRB4受体系统的示意图。图10b：流式细胞术表明抗-LILRB4抗体与人LILRB4报告细胞结合。图10c：由10％人血清(HS)诱导的LILRB4激活被抗-LILRB4抗体抑制。将IgG作为对照。****，p<0.0001。
FIGS.11a-11b-抗-LILRB4抗体不影响THP-1细胞的增殖或者T细胞的细胞激活或增殖。图11a：在使用IgG或抗-LILRB4抗体处理7天后不改变THP-1细胞的生长。图11b：使用IgG或抗-LILRB4抗体在体外处理5天后不影响人原代CD8+细胞的激活状态。n.s.，不具有显著性。
图12a-12n-在白血病细胞上表达的LILRB4在体内抑制T细胞增殖。图12a：在hPBMC移植人源化NSG小鼠中，给予抗-LILRB4抗体抑制THP-1细胞的皮下植入。通过发光成像监测随着时间推移的白血病发展情况。图12b：在白血病细胞植入后第26天确定发光通量。图12c：在第26天时CD8+T细胞在抗-LILRB4-处理hPBMC-人源化NSG小鼠中增加。图12d：通过流式细胞术检测从来自使用原代单核细胞AML细胞注射的小鼠的所示器官收集的细胞的人CD45+LILRB4+细胞百分率，所述原代单核细胞AML细胞从使用对照mIgG或抗-LILRB4抗体(C84)注射后的不同患者获得。如表1中所示，AML#1～8分别来自患者#1402903、#1403615、#1403605、#1403986、#1500237、#1500245、#1500401和#1502990。图12e：通过流式细胞术考察原代人AML细胞在NSG小鼠骨髓中的移植(engraftment)。CD45+LILRB4+表示来自人类患者的AML白血病细胞；CD8+CD28+表示来自同一患者的活性肿瘤杀伤T细胞。图12f：将表达人LILRB4的小鼠AML C1498细胞(3x106个细胞/小鼠)皮下植入给予C57bl/6小鼠。在接种肿瘤细胞后第6、9、12、15、18和21天静脉注射给予抗-LILRB4-N297A抗体或对照IgG。每3天监测一次肿瘤尺寸。通过(宽x宽x长)计算肿瘤尺寸。n.s.，不具有显著性；*，p<0.05，**，p<0.01。图12g：在接种肿瘤细胞后27天测量肿瘤重量。图12h：给予抗-LILRB4-N297A抗体的小鼠显示出延长的小鼠生存期。图12i：通过流式细胞术确定宿主脾脏中CD3+CD8+T细胞的百分率，其与肿瘤尺寸负相关。图12j：将表达人LILRB4的小鼠AML C1498细胞(3x106个细胞/小鼠)皮下植入给予C57bl/6小鼠。在接种肿瘤细胞后3、6、9和12天给予所有小鼠抗-CD8抗体。在接种肿瘤细胞后6、9、12、15和18天静脉注射抗-LILRB4-N297A抗体或对照IgG。每3天监测一次肿瘤尺寸。通过(宽x宽x长)计算肿瘤尺寸。n.s.，不具有显著性。图12k：接种肿瘤细胞后18天测量肿瘤重量。图21：当CD8+T细胞耗竭时，使用抗-LILRB4-N297A抗体处理小鼠显示出对小鼠的存活期没有影响。图12m：通过流式细胞术确定的在宿主脾脏中CD3+CD8+T细胞的百分比与肿瘤尺寸没有相关性。图12n：将2x107个脾细胞转移至野生型C57bl/6小鼠(n＝5)中，所述脾细胞来自接种了过表达人LILRB4的C1498，然后使用抗-LILRB4-N297A抗体处理的小鼠。同时，将2x107个来自正常野生型C57bl/6小鼠的脾细胞转移至野生型C57bl/6小鼠(n＝5)中作为阴性对照。在过继移植一个月后，皮下植入给予每只小鼠1x106个C1498细胞。监测并通过(宽x宽x长)计算肿瘤尺寸。箭头表示在过继移植后已消除白血病的小鼠中使用3x106个C1498细胞皮下再攻击失败。
图13–抗-LILRB4抗体降低在宿主组织中存在的GFP+白血病细胞的百分率。将C57bl/6小鼠皮下植入表达人LILRb4且表达GFP的小鼠AML C1498细胞(3x106个细胞/小鼠)。在接种肿瘤细胞后6、9、12、15、18和21天静脉注射抗-LILRB4-N297A抗体或对照IgG。通过流式细胞术确定，抗-LILRB4抗体而非对照IgG降低在宿主骨髓、肝脏和脑中存在的GFP+白血病细胞的百分率。*，p<0.05，**，p<0.01。
图14a-14dd–LILRB4促进AML细胞迁移并支持白血病发展。图14a：lilrb4敲除减少穿过内皮细胞的THP-1细胞迁移。图14b：将2x106个lilrb4-敲除(KO)或加扰对照(WT)THP-1细胞注射至NSG小鼠(n＝5)中，然后在移植后20小时处死小鼠。将通过流式细胞术测得的在肝脏、脾脏和骨髓中的白血病细胞(GFP阳性)数归一化至在外周血中的相应细胞的数量。图14c：将1x106个lilrb4-敲除(KO)或加扰对照(WT)THP-1细胞注射至NSG小鼠(n＝5)中。在移植后第21天处死小鼠进行分析。将抗-人CD45用于通过流式细胞术检测THP-1细胞。图14d：还考察了这些小鼠的总体生存期和体重(图14e)。图14f：人LILRB4的强制表达促进了小鼠AML C1498细胞的迁移。图14g：将3x106个表达人lilrb4(GFP-hlilrb4)或对照(GFP)的C1498细胞注射至NSG小鼠(n＝5)中，然后在移植后20小时处死小鼠。将通过流式细胞术测得的在肝脏、脾脏和骨髓中的白血病细胞(GFP阳性)数归一化至在外周血中的相应细胞的数量。将通过流式细胞术测得的在肝脏、脾脏和骨髓中的白血病细胞(GFP阳性)数归一化至在外周血中的相应细胞的数量。图14h：将3x106个表达人lilrb4(GFP-hlilrb4)或对照(GFP)的C1498细胞注射至NSG小鼠(n＝5)。在移植后第16天处死小鼠进行分析。确定这些小鼠的总生存期图14i和图14j体重。图14k：抗-LILRB4抗体移植THP-1细胞的迁移。将IgG作为对照。图14l：将1x106个THP-1细胞注射至NSG小鼠，随后立即使用IgG或抗-LILRB4抗体处理，然后在移植后20小时处死小鼠(n＝5)。将通过流式细胞术测得的在肝脏、脾脏和骨髓中的白血病细胞(GFP阳性)数归一化至在外周血中的相应细胞的数量。图14m：将1x106个THP-1细胞注射至NSG小鼠，随后立即使用IgG或抗-LILRB4抗体处理。在移植后第21天处死小鼠进行分析。将抗-人CD45用于通过流式细胞术检测THP-1细胞。还考察这些小鼠的总生存期(图14n)和体重(图14o)。图14p：抗-LILRB4抗体抑制MV4-11细胞的迁移。将IgG作为对照。图14q：将5x106个CFSE-标记的MV4-11细胞注射至NSG小鼠(n＝5)，随后立即给予IgG或抗-LILRB4抗体，然后在移植后20小时处死小鼠。将通过流式细胞术测得的在肝脏、脾脏和骨髓中的白血病细胞(CFSE阳性)数归一化至在外周血中的相应细胞的数量。图14r：将1x106个MV4-11细胞注射至NSG小鼠(n＝5)，随后立即给予IgG或抗-LILRB4抗体。在移植后第21天处死小鼠进行分析。将抗-人CD45用于通过流式细胞术检测MV4-11细胞。还考察这些小鼠的总生存期(图14s)和体重(图14t)。图14u：通过整体动物生物发光成像检测THP-1白血病发展情况。给予小鼠对照IgG或抗-LILRB4抗体。图14v：在移植表达荧光素酶的THP-1 21天后，将代表性的小鼠处死用于内部器官的离体生物发光成像。1：GI道；2：腿；3：肺脏；4：脾脏；5：肝脏；6：肾脏；7：脑；8：心脏。图14w-图14z：将5x106个CFSE-标记的MV4-11细胞注射至NSG小鼠(n＝5)，这些小鼠经过预处理已经将先天免疫细胞耗竭，然后立即给予IgG或抗-LILRB4-N297A抗体，随后在移植后20小时处死小鼠。将通过流式细胞术测得的在肝脏、脾脏和骨髓中的白血病细胞(CFSE阳性)数归一化至在外周血中的相应细胞的数量。分别使用抗-asialo GM1抗体、氯膦酸盐脂质体和抗-Ly6G抗体对在(x)、(y)和(z)中的小鼠预处理。图14aa-图14dd：将1x106个lilrb4-修饰的THP-1细胞注射至NSG小鼠中，随后立即给予IgG或抗-LILRB4抗体，然后在移植后20小时处死小鼠(n＝5)。将通过流式细胞术测得的在肝脏、脾脏和骨髓中的白血病细胞(CFSE阳性)数归一化至在外周血中的相应细胞的数量。WT，野生型THP-1细胞，具有可诱导的Cas9和干扰gRNA表达；KO，lilrb4-敲除THP-1细胞，通过可诱导Cas9表达和干扰lilrb4特异性gRNA表达选择；KO-wt，在THP-1细胞中野生型lilrb4cDNAlilrb4-敲除过表达；KO-intΔ，在THP-1细胞中胞内域缺失lilrb4cDNA lilrb4敲除过表达。
图15-人LILRB4的强制表达促进了小鼠AML WEHI-3细胞的迁移。*，p<0.05。
图16a-16b-LILRB4表达的调节不影响AML细胞增殖。(图16a)通过敲除lilrb4不改变THP-1细胞的生长。WT，野生型THP-1细胞，具有可诱导的Cas9和干扰gRNA表达；KO，lilrb4-敲除THP-1细胞，通过可诱导Cas9表达和干扰lilrb4特异性gRNA表达选择。(图16b)通过强制表达人lilrb4不改变小鼠AML C1498细胞生长。n.s.，不具有显著性。
图17–抗-LILRB4抗体减少白血病细胞在肝脏中的侵袭。将表达人LILRB4并且表达GFP的小鼠AML C1498细胞(3x106个细胞/小鼠)皮下植入C57bl/6小鼠。接种肿瘤细胞后3、6、9和12天给予所有小鼠抗-CD8抗体。接种肿瘤细胞后6、9、12、15和18天静脉注射给予抗-LILRB4-N297A抗体或对照IgG。通过流式细胞术测得，抗-LILRB4抗体而非对照IgG降低宿主肝脏中GFP+白细胞的百分率。*，p<0.05。
图18–通过流式细胞术测得的在所示永生化人AML细胞上LILRB4的表达。将同种型IgG作为对照。
图19–抗-LILRB4抗体不作用于LILRB4阴性癌细胞。使用LILRB4-人AML U937细胞注射NSG小鼠，然后给予抗-LILRB4抗体。将IgG作为对照抗体。在移植后第25天处死小时，通过流式细胞术对肝脏(LV)、骨髓(BM)、脾脏(SP)和外周血(PB)进行分析。通过抗-人CD45抗体染色检测人AML细胞存在情况。n.s.，不具有显著性。
图20a-20b–抗-LILRB4抗体抑制人AML移植物。(图20a)在AML移植物中施用抗体的示意图。如箭头所示给予抗体(对照IgG或抗-LILRB4抗体)。(图20b)针对从所示天数开始每3天给予一次的抗体，通过流式细胞术确定在受体NSG小鼠(n＝6)肝脏(LV)、骨髓(BM)和脾脏(SP)中的人白血病(THP-1，CD45+)细胞百分率。(图20c-20d)在第0天、第0天+第3天、第0天+第3天+第6天给予抗体，其均类似地阻断由移植的THP-1细胞(图20c)和MV4-11细胞(图20d)引发的AML发展。
图21–抗-LILRB4抗体抑制人AML移植物。如所示的在第0天给予每种抗体20μg。通过整体动物生物发光成像监测THP-1白血病发展情况。
图22–抗-LILRB4抗体抗体抑制人AML移植物。如所示的在第0天、第3天或第6天给予每种抗体200μg。通过整体动物生物发光成像监测THP-1白血病发展情况。
图23a-c–代表性流式细胞术的图表明与未耗竭的(野生型)NSG小鼠相比，在各免疫细胞亚型耗竭的NSG小鼠中(图23a)NK细胞(CD45+CD49b+)、(图23b)巨噬细胞(CD11b+F4/80+)和(图23c)中性粒细胞(CD11b+CD11c-)的频率成功降低。
图24–人和小鼠整合素异二聚体蛋白不能活化LILRB4受体。将人和小鼠血清作为阳性对照。n.s.，不具有显著性。****，p<0.0001。
图25a-25l–APOE结合LILRB4并支持AML迁移。图25a：如对LILRB4报告系统中GFP+细胞百分率的分析所示，人血清和小鼠血清特异性活化LILRB4。图25b：在报告系统中重组APOE活化人LILRB4和小鼠PIRB。图25c：来自APOE-裸小鼠的血清不能活化LILRB4。图25d：在报告系统中脂质复溶的APOE(APOE-POPC)活化人LILRB4以及重组APOE。图25e：通过流式细胞术测得lilrb4-敲除THP-1细胞显示出降低的APOE结合。将使用抗-His标签-APC染色的细胞作为阴性对照。图25f：使用表面等离子体共振(SPR)测量人APOE-3与LILRB4-ECD-Fc的结合动力学。将LILRB4-ECD-Fc固化在蛋白A生物传感器尖端并使用浓度范围从1.5625nM至100nM的APOE-3孵育。图25g：通过在APOE的N末端突变降低了APOE对LILRB4的激活。图25h：通过LILRB4所示的单氨基酸突变降低了APOE对LILRB4的激活。图25i-图25l：APOE对LILRB4介导的归巢(homing)是必需的。人lilrb4在小鼠白血病C1498细胞上的强制表达增加了白血病细胞在野生型(WT)受体小鼠(n＝5)中的归巢(如图25i中所示)。然而，lilrb4的强制表达在APOE-裸(KO)受体小鼠(n＝5)中没有增加归巢作用(如图25j中所示)。与WT小鼠(n＝5)相比，在APOE-裸(KO)小鼠(n＝5)中表达人lilrb4的C1498细胞(l)而非对照表达GFP的C1498细胞(图25k)具有更低的归巢能力；在注射白血病细胞后20小时处死小鼠。将GFP用于通过流式细胞术检测白血病细胞。
图26a-26c–人血清中LILRB4潜在配体的鉴定。图26a：配体筛选的流程图。图26b：通过FPLC从人血清中分离LILRB4刺激活性。将10％人血清作为阳性对照。图26c：通过质谱(MS)从LILRB4刺激级分中鉴定的蛋白列表。PSM：肽匹配图谱。
图27–人和小鼠APOE蛋白均能够活化LILRB4受体。将人和小鼠血清作为阳性对照。n.s.，不具有显著性。****，p<0.0001。
图28a-28b–来自不同来源的APOE蛋白均活化LILRB4。图28a：从人血浆纯化的APOE(20μg/ml)，由293T哺乳动物细胞表达的His-标签或无标签重组人APOE(rhAPOE)(20μg/ml)或由细菌表达的rhAPOE(20μg/ml)均活化LILRB4受体。这些APOE均代表人APOE3。图28b：APOE2、APOE3和APOE4均活化LILRB4报告蛋白。在板上包被40μg/ml APOE或将其直接加入细胞培养基中(可溶的)。
图29a-29g–三种APOE同种型与人LILRB4结合。图29a-c：使用表面等离子体共振(SRP)测量APOE2、3和4与LILRB4-Fc的结合动力学。将LILRB4-Fc固化在蛋白A生物传感器尖端并使用浓度范围从1.5625nM至100nM的APOE孵育。APOE2、APOE3和APOE4与LILRB4结合的Kd分别为5.525nM、2.485nM和3.573nM。(图29d-f)使用生物层干涉法(Octet)测量APOE2、3和4与LILRB4-Fc的结合动力学。将LILRB4-Fc固化在蛋白A生物传感器尖端并使用浓度范围从44nM至1176nM的APOE孵育。APOE2、APOE3和APOE4与LILRB4结合的Kd分别为60.68nM、61.67nM和48.39nM。(图29g)使用微量热泳动(MST)测量APOE 3与His-LILRB4的结合动力学。APOE3与LILRB4结合的Kd为210nM。
图30a-30b–根据LILRB4和APOE已知的结构在可能的APOE结合界面上LILRB4突变残基的作用。图30a：基于LILRB4(PDBID:3P2T)和APOE3(PDBID:2L7B)的PDB结构，在四种可能的配体结合界面中用于诱变研究的残基以及所产生的一系列突变LILRB4报告细胞。图30b：分别位于第一Ig结构域中和两个Ig结构域之间的接头中的两个残基W106和Y121的突变显著降低由APOE导致的LILRB4激活。
图31a-31w–LILRB4介导的胞内信号传导控制AML细胞迁移和T细胞抑制。图31a：Western印迹表明在THP-1细胞中通过CRISP/Cas9将shp-1、shp-2和ship分别敲除。图31b-图31c：在96孔transwell板的下室中孵育从健康供体中分离的T细胞。在上室中孵育经照射的所示THP-1细胞。Transwell膜的孔径为3μm。E:T＝2:1。随后，使用抗-CD3/CD28-包被的小珠和rhIL-2培养7天。使用倒置显微镜对代表性的细胞拍照(图31b)，以及使用抗-CD3和抗-CD8抗体对T细胞染色并通过流式细胞术分析(图31c)。图31d-图31e：在移植瘤小鼠中敲除shp-2减少THP-1细胞迁移和减慢白血病进展。图31d：将2x106个shp-1-敲除(shp-1-KO)、shp-2-敲除(shp-2-KO)、ship-敲除(ship-KO)或加扰对照(WT)THP-1细胞注射至NSG小鼠(n＝5)中，然后在移植后20小时处死小鼠。将通过流式细胞术测得的在肝脏、脾脏和骨髓中的白血病细胞(GFP阳性)数归一化至在外周血中的相应细胞的数量。图31e：将1x106个所示THP-1细胞注射至NSG小鼠(n＝5)中。在移植后第21天处死小鼠进行分析。将抗-人CD45用于通过流式细胞术检测THP-1细胞。图31f：通过RNA-seq对lilrb4-敲除(lilrb4-KO)和加扰对照(WT)THP-1细胞进行了分析。Lilrb4的丧失诱导转录因子活性的改变(lilrb4-KO对比WT)。黄色的点突出了在JAK/STAT和NFkB通路中涉及的转录因子。图31g：Western印迹表明，与在加扰对照(WT)THP-1细胞中的情形相比，lilrb4-敲除(lilrb4-KO)降低了SHP-2和STAT-3的磷酸化。图31h：Western印迹表明，与在加扰对照(WT)THP-1细胞中的情形相比，lilrb4-敲除(lilrb4-KO)降低了IKK的磷酸化。图31i：Western印迹表明，与在加扰对照(WT)THP-1细胞中的情形相比，在lilrb4-敲除(KO)核部分中的NFkB表达降低。图31j-图31k：在96孔transwell板的下室中孵育从健康供体中分离的T细胞。在上室中孵育经照射的THP-1细胞，已使用1-5μM氟达拉滨或stattic预处理所述细胞24小时。Transwell膜的孔径为3μm。E:T＝2:1。在使用抗-CD3/CD28-包被的小珠和rhIL-2培养7天后，使用倒置显微镜对代表性的细胞拍照(图31j)，以及使用抗-CD3抗体对T细胞染色并通过流式细胞术分析(如图图31k中所示)。图31l：通过特异性抑制剂抑制STAT-3而非STAT-1(分别为2.5μM stattic(STAT-3抑制剂)或氟达拉滨)减少THP-1细胞迁移通过内皮细胞。图31m：静脉注射给予NSG小鼠(n＝5)1x106个THP-1细胞，使用2.5uM所示STAT抑制剂预先处理所述细胞24小时。将DMSO作为对照。在移植后第21天处死小鼠进行分析。将抗-人CD45用于通过流式细胞术检测THP-1。图31n：lilrb4的丧失减少THP-1细胞中细胞因子和趋化因子的产生。红框中的数字1-12分别表示CCL2、CCL5、CCL4、OSM、IL-6R、IL-8、gp130、TNFRSF1B、TNFRSF1A、TIMP-1、TIMP-2和uPAR。篮框表示在细胞因子阵列中的内部对照。图31o：通过ImageJ软件对印迹强度的定量(如图31n中所示)。图31p：Western印迹的结果表明，与在加扰对照(WT)THP-1细胞中的情形相比，lilrb4-敲除(lilrb4-KO)降低了uPAR和精氨酸酶-1的表达。图31q：与在加扰对照(WT)THP-1细胞中的情形相比，在lilrb4-敲除(KO)培养基中精氨酸酶的活性降低。图31r-图31s：将从健康供体中分离得到的T细胞与经照射的lilrb4-KO或WT THP-1细胞共同孵育。向这些细胞补充所示浓度的uPAR蛋白7天。使用倒置显微镜对代表性的细胞拍照(图31r)，以及使用抗-CD3抗体对T细胞染色并通过流式细胞术分析(图31s)。图31t-图31u：将从健康供体中分离得到的T细胞与经辐射处理的lilrb4-KO或WT THP-1细胞共同孵育。向培养物补充所示浓度的重组精氨酸酶-1蛋白7天。使用倒置显微镜对代表性的细胞拍照(图31t)，以及使用抗-CD3抗体对T细胞染色并通过流式细胞术分析(图31u)。图31v-图31w：向培养基中补充重组uPAR或精氨酸酶-1挽救了lilrb4-KO THP-1(图31v)或lilrb4-KO MV4-11细胞(图31w)穿过内皮能力的降低。
图32–qPCR表明与在加扰对照(WT)THP-1细胞中的情形相比lilrb4-敲除(KO)降低了细胞因子和趋化因子的基因表达。
图33–细胞因子对T细胞的影响。将从健康供体分离的T细胞与抗-CD3/CD28-包被的小珠和rhIL-2共同培养并补充所示蛋白3天。使用倒置显微镜对代表性的细胞拍照。
图34–通过细胞因子挽救LILRB4KO THP-1细胞的T细胞活化功能。在96孔transwell板的下室中孵育从健康供体中分离的T细胞。在上室孵育经照射的lilrb4-WT或-KO THP-1细胞。在含lilrb4-KO THP-1细胞的上室中补充所示蛋白。Transwell膜的孔径为3μm。E:T＝2:1。在使用抗-CD3/CD28-包被的小珠和rhIL-2培养3天后，使用倒置显微镜对代表性的细胞拍照。在上室中仅有T细胞，而没有THP-1细胞。CCL4，20μg/ml，CCL5，10μg/ml，TIMP-2，10μg/ml，IL-8，10μg/ml，IL10，20μg/ml，IL-27，10μg/ml。
图35a-35c–CCL对AML细胞浸润的影响。图35a：通过特异性中和抗体对CCL4而非CCL2或CCL3的阻断降低了THP-1细胞迁移穿过内皮细胞。图35b：注射给予NSG小鼠(n＝5)1x106个THP-1细胞，随后立即使用200μg/小鼠IgG、抗-CCL2、抗-CCL3或抗-CCL4中和抗体对其进行处理。在移植后第21天处死小鼠进行分析。将抗-人CD45用于通过流式细胞术检测THP-1细胞。图35c：将从健康供体分离的T细胞与经照射的lilrb4-KO或WT THP-1细胞共同孵育。这些细胞补充了20μg/ml CCL4蛋白或使用10μg/ml IgG或抗-CCL4中和抗体7天。通过流式细胞术分析T细胞数。
图36a-36d–LILRB4调控基因的相关性分析。图36a：通过RNA-seq鉴定的在lilrb4-KO中对比WT中的以及在使用抗-LILRB4处理对比IgG处理的那些中不同基因表达模式的比较。对于抗体处理而言，在存在抗体的情况下，使用1％人血清处理THP-1细胞24小时。蓝色表示lilrb4-负向调控基因和红色表示lilrb4-正向调控基因。图36b：来自TCGA数据库的lilrb4-调控基因mRNA表达数据的相关性分析表明lilrb4的表达与lilrb4-正向调控基因的表达正相关；相反，来自RNA-seq的数据表明，lilrb4的表达与lilrb4-负向调控基因的表达负相关。图36c-图36d：对来自TCGA数据库的mRNA表达数据和患者生存期的分析表明lilrb4-正向调控基因的表达(红线)与基因表达和患者总生存期之间负相关(图36c)；但是lilrb4-负向调控基因的表达(红线)显示出与基因表达和患者总生存期之间正相关(图36d)。
图37a-37c–抗-LILRB4抗体加速MV4-11细胞向外周血迁移。(图37a)抗体施用示意图。(图37b)将通过流式细胞术测得的外周血(PB)中的白血病细胞数归一化至在外周血中相应细胞的数量。(图37c)将通过流式细胞术测得的在肝脏(LV)、脾脏(SP)和骨髓(BM)中的白血病细胞数归一化至在外周血中相应细胞的数量。将抗-人CD45用于检测MV4-11细胞。
图38a-38e–抗-LILRB4和化疗药物的协同作用。图38a-图38b：抗-LILRB4抗体加速MV4-11细胞从骨髓(BM)、肝脏(LV)和脾脏(SP)(图38b)向外周血(PB)(图38a)迁移。将抗-人CD45用于通过流式细胞术检测MV4-11细胞。每组中的小鼠，n＝6。图38c-图38e：抗-LILRB4抗体治疗与化疗药阿糖胞苷(图38d)或柔红霉素(图38e)组合的协同作用抑制AML进展。每组中的小鼠，n＝6。化疗药和抗-LILRB4抗体的施用如图中所示(图38c)。将抗-人CD45用于通过流式细胞术检测人白血病细胞。
图39–抗-LILRB4抗体不影响正常HSC的归巢。将人脐带血单核细胞(1x107)注射至NSG小鼠，随后立即给予抗体，然后在移植后20小时处死小鼠(n＝3)。将通过流式细胞术测得的在肝脏、脾脏和骨髓中的CD45+CD34+HSC数归一化至在外周血中相应细胞的数量。
图40a-40c–抗-LILRB4抗体在hCB-人源化NSG小鼠中抑制白血病进展。图40a：检测抗-LILRB4抗体C84在hCB-人源化NSG小鼠中是否抑制白血病进展的策略。图40b：通过发光成像监测白血病进展随时间变化的情况。图40c：在白血病移植后24天，在外周血中移植的白血病，正常人细胞(包括人B细胞、人髓细胞和人T细胞)随时间变化的频率以及在hCB人源化小鼠造血组织中的频率。BM：骨髓；LV：肝脏；SP：脾脏；PB：外周血。
具体实施方式
靶向疗法可以诱导快速肿瘤消退，而免疫疗法可以实现长期抗-肿瘤作用。因此，理想的是鉴定出能够将靶向疗法与免疫疗法有力地结合起来的分子靶点。在免疫细胞和白血病细胞上表达的白细胞免疫球蛋白样受体家族(LILRB)的功能仍有待去了解。本公开内容发现LILRB4(一种单核细胞急性髓性白血病(AML)的表面标记物)维持白血病的进展。发现APOE与LILRB4特异性结合，活化LILRB4介导的信号转导并支持AML细胞向内脏器官归巢。在移植瘤小鼠中，利用LILRB4阻断抗体抑制LILRB4的信号传导通过直接靶向肿瘤，破坏白血病细胞在微环境中的保留以及免疫检验点抑制消除AML的进展。因此，LILRB4代表了一种用于治疗单核细胞AML的新靶点，以及抗-LILRB4抗体是有希望的药物候选物。
因此，LILRB4是用于治疗AML以及潜在的其他癌症的理想靶点。因为LILRB4是单核细胞AML的标记物并且由原始和成熟单核细胞AML细胞表达，所以研究LILRB4对于单核细胞AML的潜在治疗作用可能是适宜的。最令人意想不到的是，数据表明抗-LILRB4阻断抗体策略将靶向疗法和免疫疗法结合在一起。抗-LILRB4阻断信号传导以及LILRB4+AML细胞与其微环境之间的相互作用，还介导直接的肿瘤杀伤作用。此外，抗-LILRB4刺激T细胞的激活，其导致免疫系统介导的抗癌作用。由于LILRB4在肿瘤相关巨噬细胞上表达并且MDSC通过免疫抑制支持癌细胞逃逸29，因此抗-LILRB4抗体也可以减轻由这些骨髓细胞介导的免疫抑制。而且，在下述实施例中的结果表明抗-LILRB4能够增强标准化疗方案的有效性，因为抗体导致白血病细胞从小生境(niche)迁移到血流中，这些细胞在这里可能对细胞毒性化疗更敏感。
此外，LILRB4靶向可能具有最低的毒性。LILRB4在单核细胞和巨噬细胞、树突状细胞、祖细胞肥大细胞、内皮细胞和破骨细胞上表达。然而，与正常对应细胞相比，其在人AML细胞上具有更高水平的表达。明显地，抗-LILRB4对HSC没有影响，该细胞不表达LILRB4。尽管LILRB4由破骨细胞表达，但是不表达PirB(小鼠LILRB的直系同源基因)的小鼠不具有改变的破骨细胞功能30。因此，抗-LILRB4抗体对于单核细胞AML和其他恶性肿瘤患者的治疗具有很大希望。
因而，本公开内容的实施方式提供了鉴定特异性靶向ApoE诱导的LILRB激活的LILRB拮抗剂(例如，抗-LILRB抗体)的方法。本申请提供的测定包括向报告细胞或报告细胞群以及LILRB激活的候选拮抗剂施用LILRB配体ApoE。然后，测量LILRB激活的水平，如在LILRB激活控制下通过检测标记物(例如，NFAT-GFP)。将LILRB激活的水平与仅施用ApoE的激活进行比较，并且将LILRB激活的减少鉴定为ApoE介导的LILRB激活的抑制剂。因而，本公开内容的方法和组合物提供了鉴定ApoE诱导的LILRB激活的方法，及其在癌症(特别是AML)的治疗中的用途。
下面对本公开内容的描述仅旨在说明本公开内容的各种实施方式。因此，不应将所讨论的修订解释为限制本公开内容的范围。将对本领域技术人员显而易见的是，在不脱离本公开内容的范围的前提下可以进行各种等同、改变和修订，并且应当理解的是此类等同的实施方式将包括在本申请的范围内。本申请中引用的所有参考文献，包括出版物、专利和专利申请其全部内容通过引用并入本申请。
I.定义
如在本申请中所使用的，除非上下文另有明确规定，否则单数形式的“一个(a)”、“一种(an)”和“所述(the)”包括复数引用。
在整个申请中，将术语“约”用于表示包括所述装置，用于确定所述值所使用的方法或在研究对象之间存在的变化的误差的固有变化的值。
自身免疫性疾病包括但不限于类风湿性关节炎、克隆氏病、多发性硬化症、自身免疫性糖尿病、系统性红斑狼疮、寻常性狼疮、甲状腺炎、爱迪生氏病、溶血性贫血、抗磷脂综合征、皮炎、过敏性脑脊髓炎、肾小球肾炎、古德帕斯彻氏综合征、格雷夫斯氏病、重症肌无力、神经炎、眼炎、大疱性类天疱疮、天疱疮、多内分泌腺病、紫癜、莱特尔病、僵人综合征、自身免疫性肺部炎症、格林巴利综合征和自身免疫性炎性眼病。优选地，在目标方法中，所述对象是人。在一个实施方式中，在自身免疫性攻击发作期间将多肽给予所述对象。所述方法还可以包括给予其他免疫抑制药物，例如细胞毒剂、环孢菌素、甲氨蝶呤、硫唑嘌呤和糖皮质激素。
如在本申请中所使用的，LILRB激活的“拮抗剂”或“抑制剂”指在LILRB配体(例如，ApoE)存在的条件下能够阻断或减少LILRB激活的任何物质。在某些实施方式中，所述拮抗剂或抑制剂可以是蛋白，例如抗体。在某些实施方式中，所述拮抗剂或抑制剂可以是小分子，例如化学化合物。在某些实施方式中，与参照水平(例如，在存在LILRB配体但不存在拮抗剂或抑制剂的条件下LILRB的激活水平)相比，所述拮抗剂或抑制剂将LILRB的激活降低至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。
如在本申请中所使用的，术语“抗体”包括与特异性抗原(或多抗原)结合的任何免疫球蛋白、单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体或双特异性(双价)抗体。一个天然的完整抗体包含两条重链和两条轻链。每条重链由一可变区(VH)和第一、第二、第三恒定区(分别为CH1、CH2和CH3)组成，每条轻链由一可变区(VL)和一恒定区(CL)组成。轻链和重链的可变区决定抗原的结合。将哺乳动物的重链分类为α、δ、ε、γ和μ，以及将哺乳动物的轻链分类为λ或κ。抗体具有“Y”型，Y型的茎由通过二硫键连接在一起的两条重链的第二和第三恒定区构成。Y型的每个臂包含与单一轻链的可变区和恒定区结合在一起的单一重链的可变区和第一恒定区。轻链和重链的可变区负责抗原结合，通常将其称为Fv(针对可变片段)或Fv片段。这两条链的可变区通常三个含有称为互补性决定区(CDR)的高变环(轻链(L)CDR包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，重链(H)CDR包括HCDR1、HCDR2、HCDR3)。可以通过Chothia、Kabat或Al-Lazikani约定定义或鉴定本申请公开的抗体和抗原结合片段的CDR边界CDR(Chothia,C.等，J Mol Biol 186(3):651-63(1985)；Chothia,C.和Lesk,A.M.,J Mol Biol,196:901(1987)；Chothia,C.等，Nature 342(6252):877-83(1989)；Kabat E.A.等，NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.(1991)；Al-Lazikani,B.,Chothia,C.,Lesk,A.M.,JMol Biol 273(4):927(1997))。三个CDR插入称为框架区(FR)的侧翼区段之间，其比CDR更高度保守并形成支撑高变环的支架。重链和轻链的恒定区不参与抗原结合，但是显示出多种效应功能。基于其重链恒定区的氨基酸序列对抗体分类。五个抗体的主要类别或同种型是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，通过分别存在α、δ、ε、γ和μ重链对其进行表征。将若干主要抗体类别分成亚类，如在人中的IgG1(γ1重链)、IgG2(γ2重链)、IgG3(γ3重链)、IgG4(γ4重链)、IgA1(α1重链)或IgA2(α2重链)，以及在小鼠中的IgG1(γ1重链)、IgG2a(γ2a重链)、IgG2b(γ2b重链)和IgG3(γ3重链)。如在本申请中所使用的，抗体还包括抗原结合片段，即能够与抗原特异性结合的蛋白的一部分。在某个实施方式中，抗原结合片段来自包含一个或多个CDR的抗体，或任何其他抗体片段，其与抗原结合但不包含完整的天然抗体结构。抗原结合片段的实例包括但不限于双体、、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、二硫键稳定的Fv片段(dsFv)、(dsFv)2、双特异性dsFv(dsFv-dsFv')、二硫键稳定的双体(ds双体)、单链抗体分子(scFv)、scFv二聚体(二价双体)、多特异性抗体、单域抗体(sdAb)、骆驼抗体或纳米抗体、结构域抗体和二价结构域抗体。
术语“癌症”指细胞以不受调控的、加快的速度生长和分裂的病况或病症。癌症的实例包括急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病、肾上腺皮质癌、肛门癌、星形细胞瘤、儿童小脑或大脑基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨肿瘤、脑癌、小脑星形细胞瘤、大脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、视觉通路和下丘脑神经胶质瘤、乳腺癌、伯基特淋巴瘤、宫颈癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、结肠癌、肺气肿、子宫内膜癌、室管膜瘤、食道癌、尤文氏肉瘤、视网膜母细胞瘤、胃癌(胃癌)、胶质瘤、头颈癌、心脏癌，霍奇金氏淋巴瘤、胰岛细胞癌(内分泌胰腺)、卡波西氏肉瘤、肾癌(肾细胞癌)、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、神经母细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、卵巢癌、胰腺癌、咽癌、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌(肾癌)、视网膜母细胞瘤、尤因肿瘤家族、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、咽喉癌、甲状腺癌、阴道癌。
如在本申请中所使用的，“细胞”可以是原核细胞或真核细胞。原核细胞包括例如细菌。真核细胞包括例如真菌、植物细胞和动物细胞。动物细胞(例如，哺乳动物细胞或人细胞)的类型包括例如来自循环/免疫系统或器官的细胞，例如B细胞、T细胞(细胞毒性T细胞、自然杀伤T细胞、调节T细胞、辅助T细胞)、自然杀伤细胞、粒细胞(例如，嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和多叶核中性粒细胞)、单核细胞或巨噬细胞、红细胞(网织红细胞)、肥大细胞、血小板或巨核细胞和树突状细胞；来自内分泌系统或器官的细胞，例如甲状腺细胞(例如，甲状腺上皮细胞、滤泡旁细胞)、甲状旁腺细胞(例如，甲状旁腺主细胞、嗜酸性细胞)、肾上腺细胞(例如，嗜铬细胞)和松果体细胞(例如，松果体细胞)；来自神经系统或器官的细胞，例如成胶质细胞(例如，星形胶质细胞和少突胶质细胞)、小胶质细胞、大细胞神经分泌细胞、星状细胞、伯特歇尔细胞和垂体细胞(例如，促性腺激、皮质激素、甲状腺素、生长激素和催乳素细胞)；来自呼吸系统或器官的细胞，例如肺细胞(I型肺细胞和II型肺细胞)、克拉拉细胞、杯状细胞和肺泡巨噬细胞；来自循环系统或器官的细胞(例如，心肌细胞和周细胞)；来自消化系统或器官的细胞，例如，胃主细胞、壁细胞、杯状细胞、潘氏细胞、G细胞、D细胞、ECL细胞、I细胞、K细胞、S细胞、肠内分泌细胞、肠嗜铬细胞、APUD细胞和肝细胞(例如，肝细胞和枯否细胞)；来自外皮系统或器官的细胞，例如骨细胞(例如，成骨细胞、骨细胞和破骨细胞)，牙齿细胞(例如，成牙骨质细胞和成釉细胞)，软骨细胞(例如，成软骨细胞和软骨细胞)，皮肤/毛细胞(例如，毛细胞、角质形成细胞和黑素细胞(痣细胞))，肌肉细胞(例如，肌细胞)，脂肪细胞，成纤维细胞和肌腱细胞；来自泌尿系统或器官的细胞(例如，足细胞、肾小球旁细胞，肾小球内肾小球膜细胞、肾小球外肾小球膜细胞、肾近端小管刷状缘细胞和黄斑密度细胞)；以及来自生殖系统或器官的细胞(例如，精子、支持细胞、间质细胞、卵子、卵母细胞)。细胞可以是正常的健康细胞；或者患病或不健康的细胞(例如，癌细胞)。细胞还包括哺乳动物受精卵或干细胞，其包括胚胎干细胞、胎儿干细胞、诱导多能干细胞和成体干细胞。干细胞是能够经历细胞分裂周期同时保持未分化状态并分化成特化细胞类型的细胞。干细胞可以是全能干细胞、多能干细胞(pluripotent stem cell)、专能干细胞(multipotent stem cell)、寡能干细胞和单能干细胞，其中任何一种都可以从体细胞诱导。干细胞还可以包括癌症干细胞。哺乳动物细胞可以是啮齿动物细胞，例如小鼠、大鼠、仓鼠细胞。哺乳动物细胞可以是兔形目细胞，例如家兔细胞。哺乳动物细胞还可以是灵长类细胞，例如人细胞。
如在本申请中所使用的，就特定组分而言，“基本上不含”在本申请中用于表示没有特定组分被有目的地配制成组合物和/或仅作为污染物或以痕量存在。因此，组合物的任何无意污染导致的特定组分的总量远低于0.05％，优选低于0.01％。最优选的是一种组合物，其中用标准分析方法不能检测到任何量的特定组分。
炎性病症包括但不限于(i)炎性疾病，如慢性炎性病变(包括慢性炎性病变，如但不限于结节病、慢性炎性肠病、溃疡性结肠炎和克隆氏病变)；(ii)血管炎性病变，如但不限于弥漫性血管内凝血、动脉粥样硬化、川崎病变和血管炎综合征(如但不限于结节性多动脉炎、韦格纳肉芽肿病、过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、巨细胞关节炎和肾脏微血管炎)；(iii)慢性活动性肝炎；(iv)干燥综合症；(v)脊柱关节病，如强直性脊柱炎、银屑病性关节炎和脊椎炎、肠病性关节炎和脊椎炎、反应性关节炎和炎症性肠病相关的关节炎；以及(vi)葡萄膜炎。优选地，在目标方法中，所述对象是人。还可以将所述方法与施用其他抗炎剂组合。抗炎剂包括但不限于任何已知的非甾体抗炎剂，如水杨酸衍生物(阿司匹林)、对氨基苯酚衍生物(对乙酰氨基酚)、吲哚和茚乙酸(吲哚美辛)、杂芳基乙酸(酮咯酸)、芳基丙酸(布洛芬)、邻氨基苯甲酸(甲芬那酸)、烯醇酸(昔康类)和烷酮类(萘丁美酮)，以及任何已知的甾体抗炎剂，其包括皮质类固醇以及具有其相关糖皮质激素(代谢)和盐皮质激素(电解质调节)活性的生物活性合成类似物。此外，在炎症治疗中使用的其他药物包括但不限于内分泌物拮抗剂如组胺、缓激肽受体拮抗剂、白三烯和前列腺素受体拮抗剂以及血小板活化因子受体拮抗剂。
如在本申请中所使用的，术语“连接”是指通过分子内相互作用的缔合，例如，共价键、金属键和/或离子键，或分子间相互作用，例如氢键或非共价键。
术语“可操作地连接”指元件的排布，其中对这样描述的部件配置成执行其通常的功能。因此，与多肽可操作地连接的给定信号肽指示多肽从细胞中分泌。在启动子的情况下，与编码细胞可操作地连接的启动子将指示编码序列的表达。启动子或其他控制元件不需要与编码序列相邻，只要其具有指示编码序列表达的功能即可。例如，在启动子序列与编码序列之间可以存在干扰的非翻译但转录的序列，并且仍可以将启动子序列认为与编码序列“可操作地连接”。
尽管本公开内容支持仅涉及替代方案和“和/或”的定义，但是除非另有明确指出仅为替代方案或替代方案是互斥的，否则权利要求中的术语“或”的使用用于表示“和/或”。如在本申请中所使用的，“另一个”可以指至少第二个或更多个。
如在本申请中所使用的，术语“对象”指人或任何非人动物(例如，小鼠、大鼠、家兔、犬、猫、牛、猪、绵羊、马或灵长类)。人包括产前或产后形式。在很多实施方式中，对象是人。对象可以是患者，其是指到医疗提供者处对疾病进行诊断或治疗的人。在本申请中使用的术语“对象”与“个体”或“患者”可以互换使用。对象可以患有或易患某种疾病或病症，但是可以表现或不表现出所述疾病或病症的症状。
如在本申请中所使用的，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”病况包括预防或缓解病况，延缓病况的发病或进展速度，降低发展成病况的风险，预防或推迟与病况相关症状的进展，减少或终止与病况相关的症状，产生病况的完全或部分消退，治愈病况或其某些的组合。
如在本申请中所使用的，术语“治疗有销量”或“有效剂量”指药物有效治疗疾病或病况的剂量或浓度。例如，对于使用本申请所公开的单克隆抗体或其抗原结合片段治疗癌症而言，治疗有效量是单克隆抗体或其抗原结合片段能够缩小肿瘤体积，根除全部或部分肿瘤，抑制或减缓肿瘤生长或癌细胞浸润至其他器官，抑制细胞的生长或增殖介导的癌症病况，抑制或减缓肿瘤细胞转移，改善与肿瘤或癌症病况相关的任何症状或标记物，预防或推迟肿瘤或癌症病况的进展或其某些的组合的剂量或浓度。LILR
白细胞免疫球蛋白样受体(LILR)是具有胞外免疫球蛋白结构域的受体家族。还将其称为CD85、ILT和LIR，其可以对多种免疫细胞发挥免疫调节作用。编码这些受体的人类基因存在于染色体区域19q13.4的基因簇中。其包括LILRA1、LILRA2、LILRA3、LILRA4、LILRA5、LILRA6、LILRB1、LILRB2、LILRB3、LILRB4、LILRB5、LILRB6或LILRA6以及LILRB7或LILRA5。LILR的一个子集识别I类MHC分子(在人类中也称为I类HLA)。其中，抑制性受体LILRB1和LILRB2对经典和非经典MHC等位基因显示出广泛的特异性，其优先与β2m相关的复合物结合。而相反的是，活化受体LILRA1和LILRA3优选不依赖于b2m的I类MHC的游离重链，特别是HLA-C的等位基因。对于LILR以及LILRB1-5和LAIR1的下述描述，参见综述22。
A.LILRB1
白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员1是在人类中由LILRB1基因编码的蛋白。该基因是白细胞免疫球蛋白样受体(LIR)家族成员，其存在于染色体区19q13.4的基因簇中。所编码的蛋白属于LIR受体亚家族B类，其含有两个或四个胞外免疫球蛋白结构域、跨膜结构域以及两至四个基于胞质免疫受体酪氨酸的抑制性基序(ITIM)。该受体在免疫细胞上表达，在此处其与抗原提呈细胞上的I类MHC分子结合，并转导抑制免疫应答的刺激的负性信号。还报道了ILIRB1在人胃癌细胞上表达并且可以增强肿瘤生长。认为其控制炎症应答和细胞毒性，以辅助集中免疫应答和限制自身反应。已发现了该基因多个转录物变体编码的不同同种型。
B.LILRB2
白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员2是在人类中由LILRB2基因编码的蛋白。该基因是白细胞免疫球蛋白样受体(LIR)家族成员，其存在于染色体区19q13.4的基因簇中。所编码的蛋白属于LIR受体亚家族B类，其含有两个或四个胞外免疫球蛋白结构域、跨膜结构域以及两至四个基于胞质免疫受体酪氨酸的抑制性基序(ITIM)。该受体在免疫细胞上表达，在此处其与抗原提呈细胞上的I类MHC分子结合，并转导抑制免疫应答的刺激的负性信号。认为其控制炎症应答和细胞毒性，以辅助集中免疫应答和限制自身反应。该受体还在人非小细胞肺癌细胞上表达。已发现了该基因多个转录物变体编码的不同同种型。已发现LILRB2与PTPN6相互作用。
C.LILRB3
白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员3是在人类中由LILRB3基因编码的蛋白。该基因是白细胞免疫球蛋白样受体(LIR)家族成员，其存在于染色体区19q13.4的基因簇中。所编码的蛋白属于LIR受体亚家族B类，其含有两个或四个胞外免疫球蛋白结构域、跨膜结构域以及两至四个基于胞质免疫受体酪氨酸的抑制性基序(ITIM)。该受体在免疫细胞上表达，在此处其与抗原提呈细胞上的I类MHC分子结合，并转导抑制免疫应答的刺激的负性信号。认为其控制炎症应答和细胞毒性，以辅助集中免疫应答和限制自身反应。已发现了该基因多个转录物变体编码的不同同种型。
D.LILRB4
白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员4是在人类中由LILRB4基因编码的蛋白。该基因是白细胞免疫球蛋白样受体(LIR)家族成员，其存在于染色体区19q13.4的基因簇中。所编码的蛋白属于LIR受体亚家族B类，其含有两个或四个胞外免疫球蛋白结构域、跨膜结构域以及两至四个基于胞质免疫受体酪氨酸的抑制性基序(ITIM)。该受体在免疫细胞上表达，在此处其与抗原提呈细胞上的I类MHC分子结合，并转导抑制免疫应答的刺激的负性信号。该受体还具有抗原捕获和提呈的功能。认为其控制炎症应答和细胞毒性，以辅助集中免疫应答和限制自身反应。LILRB4还在胃癌细胞上表达并且可以增强肿瘤生长。已发现了该基因多个转录物变体编码的不同同种型。已发现LILRB4与PTPN6相互作用。
E.LAIR1
白细胞相关免疫球蛋白样受体1是在人类中由LAIR1基因编码的蛋白。还将LAIR1称为CD305(分化簇305)。LAIR1是I型跨膜糖蛋白，其含有一个胞外Ig样结构域和两个胞内ITIM。与编码LILRB的基因类似，lair1位于人染色体19q13.4上的白细胞受体复合物(LRC)中。LAIR1与胶原结合，并且其ITIM募集SHP-1和SHP-2。LAIR1在T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞和树突状细胞，以及包括人CD34+细胞在内的造血祖细胞中表达。
实施例
包括下述实施例以显示本公开内容的优选实施方式。本领域技术人员应当理解的是，以下实施例中公开的技术代表发明人发现的在本公开内容的实践中很好地起作用的技术，因此可以认为是构成其实践的优选模式。然而，根据本公开内容，本领域技术人员应当理解，在不脱离本公开内容的主旨和范围的前提下，可以对所公开的具体实施方式进行很多改变并仍然获得相同或相似的结果。
实施例1
在白血病细胞上表达的LILRB4导致T细胞抑制
为了鉴定白血病免疫逃逸的新机制和分子靶点，发明人分析了50种已知的概念共刺激和共抑制受体的基因表达与在TCGAAML数据库中的173名AML患者总生存期之间的相关性。发明人发现免疫抑制性受体lilrb4的表达与AML患者的生存期呈最显著的负相关(图5)。
LILRB4在正常单核细胞上具有限制性表达模式22，并且在单核细胞AML(或急性单核细胞白血病，其由单核细胞谱系发展而来，属于FAB M4和M5AML亚型)细胞中的表达高于在来自其他亚型AML的细胞中的表达(图6)。本发明人分析了在来自UT西南医学中心(UTSW)的118个AML患者样本的白血病母细胞上LILRB4的表面表达，并且发现LILRB4仅存在于M4和M5单核细胞AML亚型而非其他AML亚型的母细胞上(图7a和表1)。这些结果与此前的报道LILRB4是单核细胞AML的特异性标记物26一致。重要的是，LILRB4在单核细胞AML细胞中的水平高于其在正常单核细胞中的水平(图7b-c)，并且不在正常造血干细胞(HSC)上表达(图8)。这些结果表明单核细胞AML标记物LILRB4是一种用于治疗这种类型白血病的有吸引力的靶点。
为了检测在AML细胞上表达的LILRB是否具有免疫抑制功能，发明人将LILRB4阳性或LILRB4阴性白血病细胞或正常造血细胞与自体T细胞或来自健康供体的T细胞共培养。LILRB4阳性原代单核细胞AML细胞显著抑制T细胞增殖(图9)。然后，发明人使用具有lilrb4-特异性引导RNA的诱导型CRISPR/Cas9系统在人单核细胞AML THP-1细胞中缺失LILRB4。在将lilrb4敲除(KO)后，THP-1细胞的T细胞抑制能力丧失(图7d-f)。而相反的是，在lilrb4-KO THP-1细胞中强制表达野生型lilrb4，而非胞内结构域缺失的突变体lilrb4挽救了对此类T细胞的抑制性功能(图7d-f)。因而，在肿瘤细胞上的LILRB4有效抑制了人T细胞活性，并且LILRB4的这种功能依赖于其胞内信号转导结构域。这与此前的研究报道的LILRB4的胞外域负责抑制T细胞活性25是相反的。令人吃惊的是，在transwell中野生型THP-1细胞与人T细胞的分离仍能抑制T细胞。而相反的是，lilrb4-KO THP-1细胞丧失了这种能力。而且，全长而非胞内域缺失的LILRB4能够挽救这种表型，表明非接触的T细胞抑制是LILRB4胞内信号转导依赖性的(图7g-h)。
发明人试图通过逆转LILRB4介导的免疫抑制来确定是否拮抗LILRB4能够阻止AML进展。如发明人所描述的2,31，为了鉴定LILRB潜在的激动和拮抗作用，发明人基于单个LILRB的胞外域(ECD)与其小鼠直系同源物PirB27和gp49B128的融合产生了与成对的免疫球蛋白样受体β的胞内域相互作用的单个稳定的嵌合受体报告细胞，其通过适体DAP-12传递信号以活化NFAT启动子驱动的GFP表达。在该系统的帮助下，发明人产生了新型抗-LILRB4阻断抗体以进一步评估LILRB4-介导的信号转导(图10)。尽管抗-LILRB4对T细胞或THP-1细胞本身的细胞激活或增殖没有影响(图11)，但是抗-LILRB4抗体处理阻断了LILRB4-介导的T细胞抑制(图7g-h)。而且，在THP-1细胞和CTL的共培养中，这种阻断抗体的处理显著减少THP-1细胞数并增加CTL数以及由CTL产生的细胞因子(图7i-m)。综上所述，这些体外结果表明由AML细胞表达的LILRB4抑制T细胞活性，以及抗-LILRB4阻断抗体逆转这种免疫检验点功能，使肿瘤细胞对T细胞的细胞毒性杀伤作用敏感。
本发明人尝试使用人源化小鼠移植瘤模型和免疫活性小鼠模型证实LILRB4在体内的免疫检验点阻断功能。为了产生人源化小鼠模型，对免疫受损的NOD-SCID Il2rg敲除(NSG)小鼠进行亚致死性辐射并移植人外周血单核细胞(hPBMC)，从而能够分析人T细胞对肿瘤生物学的作用32。在人源化NSG小鼠中，抗-LILRB4对LILRB4的阻断抑制皮下植入THP-1细胞的肿瘤发展(图12a-b)并增加细胞毒性T细胞(图12c)。重要的是，LILRB4的阻断在8种原代人单核细胞AML来源的移植瘤中显著降低白血病进展(图12d)，并且同时增加同种异体人CTL细胞(图12e)。这些结果证实了抗-LILRB4抗体逆转由肿瘤细胞表达的LILRB4介导的T细胞免疫抑制。
为了进一步验证结论，发明人将表达人LILRB4的小鼠C1498AML细胞(C1498-huLILRB4)皮下植入免疫感受态C57BL/6小鼠。为了排除抗体依赖性细胞介导的细胞毒性/吞噬作用或补体依赖性细胞毒性(ADCC/ADCP/CDC)的抗肿瘤效应，发明人给予荷瘤小鼠Fc糖基化位点突变的抗-LILRB4抗体(抗-LILRB4-N297A)，这种抗体缺乏ADCC/ADCP/CDC33。与给予对照IgG相比，LILRB4阻断能够通过增加有效T细胞(图12i)有效地降低肿瘤负荷(图12f-h)。相反，CD8+T细胞耗竭则消除了抗-LILRB4抗体的抗肿瘤作用(图12j-l)，表明LILRB4的肿瘤支持作用依赖于T细胞抑制。为确定是否抗-LILRB4抗体治疗产生记忆T细胞以阻止AML复发，发明人将来自经抗-LILRB4处理小鼠的脾细胞过继移植给正常受体小鼠。五只移植小鼠中的四只排斥了亲本C1498小鼠白血病细胞，并且这些小鼠还阻止了三倍数量白血病细胞的再攻击(图12n)。综上所述，这些体外和体内的结果表明，LILRB4是单核细胞AML的特异性标记物，并且LILRB4在肿瘤细胞中的信号传导需要抑制T细胞介导的抗肿瘤免疫。
LILRB4支持白血病细胞浸润
单核细胞AML的特征之一是肿瘤细胞髓外浸润增强。发明人观察到用LILRB4抗体进行阻断可以导致白血病向包括骨髓、肝脏和脑在内的内脏器官浸润显著减少(图13)。发明人假设，除了T细胞抑制以外，LILRB4能够促进白血病浸润以进行免疫逃逸。为了验证这一假设，他们进行了跨内皮迁移和归巢测定，并且监测了相对于LILRB4表达的白血病浸润。人AML THP-1细胞中的LILRB4KO在体外减少了跨内皮迁移(图14a)，降低了向肝脏和骨髓的短期(20小时)归巢(图14b)，降低了向造血器官的长期(21天)植入(图14c)，延长了移植瘤小鼠的生存期(图14d)以及推迟了体重减轻(图14e)。而相反的是，人LILRB4在小鼠AMLC1498或WEHI-3细胞中的强制表达具有相反的作用(图14f-j和图15)。值得注意的是，LILRB4的KO或异位表达不会显著影响白血病的体外和体内生长(图16)。由于NSG小鼠是功能性T细胞缺陷的，因而这些结果特别是来自移植瘤实验的结果揭示了LILRB4在AML中的独特作用——促进迁移和白血病浸润。这与此前的研究一致，研究表明循环LILRB4+AML母细胞的频率显著低于LILRB4-AML母细胞26和LILRB4+慢性淋巴细胞白血病细胞的频率，后者更通常地与淋巴组织受累相关12。
尽管当在C57bl/6小鼠中CD8T细胞耗竭时，给予抗-LILRB4抗体不会缩小皮下C1498肿瘤的尺寸(图12h)，但是给予抗-LILRB4抗体导致肝脏中白血病细胞的浸润减少(图17)。为了进一步考察是否LILRB4调控细胞迁移/浸润，发明人在体外transwell以及体内归巢测定和移植瘤模型中将抗-LILRB4抗体给予LILRB4-阳性(THP-1和MV4-11)和LILRB4-阴性(U937)人AML细胞(图18)。发明人发现，抗体介导的LILRB4阻断对于表达LILRB4的MV4-11和THP-1AML细胞与LILRB4KO具有相同作用(图14k-t)，但是其在不表达LILRB4的U937细胞上无效(图19)。重要的是，整体动物和离体生物发光成像表明抗-LILRB4抗体显著阻止白血病浸润至肺脏、肝脏、骨髓、脑、肾脏、脾脏和胃肠道(图14u-v、图20、图21和图22)。为了排除所观察到的迁移抑制作用可能是由于通过在NSG小鼠中存在的先天免疫细胞的抗体介导的作用导致的，发明人向移植了MV4-11细胞的NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞耗竭的NSG受体施用了糖基化缺陷的抗-LILRB4抗体(抗-LILRB4-N297A)(图23a-c)。在每种先天免疫细胞耗竭的条件下，与同种型对照相比，给予抗-LILRB4-N297A抗体均显著抑制AML浸润(图14w-z)。
为了确定LILRB4的胞内信号传导是否是白血病细胞浸润所需要的，发明人研究了野生型(WT)或敲除(KO)lilrb4基因的THP-1细胞，以及具有野生型lilrb4表达(KO-wt)或具有胞内域缺失的突变体lilrb4表达(KO-intΔ)挽救的KO THP-1细胞的归巢。其进一步检测了抗-LILRB4抗体的作用。发明人发现抗-LILRB4抗体将野生型THP-1和LILRB4KO THP-1(重新引入了WT LILRB4(KO-WT))细胞向肝脏和骨髓的归巢能力降至与LILRB4KO或KO THP-1(重新引入了缺乏胞内域的突变体LILRB4(KO-intΔ))细胞相同的水平(图14aa，图14cc)。而相反的是，给予抗体对LILRB4KO THP-1细胞或KO-intΔ细胞的归巢能力没有影响(图14bb，图14dd)。综上所述，这些结果表明LILRB4促进AML细胞向具有免疫豁免位点(immuneprivileged site)的内脏器官迁移并支持AML进展。
APOE激活LILRB4以支持AML浸润
通过抗-LILRB4抗体进行阻断能有效抑制急性单核细胞白血病细胞的免疫抑制和迁移功能，这表明LILRB4在白血病细胞表面上的功能可能是配体依赖性的。发明人试图鉴定LILRB4的胞外结合蛋白。此前已将整合素-αvβ3鉴定为是gp49B1的配体，整合素-αvβ3是小鼠LILRB4的直系同源物34。然而，多种整合素-αβ复合物不能激活人LILRB4报告细胞(图24)。
令人吃惊的是，发明人发现人血清和小鼠血清能够特异性刺激LILRB4报告蛋白而非其他LILRB的报告蛋白(图25a)。通过快速蛋白液相色谱(FPLC)分级，随后通过报告蛋白测定和质谱(图26)，其鉴定了人和小鼠APOE特异性激活的LILRB4报告蛋白(图25b和图27)。纯化自不同来源的APOE均激活LILRB4(图28a)。在固化和可溶性条件下，人APOE的所有三种同种型均激活LILRB4(图28b)。有趣的是，重组APOE特异性激活小鼠PirB而非gp49B1(图25b)，认为其是小鼠LILRB4的直系同源物28。野生型而非APOE-缺失小鼠的血清激活LILRB4报告蛋白(图25c)。此外，脂质体重构的APOE蛋白(APOE-POPC)与无液体APOE蛋白在激活LILRB4报告细胞方面具有相同能力(图25d)。LILRB4KO显著降低APOE与THP-1细胞的结合(图25e)。
发明人使用表面等离子体共振(SPR)、生物层干涉法(Octet)以及微量热泳动(MST)证实了重组APOE与LILRB4的特异性结合，其中通过SPR确定的解离常数为2nM(图25f和图29)。APOE包含两个功能性结构域，含有其受体LDLR结合位点(残基136-150)的N-末端结构域和C末端结构域(残基222-299)。为确定APOE的哪个结构域是与LILRB4结合所需的，发明人产生了人APOE的一个N-末端突变体(Mut-N：R142A/K143A/R145A/K146A/R147A/R150A)和两个C-末端突变体(Mut-C1：缺失残基245-299；以及Mut-C2：缺失残基279-299)。N-末端突变体显著降低了LILRB4激活(图25g)。发明人还基于LILRB4对APOE的分子建模在可能对配体与LILRB4的结合是关键的氨基酸中设计了一系列位点特异性突变(图30)。其发现在第一Ig结构域中的P35和W106以及在两个Ig结构域之间的接头区域中的Y121对APOE激活LILRB4报告蛋白是关键的(图25h)。APOE对免疫抑制性受体LILRB4的激活与已被充分证明的APOE的免疫抑制性功能一致35,36。
为了进一步确定是否ApoE调控LILRB4的功能，发明人比较了具有和不具有异位表达的LILRB4的小鼠C1498AML细胞在野生型和apoe-敲除小鼠中的归巢。LILRB4的表达显著增加C1498向野生型小鼠而非APOE-缺失小鼠的骨髓和肝脏的归巢(图25i-l)。综上所述，APOE结合并激活LILRB4以支持人急性单核细胞白血病细胞的迁移。
LILRB4在AML细胞中通过下调效应物支持AML浸润和T细胞抑制
LILRB4的胞内域缺失可以使其功能丧失(图7e-g和图14dd)表明LILRB4的下游信号转导是T细胞抑制和白细胞浸润所需的。LILRB4的胞内域含有三个ITIM，其可以募集用于下游信号传导的磷酸酶SHP-1、SHP-2或SHIP。为了确定是否一种或多种磷酸酶介导LILRB4的功能，在用于T细胞共培养和通过CRISPR/Cas9技术进行的迁移测定的THP-1细胞中单独缺失shp-1、shp-2和ship。SHP-2的丧失挽救THP-1细胞的T细胞抑制(图31a-c)。但是，SHP-2而非SHP-1或SHIP的丧失降低了THP-1细胞的迁移能力和植入(图31d和图31e)。这些结果表明SHP-2是LILRB4进行信号传导以支持白血病迁移和T细胞抑制的中介物。发明人通过RNA-seq分析进一步考察了野生型和lilrb4-KO THP-1细胞的基因表达。他们发现与野生型对应物相比，在lilrb4-KO THP-1细胞中585个基因显著下调以及445个基因上调。与发明人观察到的表型一致，这些lilrb4-上调的基因特别地参与了细胞迁移、细胞因子产生和免疫抑制性IL10信号传导。在Ingenuity Pathway Analysis(IPA)中的上游调控因子分析发现JAK-STAT(STAT1、STAT2、STAT3和STAT4)和NFkB(NFkB1、REL和RELA)通路(已知其是SHP-2的下游信号37)关键转录因子的活性被lilrb4的丧失显著抑制(图31f)。与SHP-2磷酸化的降低平行的是，LILRB4的丧失下调JAK/STAT和NFkB通路的激活(图31g-i)。在白血病细胞中STAT的抑制增加T细胞增殖(图31j-k)以及减少体外迁移(图31l)和体内白血病进展(图31m)。
发明人此前的结果表明，在transwell中分离野生型THP-1细胞和人T细胞仍能使T细胞抑制(图7g-h)，这表明从白血病细胞中分泌的蛋白是免疫抑制的关键效应物。与该假设一致的是，发明人发现在单核细胞AML细胞中参与单核细胞迁移和免疫调节的分泌蛋白的mRNA水平被lilrb4的丧失所下调(图32)。而且，与野生型对照细胞相比，在lilrb4-KO细胞的培养基中CCL2、CCL4、CCL5、IL-6R、IL-8、gp130、OSM、TIMP-1/2、TNF-R1/II和uPAR减少(图31n-o)。在这些蛋白中，单核细胞AML细胞特别高地表达uPAR(尿激酶受体)38，并且已知其促进癌症侵袭、转移、存活和血管生成39。uPAR是人癌细胞中NFkB的靶点40-43。与分泌的uPAR减少一致的是，在lilrb4-KO细胞中uPAR的mRA和胞内蛋白水平降低(图32和图31p)。接下来，发明人发现在lilrb4-KO细胞中精氨酸酶-1的表达显著降低(图31p)；据报道精氨酸酶-1被uPAR介导的信号传导上调并通过增加T细胞微环境中的超氧化物产物来抑制T细胞增殖和CTL产生44-46。由于据报道在AML细胞中的精氨酸酶-1能够被分泌一抑制T细胞活性47，因而发明人测量了培养基中精氨酸酶-1的水平并且发现确实lilrb4-KO THP-1细胞分泌的精氨酸酶-1也减少了(图31q)。为了确定是否uPAR有助于LILRB4介导的T细胞抑制，当与T细胞共培养时，发明人使用附加的uPAR蛋白处理lilrb4-KO细胞。补充uPAR在共培养中以剂量依赖性的方式减少T细胞增殖(图31r-s)；uPAR的这种作用可能是通过共培养实现的，因为uPAR不能有效地直接减少T细胞增殖(图33)。类似地，补充精氨酸酶-1也在共培养中减少T细胞增殖(图31t-u)。而且，补充uPAR或精氨酸酶-1增加THP-1(图31v)或MV4-11细胞(图31w)跨过内皮细胞的迁移能力。这些结果表明LILRB4可以通过SHP-2/NFkB/uPAR/精氨酸酶-1信号转导在AML细胞中增加精氨酸酶-1的表达，其抑制T细胞活性并增加白血病迁移。
除了uPAR和精氨酸酶-1以外，形成IL-27与IL27p28的异二聚体的EBI3因lilrb4的丧失而减少(图32)。同时还有IL-10减少(图32)，这些结果表明LILRB4控制IL-27/IL-10的表达以抑制T细胞增殖和激活48,49(图34)。TIMP-2是MMP的天然抑制剂。在共培养(图34)或无THP-1细胞(图33)的条件下补充TIMP-2减少T细胞增殖。有趣的是，具有控制单核细胞和T细胞迁移的共有受体CCR50的CCL2、CCL3、CCL4和CCL5由于lilrb4的缺失下调。使用单独的中和抗体处理THP-1细胞表明CCL4而非CCL2和CCL3在移植瘤模型中促进白血病细胞迁移和AML进展(图35a-c)。此外，与CCL4直接诱导T细胞凋亡的报道一致51，发明人发现在T/THP-1共培养培养基中补充CCL4抑制T细胞增殖；以及给予抗-CCL4中和抗体挽救LILRB4介导的T细胞抑制(图34和图35a-c)。这些结果表明CCL4是在LILRB4信号转导中控制白血病进展和免疫逃逸的关键效应物。
为了尝试验证LILRB4下游效应物的功能，发明人对lilrb4-KO对比野生型THP-1细胞，使用人血清处理的对比未处理的THP-1细胞以及经人血清预处理的使用抗-LILRB4抗体处理的对比使用对照IgG处理的THP-1细胞进行了基因表达分析。他们发现44个基因，包括10个lilrb4正向调控基因和34个lilrb4负向调控基因，在血清激活和抗-LILRB4处理的样品中显示出相反的趋势(图36a-d)。在人AML患者中这些基因的mRNA水平也与LILRB4的mRNA水平显著相关(图36a-d)。这些LILRB4-正向调控基因的表达与患者的生存期负相关(图36a-d)。相反，这些LILRB4-负向调控基因的表达与患者的生存期正相关(图36a-d)。综上所述，这些结果表明LILRB4通过在白血病细胞中的下游信号转导支持免疫逃逸和癌症浸润。
在本研究中，发明人试图回答两个主要的生物学问题。第一个是，鉴于现有免疫检验点阻断疗法对白血病普遍缺乏有效性，白血病是否采用独特的未知肿瘤发展和免疫逃逸机制？第二个是，含有免疫抑制性ITIM的受体通常需要与激活受体一起工作以进行免疫调节52。这些受体能够启动免疫相关的原发性信号转导吗？在这里，发明人获得了对这两个问题的肯定答案。其鉴定了急性单核细胞白血病肿瘤发展和免疫逃逸的新机制，并且还证明了含有ITIM的受体能够在肿瘤细胞中启动原发性免疫逃逸信号转导。为了逃避免疫攻击，急性单核细胞白血病依赖于LILRB4对T细胞的抑制；与此前的发现不同的是53，这些数据表明LILRB4在癌细胞中的胞内信号转导是这种免疫抑制所需要的。一致地，LILRB4引导肿瘤细胞向包括免疫豁免位点的内脏器官/组织迁移。值得注意的是，这也解释了单核细胞AML的特征性髓外浸润。
如发明人所证实的，急性单核细胞白血病的肿瘤侵袭机制是独特的。与通过PD-L1/PD-1接合(engagement)所示例的细胞-细胞接触的直接免疫抑制不同，这些白血病细胞利用LILRB4介导的信号转导浸入组织并抑制T细胞活性-从而产生新的免疫抑制微环境。这些发现表明需要与现有策略不同的肿瘤阻断策略以治疗急性单核细胞白血病。
LILRB4可能成为急性单核细胞白血病的致命弱点，因此是治疗这种疾病的理想靶点。靶向LILRB4可以重新激活多种免疫细胞类型(包括T细胞和可能的单核细胞/巨噬细胞)，阻止肿瘤浸润至组织/器官，以及直接杀死肿瘤细胞(通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性或吞噬作用)，从而完美地与免疫疗法和靶向疗法联用。此外，抗-LILRB4可以将白血病细胞从骨髓动员到外周血去(图37a-c)并且将LILRB4靶向与其他疗法(如化疗)组合可能是有益的，因为抗-LILRB4治疗导致白血病细胞从小生境迁移到血流中，在这里这些细胞可能对细胞毒性化疗更敏感(图38a-e)。重要的是，急性单核细胞白血病LILRB4的功能依赖性表明LILRB4下调导致LILRB4阻断策略耐药性的可能性很低。更进一步地，因为LILRB4在正常单核细胞上的表达受限22，但是其在人单核细胞AML细胞上高水平表达，并且抗-LILRB4阻断抗体不影响正常HSC归巢(图39)以及人脐带血细胞重构小鼠中的正常造血功能(图40)，所以靶向LILRB4可能具有极低毒性。
除了AML以外，LILRB4可能在其他造血系统恶性肿瘤和实体癌症中发挥作用。LILRB4在慢性淋巴细胞白血病12以及某些实体癌症细胞中上调2210,16,17。LILRB4还在肿瘤相关巨噬细胞，骨髓来源的抑制细胞以及致耐受树突状细胞上表达2210,16,17，这可能有助于多种肿瘤的免疫抑制环境。在AML中推断的这些结果可能表明LILRB4可能促进LILRB4阳性实体癌细胞的转移。而且，据报道单核细胞是IL-6的来源，IL-6是造成一些免疫疗法中威胁生命的细胞因子释放综合征的主要细胞因子54。因此，靶向这些LILRB4阳性的单核细胞可以控制细胞因子释放综合征。可以证明阻断LILRB4信号转导是一种用于治疗不同类型癌症且具有最低副作用的新策略。
实施例2–材料和方法
小鼠:C57BL/6J和NOD-scid IL2Rγ裸(NSG)小鼠购自德克萨斯大学西南医学中心(UTSW)的中心动物房并饲养在此处。APOE-缺失小鼠如此前所述55。所有动物实验均经动物保护委员会批准进行。
嵌合受体报告细胞:如此前所述，发明人构建了稳定的嵌合受体报告细胞系统231以检测配体与单独的LILRB、PirB和gp49B1的ECD结合以及触发成对免疫球蛋白样受体β化学融合的胞内域激活或抑制的能力，其中通过适体DAP-12发出信号以激活NFAT启动子。如果激动剂或拮抗剂结合ECD并活化或抑制嵌合信号转导结构域，则分别观察到GFP表达的增加或减少。
使用APOE竞争测定筛选LILRB4阻断抗体。简言之，在37℃下将APOE蛋白在96孔板上预包被3小时。使用PBS洗涤2次后，将2x104个LILRB4报告细胞接种在各孔中；同时，将所示抗-LILRB4抗体加入培养基中。16小时后，通过流式细胞术分析GFP+报告细胞的百分率。
使用K562共培养测定筛选可以增强LILRB4活性的抗-LILRB4抗体。简言之，将2x104个LILRB4报告细胞与2x104个K562细胞混合并在96孔板的孔中培养；同时，将所示抗-LILRB4抗体加入培养基中。16小时后，通过流式细胞术分析小鼠CD45+GFP+细胞的百分率。
流式细胞术:为了对小鼠AML细胞进行流式细胞术分析，使用抗-Mac-1-APC(M1/70，BD Pharmingen)、抗-Gr-1-PE(RB6-8C5，BD Pharmingen)、抗-CD3-APC(145-2C11、BDPharmingen)、抗-B220-PE(RA3-6B2、BD Pharmingen)或抗-Kit-PE(B8，BD Pharmingen)单克隆抗体对外周血或骨髓细胞染色。为了在NSG小鼠中对人造血移植进行分析，使用此前已发表的方案2,56,57。发明人使用抗-人CD45-PE(HI30，BD Pharmingen)、抗-人CD34-FITC(555821，BD Pharmingen)、抗-人CD19-PE(HIB19，eBioscience)、抗-人CD20-PE(555623，BDPharmingen)、抗-人CD11b-APC(ICRF44，eBioscience)、抗-人LILRB4-APC(ZM4.1，eBioscience)、抗-人CD14-APC(61D3，eBioscience)、抗-人CD4-APC(RPA-T4，eBioscience)、抗-人CD8-PE(555367，BD Pharmingen)、抗-人CD28-APC(CD28.2，eBioscience)和抗-人CD40L-APC(24-31，eBioscience)抗体对不同的人造血谱系细胞的移植进行定量。
病毒构建/感染和AML移植:为了进行病毒包装，将逆转录病毒构建体MSCV-MLL-AF9-IRES-YFP、XZ201-IRES-GFP、XZ201-LILRB4-IRES-GFP与PCL-ECO混合(2:1)，随后使用Lipofectamine 2000(Invitrogen,CA)转染至293T细胞。在转染后48-72小时收集含病毒的上清液并用于如此前所述的感染58。通过球后注射将经感染的小鼠Lin-细胞(3x 105)或小鼠白血病C1498细胞(1x 106)移植入经致死剂量照射(1,000rad)或经亚致死剂量照射(250rad)的C57BL/6J小鼠(6-8周龄)中。C1498细胞购自ATCC。对于二次移植而言，发明人使用FACS从原代受体小鼠分离YFP+BM细胞，并将3000个细胞移植入包括野生型C57BL/6J和APOE-裸小鼠在内的未经照射的受体小鼠中。其监测了生存期，检查了骨髓、脾脏和肝脏的尺寸和组织学性质以及分析了在外周血、骨髓、脾脏和肝脏中的白血病细胞数和浸润情况。其还使用流式细胞术确定了不同白血病细胞的群。
人和小鼠的白血病细胞:原代人AML样品来自UTSW。根据UTSW机构审查委员会审查和批准的方案获得知情同意。UTSW病例群包括105名AML患者，代表了AML亚型M1(n＝9)、M2(n＝34)、M3(n＝10)、M4(n＝34)、M5(n＝25)、M6(n＝2)和M7(n＝1)以及未分化白血病(AUL；n＝1)和暂时性骨髓增殖性病症(TAM；n＝2)的患者。通过流式细胞术分析样品中LILRB4的表达。在37℃，5％CO2和正常水平O2的条件下，在补充了10％FBS的RPMI-1640中培养人白血病细胞(THP-1、MV4-11和U937)和小鼠白血病细胞(WEHI-3)(购自ATCC)。在37℃，5％CO2和正常水平O2的条件下，在补充了10％FBS的DMEM中培养小鼠白血病细胞(C1498)(购自ATCC)。
TCGA分析。数据来自TCGA急性髓性白血病数据库(版本：2015年10月29日)。将患者分成AML亚型M0(n＝16)、M1(n＝42)、M2(n＝39)、M3(n＝16)、M4(n＝35)、M5(n＝18)、M6(n＝2)、M7(n＝3)；两例未按亚型分类。通过RNAseq(IlluminaHiSeq)确定LILRB4mRNA的水平。报告经RESM归一化的计数，并用UCSC Xena(xena.ucsc.edu)显示数据。为了分析总生存期，根据其是否具有高(n＝55)、中(n＝48)或低(n＝57)LILRB4表达，将具有可用生存期数据的160名患者分成三组。
生物层干涉法:在Octet RED96(ForteBio,Pall Corporation)上进行LILRB4-Fc与APOE2、APOE3和APOE4之间的结合相互作用分析。使用蛋白A浸入和读取生物传感器(ForteBio)进行所有的相互作用研究。在30℃下使用Octet Red和动力学缓冲液进行所有的结合实验。在监测APOE的结合(300s)和解离(600s)之前在动力学缓冲液中洗涤LILRB4-Fc包被的生物传感器(使用25μg/ml LILRB4-Fc负载420s)。使用仅负载LILRB4-Fc的参照传感器测量背景波长偏移。
微量热泳动(MST):在Monolith NT.115系统(NanoTemper Technologies)上使用80％LED和20％IR-激光功率进行MST实验。将激光开关时间分别设为30s和5s。使用4488-NHS(NanoTemper Technologies)标记重组LILRB4-ECD蛋白(SinoBio)并以终浓度5.9nM应用。在PBS中制备未标记His-APOE((#CI06,Novoprotein)的两倍系列稀释物，并将各稀释点类似地转移至LILRB4-ECD溶液中。His-APOE的终浓度范围从12μM至0.36nM。将样品充入标准处理的毛细管(NanoTemper Technologies)中进行测量。
肿瘤细胞/T细胞共培养测定:在U型底96孔板中将从健康供体外周血分离的T细胞(PB009-1-0,Allcells)与经照射(28Gy)的THP-1细胞共培养3-7天。将抗-CD3/CD28-包被的小珠(#11161D,Thermo Fisher)、50U/ml重组人IL-2和5ng/ml重组人IL-7加入培养基中。在一些实验中，在U型底96孔板transwell插入物(孔径为3μM，#09-761-80，Thermo Fisher)的上室中培养THP-1细胞。对于原代AML或B-ALL样品，收集患者的CD3+T细胞，针对AML和B-ALL分别将患者的白血病细胞分选为CD33+和CD19+。
在96孔板中使用抗-CD3/CD28/CD137包被的小珠(11163D,Thermo Fisher)刺激从健康供体的hPBMC(Interstate Blood Bank)中分离的CD8+T细胞(每孔5x104)或不进行刺激培养2天。然后，加入5x 103个人白血病THP-1-Luc-GFP细胞以及50至500μg/ml的抗-LILRB4抗体C84或对照抗体mIgG。第7天在三复孔中确定细胞数。将抗-CD8和抗-CD28用于检测人CTL细胞；THP-1细胞对GFP是阳性的。使用人细胞因子阵列(AAH-CYT-6,RayBiotech)将使用C84或mIgG处理的经刺激的CTL细胞与THP-1细胞共培养物的细胞上清液用于检查细胞因子产生情况。该实验重复三次，具有相似结果。
Transwell测定:为了检测细胞的可塑性，使用CFSE(Invitrogen)标记1x 105个MV4-11细胞，给予100μg/ml抗-LILRB4抗体C84或对照抗体mIgG，并将其在transwell板(Corning)的孔的上室培养。18h后，计数下室中的细胞。为检测AML细胞迁移通过内皮细胞的能力，在transwell膜上培养3x 105个人脐静脉内皮细胞(HUVEC)。3天后，将1x 105个CFSE-标记的MV4-11细胞接种在含100μg/mlC84或mIgG的上室中。18h后，计数下室中的细胞。
白血病和HSC细胞的归巢和动员:将CFSE-标记的MV4-11细胞(每只小鼠5x106个细胞)静脉注射至NSG小鼠。在注射白血病细胞后，立即给予动物200μg对照抗体mIgG或抗-LILRB4抗体C84或10％血清。8或20h后处死小鼠。收集外周血、骨髓、肝脏和脾脏，并通过流式细胞术检测单细胞悬液。将CFSE或抗-人CD45用于检测人白血病细胞。以相对于外周血的细胞数百分比报告在受体肝脏、脾脏和骨髓中的白血病细胞数。为检测HSC归巢情况，将1x107个人脐带血单核细胞静脉注射至NSG小鼠。在注射单核细胞后，立即给予小鼠200μgmIgG或C84，20h后处死小鼠。将抗-人CD45和抗-人CD34用于通过流式细胞术检测人HSC。为检测小鼠白血病细胞的归巢情况，将5x 106个C1498-GFP-hLILRB4细胞或C1498-GFP静脉注射至野生型C57BL/6J或APOE-裸小鼠。20h后处死小鼠。将GFP用于通过流式细胞术检测白血病细胞。将在受体肝脏、脾脏和骨髓中的白血病细胞数归一化至在外周血中的相应细胞数量，并以百分率报告。为检测白血病细胞的动员情况，将5x 106个MV4-11细胞静脉注射至每只NSG小鼠。移植3天后，静脉注射给予小鼠200μg C84或mIgG。将首次给药当天指定为第0天。然后，在次日分别给予小鼠另一剂200μg C84或mIgG。在首次施用抗体后4hr(在第0天)以及第1天和第4天检测外周血中的白血病细胞。在第4天处死小鼠。将抗-人CD45用于通过流式细胞术检测人白血病细胞。
人AML移植瘤:基本上如所述的进行移植瘤2,3,56,59。简言之，将6-8周龄的NSG小鼠用于移植。将人白血病细胞重悬于200μl含1％FBS的PBS中。通过尾静脉注射给予小鼠1x106个人培养的白血病细胞或5至10x 106个人原代AML细胞。移植后1至4个月，评估外周血、骨髓、脾脏和肝脏的植入情况。
对于hPBMC移植瘤模型而言，将1x 107个人PBMC静脉注射至每只NSG小鼠。接种3周后，小鼠具有30至50％的人T细胞植入。接种3周后，皮下接种1x106个稳定表达荧光素酶的人AML THP-1细胞(THP-1-Luc-GFP细胞)。立即静脉给予小鼠200μg C84或mIgG，每两周给予一次直至处死。通过发光成像监测肿瘤生长随时间变化情况。
对于人脐带血(hCB)HSC重构移植瘤模型而言，通过球后途径将3x 104个人脐带血CD34+细胞静脉注射至经亚致死剂量照射(2.5Gy)的6-8周龄NSG小鼠中。如此前所述56,57,60，通过流式细胞术在移植后第21天至第41天之间的多个时间点确证多谱系人造血重构情况。在第42天，静脉接种1x 106个人THP-1-Luc-GFP细胞。通过静脉注射立即给予小鼠200μgC84或小鼠IgG。通过发光成像监测肿瘤生长随时间变化情况。通过流式细胞术在白血病细胞移植后第12天至第24天之间的多个时间点检测多谱系人造血重构情况。将CD19和CD20用于鉴定人B细胞；将CD11b、CD14和LILRB4用于人髓细胞；CD4、CD8、CD28和CD40L用于人T细胞群。
对于生存曲线实验，当将濒死动物处死时，记录小鼠死亡。
在AML细胞中基于CRISPR/Cas9的LILRB4敲除:使用表达多西环素诱导的Cas9的慢病毒(pCW-Cas9,Addgene 50661)感染THP1细胞。用1μg/ml嘌呤霉素选择后，使用表达sgRNA的慢病毒感染存活细胞，所述慢病毒由使用GFP替代puro-mcherry以进行分选的经修饰的pSLQ1651(Addgene 51024)质粒产生。将通过在线工具(http://crispr.mit.edu)设计的一个对照sgRNA(对照sgRNA 5’-GAACGACTAGTTAGGCGTGTA-3’(SEQ ID NO:1))和三个LILRB4靶向sgRNA(sgRNA1 5’-TGTTACTATCGCAGCCCTGT-3’(SEQ ID NO:2)；sgRNA2 5’-GTAGGTCCCCCCGTGCACTG-3’(SEQ ID NO:3)；sgRNA3 5’-CCTGTGACCTCAGTGCACGG-3’(SEQ IDNO:4))分别克隆至sgRNA质粒。使用1μg/ml多西环素处理1周后，使用抗-LILRB4抗体对这些细胞染色，并将LILRB4阴性细胞分选为LILRB4敲除细胞。
SDS-PAGE和胞质/核蛋白分离:对于SDS-PAGE，将样品与含有β-巯基乙醇(BME)的4x上样缓冲液混合，并上样至10％SDS凝胶上。通过NE-核/胞质提取试剂盒(#78833,ThermoFisher)分离核和胞质细胞区室，并将这些蛋白提取物与含有β-巯基乙醇(BME)的4x上样缓冲液混合，并上样至10％SDS凝胶上。抗-SHP-1(#3759)、抗-SHP-2(#3397)、抗-SHIP(#2727)、抗-磷酸-SHP-2(Tyr580)(#3703)、抗-Nf-kB p65(#8242)、抗-IKKa(#11930)、抗-IKKb(#8943)、抗-磷酸-IKKa/b(Ser176/180)(#2697)、抗-磷酸-Stat1(Tyr701)(#7649)、抗-磷酸-Stat-3(Ser727)(#9134)、抗-Lamin-B2(#12255)和抗-精氨酸酶-1(#9819)购自Cell Signaling Technology Inc。抗-uPAR抗体(MON R-4-02,Thermo Fisher)和抗-α-微管蛋白(#MABT205,Sigma)购自其他公司。
RNA-seq分析。根据生产厂商的说明书，使用Qiagen RNeasy Mini试剂盒从分选细胞中纯化RNA，然后使用SuperScript III逆转录酶(Invitrogen)逆转录。在UTSW基因组学和微阵列中心实验室进行RNA-seq。使用Covaris S2超声仪对cDNA进行超声处理，并用KAPA高通量文库制备试剂盒制备文库。对样品进行末端修复，将3′末端腺苷酸化并用多重适体进行条形码编码。使用AmpureXP小珠纯化PCR-扩增的文库并在Agilent 2100生物分析仪上进行验证。在归一化和混合前，通过Qubit(Invitrogen)对样品定量，然后使用PE100SBS v3试剂在Illumina Hiseq 2500仪器上运行以产生51-bp单端读数。作图前，修剪读数以除去末端低质量区。使用来自Illumina的具有UCSC iGenomes GTF文件的TopHat v2.0.1227将经修剪的读数定位到人类基因组(HM19)上。
数据归一化和分析的方法基于使用“内部标准品”来表征系统行为的一些方面，例如技术可变性，如其他地方所示的。将log2(变化倍数)>2，P<0.01且RPKM>0.1的基因视为在两种情况之间的表达具有显著性差异，并将其用于通路分析和上游转录因子分析。使用DAVID(https://david.ncifcrf.gov/tools.jsp)进行通路分析。使用QIAGEN的Ingenuity工具进行上游转录因子分析。通过分层聚类(Cluster and Java Treeview)将基因热图聚类。
定量RT–PCR:根据所提供的方案，使用RNAeasy试剂盒(QIAGEN)提取总RNA并使用SuperScript III逆转录酶(Invitrogen)逆转录为cDNA。利用表2中所列的引物使用SYBRGreen Master Mix(Bio-Rad)进行实时PCR。将mRNA水平归一化为同一样品中存在的GAPDH或18S rRNA转录物的水平。
统计分析:数据以平均值±SEM表示。使用Student t检验分析数据并将p<0.05认为具有统计学显著性。使用对数秩检验分析两组的存活率并将p<0.05认为具有统计学显著性。在所有图中，*表示p<0.05；**表示p<0.01；***表示p<0.001；****表示p<0.0001；否则，p值以精确值表示。
表1：将来自UTSW病例群的8例AML患者样品用于小鼠移植瘤模型
Figure BDA0002005612410000361
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根据本公开的内容，无需过度实验即可进行和执行本申请所公开的和所要求保护的所有方法。尽管已在优选的实施方式中对本公开内容的组合物和方法进行了描述，但是对本领域技术人员显而易见的是在不脱离本公开内容的概念、主旨和范围的前提下，可以对本申请所述方法以及所述方法的步骤或步骤的顺序进行改变。更具体的，可以使用化学和生理学相关的某些试剂代替本申请所述的试剂，同时获得相同或相似的结果，这将是显而易见的。将对本领域技术人员而言是显而易见的所有此类相似的替代和修订均视为在由所附权利要求所定义的本公开内容的主旨、范围和概念之内。
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将下述参考文献具体地通过引用并入本申请，其提供了对本申请所述的那些示例性程序或其他细节的补充。
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序列表
<110> 德克萨斯大学体系董事会
C·张
Z·安
N·张
M·邓
J·金
X·桂
<120> 用于鉴定LILRB阻断抗体的方法
<130> UTFH.P0332WO
<150> 62368672
<151> 2016-07-29
<160> 196
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对照sgRNA
<400> 1
gaacgactag ttaggcgtgt a 21
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> sgRNA1
<400> 2
tgttactatc gcagccctgt 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> sgRNA2
<400> 3
gtaggtcccc ccgtgcactg 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> sgRNA3
<400> 4
cctgtgacct cagtgcacgg 20
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 5
tggcaaaacg tcttcaggag g 21
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 6
agcttgactt agtggctttg g 21
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 7
aactcatttt gcggtcgcta t 21
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 8
tccctgaatt gctcgctcac 20
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 9
accctgacca tccaagtcaa a 21
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
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ttggcctcgc atcttagaaa g 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
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accgctttgc ggaatctca 19
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
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aggtcaggga aacatcaggg a 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 13
actcacctct tcagaacgaa ttg 23
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 14
ccatctttgg aaggttcagg ttg 23
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
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agagctgtga taagccagtt cc 22
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 16
aattcctcga aagtgaagtg tgt 23
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 17
agttctctgc atcacttgct g 21
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 18
cggcttcgct tggttaggaa 20
<210> 19
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 19
atcagagctg ggctgcgata 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 20
caggtcgaac gactctctcc 20
<210> 21
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 21
atgatggctt attacagtgg caa 23
<210> 22
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 22
gtcggagatt cgtagctgga 20
<210> 23
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 23
atgcccagac atctgtgtcc 20
<210> 24
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 24
ggggtctcta tgcccaacaa 20
<210> 25
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 25
cagccagatg caatcaatgc c 21
<210> 26
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 26
tggaatcctg aacccacttc t 21
<210> 27
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 27
cagccgcagg gttctctac 19
<210> 28
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 28
gatctggcag aagacgatgg t 21
<210> 29
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 29
cagcgagtgg accagatcc 19
<210> 30
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 30
ccaaagagga ggtagtggct atc 23
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 31
cagcttgact caaaattcct gga 23
<210> 32
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 32
tgaagattac gcttgctttt cct 23
<210> 33
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 33
ccaacgtgac ggacttccc 19
<210> 34
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 34
tacacgacta tgcggtacag c 21
<210> 35
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 35
ccaagcccgg aattgtcttc a 21
<210> 36
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 36
gggttggtac agacggaatg g 21
<210> 37
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 37
ccagctttac tcgcacagc 19
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 38
agccttggaa tcatcactcc c 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 39
ccgacagatt ccacagaa 18
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 40
ttggttagga agatgacact 20
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<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 41
ccggaggcgc tttactacc 19
<210> 42
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 42
taggggtgta ggcaggttca c 21
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<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 43
cctgcgcctc aagaccttc 19
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 44
gtcactgcgc tccagtagaa 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 45
cgcatctcct ccatactc 18
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 46
acctaataca ataatacagc acat 24
<210> 47
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 47
ctcagggaca acagtcagtt c 21
<210> 48
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 48
acagggctat cagggagca 19
<210> 49
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 49
ctcctgcaag agtttgatgt cc 22
<210> 50
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 50
tcatgccgat gtcatggtag g 21
<210> 51
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 51
ctgaaccgta agcccattga g 21
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<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 52
cgctccacac cacgatgac 19
<210> 53
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 53
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<210> 54
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 54
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 55
ctgtgctgat cccagtgaat c 21
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<212> DNA
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<220>
<223> 引物
<400> 56
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 57
gctcctcact gttgttctac g 21
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<212> DNA
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<220>
<223> 引物
<400> 58
cgggccgctg aaagtcatt 19
<210> 59
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<212> DNA
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<220>
<223> 引物
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<210> 60
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<220>
<223> 引物
<400> 60
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<210> 61
<211> 22
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<220>
<223> 引物
<400> 61
ggagtcgaga catcttgact ga 22
<210> 62
<211> 21
<212> DNA
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<220>
<223> 引物
<400> 62
atgaggaccg ttttatgggc t 21
<210> 63
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 63
gtggcattca aggagtacct c 21
<210> 64
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 64
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<210> 65
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 65
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 66
ccccagaaaa tggttcacgc t 21
<210> 67
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 67
tacaggctgg ctcaggacta t 21
<210> 68
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 68
cgcaacattt tgtagcactc tg 22
<210> 69
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 69
tcaggctgtt tgtctctgaa gg 22
<210> 70
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 70
catgctctca tactgacacc ac 22
<210> 71
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 71
tcattgccac gtacaggctc 20
<210> 72
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 72
gggtcgggct tgatgatgtg 20
<210> 73
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 73
tcccaggccc agttcataaa t 21
<210> 74
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 74
tgctttgtga gatgtaggag gt 22
<210> 75
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 75
tcctgtggaa gatcaccaat gt 22
<210> 76
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 76
gcaggcacaa cttgtagcc 19
<210> 77
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 77
tgaggtcacg gacgattaca t 21
<210> 78
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 78
gtaggcccac gaaacaaatg at 22
<210> 79
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 79
tgctgtacca agagtttgct c 21
<210> 80
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 80
cgcacacaga caactttttc ttt 23
<210> 81
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 81
tggagagcta cacaagaatc acc 23
<210> 82
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 82
tggtccagat gcttcatgga a 21
<210> 83
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 83
tggtagtagc aaccaacggg a 21
<210> 84
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 84
actttgattg agggcgtcat tc 22
<210> 85
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 85
tgtatatgtc atctcagt 18
<210> 86
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 86
taataacaat atgcttcca 19
<210> 87
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 87
tgttggccca atggattgaa a 21
<210> 88
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 88
ggaaacacga cctaactgtt cat 23
<210> 89
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 89
ttcagtatca caacctcagc aag 23
<210> 90
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 90
tggacctgca agttaaaatc cc 22
<210> 91
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 91
ttttgccaag gagtgctaaa ga 22
<210> 92
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 92
aaccctctgc acccagtttt c 21
<210> 93
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 93
ggagcgagat ccctccaaaa t 21
<210> 94
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 94
ggctgttgtc atacttctca tgg 23
<210> 95
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 95
catgtacgtt gctatccagg c 21
<210> 96
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 96
ctccttaatg tcacgcacga t 21
<210> 97
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 97
gtaacccgtt gaaccccatt 20
<210> 98
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 98
ccatccaatc ggtagtagcg 20
<210> 99
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 99
cagcagcttg acacacggta 20
<210> 100
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 100
aaacaccaaa gtggcatgtg a 21
<210> 101
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 101
ttgcctcgga gatcggagaa 20
<210> 102
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 102
ttcctcggaa tagccaccat c 21
<210> 103
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 103
ctcagcggta cttggaccc 19
<210> 104
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 104
cgagtggcaa agtcaatacc t 21
<210> 105
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 105
ctatcgacgc ccctaagact t 21
<210> 106
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 106
catcgctggg ccttactct 19
<210> 107
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 107
cggagcgcaa atacctgaag 20
<210> 108
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 108
ggttgatgat ggtgcgactg t 21
<210> 109
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 109
accacttgga atgaaattgg aca 23
<210> 110
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 110
gcggtgtgtt ataggagact ct 22
<210> 111
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 111
tccttggggc tagatggttt c 21
<210> 112
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 112
tccacgatca catggttctt tg 22
<210> 113
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 113
gactttaagg gttacctggg ttg 23
<210> 114
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 114
tcacatgcgc cttgatgtct g 21
<210> 115
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 115
aggttgggat tcgtgtctgg 20
<210> 116
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 116
agttgtttgt agttctcagg cag 23
<210> 117
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 117
accctcatct atatcctttg gca 23
<210> 118
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 118
caccaacgga accgaccag 19
<210> 119
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 119
gcaccatgca caactacctg t 21
<210> 120
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 120
attcgccacc gatggcatag 20
<210> 121
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 121
tcaccaagag ggtatctacc g 21
<210> 122
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 122
gtgcccttag gaaactcgtc t 21
<210> 123
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 123
ggactcccct tagcaacgtg 20
<210> 124
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 124
aggacatttg agagggtgtg a 21
<210> 125
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 125
cgaggggtga gcttatggaa c 21
<210> 126
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 126
gctttcccgt tgtagtcgaa ta 22
<210> 127
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 127
tgtaagacca acggggattg c 21
<210> 128
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 128
agccagtccg atagctcagg 20
<210> 129
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 129
accaccttat accagcgtta tga 23
<210> 130
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 130
ggtgtagacg aaccggatgt c 21
<210> 131
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 131
gctgcgagtg caagatcac 19
<210> 132
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 132
tggtgcccgt tgatgttctt c 21
<210> 133
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 133
tcaccgcttc agaaaaccac c 21
<210> 134
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 134
ggtccactgt gcaagaagag a 21
<210> 135
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 135
tgaaacatca gacgtggtgt g 21
<210> 136
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 136
tgcaaatatc cgtggatgaa gtc 23
<210> 137
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 137
ccagcagtcg tctttgtcac 20
<210> 138
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 138
ctctgggttg gcacacactt 20
<210> 139
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 139
gtggaaactt gcatggacaa c 21
<210> 140
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 140
aatcctggca catcgggaat c 21
<210> 141
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 141
cgcgagtgca ttccatcct 19
<210> 142
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 142
tccaaagtct tttaggtggc ag 22
<210> 143
<211> 1953
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(1953)
<223> cDNA LILRB1
<400> 143
atgaccccca tcctcacggt cctgatctgt ctcgggctga gtctgggccc ccggacccac 60
gtgcaggcag ggcacctccc caagcccacc ctctgggctg aaccaggctc tgtgatcacc 120
caggggagtc ctgtgaccct caggtgtcag gggggccagg agacccagga gtaccgtcta 180
tatagagaaa agaaaacagc accctggatt acacggatcc cacaggagct tgtgaagaag 240
ggccagttcc ccatcccatc catcacctgg gaacacacag ggcggtatcg ctgttactat 300
ggtagcgaca ctgcaggccg ctcagagagc agtgaccccc tggagctggt ggtgacagga 360
gcctacatca aacccaccct ctcagcccag cccagccccg tggtgaactc aggagggaat 420
gtaaccctcc agtgtgactc acaggtggca tttgatggct tcattctgtg taaggaagga 480
gaagatgaac acccacaatg cctgaactcc cagccccatg cccgtgggtc gtcccgcgcc 540
atcttctccg tgggccccgt gagcccgagt cgcaggtggt ggtacaggtg ctatgcttat 600
gactcgaact ctccctatga gtggtctcta cccagtgatc tcctggagct cctggtccta 660
ggtgtttcta agaagccatc actctcagtg cagccaggtc ctatcgtggc ccctgaggag 720
accctgactc tgcagtgtgg ctctgatgct ggctacaaca gatttgttct gtataaggac 780
ggggaacgtg acttccttca gctcgctggc gcacagcccc aggctgggct ctcccaggcc 840
aacttcaccc tgggccctgt gagccgctcc tacgggggcc agtacagatg ctacggtgca 900
cacaacctct cctccgagtg gtcggccccc agcgaccccc tggacatcct gatcgcagga 960
cagttctatg acagagtctc cctctcggtg cagccgggcc ccacggtggc ctcaggagag 1020
aacgtgaccc tgctgtgtca gtcacaggga tggatgcaaa ctttccttct gaccaaggag 1080
ggggcagctg atgacccatg gcgtctaaga tcaacgtacc aatctcaaaa ataccaggct 1140
gaattcccca tgggtcctgt gacctcagcc catgcgggga cctacaggtg ctacggctca 1200
cagagctcca aaccctacct gctgactcac cccagtgacc ccctggagct cgtggtctca 1260
ggaccgtctg ggggccccag ctccccgaca acaggcccca cctccacatc tggccctgag 1320
gaccagcccc tcacccccac cgggtcggat ccccagagtg gtctgggaag gcacctgggg 1380
gttgtgatcg gcatcttggt ggccgtcatc ctactgctcc tcctcctcct cctcctcttc 1440
ctcatcctcc gacatcgacg tcagggcaaa cactggacat cgacccagag aaaggctgat 1500
ttccaacatc ctgcaggggc tgtggggcca gagcccacag acagaggcct gcagtggagg 1560
tccagcccag ctgccgatgc ccaggaagaa aacctctatg ctgccgtgaa gcacacacag 1620
cctgaggatg gggtggagat ggacactcgg agcccacacg atgaagaccc ccaggcagtg 1680
acgtatgccg aggtgaaaca ctccagacct aggagagaaa tggcctctcc tccttcccca 1740
ctgtctgggg aattcctgga cacaaaggac agacaggcgg aagaggacag gcagatggac 1800
actgaggctg ctgcatctga agccccccag gatgtgacct acgcccagct gcacagcttg 1860
accctcagac gggaggcaac tgagcctcct ccatcccagg aagggccctc tccagctgtg 1920
cccagcatct acgccactct ggccatccac tag 1953
<210> 144
<211> 650
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(650)
<223> LILRB1
<400> 144
Met Thr Pro Ile Leu Thr Val Leu Ile Cys Leu Gly Leu Ser Leu Gly
1 5 10 15
Pro Arg Thr His Val Gln Ala Gly His Leu Pro Lys Pro Thr Leu Trp
20 25 30
Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile Thr Gln Gly Ser Pro Val Thr Leu Arg
35 40 45
Cys Gln Gly Gly Gln Glu Thr Gln Glu Tyr Arg Leu Tyr Arg Glu Lys
50 55 60
Lys Thr Ala Leu Trp Ile Thr Arg Ile Pro Gln Glu Leu Val Lys Lys
65 70 75 80
Gly Gln Phe Pro Ile Pro Ser Ile Thr Trp Glu His Ala Gly Arg Tyr
85 90 95
Arg Cys Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Ala Gly Arg Ser Glu Ser Ser Asp
100 105 110
Pro Leu Glu Leu Val Val Thr Gly Ala Tyr Ile Lys Pro Thr Leu Ser
115 120 125
Ala Gln Pro Ser Pro Val Val Asn Ser Gly Gly Asn Val Ile Leu Gln
130 135 140
Cys Asp Ser Gln Val Ala Phe Asp Gly Phe Ser Leu Cys Lys Glu Gly
145 150 155 160
Glu Asp Glu His Pro Gln Cys Leu Asn Ser Gln Pro His Ala Arg Gly
165 170 175
Ser Ser Arg Ala Ile Phe Ser Val Gly Pro Val Ser Pro Ser Arg Arg
180 185 190
Trp Trp Tyr Arg Cys Tyr Ala Tyr Asp Ser Asn Ser Pro Tyr Glu Trp
195 200 205
Ser Leu Pro Ser Asp Leu Leu Glu Leu Leu Val Leu Gly Val Ser Lys
210 215 220
Lys Pro Ser Leu Ser Val Gln Pro Gly Pro Ile Val Ala Pro Glu Glu
225 230 235 240
Thr Leu Thr Leu Gln Cys Gly Ser Asp Ala Gly Tyr Asn Arg Phe Val
245 250 255
Leu Tyr Lys Asp Gly Glu Arg Asp Phe Leu Gln Leu Ala Gly Ala Gln
260 265 270
Pro Gln Ala Gly Leu Ser Gln Ala Asn Phe Thr Leu Gly Pro Val Ser
275 280 285
Arg Ser Tyr Gly Gly Gln Tyr Arg Cys Tyr Gly Ala His Asn Leu Ser
290 295 300
Ser Glu Trp Ser Ala Pro Ser Asp Pro Leu Asp Ile Leu Ile Ala Gly
305 310 315 320
Gln Phe Tyr Asp Arg Val Ser Leu Ser Val Gln Pro Gly Pro Thr Val
325 330 335
Ala Ser Gly Glu Asn Val Thr Leu Leu Cys Gln Ser Gln Gly Trp Met
340 345 350
Gln Thr Phe Leu Leu Thr Lys Glu Gly Ala Ala Asp Asp Pro Trp Arg
355 360 365
Leu Arg Ser Thr Tyr Gln Ser Gln Lys Tyr Gln Ala Glu Phe Pro Met
370 375 380
Gly Pro Val Thr Ser Ala His Ala Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ser
385 390 395 400
Gln Ser Ser Lys Pro Tyr Leu Leu Thr His Pro Ser Asp Pro Leu Glu
405 410 415
Leu Val Val Ser Gly Pro Ser Gly Gly Pro Ser Ser Pro Thr Thr Gly
420 425 430
Pro Thr Ser Thr Ser Gly Pro Glu Asp Gln Pro Leu Thr Pro Thr Gly
435 440 445
Ser Asp Pro Gln Ser Gly Leu Gly Arg His Leu Gly Val Val Ile Gly
450 455 460
Ile Leu Val Ala Val Ile Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Phe
465 470 475 480
Leu Ile Leu Arg His Arg Arg Gln Gly Lys His Trp Thr Ser Thr Gln
485 490 495
Arg Lys Ala Asp Phe Gln His Pro Ala Gly Ala Val Gly Pro Glu Pro
500 505 510
Thr Asp Arg Gly Leu Gln Trp Arg Ser Ser Pro Ala Ala Asp Ala Gln
515 520 525
Glu Glu Asn Leu Tyr Ala Ala Val Lys His Thr Gln Pro Glu Asp Gly
530 535 540
Val Glu Met Asp Thr Arg Ser Pro His Asp Glu Asp Pro Gln Ala Val
545 550 555 560
Thr Tyr Ala Glu Val Lys His Ser Arg Pro Arg Arg Glu Met Ala Ser
565 570 575
Pro Pro Ser Pro Leu Ser Gly Glu Phe Leu Asp Thr Lys Asp Arg Gln
580 585 590
Ala Glu Glu Asp Arg Gln Met Asp Thr Glu Ala Ala Ala Ser Glu Ala
595 600 605
Pro Gln Asp Val Thr Tyr Ala Gln Leu His Ser Leu Thr Leu Arg Arg
610 615 620
Glu Ala Thr Glu Pro Pro Pro Ser Gln Glu Gly Pro Ser Pro Ala Val
625 630 635 640
Pro Ser Ile Tyr Ala Thr Leu Ala Ile His
645 650
<210> 145
<211> 438
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(438)
<223> LILRB1的胞外域序列
<400> 145
Gly His Leu Pro Lys Pro Thr Leu Trp Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile
1 5 10 15
Thr Gln Gly Ser Pro Val Thr Leu Arg Cys Gln Gly Gly Gln Glu Thr
20 25 30
Gln Glu Tyr Arg Leu Tyr Arg Glu Lys Lys Thr Ala Leu Trp Ile Thr
35 40 45
Arg Ile Pro Gln Glu Leu Val Lys Lys Gly Gln Phe Pro Ile Pro Ser
50 55 60
Ile Thr Trp Glu His Ala Gly Arg Tyr Arg Cys Tyr Tyr Gly Ser Asp
65 70 75 80
Thr Ala Gly Arg Ser Glu Ser Ser Asp Pro Leu Glu Leu Val Val Thr
85 90 95
Gly Ala Tyr Ile Lys Pro Thr Leu Ser Ala Gln Pro Ser Pro Val Val
100 105 110
Asn Ser Gly Gly Asn Val Ile Leu Gln Cys Asp Ser Gln Val Ala Phe
115 120 125
Asp Gly Phe Ser Leu Cys Lys Glu Gly Glu Asp Glu His Pro Gln Cys
130 135 140
Leu Asn Ser Gln Pro His Ala Arg Gly Ser Ser Arg Ala Ile Phe Ser
145 150 155 160
Val Gly Pro Val Ser Pro Ser Arg Arg Trp Trp Tyr Arg Cys Tyr Ala
165 170 175
Tyr Asp Ser Asn Ser Pro Tyr Glu Trp Ser Leu Pro Ser Asp Leu Leu
180 185 190
Glu Leu Leu Val Leu Gly Val Ser Lys Lys Pro Ser Leu Ser Val Gln
195 200 205
Pro Gly Pro Ile Val Ala Pro Glu Glu Thr Leu Thr Leu Gln Cys Gly
210 215 220
Ser Asp Ala Gly Tyr Asn Arg Phe Val Leu Tyr Lys Asp Gly Glu Arg
225 230 235 240
Asp Phe Leu Gln Leu Ala Gly Ala Gln Pro Gln Ala Gly Leu Ser Gln
245 250 255
Ala Asn Phe Thr Leu Gly Pro Val Ser Arg Ser Tyr Gly Gly Gln Tyr
260 265 270
Arg Cys Tyr Gly Ala His Asn Leu Ser Ser Glu Trp Ser Ala Pro Ser
275 280 285
Asp Pro Leu Asp Ile Leu Ile Ala Gly Gln Phe Tyr Asp Arg Val Ser
290 295 300
Leu Ser Val Gln Pro Gly Pro Thr Val Ala Ser Gly Glu Asn Val Thr
305 310 315 320
Leu Leu Cys Gln Ser Gln Gly Trp Met Gln Thr Phe Leu Leu Thr Lys
325 330 335
Glu Gly Ala Ala Asp Asp Pro Trp Arg Leu Arg Ser Thr Tyr Gln Ser
340 345 350
Gln Lys Tyr Gln Ala Glu Phe Pro Met Gly Pro Val Thr Ser Ala His
355 360 365
Ala Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ser Gln Ser Ser Lys Pro Tyr Leu
370 375 380
Leu Thr His Pro Ser Asp Pro Leu Glu Leu Val Val Ser Gly Pro Ser
385 390 395 400
Gly Gly Pro Ser Ser Pro Thr Thr Gly Pro Thr Ser Thr Ser Gly Pro
405 410 415
Glu Asp Gln Pro Leu Thr Pro Thr Gly Ser Asp Pro Gln Ser Gly Leu
420 425 430
Gly Arg His Leu Gly Val
435
<210> 146
<211> 1797
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(1797)
<223> LILRB2
<400> 146
atgaccccca tcgtcacagt cctgatctgt ctcgggctga gtctgggccc caggacccgc 60
gtgcagacag ggaccatccc caagcccacc ctgtgggctg agccagactc tgtgatcacc 120
caggggagtc ccgtcaccct cagttgtcag gggagccttg aagcccagga gtaccgtcta 180
tatagggaga aaaaatcagc atcttggatt acacggatac gaccagagct tgtgaagaac 240
ggccagttcc acatcccatc catcacctgg gaacacacag ggcgatatgg ctgtcagtat 300
tacagccgcg ctcggtggtc tgagctcagt gaccccctgg tgctggtgat gacaggagcc 360
tacccaaaac ccaccctctc agcccagccc agccctgtgg tgacctcagg aggaagggtg 420
accctccagt gtgagtcaca ggtggcattt ggcggcttca ttctgtgtaa ggaaggagaa 480
gatgaacacc cacaatgcct gaactcccag ccccatgccc gtgggtcgtc ccgcgccatc 540
ttctccgtgg gccccgtgag cccgaatcgc aggtggtcgc acaggtgcta tggttatgac 600
ttgaactctc cctatgtgtg gtcttcaccc agtgatctcc tggagctcct ggtcccaggt 660
gtttctaaga agccatcact ctcagtgcag ccgggtcctg tcatggcccc tggggaaagc 720
ctgaccctcc agtgtgtctc tgatgtcggc tatgacagat ttgttctgta caaggagggg 780
gaacgtgacc ttcgccagct ccctggccgg cagccccagg ctgggctctc ccaggccaac 840
ttcaccctgg gccctgtgag ccgctcctac gggggccagt acagatgcta cggtgcacac 900
aacctctcct ctgagtgctc ggcccccagc gaccccctgg acatcctgat cacaggacag 960
atccgtggca cacccttcat ctcagtgcag ccaggcccca cagtggcctc aggagagaac 1020
gtgaccctgc tgtgtcagtc atggcggcag ttccacactt tccttctgac caaggcggga 1080
gcagctgatg ccccactccg tctaagatca atacacgaat atcctaagta ccaggctgaa 1140
ttccccatga gtcctgtgac ctcagcccac gcggggacct acaggtgcta cggctcactc 1200
aactccgacc cctacctgct gtctcacccc agtgagcccc tggagctcgt ggtctcagga 1260
ccctccatgg gttccagccc cccacccacc ggtcccatct ccacacctgc aggccctgag 1320
gaccagcccc tcacccccac tgggtcggat ccccaaagtg gtctgggaag gcacctgggg 1380
gttgtgatcg gcatcttggt ggccgtcgtc ctactgctcc tcctcctcct cctcctcttc 1440
ctcatcctcc gacatcgacg tcagggcaaa cactggacat cgacccagag aaaggctgat 1500
ttccaacatc ctgcaggggc tgtggggcca gagcccacag acagaggcct gcagtggagg 1560
tccagcccag ctgccgacgc ccaggaagaa aacctctatg ctgccgtgaa ggacacacag 1620
cctgaagatg gggtggagat ggacactcgg gctgctgcat ctgaagcccc ccaggatgtg 1680
acctacgccc agctgcacag cttgaccctc agacggaagg caactgagcc tcctccatcc 1740
caggaaaggg aacctccagc tgagcccagc atctacgcca ccctggccat ccactag 1797
<210> 147
<211> 598
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(598)
<223> LILRB2
<400> 147
Met Thr Pro Ile Val Thr Val Leu Ile Cys Leu Gly Leu Ser Leu Gly
1 5 10 15
Pro Arg Thr His Val Gln Thr Gly Thr Ile Pro Lys Pro Thr Leu Trp
20 25 30
Ala Glu Pro Asp Ser Val Ile Thr Gln Gly Ser Pro Val Thr Leu Ser
35 40 45
Cys Gln Gly Ser Leu Glu Ala Gln Glu Tyr Arg Leu Tyr Arg Glu Lys
50 55 60
Lys Ser Ala Ser Trp Ile Thr Arg Ile Arg Pro Glu Leu Val Lys Asn
65 70 75 80
Gly Gln Phe His Ile Pro Ser Ile Thr Trp Glu His Thr Gly Arg Tyr
85 90 95
Gly Cys Gln Tyr Tyr Ser Arg Ala Arg Trp Ser Glu Leu Ser Asp Pro
100 105 110
Leu Val Leu Val Met Thr Gly Ala Tyr Pro Lys Pro Thr Leu Ser Ala
115 120 125
Gln Pro Ser Pro Val Val Thr Ser Gly Gly Arg Val Thr Leu Gln Cys
130 135 140
Glu Ser Gln Val Ala Phe Gly Gly Phe Ile Leu Cys Lys Glu Gly Glu
145 150 155 160
Glu Glu His Pro Gln Cys Leu Asn Ser Gln Pro His Ala Arg Gly Ser
165 170 175
Ser Arg Ala Ile Phe Ser Val Gly Pro Val Ser Pro Asn Arg Arg Trp
180 185 190
Ser His Arg Cys Tyr Gly Tyr Asp Leu Asn Ser Pro Tyr Val Trp Ser
195 200 205
Ser Pro Ser Asp Leu Leu Glu Leu Leu Val Pro Gly Val Ser Lys Lys
210 215 220
Pro Ser Leu Ser Val Gln Pro Gly Pro Val Val Ala Pro Gly Glu Ser
225 230 235 240
Leu Thr Leu Gln Cys Val Ser Asp Val Gly Tyr Asp Arg Phe Val Leu
245 250 255
Tyr Lys Glu Gly Glu Arg Asp Leu Arg Gln Leu Pro Gly Arg Gln Pro
260 265 270
Gln Ala Gly Leu Ser Gln Ala Asn Phe Thr Leu Gly Pro Val Ser Arg
275 280 285
Ser Tyr Gly Gly Gln Tyr Arg Cys Tyr Gly Ala His Asn Leu Ser Ser
290 295 300
Glu Cys Ser Ala Pro Ser Asp Pro Leu Asp Ile Leu Ile Thr Gly Gln
305 310 315 320
Ile Arg Gly Thr Pro Phe Ile Ser Val Gln Pro Gly Pro Thr Val Ala
325 330 335
Ser Gly Glu Asn Val Thr Leu Leu Cys Gln Ser Trp Arg Gln Phe His
340 345 350
Thr Phe Leu Leu Thr Lys Ala Gly Ala Ala Asp Ala Pro Leu Arg Leu
355 360 365
Arg Ser Ile His Glu Tyr Pro Lys Tyr Gln Ala Glu Phe Pro Met Ser
370 375 380
Pro Val Thr Ser Ala His Ala Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ser Leu
385 390 395 400
Asn Ser Asp Pro Tyr Leu Leu Ser His Pro Ser Glu Pro Leu Glu Leu
405 410 415
Val Val Ser Gly Pro Ser Met Gly Ser Ser Pro Pro Pro Thr Gly Pro
420 425 430
Ile Ser Thr Pro Ala Gly Pro Glu Asp Gln Pro Leu Thr Pro Thr Gly
435 440 445
Ser Asp Pro Gln Ser Gly Leu Gly Arg His Leu Gly Val Val Ile Gly
450 455 460
Ile Leu Val Ala Val Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Phe
465 470 475 480
Leu Ile Leu Arg His Arg Arg Gln Gly Lys His Trp Thr Ser Thr Gln
485 490 495
Arg Lys Ala Asp Phe Gln His Pro Ala Gly Ala Val Gly Pro Glu Pro
500 505 510
Thr Asp Arg Gly Leu Gln Trp Arg Ser Ser Pro Ala Ala Asp Ala Gln
515 520 525
Glu Glu Asn Leu Tyr Ala Ala Val Lys Asp Thr Gln Pro Glu Asp Gly
530 535 540
Val Glu Met Asp Thr Arg Ala Ala Ala Ser Glu Ala Pro Gln Asp Val
545 550 555 560
Thr Tyr Ala Gln Leu His Ser Leu Thr Leu Arg Arg Lys Ala Thr Glu
565 570 575
Pro Pro Pro Ser Gln Glu Arg Glu Pro Pro Ala Glu Pro Ser Ile Tyr
580 585 590
Ala Thr Leu Ala Ile His
595
<210> 148
<211> 440
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(440)
<223> LILRB2的胞外域
<400> 148
Gln Thr Gly Thr Ile Pro Lys Pro Thr Leu Trp Ala Glu Pro Asp Ser
1 5 10 15
Val Ile Thr Gln Gly Ser Pro Val Thr Leu Ser Cys Gln Gly Ser Leu
20 25 30
Glu Ala Gln Glu Tyr Arg Leu Tyr Arg Glu Lys Lys Ser Ala Ser Trp
35 40 45
Ile Thr Arg Ile Arg Pro Glu Leu Val Lys Asn Gly Gln Phe His Ile
50 55 60
Pro Ser Ile Thr Trp Glu His Thr Gly Arg Tyr Gly Cys Gln Tyr Tyr
65 70 75 80
Ser Arg Ala Arg Trp Ser Glu Leu Ser Asp Pro Leu Val Leu Val Met
85 90 95
Thr Gly Ala Tyr Pro Lys Pro Thr Leu Ser Ala Gln Pro Ser Pro Val
100 105 110
Val Thr Ser Gly Gly Arg Val Thr Leu Gln Cys Glu Ser Gln Val Ala
115 120 125
Phe Gly Gly Phe Ile Leu Cys Lys Glu Gly Glu Glu Glu His Pro Gln
130 135 140
Cys Leu Asn Ser Gln Pro His Ala Arg Gly Ser Ser Arg Ala Ile Phe
145 150 155 160
Ser Val Gly Pro Val Ser Pro Asn Arg Arg Trp Ser His Arg Cys Tyr
165 170 175
Gly Tyr Asp Leu Asn Ser Pro Tyr Val Trp Ser Ser Pro Ser Asp Leu
180 185 190
Leu Glu Leu Leu Val Pro Gly Val Ser Lys Lys Pro Ser Leu Ser Val
195 200 205
Gln Pro Gly Pro Val Val Ala Pro Gly Glu Ser Leu Thr Leu Gln Cys
210 215 220
Val Ser Asp Val Gly Tyr Asp Arg Phe Val Leu Tyr Lys Glu Gly Glu
225 230 235 240
Arg Asp Leu Arg Gln Leu Pro Gly Arg Gln Pro Gln Ala Gly Leu Ser
245 250 255
Gln Ala Asn Phe Thr Leu Gly Pro Val Ser Arg Ser Tyr Gly Gly Gln
260 265 270
Tyr Arg Cys Tyr Gly Ala His Asn Leu Ser Ser Glu Cys Ser Ala Pro
275 280 285
Ser Asp Pro Leu Asp Ile Leu Ile Thr Gly Gln Ile Arg Gly Thr Pro
290 295 300
Phe Ile Ser Val Gln Pro Gly Pro Thr Val Ala Ser Gly Glu Asn Val
305 310 315 320
Thr Leu Leu Cys Gln Ser Trp Arg Gln Phe His Thr Phe Leu Leu Thr
325 330 335
Lys Ala Gly Ala Ala Asp Ala Pro Leu Arg Leu Arg Ser Ile His Glu
340 345 350
Tyr Pro Lys Tyr Gln Ala Glu Phe Pro Met Ser Pro Val Thr Ser Ala
355 360 365
His Ala Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asp Pro Tyr
370 375 380
Leu Leu Ser His Pro Ser Glu Pro Leu Glu Leu Val Val Ser Gly Pro
385 390 395 400
Ser Met Gly Ser Ser Pro Pro Pro Thr Gly Pro Ile Ser Thr Pro Ala
405 410 415
Gly Pro Glu Asp Gln Pro Leu Thr Pro Thr Gly Ser Asp Pro Gln Ser
420 425 430
Gly Leu Gly Arg His Leu Gly Val
435 440
<210> 149
<211> 1896
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(1896)
<223> cDNA of LILRB3
<400> 149
atgacgcccg ccctcacagc cctgctctgc cttgggctga gtctgggccc caggacccgc 60
atgcaggcag ggcccttccc caaacccacc ctctgggctg agccaggctc tgtgatcagc 120
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tacctggagg ttttgattgg ggtctcggtg gccttcgtcc tgctgctctt cctcctcctc 1380
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aggtccagcc cagctgctga cgtccaggaa gaaaacctct atgctgctgt gaaggacaca 1560
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tcactgtctg gggaattcct ggacacaaag gacagacagg tggaagagga caggcagatg 1740
gacactgagg ctgctgcatc tgaagcctcc caggatgtga cctacgccca gctgcacagc 1800
ttgaccctta gacggaaggc aactgagcct cctccatccc aggaagggga acctccagct 1860
gagcccagca tctacgccac tctggccatc cactag 1896
<210> 150
<211> 631
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(631)
<223> LILRB3
<400> 150
Met Thr Pro Ala Leu Thr Ala Leu Leu Cys Leu Gly Leu Ser Leu Gly
1 5 10 15
Pro Arg Thr Arg Val Gln Ala Gly Pro Phe Pro Lys Pro Thr Leu Trp
20 25 30
Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile Ser Trp Gly Ser Pro Val Thr Ile Trp
35 40 45
Cys Gln Gly Ser Gln Glu Ala Gln Glu Tyr Arg Leu His Lys Glu Gly
50 55 60
Ser Pro Glu Pro Leu Asp Arg Asn Asn Pro Leu Glu Pro Lys Asn Lys
65 70 75 80
Ala Arg Phe Ser Ile Pro Ser Met Thr Glu His His Ala Gly Arg Tyr
85 90 95
Arg Cys His Tyr Tyr Ser Ser Ala Gly Trp Ser Glu Pro Ser Asp Pro
100 105 110
Leu Glu Met Val Met Thr Gly Ala Tyr Ser Lys Pro Thr Leu Ser Ala
115 120 125
Leu Pro Ser Pro Val Val Ala Ser Gly Gly Asn Met Thr Leu Arg Cys
130 135 140
Gly Ser Gln Lys Gly Tyr His His Phe Val Leu Met Lys Glu Gly Glu
145 150 155 160
His Gln Leu Pro Arg Thr Leu Asp Ser Gln Gln Leu His Ser Arg Gly
165 170 175
Phe Gln Ala Leu Phe Pro Val Gly Pro Val Thr Pro Ser His Arg Trp
180 185 190
Arg Phe Thr Cys Tyr Tyr Tyr Tyr Thr Asn Thr Pro Trp Val Trp Ser
195 200 205
His Pro Ser Asp Pro Leu Glu Ile Leu Pro Ser Gly Val Ser Arg Lys
210 215 220
Pro Ser Leu Leu Thr Leu Gln Gly Pro Val Leu Ala Pro Gly Gln Ser
225 230 235 240
Leu Thr Leu Gln Cys Gly Ser Asp Val Gly Tyr Asn Arg Phe Val Leu
245 250 255
Tyr Lys Glu Gly Glu Arg Asp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Gln Pro
260 265 270
Gln Ala Gly Leu Ser Gln Ala Asn Phe Thr Leu Gly Pro Val Ser Pro
275 280 285
Ser Asn Gly Gly Gln Tyr Arg Cys Tyr Gly Ala His Asn Leu Ser Ser
290 295 300
Glu Trp Ser Ala Pro Ser Asp Pro Leu Asn Ile Leu Met Ala Gly Gln
305 310 315 320
Ile Tyr Asp Thr Val Ser Leu Ser Ala Gln Pro Gly Pro Thr Val Ala
325 330 335
Ser Gly Glu Asn Val Thr Leu Leu Cys Gln Ser Trp Trp Gln Phe Asp
340 345 350
Thr Phe Leu Leu Thr Lys Glu Gly Ala Ala His Pro Pro Leu Arg Leu
355 360 365
Arg Ser Met Tyr Gly Ala His Lys Tyr Gln Ala Glu Phe Pro Met Ser
370 375 380
Pro Val Thr Ser Ala His Ala Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ser Tyr
385 390 395 400
Ser Ser Asn Pro His Leu Leu Ser His Pro Ser Glu Pro Leu Glu Leu
405 410 415
Val Val Ser Gly His Ser Gly Gly Ser Ser Leu Pro Pro Thr Gly Pro
420 425 430
Pro Ser Thr Pro Gly Leu Gly Arg Tyr Leu Glu Val Leu Ile Gly Val
435 440 445
Ser Val Ala Phe Val Leu Leu Leu Phe Leu Leu Leu Phe Leu Leu Leu
450 455 460
Arg Arg Gln Arg His Ser Lys His Arg Thr Ser Asp Gln Arg Lys Thr
465 470 475 480
Asp Phe Gln Arg Pro Ala Gly Ala Ala Glu Thr Glu Pro Lys Asp Arg
485 490 495
Gly Leu Leu Arg Arg Ser Ser Pro Ala Ala Asp Val Gln Glu Glu Asn
500 505 510
Leu Tyr Ala Ala Val Lys Asp Thr Gln Ser Glu Asp Arg Val Glu Leu
515 520 525
Asp Ser Gln Ser Pro His Asp Glu Asp Pro Gln Ala Val Thr Tyr Ala
530 535 540
Pro Val Lys His Ser Ser Pro Arg Arg Glu Met Ala Ser Pro Pro Ser
545 550 555 560
Ser Leu Ser Gly Glu Phe Leu Asp Thr Lys Asp Arg Gln Val Glu Glu
565 570 575
Asp Arg Gln Met Asp Thr Glu Ala Ala Ala Ser Glu Ala Ser Gln Asp
580 585 590
Val Thr Tyr Ala Gln Leu His Ser Leu Thr Leu Arg Arg Lys Ala Thr
595 600 605
Glu Pro Pro Pro Ser Gln Glu Gly Glu Pro Pro Ala Glu Pro Ser Ile
610 615 620
Tyr Ala Thr Leu Ala Ile His
625 630
<210> 151
<211> 420
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(420)
<223> LILRB3的胞外域
<400> 151
Gly Pro Phe Pro Lys Pro Thr Leu Trp Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile
1 5 10 15
Ser Trp Gly Ser Pro Val Thr Ile Trp Cys Gln Gly Ser Gln Glu Ala
20 25 30
Gln Glu Tyr Arg Leu His Lys Glu Gly Ser Pro Glu Pro Leu Asp Arg
35 40 45
Asn Asn Pro Leu Glu Pro Lys Asn Lys Ala Arg Phe Ser Ile Pro Ser
50 55 60
Met Thr Glu His His Ala Gly Arg Tyr Arg Cys His Tyr Tyr Ser Ser
65 70 75 80
Ala Gly Trp Ser Glu Pro Ser Asp Pro Leu Glu Met Val Met Thr Gly
85 90 95
Ala Tyr Ser Lys Pro Thr Leu Ser Ala Leu Pro Ser Pro Val Val Ala
100 105 110
Ser Gly Gly Asn Met Thr Leu Arg Cys Gly Ser Gln Lys Gly Tyr His
115 120 125
His Phe Val Leu Met Lys Glu Gly Glu His Gln Leu Pro Arg Thr Leu
130 135 140
Asp Ser Gln Gln Leu His Ser Arg Gly Phe Gln Ala Leu Phe Pro Val
145 150 155 160
Gly Pro Val Thr Pro Ser His Arg Trp Arg Phe Thr Cys Tyr Tyr Tyr
165 170 175
Tyr Thr Asn Thr Pro Trp Val Trp Ser His Pro Ser Asp Pro Leu Glu
180 185 190
Ile Leu Pro Ser Gly Val Ser Arg Lys Pro Ser Leu Leu Thr Leu Gln
195 200 205
Gly Pro Val Leu Ala Pro Gly Gln Ser Leu Thr Leu Gln Cys Gly Ser
210 215 220
Asp Val Gly Tyr Asn Arg Phe Val Leu Tyr Lys Glu Gly Glu Arg Asp
225 230 235 240
Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Gln Pro Gln Ala Gly Leu Ser Gln Ala
245 250 255
Asn Phe Thr Leu Gly Pro Val Ser Pro Ser Asn Gly Gly Gln Tyr Arg
260 265 270
Cys Tyr Gly Ala His Asn Leu Ser Ser Glu Trp Ser Ala Pro Ser Asp
275 280 285
Pro Leu Asn Ile Leu Met Ala Gly Gln Ile Tyr Asp Thr Val Ser Leu
290 295 300
Ser Ala Gln Pro Gly Pro Thr Val Ala Ser Gly Glu Asn Val Thr Leu
305 310 315 320
Leu Cys Gln Ser Trp Trp Gln Phe Asp Thr Phe Leu Leu Thr Lys Glu
325 330 335
Gly Ala Ala His Pro Pro Leu Arg Leu Arg Ser Met Tyr Gly Ala His
340 345 350
Lys Tyr Gln Ala Glu Phe Pro Met Ser Pro Val Thr Ser Ala His Ala
355 360 365
Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ser Tyr Ser Ser Asn Pro His Leu Leu
370 375 380
Ser His Pro Ser Glu Pro Leu Glu Leu Val Val Ser Gly His Ser Gly
385 390 395 400
Gly Ser Ser Leu Pro Pro Thr Gly Pro Pro Ser Thr Pro Gly Leu Gly
405 410 415
Arg Tyr Leu Glu
420
<210> 152
<211> 1347
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(1347)
<223> LILRB4的cDNA
<400> 152
atgatcccca ccttcacggc tctgctctgc ctcgggctga gtctgggccc caggacccac 60
atgcaggcag ggcccctccc caaacccacc ctctgggctg agccaggctc tgtgatcagc 120
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accctgctgt gtcagtcacg gagcccaatg gacacttttc ttctgatcaa ggagcgggca 480
gcccatcccc tactgcatct gagatcagag cacggagctc agcagcacca ggctgaattc 540
cccatgagtc ctgtgacctc agtgcacggg gggacctaca ggtgcttcag ctcacacggc 600
ttctcccact acctgctgtc acaccccagt gaccccctgg agctcatagt ctcaggatcc 660
ttggagggtc ccaggccctc acccacaagg tccgtctcaa cagctgcagg ccctgaggac 720
cagcccctca tgcctacagg gtcagtcccc cacagtggtc tgagaaggca ctgggaggta 780
ctgatcgggg tcttggtggt ctccatcctg cttctctccc tcctcctctt cctcctcctc 840
caacactggc gtcagggaaa acacaggaca ttggcccaga gacaggctga tttccaacgt 900
cctccagggg ctgccgagcc agagcccaag gacgggggcc tacagaggag gtccagccca 960
gctgctgacg tccagggaga aaacttctgt gctgccgtga agaacacaca gcctgaggac 1020
ggggtggaaa tggacactcg gcagagccca cacgatgaag acccccaggc agtgacgtat 1080
gccaaggtga aacactccag acctaggaga gaaatggcct ctcctccctc cccactgtct 1140
ggggaattcc tggacacaaa ggacagacag gcagaagagg acagacagat ggacactgag 1200
gctgctgcat ctgaagcccc ccaggatgtg acctacgccc ggctgcacag ctttaccctc 1260
agacagaagg caactgagcc tcctccatcc caggaagggg cctctccagc tgagcccagt 1320
gtctatgcca ctctggccat ccactaa 1347
<210> 153
<211> 448
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(448)
<223> LILRB4
<400> 153
Met Ile Pro Thr Phe Thr Ala Leu Leu Cys Leu Gly Leu Ser Leu Gly
1 5 10 15
Pro Arg Thr His Met Gln Ala Gly Pro Leu Pro Lys Pro Thr Leu Trp
20 25 30
Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile Ser Trp Gly Asn Ser Val Thr Ile Trp
35 40 45
Cys Gln Gly Thr Leu Glu Ala Arg Glu Tyr Arg Leu Asp Lys Glu Glu
50 55 60
Ser Pro Ala Pro Trp Asp Arg Gln Asn Pro Leu Glu Pro Lys Asn Lys
65 70 75 80
Ala Arg Phe Ser Ile Pro Ser Met Thr Glu Asp Tyr Ala Gly Arg Tyr
85 90 95
Arg Cys Tyr Tyr Arg Ser Pro Val Gly Trp Ser Gln Pro Ser Asp Pro
100 105 110
Leu Glu Leu Val Met Thr Gly Ala Tyr Ser Lys Pro Thr Leu Ser Ala
115 120 125
Leu Pro Ser Pro Leu Val Thr Ser Gly Lys Ser Val Thr Leu Leu Cys
130 135 140
Gln Ser Arg Ser Pro Met Asp Thr Phe Leu Leu Ile Lys Glu Arg Ala
145 150 155 160
Ala His Pro Leu Leu His Leu Arg Ser Glu His Gly Ala Gln Gln His
165 170 175
Gln Ala Glu Phe Pro Met Ser Pro Val Thr Ser Val His Gly Gly Thr
180 185 190
Tyr Arg Cys Phe Ser Ser His Gly Phe Ser His Tyr Leu Leu Ser His
195 200 205
Pro Ser Asp Pro Leu Glu Leu Ile Val Ser Gly Ser Leu Glu Asp Pro
210 215 220
Arg Pro Ser Pro Thr Arg Ser Val Ser Thr Ala Ala Gly Pro Glu Asp
225 230 235 240
Gln Pro Leu Met Pro Thr Gly Ser Val Pro His Ser Gly Leu Arg Arg
245 250 255
His Trp Glu Val Leu Ile Gly Val Leu Val Val Ser Ile Leu Leu Leu
260 265 270
Ser Leu Leu Leu Phe Leu Leu Leu Gln His Trp Arg Gln Gly Lys His
275 280 285
Arg Thr Leu Ala Gln Arg Gln Ala Asp Phe Gln Arg Pro Pro Gly Ala
290 295 300
Ala Glu Pro Glu Pro Lys Asp Gly Gly Leu Gln Arg Arg Ser Ser Pro
305 310 315 320
Ala Ala Asp Val Gln Gly Glu Asn Phe Cys Ala Ala Val Lys Asn Thr
325 330 335
Gln Pro Glu Asp Gly Val Glu Met Asp Thr Arg Gln Ser Pro His Asp
340 345 350
Glu Asp Pro Gln Ala Val Thr Tyr Ala Lys Val Lys His Ser Arg Pro
355 360 365
Arg Arg Glu Met Ala Ser Pro Pro Ser Pro Leu Ser Gly Glu Phe Leu
370 375 380
Asp Thr Lys Asp Arg Gln Ala Glu Glu Asp Arg Gln Met Asp Thr Glu
385 390 395 400
Ala Ala Ala Ser Glu Ala Pro Gln Asp Val Thr Tyr Ala Gln Leu His
405 410 415
Ser Phe Thr Leu Arg Gln Lys Ala Thr Glu Pro Pro Pro Ser Gln Glu
420 425 430
Gly Ala Ser Pro Ala Glu Pro Ser Val Tyr Ala Thr Leu Ala Ile His
435 440 445
<210> 154
<211> 238
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(238)
<223> LILRB4的胞外域
<400> 154
Gln Ala Gly Pro Leu Pro Lys Pro Thr Leu Trp Ala Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Val Ile Ser Trp Gly Asn Ser Val Thr Ile Trp Cys Gln Gly Thr Leu
20 25 30
Glu Ala Arg Glu Tyr Arg Leu Asp Lys Glu Glu Ser Pro Ala Pro Trp
35 40 45
Asp Arg Gln Asn Pro Leu Glu Pro Lys Asn Lys Ala Arg Phe Ser Ile
50 55 60
Pro Ser Met Thr Glu Asp Tyr Ala Gly Arg Tyr Arg Cys Tyr Tyr Arg
65 70 75 80
Ser Pro Val Gly Trp Ser Gln Pro Ser Asp Pro Leu Glu Leu Val Met
85 90 95
Thr Gly Ala Tyr Ser Lys Pro Thr Leu Ser Ala Leu Pro Ser Pro Leu
100 105 110
Val Thr Ser Gly Lys Ser Val Thr Leu Leu Cys Gln Ser Arg Ser Pro
115 120 125
Met Asp Thr Phe Leu Leu Ile Lys Glu Arg Ala Ala His Pro Leu Leu
130 135 140
His Leu Arg Ser Glu His Gly Ala Gln Gln His Gln Ala Glu Phe Pro
145 150 155 160
Met Ser Pro Val Thr Ser Val His Gly Gly Thr Tyr Arg Cys Phe Ser
165 170 175
Ser His Gly Phe Ser His Tyr Leu Leu Ser His Pro Ser Asp Pro Leu
180 185 190
Glu Leu Ile Val Ser Gly Ser Leu Glu Asp Pro Arg Pro Ser Pro Thr
195 200 205
Arg Ser Val Ser Thr Ala Ala Gly Pro Glu Asp Gln Pro Leu Met Pro
210 215 220
Thr Gly Ser Val Pro His Ser Gly Leu Arg Arg His Trp Glu
225 230 235
<210> 155
<211> 1773
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(1773)
<223> LILRB5的cDNA
<400> 155
atgaccctca ccctctcagt cctgatttgc ctcgggctga gtgtgggccc caggacctgc 60
gtgcaggcag gcaccctccc caaacccacc ctctgggctg agccagcctc tgtgatagct 120
cgggggaagc ccgtgaccct ctggtgtcag gggcccctgg agactgagga gtaccgtctg 180
gataaggagg gactcccatg ggcccggaag agacagaacc cactggagcc tggagccaag 240
gccaagttcc acattccatc cacggtgtat gacagtgcag ggcgataccg ctgctactat 300
gagacccctg caggctggtc agagcccagt gaccccctgg agctggtggc gacaggattc 360
tatgcagaac ccactctttt agccctgccg agtcctgtgg tggcctcagg aggaaatgtg 420
accctccagt gtgatacact ggacggactt ctcacgtttg ttcttgttga ggaagaacag 480
aagctcccca ggaccctgta ctcacagaag ctccccaaag ggccatccca ggccctgttc 540
cctgtgggtc ccgtgacccc cagctgcagg tggaggttca gatgctatta ctattacagg 600
aaaaaccctc aggtgtggtc gaaccccagt gacctcctgg agattctggt cccaggcgtg 660
tctaggaagc cctccctcct gatcccgcag ggctctgtcg tggcccgcgg aggcagcctg 720
accctgcagt gtcgctctga tgtcggctat gacatattcg ttctgtacaa ggagggggaa 780
catgacctcg tccagggctc tggccagcag ccccaggctg ggctctccca ggccaacttc 840
accctgggcc ctgtgagccg ctcccacggg ggccagtaca gatgctacgg tgcacacaac 900
ctctccccta ggtggtcggc ccccagcgac cccctggaca tcctgatcgc aggactgatc 960
cctgacatac ccgccctctc ggtgcagccg ggccccaagg tggcctcagg agagaacgtg 1020
accctgctgt gtcagtcatg gcatcagata gacactttct ttttgaccaa ggagggggca 1080
gcccatcccc cgctgtgtct aaagtcaaag taccagtctt atagacacca ggctgaattc 1140
tccatgagtc ctgtgacctc agcccagggt ggaacctacc gatgctacag cgcaatcagg 1200
tcctacccct acctgctgtc cagccctagt tacccccagg agctcgtggt ctcaggaccc 1260
tctggggatc ccagcctctc acctacaggc tccaccccca cacctggccc tgaggaccag 1320
cccctcaccc ccacggggtt ggatccccag agtggtctgg gaaggcacct gggggttgtg 1380
actggggtct cagtggcctt cgtcctgctg ctgttcctcc tcctcttcct cctcctccga 1440
catcggcatc agagcaaaca caggacatcg gcccatttct accgtcctgc aggggctgcg 1500
gggccagagc ccaaggacca gggcctgcag aagagggcca gcccagttgc tgacatccag 1560
gaggaaattc tcaatgctgc cgtgaaggac acacagccca aggacggggt ggagatggat 1620
gctccggctg ctgcatctga agccccccag gatgtgacct acgcccagct gcacagcttg 1680
accctcagac gggaggcaac tgagcctcct ccatcccagg aaagggaacc tccagctgaa 1740
cccagcatct acgcccccct ggccatccac tag 1773
<210> 156
<211> 590
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(590)
<223> LILRB5
<400> 156
Met Thr Leu Thr Leu Ser Val Leu Ile Cys Leu Gly Leu Ser Val Gly
1 5 10 15
Pro Arg Thr Cys Val Gln Ala Gly Thr Leu Pro Lys Pro Thr Leu Trp
20 25 30
Ala Glu Pro Ala Ser Val Ile Ala Arg Gly Lys Pro Val Thr Leu Trp
35 40 45
Cys Gln Gly Pro Leu Glu Thr Glu Glu Tyr Arg Leu Asp Lys Glu Gly
50 55 60
Leu Pro Trp Ala Arg Lys Arg Gln Asn Pro Leu Glu Pro Gly Ala Lys
65 70 75 80
Ala Lys Phe His Ile Pro Ser Thr Val Tyr Asp Ser Ala Gly Arg Tyr
85 90 95
Arg Cys Tyr Tyr Glu Thr Pro Ala Gly Trp Ser Glu Pro Ser Asp Pro
100 105 110
Leu Glu Leu Val Ala Thr Gly Phe Tyr Ala Glu Pro Thr Leu Leu Ala
115 120 125
Leu Pro Ser Pro Val Val Ala Ser Gly Gly Asn Val Thr Leu Gln Cys
130 135 140
Asp Thr Leu Asp Gly Leu Leu Thr Phe Val Leu Val Glu Glu Glu Gln
145 150 155 160
Lys Leu Pro Arg Thr Leu Tyr Ser Gln Lys Leu Pro Lys Gly Pro Ser
165 170 175
Gln Ala Leu Phe Pro Val Gly Pro Val Thr Pro Ser Cys Arg Trp Arg
180 185 190
Phe Arg Cys Tyr Tyr Tyr Tyr Arg Lys Asn Pro Gln Val Trp Ser Asn
195 200 205
Pro Ser Asp Leu Leu Glu Ile Leu Val Pro Gly Val Ser Arg Lys Pro
210 215 220
Ser Leu Leu Ile Pro Gln Gly Ser Val Val Ala Arg Gly Gly Ser Leu
225 230 235 240
Thr Leu Gln Cys Arg Ser Asp Val Gly Tyr Asp Ile Phe Val Leu Tyr
245 250 255
Lys Glu Gly Glu His Asp Leu Val Gln Gly Ser Gly Gln Gln Pro Gln
260 265 270
Ala Gly Leu Ser Gln Ala Asn Phe Thr Leu Gly Pro Val Ser Arg Ser
275 280 285
His Gly Gly Gln Tyr Arg Cys Tyr Gly Ala His Asn Leu Ser Pro Arg
290 295 300
Trp Ser Ala Pro Ser Asp Pro Leu Asp Ile Leu Ile Ala Gly Leu Ile
305 310 315 320
Pro Asp Ile Pro Ala Leu Ser Val Gln Pro Gly Pro Lys Val Ala Ser
325 330 335
Gly Glu Asn Val Thr Leu Leu Cys Gln Ser Trp His Gln Ile Asp Thr
340 345 350
Phe Phe Leu Thr Lys Glu Gly Ala Ala His Pro Pro Leu Cys Leu Lys
355 360 365
Ser Lys Tyr Gln Ser Tyr Arg His Gln Ala Glu Phe Ser Met Ser Pro
370 375 380
Val Thr Ser Ala Gln Gly Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Ser Ala Ile Arg
385 390 395 400
Ser Tyr Pro Tyr Leu Leu Ser Ser Pro Ser Tyr Pro Gln Glu Leu Val
405 410 415
Val Ser Gly Pro Ser Gly Asp Pro Ser Leu Ser Pro Thr Gly Ser Thr
420 425 430
Pro Thr Pro Gly Pro Glu Asp Gln Pro Leu Thr Pro Thr Gly Leu Asp
435 440 445
Pro Gln Ser Gly Leu Gly Arg His Leu Gly Val Val Thr Gly Val Ser
450 455 460
Val Ala Phe Val Leu Leu Leu Phe Leu Leu Leu Phe Leu Leu Leu Arg
465 470 475 480
His Arg His Gln Ser Lys His Arg Thr Ser Ala His Phe Tyr Arg Pro
485 490 495
Ala Gly Ala Ala Gly Pro Glu Pro Lys Asp Gln Gly Leu Gln Lys Arg
500 505 510
Ala Ser Pro Val Ala Asp Ile Gln Glu Glu Ile Leu Asn Ala Ala Val
515 520 525
Lys Asp Thr Gln Pro Lys Asp Gly Val Glu Met Asp Ala Arg Ala Ala
530 535 540
Ala Ser Glu Ala Pro Gln Asp Val Thr Tyr Ala Gln Leu His Ser Leu
545 550 555 560
Thr Leu Arg Arg Glu Ala Thr Glu Pro Pro Pro Ser Gln Glu Arg Glu
565 570 575
Pro Pro Ala Glu Pro Ser Ile Tyr Ala Pro Leu Ala Ile His
580 585 590
<210> 157
<211> 435
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(435)
<223> LILRB5的胞外域
<400> 157
Gly Thr Leu Pro Lys Pro Thr Leu Trp Ala Glu Pro Ala Ser Val Ile
1 5 10 15
Ala Arg Gly Lys Pro Val Thr Leu Trp Cys Gln Gly Pro Leu Glu Thr
20 25 30
Glu Glu Tyr Arg Leu Asp Lys Glu Gly Leu Pro Trp Ala Arg Lys Arg
35 40 45
Gln Asn Pro Leu Glu Pro Gly Ala Lys Ala Lys Phe His Ile Pro Ser
50 55 60
Thr Val Tyr Asp Ser Ala Gly Arg Tyr Arg Cys Tyr Tyr Glu Thr Pro
65 70 75 80
Ala Gly Trp Ser Glu Pro Ser Asp Pro Leu Glu Leu Val Ala Thr Gly
85 90 95
Phe Tyr Ala Glu Pro Thr Leu Leu Ala Leu Pro Ser Pro Val Val Ala
100 105 110
Ser Gly Gly Asn Val Thr Leu Gln Cys Asp Thr Leu Asp Gly Leu Leu
115 120 125
Thr Phe Val Leu Val Glu Glu Glu Gln Lys Leu Pro Arg Thr Leu Tyr
130 135 140
Ser Gln Lys Leu Pro Lys Gly Pro Ser Gln Ala Leu Phe Pro Val Gly
145 150 155 160
Pro Val Thr Pro Ser Cys Arg Trp Arg Phe Arg Cys Tyr Tyr Tyr Tyr
165 170 175
Arg Lys Asn Pro Gln Val Trp Ser Asn Pro Ser Asp Leu Leu Glu Ile
180 185 190
Leu Val Pro Gly Val Ser Arg Lys Pro Ser Leu Leu Ile Pro Gln Gly
195 200 205
Ser Val Val Ala Arg Gly Gly Ser Leu Thr Leu Gln Cys Arg Ser Asp
210 215 220
Val Gly Tyr Asp Ile Phe Val Leu Tyr Lys Glu Gly Glu His Asp Leu
225 230 235 240
Val Gln Gly Ser Gly Gln Gln Pro Gln Ala Gly Leu Ser Gln Ala Asn
245 250 255
Phe Thr Leu Gly Pro Val Ser Arg Ser His Gly Gly Gln Tyr Arg Cys
260 265 270
Tyr Gly Ala His Asn Leu Ser Pro Arg Trp Ser Ala Pro Ser Asp Pro
275 280 285
Leu Asp Ile Leu Ile Ala Gly Leu Ile Pro Asp Ile Pro Ala Leu Ser
290 295 300
Val Gln Pro Gly Pro Lys Val Ala Ser Gly Glu Asn Val Thr Leu Leu
305 310 315 320
Cys Gln Ser Trp His Gln Ile Asp Thr Phe Phe Leu Thr Lys Glu Gly
325 330 335
Ala Ala His Pro Pro Leu Cys Leu Lys Ser Lys Tyr Gln Ser Tyr Arg
340 345 350
His Gln Ala Glu Phe Ser Met Ser Pro Val Thr Ser Ala Gln Gly Gly
355 360 365
Thr Tyr Arg Cys Tyr Ser Ala Ile Arg Ser Tyr Pro Tyr Leu Leu Ser
370 375 380
Ser Pro Ser Tyr Pro Gln Glu Leu Val Val Ser Gly Pro Ser Gly Asp
385 390 395 400
Pro Ser Leu Ser Pro Thr Gly Ser Thr Pro Thr Pro Gly Pro Glu Asp
405 410 415
Gln Pro Leu Thr Pro Thr Gly Leu Asp Pro Gln Ser Gly Leu Gly Arg
420 425 430
His Leu Gly
435
<210> 158
<211> 2526
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(2526)
<223> PirB的cDNA
<400> 158
atgtcctgca ccttcacagc cctgctccgt cttggactga ctctgagcct ctggatccca 60
gtgctgacag ggtccctccc taagcctatc ctcagagtac agccagactc tgtggtctcc 120
aggaggacta aggtgacctt cttgtgtgaa gagacaattg gagccaatga gtaccgcctc 180
tataaagatg gaaagctata taaaaccgta acaaagaaca aacagaagcc agaaaacaag 240
gctgaattct cattctcaaa tgtagacctg agtaatgcag gtcaatatcg atgttcctac 300
agcacccagt ataaatcatc aggctacagt gacctcctgg agctggtggt gacaggacac 360
tactggacac ccagcctttt agcccaagcc agccctgtgg taacttcagg agggtatgtc 420
accctccagt gtgagtcctg gcacaacgat cacaagttca ttctgactgt agaaggacca 480
cagaagctct cgtggacaca agactcacag tataattact ctacaaggaa gtaccacgcc 540
ctgttctctg tgggccctgt gacccccaac cagagatgga tatgcagatg ttacagttat 600
gacaggaaca gaccatatgt gtggtcacct ccaagtgaat ccgtggagct cctggtctca 660
ggtaatctcc aaaaaccaac catcaaggct gaaccaggat ctgtgatcac ctccaaaaga 720
gcaatgacca tctggtgtca ggggaacctg gatgcagaag tatattttct gcataatgag 780
aaaagccaaa aaacacagag cacacagacc ctacaggagc ctgggaacaa gggcaagttc 840
ttcatccctt ctgtgacact acaacatgca gggcaatatc gctgttattg ttacggctca 900
gctggttggt cacagcccag tgacaccctg gagctggtgg tgacaggaat ctatgaatac 960
tatgaaccca ggctgtcagt actgcccagc cctgtggtga cagctggagg gaacatgaca 1020
ctccactgtg cctcagactt tccctacgat aaattcattc tcaccaagga agataagaaa 1080
ttcggcaact cactggacac agagcatata tcttctagtg gacagtaccg agccctgttt 1140
attataggac ccacaacccc aacccataca ggggcattca gatgttacgg ttactacaag 1200
aatgccccac agctgtggtc agtacctagt gctctccaac aaatactcat ctcagggctg 1260
tccaagaagc cctctctgct gactcaccaa ggccatatcc tggaccctgg aatgaccctc 1320
accctgcagt gtttctctga catcaactat gacagatttg ctctgcacaa ggtgggggga 1380
gctgacatca tgcagcactc tagccagcag actgacactg gcttctctgt ggccaacttc 1440
acactgggct atgtgagtag ctccactgga ggccaataca gatgctatgg tgcacacaac 1500
ctctcctctg agtggtcagc ctccagtgag cccctggaca tcctgatcac aggacagctc 1560
cctctcactc cttccctctc agtgcagcct aaccacacag tgcactcagg agagaccgtg 1620
agcctgctgt gttggtcaat ggactctgtg gatactttca ttctgtccaa ggagggatca 1680
gcccagcaac ccctgcgact aaaatcaaag tcccatgatc agcagtccca ggcagaattc 1740
tccatgagtg ctgtgacctc ccatctctca ggcacctaca ggtgctatgg agctcaagac 1800
tcatctttct acctcttgtc atctgccagt gcccctgtgg agctcacagt ctcaggaccc 1860
atcgaaacct ctaccccgcc acccacaatg tccatgccac taggtggact gcatatgtac 1920
ctgaaggctc tcattggagt gtctgtggcc ttcatcctgt tcctcttcat cttcatcttc 1980
attcttcttc gacgaagaca tcggggaaaa ttcaggaaag atgtccagaa agagaaagac 2040
ttgcaacttt cttcaggagc tgaagagccc ataaccagga aaggagaact ccagaagagg 2100
cccaacccag ctgctgccac ccaggaagaa agcctatatg cttcagtgga ggacatgcaa 2160
actgaggatg gagtggagct gaacagctgg acaccacctg aggaagatcc ccagggagag 2220
acttatgccc aggtgaaacc ctccaggctc aggaaggcag gacatgtctc accttctgtc 2280
atgtcaaggg aacaactgaa cacagaatat gaacaagcag aagagggcca aggagcaaac 2340
aatcaggctg ccgaatctgg ggagtcccag gatgtgacct atgcccagct gtgcagcagg 2400
acactcagac agggggcagc tgcatctcct ctctcccagg caggggaagc cccagaggag 2460
cccagtgtat atgctactct ggcggctgct cgtccagagg ctgttcccaa ggacatggag 2520
caatga 2526
<210> 159
<211> 841
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(841)
<223> PirB
<400> 159
Met Ser Cys Thr Phe Thr Ala Leu Leu Arg Leu Gly Leu Thr Leu Ser
1 5 10 15
Leu Trp Ile Pro Val Leu Thr Gly Ser Leu Pro Lys Pro Ile Leu Arg
20 25 30
Val Gln Pro Asp Ser Val Val Ser Arg Arg Thr Lys Val Thr Phe Leu
35 40 45
Cys Glu Glu Thr Ile Gly Ala Asn Glu Tyr Arg Leu Tyr Lys Asp Gly
50 55 60
Lys Leu Tyr Lys Thr Val Thr Lys Asn Lys Gln Lys Pro Glu Asn Lys
65 70 75 80
Ala Glu Phe Ser Phe Ser Asn Val Asp Leu Ser Asn Ala Gly Gln Tyr
85 90 95
Arg Cys Ser Tyr Ser Thr Gln Tyr Lys Ser Ser Gly Tyr Ser Asp Leu
100 105 110
Leu Glu Leu Val Val Thr Gly His Tyr Trp Thr Pro Ser Leu Leu Ala
115 120 125
Gln Ala Ser Pro Val Val Thr Ser Gly Gly Tyr Val Thr Leu Gln Cys
130 135 140
Glu Ser Trp His Asn Asp His Lys Phe Ile Leu Thr Val Glu Gly Pro
145 150 155 160
Gln Lys Leu Ser Trp Thr Gln Asp Ser Gln Tyr Asn Tyr Ser Thr Arg
165 170 175
Lys Tyr His Ala Leu Phe Ser Val Gly Pro Val Thr Pro Asn Gln Arg
180 185 190
Trp Ile Cys Arg Cys Tyr Ser Tyr Asp Arg Asn Arg Pro Tyr Val Trp
195 200 205
Ser Pro Pro Ser Glu Ser Val Glu Leu Leu Val Ser Gly Asn Leu Gln
210 215 220
Lys Pro Thr Ile Lys Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile Thr Ser Lys Arg
225 230 235 240
Ala Met Thr Ile Trp Cys Gln Gly Asn Leu Asp Ala Glu Val Tyr Phe
245 250 255
Leu His Asn Glu Lys Ser Gln Lys Thr Gln Ser Thr Gln Thr Leu Gln
260 265 270
Glu Pro Gly Asn Lys Gly Lys Phe Phe Ile Pro Ser Val Thr Leu Gln
275 280 285
His Ala Gly Gln Tyr Arg Cys Tyr Cys Tyr Gly Ser Ala Gly Trp Ser
290 295 300
Gln Pro Ser Asp Thr Leu Glu Leu Val Val Thr Gly Ile Tyr Glu Tyr
305 310 315 320
Tyr Glu Pro Arg Leu Ser Val Leu Pro Ser Pro Val Val Thr Ala Gly
325 330 335
Gly Asn Met Thr Leu His Cys Ala Ser Asp Phe Pro Tyr Asp Lys Phe
340 345 350
Ile Leu Thr Lys Glu Asp Lys Lys Phe Gly Asn Ser Leu Asp Thr Glu
355 360 365
His Ile Ser Ser Ser Gly Gln Tyr Arg Ala Leu Phe Ile Ile Gly Pro
370 375 380
Thr Thr Pro Thr His Thr Gly Ala Phe Arg Cys Tyr Gly Tyr Tyr Lys
385 390 395 400
Asn Ala Pro Gln Leu Trp Ser Val Pro Ser Ala Leu Gln Gln Ile Leu
405 410 415
Ile Ser Gly Leu Ser Lys Lys Pro Ser Leu Leu Thr His Gln Gly His
420 425 430
Ile Leu Asp Pro Gly Met Thr Leu Thr Leu Gln Cys Phe Ser Asp Ile
435 440 445
Asn Tyr Asp Arg Phe Ala Leu His Lys Val Gly Gly Ala Asp Ile Met
450 455 460
Gln His Ser Ser Gln Gln Thr Asp Thr Gly Phe Ser Val Ala Asn Phe
465 470 475 480
Thr Leu Gly Tyr Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gln Tyr Arg Cys Tyr
485 490 495
Gly Ala His Asn Leu Ser Ser Glu Trp Ser Ala Ser Ser Glu Pro Leu
500 505 510
Asp Ile Leu Ile Thr Gly Gln Leu Pro Leu Thr Pro Ser Leu Ser Val
515 520 525
Gln Pro Asn His Thr Val His Ser Gly Glu Thr Val Ser Leu Leu Cys
530 535 540
Trp Ser Met Asp Ser Val Asp Thr Phe Ile Leu Ser Lys Glu Gly Ser
545 550 555 560
Ala Gln Gln Pro Leu Arg Leu Lys Ser Lys Ser His Asp Gln Gln Ser
565 570 575
Gln Ala Glu Phe Ser Met Ser Ala Val Thr Ser His Leu Ser Gly Thr
580 585 590
Tyr Arg Cys Tyr Gly Ala Gln Asp Ser Ser Phe Tyr Leu Leu Ser Ser
595 600 605
Ala Ser Ala Pro Val Glu Leu Thr Val Ser Gly Pro Ile Glu Thr Ser
610 615 620
Thr Pro Pro Pro Thr Met Ser Met Pro Leu Gly Gly Leu His Met Tyr
625 630 635 640
Leu Lys Ala Leu Ile Gly Val Ser Val Ala Phe Ile Leu Phe Leu Phe
645 650 655
Ile Phe Ile Phe Ile Leu Leu Arg Arg Arg His Arg Gly Lys Phe Arg
660 665 670
Lys Asp Val Gln Lys Glu Lys Asp Leu Gln Leu Ser Ser Gly Ala Glu
675 680 685
Glu Pro Ile Thr Arg Lys Gly Glu Leu Gln Lys Arg Pro Asn Pro Ala
690 695 700
Ala Ala Thr Gln Glu Glu Ser Leu Tyr Ala Ser Val Glu Asp Met Gln
705 710 715 720
Thr Glu Asp Gly Val Glu Leu Asn Ser Trp Thr Pro Pro Glu Glu Asp
725 730 735
Pro Gln Gly Glu Thr Tyr Ala Gln Val Lys Pro Ser Arg Leu Arg Lys
740 745 750
Ala Gly His Val Ser Pro Ser Val Met Ser Arg Glu Gln Leu Asn Thr
755 760 765
Glu Tyr Glu Gln Ala Glu Glu Gly Gln Gly Ala Asn Asn Gln Ala Ala
770 775 780
Glu Ser Gly Glu Ser Gln Asp Val Thr Tyr Ala Gln Leu Cys Ser Arg
785 790 795 800
Thr Leu Arg Gln Gly Ala Ala Ala Ser Pro Leu Ser Gln Ala Gly Glu
805 810 815
Ala Pro Glu Glu Pro Ser Val Tyr Ala Thr Leu Ala Ala Ala Arg Pro
820 825 830
Glu Ala Val Pro Lys Asp Met Glu Gln
835 840
<210> 160
<211> 618
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(618)
<223> PirB的胞外域
<400> 160
Ser Leu Pro Lys Pro Ile Leu Arg Val Gln Pro Asp Ser Val Val Ser
1 5 10 15
Arg Arg Thr Lys Val Thr Phe Leu Cys Glu Glu Thr Ile Gly Ala Asn
20 25 30
Glu Tyr Arg Leu Tyr Lys Asp Gly Lys Leu Tyr Lys Thr Val Thr Lys
35 40 45
Asn Lys Gln Lys Pro Glu Asn Lys Ala Glu Phe Ser Phe Ser Asn Val
50 55 60
Asp Leu Ser Asn Ala Gly Gln Tyr Arg Cys Ser Tyr Ser Thr Gln Tyr
65 70 75 80
Lys Ser Ser Gly Tyr Ser Asp Leu Leu Glu Leu Val Val Thr Gly His
85 90 95
Tyr Trp Thr Pro Ser Leu Leu Ala Gln Ala Ser Pro Val Val Thr Ser
100 105 110
Gly Gly Tyr Val Thr Leu Gln Cys Glu Ser Trp His Asn Asp His Lys
115 120 125
Phe Ile Leu Thr Val Glu Gly Pro Gln Lys Leu Ser Trp Thr Gln Asp
130 135 140
Ser Gln Tyr Asn Tyr Ser Thr Arg Lys Tyr His Ala Leu Phe Ser Val
145 150 155 160
Gly Pro Val Thr Pro Asn Gln Arg Trp Ile Cys Arg Cys Tyr Ser Tyr
165 170 175
Asp Arg Asn Arg Pro Tyr Val Trp Ser Pro Pro Ser Glu Ser Val Glu
180 185 190
Leu Leu Val Ser Gly Asn Leu Gln Lys Pro Thr Ile Lys Ala Glu Pro
195 200 205
Gly Ser Val Ile Thr Ser Lys Arg Ala Met Thr Ile Trp Cys Gln Gly
210 215 220
Asn Leu Asp Ala Glu Val Tyr Phe Leu His Asn Glu Lys Ser Gln Lys
225 230 235 240
Thr Gln Ser Thr Gln Thr Leu Gln Glu Pro Gly Asn Lys Gly Lys Phe
245 250 255
Phe Ile Pro Ser Val Thr Leu Gln His Ala Gly Gln Tyr Arg Cys Tyr
260 265 270
Cys Tyr Gly Ser Ala Gly Trp Ser Gln Pro Ser Asp Thr Leu Glu Leu
275 280 285
Val Val Thr Gly Ile Tyr Glu Tyr Tyr Glu Pro Arg Leu Ser Val Leu
290 295 300
Pro Ser Pro Val Val Thr Ala Gly Gly Asn Met Thr Leu His Cys Ala
305 310 315 320
Ser Asp Phe Pro Tyr Asp Lys Phe Ile Leu Thr Lys Glu Asp Lys Lys
325 330 335
Phe Gly Asn Ser Leu Asp Thr Glu His Ile Ser Ser Ser Gly Gln Tyr
340 345 350
Arg Ala Leu Phe Ile Ile Gly Pro Thr Thr Pro Thr His Thr Gly Ala
355 360 365
Phe Arg Cys Tyr Gly Tyr Tyr Lys Asn Ala Pro Gln Leu Trp Ser Val
370 375 380
Pro Ser Ala Leu Gln Gln Ile Leu Ile Ser Gly Leu Ser Lys Lys Pro
385 390 395 400
Ser Leu Leu Thr His Gln Gly His Ile Leu Asp Pro Gly Met Thr Leu
405 410 415
Thr Leu Gln Cys Phe Ser Asp Ile Asn Tyr Asp Arg Phe Ala Leu His
420 425 430
Lys Val Gly Gly Ala Asp Ile Met Gln His Ser Ser Gln Gln Thr Asp
435 440 445
Thr Gly Phe Ser Val Ala Asn Phe Thr Leu Gly Tyr Val Ser Ser Ser
450 455 460
Thr Gly Gly Gln Tyr Arg Cys Tyr Gly Ala His Asn Leu Ser Ser Glu
465 470 475 480
Trp Ser Ala Ser Ser Glu Pro Leu Asp Ile Leu Ile Thr Gly Gln Leu
485 490 495
Pro Leu Thr Pro Ser Leu Ser Val Gln Pro Asn His Thr Val His Ser
500 505 510
Gly Glu Thr Val Ser Leu Leu Cys Trp Ser Met Asp Ser Val Asp Thr
515 520 525
Phe Ile Leu Ser Lys Glu Gly Ser Ala Gln Gln Pro Leu Arg Leu Lys
530 535 540
Ser Lys Ser His Asp Gln Gln Ser Gln Ala Glu Phe Ser Met Ser Ala
545 550 555 560
Val Thr Ser His Leu Ser Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ala Gln Asp
565 570 575
Ser Ser Phe Tyr Leu Leu Ser Ser Ala Ser Ala Pro Val Glu Leu Thr
580 585 590
Val Ser Gly Pro Ile Glu Thr Ser Thr Pro Pro Pro Thr Met Ser Met
595 600 605
Pro Leu Gly Gly Leu His Met Tyr Leu Lys
610 615
<210> 161
<211> 1008
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(1008)
<223> gp49B1的cDNA
<400> 161
atgatcgcca tgctcacagt gctgctatac cttggtctta ttctggaacc caggactgca 60
gtacaggcag gacacctccc aaagcccatc atctgggctg agccaggctc tgtgatcgct 120
gcgtatacat ctgtgattac ctggtgtcag ggttcctggg aggcccagta ttatcatctg 180
tataaagaga aaagtgtaaa tccttgggac actcaagtcc ctctggaaac caggaataag 240
gccaagttca acattccaag catgacaacc tcatatgcag gcatatataa gtgttactat 300
gagagtgctg ctggcttctc agagcacagt gatgccatgg agctggtgat gacaggagca 360
tatgaaaatc ccagcctgtc agtctatccc agctctaatg tgacctctgg agtttccata 420
tcctttagtt gcagctcatc catagtattt ggcagattca ttctgatcca ggaaggaaag 480
catggcctct cttggaccct ggactcacag catcaggcca atcagccatc ctatgctact 540
tttgttctgg atgctgttac tcccaaccac aatggaacat tcagatgcta tggctacttt 600
agaaatgaac cacaggtgtg gtcaaaacca agtaactccc tagacctcat gatctcagaa 660
accaaggacc agtcctctac acccactgaa gatggactgg aaacatacca gaagattttg 720
attggagtcc tggtgtcatt cctcctgctt ttcttcctcc tgctttttct catcctcatc 780
ggataccagt atgggcacaa aaagaaggct aatgcttctg tgaagaacac acaatctgag 840
aacaatgcag agctgaacag ttggaaccca caaaatgaag acccccaggg aattgtctac 900
gcccaggtaa aaccctccag gcttcagaag gacactgcat gcaaagagac ccaggatgta 960
acctatgccc agttgtgcat caggacacag gaacagaaca acagctga 1008
<210> 162
<211> 335
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(335)
<223> gp49B1
<400> 162
Met Ile Ala Met Leu Thr Val Leu Leu Tyr Leu Gly Leu Ile Leu Glu
1 5 10 15
Pro Arg Thr Ala Val Gln Ala Gly His Leu Pro Lys Pro Ile Ile Trp
20 25 30
Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile Ala Ala Tyr Thr Ser Val Ile Thr Trp
35 40 45
Cys Gln Gly Ser Trp Glu Ala Gln Tyr Tyr His Leu Tyr Lys Glu Lys
50 55 60
Ser Val Asn Pro Trp Asp Thr Gln Val Pro Leu Glu Thr Arg Asn Lys
65 70 75 80
Ala Lys Phe Asn Ile Pro Ser Met Thr Thr Ser Tyr Ala Gly Ile Tyr
85 90 95
Lys Cys Tyr Tyr Glu Ser Ala Ala Gly Phe Ser Glu His Ser Asp Ala
100 105 110
Met Glu Leu Val Met Thr Gly Ala Tyr Glu Asn Pro Ser Leu Ser Val
115 120 125
Tyr Pro Ser Ser Asn Val Thr Ser Gly Val Ser Ile Ser Phe Ser Cys
130 135 140
Ser Ser Ser Ile Val Phe Gly Arg Phe Ile Leu Ile Gln Glu Gly Lys
145 150 155 160
His Gly Leu Ser Trp Thr Leu Asp Ser Gln His Gln Ala Asn Gln Pro
165 170 175
Ser Tyr Ala Thr Phe Val Leu Asp Ala Val Thr Pro Asn His Asn Gly
180 185 190
Thr Phe Arg Cys Tyr Gly Tyr Phe Arg Asn Glu Pro Gln Val Trp Ser
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Ser Leu Asp Leu Met Ile Ser Glu Thr Lys Asp Gln
210 215 220
Ser Ser Thr Pro Thr Glu Asp Gly Leu Glu Thr Tyr Gln Lys Ile Leu
225 230 235 240
Ile Gly Val Leu Val Ser Phe Leu Leu Leu Phe Phe Leu Leu Leu Phe
245 250 255
Leu Ile Leu Ile Gly Tyr Gln Tyr Gly His Lys Lys Lys Ala Asn Ala
260 265 270
Ser Val Lys Asn Thr Gln Ser Glu Asn Asn Ala Glu Leu Asn Ser Trp
275 280 285
Asn Pro Gln Asn Glu Asp Pro Gln Gly Ile Val Tyr Ala Gln Val Lys
290 295 300
Pro Ser Arg Leu Gln Lys Asp Thr Ala Cys Lys Glu Thr Gln Asp Val
305 310 315 320
Thr Tyr Ala Gln Leu Cys Ile Arg Thr Gln Glu Gln Asn Asn Ser
325 330 335
<210> 163
<211> 215
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(215)
<223> gp49B1的胞外域
<400> 163
Gly His Leu Pro Lys Pro Ile Ile Trp Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile
1 5 10 15
Ala Ala Tyr Thr Ser Val Ile Thr Trp Cys Gln Gly Ser Trp Glu Ala
20 25 30
Gln Tyr Tyr His Leu Tyr Lys Glu Lys Ser Val Asn Pro Trp Asp Thr
35 40 45
Gln Val Pro Leu Glu Thr Arg Asn Lys Ala Lys Phe Asn Ile Pro Ser
50 55 60
Met Thr Thr Ser Tyr Ala Gly Ile Tyr Lys Cys Tyr Tyr Glu Ser Ala
65 70 75 80
Ala Gly Phe Ser Glu His Ser Asp Ala Met Glu Leu Val Met Thr Gly
85 90 95
Ala Tyr Glu Asn Pro Ser Leu Ser Val Tyr Pro Ser Ser Asn Val Thr
100 105 110
Ser Gly Val Ser Ile Ser Phe Ser Cys Ser Ser Ser Ile Val Phe Gly
115 120 125
Arg Phe Ile Leu Ile Gln Glu Gly Lys His Gly Leu Ser Trp Thr Leu
130 135 140
Asp Ser Gln His Gln Ala Asn Gln Pro Ser Tyr Ala Thr Phe Val Leu
145 150 155 160
Asp Ala Val Thr Pro Asn His Asn Gly Thr Phe Arg Cys Tyr Gly Tyr
165 170 175
Phe Arg Asn Glu Pro Gln Val Trp Ser Lys Pro Ser Asn Ser Leu Asp
180 185 190
Leu Met Ile Ser Glu Thr Lys Asp Gln Ser Ser Thr Pro Thr Glu Asp
195 200 205
Gly Leu Glu Thr Tyr Gln Lys
210 215
<210> 164
<211> 864
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(864)
<223> Lair1的cDNA
<400> 164
atgtctcccc accccaccgc cctcctgggc ctagtgctct gcctggccca gaccatccac 60
acgcaggagg aagatctgcc cagaccctcc atctcggctg agccaggcac cgtgatcccc 120
ctggggagcc atgtgacttt cgtgtgccgg ggcccggttg gggttcaaac attccgcctg 180
gagagggaca gtagatccac atacaatgat actgaagatg tgtctcaagc tagtccatct 240
gagtcagagg ccagattccg cattgactca gtaagagaag gaaatgccgg gctttatcgc 300
tgcatctatt ataagccccc taaatggtct gagcagagtg actacctgga gctgctggtg 360
aaagaaagct ctggaggccc ggactccccg gacacagagc ccggctcctc agctggaccc 420
acgcagaggc cgtcggacaa cagtcacaat gagcatgcac ctgcttccca aggcctgaaa 480
gctgagcatc tgtatattct catcggggtc tcagtggtct tcctcttctg tctcctcctc 540
ctggtcctct tctgcctcca tcgccagaat cagataaagc aggggccccc cagaagcaag 600
gacgaggagc agaagccaca gcagaggcct gacctggctg ttgatgttct agagaggaca 660
gcagacaagg ccacagtcaa tggacttcct gagaaggaca gagagacgga cacctcggcc 720
ctggctgcag ggagttccca ggaggtgacg tatgctcagc tggaccactg ggccctcaca 780
cagaggacag cccgggctgt gtccccacag tccacaaagc ccatggccga gtccatcacg 840
tatgcagccg ttgccagaca ctga 864
<210> 165
<211> 287
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(287)
<223> Lair1
<400> 165
Met Ser Pro His Pro Thr Ala Leu Leu Gly Leu Val Leu Cys Leu Ala
1 5 10 15
Gln Thr Ile His Thr Gln Glu Glu Asp Leu Pro Arg Pro Ser Ile Ser
20 25 30
Ala Glu Pro Gly Thr Val Ile Pro Leu Gly Ser His Val Thr Phe Val
35 40 45
Cys Arg Gly Pro Val Gly Val Gln Thr Phe Arg Leu Glu Arg Glu Ser
50 55 60
Arg Ser Thr Tyr Asn Asp Thr Glu Asp Val Ser Gln Ala Ser Pro Ser
65 70 75 80
Glu Ser Glu Ala Arg Phe Arg Ile Asp Ser Val Ser Glu Gly Asn Ala
85 90 95
Gly Pro Tyr Arg Cys Ile Tyr Tyr Lys Pro Pro Lys Trp Ser Glu Gln
100 105 110
Ser Asp Tyr Leu Glu Leu Leu Val Lys Glu Thr Ser Gly Gly Pro Asp
115 120 125
Ser Pro Asp Thr Glu Pro Gly Ser Ser Ala Gly Pro Thr Gln Arg Pro
130 135 140
Ser Asp Asn Ser His Asn Glu His Ala Pro Ala Ser Gln Gly Leu Lys
145 150 155 160
Ala Glu His Leu Tyr Ile Leu Ile Gly Val Ser Val Val Phe Leu Phe
165 170 175
Cys Leu Leu Leu Leu Val Leu Phe Cys Leu His Arg Gln Asn Gln Ile
180 185 190
Lys Gln Gly Pro Pro Arg Ser Lys Asp Glu Glu Gln Lys Pro Gln Gln
195 200 205
Arg Pro Asp Leu Ala Val Asp Val Leu Glu Arg Thr Ala Asp Lys Ala
210 215 220
Thr Val Asn Gly Leu Pro Glu Lys Asp Arg Glu Thr Asp Thr Ser Ala
225 230 235 240
Leu Ala Ala Gly Ser Ser Gln Glu Val Thr Tyr Ala Gln Leu Asp His
245 250 255
Trp Ala Leu Thr Gln Arg Thr Ala Arg Ala Val Ser Pro Gln Ser Thr
260 265 270
Lys Pro Met Ala Glu Ser Ile Thr Tyr Ala Ala Val Ala Arg His
275 280 285
<210> 166
<211> 144
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(144)
<223> Lair1的胞外域
<400> 166
Gln Glu Glu Asp Leu Pro Arg Pro Ser Ile Ser Ala Glu Pro Gly Thr
1 5 10 15
Val Ile Pro Leu Gly Ser His Val Thr Phe Val Cys Arg Gly Pro Val
20 25 30
Gly Val Gln Thr Phe Arg Leu Glu Arg Glu Ser Arg Ser Thr Tyr Asn
35 40 45
Asp Thr Glu Asp Val Ser Gln Ala Ser Pro Ser Glu Ser Glu Ala Arg
50 55 60
Phe Arg Ile Asp Ser Val Ser Glu Gly Asn Ala Gly Pro Tyr Arg Cys
65 70 75 80
Ile Tyr Tyr Lys Pro Pro Lys Trp Ser Glu Gln Ser Asp Tyr Leu Glu
85 90 95
Leu Leu Val Lys Glu Thr Ser Gly Gly Pro Asp Ser Pro Asp Thr Glu
100 105 110
Pro Gly Ser Ser Ala Gly Pro Thr Gln Arg Pro Ser Asp Asn Ser His
115 120 125
Asn Glu His Ala Pro Ala Ser Gln Gly Leu Lys Ala Glu His Leu Tyr
130 135 140
<210> 167
<211> 792
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(792)
<223> Lair1的cDNA
<400> 167
atgtcacttc atccagttat cctgctggtg cttgtgctgt gcctgggatg gaaaattaac 60
acacaggagg gttctctgcc tgatattacc atcttcccta attcaagtct tatgatctcc 120
caagggactt ttgtaactgt tgtgtgctca tactctgata aacacgactt gtataacatg 180
gtccgcctgg agaaggacgg cagcaccttt atggaaaaga gcactgagcc ttataaaaca 240
gaggatgaat ttgagattgg gccagtgaat gaaaccatta ctggacatta tagctgtatc 300
tattcgaagg ggattacctg gtccgaacgt agtaagacgc tggagctaaa ggtgatcaaa 360
gaaaatgtca tccagactcc tgccccaggt ccaacctcag atacatcttg gctaaagaca 420
tacagcattt acatttttac tgtggtctct gtgattttcc tcctttgtct ttccgccctt 480
ctgttctgct tcctcaggca ccgtcagaaa aagcagggac tcccaaacaa caaaagacag 540
cagcagaggc cagaagagag gctaaatcta gctactaatg gcctggagat gactccagac 600
atagttgcag atgacaggct tcctgaggac agatggacag aaacctggac cccagttgca 660
ggagaccttc aagaggtgac gtatatccag ctggaccatc actccctcac acagagggca 720
gtcggagctg tgacctcaca gagcacagat atggctgagt ccagcacata tgcagccatc 780
atcagacact ga 792
<210> 168
<211> 263
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(263)
<223> Lair
<400> 168
Met Ser Leu His Pro Val Ile Leu Leu Val Leu Val Leu Cys Leu Gly
1 5 10 15
Trp Lys Ile Asn Thr Gln Glu Gly Ser Leu Pro Asp Ile Thr Ile Phe
20 25 30
Pro Asn Ser Ser Leu Met Ile Ser Gln Gly Thr Phe Val Thr Val Val
35 40 45
Cys Ser Tyr Ser Asp Lys His Asp Leu Tyr Asn Met Val Arg Leu Glu
50 55 60
Lys Asp Gly Ser Thr Phe Met Glu Lys Ser Thr Glu Pro Tyr Lys Thr
65 70 75 80
Glu Asp Glu Phe Glu Ile Gly Pro Val Asn Glu Thr Ile Thr Gly His
85 90 95
Tyr Ser Cys Ile Tyr Ser Lys Gly Ile Thr Trp Ser Glu Arg Ser Lys
100 105 110
Thr Leu Glu Leu Lys Val Ile Lys Glu Asn Val Ile Gln Thr Pro Ala
115 120 125
Pro Gly Pro Thr Ser Asp Thr Ser Trp Leu Lys Thr Tyr Ser Ile Tyr
130 135 140
Ile Phe Thr Val Val Ser Val Ile Phe Leu Leu Cys Leu Ser Ala Leu
145 150 155 160
Leu Phe Cys Phe Leu Arg His Arg Gln Lys Lys Gln Gly Leu Pro Asn
165 170 175
Asn Lys Arg Gln Gln Gln Arg Pro Glu Glu Arg Leu Asn Leu Ala Thr
180 185 190
Asn Gly Leu Glu Met Thr Pro Asp Ile Val Ala Asp Asp Arg Leu Pro
195 200 205
Glu Asp Arg Trp Thr Glu Thr Trp Thr Pro Val Ala Gly Asp Leu Gln
210 215 220
Glu Val Thr Tyr Ile Gln Leu Asp His His Ser Leu Thr Gln Arg Ala
225 230 235 240
Val Gly Ala Val Thr Ser Gln Ser Thr Asp Met Ala Glu Ser Ser Thr
245 250 255
Tyr Ala Ala Ile Ile Arg His
260
<210> 169
<211> 123
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(123)
<223> Lair1的胞外域
<400> 169
Gln Glu Gly Ser Leu Pro Asp Ile Thr Ile Phe Pro Asn Ser Ser Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Gln Gly Thr Phe Val Thr Val Val Cys Ser Tyr Ser Asp
20 25 30
Lys His Asp Leu Tyr Asn Met Val Arg Leu Glu Lys Asp Gly Ser Thr
35 40 45
Phe Met Glu Lys Ser Thr Glu Pro Tyr Lys Thr Glu Asp Glu Phe Glu
50 55 60
Ile Gly Pro Val Asn Glu Thr Ile Thr Gly His Tyr Ser Cys Ile Tyr
65 70 75 80
Ser Lys Gly Ile Thr Trp Ser Glu Arg Ser Lys Thr Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Val Ile Lys Glu Asn Val Ile Gln Thr Pro Ala Pro Gly Pro Thr Ser
100 105 110
Asp Thr Ser Trp Leu Lys Thr Tyr Ser Ile Tyr
115 120
<210> 170
<211> 1470
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(1470)
<223> LILRA1的cDNA
<400> 170
atgaccccca tcgtcacagt cctgatctgt ctcaggctga gtctgggccc ccggacccac 60
gtgcaggcag ggaccctccc caagcccaca ctctgggctg agccaggctc tgtgatcacc 120
caggggagtc ccgtgaccct ctggtgtcag gggatcctgg agacccagga gtaccgtctg 180
tatagagaaa agaaaacagc accctggatt acacggatcc cacaggagat tgtgaagaag 240
ggccagttcc ccatcccatc catcacctgg gaacacacag ggcggtatcg ctgtttctac 300
ggtagccaca ctgcaggctg gtcagagccc agtgaccccc tggagctggt ggtgacagga 360
gcctacatca aacccaccct ctcagctcta cccagccctg tggtgacctc aggagggaac 420
gtgaccctcc attgtgtctc acaggtggca tttggcagct tcattctgtg taaggaagga 480
gaagatgaac acccacaatg cctgaactca cagccccgta cccatgggtg gtcccgggcc 540
atcttctctg tgggccccgt gagcccgagt cgcaggtggt cgtacaggtg ctatgcttat 600
gactcgaact ctccccatgt gtggtctcta cccagtgatc tcctggagct cctggtccta 660
ggtgtttcta agaagccatc actctcagtg cagccaggtc ctatagtggc ccctggggag 720
agcctgaccc tccagtgtgt ttctgatgtc agctacgaca gatttgttct gtataaggag 780
ggagaacgtg acttcctcca gctccctggc ccacagcccc aggctgggct ctcccaggcc 840
aacttcaccc tgggccctgt gagccgctcc tacgggggcc agtacagatg ctccggtgca 900
tacaacctct cctccgagtg gtcggccccc agcgaccccc tggacatcct gatcgcagga 960
cagttccgtg gcagaccctt catctcggtg catccgggcc ccacggtggc ctcaggagag 1020
aacgtgaccc tgctgtgtca gtcatggggg ccgttccaca ctttccttct gaccaaggcg 1080
ggagcagctg atgcccccct ccgtctcaga tcaatacacg aatatcctaa gtaccaggct 1140
gaattcccta tgagtcctgt gacctcagcc cactcgggga cctacaggtg ctacggctca 1200
ctcagctcca acccctacct gctgtctcac cccagtgact ccctggagct catggtctca 1260
ggagcagctg agaccctcag cccaccacaa aacaagtccg attccaaggc tggagcagct 1320
aacaccctca gcccatcaca aaacaagact gcctcacacc cccaggatta cacagtggag 1380
aatctcatcc gcatgggcat agctggcttg gtcctggtgg tcctcgggat tctgctattt 1440
gaggctcagc acagccagag aagcctctga 1470
<210> 171
<211> 489
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(489)
<223> LILRA1
<400> 171
Met Thr Pro Ile Val Thr Val Leu Ile Cys Leu Arg Leu Ser Leu Gly
1 5 10 15
Pro Arg Thr His Val Gln Ala Gly Thr Leu Pro Lys Pro Thr Leu Trp
20 25 30
Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile Thr Gln Gly Ser Pro Val Thr Leu Trp
35 40 45
Cys Gln Gly Ile Leu Glu Thr Gln Glu Tyr Arg Leu Tyr Arg Glu Lys
50 55 60
Lys Thr Ala Pro Trp Ile Thr Arg Ile Pro Gln Glu Ile Val Lys Lys
65 70 75 80
Gly Gln Phe Pro Ile Pro Ser Ile Thr Trp Glu His Thr Gly Arg Tyr
85 90 95
Arg Cys Phe Tyr Gly Ser His Thr Ala Gly Trp Ser Glu Pro Ser Asp
100 105 110
Pro Leu Glu Leu Val Val Thr Gly Ala Tyr Ile Lys Pro Thr Leu Ser
115 120 125
Ala Leu Pro Ser Pro Val Val Thr Ser Gly Gly Asn Val Thr Leu His
130 135 140
Cys Val Ser Gln Val Ala Phe Gly Ser Phe Ile Leu Cys Lys Glu Gly
145 150 155 160
Glu Asp Glu His Pro Gln Cys Leu Asn Ser Gln Pro Arg Thr His Gly
165 170 175
Trp Ser Arg Ala Ile Phe Ser Val Gly Pro Val Ser Pro Ser Arg Arg
180 185 190
Trp Ser Tyr Arg Cys Tyr Ala Tyr Asp Ser Asn Ser Pro His Val Trp
195 200 205
Ser Leu Pro Ser Asp Leu Leu Glu Leu Leu Val Leu Gly Val Ser Lys
210 215 220
Lys Pro Ser Leu Ser Val Gln Pro Gly Pro Ile Val Ala Pro Gly Glu
225 230 235 240
Ser Leu Thr Leu Gln Cys Val Ser Asp Val Ser Tyr Asp Arg Phe Val
245 250 255
Leu Tyr Lys Glu Gly Glu Arg Asp Phe Leu Gln Leu Pro Gly Pro Gln
260 265 270
Pro Gln Ala Gly Leu Ser Gln Ala Asn Phe Thr Leu Gly Pro Val Ser
275 280 285
Arg Ser Tyr Gly Gly Gln Tyr Arg Cys Ser Gly Ala Tyr Asn Leu Ser
290 295 300
Ser Glu Trp Ser Ala Pro Ser Asp Pro Leu Asp Ile Leu Ile Ala Gly
305 310 315 320
Gln Phe Arg Gly Arg Pro Phe Ile Ser Val His Pro Gly Pro Thr Val
325 330 335
Ala Ser Gly Glu Asn Val Thr Leu Leu Cys Gln Ser Trp Gly Pro Phe
340 345 350
His Thr Phe Leu Leu Thr Lys Ala Gly Ala Ala Asp Ala Pro Leu Arg
355 360 365
Leu Arg Ser Ile His Glu Tyr Pro Lys Tyr Gln Ala Glu Phe Pro Met
370 375 380
Ser Pro Val Thr Ser Ala His Ser Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ser
385 390 395 400
Leu Ser Ser Asn Pro Tyr Leu Leu Ser His Pro Ser Asp Ser Leu Glu
405 410 415
Leu Met Val Ser Gly Ala Ala Glu Thr Leu Ser Pro Pro Gln Asn Lys
420 425 430
Ser Asp Ser Lys Ala Gly Ala Ala Asn Thr Leu Ser Pro Ser Gln Asn
435 440 445
Lys Thr Ala Ser His Pro Gln Asp Tyr Thr Val Glu Asn Leu Ile Arg
450 455 460
Met Gly Ile Ala Gly Leu Val Leu Val Val Leu Gly Ile Leu Leu Phe
465 470 475 480
Glu Ala Gln His Ser Gln Arg Ser Leu
485
<210> 172
<211> 445
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(445)
<223> LILRA1的胞外域
<400> 172
Pro Arg Thr His Val Gln Ala Gly Thr Leu Pro Lys Pro Thr Leu Trp
1 5 10 15
Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile Thr Gln Gly Ser Pro Val Thr Leu Trp
20 25 30
Cys Gln Gly Ile Leu Glu Thr Gln Glu Tyr Arg Leu Tyr Arg Glu Lys
35 40 45
Lys Thr Ala Pro Trp Ile Thr Arg Ile Pro Gln Glu Ile Val Lys Lys
50 55 60
Gly Gln Phe Pro Ile Pro Ser Ile Thr Trp Glu His Thr Gly Arg Tyr
65 70 75 80
Arg Cys Phe Tyr Gly Ser His Thr Ala Gly Trp Ser Glu Pro Ser Asp
85 90 95
Pro Leu Glu Leu Val Val Thr Gly Ala Tyr Ile Lys Pro Thr Leu Ser
100 105 110
Ala Leu Pro Ser Pro Val Val Thr Ser Gly Gly Asn Val Thr Leu His
115 120 125
Cys Val Ser Gln Val Ala Phe Gly Ser Phe Ile Leu Cys Lys Glu Gly
130 135 140
Glu Asp Glu His Pro Gln Cys Leu Asn Ser Gln Pro Arg Thr His Gly
145 150 155 160
Trp Ser Arg Ala Ile Phe Ser Val Gly Pro Val Ser Pro Ser Arg Arg
165 170 175
Trp Ser Tyr Arg Cys Tyr Ala Tyr Asp Ser Asn Ser Pro His Val Trp
180 185 190
Ser Leu Pro Ser Asp Leu Leu Glu Leu Leu Val Leu Gly Val Ser Lys
195 200 205
Lys Pro Ser Leu Ser Val Gln Pro Gly Pro Ile Val Ala Pro Gly Glu
210 215 220
Ser Leu Thr Leu Gln Cys Val Ser Asp Val Ser Tyr Asp Arg Phe Val
225 230 235 240
Leu Tyr Lys Glu Gly Glu Arg Asp Phe Leu Gln Leu Pro Gly Pro Gln
245 250 255
Pro Gln Ala Gly Leu Ser Gln Ala Asn Phe Thr Leu Gly Pro Val Ser
260 265 270
Arg Ser Tyr Gly Gly Gln Tyr Arg Cys Ser Gly Ala Tyr Asn Leu Ser
275 280 285
Ser Glu Trp Ser Ala Pro Ser Asp Pro Leu Asp Ile Leu Ile Ala Gly
290 295 300
Gln Phe Arg Gly Arg Pro Phe Ile Ser Val His Pro Gly Pro Thr Val
305 310 315 320
Ala Ser Gly Glu Asn Val Thr Leu Leu Cys Gln Ser Trp Gly Pro Phe
325 330 335
His Thr Phe Leu Leu Thr Lys Ala Gly Ala Ala Asp Ala Pro Leu Arg
340 345 350
Leu Arg Ser Ile His Glu Tyr Pro Lys Tyr Gln Ala Glu Phe Pro Met
355 360 365
Ser Pro Val Thr Ser Ala His Ser Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ser
370 375 380
Leu Ser Ser Asn Pro Tyr Leu Leu Ser His Pro Ser Asp Ser Leu Glu
385 390 395 400
Leu Met Val Ser Gly Ala Ala Glu Thr Leu Ser Pro Pro Gln Asn Lys
405 410 415
Ser Asp Ser Lys Ala Gly Ala Ala Asn Thr Leu Ser Pro Ser Gln Asn
420 425 430
Lys Thr Ala Ser His Pro Gln Asp Tyr Thr Val Glu Asn
435 440 445
<210> 173
<211> 1452
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(1452)
<223> LILRA2的cDNA
<400> 173
atgaccccca tcctcacggt cctgatctgt ctcgggctga gtctgggccc caggacccac 60
gtgcaggcag ggcacctccc caagcccacc ctctgggctg agccaggctc tgtgatcatc 120
cagggaagtc ctgtgaccct caggtgtcag gggagccttc aggctgagga gtaccatcta 180
tatagggaaa acaaatcagc atcctgggtt agacggatac aagagcctgg gaagaatggc 240
cagttcccca tcccatccat cacctgggaa cacgcagggc ggtatcactg tcagtactac 300
agccacaatc actcatcaga gtacagtgac cccctggagc tggtggtgac aggagcctac 360
agcaaaccca ccctctcagc tctgcccagc cctgtggtga cctcaggagg gaacgtgacc 420
ctccagtgtg tctcacaggt ggcatttgac ggcttcattc tgtgtaagga aggagaagat 480
gaacacccac aacgcctgaa ctcccattcc catgcccgtg ggtggtcctg ggccatcttc 540
tccgtgggcc ccgtgagccc gagtcgcagg tggtcgtaca ggtgctatgc ttatgactcg 600
aactctccct atgtgtggtc tctacccagt gatctcctgg agctcctggt cccaggtgtt 660
tctaagaagc catcactctc agtgcagcca ggtcctatgg tggcccctgg ggagagcctg 720
accctccagt gtgtctctga tgtcggctac gacagatttg ttctgtataa ggagggagaa 780
cgtgacttcc tccagcgccc tggttggcag ccccaggctg ggctctccca ggccaacttc 840
accctgggcc ctgtgagccc ctcccacggg ggccagtaca gatgctacag tgcacacaac 900
ctctcctccg agtggtcggc ccccagtgac cccctggaca tcctgatcac aggacagttc 960
tatgacagac cctctctctc ggtgcagccg gtccccacag tagccccagg aaagaacgtg 1020
accctgctgt gtcagtcacg ggggcagttc cacactttcc ttctgaccaa ggagggggca 1080
ggccatcccc cactgcatct gagatcagag caccaagctc agcagaacca ggctgaattc 1140
cgcatgggtc ctgtgacctc agcccacgtg gggacctaca gatgctacag ctcactcagc 1200
tccaacccct acctgctgtc tctccccagt gaccccctgg agctcgtggt ctcagaagca 1260
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gtggtcctcg ggattctgct atttgaggct cagcacagcc agagaagcct acaagatgca 1440
gccgggaggt ga 1452
<210> 174
<211> 483
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(483)
<223> LILRA2
<400> 174
Met Thr Pro Ile Leu Thr Val Leu Ile Cys Leu Gly Leu Ser Leu Gly
1 5 10 15
Pro Arg Thr His Val Gln Ala Gly His Leu Pro Lys Pro Thr Leu Trp
20 25 30
Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile Ile Gln Gly Ser Pro Val Thr Leu Arg
35 40 45
Cys Gln Gly Ser Leu Gln Ala Glu Glu Tyr His Leu Tyr Arg Glu Asn
50 55 60
Lys Ser Ala Ser Trp Val Arg Arg Ile Gln Glu Pro Gly Lys Asn Gly
65 70 75 80
Gln Phe Pro Ile Pro Ser Ile Thr Trp Glu His Ala Gly Arg Tyr His
85 90 95
Cys Gln Tyr Tyr Ser His Asn His Ser Ser Glu Tyr Ser Asp Pro Leu
100 105 110
Glu Leu Val Val Thr Gly Ala Tyr Ser Lys Pro Thr Leu Ser Ala Leu
115 120 125
Pro Ser Pro Val Val Thr Leu Gly Gly Asn Val Thr Leu Gln Cys Val
130 135 140
Ser Gln Val Ala Phe Asp Gly Phe Ile Leu Cys Lys Glu Gly Glu Asp
145 150 155 160
Glu His Pro Gln Arg Leu Asn Ser His Ser His Ala Arg Gly Trp Ser
165 170 175
Trp Ala Ile Phe Ser Val Gly Pro Val Ser Pro Ser Arg Arg Trp Ser
180 185 190
Tyr Arg Cys Tyr Ala Tyr Asp Ser Asn Ser Pro Tyr Val Trp Ser Leu
195 200 205
Pro Ser Asp Leu Leu Glu Leu Leu Val Pro Gly Val Ser Lys Lys Pro
210 215 220
Ser Leu Ser Val Gln Pro Gly Pro Met Val Ala Pro Gly Glu Ser Leu
225 230 235 240
Thr Leu Gln Cys Val Ser Asp Val Gly Tyr Asp Arg Phe Val Leu Tyr
245 250 255
Lys Glu Gly Glu Arg Asp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Trp Gln Pro Gln
260 265 270
Ala Gly Leu Ser Gln Ala Asn Phe Thr Leu Gly Pro Val Ser Pro Ser
275 280 285
His Gly Gly Gln Tyr Arg Cys Tyr Ser Ala His Asn Leu Ser Ser Glu
290 295 300
Trp Ser Ala Pro Ser Asp Pro Leu Asp Ile Leu Ile Thr Gly Gln Phe
305 310 315 320
Tyr Asp Arg Pro Ser Leu Ser Val Gln Pro Val Pro Thr Val Ala Pro
325 330 335
Gly Lys Asn Val Thr Leu Leu Cys Gln Ser Arg Gly Gln Phe His Thr
340 345 350
Phe Leu Leu Thr Lys Glu Gly Ala Gly His Pro Pro Leu His Leu Arg
355 360 365
Ser Glu His Gln Ala Gln Gln Asn Gln Ala Glu Phe Arg Met Gly Pro
370 375 380
Val Thr Ser Ala His Val Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Ser Ser Leu Ser
385 390 395 400
Ser Asn Pro Tyr Leu Leu Ser Leu Pro Ser Asp Pro Leu Glu Leu Val
405 410 415
Val Ser Glu Ala Ala Glu Thr Leu Ser Pro Ser Gln Asn Lys Thr Asp
420 425 430
Ser Thr Thr Thr Ser Leu Gly Gln His Pro Gln Asp Tyr Thr Val Glu
435 440 445
Asn Leu Ile Arg Met Gly Val Ala Gly Leu Val Leu Val Val Leu Gly
450 455 460
Ile Leu Leu Phe Glu Ala Gln His Ser Gln Arg Ser Leu Gln Asp Ala
465 470 475 480
Ala Gly Arg
<210> 175
<211> 426
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(426)
<223> LILRA2的胞外域
<400> 175
Gly His Leu Pro Lys Pro Thr Leu Trp Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile
1 5 10 15
Ile Gln Gly Ser Pro Val Thr Leu Arg Cys Gln Gly Ser Leu Gln Ala
20 25 30
Glu Glu Tyr His Leu Tyr Arg Glu Asn Lys Ser Ala Ser Trp Val Arg
35 40 45
Arg Ile Gln Glu Pro Gly Lys Asn Gly Gln Phe Pro Ile Pro Ser Ile
50 55 60
Thr Trp Glu His Ala Gly Arg Tyr His Cys Gln Tyr Tyr Ser His Asn
65 70 75 80
His Ser Ser Glu Tyr Ser Asp Pro Leu Glu Leu Val Val Thr Gly Ala
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Tyr Ser Lys Pro Thr Leu Ser Ala Leu Pro Ser Pro Val Val Thr Leu
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Gly Gly Asn Val Thr Leu Gln Cys Val Ser Gln Val Ala Phe Asp Gly
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Phe Ile Leu Cys Lys Glu Gly Glu Asp Glu His Pro Gln Arg Leu Asn
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Ser His Ser His Ala Arg Gly Trp Ser Trp Ala Ile Phe Ser Val Gly
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Pro Val Ser Pro Ser Arg Arg Trp Ser Tyr Arg Cys Tyr Ala Tyr Asp
165 170 175
Ser Asn Ser Pro Tyr Val Trp Ser Leu Pro Ser Asp Leu Leu Glu Leu
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Leu Val Pro Gly Val Ser Lys Lys Pro Ser Leu Ser Val Gln Pro Gly
195 200 205
Pro Met Val Ala Pro Gly Glu Ser Leu Thr Leu Gln Cys Val Ser Asp
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Val Gly Tyr Asp Arg Phe Val Leu Tyr Lys Glu Gly Glu Arg Asp Phe
225 230 235 240
Leu Gln Arg Pro Gly Trp Gln Pro Gln Ala Gly Leu Ser Gln Ala Asn
245 250 255
Phe Thr Leu Gly Pro Val Ser Pro Ser His Gly Gly Gln Tyr Arg Cys
260 265 270
Tyr Ser Ala His Asn Leu Ser Ser Glu Trp Ser Ala Pro Ser Asp Pro
275 280 285
Leu Asp Ile Leu Ile Thr Gly Gln Phe Tyr Asp Arg Pro Ser Leu Ser
290 295 300
Val Gln Pro Val Pro Thr Val Ala Pro Gly Lys Asn Val Thr Leu Leu
305 310 315 320
Cys Gln Ser Arg Gly Gln Phe His Thr Phe Leu Leu Thr Lys Glu Gly
325 330 335
Ala Gly His Pro Pro Leu His Leu Arg Ser Glu His Gln Ala Gln Gln
340 345 350
Asn Gln Ala Glu Phe Arg Met Gly Pro Val Thr Ser Ala His Val Gly
355 360 365
Thr Tyr Arg Cys Tyr Ser Ser Leu Ser Ser Asn Pro Tyr Leu Leu Ser
370 375 380
Leu Pro Ser Asp Pro Leu Glu Leu Val Val Ser Glu Ala Ala Glu Thr
385 390 395 400
Leu Ser Pro Ser Gln Asn Lys Thr Asp Ser Thr Thr Thr Ser Leu Gly
405 410 415
Gln His Pro Gln Asp Tyr Thr Val Glu Asn
420 425
<210> 176
<211> 1320
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(1320)
<223> LILRA3的cDNA
<400> 176
atgaccccca tcctcacggt cctgatctgt ctcgggctga gcctggaccc caggacccac 60
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<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(439)
<223> LILRA3
<400> 177
Met Thr Pro Ile Leu Thr Val Leu Ile Cys Leu Gly Leu Ser Leu Asp
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Pro Arg Thr His Val Gln Ala Gly Pro Leu Pro Lys Pro Thr Leu Trp
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Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile Thr Gln Gly Ser Pro Val Thr Leu Arg
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Cys Gln Gly Ser Leu Glu Thr Gln Glu Tyr His Leu Tyr Arg Glu Lys
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Lys Thr Ala Leu Trp Ile Thr Arg Ile Pro Gln Glu Leu Val Lys Lys
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Gly Gln Phe Pro Ile Leu Ser Ile Thr Trp Glu His Ala Gly Arg Tyr
85 90 95
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Pro Leu Glu Leu Val Val Thr Gly Ala Tyr Ser Lys Pro Thr Leu Ser
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Ser Pro Val Thr Ser Ala His Ala Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ser
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Leu Ser Ser Asn Pro Tyr Leu Leu Thr His Pro Ser Asp Pro Leu Glu
405 410 415
Leu Val Val Ser Gly Ala Ala Glu Thr Leu Ser Pro Pro Gln Asn Lys
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Ser Asp Ser Lys Ala Gly Glu
435
<210> 178
<211> 416
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(416)
<223> LILRA3的胞外域
<400> 178
Gly Pro Leu Pro Lys Pro Thr Leu Trp Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile
1 5 10 15
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Thr Ser Gly Gly Asn Val Thr Ile Gln Cys Asp Ser Gln Val Ala Phe
115 120 125
Asp Gly Phe Ile Leu Cys Lys Glu Gly Glu Asp Glu His Pro Gln Cys
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Leu Asn Ser His Ser His Ala Arg Gly Ser Ser Arg Ala Ile Phe Ser
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Gly Leu Leu Val Pro Gly Val Ser Lys Lys Pro Ser Leu Ser Val Gln
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Pro Gly Pro Val Val Ala Pro Gly Glu Lys Leu Thr Phe Gln Cys Gly
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Asp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Arg Gln Pro Gln Ala Gly Leu Ser Gln
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Thr Cys Ser Gly Ala Tyr Asn Leu Ser Ser Glu Trp Ser Ala Pro Ser
275 280 285
Asp Pro Leu Asp Ile Leu Ile Thr Gly Gln Ile Arg Ala Arg Pro Phe
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Leu Ser Val Arg Pro Gly Pro Thr Val Ala Ser Gly Glu Asn Val Thr
305 310 315 320
Leu Leu Cys Gln Ser Gln Gly Gly Met His Thr Phe Leu Leu Thr Lys
325 330 335
Glu Gly Ala Ala Asp Ser Pro Leu Arg Leu Lys Ser Lys Arg Gln Ser
340 345 350
His Lys Tyr Gln Ala Glu Phe Pro Met Ser Pro Val Thr Ser Ala His
355 360 365
Ala Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ser Leu Ser Ser Asn Pro Tyr Leu
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Leu Thr His Pro Ser Asp Pro Leu Glu Leu Val Val Ser Gly Ala Ala
385 390 395 400
Glu Thr Leu Ser Pro Pro Gln Asn Lys Ser Asp Ser Lys Ala Gly Glu
405 410 415
<210> 179
<211> 1500
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(1500)
<223> LILRA4的cDNA
<400> 179
atgaccctca ttctcacaag cctgctcttc tttgggctga gcctgggccc caggacccgg 60
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accctccagt gtggctctga tgtcggctac atcagataca ctctgtacaa ggagggggcc 780
gatggcctcc cccagcgccc tggccggcag ccccaggctg ggctctccca ggccaacttc 840
accctgagcc ctgtgagccg ctcctacggg ggccagtaca gatgctacgg cgcacacaac 900
gtctcctccg agtggtcggc ccccagtgac cccctggata tcctgatcgc aggacagatc 960
tctgacagac cctccctctc agtgcagccg ggccccacgg tgacctcagg agagaaggtg 1020
accctgctgt gtcagtcatg ggacccgatg ttcactttcc ttctgaccaa ggagggggca 1080
gcccatcccc cgttgcgtct gagatcaatg tacggagctc ataagtacca ggctgaattc 1140
cccatgagtc ctgtgacctc agcccacgcg gggacctaca ggtgctacgg ctcacgcagc 1200
tccaacccct acctgctgtc tcaccccagt gagcccctgg agctcgtggt ctcaggagca 1260
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gcaaacagca gaaaggacaa tgcacccttc agagtggtgg agccttggga acagatctga 1500
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<211> 499
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(499)
<223> LILRA4
<400> 180
Met Thr Leu Ile Leu Thr Ser Leu Leu Phe Phe Gly Leu Ser Leu Gly
1 5 10 15
Pro Arg Thr Arg Val Gln Ala Glu Asn Leu Pro Lys Pro Ile Leu Trp
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Cys Gln Gly Thr Leu Glu Ala Gln Gly Tyr Arg Leu Asp Lys Glu Gly
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Ser Arg Leu Gly Leu Gly Arg Phe Thr Leu Ile Glu Glu Gly Asp His
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165 170 175
Gln Ala Leu Phe Pro Met Gly Pro Leu Thr Phe Ser Asn Arg Gly Thr
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Ser Leu Leu Thr Leu Gln Gly Pro Val Val Thr Pro Gly Glu Asn Leu
225 230 235 240
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245 250 255
Lys Glu Gly Ala Asp Gly Leu Pro Gln Arg Pro Gly Arg Gln Pro Gln
260 265 270
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275 280 285
Tyr Gly Gly Gln Tyr Arg Cys Tyr Gly Ala His Asn Val Ser Ser Glu
290 295 300
Trp Ser Ala Pro Ser Asp Pro Leu Asp Ile Leu Ile Ala Gly Gln Ile
305 310 315 320
Ser Asp Arg Pro Ser Leu Ser Val Gln Pro Gly Pro Thr Val Thr Ser
325 330 335
Gly Glu Lys Val Thr Leu Leu Cys Gln Ser Trp Asp Pro Met Phe Thr
340 345 350
Phe Leu Leu Thr Lys Glu Gly Ala Ala His Pro Pro Leu Arg Leu Arg
355 360 365
Ser Met Tyr Gly Ala His Lys Tyr Gln Ala Glu Phe Pro Met Ser Pro
370 375 380
Val Thr Ser Ala His Ala Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ser Arg Ser
385 390 395 400
Ser Asn Pro Tyr Leu Leu Ser His Pro Ser Glu Pro Leu Glu Leu Val
405 410 415
Val Ser Gly Ala Thr Glu Thr Leu Asn Pro Ala Gln Lys Lys Ser Asp
420 425 430
Ser Lys Thr Ala Pro His Leu Gln Asp Tyr Thr Val Glu Asn Leu Ile
435 440 445
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Phe Glu Ala Gln His Ser Gln Arg Ser Pro Pro Arg Cys Ser Gln Glu
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485 490 495
Glu Gln Ile
<210> 181
<211> 423
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(423)
<223> LILRA4的胞外域
<400> 181
Glu Asn Leu Pro Lys Pro Ile Leu Trp Ala Glu Pro Gly Pro Val Ile
1 5 10 15
Thr Trp His Asn Pro Val Thr Ile Trp Cys Gln Gly Thr Leu Glu Ala
20 25 30
Gln Gly Tyr Arg Leu Asp Lys Glu Gly Asn Ser Met Ser Arg His Ile
35 40 45
Leu Lys Thr Leu Glu Ser Glu Asn Lys Val Lys Leu Ser Ile Pro Ser
50 55 60
Met Met Trp Glu His Ala Gly Arg Tyr His Cys Tyr Tyr Gln Ser Pro
65 70 75 80
Ala Gly Trp Ser Glu Pro Ser Asp Pro Leu Glu Leu Val Val Thr Ala
85 90 95
Tyr Ser Arg Pro Thr Leu Ser Ala Leu Pro Ser Pro Val Val Thr Ser
100 105 110
Gly Val Asn Val Thr Leu Arg Cys Ala Ser Arg Leu Gly Leu Gly Arg
115 120 125
Phe Thr Leu Ile Glu Glu Gly Asp His Arg Leu Ser Trp Thr Leu Asn
130 135 140
Ser His Gln His Asn His Gly Lys Phe Gln Ala Leu Phe Pro Met Gly
145 150 155 160
Pro Leu Thr Phe Ser Asn Arg Gly Thr Phe Arg Cys Tyr Gly Tyr Glu
165 170 175
Asn Asn Thr Pro Tyr Val Trp Ser Glu Pro Ser Asp Pro Leu Gln Leu
180 185 190
Leu Val Ser Gly Val Ser Arg Lys Pro Ser Leu Leu Thr Leu Gln Gly
195 200 205
Pro Val Val Thr Pro Gly Glu Asn Leu Thr Leu Gln Cys Gly Ser Asp
210 215 220
Val Gly Tyr Ile Arg Tyr Thr Leu Tyr Lys Glu Gly Ala Asp Gly Leu
225 230 235 240
Pro Gln Arg Pro Gly Arg Gln Pro Gln Ala Gly Leu Ser Gln Ala Asn
245 250 255
Phe Thr Leu Ser Pro Val Ser Arg Ser Tyr Gly Gly Gln Tyr Arg Cys
260 265 270
Tyr Gly Ala His Asn Val Ser Ser Glu Trp Ser Ala Pro Ser Asp Pro
275 280 285
Leu Asp Ile Leu Ile Ala Gly Gln Ile Ser Asp Arg Pro Ser Leu Ser
290 295 300
Val Gln Pro Gly Pro Thr Val Thr Ser Gly Glu Lys Val Thr Leu Leu
305 310 315 320
Cys Gln Ser Trp Asp Pro Met Phe Thr Phe Leu Leu Thr Lys Glu Gly
325 330 335
Ala Ala His Pro Pro Leu Arg Leu Arg Ser Met Tyr Gly Ala His Lys
340 345 350
Tyr Gln Ala Glu Phe Pro Met Ser Pro Val Thr Ser Ala His Ala Gly
355 360 365
Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ser Arg Ser Ser Asn Pro Tyr Leu Leu Ser
370 375 380
His Pro Ser Glu Pro Leu Glu Leu Val Val Ser Gly Ala Thr Glu Thr
385 390 395 400
Leu Asn Pro Ala Gln Lys Lys Ser Asp Ser Lys Thr Ala Pro His Leu
405 410 415
Gln Asp Tyr Thr Val Glu Asn
420
<210> 182
<211> 900
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(900)
<223> LILRA5的cDNA
<400> 182
atggcaccat ggtctcatcc atctgcacag ctgcagccag tgggaggaga cgccgtgagc 60
cctgccctca tggttctgct ctgcctcggg ctgagtctgg gccccaggac ccacgtgcag 120
gcagggaacc tctccaaagc caccctctgg gctgagccag gctctgtgat cagccggggg 180
aactctgtga ccatccggtg tcaggggacc ctggaggccc aggaataccg tctggttaaa 240
gagggaagcc cagaaccctg ggacacacag aacccactgg agcccaagaa caaggccaga 300
ttctccatcc catccatgac agagcaccat gcagggagat accgctgtta ctactacagc 360
cctgcaggct ggtcagagcc cagcgacccc ctggagctgg tggtgacagg attctacaac 420
aaacccaccc tctcagccct gcccagtcct gtggtgacct caggagagaa cgtgaccctc 480
cagtgtggct cacggctgag attcgacagg ttcattctga ctgaggaagg agaccacaag 540
ctctcctgga ccttggactc acagctgacc cccagtgggc agttccaggc cctgttccct 600
gtgggccctg tgacccccag ccacaggtgg atgctcagat gctatggctc tcgcaggcat 660
atcctgcagg tatggtcaga acccagtgac ctcctggaga ttccggtctc aggagcagct 720
gataacctca gtccgtcaca aaacaagtct gactctggga ctgcctcaca ccttcaggat 780
tacgcagtag agaatctcat ccgcatgggc atggccggct tgatcctggt ggtccttggg 840
attctgatat ttcaggattg gcacagccag agaagccccc aagctgcagc tggaaggtga 900
<210> 183
<211> 299
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(299)
<223> LILRA5
<400> 183
Met Ala Pro Trp Ser His Pro Ser Ala Gln Leu Gln Pro Val Gly Gly
1 5 10 15
Asp Ala Val Ser Pro Ala Leu Met Val Leu Leu Cys Leu Gly Leu Ser
20 25 30
Leu Gly Pro Arg Thr His Val Gln Ala Gly Asn Leu Ser Lys Ala Thr
35 40 45
Leu Trp Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile Ser Arg Gly Asn Ser Val Thr
50 55 60
Ile Arg Cys Gln Gly Thr Leu Glu Ala Gln Glu Tyr Arg Leu Val Lys
65 70 75 80
Glu Gly Ser Pro Glu Pro Trp Asp Thr Gln Asn Pro Leu Glu Pro Lys
85 90 95
Asn Lys Ala Arg Phe Ser Ile Pro Ser Met Thr Glu His His Ala Gly
100 105 110
Arg Tyr Arg Cys Tyr Tyr Tyr Ser Pro Ala Gly Trp Ser Glu Pro Ser
115 120 125
Asp Pro Leu Glu Leu Val Val Thr Gly Phe Tyr Asn Lys Pro Thr Leu
130 135 140
Ser Ala Leu Pro Ser Pro Val Val Thr Ser Gly Glu Asn Val Thr Leu
145 150 155 160
Gln Cys Gly Ser Arg Leu Arg Phe Asp Arg Phe Ile Leu Thr Glu Glu
165 170 175
Gly Asp His Lys Leu Ser Trp Thr Leu Asp Ser Gln Leu Thr Pro Ser
180 185 190
Gly Gln Phe Gln Ala Leu Phe Pro Val Gly Pro Val Thr Pro Ser His
195 200 205
Arg Trp Met Leu Arg Cys Tyr Gly Ser Arg Arg His Ile Leu Gln Val
210 215 220
Trp Ser Glu Pro Ser Asp Leu Leu Glu Ile Pro Val Ser Gly Ala Ala
225 230 235 240
Asp Asn Leu Ser Pro Ser Gln Asn Lys Ser Asp Ser Gly Thr Ala Ser
245 250 255
His Leu Gln Asp Tyr Ala Val Glu Asn Leu Ile Arg Met Gly Met Ala
260 265 270
Gly Leu Ile Leu Val Val Leu Gly Ile Leu Ile Phe Gln Asp Trp His
275 280 285
Ser Gln Arg Ser Pro Gln Ala Ala Ala Gly Arg
290 295
<210> 184
<211> 227
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(227)
<223> LILRA5的胞外域
<400> 184
Gly Asn Leu Ser Lys Ala Thr Leu Trp Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile
1 5 10 15
Ser Arg Gly Asn Ser Val Thr Ile Arg Cys Gln Gly Thr Leu Glu Ala
20 25 30
Gln Glu Tyr Arg Leu Val Lys Glu Gly Ser Pro Glu Pro Trp Asp Thr
35 40 45
Gln Asn Pro Leu Glu Pro Lys Asn Lys Ala Arg Phe Ser Ile Pro Ser
50 55 60
Met Thr Glu His His Ala Gly Arg Tyr Arg Cys Tyr Tyr Tyr Ser Pro
65 70 75 80
Ala Gly Trp Ser Glu Pro Ser Asp Pro Leu Glu Leu Val Val Thr Gly
85 90 95
Phe Tyr Asn Lys Pro Thr Leu Ser Ala Leu Pro Ser Pro Val Val Thr
100 105 110
Ser Gly Glu Asn Val Thr Leu Gln Cys Gly Ser Arg Leu Arg Phe Asp
115 120 125
Arg Phe Ile Leu Thr Glu Glu Gly Asp His Lys Leu Ser Trp Thr Leu
130 135 140
Asp Ser Gln Leu Thr Pro Ser Gly Gln Phe Gln Ala Leu Phe Pro Val
145 150 155 160
Gly Pro Val Thr Pro Ser His Arg Trp Met Leu Arg Cys Tyr Gly Ser
165 170 175
Arg Arg His Ile Leu Gln Val Trp Ser Glu Pro Ser Asp Leu Leu Glu
180 185 190
Ile Pro Val Ser Gly Ala Ala Asp Asn Leu Ser Pro Ser Gln Asn Lys
195 200 205
Ser Asp Ser Gly Thr Ala Ser His Leu Gln Asp Tyr Ala Val Glu Asn
210 215 220
Leu Ile Arg
225
<210> 185
<211> 1446
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(1446)
<223> LILRA6的cDNA
<400> 185
atgaccccca ccctcgcagc cctgctctgc ctagggctga gtctgggccc caggacccac 60
gtgcaggcag ggcccttccc caaacccacc ctctgggctg agccaggctc tgtgatcagc 120
tgggggagcc ccgtgaccat ctggtgtcag gggagcctgg aggcccagga gtaccgactg 180
gataaagagg gaagcccaga gccctgggac agaaataacc cactggaacc caagaacaag 240
gccagattct ccatcccatc cataacagag caccatgcgg ggagataccg ctgccactat 300
tacagctctg caggctggtc agagcccagc gaccccctgg agctggtgat gacaggagcc 360
tatagcaaac ccaccctctc agccctgccc agccctgtgg tggcctcagg ggggaatatg 420
accctccaat gtggctcaca gaagggatat caccattttg ttctgatgaa ggaaggagaa 480
caccagctcc cccggaccct ggactcacag cagctccaca gtggggggtt ccaggccctg 540
ttccctgtgg gccccgtgaa ccccagccac aggtggaggt tcacatgcta ttactattat 600
atgaacaccc cccgggtgtg gtcccacccc agtgaccccc tggagattct gccctcaggc 660
gtgtctagga agccctccct cctgaccctg cagggccctg tcctggcccc tgggcagagc 720
ctgaccctcc agtgtggctc tgatgtcggc tacgacagat ttgttctgta taaggagggg 780
gaacgtgact tcctccagcg ccctggccag cagccccagg ctgggctctc ccaggccaac 840
ttcaccctgg gccctgtgag cccctcccac gggggccagt acaggtgcta tggtgcacac 900
aacctctcct ccgagtggtc ggcccccagc gaccccctga acatcctgat ggcaggacag 960
atctatgaca ccgtctccct gtcagcacag ccgggcccca cagtggcctc aggagagaac 1020
gtgaccctgc tgtgtcagtc atggtggcag tttgacactt tccttctgac caaagaaggg 1080
gcagcccatc ccccactgcg tctgagatca atgtacggag ctcataagta ccaggctgaa 1140
ttccccatga gtcctgtgac ctcagcccac gcggggacct acaggtgcta cggctcatac 1200
agctccaacc cccacctgct gtctttcccc agtgagcccc tggaactcat ggtctcagga 1260
cactctggag gctccagcct cccacccaca gggccgccct ccacacctgc ctcacacgcc 1320
aaggattaca cagtggagaa tctcatccgc atgggcatgg caggcttggt cctggtgttc 1380
ctcgggattc tgttatttga ggctcagcac agccagagaa acccccaaga tgcagccggg 1440
aggtga 1446
<210> 186
<211> 481
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(481)
<223> LILRA6
<400> 186
Met Thr Pro Ala Leu Thr Ala Leu Leu Cys Leu Gly Leu Ser Leu Gly
1 5 10 15
Pro Arg Thr Arg Val Gln Ala Gly Pro Phe Pro Lys Pro Thr Leu Trp
20 25 30
Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile Ser Trp Gly Ser Pro Val Thr Ile Trp
35 40 45
Cys Gln Gly Ser Leu Glu Ala Gln Glu Tyr Gln Leu Asp Lys Glu Gly
50 55 60
Ser Pro Glu Pro Leu Asp Arg Asn Asn Pro Leu Glu Pro Lys Asn Lys
65 70 75 80
Ala Arg Phe Ser Ile Pro Ser Met Thr Gln His His Ala Gly Arg Tyr
85 90 95
Arg Cys His Tyr Tyr Ser Ser Ala Gly Trp Ser Glu Pro Ser Asp Pro
100 105 110
Leu Glu Leu Val Met Thr Gly Phe Tyr Asn Lys Pro Thr Leu Ser Ala
115 120 125
Leu Pro Ser Pro Val Val Ala Ser Gly Gly Asn Met Thr Leu Arg Cys
130 135 140
Gly Ser Gln Lys Gly Tyr His His Phe Val Leu Met Lys Glu Gly Glu
145 150 155 160
His Gln Leu Pro Arg Thr Leu Asp Ser Gln Gln Leu His Ser Gly Gly
165 170 175
Phe Gln Ala Leu Phe Pro Val Gly Pro Val Thr Pro Ser His Arg Trp
180 185 190
Arg Phe Thr Cys Tyr Tyr Tyr Tyr Thr Asn Thr Pro Arg Val Trp Ser
195 200 205
His Pro Ser Asp Pro Leu Glu Ile Leu Pro Ser Gly Val Ser Arg Lys
210 215 220
Pro Ser Leu Leu Thr Leu Gln Gly Pro Val Leu Ala Pro Gly Gln Ser
225 230 235 240
Leu Thr Leu Gln Cys Gly Ser Asp Val Gly Tyr Asp Arg Phe Val Leu
245 250 255
Tyr Lys Glu Gly Glu Arg Asp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Gln Pro
260 265 270
Gln Ala Gly Leu Ser Gln Ala Asn Phe Thr Leu Gly Pro Val Ser Pro
275 280 285
Ser His Gly Gly Gln Tyr Arg Cys Tyr Gly Ala His Asn Leu Ser Ser
290 295 300
Glu Trp Ser Ala Pro Ser Asp Pro Leu Asn Ile Leu Met Ala Gly Gln
305 310 315 320
Ile Tyr Asp Thr Val Ser Leu Ser Ala Gln Pro Gly Pro Thr Val Ala
325 330 335
Ser Gly Glu Asn Val Thr Leu Leu Cys Gln Ser Arg Gly Tyr Phe Asp
340 345 350
Thr Phe Leu Leu Thr Lys Glu Gly Ala Ala His Pro Pro Leu Arg Leu
355 360 365
Arg Ser Met Tyr Gly Ala His Lys Tyr Gln Ala Glu Phe Pro Met Ser
370 375 380
Pro Val Thr Ser Ala His Ala Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ser Tyr
385 390 395 400
Ser Ser Asn Pro His Leu Leu Ser Phe Pro Ser Glu Pro Leu Glu Leu
405 410 415
Met Val Ser Gly His Ser Gly Gly Ser Ser Leu Pro Pro Thr Gly Pro
420 425 430
Pro Ser Thr Pro Ala Ser His Ala Lys Asp Tyr Thr Val Glu Asn Leu
435 440 445
Ile Arg Met Gly Met Ala Gly Leu Val Leu Val Phe Leu Gly Ile Leu
450 455 460
Leu Phe Glu Ala Gln His Ser Gln Arg Asn Pro Gln Asp Ala Ala Gly
465 470 475 480
Arg
<210> 187
<211> 424
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(424)
<223> LILRA6
<400> 187
Gly Pro Phe Pro Lys Pro Thr Leu Trp Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile
1 5 10 15
Ser Trp Gly Ser Pro Val Thr Ile Trp Cys Gln Gly Ser Leu Glu Ala
20 25 30
Gln Glu Tyr Gln Leu Asp Lys Glu Gly Ser Pro Glu Pro Leu Asp Arg
35 40 45
Asn Asn Pro Leu Glu Pro Lys Asn Lys Ala Arg Phe Ser Ile Pro Ser
50 55 60
Met Thr Gln His His Ala Gly Arg Tyr Arg Cys His Tyr Tyr Ser Ser
65 70 75 80
Ala Gly Trp Ser Glu Pro Ser Asp Pro Leu Glu Leu Val Met Thr Gly
85 90 95
Phe Tyr Asn Lys Pro Thr Leu Ser Ala Leu Pro Ser Pro Val Val Ala
100 105 110
Ser Gly Gly Asn Met Thr Leu Arg Cys Gly Ser Gln Lys Gly Tyr His
115 120 125
His Phe Val Leu Met Lys Glu Gly Glu His Gln Leu Pro Arg Thr Leu
130 135 140
Asp Ser Gln Gln Leu His Ser Gly Gly Phe Gln Ala Leu Phe Pro Val
145 150 155 160
Gly Pro Val Thr Pro Ser His Arg Trp Arg Phe Thr Cys Tyr Tyr Tyr
165 170 175
Tyr Thr Asn Thr Pro Arg Val Trp Ser His Pro Ser Asp Pro Leu Glu
180 185 190
Ile Leu Pro Ser Gly Val Ser Arg Lys Pro Ser Leu Leu Thr Leu Gln
195 200 205
Gly Pro Val Leu Ala Pro Gly Gln Ser Leu Thr Leu Gln Cys Gly Ser
210 215 220
Asp Val Gly Tyr Asp Arg Phe Val Leu Tyr Lys Glu Gly Glu Arg Asp
225 230 235 240
Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Gln Pro Gln Ala Gly Leu Ser Gln Ala
245 250 255
Asn Phe Thr Leu Gly Pro Val Ser Pro Ser His Gly Gly Gln Tyr Arg
260 265 270
Cys Tyr Gly Ala His Asn Leu Ser Ser Glu Trp Ser Ala Pro Ser Asp
275 280 285
Pro Leu Asn Ile Leu Met Ala Gly Gln Ile Tyr Asp Thr Val Ser Leu
290 295 300
Ser Ala Gln Pro Gly Pro Thr Val Ala Ser Gly Glu Asn Val Thr Leu
305 310 315 320
Leu Cys Gln Ser Arg Gly Tyr Phe Asp Thr Phe Leu Leu Thr Lys Glu
325 330 335
Gly Ala Ala His Pro Pro Leu Arg Leu Arg Ser Met Tyr Gly Ala His
340 345 350
Lys Tyr Gln Ala Glu Phe Pro Met Ser Pro Val Thr Ser Ala His Ala
355 360 365
Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly Ser Tyr Ser Ser Asn Pro His Leu Leu
370 375 380
Ser Phe Pro Ser Glu Pro Leu Glu Leu Met Val Ser Gly His Ser Gly
385 390 395 400
Gly Ser Ser Leu Pro Pro Thr Gly Pro Pro Ser Thr Pro Ala Ser His
405 410 415
Ala Lys Asp Tyr Thr Val Glu Asn
420
<210> 188
<211> 675
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(675)
<223> PILRbeta
<400> 188
atggctttgc tgatctcgct tcctggaggg actccagcca tggctcaggt cctgcttctg 60
ctctcatcag gctgtctgca tgctggaaat tcagaaagat acaacagaaa aaatggcttt 120
ggggtcaacc aacctgaacg ctgctctgga gtccagggtg gctccatcga catccccttc 180
tccttctatt tcccctggaa gttggccaag gatccacaga tgagcatagc ctggaaatgg 240
aaggatttcc atggggaagt catctacaac tcctccctgc ctttcataca tgagcacttc 300
aagggccggc tcatcctgaa ctggacacag ggtcagacat ctggagtcct cagaatcctg 360
aacttgaagg agtctgacca agcccagtac tttagtcgag ttaatctgca gtcgacagaa 420
ggcatgaagt tgtggcagtc aattcctgga acccaactca acgtgaccca agcactcaac 480
accaccatga ggagcccctt catcgtcacc tctgaattca ccacagctgg cctggagcac 540
acaagcgacc agaggaatcc ttcactgatg aacctgggag ccatggtcac gatgctcctg 600
gctaaagttt tggtcatagt cctagtctat ggatggatga tcttcctgag gtggaagcaa 660
aggccagcac actaa 675
<210> 189
<211> 224
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(224)
<223> PILRbeta
<400> 189
Met Ala Leu Leu Ile Ser Leu Pro Gly Gly Thr Pro Ala Met Ala Gln
1 5 10 15
Val Leu Leu Leu Leu Ser Ser Gly Cys Leu His Ala Gly Asn Ser Glu
20 25 30
Arg Tyr Asn Arg Lys Asn Gly Phe Gly Val Asn Gln Pro Glu Arg Cys
35 40 45
Ser Gly Val Gln Gly Gly Ser Ile Asp Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Phe
50 55 60
Pro Trp Lys Leu Ala Lys Asp Pro Gln Met Ser Ile Ala Trp Lys Trp
65 70 75 80
Lys Asp Phe His Gly Glu Val Ile Tyr Asn Ser Ser Leu Pro Phe Ile
85 90 95
His Glu His Phe Lys Gly Arg Leu Ile Leu Asn Trp Thr Gln Gly Gln
100 105 110
Thr Ser Gly Val Leu Arg Ile Leu Asn Leu Lys Glu Ser Asp Gln Ala
115 120 125
Gln Tyr Phe Ser Arg Val Asn Leu Gln Ser Thr Glu Gly Met Lys Leu
130 135 140
Trp Gln Ser Ile Pro Gly Thr Gln Leu Asn Val Thr Gln Ala Leu Asn
145 150 155 160
Thr Thr Met Arg Ser Pro Phe Ile Val Thr Ser Glu Phe Thr Thr Ala
165 170 175
Gly Leu Glu His Thr Ser Asp Gln Arg Asn Pro Ser Leu Met Asn Leu
180 185 190
Gly Ala Met Val Thr Met Leu Leu Ala Lys Val Leu Val Ile Val Leu
195 200 205
Val Tyr Gly Trp Met Ile Phe Leu Arg Trp Lys Gln Arg Pro Ala His
210 215 220
<210> 190
<211> 24
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(24)
<223> PILRbeta的胞内域
<400> 190
aggtggaagc aaaggccagc acac 24
<210> 191
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> 来源
<222> (1)..(8)
<223> PILRbeta的胞内域
<400> 191
Arg Trp Lys Gln Arg Pro Ala His
1 5
<210> 192
<211> 900
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合LILRB4-PLILRbeta受体
<400> 192
atggatccca aaggatccct ttcctggaga atacttctgt ttctctccct ggcttttgag 60
ttgagctacg gactcgagca ggcagggccc ctccccaaac ccaccctctg ggctgagcca 120
ggctctgtga tcagctgggg gaactctgtg accatctggt gtcaggggac cctggaggct 180
cgggagtacc gtctggataa agaggaaagc ccagcaccct gggacagaca gaacccactg 240
gagcccaaga acaaggccag attctccatc ccatccatga cagaggacta tgcagggaga 300
taccgctgtt actatcgcag ccctgtaggc tggtcacagc ccagtgaccc cctggagctg 360
gtgatgacag gagcctacag taaacccacc ctttcagccc tgccgagtcc tcttgtgacc 420
tcaggaaaga gcgtgaccct gctgtgtcag tcacggagcc caatggacac ttttcttctg 480
atcaaggagc gggcagccca tcccctactg catctgagat cagagcacgg agctcagcag 540
caccaggctg aattccccat gagtcctgtg acctcagtgc acggggggac ctacaggtgc 600
ttcagctcac acggcttctc ccactacctg ctgtcacacc ccagtgaccc cctggagctc 660
atagtctcag gatccttgga gggtcccagg ccctcaccca caaggtccgt ctcaacagct 720
gcaggccctg aggaccagcc cctcatgcct acagggtcag tcccccacag tggtctgaga 780
aggcactggg agctcgagct gggagccatg gtcacgatgc tcctggctaa agttttggtc 840
atagtcctag tctatggatg gatgatcttc ctgaggtgga agcaaaggcc agcacactaa 900
<210> 193
<211> 299
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合LILRB4-PLILRbeta受体
<400> 193
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Leu Glu Gln Ala Gly Pro Leu Pro
20 25 30
Lys Pro Thr Leu Trp Ala Glu Pro Gly Ser Val Ile Ser Trp Gly Asn
35 40 45
Ser Val Thr Ile Trp Cys Gln Gly Thr Leu Glu Ala Arg Glu Tyr Arg
50 55 60
Leu Asp Lys Glu Glu Ser Pro Ala Pro Trp Asp Arg Gln Asn Pro Leu
65 70 75 80
Glu Pro Lys Asn Lys Ala Arg Phe Ser Ile Pro Ser Met Thr Glu Asp
85 90 95
Tyr Ala Gly Arg Tyr Arg Cys Tyr Tyr Arg Ser Pro Val Gly Trp Ser
100 105 110
Gln Pro Ser Asp Pro Leu Glu Leu Val Met Thr Gly Ala Tyr Ser Lys
115 120 125
Pro Thr Leu Ser Ala Leu Pro Ser Pro Leu Val Thr Ser Gly Lys Ser
130 135 140
Val Thr Leu Leu Cys Gln Ser Arg Ser Pro Met Asp Thr Phe Leu Leu
145 150 155 160
Ile Lys Glu Arg Ala Ala His Pro Leu Leu His Leu Arg Ser Glu His
165 170 175
Gly Ala Gln Gln His Gln Ala Glu Phe Pro Met Ser Pro Val Thr Ser
180 185 190
Val His Gly Gly Thr Tyr Arg Cys Phe Ser Ser His Gly Phe Ser His
195 200 205
Tyr Leu Leu Ser His Pro Ser Asp Pro Leu Glu Leu Ile Val Ser Gly
210 215 220
Ser Leu Glu Asp Pro Arg Pro Ser Pro Thr Arg Ser Val Ser Thr Ala
225 230 235 240
Ala Gly Pro Glu Asp Gln Pro Leu Met Pro Thr Gly Ser Val Pro His
245 250 255
Ser Gly Leu Arg Arg His Trp Glu Leu Glu Leu Gly Ala Met Val Thr
260 265 270
Met Leu Leu Ala Lys Val Leu Val Ile Val Leu Val Tyr Gly Trp Met
275 280 285
Ile Phe Leu Arg Trp Lys Gln Arg Pro Ala His
290 295
<210> 194
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NFAT启动子
<400> 194
tgaaaatgaa aatgaaaa 18
<210> 195
<211> 954
<212> DNA
<213> 智人
<400> 195
atgaaggttc tgtgggctgc gttgctggtc acattcctgg caggatgcca ggccaaggtg 60
gagcaagcgg tggagacaga gccggagccc gagctgcgcc agcagaccga gtggcagagc 120
ggccagcgct gggaactggc actgggtcgc ttttgggatt acctgcgctg ggtgcagaca 180
ctgtctgagc aggtgcagga ggagctgctc agctcccagg tcacccagga actgagggcg 240
ctgatggacg agaccatgaa ggagttgaag gcctacaaat cggaactgga ggaacaactg 300
accccggtgg cggaggagac gcgggcacgg ctgtccaagg agctgcaggc ggcgcaggcc 360
cggctgggcg cggacatgga ggacgtgtgc ggccgcctgg tgcagtaccg cggcgaggtg 420
caggccatgc tcggccagag caccgaggag ctgcgggtgc gcctcgcctc ccacctgcgc 480
aagctgcgta agcggctcct ccgcgatgcc gatgacctgc agaagcgcct ggcagtgtac 540
caggccgggg cccgcgaggg cgccgagcgc ggcctcagcg ccatccgcga gcgcctgggg 600
cccctggtgg aacagggccg cgtgcgggcc gccactgtgg gctccctggc cggccagccg 660
ctacaggagc gggcccaggc ctggggcgag cggctgcgcg cgcggatgga ggagatgggc 720
agccggaccc gcgaccgcct ggacgaggtg aaggagcagg tggcggaggt gcgcgccaag 780
ctggaggagc aggcccagca gatacgcctg caggccgagg ccttccaggc ccgcctcaag 840
agctggttcg agcccctggt ggaagacatg cagcgccagt gggccgggct ggtggagaag 900
gtgcaggctg ccgtgggcac cagcgccgcc cctgtgccca gcgacaatca ctga 954
<210> 196
<211> 317
<212> PRT
<213> 智人
<400> 196
Met Lys Val Leu Trp Ala Ala Leu Leu Val Thr Phe Leu Ala Gly Cys
1 5 10 15
Gln Ala Lys Val Glu Gln Ala Val Glu Thr Glu Pro Glu Pro Glu Leu
20 25 30
Arg Gln Gln Thr Glu Trp Gln Ser Gly Gln Arg Trp Glu Leu Ala Leu
35 40 45
Gly Arg Phe Trp Asp Tyr Leu Arg Trp Val Gln Thr Leu Ser Glu Gln
50 55 60
Val Gln Glu Glu Leu Leu Ser Ser Gln Val Thr Gln Glu Leu Arg Ala
65 70 75 80
Leu Met Asp Glu Thr Met Lys Glu Leu Lys Ala Tyr Lys Ser Glu Leu
85 90 95
Glu Glu Gln Leu Thr Pro Val Ala Glu Glu Thr Arg Ala Arg Leu Ser
100 105 110
Lys Glu Leu Gln Ala Ala Gln Ala Arg Leu Gly Ala Asp Met Glu Asp
115 120 125
Val Cys Gly Arg Leu Val Gln Tyr Arg Gly Glu Val Gln Ala Met Leu
130 135 140
Gly Gln Ser Thr Glu Glu Leu Arg Val Arg Leu Ala Ser His Leu Arg
145 150 155 160
Lys Leu Arg Lys Arg Leu Leu Arg Asp Ala Asp Asp Leu Gln Lys Arg
165 170 175
Leu Ala Val Tyr Gln Ala Gly Ala Arg Glu Gly Ala Glu Arg Gly Leu
180 185 190
Ser Ala Ile Arg Glu Arg Leu Gly Pro Leu Val Glu Gln Gly Arg Val
195 200 205
Arg Ala Ala Thr Val Gly Ser Leu Ala Gly Gln Pro Leu Gln Glu Arg
210 215 220
Ala Gln Ala Trp Gly Glu Arg Leu Arg Ala Arg Met Glu Glu Met Gly
225 230 235 240
Ser Arg Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu Val Lys Glu Gln Val Ala Glu
245 250 255
Val Arg Ala Lys Leu Glu Glu Gln Ala Gln Gln Ile Arg Leu Gln Ala
260 265 270
Glu Ala Phe Gln Ala Arg Leu Lys Ser Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu
275 280 285
Asp Met Gln Arg Gln Trp Ala Gly Leu Val Glu Lys Val Gln Ala Ala
290 295 300
Val Gly Thr Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Asp Asn His
305 310 315

Claims (33)

1.一种鉴定LILRB4激活的调节剂的方法，所述方法包括：
(a)将报告细胞与LILRB4的配体和候选物质接触，所述LILRB4的配体为ApoE，其中，所述报告细胞表达：
(i)LILRB4或包含LILRB4胞外域的受体，和
(ii)编码可检测标记的报告基因，所述报告基因与由LILRB4或包含LILRB4胞外域的受体的激活调控的启动子可操作地连接；和
(b)在所述报告细胞中检测LILRB4激活的水平，其中与参照水平相比LILRB4激活的水平的变化表明所述候选物质是LILRB4激活的调节剂，其中所述参照水平从与所述配体接触而未与所述候选物质接触的报告细胞获得。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述报告细胞表达包含LILRB4的胞外域的受体。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述报告细胞是小鼠T-细胞杂交瘤细胞。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述受体还包含成对的免疫球蛋白样受体β(PILRβ)的胞内域。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述受体通过病毒表达载体在所述细胞内表达。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述病毒表达载体是逆转录病毒表达载体。
7.根据权利要求1所述的方法，其中基于所述细胞的形态或迁移率对所述LILRB4激活的水平进行检测。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述启动子是活化T细胞核因子(NFAT)启动子。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述启动子是CCL2启动子、CCL4启动子、CCL5启动子、IL-6R启动子、IL-8启动子、gp130启动子、OSM启动子、TIMP-1/2启动子、TNF-R1/II启动子、uPAR启动子或精氨酸酶-1启动子。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述可检测标记是GFP、YFP、RFP或D-萤光素存在下的荧光素酶。
11.根据权利要求1所述的方法，其中检测步骤包括流式细胞术分析或发光定量。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述候选物质是抗体。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述抗体是嵌合抗体、CDR移植抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv或scFv。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗体是人源化抗体。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
16.根据权利要求1所述的方法，其中当仅与所述LILRB4的配体接触时，在所述报告细胞中获得所述参照水平。
17.根据权利要求1所述的方法，其中所述ApoE是重组的。
18.根据权利要求1所述的方法，其中所述ApoE是人ApoE或小鼠ApoE。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述人ApoE或小鼠ApoE分别分离自人血清或小鼠血清。
20.根据权利要求1所述的方法，其中所述ApoE是ApoE2、ApoE3或ApoE4。
21.根据权利要求1所述的方法，其中与所述参照水平相比所述LILRB4激活水平增加表明所述调节剂是激动剂。
22.根据权利要求1所述的方法，其中与所述参照水平相比所述LILRB4激活水平降低表明所述调节剂是拮抗剂。
23.根据权利要求1所述的方法，其中所述候选物质与表达FcR的细胞连接。
24.一种鉴定LILRB4激活的调节剂的组合物，所述组合物包含：
候选LILRB4调节剂；
ApoE；和
报告细胞，所述报告细胞表达包含LILRB4的胞外域的受体，其中所述报告细胞具有提示LILRB4激活的表型。
25.根据权利要求24所述的组合物，其中所述候选LILRB4调节剂是抗体。
26.根据权利要求24所述的组合物，其中所述受体还包含PILRβ的胞内域。
27.根据权利要求24所述的组合物，其中所述报告细胞还包含报告基因，所述报告基因编码可检测标记，并且所述报告基因与由所述受体的激活调控的启动子可操作地连接。
28.根据权利要求27所述的组合物，其中所述可检测标记是GFP。
29.根据权利要求24所述的组合物，还包含表达FcR的细胞。
30.一种鉴定LILRB4激活的拮抗剂抗体的组合物，所述组合物包含：
候选LILRB4抗体
表达FcR的细胞；和
报告细胞，所述报告细胞表达包含LILRB4胞外域的受体，其中所述报告细胞具有提示LILRB4激活的表型。
31.根据权利要求30所述的组合物，其中所述受体还包含PILRβ的胞内域。
32.根据权利要求30所述的组合物，其中所述报告细胞还包含报告基因，所述报告基因编码可检测标记，并且所述报告基因与由所述受体的激活调控的启动子可操作地连接。
33.根据权利要求32所述的组合物，其中所述可检测标记是GFP。
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