CN109776350A

CN109776350A - 一种含有多不饱和脂肪链的酰胺类化合物

Info

Publication number: CN109776350A
Application number: CN201711130455.5A
Authority: CN
Inventors: 邹忠梅; 张涛; 陈佳欢; 张宏武
Original assignee: Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC
Current assignee: Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC
Priority date: 2017-11-15
Filing date: 2017-11-15
Publication date: 2019-05-21
Anticipated expiration: 2037-11-15
Also published as: CN109776350B

Abstract

本发明提供了一种含有多不饱和脂肪链的酰胺类衍生物，其结构通式为：

Description

一种含有多不饱和脂肪链的酰胺类化合物

技术领域

本发明涉及一种含有多不饱和脂肪链的酰胺类化合物及其制备方法与应用，属于医药领域。

背景技术

抑郁症是一种典型的情绪障碍性疾病，表现为一种持久的抑郁状态，伴有意志消沉、思维迟钝、言语减少和睡眠障碍等症状，随着社会的发展和生活压力的加剧，越来越多的人饱受抑郁症的困扰。目前，抑郁症已位居世界10大疾病的第4位，预计到2020年将跃至第2位。抑郁症已经成为中国第二大疾病，我国已有抑郁障碍患者4000万，将会成为我国最严重的疾病负担之一。

抑郁目前机制不明，药物治疗仍是抑郁症治疗的主要手段。目前抗抑郁药物根据其作用机制主要分为三类：单胺假说相关的抗抑郁剂，如丙咪嗪、吗氯贝胺；氨基酸、肽类假说相关抗抑郁药物如美金刚，拉莫三嗪；以及下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能异常假说相关抗抑郁药物。但是现有的药物治疗只在一定程度上有效，而且具有很强的心脏、肝脏毒性，易产生头痛，口干，癫痫发作及突然停药的“撤药综合征”等不良反应，且长期服用很容易产生依赖作用。现有的抗抑郁药物不能满足抑郁症治疗的需要，急需开发更多疗效可靠、起效迅速、剂量易于控制、安全耐受性好的新型抗抑郁药物。

花椒为芸香科花椒属植物花椒(Zanthoxylum bungeanum Maxim)干燥成熟果皮。在民间常被用作芳香调味品，具有药食同源性。花椒能除膻腥、温中散寒、降温止痛，可用来治疗多种疾病。但目前人们对于花椒治疗抗抑郁作用的有效成分或有效物质所知甚少，特别是其中具有的抗抑郁药理学活性的化合物，更是鲜有报道，因此花椒属植物花椒在抗抑郁治疗领域也存在诸多研究空白，亟待研究者进行探索和研究。

发明内容

本发明目的在于提供一类含有多不饱和脂肪链的酰胺类化合物，所述化合物为结构式I所示化合物或其生理上可接受的盐，

其中，R₁选自羰基、甲氧基、乙氧基或羟基；

R₂选自羰基、甲氧基、乙氧基或羟基；R₃为氢或葡萄糖基；

其中通式的C₂-C₃，C₇-C₈和C₉-C₁₀位置为双键。

进一步地：

所述的C₂-C₃双键为反式、C₇-C₈双键为反式和C₉-C₁₀双键为反式。

在上述化合物中，本发明进一步优选一种酰胺类化合物，其中，所述R₁为羰基时，R₂选自羰基、羟基或甲氧基，R₃为氢或葡萄糖基；或R₁为甲氧基时，R₂选自羰基、羟基或甲氧基，R₃为氢或葡萄糖基；或R₁为乙氧基时，R₂选自羟基或乙氧基，R₃为氢或葡萄糖基；或R₁为羟基时，R₂选自羰基、羟基、甲氧基或乙氧基，R₃为氢或葡萄糖基。

所述葡萄糖基优选β-D-葡萄糖苷。

所述化合物进一步为以下化合物：

最优选地：所述含有多不饱和脂肪链的酰胺类化合物分别为：

HJ-16：(2E，7E，9E)-6-甲氧基-11-酮-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-17：(2E，7E，9E)-6-酮-11-甲氧基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-18-1：(6R)-(2E，7E，9E)-6-羟基-11-酮-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-18-2：(6S)-(2E，7E，9E)-6-羟基-11-酮-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-19-1：(11R)-(2E，7E，9E)-6-酮-11-羟基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-19-2：(11S)-(2E，7E，9E)-6-酮-11-羟基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-24：(2E，7E，9E)-6，11-二酮-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-45：(2E，7E，9E)-6-甲氧基-11-羟基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-47：(2E，7E，9E)-6-羟基-11-甲氧基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-69：(2E，7E，9E)-6，11-二羟基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-71：(2E，7E，9E)-6，11-二羟基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-89：(2E，7E，9E)-6-乙氧基-11-羟基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-91：(2E，7E，9E)-6-羟基-11-乙氧基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-93：(2E，7E，9E)-6，11-二乙氧基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-14：(2E，7E，9E)-6，11-二甲氧基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

HJ-B-2：(2E，7E，9E)-6-甲氧基-11-酮-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺-2'-O-β-D- 葡萄糖苷、

HJ-B-3：(2E，7E，9E)-6-酮-11-甲氧基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺-2'-O-β-D- 葡萄糖苷或

HJ-B-7：(2E，7E，9E)-6，11-二酮-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺-2'-O-β-D-葡萄糖苷。

上述化合物的结构式和取代情况见式1和表1。

式1花椒酰胺类化合物结构

表1酰胺类化合物通式取代情况

所述花椒酰胺类化合物，进一步优选以下化合物：

(2E，7E，9E)-6-甲氧基-11-酮-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

(2E，7E，9E)-6-酮-11-甲氧基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

(2E，7E，9E)-6，11-二乙氧基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

(2E，7E，9E)-6，11-二甲氧基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

(2E，7E，9E)-6-甲氧基-11-酮-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺-2'-O-β-D-葡萄糖苷、

(2E，7E，9E)-6-酮-11-甲氧基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺-2'-O-β-D-葡萄糖苷或

(2E，7E，9E)-6，11-二酮-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺-2'-O-β-D-葡萄糖苷。

即其中HJ-16、HJ-17、HJ-93、HJ-14、HJ-B-7、HJ-B-2或HJ-B-3。

本发明提供了一种上述化合物的制备方法，由以下步骤组成：

1)将花椒的果皮、花、茎叶、根或种子进行粉碎，使用有机溶剂或含水有机溶剂提取，得到提取物；

2)将提取物使用硅藻土或硅胶进行吸附，依次分别使用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇和水洗脱，得到石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇和水的有效部位；

3)将步骤2)所述的二氯甲烷、正丁醇和乙酸乙酯有效部位通过柱层析分离后，分别使用HPLC进行纯化，得到所述化合物。

优选地：

1)将花椒的果皮、花、茎叶、根或种子进行粉碎，粉碎至5-20目，使用5-95％低级醇的水溶液提取，得到提取物；

2)提取物使用硅藻土进行吸附，依次分别使用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇和水洗脱，得到石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇和水的有效部位；

3)将步骤2)所述的二氯甲烷、正丁醇和乙酸乙酯有效部位通过柱层析分离，所述层析柱选用硅胶柱或开放ODS柱或大孔树脂进行分离，所述硅胶柱为60-100目或 100-200目或200-300目或300-400目，洗脱方法为梯度洗脱，洗脱液为：二氯甲烷-甲醇 (100:1-1:1)或石油醚-丙酮(1:0-0:1)、石油醚-乙酸乙酯(1:0-0:1)；所述开放ODS柱层析洗脱方法为梯度洗脱，洗脱液为甲醇-水(5-100％)或乙腈-水(5-100％)或丙酮-水 (5-100％)；所述大孔树脂为D系列、HPD系列、HP系列、XAD系列或AD-8型，洗脱液方法为梯度洗脱，洗脱液：乙醇-水(5-100％)；柱层析所得流份使用HPLC制备纯化，所述HPLC配备的制备柱为：YMC-PackODS-A制备柱，Chiralpak AD-H及Chiralpak AY-H手性制备柱，经过上述步骤后，得到所述化合物。

花椒各个部位粉碎优选为10目。

步骤1)中的有机溶剂选自：甲醇、乙醇、石油醚、二氯甲烷、丙酮、正丁醇及乙酸乙酯中的一种或几种。考虑到安全性和成本问题等因素，进一步优选为浓度50-95％乙醇，最优选为体积浓度90-95％乙醇溶液。提取方法为冷浸或热回流提取法。

所述含有低级醇的溶液，如无特殊说明，均默认为水溶液。

步骤2)石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇和水的洗脱顺序需依照溶剂极性强弱进行逐一挑选，防止某些化合物流失或未被洗脱出来。

所述的低级醇包括甲醇和乙醇等五个碳以下的醇。

所述萃取的步骤中，提取物充分吸附于1:2-1:4倍质量的硅藻土，优选为1:2；将硅藻土进行装柱，所述石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇和水的洗脱体积为2-4 个柱体积(硅藻土柱)，优选3个柱体积。溶剂回收方法为本领域常规减压回收方法。

步骤3)中所述的柱层析包括：所述二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇部位采用硅胶柱层析分离，用二氯甲烷-甲醇(体积比200:1-0:1)或石油醚-丙酮(体积比1:0-0:1)或石油醚-乙酸乙酯(体积比1:0-0:1)进行梯度洗脱，或采用凝胶柱层析(如Sephadex LH-20 柱色谱)进行纯化，以甲醇、或二氯甲烷-甲醇混合液(体积比1:1)或丙酮中的一种或几种为洗脱剂洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，得到通式(I)化合物；优选以甲醇为洗脱剂。

步骤3)所述的硅胶柱层析，可选用粒径为60-100目或100-200目或200-300目或300-400目的柱层析硅胶或薄层层析硅胶，优选用粒径为200～300目的柱层析硅胶，上样量为6.7％～10％，即上样量与硅胶重量比为(1:10)～(1:15)，梯度洗脱时，每个浓度洗脱液优选洗脱3～5柱体积。

步骤3)所述的凝胶柱层析，上样量为2％～2.5％，即上样量与凝胶重量比为(1:40) ～(1:50)，洗脱7～8柱体积，根据具体情况，选择收集相应柱体积洗脱液。

因柱层析过程中影响因素较多，所以，该过程中优选通过薄层检测法(TLC)来确定所需流份。即，TLC薄层硅胶板可根据工具书自制或使用商用薄层硅胶板，通过薄层色谱检测花椒酰胺类化合物，254nm紫外下有暗斑，10％浓硫酸显色(115℃烘2分钟) 后显黄色或深棕色点。以此为确定流份标准进行不同流份的洗脱。所述TLC基本采用相应柱子洗脱液系统作为展开剂，针对不同的化合物，优选二氯甲烷-甲醇、石油醚-丙酮系统等系统；展开剂的比例可以根据所要洗脱的化合物极性进行主动调整，寻找最优的展开配比。所述系统展开剂比例调配属于常规的TLC操作步骤。

所述层析产物可以通过制备液相制备纯化，色谱柱为YMC-Pack ODS-A column(5μm； 250×20mm)，洗脱程序为梯度洗脱：甲醇-水15～100％或者乙腈-水10～90％，30min，流速：15mL/min；或半制备液相制备纯化(semi-prep HPLC)，如YMC-Pack ODS-A column (5μm；250×10mm；2mL/min)，洗脱程序为梯度洗脱：甲醇-水15～100％或者乙腈-水10～90％，30min，流速：2mL/min；得到高纯度的化合物，高纯度为HPLC 98％以上。

上述层析制备的条件根据具体化合物不同，所使用的条件也不相同，具体参见具体实施例。

本发明提供了通式Ⅰ的化合物对单胺氧化酶抑制作用的研究，发现该化合物表现出单胺氧化酶抑制活性，并成剂量依赖性。

本发明的另一个目的在于，提供一种单胺氧化酶抑制剂或抗抑郁药物组合物，该组合物由有效剂量的本发明所述化合物及药学上可接受的辅料制成。所述的有效量是指25～300mg/天，所述的药学上可接受的辅料，是指为制成适用于人类或动物使用的任何药物剂型所需的辅料，如制成口服固体制剂时，药学上可接受的辅料指稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂；制成注射液时，药学上可接受的辅料指pH调节剂、助溶剂、抗氧剂、等渗剂等。所述的药物是指制成片剂、丸剂、胶囊剂、悬浮剂、软膏剂或乳剂等。

发明人通过以下实验(见实施例27)来验证本发明化合物的有益效果。

本研究从花椒的95％乙醇提取物中分离得到丰富的花椒酰胺类次级代谢产物，酰胺类化合物作为花椒的特征性小分子，为花椒产生麻辣刺激性口感和其他药理活性的主要物质基础。在花椒酰胺对单胺氧化酶A(MAO-A)抑制作用研究中，酰胺类化合物显示对单胺氧化酶A具有抑制作用，与对照组相比，单胺氧化酶A活性显著降低，表明花椒酰胺对抑郁症及与单胺氧化酶A抑制剂相关适应症有很好的改善。

上述化合物的所有化合物均具有抑制MAO-A的作用，这是以往研究中所未发现的。因此具有了化合物的新药理学活性。

因此本发明提供了一种酰胺类化合物在制备抗抑郁药物中的应用。

所述酰胺类化合物优选：

(6R)-(2E，7E，9E)-6-羟基-11-酮-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

(6S)-(2E，7E，9E)-6-羟基-11-酮-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

(11R)-(2E，7E，9E)-6-酮-11-羟基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

(11S)-(2E，7E，9E)-6-酮-11-羟基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

(2E，7E，9E)-6，11-二酮-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

(2E，7E，9E)-6-甲氧基-11-羟基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

(2E，7E，9E)-6-羟基-11-甲氧基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

(2E，7E，9E)-6，11-二羟基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

(2E，7E，9E)-6-乙氧基-11-羟基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

(2E，7E，9E)-6-羟基-11-乙氧基-2'-羟基-N-异丁基-2，7，9-十二烷三烯酰胺、

本发明进一步提供一种应用，其中，所述酰胺类化合物进一步优选：

即其中的HJ-16、HJ-17、HJ-93、HJ-14、HJ-B-7、HJ-B-2或HJ-B-3。

根据发明人检索发现，上述化合物均未有文献记载或公开其具有MAO-A抑制作用，进而具有抗抑郁活性。

再次重申：以下实验只是本发明研发过程中众多实验中的举例性实验，并未涵盖和穷尽了发明人为本发明所做的所有实验，目的仅仅在于用那些数据来阐述本发明化合物的抗抑郁活性。

具体实施方式

实施例1

花椒95％乙醇提取物的制备

花椒干燥果皮23.5kg，粉碎后用5倍体积的95％乙醇冷浸提取(温度：20-25℃)3次，每次7天，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得到95％乙醇提取物5.1kg。

实施例2

花椒95％乙醇提取物石油醚层样品制备

实施例1所得95％乙醇提取物均匀的拌于10kg硅藻土上，充分吸附后，用石油醚洗脱，回收溶剂后，得到石油醚部位1250g。

实施例3

花椒95％乙醇提取物二氯甲烷层样品制备

将实施例2洗脱后柱子进行二氯甲烷洗脱，回收溶剂后，得到二氯甲烷部位470g。标记为D部位。

实施例4

花椒95％乙醇提取物乙酸乙酯层样品制备

将实施例3洗脱后柱子进行乙酸乙酯洗脱，回收溶剂后，得到乙酸乙酯部位301g。标记为E部位。

实施例5

花椒95％乙醇提取物正丁醇层样品制备

将实施例4洗脱后柱子进行正丁醇洗脱，回收溶剂，得到正丁醇部位268g。标记为B部位。

实施例6

花椒95％乙醇提取物甲醇层样品制备

将实施例5洗脱后柱子进行甲醇洗脱，回收溶剂后，得到甲醇部位302g。标记为M部位。

实施例7：

花椒95％乙醇提取物水层样品制备

将实施例5洗脱后柱子进行水洗脱，回收溶剂后，得到水部位2000g。标记为W部位。

实施例8：

花椒酰胺qinbunamideA(HJ-89)的制备

实施例3所得D部位经硅胶柱色谱(青岛海洋化工厂200-300目，样品与硅胶质量比为1:5)，以石油醚-丙酮(50:1，100:7，10:1，5:1，4:1，2:1，1:1)梯度洗脱，每个梯度洗脱3个柱体积。每2.5L洗脱液收集为一个流份，共得到42个流份。经TLC检测合并，TLC检测使用石油醚-丙酮系统，得到10个组份标记为D1-D10，即D1(Fr.1)、D2(F r.2-4)、D3(Fr.5-11)、D4(Fr.12-14)、D5(Fr.15-20)、D6(Fr.21-22)、D7(Fr.23-30)、D8(Fr.31- 35)、D9(Fr.36-40)、D10(Fr.41-42)。

D3部分20g，经硅胶柱色谱(青岛海洋化工厂200-300目，样品与硅胶质量比为1:10)，以二氯甲烷-甲醇等度洗脱(50:1)，每150ml洗脱液收集为一个流份，TLC检测使用二氯甲烷-甲醇系统，取Fr.4-10(标记为D3.2)。D3.2经开放ODS柱色谱(YMC.GE L，ODS-A-HG，5cm×30cm)，以40％、70％、75％、100％甲醇-水梯度洗脱。每个梯度洗脱1.5L。每250ml洗脱液收集为一个流份，分别取Fr.7-10标记为D3.2.2；Fr.18-19 标记为D3.2.5。D3.2.2部分经开放ODS柱色谱(YMC.GEL，ODS-A-HG，5cm×30cm)，以35％乙腈-水等度洗脱，每100ml洗脱液收集为一个流份。收集Fr.12经HPLC制备(Y MC-Pack ODS-A column 5μm，10×250mm，YMC，Kyoto，Japan)；2ml/min，35％- 95％乙腈-水0-30min得到化合物HJ-89(t_R＝12.5min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR(CD₃OD，500MHz)δ6.79(1H，dt， J＝15.3，6.9Hz)，6.21(2H，m)，6.00(1H，dt，J＝15.3Hz)，5.74(1H，m)，5.52( 1H，m)，4.27(1H，p，J＝6.4Hz)，3.75(1H，m)，3.54(1H，m)，3.34(1H，d，J ＝6.2Hz)，3.25(2H，s)，2.27(2H，m)，1.71(1H，m)，1.61(1H，m)，1.23(2H，d， J＝6.5Hz)，1.17(6H，s)，1.15(3H，d，J＝7.2Hz)¹³C NMR(CD₃OD，125MHz) δ169.1(C-1)，145.5(C-3)，139.2(C-10)，134.7(C-3)，133.4(C-8)，129.5(C-9)，124.8(C-2) ，80.7(C-6)，71.6(C-2')，68.8(C-11)，64.8(C-1”)，51.1(C-1')，35.4(C-5)，29.1(C-4)，27. 2(C-3'\C-4')，23.5(C-12)，15.6(C-2”)。

实施例9

花椒酰胺qinbunamide B(HJ-91)的制备

实施例8所得D3.2.2部分经开放ODS柱色谱(YMC.GEL，ODS-A-HG，5cm×30cm) ，以35％乙腈-水等度洗脱，每100ml洗脱液收集为一个流份。收集Fr.12经HPLC制备(Y MC-PackODS-A column 5μm，10×250mm，YMC，Kyoto，Japan)；2ml/min，35％ -95％乙腈-水30min得到化合物HJ-91(t_R＝14.2min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR(CD₃OD，500MHz)δ6.81(1H，dt， J＝15.3，6.9Hz)，6.22(2H，m)，6.02(1H，d，J＝15.3Hz，)，5.70(1H，m)，5.57 (1H，m)，4.11(1H，q，J＝6.8Hz)，3.91(1H，p，J＝6.6Hz)，3.50(1H，m)，3.38 (1H，m)，3.25(2H，s)，2.28(2H，m)，1.66(2H，m)，1.22(3H，d，J＝6.3Hz)，1.1 7(6H，s)，1.16(3H，d，J＝7.2Hz)¹³C NMR(CD₃OD，125MHz)δ169.1(C-1)，14 5.4(C-3)，137.5(C-7)，136.4(C-10)，132.1(C-9)，130.8(C-8)，124.9(C-2)，77.2(C-11)，72 .3(C-6)，71.6(C-2')，64.6(C-1”)，51.1(C-1')，36.9，29.1，27.2(C-3'\C-4')，21.8，15.6(C-2 ”)。

实施例10

花椒酰胺HJ-16的制备

实施例8所得D8部分25g，经凝胶柱色谱(Sephadex LH-20，样品与凝胶质量比为1:60)，以甲醇洗脱10个柱体积，收集第3个柱体积洗脱液。回收溶剂后经HPLC制备YMC-PackODS-A column(5μm，10×250mm，YMC，Kyoto，Japan)；2ml/min， 35％-65％甲醇-水0-30min梯度制备得到化合物HJ-16(t_R＝19.2min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR(CD₃OD，500MHz)¹H NMR(CD₃OD， 500MHz)δ7.29(1H，dd，J＝15.7，10.8Hz，H-9)，6.79(1H，dt，J＝15.3，6.9Hz，H-3)， 6.45(1H，dd，J＝15.3，10.8Hz，H-8)，6.19(1H，d，J＝15.7Hz，H-10)，6.12(1H，dd， J＝15.3，7.3Hz，H-7)，6.01(1H，dt，J＝15.3，1.5Hz，H-2)，3.78(1H，q，J＝6.7Hz， H-6)，3.30(3H，s，-OCH₃)，3.25(2H，s，H-1')，2.29(2H，m，H-4)，2.21(3H，s，H-12)， 1.79–1.65(2H，m，H-5)，1.17(6H，s，H-3'，H-4')¹³C NMR(CD₃OD，125MHz)δ201.5 (C-11)，169.0(C-1)，145.2(C-3)，145.0(C-7)，144.8(C-9)，131.7(C-10)，131.7(C-8)， 125.0(C-2)，81.9(C-6)，71.6(C-2')，57.0(-OCH₃)，51.1(C-1')，34.8(C-5)，28.8(C-4)， 27.2(C-3'/C-4')，27.1(C-12)。

实施例11

花椒酰胺HJ-17的制备

实施例8所得D8部分25g，经凝胶柱色谱(Sephadex LH-20，样品与凝胶质量比为1:60)，以甲醇洗脱10个柱体积，收集第3个柱体积洗脱液。回收溶剂后经HPLC制备YMC-PackODS-A column(5μm，10×250mm，YMC，Kyoto，Japan)；2ml/min， 35％-65％甲醇-水0-30min梯度制备得到化合物HJ-17(t_R＝22.3min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：1H NMR(CD3OD，500MHz)δ7.28(1H，dd，J＝15.7，10.8Hz，H-8)，6.79(1H，dt，J＝15.3，6.9Hz，H-3)，6.42(1H，dd，J＝15.7， 10.8Hz，H-9)，6.24(1H，d，J＝15.7Hz，H-7)，6.14(1H，dd，J＝15.7，6.9Hz，H-10)，6.02(1H，d，J＝15.3Hz，H-2)，3.91(1H，m，H-11)，3.29(3H，s，-OCH3)，3.24(2H， s，H-1')，2.82(2H，t，J＝7.2Hz，H-5)，2.49(2H，t，J＝7.2Hz，H-4)，1.25(3H，d， J＝6.4Hz，H-12)，1.17(6H，s，H-3'，H-4')¹³C NMR(CD3OD，125MHz)δ201.5(C-6)， 168.9(C-1)，146.5(C-10)，144.4(C-3)，143.9(C-8)，130.7(C-7)，130.5(C-9)，125.2(C-2)， 78.4(C-11)，71.6(C-2')，56.7(-OCH3)，51.1(C-1')，39.4(C-5)，27.4(C-4)，27.2(C-3'\C-4')， 21.0(C-12)。

实施例12

(2E,7E,9E)-N-(2-hydroxy-2-methylpropyl)-6,11-dioxo-2,7,9-dodecatrienamide(HJ-24) 的制备

实施例8所得D9部分40g，经硅胶柱色谱(青岛海洋化工厂200-300目，样品与硅胶质量比为1:10)，以二氯甲烷-甲醇(200:1，100:1，50:1，25:1，10:1)梯度洗脱，每梯度洗脱3个柱体积，每500ml洗脱液收集为一个流份。经TLC检测合并，TLC检测使用二氯甲烷-甲醇系统，Fr.3-4标记为D.9.2；Fr.16-17标记为D.9.5。取D.9.2经HPLC制备YMC-Pack ODS-Acolumn(5μm，10×250mm，YMC，Kyoto，Japan)；2ml/min，40％-70％甲醇-水0-30min梯度制备得到化合物HJ-24(t_R＝15.3min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR[(CD₃₎₂CO，500MHz]δ7.31(2H，m，H-8， H-9)，7.19(1H，brs，-NH)，6.75(1H，dt，J＝15.3，6.8Hz，H-3)，6.60(1H，d，J＝15.3Hz， H-7)，6.53(1H，d，J＝14.8Hz，H-10)，6.05(1H，dt，J＝15.3，1.6Hz，H-2)，3.22(2H， d，J＝6.0HzH-1')，2.84(2H，t，J＝7.1Hz，H-5)，2.45(2H，qd，J＝7.1，1.5Hz，H-4)， 2.28(3H，s，H-12)，1.11(6H，s，H-3'，H-4')。¹³C NMR(CD₃OD，125MHz)δ200.6(C-6)， 200.5(C-11)，168.9(C-1)，144.2(C-3)，141.9(C-9)，141.0(C-8)，138.0(C-10)，137.2(C-7)， 125.3(C-2)，71.6(C-2')，51.11(C-1')，39.9(C-5)，27.5(C-12)，27.2(C-3'\C-4')，27.1(C-4)。

实施例13

花椒酰胺bungeanumamide B(HJ-45)的制备

实施例12所得D9.2部分经HPLC制备YMC-Pack ODS-A column(5μm，10×250mm，YMC，Kyoto，Japan)；2ml/min，40％-70％甲醇-水0-30min梯度制备得到化合物HJ-45 (t_R＝18.2min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR[(CD₃)₂CO，500MHz]δ7.17(1H，brs，-NH)，6.77(1H，dt，J＝15.3，6.9Hz，H-3)，6.23(2H，m，H-8，H-9)，6.04(1H，dt，J＝15.3， 1.6Hz，H-2)，5.77(1H，m，H-10)，5.49(1H，m，H-7)，4.28(1H，p，J＝6.4Hz，H-11)， 3.61(1H，m，H-6)，3.24(2H，d，J＝6.0Hz，H-1')，3.20(3H，s，-OCH₃)，2.22(2H， m，H-4)，1.68(1H，m，H-5a)，1.58(1H，m，H-5b)，1.20(3H，d，J＝6.4Hz，H-12)， 1.13(6H，s，H-3'，H-4')¹³C NMR[(CD₃)₂CO，125MHz]δ167.1(C-1)，143.8(C-3)，139.9 (C-7)，133.8(C-10)，133.3(C-9)，128.3(C-8)，125.2(C-2)，81.8(C-6)，70.9(C-2')，67.9(C-11)， 56.2(-OCH₃)，51.2(C-1')，35.1(C-5)，28.4(C-4)，27.6(C-3'\C-4')，24.0(C-12)。

实施例14

花椒酰胺bungeanumamide A(HJ-47)的制备

实施例12所得D9.2部分经HPLC制备YMC-Pack ODS-A column(5μm，10×250mm，YMC，Kyoto，Japan)；2ml/min，40％-70％甲醇-水0-30min梯度制备得到化合物HJ-47 (t_R＝20.1min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR[(CD₃)₂CO，500MHz]δ7.15(1H，brs， -NH)，6.80(1H，dt，J＝15.3，7.0Hz，H-3)，6.22(2H，m，H-8，H-9)，6.05(1H，dt， J＝15.3，1.6Hz，H-2)，5.75(1H，m，H-7)，5.52(1H，m，H-10)，4.14(1H，q，J＝6.3 Hz，H-6)，3.74(1H，m，H-11)，3.24(2H，d，J＝6.1Hz，H-1')，3.18(3H，s，-OCH₃)， 2.28(2H，m，H-4)，1.63(2H，m，H-5)，1.16(3H，d，J＝6.3Hz，H-12)，1.13(6H，s， H-3'，H-4')¹³C NMR[(CD₃)₂CO，125MHz]δ167.1(C-1)，144.0(C-3)，138.2(C-10)， 135.7(C-7)131.9(C-9)，129.5(C-8)，125.2(C-2)，78.1(C-11)，71.4(C-6)，70.9(C-2')，55.9 (-OCH₃)，51.2(C-1')，37.0(C-5)，28.6(C-4)，27.7(C-3'\C-4')，21.6(C-12)。

实施例15：

花椒酰胺(6R)-ZP-amide A(HJ-18-1)的制备

实施例12所得D.9.5部分经HPLC梯度制备YMC-Pack ODS-A column(5μm，20×250mm，YMC，Kyoto，Japan)；15ml/min，35％-65％甲醇-水0-30min得到化合物HJ-18 (t_R＝14.4min)。HJ-18作为外消旋体经手性制备柱Chiralpak AD-H column(5μm，150mm ×30mm，Daicel Chemical Industries，Ltd)以流速30ml/min，Hexane/IPA＝60/40(V\V)制备得到对映异构体HJ-18-1(t_R＝4.2min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR(CD₃OD，500MHz)δ7.29(1H，dd，J＝15.3，10.8Hz，H-9)，6.81(1H，dt，J＝15.3，6.9Hz，H-3)，6.45(1H，dd，J＝15.3 10.8Hz， H-8)，6.28(1H，dd，J＝15.3，6.0Hz，H-7)，6.16(1H，d，J＝15.3Hz，H-10)，6.03(1H，dt，J＝15.3，1.5Hz，H-2)，4.23(1H，q，J＝6Hz，H-6)，3.25(2H，s，H-1')，2.33(2H， m，H-4)，2.28(3H，s，H-12)，1.70(2H，m，H-5)，1.17(6H，s，H-3'，H-4')。

实施例16：

花椒酰胺(6S)-ZP-amide A(HJ-18-2)的制备

实施例15所得HJ-18作为外消旋体经手性制备柱Chiralpak AD-H column(5μm，150 mm×30mm，Daicel Chemical Industries，Ltd)以流速30ml/min，Hexane/IPA＝60/40(V\V) 制备得到对映异构体HJ-18-2(t_R＝6.8min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR(CD₃OD，500MHz)δ7.29(1H，dd，J＝15.3，10.8Hz，H-9)，6.81(1H，dt，J＝15.3，6.9Hz，H-3)，6.45(1H，dd，J＝15.3 10.8Hz，H-8)，6.28(1H，dd，J＝15.3，6.0Hz，H-7)，6.16(1H，d，J＝15.3Hz，H-10)，6.03(1H， dt，J＝15.3，1.5Hz，H-2)，4.23(1H，q，J＝6Hz，H-6)，3.25(2H，s，H-1')，2.33(2H， m，H-4)，2.28(3H，s，H-12)，1.70(2H，m，H-5)，1.17(6H，s，H-3'，H-4')。

实施例17：

花椒酰胺(6R)-ZP-amide B(HJ-19-1)的制备

实施例12所得D9.5部分经HPLC梯度制备YMC-Pack ODS-A column(5μm，20×250mm，YMC，Kyoto，Japan)；15ml/min，35％-65％甲醇-水0-30min得到化合物HJ-19(t_R＝15.8min)。外消旋体HJ-19经手性制备柱Chiralpak AY-H column(5μm，150mm×30mm， DaicelChemical Industries，Ltd)以流速30ml/min，Hexane/IPA＝60/40(V\V)得到对映异构体HJ-19-1(t_R＝4.7min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR(CD₃OD，500MHz)δ7.28(1H，dd，J＝15.3，10.7Hz，H-8)，6.79(1H，dt，J＝15.3，6.8Hz，H-3)，6.41(1H，ddd，J＝15.3，10.8， 1.4Hz，H-9)，6.28(1H，dd，J＝15.3，5.4Hz，H-10)，6.22(1H，d，J＝15.3Hz，H-7)， 6.02(1H，dt，J＝15.3，1.6Hz，H-2)，4.37(1H，m，H-11)，3.24(2H，s，H-1')，2.81(2H， t，J＝7.2Hz，H-5)，2.49(2H，m，H-4)，1.27(3H，d，J＝6.5Hz，H-12)，1.17(6H，s， H-3'，H-4')。

实施例18：

花椒酰胺(6S)-ZP-amide B(HJ-19-2)的制备

实施例17所得外消旋体HJ-19经手性制备柱Chiralpak AY-H column(150mm×30mm，5μm；Daicel Chemical Industries，Ltd)以流速30ml/min，Hexane/IPA＝60/40(V\V)得到对映异构体HJ-19-2(t_R＝5.6min)。

实施例19：

花椒酰胺HJ-14的制备

实施例8所得D8部分25g，经凝胶柱色谱(Sephadex LH-20，样品与凝胶质量比为1:60)，以甲醇洗脱10个柱体积，收集第3个柱体积洗脱液。回收溶剂后经HPLC制备YMC-PackODS-A column(5μm，10×250mm，YMC，Kyoto，Japan)；2ml/min， 35％-65％甲醇-水0-30min梯度制备得到化合物HJ-14(t_R＝27.3min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR(CD₃OD，500MHz)δ，6.79(1H，dt， J＝15.3，6.9Hz，H-3)，6.45(1H，dd，J＝15.3，10.8Hz，H-8)，6.43(1H，dd，J ＝15.7，10.8Hz，H-9)，6.15(1H，dd，J＝15.7，6.8Hz，H-10)，6.14(1H，dd，J＝1 5.3，7.3Hz，H-7)，6.01(1H，dt，J＝15.4，1.5Hz，H-2)，3.90(1H，m，H-11)，3.7 8(1H，q，J＝6.7Hz，H-6)，3.30(3H，s，-OCH₃)，3.25(2H，s，H-1')，2.29(2H， m，H-4)，1.79–1.65(2H，m，H-5)，1.21(3H，d，J＝6.5Hz，H-12)，1.17(6H，s， H-3'，H-4')¹³C NMR(CD₃OD，125MHz)δ169.0(C-1)，144.7(C-10)，145.2(C-3)，145.1(C-7)，131.5(C-8)，130.3(C-9)，125.0(C-2)，81.9(C-6)，79.9(C-11)，71.6(C- 2')，57.0(-OCH₃)，51.1(C-1')，34.8(C-5)，28.8(C-4)，27.2(C-3'\C-4')，20.9(C-12)。

实施例20

花椒酰胺HJ-93的制备

实施例8所得D3.2.5经HPLC制备YMC-Pack ODS-A column(5μm，10×250m m，YMC，Kyoto，Japan)；2ml/min，40％-90％乙腈-水0-30min梯度制备得到化合物 HJ-93(t_R＝23.2min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR(CD₃OD，500MHz)δ6.79(1H，dt， J＝15.3，6.9Hz，H-3)，6.23(1H，dd，J＝15.4，10.5Hz，H-8)，6.21(1H，dd，J＝15.4，10.5Hz，H-9)，6.02(1H，dt，J＝15.4，1.5Hz，H-2)，5.79(1H，dd，J＝15.3， 6.5Hz，H-7)，5.76(1H，dd，J＝15.3，6.4Hz，H-10)，3.75(1H，m，H-11)，3.54(1H， m，H-6)，3.52(2H，m，H-1”a，H-1”'a)，3.38(2H，m，H-1”b，H-1”'b)，3.25(2H，s， H-1')，2.24(2H，m，H-4)，1.26(3H，d，J＝6.5Hz，H-12)，1.70(1H，m，H-5a)，1.6 2(1H，m，H-5b)，1.17(6H，s，H-3'，H-4')，1.16(3H，t，H-2”)1.15(3H，t，H-2”') ¹³C NMR(CD₃OD，125MHz)δ169.1(C-1)，145.5(C-3)，133.5(C-10)，130.7(C-8)，130. 5(C-9)，124.8(C-2)，80.7(C-6)，71.6(C-2')，80.2(C-11)，64.5(C-1”)，64.0(C-1”')，51.1(C -1')，35.2(C-5)，28.9(C-4)，27.2(C-3'/C-4')，21.4(C-12)，15.6(C-2”)，15.2(C-2”')。

实施例21

花椒酰胺HJ-B-2的制备

实施例5所得B部分部位经D101大孔树脂(20L)吸附，分别以20％，50％，90％乙醇及无水乙醇洗脱，每个梯度洗脱3个柱体积。收集20％乙醇洗脱部位，回收溶剂，所得流份标记为B20部位。

B20部位经硅胶柱色谱(青岛海洋化工厂200-300目，样品与硅胶质量比为1:5)，以二氯甲烷-甲醇(50:1，20:1，10:1，5:1，3:1)梯度洗脱，每个梯度洗脱3个柱体积。每800mL洗脱液收集为一个流份，共得到52个流份。经TLC检测合并(TLC检测使用二氯甲烷-甲醇系统)得到4个组份标记为B20.1-B20.4，即B20.1(Fr.1-6)、B20.2(Fr.7 -13)、B20.3(Fr.20-45)、B20.4(Fr.46-52)。

B20.3经开放ODS柱色谱(YMC.GEL，ODS-A-HG，5cm×30cm)，以15％、18％、 20％、25％、30％、50％、100％甲醇-水梯度洗脱。每个梯度洗脱1.5L。每250ml洗脱液收集为一个流份。收集流份Fr.21-23，标记为B20.3-21～23。

B20.3-21～23经HPLC制备(YMC-Pack ODS-A column 5μm，10×250mm，YMC，Kyoto，Japan)；2ml/min，15％乙腈-水制备得到化合物HJ-B-2(t_R＝21.2min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR(CD₃OD，500MHz)δ7.29(1H，dd， J＝15.7，10.8Hz，H-9)，6.78(1H，dt，J＝15.3，6.9Hz，H-3)，6.45(1H，dd，J ＝15.3，10.8Hz，H-8)，6.19(1H，d，J＝15.7Hz，H-10)，6.12(1H，dd，J＝15.3，7. 3Hz，H-7)，6.02(1H，dt，J＝15.4，1.5Hz，H-2)，4.48(1H，d，J＝7.8Hz，H-1”)， 3.78(1H，q，J＝6.7Hz，H-6)，3.90(1H，m，H-6”)，3.65(1H，m，H-6”)，3.37(2H， s，H-1')，3.37(1H，m，H-3”)，3.30(3H，s，-OCH₃)，3.28(2H，m，H-4”，H-5”overl ap)，3.17(1H，m，H-2”)，2.29(2H，m，H-4)，2.21(3H，s，H-12)，1.79–1.65(2H， m，H-5)，1.24(6H，s，H-3'，H-4')¹³C NMR(CD₃OD，125MHz)δ201.5(C-11)，16 9.0(C-1)，145.2(C-3)，145.0(C-7)，144.8(C-9)，131.7(C-10)，131.7(C-8)，125.0(C -2)，98.4(C-1”)，81.9(C-6)，78.6(C-2')，78.1(C-3”)，77.6(C-5”)，75.2(C-2”)，71.7(C -4”)，62.8(C-6”)，57.0(-OCH₃)，49.0(C-1')，34.8(C-5)，28.8(C-4)，25.1(C-3'/C-4')， 24.7(C-3'/C-4')，27.1(C-12)。

实施例22

花椒酰胺HJ-B-3的制备

实施例21所得B20.3-21～23经HPLC制备(YMC-Pack ODS-A column 5μm，10×250mm，YMC，Kyoto，Japan)；2ml/min，15％乙腈-水制备得到化合物HJ-B-3(t_R＝ 24.9min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR(CD₃OD，500MHz)δ7.28(1H，dd， J＝15.7，10.8Hz，H-8)，6.78(1H，dt，J＝15.3，6.9Hz，H-3)，6.42(1H，dd，J ＝15.5，10.8Hz，H-9)，6.24(1H，d，J＝15.6Hz，H-7)，6.14(1H，dd，J＝15.2， 6.9Hz，H-10)，6.02(1H，d，J＝15.5Hz，H-2)，4.48(1H，d，J＝7.8Hz，H-1”)， 3.91(1H，m，H-11)，3.90(1H，m，H-6”)，3.65(1H，m，H-6”)，3.29(3H，s，-OCH₃)， 3.37(2H，s，H-1')，3.37(1H，m，H-3”)，3.28(2H，m，H-4”，H-5”overlap)，3.17(1 H，m，H-2”)，2.82(2H，t，J＝7.2Hz，H-5)，2.49(2H，t，J＝7.2Hz，H-4)，1.25 (3H，d，J＝6.4Hz，H-12)，1.24(6H，s，H-3'，H-4')¹³C NMR(CD₃OD，125MHz) δ201.5(C-6)，168.9(C-1)，146.5(C-10)，144.4(C-3)，143.9(C-8)，130.7(C-7)，130. 5(C-9)，125.2(C-2)，98.4(C-1”)，78.6(C-2')，78.4(C-11)，78.1(C-3”)，77.6(C-5”)， 75.2(C-2”)，71.7(C-4”)，62.8(C-6”)，56.7(-OCH₃)，49.1(C-1')，39.4(C-5)，27.4(C-4)， 25.1(C-3'/C-4')，24.7(C-3'/C-4')，21.0(C-12)。

实施例23

花椒酰胺HJ-B-7的制备

实施例21所得B20.3-21～23经HPLC制备(YMC-Pack ODS-A column 5μm，10×250mm，YMC，Kyoto，Japan)；2ml/min，15％：85％乙腈-水制备得到化合物HJ-B -7(t_R＝17.7min)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR(CD₃OD，500MHz)δ7.38–7.28(2H， m，H-8，H-9)，6.79(1H，dt，J＝15.3，6.8Hz，H-3)，6.65–6.57(1H，m，H-7)，6.5 7–6.50(1H，m，H-10)，6.02(1H，dt，J＝15.4，1.6Hz，H-2)，4.48(1H，d，J＝7.8 Hz，H-1”)，3.90(1H，m，H-6”)，3.65(1H，m，H-6”)，3.37(2H，s，H-1')，3.37(1H， m，H-3”)，3.28(2H，m，H-4”，H-5”overlap)，3.17(1H，m，H-2”)，2.87(2H，t，J＝ 7.1，7.1Hz，H-5)，2.51(2H，m，H-4)，2.33(3H，s，H-12)，1.24(6H，s，H-3'，H- 4')。¹³C NMR(CD₃OD，125MHz)δ200.6(C-6)，200.5(C-11)，168.8(C-1)，144.2(C -3)，141.9(C-9)，141.0(C-8)，138.0(C-10)，137.2(C-7)，125.3(C-2)，98.4(C-1”)，7 8.6(C-2')，78.1(C-3”)，77.6(C-5”)，75.2(C-2”)，71.7(C-4”)，62.8(C-6”)，49.1(C-1')， 39.9(C-5)，27.5(C-12)，25.0(C-3'/C-4')，24.7(C-3'/C-4')，27.1(C-4)。

实施例25

花椒酰胺HJ-69的制备

实施例4所得E部分301g经硅胶柱色谱(青岛海洋化工厂200-300目，样品与硅胶质量比为1:5)，以石油醚-丙酮(20:3，10:3，2:1，1:1，1:1.5，1:2)梯度洗脱，每个梯度约3个柱体积。每500ml洗脱液收集为一个流份。得到110个流份。TLC检测使用二氯甲烷-甲醇系统，Fr.71-77标记为E5。

E5部分20g，经硅胶柱色谱(青岛海洋化工厂200-300目，样品与硅胶质量比为1:5)，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(15:1，10:1，5:1，1:1)，每个梯度洗脱3个柱体积。每50ml 洗脱液收集为一个流份。Fr.12经TLC检识，TLC检测使用二氯甲烷-甲醇系统，得到化合物HJ-69-1。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR[(CD₃)₂CO，500MHz]δ7.14(1H，s，-NH)，6.79(1H，dt，J＝15.3，6.9Hz，H-3)，6.19(1H，dd，J＝15.3，10.8Hz，H-9)，6.20(1H， dd，J＝15.3，10.8Hz，H-8)，6.04(1H，dt，J＝15.3，1.6Hz，H-2)，5.70(2H，m，H-7， H-10)，4.27(1H，m，H-11)，4.13(1H，m，H-6)，3.98(1H，s，OH at C-2')，3.84(1H， d，J＝4.6Hz，OH at C-6)，3.73(1H，d，J＝4.4Hz，OH at C-11)，3.24(2H，d，J＝6.1Hz， H-1')，2.26(2H，m，H-4)，1.63(2H，m，H-5)，1.19(3H，d，J＝6.5Hz，H-12)，1.13(6H， s，H-3'，H-4')¹³C NMR[(CD₃)₂CO，125MHz]δ167.1(C-1)，144.0(C-3)，139.1(C-10)， 137.4(C-7)，130.1(C-8)，128.8(C-9)，125.2(C-2)，71.5(C-6)，70.9(C-2')，68.0(C-11)， 51.2(C-1')，37.0(C-5)，28.6(C-4)，27.7(C-3'/C-4')，24.0(C-12)。

实施例26

花椒酰胺ZP-amide F(HJ-71)的制备

实施例25所得E5部分20g，经硅胶柱色谱(青岛海洋化工厂200-300目，样品与硅胶质量比为1:5)，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(15:1，10:1，5:1，1:1)，每个梯度洗脱3个柱体积。每50ml洗脱液收集为一个流份。Fr.14经TLC检识，TLC检测使用二氯甲烷-甲醇系统，得到化合物HJ-71。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H NMR(CD₃OD 500MHz)δ6.81(1H，dt，J ＝15.3，6.9Hz，H-3)，6.24(1H，dd，J＝15.3，10.8Hz，H-9)，6.21(1H，dd，J＝ 15.3，10.8Hz，H-8)，6.02(1H，dd，J＝15.3，1.6Hz，H-2)，5.76–5.64(2H，m，H-7 ，H-10)，4.27(1H，m，H-11)，4.10(1H，m，H-6)，3.25(2H，s，H-1')，2.28(2H，m ，H-4)，1.66(2H，m，H-5)，1.23(3H，d，J＝6.4Hz，H-12)，1.18(6H，s，H-3'，H -4')¹³C NMR(CD₃OD，125MHz)δ169.1(C-1)，145.5(C-3)，138.6(C-10)，136.9(C-7) ，131.1(C-8)，129.8(C-9)，124.8(C-2)，72.3(C-6)，71.6(C-2')，68.8(C-11)，51.1(C-1')，3 6.9(C-5)，29.1(C-4)，27.2(C-3'/C-4')，23.6(C-12)。

实施例27

单胺氧化酶抑制剂(Monoamine Oxidase Inhibitor，MAOI)是最早发现的抗抑郁剂，对于MAO的抑制作用决定其是否能够在抗抑郁药物开发中具有潜在的可能。

材料与实验动物

药品与试剂

MAO活性测试试剂盒：购于南京建成生物工程研究所；帕吉林：sigma公司产品，规格1g/瓶；磷酸钠，蔗糖均购于北京化学试剂公司；吗氯贝胺购自中国药品生物制品鉴定所。

实验仪器

冷冻干燥机，紫外分光光度计(Mapada,UV-3100,China)，AT201型十万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；Buchi Heating Both B旋转蒸发仪(德国Heidolph公司)；SHH-W21-420三用恒温电热水箱(北京精科华瑞仪器有限公司)； QL-901涡旋混匀器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)，Ependrof Centrifuge 5810 R冷冻离心机(德国Eppendorf公司)；组织粉碎机(IKA，Staufen，Germany)。

实验动物

Wistar鼠，雄性，体重180～220g，购自北京维通利华实验动物有限公司，许可证：SCXK(京)2017-0003。大鼠每笼4只群养，自由摄食饮水，室温23-25℃，湿度50±10％， 7:00-19:00光照。动物在新环境中适应7天后开始实验。

实验方法

大鼠肝线粒体单胺氧化酶粗酶(MAO)的制备

大鼠断头处死，快速取出肝脏，4℃缓冲液(0.2M磷酸钠缓冲液，pH＝7.6)反复冲洗干净；称取10g，剪碎，在冰浴中用组织粉碎机匀浆，以1:20(w/v)加入预冷的0.3M蔗糖溶液，涡旋5min；4℃，3000rpm离心10min；吸取上清液，4℃，10000rpm离心30min；弃去上清液，取沉淀溶于40mL缓冲液中，涡旋使其均匀分散，分装至1mL管中，并使用双缩脲法测定粗酶蛋白含量，-80℃储存备用。

测试样品溶液配制

精密称取花椒酰胺单体40mg，于10mL容量瓶中超声溶解，定容，从该标准液中分别吸取不同体积的溶液，配制成一系列不同浓度的供试溶液，使其加入酶液和试剂一以及试剂二后花椒酰胺的浓度分别为浓度分别为300.0，200.0，100.0，50.0，25.0μg/mL。

MAO-A活性抑制测定方法

首先加入B型抑制剂帕吉林pargyline(500nmol/L)至30mL大鼠肝线粒体中，37℃温浴半小时，以抑制MAO-B的活性。后加入不同浓度的花椒酰胺单体及试剂一(苄氨基质液0.3ml)，试剂二(pH 7.6Tris缓冲液)3mL，空白管以生理盐水代替酶液，其余相同。以37℃水浴中混匀反应40min，3h后取出各加10％过氯酸0.3mL，环己烷3.0mL，涡旋2 min，4℃离心沉淀(2000rpm/min)15min，取上清液于石英比色皿内，以空白调零，测定波长242nm下的吸光度，计算MAO-A活性。以只加底物不加抑制剂的对照组的酶活性为100％，计算待测酰胺对MAO-A活性的抑制率

MAO-A活性抑制率＝(对照组吸光度-测试组吸光度)/对照组吸光度×100％

数据处理及统计学分析

实验数据采用(平均值±标准偏差)表示。SPSS 12.0数据处理软件进行统计分析。组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。p<0.05时，组间存在显著性差异。

实验结果

经紫外分光光度法检测得到花椒酰胺单体化合物在不同浓度下对MAO-A活性抑制结果(表2).

表2花椒酰胺单体化合物在不同浓度时对MAO-A活性的抑制率％

如表格所示，花椒酰胺在不同浓度对MAO-A均有显著的抑制作用，且大多数酰胺随着浓度的增加抑制作用增强。显示出花椒酰胺在抗抑郁治疗及对单胺氧化酶A抑制剂中的突出作用。

在后期的初步半数致死计量和细胞毒性试验中，HJ-16、HJ-17、HJ-93、HJ-14、HJ-B-7、 HJ-B-2或HJ-B-3的NAOEL和细胞毒性显著优于其他化合物在同等剂量上的表现。因此在抗抑郁药物制备中HJ-16、HJ-17、HJ-93、HJ-14、HJ-B-7、HJ-B-2或HJ-B-3的性质要显著优于其他化合物。

Claims

1.一种含有多不饱和脂肪链的酰胺类化合物，其特征在于，所述化合物为结构式I所示化合物或其生理上可接受的盐，

其中，R₁选自羰基、甲氧基、乙氧基或羟基；

其中通式的C₂-C₃，C₇-C₈和C₉-C₁₀位置为双键。

2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的C₂-C₃双键为反式、C₇-C₈双键为反式和C₉-C₁₀双键为反式。

3.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，所述R₁为羰基时，R₂选自羰基、羟基或甲氧基，R₃为氢或葡萄糖基；或R₁为甲氧基时，R₂选自羰基、羟基或甲氧基，R₃为氢或葡萄糖基；或R₁为乙氧基时，R₂选自羟基或乙氧基，R₃为氢或葡萄糖基；或R₁为羟基时，R₂选自羰基、羟基、甲氧基或乙氧基，R3为氢或葡萄糖基。

4.根据权利要求3所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自以下化合物：

5.根据权利要求4所述的化合物，其特征在于，所述化合物优选自以下化合物：

6.一种权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于，该方法由以下步骤组成：

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，该方法由以下步骤组成：

3)将步骤2)所述的二氯甲烷、正丁醇和乙酸乙酯有效部位通过柱层析分离，所述层析柱选用硅胶柱或开放ODS柱或大孔树脂进行分离，所述硅胶柱为60-100目或100-200目或200-300目或300-400目，洗脱方法为梯度洗脱，洗脱液为：二氯甲烷-甲醇(100:1-1:1)或石油醚-丙酮(1:0-0:1)、石油醚-乙酸乙酯(1:0-0:1)；所述开放ODS柱层析洗脱方法为梯度洗脱，洗脱液为甲醇-水(5-100％)或乙腈-水(5-100％)或丙酮-水(5-100％)；所述大孔树脂为D系列、HPD系列、HP系列、XAD系列或AD-8型，洗脱液方法为梯度洗脱，洗脱液：乙醇-水(5-100％)；柱层析所得流份使用HPLC制备纯化，所述HPLC配备的制备柱为：YMC-Pack ODS-A制备柱，Chiralpak AD-H及ChiralpakAY-H手性制备柱，经过上述步骤后，得到所述化合物。

8.如权利要求7所述的提取方法，其特征在于，所述低级醇为包括甲醇和乙醇等五个碳以下的醇，提取方法为冷浸或热回流提取法。

9.一种权利要求1所述酰胺类化合物在制备抗抑郁药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，所述酰胺类化合物选自以下化合物：