CN109771391A - 血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物技术领域，涉及一种共载阿霉素和吲哚菁绿的仿生纳米颗粒及其用途，具体地说，是涉及一种彻底消融原发肿瘤，靶向循环肿瘤细胞从而抑制肿瘤转移的血小板膜包被的阿霉素‑吲哚菁绿仿生纳米颗粒及其在制备治疗肿瘤转移疾病药物中的用途。本发明所述的血小板膜包被的仿生纳米颗粒包含阿霉素、吲哚菁绿、纳米载体材料、血小板膜，其中，各成分的重量百分组成是：阿霉素占1‑2％，吲哚菁绿占1‑2％，纳米载体材料占60‑70％，余量为血小板膜。本发明的纳米载体表面包被血小板膜，利用膜上的P‑selectin蛋白，去主动捕获并清除游离在血管及淋巴管中的循环肿瘤细胞，提高了转移性乳腺癌细胞的细胞摄取，从而达到抑制肿瘤转移的目的。

Description

血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒及其用途

技术领域

本发明涉及药物技术领域，涉及一种共载阿霉素和吲哚菁绿的仿生纳米颗粒及其用途，具体地说，是涉及一种彻底消融原发肿瘤，靶向循环肿瘤细胞从而抑制肿瘤转移的血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒及其在制备治疗肿瘤转移疾病药物中的用途。

背景技术

转移性乳腺癌，也称为乳腺癌转移瘤，是乳腺癌的一个阶段，其中疾病已扩展到越过腋窝淋巴结的远处部位。远端转移是90％乳腺癌病人死于乳腺癌的原因。虽然目前临床技术得到很大的进步，但治疗效果仍然有限，远端转移整个生存期最多只能提高几个月。这其中的一个原因是传统化疗药物通过静脉注射由于剂量限制而无法有效进入淋巴系统形成细胞毒性或不能以足够的浓度进入淋巴管。

纳米药物传递系统可以通过增强肿瘤的高通透性和滞留效应而有效地靶向肿瘤，这可以提高肿瘤靶向的潜力。然而，当乳腺癌恶化到晚期时，肿瘤细胞之间的连接松散并且可能分离。大量的游离肿瘤细胞-循环肿瘤细胞(CTC)可以通过血液或淋巴传播，从而形成更多的转移，这是危及生命的。因此，仅仅消除已经产生的转移灶是不明智的，有效捕获并清除循环肿瘤细胞以预防更多的转移仍具有临床挑战性。

血小板在肿瘤转移及发展有诸多的作用，一些研究使用已建立的动物模型报道，血小板通过保护肿瘤细胞免受宿主免疫监测而促进转移，从而使越来越多的循环肿瘤细胞粘附于内皮细胞。血小板衍生的细胞因子和受体可与循环肿瘤细胞结合形成相对较大的栓子，从而保护循环肿瘤细胞免受免疫系统攻击和体内剪切力的影响。其粘附的分子机制主要是在其膜上过表达的血小板蛋白P-选择蛋白可以高度特异性结合在乳腺肿瘤细胞中上调的CD44受体。仿生药物传递系统提供了模拟体内生物粒子的新机遇。

目前血小板膜包被策略主要是探究其在血液中的行为，由于粒径等问题很难去进入淋巴管从而达到更有意义的治疗。目前暂无利用细胞膜包被的仿生纳米颗粒包被阿霉素-吲哚菁绿消融原位肿瘤、靶向捕获并清除循环肿瘤细胞的相关研究及相关的报道。

发明内容

本发明所解决的技术问题是为了克服现有技术的缺陷，同时考虑血小板对循环肿瘤细胞的天然靶向性及靶向递送阿霉素-吲哚菁绿触发化疗及光热治疗的双重作用，提供了血小板膜包被共载阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒(PMDIs)，采用纳米药物载体共载阿霉素和吲哚菁绿，在载体表面包被血小板膜，通过静脉注射，可通过增强的通透性和滞留作用(EPR)在原发肿瘤中积聚，并通过化疗光热消融原发肿瘤。通过P-选择蛋白和CD44受体之间的高亲和力同时活化捕获并清除血液循环和淋巴循环中的循环肿瘤细胞。该纳米系统对乳腺癌的肺和肝转移产生显著的抑制作用。

具体地，

本发明的第一个目的是，克服免疫清除和无法清除循环肿瘤细胞及新的转移灶，提供阿霉素-吲哚菁绿的一种新剂型，即一种可靶向循环肿瘤细胞抑制肿瘤转移的血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒(PMDIs)。

本发明的第二个目的是，提供所述血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒的制备方法。

本发明的第三个目的是，提供所述血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒在制备抗肿瘤药物中的应用。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：提供血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒，所述的仿生纳米颗粒为表面包被血小板膜、内部包载阿霉素与吲哚菁绿的纳米载体。

具体地，所述的血小板膜包被的仿生纳米颗粒包含阿霉素、吲哚菁绿、纳米载体材料、血小板膜，其中，各成分的重量百分组成是：阿霉素占1-2％，吲哚菁绿占1-2％，纳米载体材料占60-70％，余量为血小板膜。

本发明中所述的阿霉素和吲哚菁绿还可以为阿霉素或吲哚菁绿的衍生物。

所述的阿霉素与吲哚菁绿的重量比为：0.5-2.0。

所述的纳米载体材料可以是任何能够包载阿霉素-吲哚菁绿或其衍生物的聚合物，包括聚乳酸乙醇酸、聚三亚甲基碳酸酯、聚己内酯、聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸中的一种或几种；优选的，所述的纳米载体材料为聚乳酸-羟基乙酸。

阿霉素、吲哚菁绿、纳米载体材料之间的重量比为：(1-2)：(1-2)：(60-70)，优选为：1：1：60。

所述的纳米粒的粒径为95-125nm。

所述的血小板膜为鼠源性血小板膜，由大鼠血小板提取而来。

2～5×10⁸个血小板提取的血小板膜包被1mg的阿霉素-吲哚菁绿纳米载体。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：在包载阿霉素与吲哚菁绿的纳米载体外面包被血小板膜。所述的制备方法包括以下步骤：

(1)制备阿霉素-吲哚菁绿纳米载体；

(2)制备血小板膜；

(3)将血小板膜包被于阿霉素-吲哚菁绿纳米载体表面。

其中，

步骤(1)所述的纳米载体为纳米载体材料(如乳酸-羟基乙酸)通过乳化溶剂挥发法制备的含阿霉素、吲哚菁绿的纳米载体。

即将纳米载体材料、阿霉素、吲哚菁绿溶于混合溶剂中，注射到PVA溶液中，冰浴超声。之后旋转挥发有机溶剂。

其中，所述混合溶剂为甲醇、乙醇、二氯甲烷中的两种或两种以上。优选地，所述混合溶剂为甲醇和二氯甲烷的组合，其体积比为甲醇：二氯甲烷＝1：1-1：4，优选为1：3-1：4。

阿霉素、吲哚菁绿、纳米载体材料的重量比为：(1-2)：(1-2)：(60-70)；

PVA溶液的重量体积浓度为：0.5-1.5％，优选为1.0-1.5％。

超声功率为300-450W，优选为400-450W。

步骤(2)中，富血小板血浆采用EDTA抗凝后，离心除去红细胞，取上清加入前列环素抑制血小板激活，离心，再用含蛋白酶抑制剂的PBS重悬。血小板采用重复冻融法制备血小板膜。

液氮速冻血小板后室温溶解，反复此操作，离心，然后用含蛋白酶抑制剂的PBS反复洗涤重悬。

步骤(3)中，将步骤(1)的阿霉素-吲哚菁绿纳米载体加入到步骤(2)制备的血小板膜中，超声处理制备血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿纳米载体。

阿霉素-吲哚菁绿纳米粒冻干之后，1mg与2～5×10⁸个血小板膜进行混合包被。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：一种靶向循环肿瘤细胞抑制肿瘤转移的血小板膜包被的共载阿霉素和吲哚菁绿的仿生纳米颗粒在制备治疗肿瘤转移的药物中的应用。

所述的肿瘤转移尤其指乳腺癌的肺或肝转移。

本发明制备了阿霉素-吲哚菁绿纳米载体，并对其性质进行了考察，同时制备了血小板膜PM，未包被血小板膜的纳米粒DINPs以及单载阿霉素PMDs、单载吲哚菁绿PMIs的纳米粒作为对照，详细考察内容如下：

1)合成阿霉素-吲哚菁绿纳米载体，制备血小板膜，通过超声和挤出将血小板膜包被于阿霉素-吲哚菁绿纳米载体表面，对其理化性质进行表征，如粒径、电位、形态、SDS-PAGE及western-blot表征蛋白情况、包封率、药物释放曲线、体外光热效果等。

2)考察血小板对四种细胞的粘附性。

3)考察血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒(PMDIs)的细胞毒性及细胞摄取。

4)考察血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒(PMDIs)在右足部接瘤的Balb/c裸鼠体内的行为及抗转移治疗效果。

5)考察血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒(PMDIs)在后背部接瘤的Balb/c裸鼠体内的行为及抗转移治疗效果。

6)考察血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒(PMDIs)在右侧第四对乳腺脂肪垫上接瘤的Balb/c裸鼠体内的行为及抗转移治疗效果。

结果表明，本发明制备的血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒治疗肿瘤转移尤其指乳腺癌的肺或肝转移具有明显的效果，可以用于制备抗肿瘤药物，尤其是抗肿瘤转移药物。

附图说明

图1：PMDIs的制备示意图；

其中阿霉素和吲哚菁绿被包载于纳米载体中，血小板膜通过静电作用包被与纳米载体的表面。

图2：PMDIs的表征；

A为DINPs，PMDIs，PMDs和PMIs的外观照片以及电镜图像。比例尺：100纳米；

B为血小板膜，PMDs，PMIs和PMDIs的SDS-PAGE蛋白电泳分析；

C为在有和没有激光照射的情况下从PMDIs的体外药物释放情况；

D为血小板包被的纳米粒的体外光热效率。

图3：四种细胞上CD44的表达和血小板-肿瘤细胞的粘附；

A为流式细胞术分析CD44在MDA-MB-231，CAMA-1，Hela和MCF-7上的表达；

B为在荧光显微镜下观察到的血小板和四种细胞的粘附。比例尺：20μm；

C为用酶标仪定量分析粘附率；

D为评估关键蛋白P-选择蛋白在PMIs，PMDs，PMDIs上的表达并使用血小板膜作为对照。***p<0.001，****p<0.0001，用于与对照比较。

图4：PMDIs联合光热和化疗对MDA-MB-231和MCF-7细胞毒性的协同作用；

A为用游离DOX，游离ICG和PMDIs处理后6小时的细胞共聚焦图像，比例尺：15μm；

B为各种处理后6h，MDA-MB-231和MCF-7摄取阿霉素的流式细胞术分析；

C为不同浓度的ICG和DOX对MDA-MB-231和MCF-7细胞进行各种处理后24h的体外细胞毒性。

图5：PMDIs在右足部接瘤的Balb/c裸鼠体内的行为及抗转移治疗效果；

A为在MDA-MB-231右侧荷瘤裸鼠肿瘤内注射DINPs和PMDIs后20,40,60,90和360分钟的的体内荧光成像情况；

B为原发性肿瘤和淋巴结的体内光热成像；

C为给药后20天淋巴结的图像；

D为PMDIs体内光热效力及定量分析；

E为淋巴结的体积；

F为印度墨水染色全肺的照片和H&E染色结果。

图6：PMDIs在后背部接瘤的Balb/c裸鼠体内的行为及抗转移治疗效果；

A为尾静脉注射20天后的肿瘤图像；

B为肿瘤生长曲线；

C为各种处理后不同组小鼠的存活率；

D为切片情况，比例尺：1毫米；

E为各种治疗期间小鼠的体重变化。**为与对照相比，p<0.01。

图7：PMDIs在右侧第四对乳腺脂肪垫上接瘤的Balb/c裸鼠体内的行为及抗转移治疗效果；

A为给药后20天的体内生物发光和肿瘤图像；

B为肿瘤生长曲线；

C为各种处理后不同组小鼠的存活率；

D为切片情况，比例尺：1毫米；

E为各种治疗期间小鼠的体重变化。

图8：粒径、分散度及粒径分布图；

A为DINPs粒径分布图及平均粒径和分散性指数

B为PMDs粒径分布图及平均粒径和分散性指数；

C为PMIs粒径分布图及平均粒径和分散性指数；

D为PMDIs粒径分布图及平均粒径和分散性指数。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将发明限制在所述的实施例范围之中。

以DINPs为例，不同的油水比，PVA浓度等会影响粒子的粒径和分散程度。

综合以上，当甲醇：二氯甲烷体积比为1：2-1：4，PVA溶液的重量体积浓度为0.5-1.5％时，功率为300-450W时，其粒径在250nm以下，其分散度在0.2以下；

当甲醇：二氯甲烷体积比为1：3-1：4，PVA溶液的重量体积浓度为1.0-1.5％时，功率为400W时，其粒径在100nm以下，同时其分散度相对较低。

实施例1：合成血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒及表征

合成示意图见图1。将60mg PLGA、1mg阿霉素、1mg吲哚菁绿溶于4mL混合溶剂(甲醇：二氯甲烷＝1：3)，之后注射到8ml 1％PVA溶液中，冰浴上400W 5分钟超声。之后在37℃环境旋转挥发过夜，带走有机溶剂。粒子分散体系以16000g离心力离心25min，然后用等量的超纯水洗三次。富血小板血浆采用EDTA抗凝后，100g离心20min除去红细胞，取上清加入前列环素抑制血小板激活，800g离心20分钟，再用含蛋白酶抑制剂的PBS重悬。血小板采用重复冻融法制备血小板膜。液氮速冻血小板后室温溶解，反复此操作5次，4000g离心，然后用含蛋白酶抑制剂的PBS反复洗涤重悬。后加入PLGA纳米颗粒100W2min超声处理进行包被。之后此混合物用200nm聚碳酸酯膜挤出器挤出，反复10次以后，转子搅拌过夜即得。PMDs、PMIs制备方法同上。

在挤出和超声处理DINPs，PMDs，PMIs，PMDIs之后，从左至右，它们分别呈现深绿色，浅粉色和浅绿色(图1A)。粒径和尺寸分布如图8所示，显示DINPs，PMDs，PMIs和PMDIs的粒径分别为96.9,120.6,122.0和122.7nm，具有良好的多分散性PDI分别为0.172,0.123,0.127和0.128。

PMDIs是典型的核壳结构(图1A)，ζ电位显示为-26.6mV(表1)。我们使用SDS-PAGE和western-blot分析PMDIs上的关键蛋白，如图2B和图2D所示，它们都显示相同的蛋白质组分，表明血小板中的关键蛋白质在制备过程中被有效保留。纳米粒的粒径小于125nm，可以通过增强的通透性和保留效应(EPR)蓄积到肿瘤区域，并且具备在淋巴系统中出现的条件。药物包封率为61.94％。

PMDIs在1W/cm² 5min的照射下温度最大升高到53.5℃，可以导致对肿瘤细胞的不可逆损伤。此外，激光照射加速了PMDIs释放的阿霉素，如图2C所示，激光照射显著增加阿霉素从PMDIs的释放速率，阿霉素48小时总释放量显著增加至74.06％。

表1.纳米粒物理表征.

实施例2：血小板与各种类型癌细胞的粘附情况

我们在荧光显微镜下观察血小板和各种类型癌细胞的粘附，并通过酶标仪对粘附的血小板进行定量。结果显示MDA-MB-231细胞的荧光强度比MCF-7，Hela，CAMA-1细胞高3.6倍，高1.6倍和1.1倍(图2C)。表明MDA-MB-231细胞粘附更多的血小板并且与显微镜观察到的结果一致。这表明血小板膜包被的纳米粒有潜力去捕获并清除循环肿瘤细胞。

实施例3：MDA-MB-231与MCF-7对PMDIs的摄取情况及细胞毒性

我们通过共聚焦显微镜观察了MDA-MB-231和MCF-7细胞中PMDIs的细胞内化。共聚焦图像显示在图3A中，各种处理6小时后，阿霉素的红色荧光主要位于细胞核中，吲哚菁绿的绿色荧光整齐地分散在细胞质中。在用游离吲哚菁绿，PMDIs处理的细胞中，激光照射显着增强了阿霉素和吲哚菁绿的荧光信号。我们认为这是光热效应下加速的分子渗透，而且我们发现MDA-MB-231细胞的荧光强度都要强于MCF-7细胞。接下来，我们通过流式细胞术定量测各种处理后MDA-MB-231细胞中阿霉素的摄取量，结果显示在图3B中。对于PMDIs的，激光照射的细胞显示出更强的荧光信号而且与MCF-7细胞相比，MDA-MB-231的荧光显著增加。

通过使用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)测定PMDIs对MDA-MB-231和MCF-7细胞的体外细胞毒性。在激光照射下，PMDIs显示出显著增强的细胞毒性(图3C)。值得注意的是，PMDIs对MDA-MB-231细胞的细胞毒性增加，IC₅₀值低至159.9ngmL^-1(阿霉素浓度)。总的来说，由于PMDIs的细胞摄取效率和光热作用较高，这些结果证实了PMDIs具有更强的细胞毒性。因此，将两种药物结合激光照射外面包被血小板是十分必要的。

实施例4：考察血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒(PMDIs)在右足部接瘤的Balb/c裸鼠体内的行为及抗转移治疗效果。

为了探讨PMDIs在淋巴循环中的行为，我们使用DINPs作为对照。我们可以注意到瘤内注射两种制剂后DINPs转移到附近的前哨淋巴结，而PMDIs在同一时间点累积量更多，并且在6小时内保持相对较高的水平。此外，我们可以注意到髂周淋巴结中也有PMDIs的累积，表明PMDIs具有在淋巴管中流动的能力，并且可以通过淋巴循环渗透到更深的淋巴结中(图4A)。

由于肿瘤内注射的PMDIs，原发肿瘤和前哨淋巴结在激光照射下显示出快速的温度升高(图4B)我们接下来研究了光热消融原发肿瘤及其前哨淋巴结的治疗，前哨淋巴结是肿瘤转移期间扩散肿瘤细胞的第一个关口，我们在Balb/c-nu小鼠右后爪上接种MDA-MB-231细胞，在肿瘤接种15天后瘤内给PMDIs。令人兴奋的是，用PMDIs处理的小鼠显示出大大延长的存活率，在观察的56天内只有五分之一的小鼠死亡(图4G)。用PMDIs处理的小鼠前哨淋巴结的大小比对照组小6.3倍。(图4C，E)。并且我们几乎没有发现用PMDIs治疗的小鼠肺部的转移。这表明PMDIs可以通过淋巴循环渗透到更深的淋巴结中，并且可以捕获和清除淋巴循环中的循环肿瘤细胞。PMDIs具有很好的治疗意义，同时具有良好的生物相容性。

实施例5：考察血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒(PMDIs)在后背部接瘤的Balb/c裸鼠体内的行为及抗转移治疗效果。

为了进一步证实PMDIs清除循环肿瘤细胞的能力，我们用MDA-MB-231细胞(10⁶个细胞/100μL盐水)静脉注射裸鼠。生理盐水组的小鼠显示出显著的肺转移，用DINPs处理的小鼠显示肺转移轻微减少，与生理盐水组相比没有显著差异。形成鲜明对比的是，PMDIs治疗的小鼠肺部几乎没有发现转移，这表明血管中循环肿瘤细胞的有效消除归因于血小板膜上的特异性捕获蛋白P-Selectin，并通过细胞内化杀死肿瘤细胞。

通过尾静脉注射将PMDIs和DINPs静脉给药到接种MDA-MB-231到背部的裸鼠中。PMDIs在注射后6小时在肿瘤部位显示出最强的荧光信号，证实了PMDIs的显著靶向能力，其可以选择性结合MDA-MB-231细胞表面上的过表达的CD44受体。并且根据器官分布的结果，用PMDIs处理的肿瘤的荧光强度比用DINPs处理的肿瘤的荧光强度高近2.5倍。PMDIs的光热能力同样由于DINPs。这表明PMDIs可以根据EPR效应在肿瘤区域积聚，同时捕获血液循环中的循环肿瘤细胞，这将有效抑制肿瘤转移。

然后我们探讨了PMDIs的治疗效率。在具有不同处理的MDA-MB-231背部接瘤的BALB/c-nu小鼠上进行体内化学光热疗法。PMDIs加激光照射引起完全肿瘤消融，治疗20天后肿瘤几乎消失，同时具有良好的生物相容性。(图6E)。

为了评估PMDIs对体内主要组织的乳腺癌转移抑制作用，H&E染色结果显示其他6组有肺转移和肝转移，但PMDIs治疗组未发现明显的肿瘤转移(图6D)。另外，用PMDIs处理的小鼠显示出显著延长的存活率，在观察的62天内仅有五分之一的小鼠死亡(图6C)。因此，PMDIs可以作为体内抗肿瘤治疗的强效化学光热治疗剂并抑制乳腺癌转移。

实施例6：考察血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒(PMDIs)在右侧第四对乳腺脂肪垫上接瘤的Balb/c裸鼠体内的行为及抗转移治疗效果。

为了探究在血液循环，淋巴循环中的行为，我们通过尾静脉将PMDIs和DINPs注射进原位MDA-MB-231-luc肿瘤的裸鼠中。PMDIs在注射后4小时在肿瘤部位显示出强荧光信号(图7A)，并且可以保持高水平超过2小时。根据组织分布的结果，用PMDIs处理的肿瘤的荧光强度比用DINPs处理的肿瘤的荧光强度高6.7倍(图7B，E)，表明PMDIs的高效靶向能力。

PMDIs在注射后4小时的光热能力也优于DINPs。(图7C，D)。然后我们探讨了PMDIs在原位模型中的治疗效率和抗转移效力。我们发现用基于PMDIs的光热消融其原发性肿瘤的小鼠显示几乎消失的肿瘤消融，而且几乎没有转移，并且其与肿瘤的照片一致(图8A，B)。此外，它还具有良好的生物相容性(图8E)。

根据H&E染色切片，用PMDIs处理的小鼠的主要组织也显示几乎没有转移(图8D)。另外，用PMDIs处理的小鼠显示出显著延长的存活率，在观察的90天内仅有五分之一的小鼠死亡(图8C)，并且肿瘤根据肿瘤切片发现显著的肿瘤消融(图8D)。因此，PMDIs可以作为用于体内治疗原位乳腺癌转移的强效化学/光热治疗剂。

Claims (10)

1.血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒，其特征在于，包含阿霉素、吲哚菁绿、纳米载体材料、血小板膜，其中，各成分的重量百分组成是：阿霉素占1％-2％，吲哚菁绿占1％-2％，纳米载体材料占60％-70％，余量为血小板膜。

2.如权利要求1所述的仿生纳米颗粒，其特征在于，所述的纳米载体材料是能够包载阿霉素-吲哚菁绿或其衍生物的聚合物，优选为聚乳酸乙醇酸、聚三亚甲基碳酸酯、聚己内酯、聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸中的一种或几种。

3.如权利要求1或2所述的仿生纳米颗粒，其特征在于，阿霉素、吲哚菁绿、纳米载体材料之间的重量比为：(1-2)：(1-2)：(60-70)，优选为：1：1：60。

4.如权利要求1-3任何一项所述的仿生纳米颗粒，其特征在于，所述的阿霉素和吲哚菁绿还可以为它们的衍生物。

5.如权利要求1-4任何一项所述的仿生纳米颗粒，其特征在于，所述的血小板膜为鼠源性血小板膜，由大鼠血小板提取而来，2～5×10⁸个血小板提取的血小板膜包被1mg的阿霉素-吲哚菁绿纳米载体。

6.如权利要求1所述的血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿仿生纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备阿霉素-吲哚菁绿纳米载体；

(2)制备血小板膜；

(3)将血小板膜包被于阿霉素-吲哚菁绿纳米载体表面。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中将纳米载体材料、阿霉素、吲哚菁绿溶于混合溶剂中，注射到PVA溶液中，冰浴超声，之后旋转挥发有机溶剂，所述混合溶剂为甲醇、乙醇、二氯甲烷中的两种或两种以上；优选地，所述混合溶剂为甲醇：二氯甲烷＝1：1-1：4，优选为1：3-1：4；阿霉素、吲哚菁绿、纳米载体材料的重量比为：(1-2)：(1-2)：(60-70)；PVA溶液的重量体积浓度为：0.5％-1.5％。

8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，将步骤(1)的阿霉素-吲哚菁绿纳米载体加入到步骤(2)制备的血小板膜中，超声处理制备血小板膜包被的阿霉素-吲哚菁绿纳米载体；1mg阿霉素-吲哚菁绿纳米粒与2～5×10⁸个血小板膜进行混合包被。

9.权利要求1-5任何一项所述的仿生纳米颗粒在制备抗肿瘤药物中的应用。

10.权利要求1-5任何一项所述的仿生纳米颗粒在制备抗肿瘤转移药物中的应用。