CN109765227A - 柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法 - Google Patents

Abstract

柑橘黄龙病的叶脉‑碘酊快速检测诊断方法，包括以下步骤：1)取样：随机采集需检测柑橘植株成熟叶片；2)刮去叶片中脉表皮层，露出韧皮部；3)用棉签沾上1.5‑5.0％碘酊均匀涂于中脉韧皮部；4)结果观察与诊断：等待50秒至3分钟；中脉变蓝色的为阳性，即为柑橘黄龙病，中脉不变色的为阴性，不带柑橘黄龙病韧皮部杆菌，不属柑橘黄龙病。

Description

柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法

技术领域

本发明属于的病原菌检测技术领域，具体涉及柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法。

背景技术

柑橘黄龙病是由一种于韧皮部内寄生的类细菌(韧皮部杆菌：Candida-tusLiberibacter species)引起，能够侵染各种柑橘类植物主要危害柑橘属、枳属、金柑属植物的一种毁灭性病害，属国际植物检疫对象。目前世界对柑橘黄龙病的定性为“可防可控，不可治愈”。柑橘黄龙病对柑橘产业发展及种植户生产的影响是极大，其传病途径主要是靠种苗带菌、柑橘木虱及菟丝子传播，因此，能快速检测诊断柑橘黄龙病对其防控及今后研究防治柑橘黄龙病有着非常重要的作用。

目前黄龙病检测诊断的方法较多，有指示植物鉴别、淀粉-碘反应诊断、高光谱成像检测、免疫学检测、核酸分子检测、POR、LAMP技术的检测等方法，但检测方法都比较复杂、成本高、检测技术要求高，不适宜生产基层农技人员、农民及植物检疫人员现场或田间操作。

虽然田间诊断以“黄梢”、“斑驳黄化叶片”和“红鼻子果”症状作为诊断方法简便，但对无症状柑橘病苗，不能快速诊断，且准确率也较低。因此，需要找到更有效的柑橘黄龙病原菌的检测方法。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供了柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法，能够解决长期以来困扰基层农技人员、农民及植物检疫人员现场快速检测柑橘黄龙病的难题，为柑橘黄龙病防控提供了便利及技术保障。

柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法，包括以下步骤：

1)取样：随机采集需检测柑橘植株成熟叶片；

2)刮去叶片中脉表皮层，露出韧皮部；

3)用棉签沾上1.5-5.0％(v/v)碘酊均匀涂于中脉韧皮部；

4)结果观察与诊断：等待50秒至3分钟；中脉变蓝色的为阳性，即为柑橘黄龙病；中脉不变色的为阴性，不带柑橘黄龙病韧皮部杆菌，不属柑橘黄龙病。

本发明步骤2)，优选用干净刀片均衡用力刮去叶片中脉表皮层，露出韧皮部。

步骤3)，优选用棉签沾上2.0％碘酊均匀涂于中脉韧皮部。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1、本发明方法的原理是利用柑橘黄龙病韧皮杆菌在韧皮部阻碍葡萄糖的正常运输，导致直链淀粉的积累。柑橘黄龙病叶片淀粉的平均含量是健康叶片淀粉含量的6倍，符合碘遇直链淀粉变蓝色的原理。

2、本发明所述的柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法对柑橘黄龙病的防控及今后研究防治柑橘黄龙病有着非常重要的作用，本发明所述的检测方法具有取材易，检测方便、成本低(2％碘酊20毫升2元钱；小刀片：1元；棉签1包1元，一套检测成本不到5元钱)，易学易懂、快捷、准确性高、无污染等优点，对柑橘种植户和柑橘产业的发展，是个最大的福利。

3、对于无症状表现含柑橘黄龙病的苗木，不能快速诊断，因为柑橘黄龙病潜伏期较长(3个月至5年不等)，不同的管理水平，出现“黄梢”、“斑驳黄化叶片”和“红鼻子果”等黄龙病症状表现时间长短不一，但最终5年后都会出现柑橘黄龙病症状，如“黄梢”、“斑驳黄化叶片”、“红鼻子果”及果品变差等，且出现症状时已经是柑橘黄龙病发展至中后期了，根本无法治愈，最终导致整个果园毁灭。农民如果购买到含有柑橘黄龙病病原的苗木，会造成损失惨重。因此，本发明柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法，是目前在田间快速诊断最有效、准确、快捷的方法。解决了以免农民购买到含有柑橘黄龙病病原的危险苗木所造成的损失，也能为植物检疫人员提供最好的检验方法。为柑橘产业的发展提供了技术保障。也为柑橘黄龙病防控及今后研究防治柑橘黄龙病有着非常重要的作用。

附图说明

图1为本发明所述的柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法所用到的原材料和工具。

图2为本发明所述的柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法所用到的试剂。

图3为本发明所述的柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法的结果观察与诊断1，左边4片叶片涂2％碘酊中脉变蓝色，右边2片叶片涂2％碘酊中脉不变色。

第1-3片确认感染柑橘黄龙病(变蓝色)，第四片确认不感染柑橘黄龙病(中脉不变色)。

图4为本发明所述的柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法的结果观察与诊断2，第1-3片确认感染柑橘黄龙病(中脉变蓝色)，第四片确认不感染柑橘黄龙病(中脉不变色)。

图5为本发明所述的柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法的结果观察与诊断3，左边叶片确认感染柑橘黄龙病(中脉变蓝色)，左边叶片确认不感染柑橘黄龙病(中脉不变色)。

图6为本发明所述的柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法的结果观察与诊断4，两片叶片确认感染柑橘黄龙病(中脉变蓝色)。

图7为本发明所述的柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法的结果观察与诊断5，叶片确认感染柑橘黄龙病(中脉变蓝色)。

具体实施方式

以下通过实施例进一步详细描述本发明，但这些实施例不应认为是对本发明的限制。

实施例1：

柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法，包括以下步骤：

1)取样：随机采集需检测柑橘植株成熟叶片；

2)用刀片均衡用力刮去叶片中脉表皮层，露出韧皮部；

3)用棉签沾上1.5％碘酊均匀涂于中脉韧皮部；

4)结果观察与诊断：等待50秒至3分钟；中脉变蓝色的为阳性，即为柑橘黄龙病；中脉不变色的为阴性，不带柑橘黄龙病韧皮部杆菌，不属柑橘黄龙病。

实施例2：

柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法，包括以下步骤：

1)取样：随机采集需检测柑橘植株成熟叶片；

2)用刀片均衡用力刮去叶片中脉表皮层，露出韧皮部；

3)用棉签沾上5.0％碘酊均匀涂于中脉韧皮部；

4)结果观察与诊断：等待50秒至3分钟；中脉变蓝色的为阳性，即为柑橘黄龙病；中脉不变色的为阴性，不带柑橘黄龙病韧皮部杆菌，不属柑橘黄龙病。

实施例3：

柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法，包括以下步骤：

1)取样：随机采集需检测柑橘植株成熟叶片；

2)用刀片均衡用力刮去叶片中脉表皮层，露出韧皮部；

3)用棉签沾上2.0％碘酊均匀涂于中脉韧皮部；

4)结果观察与诊断：等待50秒至3分钟；中脉变蓝色的为阳性，即为柑橘黄龙病；中脉不变色的为阴性，不带柑橘黄龙病韧皮部杆菌，不属柑橘黄龙病。

表1柑橘黄龙病检测情况

结果：申请人采用本发明所述的方法经过3年多对钦州、防城、东兴等地的柑橘样本检测了989次(见表1)，图3左边是样本之一的检测结果：中脉变蓝色为阳性，属柑橘黄龙病，用1000倍的盐酸四环素注射可减缓黄化现象，但停药3-6月会反弹，经后期的水肥管理等措施处理，树势没有恢复正常现象；图3右边是样本之一的检测结果为阴性，即不带柑橘黄龙病韧皮部杆菌，不属柑橘黄龙病，经追肥管理等处理恢复了正常。

叶脉-碘酊快速检测诊断方法是建立在以“红鼻子果”、“斑驳叶”作为柑橘黄龙病标准与柑橘正常叶片为材料进行了3年多对比与跟踪调查得出的结果。

该检测方法是目前最经济、较简便、准确、易推广及推广应用价高的柑橘黄龙病检测方法。

Claims (3)

1.柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取样：随机采集需检测柑橘植株成熟叶片；

2)刮去叶片中脉表皮层，露出韧皮部；

3)用棉签沾上1.5-5.0％碘酊均匀涂于中脉韧皮部；

4)结果观察与诊断：等待50秒至3分钟；中脉变蓝色的为阳性，即为柑橘黄龙病；中脉不变色的为阴性，不带柑橘黄龙病韧皮部杆菌，不属柑橘黄龙病。

2.根据权利要求1所述的柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法，其特征在于：步骤2)是用刀片均衡用力刮去叶片中脉表皮层，露出韧皮部。

3.根据权利要求1所述的柑橘黄龙病的叶脉-碘酊快速检测诊断方法，其特征在于：步骤3)是用棉签沾上2.0％碘酊均匀涂于中脉韧皮部。