CN109735463A - 一种细菌葡萄糖氧化酶筛选培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物工程技术领域，具体是一种细菌葡萄糖氧化酶筛选培养基。本发明培养基成分为：每L含有葡萄糖30‑60g，蛋白胨2‑5g，KH2PO4 0.1‑0.3g，(NH4)2HPO4 0.3‑0.6g，CaCO3 2‑5g，可溶性淀粉5‑10g，MgSO4 0.1‑0.3g，脱氧胆酸钠0.1‑0.2g，氯霉素0.01‑0.05g，多氧霉素0.01‑0.05g，辣根过氧化物酶0.1‑0.3g，邻联茴香胺1‑3g，琼脂粉10‑25g。本发明采用氯霉素和多氧霉素抑制真菌生长，同时选用辣根过氧化物酶和邻联茴香胺的反应体系，可直观高效的筛选出产葡萄糖氧化酶的细菌，缩短筛选周期，降低工作量。筛选葡萄糖氧化酶的成功率与传统培养基相比可由0提升到2.3%。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，具体是一种细菌葡萄糖氧化酶筛选培养基。
背景技术
葡萄糖氧化酶是一种绿色饲料添加剂，能够显著改善动物肠道微生态平衡、提高饲料利用率、促进动物生长，可在一定程度上替代抗菌药物和抗球虫药物。现存的葡萄糖氧化酶生产菌株以霉菌和工程菌居多，但两者存在着众多问题，如副产物多难于纯化，工程菌难于直接利用于食品行业等。传统的筛选培养基周期长，特异性不高。因此，需要寻求一种新的葡萄氧化酶筛选培养基以便于高效筛选获得目的菌株。
发明内容
为解决现有技术中的问题，本发明提供一种细菌葡萄糖氧化酶筛选培养基。
为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
一种细菌葡萄糖氧化酶筛选培养基，所述培养基成分为：葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、(NH4)2HPO4、CaCO3、可溶性淀粉、MgSO4、脱氧胆酸钠，琼脂粉，所述培养基成分还包括氯霉素、多氧霉素、辣根过氧化物酶、邻联茴香胺。
上述一种细菌葡萄糖氧化酶筛选培养基，所述培养基成分具体为：每L含有葡萄糖30-60g，蛋白胨2-5g，KH2PO4 0.1-0.3 g，(NH4)2HPO4 0.3-0.6 g，CaCO3 2-5 g，可溶性淀粉5-10 g，MgSO4 0.1-0.3 g，脱氧胆酸钠0.1-0.2 g，氯霉素0.01-0.05 g，多氧霉素0.01-0.05g，辣根过氧化物酶0.1-0.3g ，邻联茴香胺1-3 g，琼脂粉10-25 g。
上述一种细菌葡萄糖氧化酶筛选培养基，每L含有葡萄糖45 g，蛋白胨2.7 g，KH2PO4 0.2 g，(NH4)2HPO4 0.42 g，CaCO3 3 g，可溶性淀粉8 g，MgSO4 0.16 g，脱氧胆酸钠0.2 g，氯霉素0.01 g，多氧霉素0.01 g，辣根过氧化物酶0.2 g，邻联茴香胺1.2 g，琼脂粉20 g。
上述一种细菌葡萄糖氧化酶筛选培养基的配制方法，所述方法步骤如下：按比例取葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、(NH4)2HPO4、CaCO3、可溶性淀粉、MgSO4、脱氧胆酸钠、琼脂粉，加入海泥搅拌至溶解，调节pH 6.0-6.4；灭菌后分别加入经氯霉素、多氧霉素、辣根过氧化物酶和邻联茴香胺即得。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：相比于传统培养基，利用本发明培养基筛选葡萄糖氧化酶的成功率由0提升到2.3%，加入的氯霉素和多氧霉素是真菌抑制剂可以有效的抑制霉菌和酵母的生长，选用辣根过氧化物酶和邻联茴香胺的反应体系可减少工作量，提高筛选效率。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
本发明培养基：每L含有葡萄糖45g，蛋白胨2.7g，KH2PO4 0.2g，(NH4)2HPO4 0.42g，CaCO33g，可溶性淀粉8g，MgSO4 0.16g，脱氧胆酸钠0.2g，氯霉素0.01g，多氧霉素0.01g，辣根过氧化物酶0.2g，邻联茴香胺1.2g，琼脂粉20g。所述培养基的配制为：按比例取葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、(NH4)2HPO4、CaCO3、可溶性淀粉、MgSO4、脱氧胆酸钠、琼脂粉，加入海搅拌至溶解，调节pH 6.0-6.4，灭菌后分别加入终浓度为0.01g/L经灭菌的氯霉素和多氧霉素，灭菌后的辣根过氧化物酶和邻联茴香胺即得。
实施例2
本发明培养基：每L含有葡萄糖45g，蛋白胨2.7g，KH2PO4 0.2g，(NH4)2HPO4 0.42g，CaCO33g，可溶性淀粉8g，MgSO4 0.16g，脱氧胆酸钠0.2g，氯霉素0.02g，多氧霉素0.02g，辣根过氧化物酶0.2g，邻联茴香胺1.2g，琼脂粉20g。所述培养基的配制为：按比例取葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、(NH4)2HPO4、CaCO3、可溶性淀粉、MgSO4、脱氧胆酸钠、琼脂粉，加入海搅拌至溶解，调节pH 6.0-6.4，灭菌后分别加入终浓度为0.02g/L经灭菌的氯霉素和多氧霉素，灭菌后的辣根过氧化物酶和邻联茴香胺即得。
实施例3
本发明培养基：每L含有葡萄糖50g，蛋白胨3.5g，KH2PO4 0.3g，(NH4)2HPO4 0.5g，CaCO33.5g，可溶性淀粉8g，MgSO4 0.2g，脱氧胆酸钠0.2g，氯霉素0.01g，多氧霉素0.01g，辣根过氧化物酶0.2g，邻联茴香胺1.2g，琼脂粉20g。所述培养基的配制为：按比例取葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、(NH4)2HPO4、CaCO3、可溶性淀粉、MgSO4、脱氧胆酸钠、琼脂粉，加入海搅拌至溶解，调节pH 6.0-6.4，灭菌后分别加入终浓度为0.01g/L经灭菌的氯霉素和多氧霉素，灭菌后的辣根过氧化物酶和邻联茴香胺即得。
实施例4
现有的传统培养基：每L含有：葡萄糖80g，蛋白胨3g，KH2PO4 0.188g，(NH4)2HPO4 0.3g，CaCO3 3.5g，可溶性淀粉10g，MgSO4 0.15g脱氧胆酸钠0.2g、琼脂粉20g、KI 1.7g，121℃10min。
将富集海泥以10-4，10-5，10-6取100uL涂布于上述传统培养基及各实施例培养基，20℃培养48h，48h后进行染色观察。
传统培养基30块平板共得337个单菌落，用“自动微生物鉴定系统”对获得的单菌落进行生理生化鉴定；其中，酵母61个，霉菌123个，二者总计184个，占总体的54.6%，测定有葡萄糖氧化酶酶活的细菌共0株。
实施例1培养基30块平板共得263个单菌落，用“自动微生物鉴定系统”对获得的单菌落进行生理生化鉴定；其中，酵母24个，霉菌60个，二者总计84个，占总体的31.9%，测定有葡萄糖氧化酶酶活的细菌共6株，成功率2.3%；
实施例2培养基30块平板共得227个单菌落，用“自动微生物鉴定系统”对获得的单菌落进行生理生化鉴定；其中，酵母19个，霉菌57个，二者总计76个，占总体的33.5%，测定有葡萄糖氧化酶酶活的细菌共产葡萄糖氧化酶细菌为3株，成功率1.3%；
实施例3培养基30块平板共得315个单菌落，用“自动微生物鉴定系统”对获得的单菌落进行生理生化鉴定；其中，酵母27个，霉菌78个，二者总计105个，占总体的33.3%，测定有葡萄糖氧化酶酶活的细菌共7株，成功率2.2%。
由上述实验结果可以看出本发明培养基，可筛选出产葡萄糖氧化酶的细菌。
Claims (4)
1.一种细菌葡萄糖氧化酶筛选培养基，所述培养基成分为：葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、(NH4)2HPO4、CaCO3、可溶性淀粉、MgSO4、脱氧胆酸钠，琼脂粉，其特征在于，所述培养基成分还包括氯霉素、多氧霉素、辣根过氧化物酶、邻联茴香胺。
2.如根据权利要求1所述的细菌葡萄糖氧化酶筛选培养基，其特征在于，所述培养基成分具体为：每L含有葡萄糖30-60g，蛋白胨2-5g，KH2PO4 0.1-0.3 g，(NH4)2HPO4 0.3-0.6 g，CaCO3 2-5 g，可溶性淀粉5-10 g，MgSO4 0.1-0.3 g，脱氧胆酸钠0.1-0.2 g，氯霉素0.01-0.05 g，多氧霉素0.01-0.05 g，辣根过氧化物酶0.1-0.3g ，邻联茴香胺1-3 g，琼脂粉10-25 g。
3.如根据权利要求2所述的细菌葡萄糖氧化酶筛选培养基，其特征在于，每L含有葡萄糖45 g，蛋白胨2.7 g，KH2PO4 0.2 g，(NH4)2HPO4 0.42 g，CaCO3 3 g，可溶性淀粉8 g，MgSO40.16 g，脱氧胆酸钠0.2 g，氯霉素0.01 g，多氧霉素0.01 g，辣根过氧化物酶0.2 g，邻联茴香胺1.2 g，琼脂粉20 g。
4.权利要求2或3所述的细菌葡萄糖氧化酶筛选培养基的配制方法，其特征在于，所述方法步骤如下：按比例取葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、(NH4)2HPO4、CaCO3、可溶性淀粉、MgSO4、脱氧胆酸钠、琼脂粉，加入海泥搅拌至溶解，调节pH 6.0-6.4；灭菌后分别加入经氯霉素、多氧霉素、辣根过氧化物酶和邻联茴香胺即得。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20190510 |