CN109730187A

CN109730187A - 具有强身补肾壮阳作用的大鲵制品、制备方法及饮品

Info

Publication number: CN109730187A
Application number: CN201910115424.5A
Authority: CN
Inventors: 李伟; 佟长青
Original assignee: ZHANGJIAJIE (CHINA) JINCHI GIANT SALAMANDER BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: ZHANGJIAJIE (CHINA) JINCHI GIANT SALAMANDER BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2019-02-15
Filing date: 2019-02-15
Publication date: 2019-05-10

Abstract

本发明公开一种具有强身补肾壮阳作用的大鲵制品、制备方法及饮品，所述大鲵制品是分子量为220~1300Da的大鲵活性肽。制备方法是以海洋酸性蛋白酶与胃蛋白酶配制的复合酶酶解大鲵肉匀浆得大鲵冻干粉，再用海洋酸性蛋白酶对大鲵冻干粉进一步酶解，之后在6000rpm条件下离心20min，得到上清液，将上清液经过截留分子量为3000 Da超滤膜分离，取透过超滤膜的液体，冷冻干燥即可。所述饮品原料及质量百分比如下：分子量为220~1300Da的大鲵活性肽0.1~10%、牡蛎多糖0.1~10%、海参肽粉0.1~10%、枸杞干粉0.1~10%、蓝莓冻干粉0.1~10%、柠檬冻干粉0.01~0.6%、果胶0.1~2%，余量为水。

Description

具有强身补肾壮阳作用的大鲵制品、制备方法及饮品

技术领域

本发明涉及一种大鲵制品、制备方法及应用，尤其是一种具有强身补肾壮阳作用的大鲵制品、制备方法及以220~1300Da的大鲵活性肽为主，辅以牡蛎多糖、海参肽粉、枸杞、蓝莓、柠檬和果胶的强身补肾壮阳饮品。

背景技术

男性由于承受的生活与工作压力过大等原因，身体常常处于肾阳虚的亚健康状态，很多男性出现了性功能障碍疾病，40~70岁的男性人群中有超过50%的人患有不同程度的勃起功能障碍（ED）。枸橼酸西地那非片等壮阳类化学药物虽然具有明确的疗效，但却有较大的毒副作用。

研究表明，大鲵肌肉中含有粗蛋白为17.15%，水分为84.04%，粗脂肪为1.73%，灰分为0.66%。大鲵蛋白质经过蛋白酶水解可以获得具有生物活性的大鲵活性肽，不同的酶解方法可以获得分子量不同的大鲵肽，而大鲵肽的生物活性又与其分子量具有相关性。

中国专利申请号为201610314751.X的发明专利申请公开了一种“大鲵活性肽及用途”，其大鲵活性肽是按照如下步骤制备：

a. 将大鲵肉匀浆，向匀浆中加入1~3倍体积pH 7~8的0.01~0.1M磷酸缓冲液及与匀浆重量比为0.1~1%的复合酶，酶解12~48 h；所述复合酶为海洋碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶按活力单位比为7:3比例混合；

b. 离心取上清，采用截留分子量为4000 Da以下用物理吸附法制备的胰蛋白酶固定超滤膜分离器分离，取透过超滤膜的液体；

c. 通过Sephadex LH-20分子筛层析柱，按每管1ml收集层析产物，取第30~36管层析产物进行冷冻干燥；

d．将c步骤所得到的冷冻干燥物制备成10~50mg/ml的去离子水溶液，8000 rpm、4℃条件下离心10 min，用0.22 µm水膜过滤，得到上样上清液；

e. 使用ddH₂O 配制5%甲醇缓冲溶液，通过孔径0.45 µm水膜抽滤，通过超声波除气作为高效液相色谱柱流动相A，使用ddH₂O 配制95%甲醇缓冲溶液，通过孔径0.45 µm油膜抽滤，通过超声波除气作为高效液相色谱柱流动相B；使用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，洗脱条件：流速为1ml/min，洗脱梯度分配：0~20min，流动相A100%；20.5~40min，流动相A50%，流动相B50%；40.5~60min, 流动相B100%；将上液上清液注入C₁₈柱高效液相色谱仪进样口，收集紫外检测波长280 nm的吸收峰；

f. 挥发收集物中的甲醇后真空冷冻干燥，得到大鲵肽制品。

该专利申请说明书公开了所制备的大鲵活性肽可清除自由基、提高机体免疫力及促进皮肤纤维原细胞增殖，并不具有补肾壮阳作用。同时，实践中发现大鲵活性肽所含有的苦味氨基酸较多（甜味氨基酸为6.58mg/g，苦味氨基酸为7.71mg/g），口感较腥，影响了大鲵活性肽产品的开发。

另一方面，亦有报道某些食物中所含有的微量元素以及活性成分具有强精益气、改善男性性功能的作用。如海参低聚肽对肾阳虚小鼠的免疫力提升、生殖器官和精子浓度的提升具有显著效果；牡蛎多糖能螯合大量的锌，而锌是维持男性性功能的重要微量元素；枸杞多糖能够明显缩短阴茎勃起潜伏期、提高附性腺器官脏器系数、精子计数及活力的作用。但是，至今并没有以220~1300Da的大鲵活性肽粉为主，辅以牡蛎多糖、海参肽粉、枸杞、蓝莓、柠檬和果胶，制备强身补肾壮阳饮品的相关报道。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种具有强身补肾壮阳作用的大鲵制品、制备方法及以220~1300Da的大鲵活性肽为主，辅以牡蛎多糖、海参肽粉、枸杞、蓝莓、柠檬和果胶的强身补肾壮阳饮品。

本发明的技术解决方案是：一种具有强身补肾壮阳作用的大鲵制品，其特征是分子量为220~1300Da的大鲵活性肽。

一种如上所述具有强身补肾壮阳作用的大鲵制品的制备方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：

a. 将大鲵肉匀浆，向匀浆中分别加入1~3倍体积pH 4~5的0.01~0.1M磷酸缓冲液及匀浆质量百分比为0.1~1%的复合酶，在37℃条件下，酶解12~48 h，离心取上清，冷冻干燥得大鲵冻干粉；所述复合酶为海洋酸性蛋白酶与胃蛋白酶按活力单位比为6：4混合；

b. 以所得到的大鲵冻干粉为原料，加入1~3倍体积pH 4~5的0.01~0.1M磷酸缓冲液及大鲵冻干粉质量百分比0.1~1%的海洋酸性蛋白酶，在37℃条件下，酶解12~48 h后，在95℃水浴中灭酶15min，冷却至室温后，在6000rpm条件下离心20min，得到上清液；

c. 将上清液经过截留分子量为3000 Da超滤膜分离，取透过超滤膜的液体，冷冻干燥，得到分子量为220~1300Da的大鲵活性肽。

一种以上述具有强身补肾壮阳作用的大鲵制品制备的饮品，其特征在于所用原料及质量百分比如下：分子量为220~1300Da的大鲵活性肽 0.1% ~ 10%、牡蛎多糖0.1 ~ 10%、海参肽粉0.1 ~ 10%、枸杞干粉0.1 ~ 10%、蓝莓冻干粉0.1 ~ 10%、柠檬冻干粉0.01 ~0.6%、果胶0.1~ 2%，余量为水。

本发明所制备的分子量为220~1300Da的大鲵活性肽动物实验结果表明，对肾阳虚小鼠的睾酮水平、精囊腺中精液乳酸脱氢酶（LDH）水平及精子活动率

等方面具有显著改善的效果，即具有强身补肾壮阳作用。而以220~1300Da的大鲵活性肽为主，辅以牡蛎多糖、海参肽粉、枸杞、蓝莓、柠檬和果胶而制备的饮品不但增强了补肾壮阳作用，而且无腥味、口感好，服用方便。

具体实施方式

实施例1：

本发明的大鲵制品按照如下步骤进行制备：

a. 将大鲵肉匀浆，向匀浆中分别加入2倍体积pH4.5的0.5M磷酸缓冲液及匀浆质量百分比为0.5%的复合酶，在37℃条件下，酶解30 h，离心取上清，冷冻干燥得大鲵冻干粉；所述复合酶为海洋酸性蛋白酶（Aspergillus sp.）与胃蛋白酶按活力单位比为6：4混合；

b. 以所得到的大鲵冻干粉为原料，加入2倍体积pH4.5的0.5M磷酸缓冲液及大鲵冻干粉质量百分比0.5%的海洋酸性蛋白酶（Aspergillus sp.）在37℃条件下，酶解30 h后，迅速在95℃水浴中灭酶15min，冷却至室温后，在6000rpm条件下离心20min，得到上清液；

c. 将上清液经过截留分子量为3000 Da超滤膜分离，取透过超滤膜的液体，冷冻干燥，得到冻干粉。经检测，冻干粉为分子量220~1300Da的大鲵活性肽。

其中的海洋酸性蛋白酶（Aspergillussp.）及胃蛋白酶均为外购商品，单位质量的活力单位分别为80,000u/g和1,000,000 u/g。

本发明的具有强身补肾壮阳作用的饮品，所用原料及质量百分比如下：分子量为220~1300Da的大鲵活性肽5%、牡蛎多糖5%、海参肽粉5% 、枸杞干粉5%、蓝莓冻干粉5% 、柠檬冻干粉0.2%、果胶1%，余量为水。

牡蛎多糖、海参肽粉（分子量小于1000 Da，>95%）均为外购商品，枸杞冻干粉、蓝莓冻干粉、柠檬冻干粉均为鲜果榨汁去渣所得果汁冷冻干燥制成的粉末。

实施例2：

本发明的大鲵制品按照如下步骤进行制备：

a. 将大鲵肉匀浆，向匀浆中分别加入1倍体积pH5的0.1M磷酸缓冲液及匀浆质量百分比为0.1%的复合酶，在37℃条件下，酶解48 h，离心取上清，冷冻干燥得大鲵冻干粉；所述复合酶为海洋酸性蛋白酶（Aspergillus sp.）与胃蛋白酶按活力单位比为6：4混合；

b. 以所得到的大鲵冻干粉为原料，加入1倍体积pH5的0.1M磷酸缓冲液及大鲵冻干粉质量百分比0.1%的海洋酸性蛋白酶（Aspergillus sp.）在37℃条件下，酶解48 h后，迅速在95℃水浴中灭酶15min，冷却至室温后，在6000rpm条件下离心20min，得到上清液；

本发明的具有强身补肾壮阳作用的饮品，所用原料及质量百分比如下：分子量为220~1300Da的大鲵活性肽 0.1%、牡蛎多糖10%、海参肽粉0.1% 、枸杞干粉10%、蓝莓冻干粉0.1% 、柠檬冻干粉0.6%、果胶0.1%，余量为水。

实施例2所用原料同实施例1。

实施例3：

本发明的大鲵制品按照如下步骤进行制备：

a. 将大鲵肉匀浆，向匀浆中分别加入3倍体积pH4的0.01M磷酸缓冲液及匀浆质量百分比为1%的复合酶，在37℃条件下，酶解12h，离心取上清，冷冻干燥的大鲵冻干粉；所述复合酶为海洋酸性蛋白酶（Aspergillus sp.）与胃蛋白酶按活力单位比为6：4混合；

b. 以所得到的大鲵冻干粉为原料，加入3倍体积pH4的0.01M磷酸缓冲液及大鲵冻干粉质量百分比1%的海洋酸性蛋白酶（Aspergillus sp.）在37℃条件下，酶解12 h后，迅速在95℃水浴中灭酶15min，冷却至室温后，在6000rpm条件下离心20min，得到上清液；

本发明的具有强身补肾壮阳作用的饮品，所用原料及质量百分比如下：分子量为220~1300Da的大鲵活性肽 10%、牡蛎多糖0.1%、海参肽粉10% 、枸杞干粉0.1%、蓝莓冻干粉10% 、柠檬冻干粉0.1%、果胶2%，余量为水。

实施例3所用原料同实施例1。

实验：

取18~22g雄性ICR小鼠80只，随机分成8组：空白对照组、阴性对照组、阳性对照组、大鲵活性肽（分子量为220~1300Da）组、牡蛎多糖组、海参肽组、枸杞多糖组及本发明实施例1饮品组，所述大鲵活性肽（分子量为220~1300Da）组、牡蛎多糖组、海参肽组、枸杞多糖组均与本发明实施例1所用原料相同。

除空白对照组皮下注射生理盐水（25mg/kg•d）外，每组小鼠皮下注射等量（25mg/kg•d）的氢化可的松，连续7d构建肾阳虚小鼠模型。建模之后连续灌胃24d：空白对照组和阴性对照组灌胃生理盐水（25mL/kg•d），阳性对照组注射丙酸睾酮（5mg/kg•d），大鲵活性肽组灌胃分子量为220~1300Da大鲵活性肽（0.5g/kg•d），牡蛎多糖组灌胃牡蛎多糖（0.5g/kg•d），海参肽组灌胃海参肽（0.5g/kg•d），枸杞多糖组灌胃枸杞多糖（0.5g/kg•d），本发明实施例1饮品组灌胃本发明实施例1饮品中去除水的原料组合（0.5g/kg•d）。最后一次灌胃结束后24h，将小鼠放入水温为6±2℃的水箱中，记录小鼠游泳时间，以小鼠不能游动为截止时间。待小鼠游泳结束后，以颈椎脱臼处死小鼠，检测睾丸组织中睾酮水平、精囊腺中精液乳酸脱氢酶（LDH）水平及精子活动率。结果如下表所示：

注：*表示与空白对照组相比，差异显著（p<0.05），**表示与空白对照组相比，差异极显著（p<0.01）；#表示与阴性对照组相比，差异显著（p<0.05），##表示与阴性对照组相比，差异极显著（p<0.01）。

结果表明，从阳虚小鼠低温游泳时间、睾酮水平、精囊腺中精液乳酸脱氢酶（LDH）水平及精子活动率等指标方面上来看，本发明的大鲵大鲵活性肽组及饮品原料组，高于阴性对照组及其它对照组。

Claims

1.一种具有强身补肾壮阳作用的大鲵制品，其特征是分子量为220~1300Da的大鲵活性肽。

2.一种如权利要求1所述具有强身补肾壮阳作用的大鲵制品的制备方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：

3.一种以权利要求1所述具有强身补肾壮阳作用的大鲵制品制备的饮品，其特征在于所用原料及质量百分比如下：分子量为220~1300Da的大鲵活性肽 0.1~ 10%、牡蛎多糖0.1~ 10%、海参肽粉0.1 ~ 10%、枸杞干粉0.1 ~ 10%、蓝莓冻干粉0.1 ~ 10%、柠檬冻干粉0.01~ 0.6%、果胶0.1 ~ 2%，余量为水。