CN109705205B - 红颈常室茧蜂热激蛋白hsp83及其编码基因和应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83及其编码基因和应用。红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明证实hsp83基因在1‑13d的雌蜂体内都有表达；35℃热激处理1小时红颈常室茧蜂hsp83基因表达量最大。35℃热激进行基因功能研究，结果表明热激处理可延长红颈常室茧蜂雌蜂寿命。通过免疫荧光染色定位研究分析红颈常室茧蜂HSP83蛋白在红颈卵巢管中的分布，35℃热激处理1小时红颈常室茧蜂HSP83蛋白表达量最大。本发明可为科学利用天敌昆虫红颈常室茧蜂进行生态防治提供分子基础。

Description

红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83及其编码基因和应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83及其编码基因和应用。

背景技术

红颈常室茧蜂(Peristenus spretus Chen et van Achterberg)是我国盲蝽若虫(Apolygus lucorum)的优势寄生蜂，是防控我国绿盲蝽的主要天敌因子，其繁殖潜力较大，对控制我国的危害起到重要作用。红颈常室茧蜂可寄生绿盲蝽若虫的所有龄期，偏好2-4龄寄主，不寄生绿盲蝽卵和成虫。

通过野外释放P.spretus可以达到有效防治我国绿盲蝽的目的。然而，在野外环境下，P.spretus的活力会受到多重因素的影响，其中，温度是一个主要生态因素，对P.spretus的生长发育、繁殖和子代性比有着显著的影响。选择适宜处理的温度后投放红颈常室茧蜂，才会起到更好的防治效果。

热激蛋白(Heat Shock Proteins,Hsps)又称热休克蛋白或应激蛋白(HeatStress Proteins,Hsps)，HSPs按照作用和调控方式的不同，可分为诱导型HSPs(heatshock protein)和组成型HSCs(heat shock cognate)，蛋白功能和结构很相近。热激蛋白90(Heat Shock Protein 90,HSP90)是热激蛋白中研究的最多的一类，热激蛋白83(HeatShock Protein 83,HSP83)蛋白属于HSP90家族。

发明内容

本发明的目的在于提供一种红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83。

本发明的再一目的在于提供上述红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83的编码基因。

本发明的再一目的在于提供含有红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83基因的重组菌株。

本发明的再一目的在于提供含有红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83基因的重组表达载体。

本发明的再一目的在于提供红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83基因的应用。

本发明的红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83，其氨基酸如SEQ ID No.1所示：

MPEEVMAESGEVETFAFQAEIAQLMSLIINTFYSNKEIFLRELISNSSDALDKIRYESLTEPSKLESCKDLFIRIIPNKNDRTLTIIDSGIGMTKADLVNNLGTIAKSGTKAFMEALQAGADISMIGQFGVGFYSAYLVADKVTVVSKHNDDEQYLWESSAGGSFTVRLDDGEPLGRGTKMVLHIKEDQAEYLEESKIKEIVKKHSQFIGYPIKLLVEKERDKELSDDECEEVDEKKDVDENEDDKPKIEDVGDDDEGADDKKVEKKKKTIKEKYTEDEELNKTKPIWTRNPDDITQEEYGEFYKSLTNDWEDHLAVKHFSVEGQLEFRALLFIPRRAPFDLFENKKKKNNIKLYVRRVFIMDNCEDIIPEYLNFIKGVVDSEDLPLNISREMLQQNKILKVIRKNLVKKCLELFDEMAEDKENYKKCYEQFSKNLKLGIHEDSTNRKKLSELLRYHTSASGEEVCSLKDYVDRMKENQKQIYFITGESKEQVANSAFVERVKKRGFEVVYMTEPIDEYVVQQLKEFDGKQLVSVTKEGLELPEDEAEKKKHEEDKTKFESLCKTMKDILDKKVEKVVVSNRLVDSPCCIVTSQYGWTANMERIMKAQALRDTSTMGYMAAKKHLEINPDHPVMENLRQKAEADKNDKSLKDLVLLLFETALMSSGFALEEPQVHAMRIYRMIKLGLGIDEDDDEMVVDVKQDEGDIPALEENSEDAQRMEEVD*

该蛋白序列包括724个氨基酸，分子量为83.4KDa，等电点为4.87。

本发明的红颈常室茧蜂hsp83基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示：

AATATATCCATACCTGACGTAGAACGGTACACATCTCCAGCCCTCAGTGACGCATATAGAGAAAAACTATTTTCTGCTGTTATAAGAATTCAAATTGTTGAATCATTGTATATTGAGTGAGATAACAATAATTTAAAGTGACGATTCTAACTAAATAGTTGGATAATCTTCAGATATCTACAAAAAATTATCAAAAAATTCAACAACAAATACGACGACAATGCCAGAAGAAGTCATGGCCGAGTCAGGCGAAGTGGAAACATTTGCTTTCCAAGCTGAAATTGCTCAATTGATGAGTCTTATCATCAATACATTTTATTCAAACAAGGAAATCTTTCTTCGAGAATTAATTTCCAACTCGTCTGATGCTCTTGATAAAATCCGATATGAATCACTCACGGAACCTTCGAAACTTGAATCTTGCAAAGATTTATTCATTAGAATTATTCCCAATAAAAATGATCGTACTCTCACCATCATTGACAGTGGTATTGGAATGACCAAAGCTGATCTGGTGAATAATTTGGGTACAATTGCTAAATCCGGAACTAAAGCTTTCATGGAAGCACTTCAAGCAGGCGCAGATATATCAATGATTGGCCAATTTGGTGTTGGCTTTTATTCAGCATATTTGGTAGCTGATAAAGTGACAGTTGTATCAAAACACAATGATGATGAGCAATATTTGTGGGAATCATCAGCTGGTGGATCATTCACTGTTCGTCTCGATGATGGTGAACCATTGGGACGTGGTACAAAAATGGTTTTACACATTAAAGAAGATCAAGCTGAATATCTTGAAGAATCAAAGATTAAAGAAATCGTAAAGAAACATTCCCAATTCATTGGTTATCCAATAAAATTACTTGTCGAAAAGGAACGTGACAAAGAATTGAGCGATGACGAATGTGAAGAAGTTGATGAGAAAAAAGATGTTGATGAAAATGAAGATGATAAACCAAAAATTGAAGATGTAGGAGACGATGATGAAGGTGCCGATGATAAAAAAGTGGAGAAAAAGAAGAAAACCATAAAAGAAAAGTATACCGAGGATGAAGAATTAAATAAAACAAAGCCAATTTGGACGAGAAATCCTGATGATATTACTCAAGAAGAATACGGTGAATTTTATAAAAGCTTAACCAATGATTGGGAAGATCATCTTGCTGTAAAACACTTTTCTGTTGAGGGACAGCTTGAATTCCGTGCTCTATTATTTATTCCACGTCGTGCACCCTTTGATCTCTTTGAAAATAAAAAGAAGAAGAACAATATCAAGCTTTATGTACGACGTGTATTTATCATGGATAATTGTGAGGATATAATTCCAGAATATTTGAACTTCATCAAAGGTGTAGTTGACAGTGAAGATCTTCCTTTGAATATTTCACGTGAGATGTTACAGCAAAATAAAATCCTCAAAGTAATACGTAAAAATCTTGTAAAGAAATGTTTGGAATTATTCGATGAGATGGCAGAAGATAAAGAAAATTACAAAAAATGTTATGAACAATTTTCAAAGAATTTAAAACTTGGAATTCACGAAGACAGTACAAACAGAAAGAAGTTATCAGAGTTGTTACGTTACCACACATCGGCATCAGGCGAAGAAGTGTGTTCATTGAAAGATTACGTCGATAGAATGAAGGAAAATCAAAAACAAATTTATTTCATTACTGGTGAAAGTAAAGAACAAGTTGCAAATAGTGCATTCGTTGAAAGAGTCAAGAAACGTGGATTTGAGGTTGTATACATGACAGAGCCAATTGATGAATATGTTGTTCAACAACTCAAAGAATTCGATGGTAAACAACTTGTATCAGTGACTAAAGAAGGTTTAGAATTACCTGAAGATGAAGCAGAGAAGAAGAAGCATGAAGAAGACAAAACCAAATTTGAATCATTATGCAAAACTATGAAAGATATTTTAGATAAAAAAGTTGAAAAAGTTGTTGTATCCAATCGACTTGTTGATTCGCCATGTTGCATTGTCACATCGCAATATGGTTGGACTGCCAACATGGAGAGAATTATGAAAGCACAAGCACTACGAGATACTTCAACAATGGGTTATATGGCAGCAAAAAAACATCTTGAAATAAACCCTGATCATCCAGTTATGGAAAATTTACGACAAAAAGCCGAAGCAGATAAAAATGATAAATCACTCAAAGACTTGGTATTGTTACTATTCGAAACAGCATTGATGTCATCAGGATTTGCATTGGAAGAACCTCAAGTTCATGCTATGAGAATTTATCGAATGATCAAACTTGGACTTGGCATTGATGAAGACGATGATGAGATGGTTGTAGATGTAAAACAAGATGAAGGTGATATCCCAGCGTTGGAAGAAAATTCAGAGGATGCACAGAGGATGGAGGAAGTCGATTAAAATAAGTTACCCTTTAAAGAGATCCAAAGACTAGAAAATGAGTGAGCTACAGACTGGTCAAATTATTACAAGTATAAAAATTCAACAATGAATGTTAGCAGAGCTCACATTATCATTTTTGTTCTATTATAAGGATTCATTATCATCTCGACCCATCATTTTTTTTTTCATATCAGTTCGTTTTTTTTACTTTTTTTCAGCCTATTATCATTTTTTTTTATTCATTATCATACTTATATTTAATTTCATTTCATCGTGAATATATTTTTTATTAAAATTAAAATAATGTTTAAAGTCAAGTTGTTAACGTTGTGAAAATCGCGAGTAATCTTAATAAATAAAAAGTATTCATCTTTTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

该序列全长2772bp，含完整的开放阅读框。

本发明还提供含有红颈常室茧蜂基因hsp83的重组表达载体和重组菌株。

根据本发明具体实施方式的红颈常室茧蜂HSP83蛋白基因的应用，尤其在用于防控我国绿盲蝽方面，由于基因hsp83表达受温度调控，通过检测基因hsp83的表达情况，可以得知红颈常室茧蜂对于温度胁迫的耐受情况，热激处理后释放红颈常室茧蜂，使其寿命延长，从而更好的防治绿盲蝽的。

本发明的有益效果：

(1)本发明提供了红颈常室茧蜂首个热激蛋白基因hsp83的cDNA全序列，该序列可为深入研究hsp83对红颈常室茧蜂生物学指标影响奠定基础；

(2)通过RT-qPCR的方法研究不同日龄、不同温度下基因hsp83表达的变化，结果显示hsp83在不同日龄的红颈常室茧蜂体内处于一个动态过程，1-13d都有表达，在13d体内表达量最大。在不同温度条件下，1-13d都有表达，在35℃和38℃处理体内表达量最大，且与其他温度相比差异显著。通过将红颈常室茧蜂于35℃处理1小时与23℃进行对比观察其生物学指标，发现热激处理可延长雌蜂寿命。受到胁迫时hsp83含量增加，保护自身机制的同时延长寿命，对于防治我国绿盲蝽有重大意义，为绿色防治林业害虫提供了一个新的思路和技术。

(3)通过免疫荧光染色方法比较35℃和23℃下HSP83蛋白表达的变化，结果显示HSP83在35℃表达量显著高于23℃表达量，且HSP83表达定位于卵巢管细胞质。进一步验证热激可增加HSP83表达量，与RT-qPCR结果一致。免疫荧光染色与RT-qPCR技术相比，结果具有可靠性和重复性。

附图说明

图1显示RT-PCR所得的红颈常室茧蜂hsp83基因片段；

图2显示RACE所得的红颈常室茧蜂hsp83片段；

图3为3’RACE所得的红颈常室茧蜂hsp83片段；

图4显示不同日龄红颈常室茧蜂hsp83基因的相对表达量情况；

图5显示不同温度条件下红颈常室茧蜂hsp83基因的相对表达量情况；

图6显示不同温度条件下红颈常室茧蜂雌蜂寿命情况；

图7显示不同温度条件下红颈常室茧蜂HSP83蛋白的表达定位情况，其中A显示23℃的HSP83蛋白表达情况，B显示35℃的HSP83蛋白的表达情况。

具体实施方式

实施例1获取红颈常室茧蜂的cDNA

实验材料取自中国农科院植物保护所廊坊实验基地养虫室经人工饲养10代繁殖的种群(饲养条件：23±1℃，RH：70±10％，光照周期为L：D＝14h：10h)。

取饲养1/3/5/7/9/11/13d的红颈常室茧蜂；取50头红颈常室茧蜂进行不同温度处理，高温处理(1h)为26/29/32/35和38℃。提取各温度处理后的红颈常室茧蜂的总RNA。

以上述总RNA为模板，通过PCR扩增获取红颈常室茧蜂的cDNA。

实施例2获取红颈常室茧蜂HSP83蛋白的基因序列

1.扩增hsp83基因的中间段

设计hsp83简并引物，使用的引物序列见下表：

中间段扩增引物序列

使用实施例1获得的cDNA为模板，利用上述引物进行PCR扩增，并用凝胶回收PCR产物，将胶回收产物与pEASY-T3载体连接，并用该连接产物转化Trans-T1感受态细胞，然后将感受态细胞加入到LB液体培养基中，培养过夜。

将涂板过夜的LB固体培养基取出，挑选培养基里面白色单菌落于加有10μL去离子水的1.5μL的离心管中，漩涡混合。取1μL用于菌落PCR鉴定，在剩余9μL中加入500μL含氨苄的LB液体培养基，混合均匀，放在摇床上200×rmp 37℃，摇菌3-5小时。

通过PCR筛选阳性克隆体系，扩增产物经琼脂糖电泳检测，测序，确认得到hsp83中间段。如图1所示，从图中看出RT-PCR所得的红颈常室茧蜂基因hsp83片段，分别扩增得到了162、365、1103、901、223、281bp的基因hsp83片段。

2.扩增hsp83基因的5’末端

设计5’RACE基因特异性引物和接头引物，具体引物如下表所示：

RACE引物序列

以实施例1获得总RNA为模板，以特异性引物RC-RT1/RC-RT2反转，得到5’末端cDNA的第一链，经RNase H和TdT处理后，进行巢氏PCR。

扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳检测后，回收纯化，并与载体连接，连接产物Trans-T1感受态细胞，通过阳性克隆鉴定及测序，最终得到hsp83基因的5’末端的一段419bp的序列片段，结果如图2所示，利用巢氏PCR法扩增到了一段419bp的序列片段。

3.扩增hsp83基因的3’末端

设计3’RACE特异性引物，以3’adaptor为反转引物合成cDNA的第一链，然后进行巢氏PCR。

扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳检测后，回收纯化，并与载体连接，连接产物Trans-T1感受态细胞，通过阳性克隆鉴定及测序，最终得到hsp83基因的5’末端的一段580bp的序列片段，结果如图3所示，利用巢氏PCR法扩增到了一段580bp的序列片段。

将以上获得的hsp83基因的中间段、5’末端和3’末端连接，得到红颈常室茧蜂HSP83蛋白的基因序列。

实施例3荧光定量PCR检测由温度引发的差异性

设计适用于荧光定量PCR检测的特异性引物qF1和qR1，目的片段162bp。以红颈常室茧蜂18sRNA、actin为内参基因，设计引物18sRNA-F1、18sRNA-R1和action-F1、action-R1，引物序列如下：

qRT-PCR引物序列

以上述实施例1获得的cDNA为模板，用上述特异性引物，进行实时荧光PCR扩增反应，每个处理设3次生物学重复，每个样品设3个平行管，扩增后所得3个平行管的Ct值(即每个反应管内的荧光信号到达设定域值时所经历的反应循环数)取平均值。

红颈常室茧蜂在不同日龄、不同温度下基因hsp83相对表达量计算：

当目的基因与内参基因的扩增效率相近时，采用2^-△△CT方法计算，计算公式为：△△CT＝(Ct目的基因-Ct内参基因)实验组-(Ct目的基因-Ct内参基因)对照组；目的基因相对表达量＝2^-△△CT，表示的是本实验目的基因的表达相对于对照组的变化倍数。进行单因素方差分析，检测不同处理间的差异显著性。

检测结果如图4、5所示，1-13d红颈常室茧蜂体内的hsp83都有表达，13d表达量显著高于其他日龄；在高温胁迫的情况下，随着温度的不断升高，红颈常室茧蜂体内的Hsp83的相对表达量在35℃时达到最大表达量。

实施例4热激后hsp83功能分析

以热激表达量最高的35℃处理，热激1小时后，23℃条件下饲养，每个处理40头，以23℃为对照。检测卵巢发育形态，处理组和对照组分别取饲养3d后的雌成虫，在70％的酒精中解剖，在荧光体视显微镜SZX16下进行拍照，每个处理不低于5个重复。对热激后的对照组和处理组雌成虫，每日观察记录，统计其日产茧量、茧重、羽化率、雌雄比例、雌虫寿命、雌雄发育历期等繁殖指标。结果如图6所示，热激后雌虫寿命延长。

实施例5表达产物的亚细胞免疫荧光染色分析

研究HSP83在不同温度处理条件下红颈常室茧蜂卵巢内的表达情况，每个处理各30头只雌蜂，实验步骤如下：

设置23℃下处理1小时与35℃处理小时两个处理组，每个处理各30头只雌蜂解，剖茧蜂卵巢组织，用多聚甲醛固定，振摇离心后，弃固定液，提取一抗；将一抗将入PBTA中，振摇过夜后，回收一抗；取二抗山羊抗兔IgG/Alexa Fluor 488、DAPI加入到PBTA(1：100倍稀释)溶液中，摇床上摇晃2-4h，回收二抗。

将卵巢样品置于Carl Zeiss蔡司激光共聚焦显微镜880(LSM T-PMT)下观察，拍照并记好记录。

结果如图7所示，热激后HSP83蛋白表达显著增加，与荧光定量结果分析一致。

实施例6验证基因hsp83的功能

注射8日龄的4龄幼虫，实验重复三次，每组15只蚜虫，处理组注射dsRNA hsp83，对照组注射等量浓度的昆虫金属蛋白酶抑制剂IMPI。结果显示：注射dsRNA hsp83存活最多22天，未注射的最多存活35天。因此，注射dsRNA hps83后蚜虫寿命较对照明显缩短，基因hps83与昆虫寿命密切相关。

序列表

<110> 中国农业科学院植物保护研究所

<120> 红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83及其编码基因和应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 724

<212> PRT

<213> 红颈常室茧蜂(Peristenus spretus Chen et van Achterberg)

<400> 1

Met Pro Glu Glu Val Met Ala Glu Ser Gly Glu Val Glu Thr Phe Ala

1 5 10 15

Phe Gln Ala Glu Ile Ala Gln Leu Met Ser Leu Ile Ile Asn Thr Phe

20 25 30

Tyr Ser Asn Lys Glu Ile Phe Leu Arg Glu Leu Ile Ser Asn Ser Ser

35 40 45

Asp Ala Leu Asp Lys Ile Arg Tyr Glu Ser Leu Thr Glu Pro Ser Lys

50 55 60

Leu Glu Ser Cys Lys Asp Leu Phe Ile Arg Ile Ile Pro Asn Lys Asn

65 70 75 80

Asp Arg Thr Leu Thr Ile Ile Asp Ser Gly Ile Gly Met Thr Lys Ala

85 90 95

Asp Leu Val Asn Asn Leu Gly Thr Ile Ala Lys Ser Gly Thr Lys Ala

100 105 110

Phe Met Glu Ala Leu Gln Ala Gly Ala Asp Ile Ser Met Ile Gly Gln

115 120 125

Phe Gly Val Gly Phe Tyr Ser Ala Tyr Leu Val Ala Asp Lys Val Thr

130 135 140

Val Val Ser Lys His Asn Asp Asp Glu Gln Tyr Leu Trp Glu Ser Ser

145 150 155 160

Ala Gly Gly Ser Phe Thr Val Arg Leu Asp Asp Gly Glu Pro Leu Gly

165 170 175

Arg Gly Thr Lys Met Val Leu His Ile Lys Glu Asp Gln Ala Glu Tyr

180 185 190

Leu Glu Glu Ser Lys Ile Lys Glu Ile Val Lys Lys His Ser Gln Phe

195 200 205

Ile Gly Tyr Pro Ile Lys Leu Leu Val Glu Lys Glu Arg Asp Lys Glu

210 215 220

Leu Ser Asp Asp Glu Cys Glu Glu Val Asp Glu Lys Lys Asp Val Asp

225 230 235 240

Glu Asn Glu Asp Asp Lys Pro Lys Ile Glu Asp Val Gly Asp Asp Asp

245 250 255

Glu Gly Ala Asp Asp Lys Lys Val Glu Lys Lys Lys Lys Thr Ile Lys

260 265 270

Glu Lys Tyr Thr Glu Asp Glu Glu Leu Asn Lys Thr Lys Pro Ile Trp

275 280 285

Thr Arg Asn Pro Asp Asp Ile Thr Gln Glu Glu Tyr Gly Glu Phe Tyr

290 295 300

Lys Ser Leu Thr Asn Asp Trp Glu Asp His Leu Ala Val Lys His Phe

305 310 315 320

Ser Val Glu Gly Gln Leu Glu Phe Arg Ala Leu Leu Phe Ile Pro Arg

325 330 335

Arg Ala Pro Phe Asp Leu Phe Glu Asn Lys Lys Lys Lys Asn Asn Ile

340 345 350

Lys Leu Tyr Val Arg Arg Val Phe Ile Met Asp Asn Cys Glu Asp Ile

355 360 365

Ile Pro Glu Tyr Leu Asn Phe Ile Lys Gly Val Val Asp Ser Glu Asp

370 375 380

Leu Pro Leu Asn Ile Ser Arg Glu Met Leu Gln Gln Asn Lys Ile Leu

385 390 395 400

Lys Val Ile Arg Lys Asn Leu Val Lys Lys Cys Leu Glu Leu Phe Asp

405 410 415

Glu Met Ala Glu Asp Lys Glu Asn Tyr Lys Lys Cys Tyr Glu Gln Phe

420 425 430

Ser Lys Asn Leu Lys Leu Gly Ile His Glu Asp Ser Thr Asn Arg Lys

435 440 445

Lys Leu Ser Glu Leu Leu Arg Tyr His Thr Ser Ala Ser Gly Glu Glu

450 455 460

Val Cys Ser Leu Lys Asp Tyr Val Asp Arg Met Lys Glu Asn Gln Lys

465 470 475 480

Gln Ile Tyr Phe Ile Thr Gly Glu Ser Lys Glu Gln Val Ala Asn Ser

485 490 495

Ala Phe Val Glu Arg Val Lys Lys Arg Gly Phe Glu Val Val Tyr Met

500 505 510

Thr Glu Pro Ile Asp Glu Tyr Val Val Gln Gln Leu Lys Glu Phe Asp

515 520 525

Gly Lys Gln Leu Val Ser Val Thr Lys Glu Gly Leu Glu Leu Pro Glu

530 535 540

Asp Glu Ala Glu Lys Lys Lys His Glu Glu Asp Lys Thr Lys Phe Glu

545 550 555 560

Ser Leu Cys Lys Thr Met Lys Asp Ile Leu Asp Lys Lys Val Glu Lys

565 570 575

Val Val Val Ser Asn Arg Leu Val Asp Ser Pro Cys Cys Ile Val Thr

580 585 590

Ser Gln Tyr Gly Trp Thr Ala Asn Met Glu Arg Ile Met Lys Ala Gln

595 600 605

Ala Leu Arg Asp Thr Ser Thr Met Gly Tyr Met Ala Ala Lys Lys His

610 615 620

Leu Glu Ile Asn Pro Asp His Pro Val Met Glu Asn Leu Arg Gln Lys

625 630 635 640

Ala Glu Ala Asp Lys Asn Asp Lys Ser Leu Lys Asp Leu Val Leu Leu

645 650 655

Leu Phe Glu Thr Ala Leu Met Ser Ser Gly Phe Ala Leu Glu Glu Pro

660 665 670

Gln Val His Ala Met Arg Ile Tyr Arg Met Ile Lys Leu Gly Leu Gly

675 680 685

Ile Asp Glu Asp Asp Asp Glu Met Val Val Asp Val Lys Gln Asp Glu

690 695 700

Gly Asp Ile Pro Ala Leu Glu Glu Asn Ser Glu Asp Ala Gln Arg Met

705 710 715 720

Glu Glu Val Asp

<210> 2

<211> 2772

<212> DNA

<213> 红颈常室茧蜂(Peristenus spretus Chen et van Achterberg)

<400> 2

aatatatcca tacctgacgt agaacggtac acatctccag ccctcagtga cgcatataga 60

gaaaaactat tttctgctgt tataagaatt caaattgttg aatcattgta tattgagtga 120

gataacaata atttaaagtg acgattctaa ctaaatagtt ggataatctt cagatatcta 180

caaaaaatta tcaaaaaatt caacaacaaa tacgacgaca atgccagaag aagtcatggc 240

cgagtcaggc gaagtggaaa catttgcttt ccaagctgaa attgctcaat tgatgagtct 300

tatcatcaat acattttatt caaacaagga aatctttctt cgagaattaa tttccaactc 360

gtctgatgct cttgataaaa tccgatatga atcactcacg gaaccttcga aacttgaatc 420

ttgcaaagat ttattcatta gaattattcc caataaaaat gatcgtactc tcaccatcat 480

tgacagtggt attggaatga ccaaagctga tctggtgaat aatttgggta caattgctaa 540

atccggaact aaagctttca tggaagcact tcaagcaggc gcagatatat caatgattgg 600

ccaatttggt gttggctttt attcagcata tttggtagct gataaagtga cagttgtatc 660

aaaacacaat gatgatgagc aatatttgtg ggaatcatca gctggtggat cattcactgt 720

tcgtctcgat gatggtgaac cattgggacg tggtacaaaa atggttttac acattaaaga 780

agatcaagct gaatatcttg aagaatcaaa gattaaagaa atcgtaaaga aacattccca 840

attcattggt tatccaataa aattacttgt cgaaaaggaa cgtgacaaag aattgagcga 900

tgacgaatgt gaagaagttg atgagaaaaa agatgttgat gaaaatgaag atgataaacc 960

aaaaattgaa gatgtaggag acgatgatga aggtgccgat gataaaaaag tggagaaaaa 1020

gaagaaaacc ataaaagaaa agtataccga ggatgaagaa ttaaataaaa caaagccaat 1080

ttggacgaga aatcctgatg atattactca agaagaatac ggtgaatttt ataaaagctt 1140

aaccaatgat tgggaagatc atcttgctgt aaaacacttt tctgttgagg gacagcttga 1200

attccgtgct ctattattta ttccacgtcg tgcacccttt gatctctttg aaaataaaaa 1260

gaagaagaac aatatcaagc tttatgtacg acgtgtattt atcatggata attgtgagga 1320

tataattcca gaatatttga acttcatcaa aggtgtagtt gacagtgaag atcttccttt 1380

gaatatttca cgtgagatgt tacagcaaaa taaaatcctc aaagtaatac gtaaaaatct 1440

tgtaaagaaa tgtttggaat tattcgatga gatggcagaa gataaagaaa attacaaaaa 1500

atgttatgaa caattttcaa agaatttaaa acttggaatt cacgaagaca gtacaaacag 1560

aaagaagtta tcagagttgt tacgttacca cacatcggca tcaggcgaag aagtgtgttc 1620

attgaaagat tacgtcgata gaatgaagga aaatcaaaaa caaatttatt tcattactgg 1680

tgaaagtaaa gaacaagttg caaatagtgc attcgttgaa agagtcaaga aacgtggatt 1740

tgaggttgta tacatgacag agccaattga tgaatatgtt gttcaacaac tcaaagaatt 1800

cgatggtaaa caacttgtat cagtgactaa agaaggttta gaattacctg aagatgaagc 1860

agagaagaag aagcatgaag aagacaaaac caaatttgaa tcattatgca aaactatgaa 1920

agatatttta gataaaaaag ttgaaaaagt tgttgtatcc aatcgacttg ttgattcgcc 1980

atgttgcatt gtcacatcgc aatatggttg gactgccaac atggagagaa ttatgaaagc 2040

acaagcacta cgagatactt caacaatggg ttatatggca gcaaaaaaac atcttgaaat 2100

aaaccctgat catccagtta tggaaaattt acgacaaaaa gccgaagcag ataaaaatga 2160

taaatcactc aaagacttgg tattgttact attcgaaaca gcattgatgt catcaggatt 2220

tgcattggaa gaacctcaag ttcatgctat gagaatttat cgaatgatca aacttggact 2280

tggcattgat gaagacgatg atgagatggt tgtagatgta aaacaagatg aaggtgatat 2340

cccagcgttg gaagaaaatt cagaggatgc acagaggatg gaggaagtcg attaaaataa 2400

gttacccttt aaagagatcc aaagactaga aaatgagtga gctacagact ggtcaaatta 2460

ttacaagtat aaaaattcaa caatgaatgt tagcagagct cacattatca tttttgttct 2520

attataagga ttcattatca tctcgaccca tcattttttt tttcatatca gttcgttttt 2580

tttacttttt ttcagcctat tatcattttt ttttattcat tatcatactt atatttaatt 2640

tcatttcatc gtgaatatat tttttattaa aattaaaata atgtttaaag tcaagttgtt 2700

aacgttgtga aaatcgcgag taatcttaat aaataaaaag tattcatctt ttaaaaaaaa 2760

aaaaaaaaaa aa 2772

Claims (6)

1.红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83基因，其特征在于，编码权利要求1所述的红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83。

3.根据权利要求2所述的红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

4.包含权利要求2所述的红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83基因的重组菌株。

5.包含权利要求2所述的红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83基因的重组表达载体。

6.权利要求2所述的红颈常室茧蜂热激蛋白HSP83基因在防治绿盲蝽方面的应用。

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