CN109700931A - 一种用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物及其制备方法，药用有效成分炙黄芪、人参、百合、地骨皮、炙麻黄、杏仁、白术、蛤蚧、浙贝母、瓜蒌仁、天花粉、茯苓、陈皮、桔梗、法半夏、炙甘草、泽泻、丹皮、赤芍、白花蛇舌草、半枝莲、蟾皮及蜈蚣制成。本发明有大补元气、祛痰燥湿逐水、破血逐瘀、养阴清热和宣肺通腑的功效，还具有较强的清解热毒、癌毒的作用，用以预防COPD并发间皮瘤的高危患者发生MPM和治疗COPD合并MPM。

Description

一种用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物及其制备方法，属于药品技术的领域。

背景技术

慢性阻塞性肺疾病(chronicobstructivepulmonarydisease， COPD)是一种常见的以持续气流受限为特征的可以预防和治疗的疾病，气流受限进行性发展，与气道和肺脏对有毒颗粒或气体的慢性炎性反应增强有关。

据统计，每年约有接近百分之一的COPD患者发生肺癌。高龄和长期吸烟可以增加患COPD和肺癌的风险。所以肺癌和COPD可能存在共同的危险因素。有研究表明，与肺癌存在关联的某一基因片段，在 COPD的发生、发展也起着重要作用。许多流行病学研究都将COPD与肺癌的发展联系起来，而这与吸烟剂量无关。炎症反应和氧化应激可能是COPD易患肺癌的重要促发因素。有研究者发现，在50例肺癌组织中LTB4阳性表达率达50％以上，而正常组织则不足20％(P＜0.05)，且LTB4的表达与肺癌分化程度相关(均P＜0.05)。这些炎症物质和氧化应激产物会造成相关基因DNA的损伤，也会损害机体的正常免疫和抑癌机制，从而诱发癌症或肿瘤的发生。DNA损伤和细胞坏死，又会进一步活化炎症细胞，形成恶性的正反馈，疾病呈慢性持续进展性加重。炎症刺激致使支气管肺泡干细胞的生长、增殖，在COPD发展为肺癌的过程中起着重要的作用。COPD患者普遍存在小气道纤维化，而上皮-间质转化(epithelial-interstitialtransformation,EMT) 是其中的潜在机制之一，这也可能与气道上皮癌发展密切相关。有报道，一般只在多种肿瘤和干细胞等增殖细胞内高表达，与血管生成相关的S100A4蛋白在COPD患者和模型小鼠的肺血管均有表达。这一报道也说明了，COPD发生肺癌的风险较高。前期研究表明，COPD患者体内有HIF-1高表达，结肠癌、乳腺癌、肺癌等13种肿瘤组织中也均有HIF-1a过度表达。目前普遍认为HIF-1与肿瘤的发生、发展、转移及顶后等密切相关,是高度侵袭性疾病的一个生物标志。HIF-1 能通过上调代谢途径相关基因如EPO、转化生长因子 (transforminggrowthfactor,TGF)β等的表达，促进癌细胞的能量代谢与生长增殖。HIF-1可通过促进抑制凋亡相关基因的表达，抑制肿瘤细胞凋亡。HIF-1通过上调VEGF、VEGFR-1等，与血管生成素 (angiopoietin，Ang)、血小板生长因子(plateletgrowthfactor，PGF) 协同作用，诱导新生血管的形成。HIF-1上调基质金属蛋白酶 (matrixmetalloproteinase,MMP)的表达，使胞外基质分解及转移、侵袭能力增强。总之，HIF-1与肺癌的生长、浸润、转移及预后关系密切。HIF-1α的表达(特别是高表达)是发生肿瘤的预警信号。因在癌组织和转移灶中均有HIF-1α的过表达，HIF-1α似乎可作为肿瘤侵袭性强的一个标志。COPD存在长期缺氧，自然HIF-1α的表达会增多，也是COPD容易发生肿瘤的另一重要原因之一。

MPM研究进展及同COPD的相关性分析

现代医学角度

MPM近年来治疗研究虽有所进展，但其早期诊断仍存在困难、治疗效果仍不十分理想，五年生存率仍较低。前期文献报道，MPM与接触石棉有关。但有报道，约20％病例并未有明确石棉接触史，暴露于石棉者中也只有17％的人发展成为本病。Trisciuoglio等报道，50例MPM半数以上无明确石棉接触史。张仕富等也报道，21例MPM半数以上无明确石棉接触史。马五林等报道20例MPM仅1例存在石棉接触史。上述临床报道，都说明了很多MPM患者并无石棉接触史。越来越多的研究者开始认识到，MPM发病与石棉暴露可能并不存在必然联系。MPM虽是一种少见肿瘤，但2010年德国有1397人死于MPM。近年来，我国MPM病例也在逐年增多。国内外对其的研究也开始多起来。浙江省抗癌协会指出，我国MPM发病呈增长趋势，发病高峰预计即将到来，这将给社会带来巨大的经济负担。所以加快对该病的研究步伐，显得尤为重要。

此前一致认为，MPM发病同石棉暴露相关。但从上文论证中可知，石棉暴露并非MPM发病的直接危险因素，也不是唯一的致病因素。那么其可能的致病因素又是什么呢？发明人首次提出关于COPD与MPM 关系的假说：“COPD慢性炎症长期刺激可使胸膜间皮细胞恶性转化发生MPM”。理由如下：COPD易患MPM归纳起来主要有两大原因。一是炎症反应和氧化应激；二是HIF-1的过度表达。部分相关内容详“COPD 与肿瘤”部分，此处不再赘述。简单分析如下：在长期慢性炎症刺激的病变肺组织上，肺实质和间质细胞DNA易受氧化自由基损伤，极易发生恶性转化。此外，COPD长期处于慢性缺氧状态，与肿瘤发生密切相关的HIF-1存在高表达。所以，MPM的发病除与石棉接触、遗传因素等相关外，COPD将是其发病的最大促发因素。换而言之，COPD 引起MPM的机率可能要高过石棉暴露，COPD患者无疑是无石棉暴露并发MPM的最高危人群。在本研究中，就发现有47.2％的调查病例，存在胸膜局限性增厚。说明胸膜长期处于慢性炎症刺激中，损伤和增生修复明显。

传统医学角度(COPD病机变化规律与MPM)

恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma,MPM)男性发病率约为女性的5倍，大多数发生在壁层胸膜，多呈单侧生长，常表现为胸膜增厚(可达数厘米，以肺下部和横膈面最常见)和胸腔积液。起病隐匿，症状表现无特异性，最常见的症状为持续性胸痛和呼吸困难。胸痛常为大多数患者的首发症状，常为需要强效镇痛药的重度胸痛，胸痛不随胸水增多而缓减；约95％伴胸腔积液。

MPM属于传统医学“癥瘕”、“积聚”的范畴。《素问》中有段文字描述颇似MPM晚期的临床表现，

“大骨枯槁，大肉陷下，胸中气满，喘息不便，内痛引肩项……十月之内死。”中医认为，肿瘤类疾病的发生与脏腑功能失调、气血津液运行失常相关，气滞、血瘀、痰浊、热毒等相互作用而发病。COPD 具有反复发作的特点，疾病呈慢性进展性。COPD病程一般较长，肺脾肾之正气虚损严重，痰浊、瘀血、热邪壅盛，郁久成毒。从现代医学角度看，脏、壁两层胸膜形成一个封闭的、呈负压的间隙。胸膜腔内的负压是保证肺通气正常进行的必要条件，当负压消失，肺组织将发生萎陷。所以，胸膜也参与维持正常的呼吸功能。从中医角度分析， COPD肺气虚，主气功能降低，多伴有胸膜结构损伤。加之湿毒、瘀毒、热毒阻滞经络气血，久则便在胸膜聚而成癥瘕、肿块，最终在 COPD稳定期病机的基础上发生MPM。

MPM恶性程度极高、预后极差，对各种治疗均不敏感，近年来发病有增多趋势。积极探索、发现有效的MPM治疗方法及药物是减轻患者痛苦、改善预后、延长生存期所必需的。基于“COPD慢性炎症长期刺激可使胸膜间皮细胞恶性转化发生MPM”这一假说，发明人以 COPD病机规律为指导创制了本发明的药物。将本发明的药物应用MPM 细胞上，通过观察其对MPM的治疗作用，探索假说的可成立性，阐明 MPM的更多可能发病机制，在中医药领域寻找MPM新的有效治疗方药。同时进一步探究COPD病机规律的客观性、科学性和有效性。

在规律指导下发明人创制本发明的用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物，用以预防高危COPD患者(病程长、胸膜明显增厚、胸腔积液等)发生MPM和治疗COPD合并MPM。能全面针对慢阻肺-间皮瘤的病机规律特征，在大补元气(主要为肺之气阴、脾肾之气)、祛痰燥湿逐水、破血逐瘀、养阴清热和宣肺通腑功效的基础上，还具有较强的清解热毒、癌毒的作用。

因此，发明这种有大补元气、祛痰燥湿逐水、破血逐瘀、养阴清热和宣肺通腑的功效，还具有较强的清解热毒、癌毒的作用，用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物。本发明有大补元气、祛痰燥湿逐水、破血逐瘀、养阴清热和宣肺通腑的功效，还具有较强的清解热毒、癌毒的作用，用以预防 COPD并发间皮瘤的高危患者发生MPM和治疗COPD合并MPM。

本发明的技术方案：一种用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物，药用有效成分照重量组份计算，由炙黄芪10-30份，人参10-30 份，百合10-30份，地骨皮5-25份，炙麻黄10-30份，杏仁1-15份，白术10-30份，蛤蚧1-15份，浙贝母15-35份，瓜蒌仁15-35份，天花粉10-30份，茯苓15-35份，陈皮10-30份，桔梗10-30份，法半夏5-25份，炙甘草1-15份，泽泻1-15份，丹皮15-35份，赤芍 15-35份，白花蛇舌草10-30份，半枝莲10-30份，蟾皮1-5份，蜈蚣1-5份制成。

前述的用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物中，药用有效成分照重量组份计算，由炙黄芪20份，人参20份，百合20份，地骨皮15份，炙麻黄20份，杏仁10份，白术20份，蛤蚧10份，浙贝母25份，瓜蒌仁25份，天花粉20份，茯苓25份，陈皮20份，桔梗20份，法半夏15份，炙甘草10份，泽泻10份，丹皮25份，赤芍25份，白花蛇舌草20份，半枝莲20份，蟾皮3份，蜈蚣3份制成。

前述用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物的制备方法，取上述药物，与药物中可接受的辅料进行组合，或不加辅料，按照常规方法进行加工，制成相应的药物制剂。

前述用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物的制备方法中，所述药物制剂为口服制剂。

前述用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物的制备方法中，所述口服制剂为汤剂、颗粒剂或煎膏剂。

前述用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物的制备方法中，所述汤剂这样制备：按比例称取上述药物，混合，加入2-4倍量的水浸泡20-30min，随后砂锅中火煎煮至沸腾20-25min，趁热滤过药渣保留煎液A，向药渣中加入2-4倍量的水，煎煮15-20min，趁热滤过药渣保留煎液B，合并煎液A和煎液B，即得该汤剂。

前述用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物的制备方法中，所述颗粒剂这样制备：按比例称取上述药物，粉碎成最粗粉，加水浸泡 20-30min，煎煮三次，每次30min，合并煎液，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.30～1.35的稠膏，加入制成量33％的糊精、制成量 48％的蔗糖，混匀，制成颗粒，干燥，即得该颗粒剂。

前述用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物的制备方法中，所述煎膏剂这样制备：按比例称取炙黄芪、人参、百合、地骨皮、炙麻黄、杏仁、白术、蛤蚧、浙贝母、瓜蒌仁、天花粉、茯苓、陈皮、桔梗、法半夏、炙甘草、泽泻、丹皮、赤芍、白花蛇舌草、半枝莲、蟾皮及蜈蚣，粉碎成最粗粉，加水浸泡20-30min，煎煮3次，第一次用12倍量的水煎煮3小时，第二次用8倍量的水煎煮2小时，第三次用6倍量的水煎煮0.5小时，合并煎液，滤过，浓缩成60-65℃时相对密度为的1.10-1.15的浸膏，然后于浸膏中加入浸膏量50％的蜂蜜,加热混匀，浓缩至60-65℃时相对密度为1.2-1.25的浸膏，即得该煎膏剂。

本发明药用有效成分由炙黄芪、人参、百合、地骨皮、炙麻黄、杏仁、白术、蛤蚧、浙贝母、瓜蒌仁、天花粉、茯苓、陈皮、桔梗、法半夏、炙甘草、泽泻、丹皮、赤芍、白花蛇舌草、半枝莲、蟾皮及蜈蚣制成，其中炙黄芪，为黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.) Bunge.的炮制加工品；有益气补中的功效，用于气虚乏力，食少便溏。人参，为五加科植物人参Panaxginseng C.A.Mey.的干燥根，有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神的功效；用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，内热消渴，久病虚羸，惊悸失眠，阳痿宫冷；心力衰竭，心原性休克。百合，为百合科植物卷丹Lilium lancifolium Thunb.、百合Lilium brownii F.E.Brown var.viridulum Baker或细叶百合Lilium pumilum DC.的干燥肉质鳞叶；具有养阴润肺，清心安神之功效；常用于阴虚燥咳，劳嗽咳血，虚烦惊悸，失眠多梦，精神恍惚。地骨皮，是枸杞Lycium chinense Mill.的根皮，具有退热除蒸之效，凉血除蒸、清肺降火等功效；用于阴虚潮热、骨蒸盗汗、肺热咳嗽、咯血、衄血。内热消渴。炙麻黄，为麻黄科植物草麻黄、木贼麻黄或中麻黄的草质茎；有发汗散寒，宣肺平喘，利水消肿的功效；用于风寒感冒，胸闷喘咳，风水浮肿；支气管哮喘。杏仁，是蔷薇科植物山杏Prun.usarmemaca L.var. ansuMaxim.、西伯利亚杏Prunus sibiricaL.、东北杏Prunusmandshurica(Maxim.)Koehne或杏Prunus armeniacaL.的成熟种子；有止咳平喘，润肠通便的功效；用于风寒感冒、咳嗽气喘。白术，为菊科植物白术Atractylodesmacrocephala Koidz.的根，有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎的功效；用于脾虚食少，腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自汗，胎动不安。蛤蚧，为壁虎科动物蛤蚧 Gekko gecko Linnaeus的干燥体，具有补肺益肾，纳气定喘，助阳益精之功效；常用于肺肾不足，虚喘气促，劳嗽咳血，阳痿，遗精。浙贝母，为百合科植物浙贝母Fritillaria thunbergii Mig.的鳞茎，有清热散结、化痰止咳的功效；用于风热犯肺，痰火咳嗽，肺痈，乳痈，瘰疬，疮毒。瓜蒌仁，为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.或双边栝楼Trichosanthes rosthornii Harms的干燥成熟种子，有润肺化痰，滑肠通便的功效；用于咳燥痰粘，肠燥便秘。天花粉，为葫芦科植物双边栝楼Trichosanthes rosthornii Harms.或栝楼Trichosanthes kirilowiiMaxim.的根；具有清热泻火，生津止渴，排脓消肿的功效；用于治热病口渴、消渴、黄疸、肺燥咳血、痈肿、痔痿。茯苓，为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf 的干燥菌核，有利水渗湿，健脾，宁心的功效，用于水肿尿少，痰饮眩悸，脾虚食少，便溏泄泻，心神不安，惊悸失眠。陈皮，为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮，有理气健脾，燥湿化痰的功效；用于胸脘胀满，食少吐泻，咳嗽痰多。桔梗，为桔梗科植物桔梗Platycodon grandiflorum(Jacq.)A.DC. 的干燥根；有宣肺，利咽，祛痰，排脓的功效；用于咳嗽痰多，胸闷不畅，咽痛，音哑，肺痈吐脓，疮疡脓成不溃。法半夏，为半夏的炮制加工品，有燥湿化痰的功效；用于痰多咳喘，痰饮眩悸，风痰眩晕，痰厥头痛。炙甘草，为生药材豆科 植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘 草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根的炮制加工品，有补脾和胃，益气复脉的功效；用于治疗脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸动，脉结代。泽泻，为泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎，有利小便，清湿热的功效，用于小便不利，水肿胀满，泄泻尿少，痰饮眩晕，热淋涩痛；高血脂。丹皮，又名牡丹皮，为毛茛科植物牡丹 Paeoniasuffruticosa Andr.的干燥根皮；有清热凉血，活血化瘀的功效；用于温毒发斑，吐血衄血，夜热早凉，无汗骨蒸，经闭痛经，痈肿疮毒，跌扑伤痛。赤芍，为毛茛科植物芍药Paeonialactiflora Pall.或川赤芍Paeonia veitchii Lynch的干燥根；有清热凉血，散瘀止痛的功效；用于温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁胁痛，经闭痛经，症瘕腹痛，跌扑损伤，痈肿疮疡。白花蛇舌草，为茜草科耳草属植物白花蛇舌草Hedyotis diffusa Willd.[Oldenlandia diffusa(Willd.)Roxb.]的全草；有清热解毒，利尿消肿，活血止痛功效；用于肠痈(阑尾炎)，疮疖肿毒，湿热黄疸，小便不利等症；外用治疮疖痈肿，毒蛇咬伤。半枝莲，为唇形科植物半枝莲 Scutellaria barbata Don[S.rivularis Wall]的干燥全草；有清热解毒，化瘀利尿的功效。用于疔疮肿毒，咽喉肿痛，毒蛇咬伤，跌扑伤痛，水肿，黄疸。蟾皮，为蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍等的皮；主治功能为：清热解毒，利水消胀。治痈疽，肿毒，瘰疬，肿瘤，疳积腹胀，慢性气管炎。蜈蚣，为蜈蚣科动物少棘巨蜈蚣 Scolopendrasubspinipes mutilans L.Koch的干燥体；息风镇痉，功毒散结，通络止痛。用于小儿惊风，抽搐痉挛，中风口歪，半身不遂，破伤风，风湿顽痹，疮疡，瘰疬，毒蛇咬伤。

方解：基于“COPD慢性炎症长期刺激可使胸膜间皮细胞恶性转化发生MPM”的假说，我们认为在COPD病变的基础上，其疾病发展过程中极易并发MPM。基于COPD病机规律和前期对MPM的研究，认为MPM的发生多是在COPD稳定期的基础上发展而来，故其基础病机特征同COPD稳定期。虚为最首要的病机证素；痰(湿水饮)、瘀同时存在且居于次要位置；热表现为肺阴虚之虚热。MPM的发病病机，即在COPD稳定期病机的基础上出现正虚加重，痰(湿水饮)、瘀、热郁积于内、郁久成毒。正虚(肺气阴虚)，则可见消瘦、贫血、营养不良、骨骼肌(呼吸肌、运动肌)肌力下降等；痰(湿水饮)代谢障碍则表现为大量顽固性胸腔积液；毒邪阻滞胸胁经络，常表现为持续性固定性侧胸部剧烈疼痛。故MPM患者正气大虚、邪气壅盛，正不胜邪，病情发展迅速，极易恶化、死亡。治疗上以大补肺之气阴为主，辅以滋阴清热、补脾益肾。重用化痰除湿利水及活血化瘀之品。此外，再辅以宣肺通腑法纠正其宣肃失司。针对上述病机特点，加大炙黄芪、生晒参、百合、地骨皮用量以大补五脏之气，重在滋补肺阴、滋阴清热；加大四君子汤药物用量，共奏益气健脾之功；重用蛤蚧，补肺益肾定喘。保留降气化痰基础剂三拗汤，方中杏仁能降逆肺气、通腑下气、麻黄开宣肺气，体现宣肺通腑法。保留润肺清热化痰剂贝母瓜蒌散，增大方中二陈汤组成药物(除法半夏)用量，以增加燥湿祛痰之功；泽泻加量，合茯苓以利水渗湿、导热从小便而去。以上诸药相合，以起到祛痰燥湿利水的功效。以大剂量丹皮、赤芍活血化瘀、凉血清热。配以白花蛇舌草、半枝莲、蟾皮、蜈蚣以清解热毒、散解癌毒。前期诸多研究表明，清热解毒类药物在合理配合的基础上，有一定的抗癌作用，一定程度上改善生存质量。现代药理研究证实清热解毒类中药，具有一定抑制肿瘤细胞和病原微生物的作用。临床上，白花蛇舌草、半枝莲、蟾皮和蜈蚣，被广泛用于各种癌症、肿瘤。因此，慢阻肺-间皮瘤方能全面针对慢阻肺-间皮瘤的病机规律特征，在大补元气(主要为肺之气阴、脾肾之气)、祛痰燥湿逐水、破血逐瘀、养阴清热和宣肺通腑功效的基础上，还具有较强的清解热毒、癌毒的作用。

与现有技术相比，本发明有大补元气(肺之气阴、脾肾之气)、祛痰燥湿逐水、破血逐瘀、养阴清热和宣肺通腑的功效，还具有较强的清解热毒、癌毒的作用。用以预防COPD并发间皮瘤的高危患者(病程长、年龄大、胸膜增厚或结节、胸腔积液等)发生MPM和治疗COPD合并MPM。

实验例

1材料与方法

1.1实验细胞

人间皮瘤细胞(NCI-H2452，上海信裕生物)

1.2主要仪器与耗材

如下表所示：

1.3实验试剂

1640液体培养基(SH30809.01B)、双抗：sv30010(Hyclone) 和双抗(sv30010)，均由Hyclone生产；胰酶(+EDTA)(SH30042.01， Hyclone生产)；南美胎牛血清(FB15011，CLARK生产)；MTT(噻唑蓝：M-2128，biosharp生产)；二甲基亚砜(DMSO，Sigma生产)。

1.4药液配制

培养基、冻存液(内含10％DMSO)、磷酸盐缓冲液(Phosphatebuffersolution，PBS)和MTT配制均按SOP的方法和步骤进行。中药配制：将实施例1所制的药液过滤、离心除去杂质，置于-20℃(或-80℃)冷冻保存，临用时加含1％DMSO的蒸馏水稀释成 600μg/mL(中药药液浓度为170mg/ml)。西药配制：先将甲氨蝶呤 (分子量454.45)药片制成粉末，再经蒸馏制成溶液，以100μmol/L (45μg/mL)做为阳性对照。

1.5实验分组

实验共分四个组：空白对照组、DMSO组、中药组和西药组。对照组不作处理，DMSO组给以1％的DMSO，中药组给以600μg/ml的慢阻肺-间皮瘤方(药物组成、剂量及方义详见后文讨论部分)药液，西药组给以100μmol/L的甲氨蝶呤溶液，做为标准对照。

1.6细胞培养

分别按细胞复苏、细胞传代和细胞计数的SOP进行。

1.7 MTT检测

取对数生长期细胞，按MTT检测的SOP进行。每组设置5个重复，贴壁生长后加入各组药物培养12h、24h、48h。上述每个时间点，均加入0.5mg/mL MTT溶液200μL，继续培养4h(37℃，5％CO2)，再弃上清加入150μLDMSO，避光振荡10min。最后以酶标仪测定 492nm处的吸光度。

1.8细胞迁移检测

将细胞培养至融合约80％左右，换用无血清培养基饥饿处理24h。对单细胞悬液进行细胞计数，调节细胞密度至4×105/mL。 Transwell(插入式细胞培养器)下室加入600μL含10％血清的培养基。上室加入含不同浓度药物的100μL细胞悬液，孵箱培养6h。每组设3个重复。固定、染色后，擦弃上室底部膜表面细胞，显微镜下取2个随机视野观察计数下室膜表面细胞。

1.9统计学方法

利用SPSS24.0进行数据录入与分析。多个独立样本间的比较，满足方差分析条件时用单因素方差分析 (analysisofvariance,ANOVA)，采用SNK-q法进行均数间的两两比较；方差不齐时，采用非参数秩和检验。两独立样本间的比较采用t 检验，方差不齐时用Satterthwaite对自由度进行校正或采用非参数秩和检验。结果以均数±标准差表示，当P＜0.05时，差异有统计学意义。

2结果

2.1增殖抑制

药物作用12h、24h和48h后，与对照组、DMSO组相比，中药组和西药组OD值均降低(活细胞数减少)，差异有统计学意义(P＜0.05) (表1、图1)。中药组、西药组增殖抑制率明显高于对照组、DMSO 组，差异有统计学意义(P＜0.05)(表2、图2)。对照组和DMSO组细胞均匀分布，呈类圆形、形态较规则，细胞分布密度大。西药组，细胞形态不规则、局部颜色加深，分布密度变小；给药48h后，细胞明显皱缩变小。中药组给药12h后，活细胞数明显减少；24h后抑制作用达到最大；48h后抑制作用较前减弱(图3)

表1 各组三大时间点的OD值比较

Table 1 Comparison of OD values of each group after 12h and 48htreatment

注：与对照组相比，^aP＜0.05；与DMSO组相比，^bP＜0.05；与中药组相比，^cP＜0.05。

表2 DMSO组、西药组、中药组的增殖抑制率(％)^*比较

Table 2 Inhibition rate of drugs given to cells in different timepoints(％)

注*：增殖抑制率(％)＝1—实验组OD值/对照组OD值×100％

2.2迁移抑制

与对照组、DMSO组比较，中药组和西药组迁移细胞数明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)(P＜0.05)(表3、图4)。对照组、 DMSO组细胞有较多迁移，均匀、密布于视野，西药组和中药组迁移细胞明显减少，零星、散在分布于视野(如图5所示)。

表3各组迁移细胞数统计描述

Table 3 Comparison of the number of migrating cells in each group

结论：

从表1及图1，可以明显看出，在药物作用12h后，中药对细胞的抑制增殖作用非常接近标准对照甲氨蝶呤。在作用24h后，其抑制作用明显较前降低，但仍明显强于空白对照与DMSO对照。甲氨蝶呤(100mol/L)抑制MPM生长的作用，随培养时间增加，其抑制作用越来越强，最大作用出现在给药48h后。从图3可以明显看出，各作用时间点空白对照组和DMSO组细胞数变化不明显，形态规则、满布视野、分布较均匀。西药组细胞数变化明显，呈进行性减少，给药后48h细胞数最少，且明显皱缩变小。中药组细胞在给药24h后达到最少，48h较前有所增多，故其最大抑制作用出现在给药24h 后。从表3及图4可以看出，各组对MPM迁移的影响作用类似于抑制增殖的作用，也是西药组具有最大的抑制迁移作用，中药组抑制作用与之非常接近。从图5光镜下片可以清楚看到，两组迁移细胞数明显少于空白对照和DMSO对照，其迁移细胞零星、散在分布，与空白对照和DMSO对照的密集分布形成鲜明对比。

可知本发明的药物对MPM有较明显的抑制增殖和迁移的作用。

综上所述，本发明有大补元气(肺之气阴、脾肾之气)、祛痰燥湿逐水、破血逐瘀、养阴清热和宣肺通腑的功效，还具有较强的清解热毒、癌毒的作用；用以预防COPD并发间皮瘤的高危患者(病程长、年龄大、胸膜增厚或结节、胸腔积液等)发生MPM和治疗COPD合并MPM。

附图说明

图1是实验例2.1部分各组三大时间点的OD值变化线图

Fig.1 Levels of OD value of each group after 12h,24h and 48hexposure；

图2是实验例2.1部分DMSO组、西药组、中药组的增殖抑制率 (％)比较

Fig.2 Comparison of the average inhibition rate of each group indifferent time points；

图3是实验例2.1部分(①～③)给药各时间点各组细胞增殖情况镜下观(×100)

Fig.3(①～③)Cell proliferation in each group at different timepoints(×100)；

图4是实验例2.2部分各组迁移细胞数比

Fig.4 Comparison of the number of migrating cells in each group；

图5是实验例2.2部分各组细胞迁移情况镜下观(×100)。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。

实施例1：一种用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物，药用有效成分由炙黄芪20g，人参20g，百合20g，地骨皮15g，炙麻黄 20g，杏仁10g，白术20g，蛤蚧10g，浙贝母25g，瓜蒌仁25g，天花粉20g，茯苓25g，陈皮20g，桔梗20g，法半夏15g，炙甘草10g，泽泻10g，丹皮25g，赤芍25g，白花蛇舌草20g，半枝莲20g，蟾皮 3g，蜈蚣3g制成。

所述药物为汤剂，该汤剂这样制备：按比例称取上述药物，混合，加入3倍量的水浸泡25min，随后砂锅中火煎煮至沸腾22min，趁热滤过药渣保留煎液A，向药渣中加入3倍量的水，煎煮18min，趁热滤过药渣保留煎液B，合并煎液A和煎液B，，即得该汤剂。

用法用量：口服，200ml/次，3次/日，饭前半小时温服。

实施例2：一种用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物，药用有效成分由炙黄芪10kg，人参10kg，百合10kg，地骨皮5kg，炙麻黄10kg，杏仁1kg，白术10kg，蛤蚧1kg，浙贝母15kg，瓜蒌仁15kg，天花粉10kg，茯苓15kg，陈皮10kg，桔梗10kg，法半夏5kg，炙甘草1kg，泽泻1kg，丹皮15kg，赤芍15kg，白花蛇舌草10kg，半枝莲10kg，蟾皮1kg，蜈蚣1kg制成。

所述药物为颗粒剂，该颗粒剂这样制备：按比例称取上述药物，粉碎成最粗粉，加水浸泡25min，煎煮三次，每次30min，合并煎液，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.33的稠膏，加入制成量33％的糊精、制成量48％的蔗糖，混匀，制成颗粒，干燥，分装为50g/ 袋，即得该颗粒剂。

用法用量：饭前半小时温水冲服，每日2-3次，每次1袋。

实施例3：一种用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物，药用有效成分由炙黄芪30g，人参30g，百合30g，地骨皮25g，炙麻黄 30g，杏仁15g，白术30g，蛤蚧15g，浙贝母35g，瓜蒌仁35g，天花粉30g，茯苓35g，陈皮30g，桔梗30g，法半夏25g，炙甘草15g，泽泻15g，丹皮35g，赤芍35g，白花蛇舌草30g，半枝莲30g，蟾皮 5g，蜈蚣5g制成。

所述药物为煎膏剂，该煎膏剂这样制备：按比例称取上述药物，粉碎成最粗粉，加水浸泡25min，煎煮3次，第一次用12倍量的水煎煮3小时，第二次用8倍量的水煎煮2小时，第三次用6倍量的水煎煮0.5小时，合并煎液，滤过，浓缩成63℃时相对密度为的1.13 的浸膏，然后于浸膏中加入浸膏量50％的蜂蜜,加热混匀，浓缩至3℃时相对密度为1.22的浸膏，即得该煎膏剂。

用法用量：饭前半小时温水冲服，每日2-3次，每次10-30g。

Claims (8)

1.一种用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物，其特征在于：药用有效成分照重量组份计算，由炙黄芪10-30份，人参10-30份，百合10-30份，地骨皮5-25份，炙麻黄10-30份，杏仁1-15份，白术10-30份，蛤蚧1-15份，浙贝母15-35份，瓜蒌仁15-35份，天花粉10-30份，茯苓15-35份，陈皮10-30份，桔梗10-30份，法半夏5-25份，炙甘草1-15份，泽泻1-15份，丹皮15-35份，赤芍15-35份，白花蛇舌草10-30份，半枝莲10-30份，蟾皮1-5份，蜈蚣1-5份制成。

2.根据权利要求1所述的用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物，其特征在于：药用有效成分照重量组份计算，由炙黄芪20份，人参20份，百合20份，地骨皮15份，炙麻黄20份，杏仁10份，白术20份，蛤蚧10份，浙贝母25份，瓜蒌仁25份，天花粉20份，茯苓25份，陈皮20份，桔梗20份，法半夏15份，炙甘草10份，泽泻10份，丹皮25份，赤芍25份，白花蛇舌草20份，半枝莲20份，蟾皮3份，蜈蚣3份制成。

3.一种如权利要求1或2所述用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物的制备方法，其特征在于：取上述药物，与药物中可接受的辅料进行组合，或不加辅料，按照常规方法进行加工，制成相应的药物制剂。

4.根据权利要求3所述用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物的制备方法，其特征在于：所述药物制剂为口服制剂。

5.根据权利要求4所述用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物的制备方法，其特征在于：所述口服制剂为汤剂、颗粒剂或煎膏剂。

6.根据权利要求5所述用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物的制备方法，其特征在于：所述汤剂这样制备：按比例称取上述药物，混合，加入2-4倍量的水浸泡20-30min，随后砂锅中火煎煮至沸腾20-25min，趁热滤过药渣保留煎液A，向药渣中加入2-4倍量的水，煎煮15-20min，趁热滤过药渣保留煎液B，合并煎液A和煎液B，即得该汤剂。

7.根据权利要求5所述用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物的制备方法，其特征在于：所述颗粒剂这样制备：按比例称取上述药物，粉碎成最粗粉，加水浸泡20-30min，煎煮三次，每次30min，合并煎液，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.30～1.35的稠膏，加入制成量33%的糊精、制成量48%的蔗糖，混匀，制成颗粒，干燥，即得该颗粒剂。

8.根据权利要求5所述用于慢性阻塞性肺疾病并发间皮瘤的药物的制备方法，其特征在于：所述煎膏剂这样制备：按比例称取上述药物，粉碎成最粗粉，加水浸泡20-30min，煎煮3次，第一次用12倍量的水煎煮3小时，第二次用8倍量的水煎煮2小时，第三次用6倍量的水煎煮0.5小时，合并煎液，滤过，浓缩成60-65℃时相对密度为的1.10-1.15的浸膏，然后于浸膏中加入浸膏量50％的蜂蜜,加热混匀，浓缩至60-65℃时相对密度为1.2-1.25的浸膏，即得该煎膏剂。