CN109700761B - 一种肿瘤靶向自运载体系及其制备方法、应用 - Google Patents
一种肿瘤靶向自运载体系及其制备方法、应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种肿瘤靶向自运载体系及其制备方法、应用,属于生物医药,该肿瘤靶向性自运载体系以两亲性细胞凋亡肽形成的纳米胶束为载体,在纳米胶束内包载疏水阿霉素,并在纳米胶束外结合透明质酸。本发明还提供了上述肿瘤靶向自运载体系的制备方法:S1.合成两亲性细胞凋亡肽;S2.用两亲性细胞凋亡肽和疏水阿霉素制备细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束溶液;S3.将透明质酸溶于水,滴加至细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束溶液中,静置,透析后离心并取上清液,得到透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束溶液,即为肿瘤靶向自运载体系水溶液。本发明的肿瘤靶向自运载体系制备简单,载药量高,且具有肿瘤靶向性优异和药物利用率高等特性。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域,具体涉及一种肿瘤靶向自运载体系及其制备方法和应用。
背景技术
肿瘤疾病已成为威胁人类健康的重大疾病之一,且发病率逐年攀升,并呈现出高发病率、高死亡率和年轻化的趋势,实现肿瘤疾病的有效治疗迫在眉睫。为了有效治疗肿瘤疾病,在过去十几年中,构建智能精巧的药物载体一直备受关注,然而常规药物载体的载药量都不甚理想,且普遍低于10%,为了实现好的治疗效果,需要在治疗过程中提高药物给药剂量,而药物给药剂量的提升往往会对患者造成严重的毒副作用,因此,亟需构建一种具有肿瘤靶向能力的高载药量的药物运载体系以提高肿瘤治疗的效率,降低毒副作用,最终实现肿瘤的精准治疗。
以药物自身作为载体的自运载体系不需要额外的载体,这种以药物自身作为载体的自运载体系可有效保障药物的高包载量,此外,不同治疗活性物质在自运载体系中的结合可以实现对肿瘤的联合治疗。细胞凋亡肽是一种具有α-螺旋结构的多肽,也是线粒体靶向肽中研究较多的多肽之一,该肽不仅能够靶向线粒体,而且可以通过破坏线粒体膜导致线粒体功能紊乱,诱导细胞进入程序性凋亡。由于具有诱导细胞凋亡的能力,细胞凋亡肽可以作为抗肿瘤试剂应用到肿瘤治疗中。但是细胞凋亡肽不具有主动靶向能力,仅依靠被动靶向富集至肿瘤部位的效率较低,导致不理想的肿瘤治疗效果。因此,构建载药量高且能够靶向肿瘤的药物载体对实现肿瘤疾病安全、高效的治疗尤为重要。
发明内容
针对现有技术中存在的上述问题,本发明的目的在于提供一种具有肿瘤靶向能力的自运载体系,该体系不仅具有超高的药物包载量,而且能够特异性的靶向肿瘤组织,降低对正常组织的毒副作用,最终通过两种活性组分高效精准的杀死肿瘤细胞。
本发明的另一目的在于提供该肿瘤靶向自运载体系的制备方法。
本发明的另一目的在于提供该肿瘤靶向自运载体系的应用。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下:一种肿瘤靶向自运载体系,以两亲性细胞凋亡肽形成的纳米胶束为载体,在纳米胶束内包载疏水阿霉素,并在纳米胶束外结合透明质酸。
在上述技术方案的基础上,本发明还可以做如下改进。
进一步,所述两亲性细胞凋亡肽为D型赖氨酸-亮氨酸-丙氨酸-赖氨酸-亮氨酸-丙氨酸-赖氨酸-赖氨酸-亮氨酸-丙氨酸-赖氨酸-亮氨酸-丙氨酸-赖氨酸-甘氨酸-半胱氨酸-赖氨酸(N-芴甲氧羰基)2(KLAKLAKKLAKLAKGCK(Fmoc)2),其化学结构式如下所示:
在细胞凋亡肽的一端增加疏水基团,可以增加细胞凋亡肽的疏水性,使该细胞凋亡肽的两亲性效果更明显,更利于形成胶束。
进一步,所述肿瘤靶向自运载体系的水合粒径为150~200nm,可以稳定的分散在水中。
进一步,所述疏水阿霉素由盐酸阿霉素脱盐得到。
本发明的原理为:利用亲疏水作用将疏水阿霉素包裹在两亲性细胞凋亡肽形成的纳米胶束内部,由于两亲性细胞凋亡肽表面带有正电荷,通过静电作用将带有负电荷的透明质酸有效包覆在两亲性细胞凋亡肽形成的纳米胶束表面。由于细胞凋亡肽自身具有诱导细胞凋亡的能力,以其作为药物载体与肿瘤治疗药物疏水阿霉素形成自运载体系,不依赖外在载体可实现高药物包载量,另外透明质酸可以有效延长自运载体系在血液循环中的时间,并且可以和肿瘤细胞表面过度表达的CD44受体特异性结合,赋予自运载体系肿瘤靶向能力,使得本发明的自运载体系具有高循环稳定性、良好的细胞靶向能力和高的药物包封率。
本发明还提供了上述肿瘤靶向自运载体系的制备方法,包括以下步骤:
S1.合成所述两亲性细胞凋亡肽;
S2.使所述两亲性细胞凋亡肽和疏水阿霉素溶于二甲亚砜中,避光搅拌均匀,加水搅拌并透析,透析后溶液离心并取上清即为细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束溶液;
S3.将透明质酸溶于水,并将透明质酸溶液滴加至所述细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束溶液中,静置,然后透析,透析后离心并取上清液,得到透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束溶液,即为所述肿瘤靶向自运载体系水溶液。
进一步,所述透明质酸、所述两亲性细胞凋亡肽与所述疏水阿霉素的质量比为1~3:8:2。
进一步,步骤S2中使所述两亲性细胞凋亡肽和疏水阿霉素溶于二甲亚砜中的具体步骤为:将盐酸阿霉素溶于二甲亚砜中,加入三乙胺搅拌除去盐酸盐得到疏水阿霉素溶液,然后加入所述两亲性细胞凋亡肽,所述两亲性细胞凋亡肽和疏水阿霉素在二甲亚砜中的总浓度为5~10mg/mL。
进一步,步骤S2中,加入的水与二甲亚砜的体积比为1:1~2,加水后搅拌的时间为1~2h。
进一步,步骤3中所述透明质酸溶液中透明质酸的浓度为0.5~1mg/mL,静置的时间为0.5~1h。
本发明的制备方法简单,操作便利,可重复性强,制备的肿瘤靶向自运载体系载药量高,粒径均匀,水合粒径均在150~200nm,干态粒径在30~50nm之间,能稳定的分散在水中。
本发明还提供了上述肿瘤靶向自运载体系在制备抗肿瘤药物中的应用。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
1)本发明的肿瘤靶向自运载体系中治疗试剂载药量高达80%,远远高于常规药物载体10%的载药量,对药物载药量的提升具有重要的应用价值。
2)本发明的肿瘤靶向自运载体系能充分利用透明质酸的负电性,增强体系稳定性,延长其血液循环时间,提高其静脉注射给药过程中的治疗效果。
3)本发明的肿瘤靶向自运载体系能充分利用透明质酸的肿瘤靶向性,将药物有效递送至肿瘤组织,实现药物载体的靶向给药以及肿瘤的精准治疗。
4)本发明的肿瘤靶向自运载体系能通过双重治疗组分的协同作用,有效杀死肿瘤细胞,提高药效。
附图说明
图1为本发明两亲性细胞凋亡肽的电喷雾质谱图;
图2为本发明肿瘤靶向自运载体系的水合粒径图;
图3为本发明肿瘤靶向自运载体系的透射电镜图;
图4为本发明肿瘤靶向自运载体系药物累积释放图;
图5为肿瘤靶向自运载体系与不同细胞共培养后的定量内吞分析;
图6为肿瘤细胞4T1中的细胞存活率;
图7为正常细胞COS7中的细胞存活率;
图8为4T1荷瘤小鼠尾静脉注射材料2h后体内分布情况;
图9为注射样本后相对肿瘤体积变化曲线;
图10为注射样本后小鼠体重变化曲线;
图11为注射样本15天后剥离肿瘤实物图;
图12为注射样本15天后的肿瘤重量图。
具体实施方式
以下结合附图及具体实施例对本发明的原理和特征进行描述,所举实例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。
细胞凋亡肽是一种α螺旋结构多肽,其氨基酸序列为(KLAKLAK)2,它可以破坏线粒体膜和诱导依赖线粒体的细胞凋亡,而在细胞外保持相对无毒,而两亲性的细胞凋亡肽可以通过亲疏水作用有效包载药物,构建细胞凋亡肽/药物的自运载体系。
透明质酸可以与肿瘤细胞表面过度表达的CD44受体特异性结合。
为了提高药物载体的药物包载量,并且特异性靶向肿瘤组织,发明人制备了一种肿瘤靶向自运载体系,以两亲性细胞凋亡肽形成的纳米胶束为载体,在纳米胶束内包载疏水阿霉素,并在纳米胶束外结合透明质酸。
作为优选地,所述两亲性细胞凋亡肽为D型赖氨酸-亮氨酸-丙氨酸-赖氨酸-亮氨酸-丙氨酸-赖氨酸-赖氨酸-亮氨酸-丙氨酸-赖氨酸-亮氨酸-丙氨酸-甘氨酸-半胱氨酸-赖氨酸(N-芴甲氧羰基)2(KLAKLAKKLAKLAKGCK(Fmoc)2),其化学结构式如下所示:
作为优选的,所述肿瘤靶向自运载体系的水合粒径为150~200nm。
作为优选的,所述疏水阿霉素由盐酸阿霉素脱盐得到。
实施例1肿瘤靶向自运载体系的合成
(1)两亲性细胞凋亡肽的合成
两亲性细胞凋亡肽为在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的最后一个赖氨酸上添加两个N-芴甲氧羰基形成,其为D型赖氨酸-亮氨酸-丙氨酸-赖氨酸-亮氨酸-丙氨酸-赖氨酸-赖氨酸-亮氨酸-丙氨酸-赖氨酸-亮氨酸-丙氨酸-赖氨酸-甘氨酸-半胱氨酸-赖氨酸(N-芴甲氧羰基)2(KLAKLAKKLAKLAKGCK(Fmoc)2)。
本领域技术人员可以采用固相合成法或液相合成法合成上述两亲性细胞凋亡肽,在本申请中,发明人以用固相合成法合成,主要步骤如下:
1)称取1g 2-氯-三苯甲基氯树脂(1.20mmol/g)于干净的固相合成柱中,并用10mLN,N-二甲基甲酰胺溶胀树脂1.5h,之后抽滤除去合成柱中的N,N-二甲基甲酰胺。称取一个氨基被N-芴甲氧羰基保护另一个氨基被叔丁氧羰基保护的赖氨酸(树脂活性氯摩尔量的0.5倍)溶于10mLN,N-二甲基甲酰胺中,并加入N,N-二异丙基乙胺(氨基酸摩尔量的6倍)活化5min,之后加入反应柱中并在室温下搅拌1.5h。抽滤除去溶液并用N,N-二甲基甲酰胺洗涤树脂3次,随后抽干。将溶有3mL甲醇及2mL N,N-二异丙基乙胺的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液加入合成柱,室温搅拌0.5h对未反应完全的活性氯进行封端处理。
2)用N,N-二甲基甲酰胺洗涤树脂3次,并接入下一个氨基酸,后续氨基酸的接入方法如下:
①用20%的哌啶/N,N-二甲基甲酰胺(v/v)溶液在室温下与树脂混合搅拌10min,抽去溶液后重新加入20%的哌啶/N,N-二甲基甲酰胺(v/v)溶液,再次搅拌10min以脱除N-芴甲氧羰基保护基。用N,N-二甲基甲酰胺洗涤树脂4次。
②茚三酮/甲醇溶液验色:取少量接有氨基酸的树脂于装有茚三酮/甲醇溶液(10mg/mL,0.5mL)的试管中,在沸腾的条件下反应2min,观察溶液颜色。若溶液颜色变蓝或树脂颜色变深,则说明N-芴甲氧羰基保护基团已经被成功脱除,下一步缩合反应可继续进行。
③将过量氨基酸、1-羟基苯并三氮唑和苯并三氮唑-N,N,N’N’-四甲基脲六氟磷酸盐(树脂上氨基酸摩尔量的3倍)溶于10mLN,N-二甲基甲酰胺中,加入1mLN,N-二异丙基乙胺活化1~2min转移到合成柱中,并于室温下搅拌3h。抽去反应溶液,并用N,N-二甲基甲酰胺洗涤树脂3次
④茚三酮/甲醇溶液验色:若茚三酮溶液变蓝或树脂颜色加深则说明氨基酸未缩合完全,重复第三步操作直至验色不变色。反之,若溶液及树脂颜色均未发生变化,则认为氨基酸缩合完全。
3)依次重复以上步骤至序列中所有的氨基酸合成完全。
4)依次用N,N-二甲基甲酰胺、甲醇和二氯甲烷各洗涤树脂3次,随后在真空干燥箱中真空干燥24h。
5)将10mL含有三氟乙酸(95%)和水(5%)的切落剂加入到合成柱中,室温搅拌1.5h。收集滤液,并用减压旋蒸浓缩滤液至3~5mL,最后将浓缩液滴加至冰的无水乙醚中,静置后,离心收集所得沉淀即为所需的细胞凋亡肽产物。
该细胞凋亡肽电喷雾质谱如图1所示,其理论分子质量为2255.33,电喷雾质谱检测到一重电荷峰2256.22,说明多肽的正确合成。
(2)肿瘤靶向自运载体系的合成
1)将抗癌药物盐酸阿霉素溶于二甲亚砜中,加入三倍当量三乙胺去除盐酸盐以获得疏水阿霉素。
2)将40mg细胞凋亡肽和10mg疏水阿霉素溶于4mL二甲亚砜中搅拌2h,之后补加2mL水继续搅拌1h,随后对水透析(MWCO:2000Da),48h后离心去除沉淀的自由药物,收集到的上清液即为细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束溶液。
3)将4mg透明质酸溶于水中,缓慢滴加至含有20mg细胞凋亡肽/阿霉素胶束的水溶液中,37℃孵育30min后对水透析(MWCO:35000Da)去除未包裹上的HA,离心后上清溶液即为透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束溶液,即得到所述肿瘤靶向自运载体系水溶液。
(3)肿瘤靶向自运载体系合成条件优化
分别按照两亲性细胞凋亡肽与疏水阿霉素的投料比为9:1、8:2和7:3制备细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束溶液,3组纳米胶束中阿霉素的载药量分别为11.3%、22.8%和23.1%,由于细胞凋亡肽与阿霉素的投料比为7:3时,药物投料比的增加对阿霉素载药量没有明显提升,而投料比为9:1时阿霉素载药量偏低,综合考虑阿霉素载药量和药物利用率后,后续实验选用两亲性细胞凋亡肽与阿霉素的投料比为8:2制备纳米胶束。
按照两亲性细胞凋亡肽与疏水阿霉素的投料比为8:2制备细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束溶液,并分别按照透明质酸与细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束的投料比1:10、2:10和3:10制备肿瘤靶向自运载体系,3组肿瘤靶向自运载体系的水合粒径分别为157.6nm、162.3nm和180.1nm,表面电势分别为+20.6mV、-18.6mV和-21.2mV,投料比为1:10时,纳米胶束表面正电荷未被透明质酸完全屏蔽,在血液循环过程中容易被清除,而投料比为2:10和3:10的两组纳米胶束表面正电荷完全被透明质酸所屏蔽,可以有效延长体系的血液循环时间。在保证该自运载体系具有肿瘤靶向能力和循环稳定性的前提下,投料比为2:10时体系具有更高的治疗试剂包载量,下述实施例中选用透明质酸与细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束的投料比为2:10制备肿瘤靶向自运载体系,水合粒径均在150~200nm范围内(如图2),干态电镜图尺寸在30~50nm范围内(如图3),电势在-18~-20mV范围内,能稳定分散在水中。
试验例1肿瘤靶向自运载体系载药量和体外药物累积释放行为测定
(1)肿瘤靶向自运载体系载药量
将实施例1透明质酸、两亲性细胞凋亡肽和阿霉素按照投料比为2:8:2制备得到的透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素肿瘤靶向自运载体系冻干,取1mg溶于1mL二甲亚砜中,通过阿霉素在二甲亚砜中的标准曲线(激发波长为488nm,狭缝宽度为10×10nm)计算肿瘤靶向自运载体系中阿霉素的含量,利用两亲性细胞凋亡肽的紫外标准曲线计算肿瘤靶向自运载体系中两亲性细胞凋亡肽的含量,并计算肿瘤靶向自运载体系的载药量(LE),载药量(LE)=(材料中包载的药物质量/材料的质量)×100%。
经测试,实施例1制备的肿瘤靶向自运载体系中阿霉素的载药量为18.2%,细胞凋亡肽载药量为61.8%,该肿瘤靶向自运载体系治疗试剂的总载药量为80%。
(2)肿瘤靶向自运载体系体外药物累积释放行为
分别在pH为7.4和5.0的条件下测定肿瘤靶向自运载体系的体外释药行为。
将0.5mg的肿瘤靶向自运载体系用水补加到1mL,之后将溶液转至透析袋(MWCO:2000Da)中并分别浸没在pH为7.4或5.0的缓冲液中,37℃水浴震摇并检测其药物释放行为。释放出的阿霉素含量通过荧光分光光度计检测(激发波长为488nm,狭缝宽度为10×10nm),最终参照阿霉素的标准曲线计算出累积释放量,累积释放量(%)=某时刻已经释放的药物量/材料总药物量。
另外,分别在pH为7.4和5.0并且存在透明质酸酶的条件下测定肿瘤靶向自运载体系的体外释药行为,透明质酸酶的浓度为5mM,肿瘤靶向自运载体系的累积释放量如图4所示,72h后pH=7.4条件下靶向自运载体系仅释放出27.2%的阿霉素,而pH=5.0条件下可以释放48.6%。当在透明质酸酶存在的条件下,阿霉素在pH=7.4和5.0条件下的释放量增至41.1%和70.6%,证明本发明的肿瘤靶向自运载体系在中性条件下药物泄露较少,而在肿瘤细胞内酸性有透明质酸酶存在的环境下可以有效释放药物。
试验例2肿瘤靶向自运载体系的细胞选择性摄取
将肿瘤细胞4T1和正常细胞COS7分别接种于六孔板中(6×105细胞/孔),肿瘤细胞4T1和正常细胞COS7分别设置4组,培养24小时后,分别用新的培养基替换旧的培养基,其中空白对照组新的培养基中不加任何物质,另外三组新的培养基中分别加入阿霉素、细胞凋亡肽/阿霉素以及透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素,使3组中阿霉素的浓度均为1μg/mL,将4组细胞继续培养4h,随后将细胞进行消化,PBS重悬细胞后用流式细胞仪对细胞对阿霉素的摄取情况进行定量检测,结果如图5所示,透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素肿瘤靶向自运载体系在肿瘤细胞4T1中的摄取比例为73.4%,高于自由阿霉素和没有靶向能力的细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束。而在正常细胞COS7中,细胞摄取趋势逆转,透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素肿瘤靶向自运载体系的细胞摄取量少于自由阿霉素和细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束。更重要的是4T1中透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素肿瘤靶向自运载体系的细胞摄取远高正常细胞COS7中的摄取。这些结果证明,包裹有透明质酸壳层的靶向自运载体系能特异性的被肿瘤细胞识别,增强肿瘤细胞的细胞内化,并有效减少正常细胞的摄取。
试验例3肿瘤靶向自运载体系的细胞毒性
将肿瘤细胞4T1和正常细胞COS7分别按照6000细胞/孔的密度接种到96孔板上,分别向不同组的肿瘤细胞4T1中加入阿霉素、细胞凋亡肽/阿霉素和透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素共培养4h,其中每组中阿霉素的浓度设置不同的梯度,分别为0μg/mL、0.2μg/mL、0.3μg/mL、0.4μg/mL、0.7μg/mL、1.0μg/mL、1.5μg/mL、2.2μg/mL、3.3μg/mL、5.0μg/mL,设置空白对照组,共培养4h后换新鲜培养基继续培养,44h后向每个孔中加入20μL的噻唑蓝(5mg/mL)溶液。37℃下孵育4h,去除上清液并向每孔中加入200μL二甲亚砜,震荡均匀后用酶标仪(Model 550,Bio-Rad,美国)检测96孔板中每个孔在570nm处的吸光度并计算细胞的相对存活率。细胞的相对存活率(%)=(OD570(样品组)/OD570(无材料的对照组))×100%。
最终结果如图6和图7所示,在肿瘤细胞4T1中,细胞凋亡肽/阿霉素和透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素均能抑制肿瘤细胞的生长,且生长抑制能力高于阿霉素。而在正常细胞COS7中,透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素对细胞的杀伤能力明显低于细胞凋亡肽/阿霉素和自由阿霉素。这一结果证实了透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素肿瘤靶向自运载体系能有效杀死肿瘤细胞,而对正常细胞的生长抑制作用较小。
试验例4肿瘤靶向自运载体系在小鼠体内的靶向性检测
构建4T1荷瘤小鼠模型,当肿瘤长至150mm3时,通过尾静脉注射的方式对小鼠注射肿瘤靶向自运载体系,在2h后对小鼠进行安乐死,收集肿瘤以及主要器官进行体外荧光成像。结果如图8所示,通过尾静脉注射后,肿瘤靶向自运载体系能在肿瘤组织有效富集,这一结果证实了透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素肿瘤靶向自运载体具有良好的肿瘤靶向能力。
试验例5肿瘤靶向自运载体系对体内肿瘤的治疗效果
构建4T1荷瘤小鼠模型,并将荷瘤小鼠随机分成四组(每组6只)。当肿瘤体积长至150mm3时,通过尾静脉注射分别将PBS、阿霉素、透明质酸/细胞凋亡肽、细胞凋亡肽/阿霉素和透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素注射到小鼠体内(阿霉素的剂量为每只老鼠2mg/kg,细胞凋亡肽的剂量为6.8mg/kg),每两天注射一次,每组累计注射三次后停止注射。每天对小鼠的体重和肿瘤大小进行测量,肿瘤体积由以下公式进行计算V=W2×L/2,其中W和L分别代表肿瘤的最短和最长的直径。治疗周期达到15天时,对小鼠进行安乐死,将肿瘤剥离并拍照称重。
经测试,结果如图9所示,透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素肿瘤靶向自运载体系治疗的小鼠肿瘤生长受到明显抑制,15天后肿瘤体积仅为初始体积0.36,远远优于其他组的抑制效果。与此同时,小鼠重量并没有出现大幅变化,说明该肿瘤靶向自运载体系对小鼠没有明显毒副作用(图10)。肿瘤实体照片体积(图11)和肿瘤重量(图12)变化进一步直观说明肿瘤靶向自运载体系具有优异的肿瘤生长抑制作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 武汉工程大学
<120> 一种肿瘤靶向自运载体系及其制备方法、应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Lys Leu Ala Lys Leu Ala Lys Lys Leu Ala Lys Leu Ala Lys Gly Cys
1 5 10 15
Lys
Claims (9)
2.根据权利要求1所述的一种肿瘤靶向自运载体系,其特征在于,所述肿瘤靶向自运载体系的水合粒径为150~200nm。
3.根据权利要求1所述的一种肿瘤靶向自运载体系,其特征在于,所述疏水阿霉素由盐酸阿霉素脱盐得到。
4.一种如权利要求1-3任一项所述的肿瘤靶向自运载体系的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1.合成所述两亲性细胞凋亡肽;
S2.使所述两亲性细胞凋亡肽和疏水阿霉素溶于二甲亚砜中,避光搅拌均匀,加水搅拌并透析,透析后溶液离心并取上清即为细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束溶液;
S3.将透明质酸溶于水,并将透明质酸溶液滴加至所述细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束溶液中,静置,然后透析,透析后离心并取上清液,得到透明质酸/细胞凋亡肽/阿霉素纳米胶束溶液,即为所述肿瘤靶向自运载体系水溶液。
5.根据权利要求4所述的肿瘤靶向自运载体系的制备方法,其特征在于,所述透明质酸、所述两亲性细胞凋亡肽与所述疏水阿霉素的质量比为1~3:8:2。
6.根据权利要求5所述的肿瘤靶向自运载体系的制备方法,其特征在于,步骤S2中使所述两亲性细胞凋亡肽和疏水阿霉素溶于二甲亚砜中的具体步骤为:将盐酸阿霉素溶于二甲亚砜中,加入三乙胺搅拌除去盐酸盐得到疏水阿霉素溶液,然后加入所述两亲性细胞凋亡肽,所述两亲性细胞凋亡肽和疏水阿霉素在二甲亚砜中的总浓度为5~10mg/mL。
7.根据权利要求5所述的肿瘤靶向自运载体系的制备方法,其特征在于,步骤S2中,加入的水与二甲亚砜的体积比为1:1~2,加水后搅拌的时间为1~2h。
8.根据权利要求5所述的肿瘤靶向自运载体系的制备方法,其特征在于,步骤3中所述透明质酸溶液中透明质酸的浓度为0.5~1mg/mL,静置的时间为0.5~1h。
9.一种如权利要求1-3任一项所述的肿瘤靶向自运载体系在制备抗肿瘤药物中的应用。
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"基于枝化多肽的多功能药物递送系统用于肿瘤细胞核的精准靶向治疗";刘畅等;《高分子学报》;20180511(第6期);全文 * |
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