CN109689047A - 用于治疗癌症的药物组合 - Google Patents

Abstract

本文公开内容提供了用于治疗癌症（诸如白血病、淋巴瘤和三重阴性的乳腺癌）的联合疗法。本发明提供了CDK抑制剂（例如，由式I表示的CDK抑制剂）或其药学上可接受的盐与BCL‑2抑制剂或蛋白酶体抑制剂一起用于治疗癌症的联合疗法。

Description

用于治疗癌症的药物组合

交叉引用

本申请要求2016年3月28日提交的美国临时专利申请系列号62/314,356的优先权，其整个内容通过引用并入本文。

背景

众多癌症相关的治疗剂在任何特定时间处于I期或II期临床试验和评价下；但是，它们中的大多数将不会前进。实际上，据估测，超过90%的癌症相关的治疗剂将在I或II期临床试验评价中失败。在III期试验中的失败率是几乎50%，并且从发现至III期试验的新药开发的成本是在8亿美元至17亿美元之间，且可能需要8-10年。

另外，许多患者甚至没有对已经被证实有效的标准药物做出应答。由于当前没有被充分理解或容易评价的原因，各个患者可能不会对标准药物疗法做出应答。在某些情况下，与单独施用的药物相比，药物组合的施用可能对于治疗癌症而言是更有效的。这些药物组合可以协同地起作用以增强药物的抗癌活性。在某些情况下，当与另外的药物疗法组合时，不是特别有效的药物可能找到新的和意外的应用。

发明概述

在一个方面，本发明提供了一种治疗血癌的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的由式I表示的CDK抑制剂或其药学上可接受的盐和治疗有效量的BCL-2抑制剂：

其中：

R₁是任选地被取代的苯基；

R₂和R₃各自独立地选自羟基和OR₈，其中R₈是任选地被取代的C₁-C₁₀-烷基；

R₄是任选地被取代的C₁-C₄-烷基；且

R₉是氢或任选地被取代的C₁-C₄-烷基。

在某些方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的由式I表示的CDK抑制剂或其药学上可接受的盐和治疗有效量的蛋白酶体抑制剂：

其中：

R₁是任选地被取代的苯基；

R₂和R₃各自独立地选自羟基和OR₈，其中R₈是任选地被取代的C₁-C₁₀-烷基；

R₄是任选地被取代的C₁-C₄-烷基；且

R₉是氢或任选地被取代的C₁-C₄-烷基。在某些实施方案中，所述癌症选自血癌和三重阴性的乳腺癌(TNBC)。

在某些实施方案中，所述式I的化合物由式Ia表示：

, 或其药学上可接受的盐。

在某些关于式I或Ia的化合物或盐的实施方案中，R₁任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自羟基、氰基、卤素、氨基、C₁-C₄-烷基、C₁-C₄-烷氧基、C₁-C₄-羟基烷基、C₁-C₄-卤代烷基和硝基。在某些实施方案中，R₁被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素和C₁-C₄-卤代烷基。在某些实施方案中，R₁是2-氯-4-三氟甲基苯基。

在某些关于式I或Ia的化合物或盐的实施方案中，R₂和R₃各自独立地选自羟基和OR₈，其中R₈是任选地被一个或多个取代基取代的C₁-C₁₀-烷基，所述取代基独立地选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。在某些实施方案中，R₂和R₃各自是羟基。

在某些关于式I或Ia的化合物或盐的实施方案中，R₄是被一个或多个取代基取代的C₁-C₄-烷基，所述取代基选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。在某些实施方案中，R₄是被一个或多个取代基取代的C₁-C₄-烷基，所述取代基选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。在某些实施方案中，R₄是2-羟基甲基。

在某些关于式I或Ia的化合物或盐的实施方案中，R₉是任选地被羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基取代的C₁-C₄-烷基。在某些实施方案中，R₉是甲基。在某些实施方案中，式I的化合物由式Ib表示：

, 或其药学上可接受的盐。

在某些实施方案中，本文所述的方法的BCL-2抑制剂是BH3-模拟物。所述BCL-2抑制剂可以特异性地抑制Bcl-2蛋白。所述BCL-2抑制剂可以选自navitoclax、venetoclax、A-1155463、A-1331852、ABT-737、obatoclax、S44563、TW-37、A-1210477、AT101、HA14-1、BAM7、sabutoclax、UMI-77、藤黄酸、maritoclax、MIM1、甲泼尼龙、iMAC2、Bax抑制剂肽V5、Bax抑制剂肽P5、Bax通道阻滞剂和ARRY 520三氟乙酸盐。在某些实施方案中，本文所述的方法的BCL-2抑制剂选自navitoclax和venetoclax或其中任一种的药学上可接受的盐。

在某些实施方案中，本文所述的方法的血癌选自急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性淋巴瘤(ALL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)、弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞性淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、套细胞淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、结节外边缘区B细胞淋巴瘤、结节边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤和原发性中枢神经系统淋巴瘤。所述血癌可以是弥漫性大B细胞性淋巴瘤、急性髓性白血病或慢性淋巴细胞白血病。

对于本文描述的某些方法，可以并行地施用CDK抑制剂和BCL-2抑制剂。对于本文所述的方法，可以在彼此的约12小时内（诸如在彼此的约5小时内）依次施用CDK抑制剂和BCL-2抑制剂。

对于本文描述的某些方法，可以将CDK抑制剂和BCL-2抑制剂共配制在药物组合物中。

对于本文描述的某些方法，可以每天、每隔一天或每三天施用CDK抑制剂和BCL-2抑制剂。

对于本文描述的某些方法，所述蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、marizomib、ixazomib、双硫仑、表儿茶素-3-没食子酸盐、salinosporamide A、卡非佐米、ONX 0912、CEP-18770、MLN9708、环氧霉素、MG132和其中任一种的药学上可接受的盐。在某些实施方案中，所述蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、marizomib、ixazomib和其中任一种的药学上可接受的盐。

在本文描述的某些方法中，并行地施用CDK抑制剂和蛋白酶体抑制剂。可以在彼此的约12小时内（诸如在彼此的5小时内）依次施用CDK抑制剂和蛋白酶体抑制剂。

在本文描述的某些方法中，将CDK抑制剂和蛋白酶体抑制剂共配制在药物组合物中。

在本文描述的某些方法中，每天、每隔一天或每三天施用CDK抑制剂和BCL-2抑制剂。

在某些方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的由式I表示的CDK抑制剂或其药学上可接受的盐、治疗有效量的BCL-2抑制剂或蛋白酶体抑制剂和药学上可接受的赋形剂：

其中：

R₁是任选地被取代的苯基；

R₂和R₃各自独立地选自羟基和OR₈，其中R₈是任选地被取代的C₁-C₁₀-烷基；

R₄是任选地被取代的C₁-C₄-烷基；且

R₉是氢或任选地被取代的C₁-C₄-烷基。

在某些实施方案中，式I的化合物或盐由式Ia表示：。

对于本文描述的组合物，对于式I或Ia的化合物或盐，R₁可以任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自羟基、氰基、卤素、氨基、C₁-C₄-烷基、C₁-C₄-烷氧基、C₁-C₄-羟基烷基、C₁-C₄-卤代烷基和硝基。在某些实施方案中，R₁被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素和C₁-C₄-卤代烷基。在某些实施方案中，R₁是2-氯-4-三氟甲基苯基。

对于本文描述的组合物，对于式I或Ia的化合物或盐，R₂和R₃可以各自独立地选自羟基和OR₈，其中R₈是任选地被一个或多个取代基取代的C₁-C₁₀-烷基，所述取代基独立地选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。在某些实施方案中，R₂和R₃各自是羟基。

对于本文描述的组合物，对于式I或Ia的化合物或盐，R₄是被一个或多个取代基取代的C₁-C₄-烷基，所述取代基选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。在某些实施方案中，R₄是被一个或多个取代基取代的C₁-C₄-烷基，所述取代基选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。在某些实施方案中，R₄是2-羟基甲基。

对于本文描述的组合物，对于式I或Ia的化合物或盐，R₉可以是任选地被羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基取代的C₁-C₄-烷基。在某些实施方案中，R₉是甲基。

对于本文描述的组合物，式I的化合物可以由式Ib表示：,或其药学上可接受的盐。

对于本文描述的包含BCL-2抑制剂的组合物，所述BCL-2抑制剂可以选自navitoclax、venetoclax、A-1155463、A-1331852、ABT-737、obatoclax、S44563、TW-37、A-1210477、AT101、HA14-1、BAM7、sabutoclax、UMI-77、藤黄酸、maritoclax、MIM1、甲泼尼龙、iMAC2、Bax抑制剂肽V5、Bax抑制剂肽P5、Bax通道阻滞剂、ARRY 520三氟乙酸盐和其中任一种的药学上可接受的盐。所述BCL-2抑制剂可以选自navitoclax和venetoclax或其中任一种的药学上可接受的盐。在某些实施方案中，所述BCL-2抑制剂是venetoclax。

对于本文描述的包含蛋白酶体抑制剂的组合物，所述蛋白酶体抑制剂可以选自硼替佐米、marizomib、ixazomib、双硫仑、表儿茶素-3-没食子酸盐、salinosporamide A、卡非佐米、ONX 0912、CEP-18770、MLN9708、环氧霉素、MG132和其中任一种的药学上可接受的盐。在某些实施方案中，所述蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、marizomib、ixazomib和其中任一种的药学上可接受的盐。

通过引用并入

在本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请都通过引用并入本文，其程度如同明确地且单独地指出每篇单独的出版物、专利或专利申请通过引用并入。

附图简述

特别在所附权利要求中阐述了本发明的新颖特征。参考以下阐述在其中利用本发明的原理的示例性实施方案的详细描述和附图将更好地理解本发明的特征和优点，在附图中：

图1阐述了voruciclib和flavopiradol对38种激酶的活性的对比。

图2阐述了voruciclib对细胞周期蛋白依赖性激酶的单数位nM效能。

图3A-3D阐述了voruciclib与venetoclax (ABT-199)组合的协同效应。voruciclib抑制NU-DHL-1弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)细胞中venetoclax对诱导的髓样白血病细胞分化蛋白(MLC-1)的诱导。MCL-1 = 红色; DAPI = 蓝色；荧光跟踪标志物(FTM) = 绿色。

图4A-4D阐述了通过voruciclib和venetoclax的联合治疗实现的NU-DHL-1弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)细胞中增加的细胞凋亡。经切割的胱天蛋白酶-3 (CC3) = 红色;DAPI = 蓝色；荧光跟踪标志物(FTM) = 绿色。

图5A-5D阐述了voruciclib与navitoclax (ABT-263)组合的协同效应。用voruciclib和navitoclax对Ramos伯基特淋巴瘤细胞系的处理会诱导细胞凋亡。经切割的胱天蛋白酶-3 (CC3) = 红色; DAPI = 蓝色；荧光跟踪标志物(FTM) = 绿色。

图6A-6E阐述了voruciclib与venetoclax组合在弥漫性大B细胞性淋巴瘤的5个模型之间的协同效应。

图7表明，通过CDK9对MCL-1的抑制有助于将细胞转换至细胞凋亡。

图8A-8D表明，蛋白酶体抑制会诱导三重阴性的乳腺癌(TNBC)中的MCL-1的上调。图8A阐述了在HCC1187 TNBC异种移植物模型中筛选的化合物的列表。图8B阐述了不同化合物处理引起的MCL-1诱导的平均%变化。图8C-8D阐述了在媒介物和硼替佐米处理以后CC3对细胞的染色(以红色显示)。

图9A-9D阐述了voruciclib与marizomib组合在NudHL1 DLBCL细胞上的协同效应。经切割的胱天蛋白酶-3 (CC3) = 红色; DAPI = 蓝色；荧光跟踪标志物(FTM) = 绿色。

图10A-10D阐述了voruciclib与硼替佐米组合在NudHL1 DLBCL细胞上的协同效应。经切割的胱天蛋白酶-3 (CC3) = 红色; DAPI = 蓝色；荧光跟踪标志物(FTM) = 绿色。

图11A-11D阐述了voruciclib与硼替佐米组合在三重阴性的乳腺癌细胞上的协同效应。经切割的胱天蛋白酶-3 (CC3) = 红色; DAPI = 蓝色；荧光跟踪标志物(FTM) = 绿色。

图12A-12E阐述了voruciclib与硼替佐米组合在HCC1187三重阴性的乳腺癌细胞上的协同效应。图12A-12D阐述了用voruciclib和硼替佐米处理的HCC1187 TNBC小鼠模型中减小的肿瘤体积。图12E阐述了蛋白质印迹，其证实在用voruciclib和硼替佐米、或voruciclib和衣霉素处理过的HCC1187 TNBC细胞中减少的MCL-1表达。

图13阐述了voruciclid和硼替佐米、以及voruciclib和硼替佐米的组合对HCC1187 TNBC小鼠模型的体重的影响。

图14阐述了硼替佐米与palbociclib（帕博西尼）（一种CDK4/6抑制剂）组合在HCC1187 TNBC小鼠模型中的作用。

图15A-15B表明，voruciclib会减少硼替佐米诱导的MCL-1和E3泛素-蛋白连接酶XIAP表达。图15A阐述了CDK9的voruciclib抑制的提议模型。图15B阐述了蛋白质印迹，其表明voruciclib会减少硼替佐米诱导的MCL-1和E3泛素-蛋白连接酶XIAP表达的增加。

图16A-16B阐述了对硼替佐米治疗有抗性的细胞。图16A阐述了在另外通过硼替佐米治疗清除细胞的区域中对硼替佐米治疗有抗性的细胞。图16B表明，对硼替佐米有抗性的细胞表达GRP78，即作为ER应激应答的部分而表达的蛋白。

图17阐述了三种不同的ER应激应答途径。

图18A-18B表明，voruciclib可以影响IRE1α依赖性的ER应激应答途径。图18A阐述了IRE1α依赖性的ER应激应答途径。图18B阐述了蛋白质印迹，其表明ER应激诱导物衣霉素急剧地上调X-盒结合蛋白1 (XBP1)，一种促存活(抗肿瘤细胞死亡)蛋白。该效应被voruciclib显著地减轻。在6小时，仅衣霉素显示该效应，但是在24小时，硼替佐米和衣霉素都显示该效应。

图19A-19B阐述了voruciclib对硼替佐米诱导的XBP1转录的抑制。STF083010 =IRE1α核糖核酸内切酶活性抑制剂; Tm = 衣霉素。

图20A-20D阐述了voruciclib与ixazomib组合的协同效应。经切割的胱天蛋白酶3(CC3) = 红色; DAPI = 蓝色；荧光跟踪标志物(FTM) = 绿色。

图21A-21B阐述了CDK抑制剂、voruciclib、帕博西尼、dinaciclib和flavopiradol与ixazomib组合处理过的实体瘤切片。仅voruciclib + Ixazomib可再现地导致在24小时内明显的肿瘤细胞清除。

图22A-B阐述了voruciclib和venetoclax在弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)的SU-DHL-4模型中的协同作用。

图23A-23C阐述了voruciclib和venetoclax在弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)的SU-DHL-4模型、OCI Ly10模型和U2932模型中的协同作用。

图24表明，voruciclib抑制DLBCL异种移植物肿瘤中的MCL1表达。

图25A-25B阐述了voruciclib和venetoclax在小鼠的ABC-型(RIVA) DLBCL中的协同效应。

图26A-26B阐述了voruciclib和venetoclax的协同效应和在小鼠中的DLBCL的U2932模型中对体重的影响。

图27A-27B阐述了voruciclib和venetoclax在小鼠的DLBCL的NUDHL1模型中的协同效应。

图28阐述了voruciclib和venetoclax在GC DLBCL的SUDHL4模型中的协同效应。

图29表明，voruciclib会恢复被venetoclax废除的p53。

图30A-30C表明，voruciclib在AML细胞系中具有单一药物活性。

图31表明，voruciclib和venetoclax的组合在AML细胞系中诱导协同细胞死亡。

图32阐述了voruciclib和venetoclax的组合阻碍SKM1 AML异种移植物中的肿瘤生长的协同效应。

图33表明，voruciclib诱导的细胞凋亡与MCL的抑制相关。

发明详述

本发明提供了用于治疗癌症的联合疗法。具体地，本发明提供了用于治疗癌症的CDK抑制剂与其它抗癌药的联合疗法。在一个方面，本发明提供了用于治疗癌症的组合物和方法，其使用CDK抑制剂与BCL-2抑制剂组合。这样的组合会在癌症的治疗和尤其是血癌（例如，白血病和淋巴瘤）的治疗中提供协同效应。

在另一个方面，本发明提供了用于治疗癌症的组合物和方法，其使用CDK抑制剂与蛋白酶体抑制剂组合。这样的组合会在癌症的治疗和尤其是血癌和三重阴性的乳腺癌的治疗中提供协同效应。

在上文中和在下文中使用的一般术语优选地具有在本发明的上下文中的下述含义，除非另外指出。因而，在下文提供了在本发明的上下文中使用的一般术语的定义：

单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数形式，除非上下文另外清楚地指明。

本文中使用的术语“约”通常表示特定值的可接受的误差范围，如本领域普通技术人员所确定的，其可以部分地取决于如何测量或确定所述值。例如，“约”可以是指在1个或超过1个标准差内。可替换地，“约”可以是指给定值的多达20%、多达10%、多达5%或多达1%的范围。可替换地，特别关于生物系统或过程，该术语可以是指在一个值的一个数量级内，5倍内，和2倍内。

本文中使用的术语“至少一种/个”表示一种/个或多种/个。例如，术语“至少一种抗癌药”是指，所述组合包含单一抗癌药或多种抗癌药。

本文中使用的术语“有效量”或“治疗有效量”通常表示本文描述的化合物的量，该量足以实现预期的、预定的或规定的应用，包括、但不限于，疾病或病况治疗。治疗有效量可以随应用(例如，体外或体内)或正在治疗的受试者和疾病状况（例如，受试者的重量和年龄、疾病状况的严重程度和施用方式）而变化。该术语也可以应用于在靶细胞中诱导特定应答（例如，增殖的减少或靶蛋白的活性的下调）的剂量。具体的剂量可以随以下因素而变化：选择的特定化合物，要遵循的定量施用方案，它是否与其它化合物组合施用，施用时机，施用它的组织，和在其中承载它的物理递送系统。

本文中使用的术语“药学上可接受的”是指，所述载体、稀释剂、赋形剂和/或盐必须与制剂的其它成分相容，且对其接受者无害。“药学上可接受的”也意味着，所述组合物或剂型在合理的医学判断范围内适合用于动物或人，而没有过度的毒性、刺激、变应性应答或其它问题或并发症，与合理的收益/风险比相称。

本文中使用的术语“组合”或“药物组合”表示抗癌药的组合施用。本发明的组合包括CDK抑制剂，例如，式I、Ia或Ib的化合物和至少一种选自BCL-2抑制剂和蛋白酶体抑制剂的抗癌药；可以将所述抗癌药施用给有此需要的受试者，例如，并行地或依次地。

本文中使用的术语“协同”或“协同效应”或“协同作用”通常表示这样的效应：组合物的组合的一种或多种效应大于单独每种组分的一种或多种效应，或它们可以大于单独每种组分的一种或多种效应的总和。所述协同效应可以是比单独组分之一对受试者的效应或当单独施用时每种组分的累加效应大了约10%、20%、30%、50%、75%、100%、110%、120%、150%、200%、250%、350%或500%或更多。所述效应可以是本文描述的可测量效应中的任一种。有利地，当组合时，在药物之间的这样的协同作用可以允许使用一种或两种药物的更小剂量，可能在相同剂量提供更大的效力，且可能阻止或延迟多药抗性的积累。Chou和Talalay的组合指数(CI)方法可以用于确定在组合中使用的药物的协同、累加或拮抗作用。当CI值小于1时，在组合中使用的化合物之间存在协同作用；当CI值等于1时，在组合中使用的化合物之间存在累加效应，且当CI值超过1时，存在拮抗作用。通过共配制药物组合的药物，可以获得协同效应。通过施用两种或更多种药物作为同时地或依次地施用的单独制剂，可以获得协同效应。

细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)是在细胞周期的特定阶段变得活化的酶的家族。CDK由催化亚基(实际的细胞周期蛋白依赖性激酶或CDK)和调节亚基(细胞周期蛋白)组成。存在至少9种CDK (CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9等)和至少15种不同类型的细胞周期蛋白(细胞周期蛋白A、B1、B2、D1、D2、D3、E、H等)。细胞周期的每个步骤由这样的CDK复合物调节：G1/S转变(CDK2/细胞周期蛋白A、CDK4/细胞周期蛋白D1-D3、CDK6/细胞周期蛋白D3)、S期(CDK2/细胞周期蛋白A)、G2期30 (CDK1/细胞周期蛋白A)、G2/M转变期(CDK1/细胞周期蛋白B)。

本文中使用的术语“CDK抑制剂”表示能够抑制一种或多种细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)的药物。这些激酶的异常表达和过表达在许多疾病状况诸如癌症中显现。在本发明的上下文中，本文描述的药物组合的CDK抑制剂可以是式I、Ia或Ib的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的化合物可以特异性地抑制CDK1/细胞周期蛋白B、CDK2/细胞周期蛋白E、CDK4/细胞周期蛋白D、CDK4/细胞周期蛋白D1和CDK9/细胞周期蛋白T1中的一种或多种。在某些实施方案中，本发明的化合物会特异性地抑制CDK9/细胞周期蛋白T1或CDK9。

本文中公开了用于治疗癌症（例如，白血病、淋巴瘤和乳腺癌）的联合疗法。本文描述的方法和组合物可以包括细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂，诸如式I、Ia或Ib的化合物或其药学上可接受的盐。在某些情况下，联合疗法可以包括CDK抑制剂与蛋白酶体抑制剂组合。在其它情况下，联合疗法可以包括CDK抑制剂与BCL-2抑制剂组合。

在某些实施方案中，本发明的CDK抑制剂以在美国专利号7,271,193、7,915,301、8,304,449、7,884,127、8,563,596中公开的化合物为代表，它们中的每一篇的整个内容通过引用并入本文。在某些实施方案中，本发明的CDK抑制剂由式I表示：

或其药学上可接受的盐，其中：

R₁是任选地被取代的苯基；

R₂和R₃各自独立地选自羟基和OR₈，其中R₈是任选地被取代的C₁-C₁₀-烷基；

R₄是任选地被取代的C₁-C₄-烷基；且

R₉是氢或任选地被取代的C₁-C₄-烷基。

在某些实施方案中，式I的化合物或盐由式Ia表示：

。

在某些关于式I或Ia的化合物或盐的实施方案中，R₁任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自羟基、氰基、卤素、氨基、C₁-C₄-烷基、C₁-C₄-烷氧基、C₁-C₄-羟基烷基、C₁-C₄-卤代烷基和硝基。在某些实施方案中，R₁被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自羟基、氰基、卤素、C₁-C₄-烷基和C₁-C₄-卤代烷基。在某些实施方案中，R₁被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素和C₁-C₄-卤代烷基。在某些实施方案中，R₁是2-氯-4-三氟甲基苯基。

术语“烷基”表示仅由碳和氢原子组成且不含有不饱和键的直链或支链烃链残基。在某些实施方案中，烷基包含1-8个碳原子(即，C₁-C₈烷基)。在其它实施方案中，烷基包含1-5个碳原子(即，C₁-C₅烷基)。在其它实施方案中，烷基包含1-4个碳原子(即，C₁-C₄烷基)。在其它实施方案中，烷基包含1-3个碳原子(即，C₁-C₃烷基)。在其它实施方案中，烷基包含1-2个碳原子(即，C₁-C₂烷基)。在其它实施方案中，烷基包含1个碳原子(即，C₁烷基)。在其它实施方案中，烷基包含5-8个碳原子(即，C₅-C₈烷基)。在其它实施方案中，烷基包含2-5个碳原子(即，C₂-C₅烷基)。在其它实施方案中，烷基包含3-5个碳原子(即，C₃-C₅烷基)。在某些实施方案中，所述烷基选自甲基、乙基、1-丙基(正丙基)、1-甲基乙基(异丙基)、1-丁基(正丁基)、1-甲基丙基(仲丁基)、2-甲基丙基(异丁基)、1,1-二甲基乙基(叔丁基)、1-戊基(正戊基)。所述烷基通过单键连接至分子的其余部分。除非在本说明书中另外特别说明，烷基任选地被一个或多个取代基（诸如本文描述的那些取代基）取代。

术语“烷氧基”表示通过式-O-烷基的氧原子键合的残基，其中烷基是如上定义的烷基链。

术语“氨基”表示基团-NR’R”，其中R’和R”独立地选自氢；和烷基、羟基、芳基、环烷基、杂环烷基和杂芳基，其中的任一个可以任选地被一个或多个取代基诸如羟基、氰基、卤素、氨基、C₁-C₄-烷基、C₁-C₄-烷氧基、C₁-C₄-羟基烷基、C₁-C₄-卤代烷基和硝基取代。

当与化学部分（诸如烷基）结合使用时，术语“C_x-y”意在包括在链中含有x至y个碳的基团。例如，术语“C_x-y烷基”表示被取代的或未被取代的饱和烃基，包括在链中含有x至y个碳的直链烷基和支链烷基，包括卤代烷基诸如三氟甲基和2,2,2-三氟乙基等。

术语“卤代烷基”表示被一个或多个卤素残基取代的烷基，例如，三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氯甲基-2-氟乙基等。在某些实施方案中，所述卤代烷基的烷基部分进一步任选地如本文中所述被取代。

术语“羟基烷基”表示被一个或多个羟基自由基取代的烷基，例如，羟基甲基、羟基乙基、二羟基甲基等。在某些实施方案中，所述羟基烷基的烷基部分进一步任选地如本文中所述被取代。

在某些关于式I或Ia的化合物或盐的实施方案中，R₂和R₃各自独立地选自羟基和OR₈，其中R₈是任选地被一个或多个取代基取代的C₁-C₁₀-烷基，所述取代基独立地选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。在某些实施方案中，R₈在每次出现时选自任选地被取代的C₁-C₆-烷基，诸如任选地被取代的C₁-C₄-烷基。在某些实施方案中，R₂和R₃各自独立地是羟基。

在某些关于式I或Ia的化合物或盐的实施方案中，R₄是任选地被取代的C₁-C₄-烷基，其中R₄任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。在某些实施方案中，R₄是任选地被取代的C₁-C₂-烷基。在某些实施方案中，R₄是羟基烷基，例如，2-羟基甲基。

在某些关于式I或Ia的化合物或盐的实施方案中，R₉是任选地被羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基取代的C₁-C₄-烷基。在某些实施方案中，R₉是任选地被取代的C₁-C₂-烷基。在某些实施方案中，R₉是甲基。在某些实施方案中，R₉是氢。

在某些关于式I或Ia的化合物或盐的实施方案中，式I的化合物是选自以下的化合物或药学上可接受的盐：(+)-反式-2-(2-氯-4-三氟甲基苯基)-8-(2-羟基甲基-1-甲基-吡咯烷-3-基)-5,7-二甲氧基-色烯-4-酮；(+)-反式-2-(2-氯-4-三氟甲基苯基)-5,7-二羟基-8-(2-羟基甲基-1-甲基吡咯烷-3-基)-色烯-4-酮；和(+)-反式-2-(2-氯-4-三氟甲基苯基)-5,7-二羟基-8-(2-羟基甲基-1-甲基-吡咯烷-3-基)-色烯-4-酮盐酸盐。

在某些实施方案中，式I或Ia的化合物由式Ib表示：

或其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，所述式I、Ia或Ib的化合物呈酸加成盐（诸如盐酸盐）的形式。

术语“取代的”表示这样的部分：其具有替换结构的一个或多个碳或杂原子上的氢的取代基。应理解，“取代”或“用......取代”包括隐含条件，即这样的取代是根据被取代的原子和取代基的允许化合价，以及代表稳定的化合物，其不会容易地经历转化诸如重排、环化、消除等。预见到本文中使用的术语“取代”包括有机化合物的所有可允许的取代基。在一个宽泛的方面，所述可允许的取代基包括有机化合物的无环的和环状的、支链的和直链的、碳环的和杂环的、芳族的和非芳族的取代基。可允许的取代基对于适当的有机化合物而言可以是一种或多种、相同或不同。为了本发明的目的，所述杂原子（诸如氮）可以具有氢取代基和/或本文描述的有机化合物的任意可允许的取代基，所述取代基满足杂原子的化合价。

取代基可以包括本文描述的任何取代基，例如，卤素、羟基、羰基(诸如羧基、烷氧基羰基、甲酰基或酰基)、硫代羰基(诸如硫代酸酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、氨基、酰氨基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷基硫基、硫酸酯、磺酸酯、氨磺酰基、磺酰氨基、磺酰基、杂环基、芳烷基、碳环基、杂环基、环烷基、杂环烷基、芳族和杂芳族部分。在某些实施方案中，取代基可以包括本文描述的任何取代基，例如：卤素、羟基、氧代(=O)、硫代(=S)、氰基(-CN)、硝基(-NO₂)、亚氨基(=N-H)、肟基（oximo）(=N-OH)、肼基(=N-NH₂)、-R^b-OR^a、-R^b-OC(O)-R^a、-R^b-OC(O)-OR^a、-R^b-OC(O)-N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)₂、-R^b-C(O)R^a、-R^b-C(O)OR^a、-R^b-C(O)N(R^a)₂、-R^b-O-R^c-C(O)N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)C(O)OR^a、-R^b-N(R^a)C(O)R^a、-R^b-N(R^a)S(O)_tR^a (其中t是1或2)、-R^b-S(O)_tR^a (其中t是1或2)、-R^b-S(O)_tOR^a (其中t是1或2)和-R^b-S(O)_tN(R^a)₂ (其中t是1或2)；和烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、芳烯基、芳炔基、环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基和杂芳基烷基，它们中的任一个可以任选地被以下基团取代：烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、卤代烷基、卤代烯基、卤代炔基、氧代(=O)、硫代(=S)、氰基(-CN)、硝基(-NO₂)、亚氨基(=N-H)、肟基（oximo）(=N-OH)、肼(=N-NH₂)、-R^b-OR^a、-R^b-OC(O)-R^a、-R^b-OC(O)-OR^a、-R^b-OC(O)-N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)₂、-R^b-C(O)R^a、-R^b-C(O)OR^a、-R^b-C(O)N(R^a)₂、-R^b-O-R^c-C(O)N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)C(O)OR^a、-R^b-N(R^a)C(O)R^a、-R^b-N(R^a)S(O)_tR^a (其中t是1或2)、-R^b-S(O)_tR^a (其中t是1或2)、-R^b-S(O)_tOR^a (其中t是1或2)和-R^b-S(O)_tN(R^a)₂ (其中t是1或2)；其中每个R^a独立地选自氢、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基，其中每个R^a（当化合价允许时）可以任选地被以下基团取代：烷基、烯基、炔基、卤素、卤代烷基、卤代烯基、卤代炔基、氧代(=O)、硫代(=S)、氰基(-CN)、硝基(-NO₂)、亚氨基(=N-H)、肟基（oximo）(=N-OH)、肼(=N-NH₂)、-R^b-OR^a、-R^b-OC(O)-R^a、-R^b-OC(O)-OR^a、-R^b-OC(O)-N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)₂、-R^b-C(O)R^a、-R^b-C(O)OR^a、-R^b-C(O)N(R^a)₂、-R^b-O-R^c-C(O)N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)C(O)OR^a、-R^b-N(R^a)C(O)R^a、-R^b-N(R^a)S(O)_tR^a (其中t是1或2)、-R^b-S(O)_tR^a (其中t是1或2)、-R^b-S(O)_tOR^a (其中t是1或2)和-R^b-S(O)_tN(R^a)₂ (其中t是1或2)；且其中每个R^b独立地选自直连键或直链或支链亚烷基、亚烯基或亚炔基链，且每个R^c是直链或支链亚烷基、亚烯基或亚炔基链。

用于制备式I、Ia和Ib的化合物或其药学上可接受的盐的操作可以参见PCT专利公开号WO2004004632 (对应于美国专利7,271,193)和PCT专利公开号WO2007148158。

本发明提供了本文描述的任意化合物（例如，式I、Ia、Ib的化合物）、BCL-2抑制剂和蛋白酶体抑制剂的药学上可接受的盐。药学上可接受的盐包括例如酸加成盐和碱加成盐。被加入到化合物中以形成酸加成盐的酸可以是有机酸或无机酸。被加入到化合物中以形成碱加成盐的碱可以是有机碱或无机碱。在某些情况下，药学上可接受的盐是金属盐。在某些情况下，药学上可接受的盐是铵盐。

通过向本文描述的化合物添加酸，可以产生酸加成盐。在某些情况下，所述酸是有机酸。在某些情况下，所述酸是无机酸。合适酸的非限制性例子包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、亚硝酸、硫酸、亚硫酸、磷酸、烟酸、异烟酸、乳酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、酒石酸、抗坏血酸、龙胆酸、葡糖酸、葡糖醛酸(glucaronic acid)、糖二酸(saccaric acid)、甲酸、苯甲酸、谷氨酸、泛酸、乙酸、丙酸、丁酸、富马酸、琥珀酸、柠檬酸、草酸、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、羟乙酸、苹果酸、肉桂酸、扁桃酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、双羟萘酸、苯乙酸、N-环己基氨基磺酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、2-羟基乙磺酸、乙烷-1,2-二磺酸、4-甲基苯磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、2-磷酸甘油酸、3-磷酸甘油酸、葡萄糖-6-磷酸和氨基酸。

通过向本发明的化合物添加无机碱，可以产生金属盐。所述无机碱由与碱性抗衡离子（例如，氢氧根、碳酸根、碳酸氢根或磷酸根）配对的金属阳离子组成。所述金属可以是碱金属、碱土金属、过渡金属或主族金属。在某些实施方案中，所述金属是锂、钠、钾、铯、铈、镁、锰、铁、钙、锶、钴、钛、铝、铜、镉或锌。

在某些实施方案中，金属盐是锂盐、钠盐、钾盐、铯盐、铈盐、镁盐、锰盐、铁盐、钙盐、锶盐、钴盐、钛盐、铝盐、铜盐、镉盐或锌盐。

通过向本文描述的化合物添加氨或有机胺，可以产生铵盐。合适的有机胺的非限制性例子包括三乙胺、二异丙基胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、吗啉、N-甲基吗啉、哌啶、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、二苄基胺、哌嗪、吡啶、吡唑（pyrrazole）、pipyrrazole、咪唑、吡嗪、pipyrazine、乙二胺、N,N'-二苄基乙二胺、普鲁卡因、氯普鲁卡因、胆碱、二环己胺和N-甲基葡糖胺。

合适的铵盐的非限制性例子包括三乙胺盐、二异丙基胺盐、乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、吗啉盐、N-甲基吗啉盐、哌啶盐、N-甲基哌啶盐、N-乙基哌啶盐、二苄基胺盐、哌嗪盐、吡啶盐、吡唑（pyrrazole）盐、pipyrrazole盐、咪唑盐、吡嗪盐、pipyrazine盐、乙二胺盐、N,N'-二苄基乙二胺盐、普鲁卡因盐、氯普鲁卡因盐、胆碱盐、二环己胺盐和N-甲基葡糖胺盐。

合适的酸加成盐的非限制性例子包括盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、碳酸盐、碳酸氢盐、烟酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、4-氨基水杨酸盐、酒石酸盐、抗坏血酸盐、龙胆酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖二酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、泛酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、甲基马来酸盐、乙醇酸盐、苹果酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐、2-苯氧基苯甲酸盐、2-乙酰氧基苯甲酸盐、双羟萘酸盐、苯基乙酸盐、N-环己基氨基磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乙烷-1,2-二磺酸盐、4-甲基苯磺酸盐、萘-2-磺酸盐、萘-1,5-二磺酸盐、2-磷酸甘油酸盐、3-磷酸甘油酸盐、葡萄糖-6-磷酸盐和氨基酸盐。

本文所述化合物（例如，式I、Ia、Ib的化合物和盐、BCL-2抑制剂和蛋白酶体抑制剂）在某些情况下可以作为非对映异构体、对映异构体或其它立体异构形式存在。本文呈现的化合物包括所有非对映异构形式、对映异构形式和差向异构形式以及它们的适当混合物。通过色谱法，或通过形成非对映异构体并通过重结晶或色谱法分离，或它们的任意组合，可以执行立体异构体的分离(Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen,“Enantiomers, Racemates and Resolutions”, John Wiley And Sons, Inc., 1981，该公开内容通过引用并入本文)。通过立体选择性合成也可以得到立体异构体。

本文所述化合物（例如，式I、Ia、Ib的化合物和盐、BCL-2抑制剂和蛋白酶体抑制剂）包括无定形形式以及晶型（也被称作多晶型物）的应用。本文所述化合物可以呈药学上可接受的盐的形式。同样，在本发明的范围内包括具有同类活性的这些化合物的活性代谢物。另外，本文所述化合物可以以未溶剂合形式以及与药学上可接受的溶剂（诸如水、乙醇等）的溶剂合形式存在。本文呈现的化合物的溶剂合形式也被视作是本文中公开的。

本文所述化合物（例如，式I、Ia、Ib的化合物和盐、BCL-2抑制剂和蛋白酶体抑制剂）包括表现出它们的天然同位素丰度的化合物，和这样的化合物：其中一个或多个原子人工地富集具有相同原子数的特定同位素，但是其原子质量或质量数不同于在自然界中占优势地存在的原子质量或质量数。本发明的化合物的所有同位素变体（无论是否是放射性的）都被包括在本发明范围内。例如，氢具有三种天然存在的同位素，称作¹H (氕)、²H (氘)和³H(氚)。氕是在自然界中最丰富的氢的同位素。氘富集可以提供某些治疗优点，诸如增加的体内半衰期和/或暴露，或可以提供可用于研究药物消除和代谢的体内途径的化合物。可以制备同位素富集的化合物。

本文描述的化合物（例如，式I、Ia、Ib的化合物和盐、BCL-2抑制剂和蛋白酶体抑制剂，其中所述化合物具有碳-碳双键或碳-氮双键）在适用时可以以Z-或E- 形式(或顺式-或反式-形式)存在。此外，有些化学实体可以以不同的互变异构形式存在。除非另外指出，否则本文描述的化学实体也意图包括所有Z-、E-和互变异构形式。

在某些情况下，本文描述的化合物可以是前药，例如，其中存在于母体化合物中的羧酸作为酯存在。术语“前药”意图包括这样的化合物：其在生理条件下转化成本发明的药学药物，即，母体化合物。一种用于制备前药的方法是，包括一种或多种选定的部分，所述部分在生理条件下水解以暴露期望的分子。在某些实施方案中，所述前药被宿主动物的酶活性（诸如宿主动物中的特定靶细胞的酶活性）转化。例如，酯或碳酸酯(例如，醇或羧酸的酯或碳酸酯)是本发明的优选前药。

前药经常是有用的，因为在某些情形下，它们可以比母体药物更容易施用。它们可以是例如通过口服施用可生物利用的，而母体不是。前药可以帮助增强化合物相对于母体药物的细胞渗透性。例如，前药可以具有与母体化合物相比改善的细胞渗透性。前药还可以具有与母体药物相比改善的在药物制剂中的溶解度。在某些实施方案中，前药的设计会增加药学药物的亲脂性。在某些实施方案中，前药的设计会增加有效水溶性。

在某些实施方案中，细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂（例如，式I、Ia或Ib的化合物或盐）可以与BCL-2家族中的一种或多种蛋白的抑制剂组合使用。BCL-2抗细胞凋亡家族的蛋白的抑制剂会改变至少一种细胞存活途径。细胞凋亡活化可以经由以下途径而发生：由细胞表面死亡受体的活化触发的外部途径，或由发育线索和不同细胞内应激触发的内部途径。该内部途径（也被称作应激途径或线粒体途径）主要由BCL-2家族调节，所述BCL-2家族是由以下组成的胱天蛋白酶活化的一类关键调节剂：具有BH1-BH4结构域的抗细胞凋亡(促存活)蛋白(BCL-2，即，BCL-2抗细胞凋亡蛋白家族的BCL-2蛋白成员)、BCL-xL、BCL-w、A1、MCL-1和BCL-B)；具有BH1、BH2和BH3结构域的促细胞凋亡蛋白(BAX、BAK和BOK)；和促细胞凋亡的仅BH3的蛋白(BIK、BAD、BID、BIM、BMF、HRK、NOXA和PUMA) (参见，例如，Cory等人,Nature Reviews Cancer 2:647-56 (2002); Cory等人, Cancer Cell 8:5-6 (2005);Adams等人, Oncogene 26:1324-1337 (2007))。BCL-2抗细胞凋亡的蛋白会阻断促细胞凋亡的多结构域蛋白BAX和BAK的活化(参见，例如，Adams等人, Oncogene 26:1324-37(2007))。

本文中使用的术语“BCL-2抑制剂”表示能够抑制BCL-2家族的抗细胞凋亡蛋白（例如，BCL-2、BCL-xL和BCL-w）中的一种或多种蛋白的药物。在某些实施方案中，本发明的BCL-2抑制剂会选择性地抑制BCL-2家族的一种蛋白，例如，BCL-2抑制剂可以选择性地抑制BCL-2，且不会抑制BCL-xl或BCL-w。

本文描述的BCL-2抑制剂可以抑制BCL-2、BCL-xL和BCL-w中的一种或多种。在某些实施方案中，BCL-2抗细胞凋亡家族的蛋白的抑制剂会抑制BCL-2。在某些实施方案中，BCL-2抗细胞凋亡家族的蛋白的抑制剂会抑制BCL-2，且不会抑制BCL-2家族的蛋白的其它成员，例如，不会抑制BCL-xL或BCL-w。在某些实施方案中，所述BCL-2抑制剂是BH3-模拟物。

在某些实施方案中，本发明的BCL-2抑制剂会抑制BCL-xL功能。除了BCL-xL的抑制以外，所述抑制剂也可以与BCL-2相互作用和/或抑制BCL-2的一种或多种功能，例如，BCL-xL/BCL-2抑制剂。在某些实施方案中，本发明的BCL-2抑制剂会抑制BCL-xL和BCL-w中的每一种。在某些实施方案中，本发明的BCL-2抑制剂会抑制BCL-xL、BCL-2和BCL-w。

在某些实施方案中，BCL-2抑制剂会干扰BCL-2抗细胞凋亡蛋白家族成员和一种或多种配体或受体之间的相互作用，BCL-2抗细胞凋亡蛋白家族成员在没有所述抑制剂存在下会结合所述配体或受体。在其它实施方案中，一种或多种BCL-2抗细胞凋亡蛋白家族成员的抑制剂（其中所述抑制剂特异性地抑制至少一种BCL-2蛋白）仅结合BCL-xL、BCL-2、BCL-w中的一种或多种，且不结合其它Bcl-2抗细胞凋亡的Bcl-2家族成员，诸如Mcl-1和BCL2A1。

可以测量BCL-2抑制剂对BCL-2家族蛋白的结合亲和力。作为例子，使用竞争荧光偏振测定可以确定BCL-xL抑制剂的结合亲和力，其中在有或没有递增浓度的如前面描述的BCL-XL抑制剂存在下将荧光BAK BH3结构域肽与BCL-xL蛋白(或其它BCL-2家族蛋白)一起温育(参见，例如，美国专利公开20140005190; Park等人, Cancer Res. 73:5485-96(2013); Wang等人, Proc. Natl. Acad. Sci USA 97:7124-9 (2000); Zhang等人,Anal. Biochem. 307:70-5 (2002); Bruncko等人, J. Med. Chem. 50:641-62 (2007))。可以通过以下方程式确定抑制百分比：1-[(孔的mP值- 阴性对照)/范围)] x 100%。通过如在Bruncko等人, J. Med. Chem. 50:641-62 (2007) (也参见，Wang, FEBS Lett. 360:111-114 (1995))中所述的下式确定抑制常数(K_i)值：K _i = [I]₅₀/([L]₅₀/K _d+[P]₀/K _d+1)。

BCL-2抑制剂的例子包括ABT-263 (4-[4-[[2-(4-氯苯基)-5,5-二甲基环己烯-1-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[4-[[(2R)-4-吗啉-4-基-1-苯基硫烷基丁-2-基]氨基]-3-(三氟甲基磺酰基)苯基]磺酰基苯甲酰胺或IUPAC, (R)-4-(4-((4'-氯-4,4-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((4-((4-吗啉代-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺) (参见，例如，Park等人, 2008, J. Med. Chem. 51:6902; Tse等人, Cancer Res., 2008, 68:3421；国际专利申请公开号WO2009/155386；美国专利号7390799、7709467、7906505、8624027)和ABT-737 (4-[4-[(4'-氯[1,1'-联苯]-2-基)甲基]-1-哌嗪基]-N-[[4-[[(1R)-3-(二甲基氨基)-1-[(苯基硫基)甲基]丙基]氨基]-3-硝基苯基]磺酰基]苯甲酰胺, 苯甲酰胺, 4-[4-[(4'-氯[1,1'-联苯]-2-基)甲基]-1-哌嗪基]-N-[[4-[[(1R)-3-(二甲基氨基)-1-[(苯基硫基)甲基]丙基]氨基]-3-硝基苯基]磺酰基]-或4-[4-[[2-(4-氯苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[4-[[(2R)-4-(二甲基氨基)-1-苯基硫烷基丁-2-基]氨基]-3-硝基苯基]磺酰基苯甲酰胺) (参见，例 如，Oltersdorf等人, Nature, 2005, 435:677；美国专利号7973161；美国专利号7642260)。

在其它实施方案中，所述BCL-2抑制剂是喹唑啉磺酰胺化合物(参见，例如，Sleebs等人, 2011, J. Med. Chem. 54:1914)。在另一个实施方案中，所述BCL-抑制剂是在以下文献中描述的小分子化合物：Zhou等人, J. Med. Chem., 2012, 55:4664 (参见，例如，化合物21 (R)-4-(4-氯苯基)-3-(3-(4-(4-(4-((4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基磺酰氨基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-5-乙基-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸)和Zhou等人, J. Med. Chem., 2012, 55:6149 (参见，例如，化合物14 (R)-5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-(4-((4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基磺酰氨基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-乙基-2-甲基-1H-吡咯-3-甲酸；化合物15 (R)-5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-(4-((4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基磺酰氨基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-甲酸)。在其它实施方案中，所述BCL-抑制剂是BCL-2/BCL-xL抑制剂诸如BM-1074 (参见，例如，Aguilar等人, 2013, J. Med. Chem. 56:3048)；BM-957 (参见，例如，Chen等人, 2012, J. Med. Chem. 55:8502)；BM-1197 (参见，例如，Bai等人, PLoS One 2014 Jun 5;9(6):e99404. Doi: 10.1371/journal.pone. 009904)；美国专利申请号2014/0199234; N-酰基磺酰胺化合物(参见，例 如，国际专利申请公开号WO 2002/024636, 国际专利申请公开号WO 2005/049593, 国际专利申请公开号WO 2005/049594, 美国专利号7767684, 美国专利号7906505)。在另一个实施方案中，所述BCL-2抑制剂是小分子大环化合物(参见，例如，国际专利申请公开号WO2006/127364, 美国专利号7777076)。在另一个实施方案中，所述BCL-2抑制剂是异噁唑烷化合物(参见，例如，国际专利申请公开号WO 2008/060569, 美国专利号7851637, 美国专利号7842815)。在另一个实施方案中，所述BCL-2抑制剂是S44563 (参见，例如，Loriot等人, Cell Death and Disease, 2014, 5, e1423)。在一个实施方案中，所述BCL-2抑制剂是(R)-3-((4'-氯-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)-N-((4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-2,3,4,4a,5,6-六氢-1H-吡嗪并[1,2-a]喹啉-8-甲酰胺。在另一个实施方案中，所述BCL-2抑制剂是小分子杂环化合物(参见，例如，美国专利号9018381)。

在某些情况下，与式I、Ia或Ib的化合物或盐组合使用BCL-2抑制剂。可以使用任何BCL-2抑制剂，且当与式I、Ia或Ib的化合物或盐组合使用时可以表现出协同效应。BCL-2家族抑制剂可以抑制BCL-2家族的一个或多个成员，包括Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、BAK1、BAX、BCL2、BCL2A1、BCL2L1、BCL2L2、BCL2L10、BCL2L13、BCL2L14、BOK和MCL1。在某些实施方案中，与以下任一种组合使用式I、Ia或Ib的化合物或盐：navitoclax、venetoclax、A-1155463、A-1331852、ABT-737、obatoclax、TW-37、A-1210477、AT101、HA14-1、BAM7、sabutoclax、UMI-77、藤黄酸、maritoclax、MIM1、甲泼尼龙、iMAC2、Bax抑制剂肽V5、Bax抑制剂肽P5、Bax通道阻滞剂和ARRY 520三氟乙酸盐。在某些实施例中，与navitoclax组合使用voruciclib。在某些实施方案中，与venetoclax组合使用voruciclib。

在某些实施方案中，与本发明的CDK抑制剂（例如，式I、Ia或Ib的化合物）组合使用BCL-2抑制剂，用于治疗血癌。在某些实施方案中，所述血癌是白血病，诸如急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性淋巴瘤(ALL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)。在某些实施方案中，所述血癌是非霍奇金淋巴瘤，诸如B-细胞或T-细胞淋巴瘤。B-细胞淋巴瘤包括弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞性淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、套细胞淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、结节外边缘区B细胞淋巴瘤、结节边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤和原发性中枢神经系统淋巴瘤。T-细胞淋巴瘤包括前体T-成淋巴细胞性淋巴瘤、周围T-细胞淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、具有阴燃、慢性、急性和淋巴瘤亚型的成人T-细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞的T-细胞淋巴瘤、结节外天然杀伤/T-细胞淋巴瘤、鼻型、具有I和II亚型的肠病变相关的肠T-细胞淋巴瘤(EATL)、和间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)。本发明的组合，例如，本文描述的CDK抑制剂和BCL-2抑制剂的组合，可以用于治疗本文描述的血癌。

本文中使用的术语“治疗”可以包括减轻、消除或改善疾病或病况症状，预防另外的症状，改善或预防症状的根本原因，抑制疾病或病况，例如，阻止疾病或病况的发展，解除疾病或病况，造成疾病或病况的消退，解除由疾病或病况造成的状况，或预防性地和/或治疗性地停止疾病或病况的症状。

本发明提供了在有此需要的受试者中预防或减少癌症的复发的方法。在某些实施方案中，与疾病或病症有关的术语“预防”可以表示这样的化合物或组合：在统计学样品中，与未经处理的对照样品相比，其减少经处理的样品中的病症或病况的发生，或者与未经处理的对照样品相比，延迟病症或病况的一种或多种症状的发作或减轻所述症状的严重程度。所述方法包括施用本文描述的联合疗法以治疗最小残留疾病和/或作为维持疗法，例如，作为另一种癌症治疗停止以后的延长或延伸疗法。例如，可以在另一种癌症疗法（诸如化学疗法、辐射疗法和/或外科手术）停止以后施用所述联合疗法。

在某些方面，蛋白酶体抑制剂可以与本发明的CDK抑制剂（例如，式I、Ia或Ib中的任一个的化合物或盐）组合或者组合地使用。在真核细胞中，泛素(Ub)-蛋白酶体途径(UPS)包含Ub修饰和蛋白底物的随后降解。UPS控制许多细胞调节蛋白（包括转录因子、细胞周期调节蛋白和参与多种细胞过程的因子）的水平。UPS途径的共同特征是，高度保守的Ub通过一系列酶（即E1 Ub-活化酶、E2 Ub-缀合酶和E3 Ub连接酶）共价地连接至靶蛋白。E1首先活化Ub并将它转移至E2。从E2酶，Ub直接转移至靶蛋白或通过E3 Ub连接酶间接转移至靶蛋白。多泛素化的蛋白被26S蛋白酶体（具有多种蛋白水解活性的大复合物）识别和降解。

本文中使用的术语“蛋白酶体抑制剂”表示阻断蛋白酶体的作用的药物。蛋白酶体抑制可以阻止促细胞凋亡因子（诸如p53蛋白）的降解，允许赘生性细胞中的程序性细胞死亡的活化（依赖于促细胞凋亡途径的抑制）。

可以使用任何蛋白酶体抑制剂，且当与CDK抑制剂（例如，式I、Ia或Ib的化合物或盐）组合使用时可以表现出协同效应。蛋白酶体抑制剂的非限制性例子可以包括：硼替佐米、marizomib、ixazomib、双硫仑、表儿茶素-3-没食子酸盐、salinosporamide A、卡非佐米、ONX 0912、CEP-18770、MLN9708、环氧霉素和MG132。

在某些实施方案中，与本发明的CDK抑制剂（例如，式I、Ia或Ib的化合物）组合使用蛋白酶体抑制剂，用于治疗血癌，诸如弥漫性大B细胞性淋巴瘤或三重阴性的乳腺癌。

在某些方面，本文描述的组合，例如，CDK抑制剂与BCL-2抑制剂或蛋白酶体抑制剂的组合，可以用于治疗癌症。本文描述的联合疗法可以减小有此需要的受试者中的转移的可能性。在某些实施方案中，所述转移是实体瘤。在某些实施方案中，所述转移是液体肿瘤。为液体肿瘤的癌症可以是发生在例如血液、骨髓和淋巴结中的那些，且可以包括，例如，白血病、髓样白血病、淋巴细胞白血病、淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、黑素瘤和多发性骨髓瘤。白血病包括，例如，急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)和毛细胞白血病。为实体瘤的癌症包括，例如，前列腺癌，睾丸癌，乳腺癌，脑癌，胰腺癌，结肠癌，甲状腺癌，胃癌，肺癌，卵巢癌，卡波西氏肉瘤，皮肤癌，鳞状细胞皮肤癌，肾癌，头颈癌，喉癌，在鼻、口腔、咽喉的潮湿粘膜衬里上形成的鳞状癌，膀胱癌，骨肉瘤，宫颈癌，子宫内膜癌，食管癌，肝癌，和肾癌。在某些实施方案中，通过本文所述的方法治疗的病况是黑素瘤细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、乳腺癌细胞、脑癌细胞、胰腺癌细胞、结肠癌细胞、甲状腺癌细胞、胃癌细胞、肺癌细胞、卵巢癌细胞、卡波西氏肉瘤细胞、皮肤癌细胞、肾癌细胞、头或颈癌细胞、咽喉癌细胞、鳞状癌细胞、膀胱癌细胞、骨肉瘤细胞、宫颈癌细胞、子宫内膜癌细胞、食管癌细胞、肝癌细胞或肾癌细胞的转移。

本文所述的方法还可以用于抑制转移性癌症肿瘤的进展。癌症的非限制性例子包括肾上腺皮质癌、儿童期肾上腺皮质癌、AIDS相关的癌症、肛门癌、阑尾癌、基底细胞癌、儿童期基底细胞癌、膀胱癌、儿童期膀胱癌、骨癌、脑肿瘤、儿童期星形细胞瘤、儿童期脑干神经胶质瘤、儿童期中枢神经系统非典型畸胎样的/杆状瘤、儿童期中枢神经系统胚胎瘤、儿童期中枢神经系统生殖细胞肿瘤、儿童期颅咽管瘤脑肿瘤、儿童期室管膜瘤脑肿瘤、乳腺癌、儿童期支气管肿瘤、类癌瘤、儿童期类癌瘤、胃肠道类癌瘤、不明原发灶的癌、儿童期不明原发灶的癌、儿童期心脏肿瘤、宫颈癌、儿童期宫颈癌、儿童期脊索瘤、慢性骨髓增生性病症、结肠癌、结直肠癌、儿童期结直肠癌、肝外胆管癌、原位导管癌(DCIS)、子宫内膜癌、食管癌、儿童期食管癌、儿童期成感觉神经细胞瘤、眼癌、骨恶性纤维组织细胞瘤、胆囊癌、胃癌、儿童期胃癌、胃肠道间质瘤(GIST)、儿童期胃肠道间质瘤(GIST)、儿童期颅外胚细胞肿瘤、性腺外胚细胞肿瘤、妊娠滋养细胞肿瘤、神经胶质瘤、头颈癌、儿童期头颈癌、肝细胞癌、下咽癌、肾癌、肾细胞肾癌、肾母细胞瘤、儿童期肾肿瘤、朗格汉斯细胞组织细胞增多症、喉癌、儿童期喉癌、白血病、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(cml)、毛细胞白血病、唇癌、肝癌(原发性)、儿童期肝癌(原发性)、原位小叶癌(LCIS)、肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、淋巴瘤、AIDS相关的淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤(CNS)、黑素瘤、儿童期黑素瘤、眼内黑素瘤、梅克尔细胞癌、恶性间皮瘤、儿童期恶性间皮瘤、具有不明原发灶的转移性鳞状颈癌、涉及NUT基因的中线道癌、口腔癌、儿童期多发性内分泌肿瘤综合征、蕈样肉芽肿病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常肿瘤、骨髓增生性肿瘤、多发性骨髓瘤、鼻腔癌、鼻咽癌、儿童期鼻咽癌、神经母细胞瘤、口癌、儿童期口癌、口咽癌、卵巢癌、儿童期卵巢癌、上皮卵巢癌、低度潜在恶性肿瘤卵巢癌、胰腺癌、儿童期胰腺癌、胰腺神经内分泌肿瘤(胰岛细胞肿瘤)、儿童期乳头状瘤病、副神经节瘤、鼻旁窦癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、垂体瘤、浆细胞肿瘤、儿童期胸膜肺胚细胞瘤、前列腺癌、直肠癌、肾盂移行细胞癌、视网膜母细胞瘤、唾液腺癌、儿童期唾液腺癌、尤因肉瘤家族的肿瘤、卡波西肉瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、儿童期横纹肌肉瘤、软组织肉瘤、子宫肉瘤、塞扎里综合征、儿童期皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、小肠癌、鳞状细胞癌、儿童期鳞状细胞癌、睾丸癌、儿童期睾丸癌、喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、儿童期胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、儿童期甲状腺癌、输尿管移行细胞癌、尿道癌、子宫内膜子宫癌、阴道癌、外阴癌和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。

本文描述的联合疗法可以与其它疗法（诸如辐射疗法）一起使用。化学疗法和放射疗法治疗方案可以包含有限数目的用药（on-drug）疗法继之以脱药（off-drug）疗法的循环，或包含在其中施用化学疗法或放射疗法的有限时间范围。通过临床试验、药物标记和临床工作人员结合要治疗的受试者可以确定所述方案。化学疗法或放射疗法的循环数目或化学疗法或放射疗法方案的总时间长度可以随受试者对癌症疗法的应答而变化。在化学疗法或放射疗法的治疗方案已经结束以后，可以施用本文描述的药学药物。

在某些方面，本文描述的组合可以用于治疗有此需要的受试者。在某些情况下，要通过本文中公开的方法和组合物治疗的受试者可以是人受试者。要通过本文中公开的方法和组合物治疗的受试者可以是非人动物。非人动物的非限制性例子可以包括非人灵长类动物、家畜动物、家养宠物和实验动物。

在某些实施方案中，本文描述的联合疗法可以作为单独药物施用，或可以组合进单一药物组合物中。例如，可以将CDK抑制剂（例如，式I、Ia或Ib的化合物或盐）和BCL-2抑制剂（例如，venetoclax或navitoclax）的组合配制为两种单独药物组合物，或可以将两种药物共配制为单一药物组合物。

在某些实施方案中，将CDK抑制剂（例如，式I、Ia或Ib的化合物或盐）与BCL-2抑制剂或蛋白酶体抑制剂共配制。在某些情况下，将式I、Ia或Ib的化合物与navitoclax、venetoclax、硼替佐米、marizomib或ixazomib中的任一种或它们的组合共配制。

在某些实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，例如，用于口服或胃肠外施用，其包含式I、Ia或Ib的化合物或盐。在某些方面，所述药物组合物包含至少约1 mg至约1000 mg、约100 mg至约400 mg、约100 mg至约200 mg、约200 mg至约400 mg、或约250 mg至约350 mg的量的式I、Ia或Ib的化合物或盐。例如，本发明的药物组合物可以包含约100 mg、约120 mg、约140 mg、约160 mg、约180 mg、约200 mg、约220 mg、约240 mg、约260 mg、约280mg、约300 mg、约320 mg、约340 mg、约360 mg、约380 mg、约400 mg、约420 mg、约440 mg、约460 mg、约480 mg或约500 mg的式I、Ia或Ib的化合物。对于以盐的形式配制在药物组合物中的本文描述的化合物（例如，式Ib的化合物），所述化合物的量可以反映游离碱重量，而不反映盐形式的重量。在某些实施方案中，式I、Ia或Ib的化合物或盐的药物组合物不包括另外的抗癌药，例如，BCL-2抑制剂或蛋白酶体抑制剂。在某些实施方案中，所述药物组合物包括另外的抗癌药，例如，BCL-2抑制剂或蛋白酶体抑制剂。

本发明的化合物（例如，式I、Ia或Ib的化合物或盐）的治疗有效量可以表达为mg化合物/千克受试者体重。在某些情况下，治疗有效量的剂量可以是至少约0.1 mg/kg至约20mg/kg，例如，约0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.7mg/kg、0.8 mg/kg、0.9 mg/kg、1 mg/kg、约2 mg/kg、约3 mg/kg、约4 mg/kg、约5 mg/kg、约6mg/kg、约7 mg/kg、约8 mg/kg、约9 mg/kg、约10 mg/kg或约20 mg/kg。对于以盐的形式配制在药物组合物中的本文描述的化合物（例如，式Ib的化合物），所述化合物的治疗有效量可以反映游离碱重量，而不反映盐形式的重量。

在某些实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，例如，用于口服或胃肠外施用，其包含BCL-2抑制剂，例如，venetoclax或navitoclax。所述药物组合物可以包含至少约1 mg至约1000 mg、约100 mg至约1000 mg、约100 mg至约800 mg、约200 mg至约800 mg、或约300 mg至约8000 mg的量的BCL-2抑制剂。例如，本发明的药物组合物可以包含约100 mg、约120 mg、约140 mg、约160 mg、约180 mg、约200 mg、约220 mg、约240 mg、约260 mg、约280mg、约300 mg、约320 mg、约340 mg、约360 mg、约380 mg、约400 mg、约420 mg、约440 mg、约460 mg、约480 mg、约500 mg、约520 mg、约540 mg、约560 mg、约580 mg、约600 mg、约620mg、约640 mg、约660 mg、约680 mg、约700 mg、约720 mg、约740 mg、约760 mg、约780 mg、约800 mg、约820 mg、约840 mg、约860 mg、约880 mg、约900 mg、约920 mg、约940 mg、约960mg、约980 mg或约1000 mg的BCL-2抑制剂，例如，venetoclax或navitoclax。

在某些实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，例如，用于口服或胃肠外施用，其包含蛋白酶体抑制剂，例如，硼替佐米、marizomib或ixazomib。所述药物组合物可以包含至少约0.5 mg至约50 mg、约1 mg至约30 mg、约1 mg至约20 mg、约1 mg至约10 mg、或约1 mg至约5 mg的量的蛋白酶体抑制剂。例如，本发明的药物组合物可以包含约0.5 mg、约1 mg、约2 mg、约3 mg、约4 mg、约5 mg、约6 mg、约7 mg、约8 mg、约9 mg、约10 mg、约11 mg、约12 mg、约13 mg、约14 mg、约15 mg、约16 mg、约17 mg、约18 mg、约19 mg或约20 mg的蛋白酶体抑制剂，例如，硼替佐米、marizomib或ixazomib。

在某些实施方案中，本发明的制剂包含式I、Ia或Ib的化合物或盐、BCL-2抑制剂或蛋白酶体抑制剂，其中所述化合物或盐是约70%至约99.99%、约80%至约99.9%、约85%至约99%、约90%至约99%、约95%至约99%、约97%至约99%、约98%至约99%、约98%至约99.9%、约99%至约99.99%、约99.5%至约99.99%、约99.6%至约99.99%、约99.8至约99.99%、或约99.9%至约99.99%不含杂质。

在某些实施方案中，本发明的药物组合物包含一定量（诸如本文描述的量）的式I、Ia或Ib的化合物或盐和BCL-2抑制剂，例如，含有100-400 mg的式Ib的化合物或盐和200-800 mg的BCL-2抑制剂（例如，venetoclax）的药物组合物。

在某些实施方案中，本发明的药物组合物包含一定量（诸如本文描述的量）的式I、Ia或Ib的化合物或盐和蛋白酶体抑制剂，例如，含有100-400 mg的式Ib的化合物或盐和1-10 mg的蛋白酶体抑制剂（例如，ixazomib）的药物组合物。

本文中公开的药物组合物可以呈液体制剂、固体制剂或它们的组合的形式。制剂的非限制性例子可以包括片剂、胶囊、丸剂、凝胶、糊剂、液体溶液和乳膏剂。在某些情况下，所述治疗剂（例如，式I、Ia或Ib的化合物或盐、BCL-2抑制剂或蛋白酶体抑制剂）可以呈结晶形式。在包含两种或更多种治疗剂的药物组合物中，可以使每种药物单独地结晶并然后组合，或可以使它们一起结晶。组合物可以包含处于一种或多种物理状态的两种或更多种治疗剂。例如，组合物可以是片剂，其包含在固体制剂中的一种治疗剂和在凝胶制剂中的另一种治疗剂或药物。在某些实施方案中，所述组合物是单一药物组合物，其包含处于第一种物理状态的式I、Ia或Ib的化合物或盐和处于第二种物理状态的BCL-2家族抑制剂或蛋白酶体抑制剂。

本发明的组合物可以进一步包含赋形剂或添加剂。赋形剂可以包括任意的和所有的溶剂、包衣剂、螯合剂、调味剂、着色剂、润滑剂、崩解剂、防腐剂、甜味剂、消泡剂、缓冲剂、聚合物、抗氧化剂、粘合剂、稀释剂和媒介物(或载体)。通常，所述赋形剂与本发明的治疗组合物相容。

用于口服施用的液体制剂可以呈例如溶液、糖浆或混悬液的形式，或者它们可以呈现为干燥产品，用于在使用前用水或其它合适的媒介物重构。通过常规方案用药学上可接受的添加剂诸如助悬剂(例如，山梨醇糖浆、甲基纤维素或氢化的可食用的脂肪)、乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯胶)、非水性的媒介物(例如，扁桃仁油、油酯或乙醇)、防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)以及人造的或天然的着色剂和/或甜味剂，可以制备这样的液体制剂。

本发明进一步包括包含活性成分的无水组合物和剂型，因为水可以促进某些化合物的降解。使用无水或低含水成分和低水分或低湿度条件，可以制备本发明的无水组合物和剂型。如果预见到在生产、包装和/或贮存过程中与水分和/或湿度的实质接触，那么可以将含有乳糖的本发明的组合物和剂型制成无水的。可以制备和贮存无水组合物，使得它的无水性质得以保持。因此，可以使用已知会防止暴露于水的材料来包装无水组合物，使得它们可以被包含在合适的处方药物盒中。合适的包装的例子包括、但不限于气密密封的箔、塑料、单位剂量容器、泡罩包和条状包。

本文描述的成分可以根据常规药物配混技术与药用载体在紧密混合物中组合。所述载体可以呈多种形式，取决于施用所需的制剂形式。在制备用于口服剂型的组合物时，任何常用的药物介质都可以用作载体，例如，在口服液体制剂(诸如混悬液、溶液和酏剂)或气雾剂的情况下使用水、二醇、油、醇、矫味剂、防腐剂、着色剂；或者在口服固体制剂的情况下可以使用载体诸如淀粉、糖、微结晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂，在某些实施方案中，不使用乳糖。例如，对于固体口服制剂，合适的载体包括粉末、胶囊和片剂。如果需要的话，可以通过标准的水性或非水性技术将片剂包衣。

可以充当药学上可接受的载体的材料的一些例子包括：(1)糖类，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉类，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素和它的衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)黄蓍胶粉末；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；(9)油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇类，诸如丙二醇；(11)多元醇，诸如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯类，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等张盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；和(21)在药物制剂中采用的其它无毒的相容物质。

适合用于用在剂型中的粘合剂包括、但不限于：玉米淀粉、马铃薯淀粉或其它淀粉、明胶、天然的和合成的树胶诸如阿拉伯胶、海藻酸钠、海藻酸、其它海藻酸盐、黄蓍胶粉末、瓜尔胶、纤维素及其衍生物(例如，乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠)、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、预胶化淀粉、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、及其混合物。

用于用在本文公开的组合物和剂型中的合适填充剂的例子包括、但不限于：滑石、碳酸钙(例如，颗粒或粉末)、微晶纤维素、粉末状纤维素、葡聚糖结合剂、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、预胶化淀粉、及其混合物。

当期望将水性悬浮液和/或酏剂用于口服施用时，在其中的活性成分可以与多种甜味剂或矫味剂、着色物质或染料组合，并且如果期望的话，可以与乳化剂和/或助悬剂以及稀释剂诸如水、乙醇、丙二醇、甘油及其各种组合进行组合。

在一个实施方案中，所述组合物可以包括增溶剂以确保本发明的化合物的良好溶解和/或溶出，并使本发明的化合物的沉淀最小化。对于非口服使用的组合物，例如，用于注射的组合物，这可以是特别重要的。还可以加入增溶剂来增加亲水药物和/或其它组分（诸如表面活性剂）的溶解度，或者维持所述组合物作为稳定的或均匀的溶液或分散体。

本文描述的药物组合物可以适合于口服施用给有此需要的受试者。在某些情况下，可以制备用于口服施用的缓释制剂，以便实现与胃肠道中的体液接触的活性剂的控释，和提供血浆中基本上恒定的且有效的活性剂水平。为此目的，可以将晶体形式包埋在可生物降解的聚合物、水溶性的聚合物或二者的混合物的聚合物基质和任选的合适表面活性剂中。在该背景下，包埋可以是指将微米颗粒掺入聚合物的基质中。还通过经由已知的分散或乳液包被技术包裹分散的微米颗粒或乳化的微滴而得到控释制剂。

在某些实施方案中，所述组合物可以配制在食品组合物中。例如，所述组合物可以是饮料或其它液体、固体食品、半固体食品，其含有或不含食品载体。例如，所述组合物可以包括补充了本文描述的任意组合物的红茶。所述组合物可以是补充了本文描述的任意组合物的乳制品。在某些实施方案中，可以将所述组合物配制在食品组合物中。例如，所述组合物可以包含饮料、固体食品、半固体食品或食品载体。

在某些实施方案中，所述药物制剂可以作为在油性或水性媒介物中的无菌混悬液、溶液或乳剂而呈适合于胃肠外注射的形式，且可以含有配制药物诸如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。用于胃肠外施用的药物制剂包括：例如，水溶形式的活性化合物的水溶液。可以将活性化合物的混悬液制备为例如油性注射混悬液。合适的亲脂溶剂或媒介物包括脂肪油诸如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，诸如油酸乙酯、棕榈酸异丙酯或中链甘油三酯，或脂质体。在优选的实施方案中，用于胃肠外施用的制剂是水性悬浮液。

本文所述的化合物可以在一定浓度范围内存在于组合物中，所述范围由选自上述浓度中的任一个的上值和下值限定。例如，本发明的化合物或盐可以以约1 nM至约100 mM、约10 nM至约10 mM、约100 nM至约1 mM、约500 nM至约1 mM、约1 mM至约50 mM、约10 mM至约40 mM、约20 mM至约35 mM、或约20 mM至约30 mM的浓度存在于所述制剂中。

用于制备包含本文所述化合物的组合物的方法可以包括用一种或多种惰性的、药学上可接受的赋形剂配制所述化合物。液体组合物包括，例如，在其中溶解化合物的溶液，包含化合物的乳剂，或含有包含本文中公开的化合物的脂质体、胶束或纳米颗粒的溶液。这些组合物还可以含有小量的无毒辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂和其它药学上可接受的添加剂。

用于注射的制剂可以存在于单位剂型中，例如，在安瓿中或在多次剂量容器中，并加入防腐剂。所述组合物可以呈诸如在油性或水性媒介物中的混悬液、溶液或乳剂等形式，且可以含有配制药物，诸如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。所述组合物可以存在于单位剂量或多次剂量容器（例如密封的安瓿和小瓶）中，且可以以粉末形式或在冷冻干燥的(低压冻干的)条件下储存，仅需要在即将使用前加入无菌液体载体，例如，盐水或无菌的无热原水。可以从前述种类的无菌粉剂、颗粒和片剂制备即时注射溶液和混悬液。

用于胃肠外施用的药物制剂包括活性化合物的水性的和非水性的(油性的)无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使所述制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；和水性的和非水性的无菌混悬液，其可以包括助悬剂和增稠剂。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油（例如芝麻油）或合成脂肪酸酯（例如油酸乙酯或甘油三酯）或者脂质体。

本文描述的组合物，例如，式I、Ia或Ib的化合物或盐或BCL-2抑制剂或蛋白酶体抑制剂的药物组合物或式I、Ia或Ib的化合物与BCL-2抑制剂或蛋白酶体抑制剂的共同制剂，可以每天施用一次或超过一次。可以连续施用所述组合物(例如，在治疗方案的持续时间中没有间断地每天施用)。在某些情况下，所述治疗方案可以是小于1周、1周、2周、3周、1个月或大于1个月。在某些情况下，在至少12周的阶段中施用本发明的组合物。在其它情况下，将所述组合物施用1天、至少2个连续天、至少3个连续天、至少4个连续天、至少5个连续天、至少6个连续天、至少7个连续天、至少8个连续天、至少9个连续天、至少10个连续天或至少大于10个连续天。在某些情况下，可以每周1次、每周2次、每周3次、每周4次、每周5次、每周6次、每周7次、每周8次、每周9次、每周10次、每周11次、每周12次、每周13次、每周14次、每周15次、每周16次、每周17次、每周18次、每周19次、每周20次、每周25次、每周30次、每周35次、每周40次、或每周大于40次施用治疗有效量。在某些情况下，可以每天1次、每天2次、每天3次、每天4次、每天5次、每天6次、每天7次、每天8次、每天9次、每天10次或每天大于10次施用治疗有效量。在某些情况下，每天至少2次施用所述组合物。在另外情况下，至少每小时、至少每2小时、至少每3小时、至少每4小时、至少每5小时、至少每6小时、至少每7小时、至少每8小时、至少每9小时、至少每10小时、至少每11小时、至少每12小时、至少每13小时、至少每14小时、至少每15小时、至少每16小时、至少每17小时、至少每18小时、至少每19小时、至少每20小时、至少每21小时、至少每22小时、至少每23小时或至少每天施用所述组合物。

可以急性地或长期地施用本发明的药物组合物。可以施用本发明的药物组合物作为单次治疗或作为疗程。可以每天1次、每天2次、每天3次、在早晨、在晚上、在睡前、或在一天中连续地施用治疗。可以每天、每隔一天、每3天、每周2次、每周1次、每隔一周、每月、每6周、每隔月、每3个月、每6个月、每年、每隔年、每5年或根据需要应用治疗。

在某些实施方案中，可以将施用的药物的剂量在某个时间长度暂时减小或暂时停止。在某些实施方案中，所述患者将具有休药期，其中所述患者在一段时间中不接受药物或接受减小的量的药物。休药期可以是，例如，2天至1年，包括仅作为示例，2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天或超过28天。休药期可以是约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约7个月、约8个月、约9个月、约10个月、约11个月或约12个月。在休药期中的剂量减小可以是，例如，原始施用剂量的10%-100%，包括仅作为示例10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%和100%。对于其它例子，所述剂量减小可以是在10%至100%之间、20%至80%之间、30%至70%之间、50%至90%之间、80%至100%之间或90%至100%之间。

一旦已经发生患者的状况的改善，如果必要的话可以施用维持剂量。随后，随着症状而变化，可以减小剂量或施用频率或二者至可以保持改善的疾病、病症或病况的水平。

另外的施用本文描述的制剂的方法包括，例如，限于以下递送：经由肠内途径（包括口服、胃或十二指肠饲管、直肠栓剂、直肠灌肠剂）、胃肠外途径、注射、输注、动脉内、心内、真皮内、十二指肠内、骨髓内、肌肉内、骨内、腹膜内、鞘内、血管内、静脉内、玻璃体内、前房内、硬膜外、皮下、吸入、透皮、透粘膜、舌下、含服、局部、皮内、真皮、灌肠滴剂、鼻内和阴道施用。可以将本文所述化合物局部地施用至需要治疗的区域，例如通过在外科手术中局部输注、局部应用诸如乳膏剂或软膏剂、注射、导管或植入物。所述施用还可以是通过在患病的组织或器官的部位处的直接注射。

施用的阶段的长度和/或施用量可以由医师或任意其它类型的临床医师确定。所述医师或临床医师可以观察受试者对施用的组合物的应答并基于受试者的表现而调节剂量。例如，对于在能量调节中表现出减少的效应的受试者，可以将剂量增加以达到期望的结果。

在某些实施方案中，本文描述的联合疗法可以在相同途径中同时一起施用，或单独施用。在某些实施方案中，使用相同的或不同的施用途径，可以施用所述组合物中的组分。

在某些实施方案中，本发明也提供了制备本文描述的组合物的方法。在某些实施方案中，本文描述的组合物的制备包括混合或组合两种或更多种组分。

在某些实施方案中，所述组合物可以与药学活性剂或治疗剂、载体和/或赋形剂组合或混合。本文描述了这样的组分的例子。可以将组合的组合物配制成单位剂量作为片剂、胶囊剂、凝胶胶囊剂、缓慢释放片剂等。

在某些实施方案中，制备所述组合物，从而获得含有一种或多种组分的基本上均匀的混合物的固体组合物，使得所述一种或多种组分均匀地分布在所述组合物中，致使该组合物可容易地细分为同等有效的单位剂型，例如片剂、丸剂和胶囊剂。

可以将单位剂量包装在要转移给用户的容器中。可以将单位剂量包装在试管、缸、盒、瓶、袋、托盘、卷筒、瓶子、注射器或罐中。

本发明的另一个方面提供了在施用本文描述的组合组合物指定的时间段以后在一个或多个受试者中达到预期效应。例如，在给受试者施用所述组合物1、2、3、4、6、8、10、12、24或52周以后，可以观察到本文描述的组合物的有益效果。

在某些实施方案中，可以通过联合治疗方案来施用本文描述的联合疗法。联合治疗方案可以包括这样的治疗方案：其中在用本文描述的第二种药物治疗之前、过程中或之后开始本文描述的化合物或其药学上可接受的盐的施用，并继续直到使用第二种药物的治疗过程中的任何时间或使用第二种药物的治疗终止以后。本发明也包括这样的治疗：其中在治疗阶段中同时地或在不同时间和/或在递减或递增的间隔施用联合使用的本文描述的化合物或其药学上可接受的盐和第二种药物。联合治疗还包括定期治疗，其在不同时间开始和停止以辅助患者的临床处理。

在某些实施方案中，考虑到与两种治疗方式有关的差别毒性，所述联合疗法可以提供治疗优点。例如，使用CDK抑制剂（诸如本文描述的那些）的治疗可以导致用所述抗癌药（例如，BCL-2抑制剂或蛋白酶体抑制剂）没有看到的特定毒性，反之亦然。这样，该差别毒性可以允许每种治疗以所述毒性没有发生或最小时的剂量施用，使得所述联合疗法一起提供治疗剂量，同时避免联合药物中的每种组分的毒性。此外，当作为联合治疗的结果实现的治疗效应是协同效应时，可以甚至进一步减小每种药物的剂量，从而在甚至更大的程度上降低有关的毒性。

可以在疾病或病况发生之前、过程中或之后施用本文所述化合物或其药学上可接受的盐、以及联合疗法，且施用含有化合物的组合物的时机会变化。本文所述化合物可以用作预防剂，且可以连续施用给具有发生病况或疾病的倾向的受试者，以便预防疾病或病况的发生。可以在症状过程中或在症状发作以后尽快地将本文所述化合物及其组合物施用给受试者。可以在检测到或怀疑疾病或病况的发作以后可行地尽快施用本文描述的化合物，并持续对于所述疾病的治疗而言必要的时间长度。

实施例

下述实施例为了阐述本发明的不同实施方案的目的而给出，且无意以任何方式限制本发明。本发明的实施例与本文所述的方法一起在目前代表优选的实施方案，其是示例性的，且无意作为对本发明的范围的限制。本领域技术人员会做出在其中的变化和其它用途，它们被包括在由权利要求的范围限定的本发明的精神内。

对于所有体外药物作用机制研究，使用下述的材料和方法。

将表1中所示的附着的或悬浮的细胞系分别在6-孔平皿或T10烧瓶中处理，在处理前以100万/ml的密度接种在3-10 ml的总体积中。将用于体外细胞处理的所有药物配制在水/DMSO中以达到所需的浓度(如在各个图标记/图例中所述)，其中DMSO浓度不超过0.01%。在表中在‘CIVO微量注射研究’下指示药物来源。在实验时间点收获细胞：如各图中所示在处理后2、6或24小时，首先将细胞在15 ml falcon试管中在冰冷的PBS中洗涤2次，在1000rpm离心5分钟，随后如在下面部分中所述裂解各种细胞沉淀物。注：通过在几次传代中在具有逐步增加的多柔比星浓度的培养基中培养亲本系，在Presage产生药物抗性的NUDHL1Dox 1000 nM和Toledo Dox 1000 nM细胞系。当达到对1uM Dox的抗性时，使用这些细胞产生异种移植物。

对于所有蛋白质印迹分析研究，使用下述的材料和方法。

如下制备蛋白裂解物：将含有1X-3X Halt蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合液(100X,Pierce)的冰冷1X RIPA缓冲液(来自10X, Millipore)加入细胞沉淀物，随后脉冲声处理(~3-5秒) 3次。通过在14K rpm离心15-20分钟来澄清裂解物，并收集上清液(裂解物)用于进一步分析。为了从冷冻保存的异种移植物肿瘤组织制备裂解物，将组织首先在上述裂解缓冲液中使用手提式组织匀浆器(Cole Palmer)匀浆化，随后如上所述脉冲声处理和离心。在冰冷的条件下进行以上步骤。使用含有1x RIPA的适当空白对照，使用Bradford测定(Biorad)在1:10或更高稀释度定量蛋白样品。将20-25微克的来自每个样品的蛋白使用BOLT 4-12%Bis-Tris凝胶(Thermofisher)进行SDS-PAGE，并使用生产商的方案转移至0.45或0.2微米孔径膜(基于蛋白分子大小适用)和硝酸纤维素(NC)或pvdf (Thermofisher)，在5%牛奶中在室温封闭1小时，用第一抗体(表2)在4℃探测过夜，并用对应的HRP-缀合的第二抗体(Jackson Immunoresearch, 1:10,000-1:20,000稀释度)在室温探测1小时。在每次抗体温育以后进行3次PBS/0.01%吐温-20洗涤(每次5-10分钟)。将ECL化学发光底物(Pierce或GE)和放射自显影胶片(Thermofisher)用于蛋白信号的检测。

对于所有体内研究，使用下述材料和方法。

在小鼠中的所有工作经IACUC Board of Presage Biosciences, Seattle, WA批准。所有相关操作在麻醉下执行，并做出所有努力以使疼痛和痛苦最小化。用于该研究的小鼠在实验端点之前都没有生病或死亡，且所有小鼠接受如下所述的药物治疗，经历常规健康监测，并在实验结束时人道地安乐死。使用下表(表3)中的以下细胞系/小鼠品系产生皮下胁腹异种移植物。使用1 ml注射器(BD 309659)和27G针头(BD 305109)，将200ul细胞混悬液与基质胶(Corning)一起以1:1比率注射进右胁腹中。

对于所有CIVO微量注射研究，使用下述材料和方法。

当肿瘤体积达到大约1000 mm³时，将小鼠招募进CIVO药物研究中。使用如前面描述的CIVO装置(Klinghoffer等人, Science Translational Medicine 2015)执行微量注射研究。将所述装置构造成具有6个注射针集合（用于6 mm注射长度）和3 μl的总体积递送。将荧光跟踪标志物(FTM)与每种药物或药物组合一起在用于递送的媒介物中加入每个药物蓄池。所有微剂量等同于或低于在FDA关于探索IND(研究用新药)研究的指南下允许的剂量，且取决于药物在媒介物中的溶解度。注射的药物的总量列出在下表4中。

对于所有全身性药物效力研究，使用下述材料和方法。

当肿瘤达到150-200 mm³的平均体积时，将小鼠招募用于研究。将肿瘤体积计算为V =长度x宽度x高度，所有三个尺寸使用数字测径器与体重一起测量。在以下情况下，从研究除去动物：三个测量的肿瘤尺寸中的任一个超过2 cm，体积超过2500 mm³，溃疡形成或体重损失大于20%。

将肿瘤生长抑制%(TGI)定义为：

其中测量结果是各个组的肿瘤平均值。Wilcoxon Rank Sum或Mann-Whitney检验用作统计检验以确定治疗组之间的差异。

下面详述了药物剂量、施用途径、计划和制剂方案。为经口管饲使用Instech,Ref: FTP-20-38饲管，且为静脉内(静脉内)使用BD胰岛素注射器。

DLBCL研究

●RIVA: voruciclib 200 mpk (口服) 6天用药/1天停药和ABT 199 (口服) 1 mpk 2次/周持续4周

●SUDHL4: voruciclib 200 mpk (口服) 6天用药/1天停药和ABT 199 (口服) 25mpk 6天用药/1天停药持续4周

●U2932: voruciclib 200 mpk (口服) 6天用药/1天停药和ABT 199 (口服) 10 mpk2次/周持续4周。

AML研究

●SKM1: voruciclib 200 mpk (口服) 6天用药/1天停药+ ABT 199 (口服) 10 mpk6天用药/1天停药持续3周。

TNBC研究

●HCC1187: voruciclib 200 mpk (口服) 5天用药/2天停药+ Ixazomib/MLN2238(口服) 3 mpk第3、6、10、13天持续2周

●HCC1187: Palbociclib 120 mpk (口服)每天1次共14天+ 硼替佐米0.42mpk (静脉内)第1、4、8、11天用药持续2周

●HCC1187: voruciclib 200 mpk (口服) + 硼替佐米0.42 mpk (静脉内)第1、4、8、11天用药持续2周。

实施例1. voruciclib是细胞周期蛋白依赖性激酶-9 (CDK9)的有效抑制剂

认为voruciclib是有效的CDK4/6抑制剂。与flavopiradol（一种已知的CDK9抑制剂）对比，试验了voruciclib对38种不同激酶的活性。图1描绘了voruciclib和flavopiridol的结构，以及voruciclib和flavopiradol的抑制特性的对比。图1证实，类似于flavopiradol，voruciclib是CDK9的有效抑制剂(K_i < 10nM)。但是，voruciclib具有比flavopiradol更高的对CDK的特异性。图1表明，flavopiradol是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶MAK和ICK的有效抑制剂，而voruciclib没有表现出MAK或ICK的有效抑制。MAK和ICK与肠上皮细胞有关，且可能导致与flavopiradol治疗有关的严重腹泻。另一方面，voruciclib可能表现出更少的胃肠副作用。DiscoveRx和Thermofisher筛选：在10 uM和50 nM时DiscoveRx ScanMax激酶组的468个激酶测定和ThermoFisher SelectScreen激酶组的414个激酶测定的激酶活性的抑制百分比。将试验物在Presage预先称重进硅烷化的琥珀色螺旋帽小瓶中并运输至DiscoveRxand Reaction Biology。对于ThermoFisher，在运输前将所述化合物在环境条件称重并溶解在10 mM DMSO中。接收后，将小瓶在-20℃储存备用。将粉末在10 mM溶解在DMSO中。

图2显示了voruciclib对CDK 1、4、6和9的单数位nM效能，具有CDK9的最强抑制。反应生物学描绘：研究的目的是确定48种激酶对voruciclib盐酸盐的敏感性的排序次序。试验设备是Reaction Biology Corp.。使用过滤器结合测定用放射性的γ-33P-ATP作为磷酸盐供体来测量激酶活性。ATP浓度接近各种激酶的Km。对于每种激酶，从试验物的10-点浓度曲线计算IC50值并转化成Ki值。在这里研究的48种激酶已经在以前的筛选实验中鉴别为最有期望的靶候选物。

实施例2. voruciclib与Bcl-2家族抑制剂venetoclax (ABT-199)组合表现出协 同效应

用媒介物、单独的voruciclib、单独的venetoclax (ABT-199)、或voruciclib和venetoclax的组合处理NU-DHL-1弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)细胞。图3A-3D显示了关于抗细胞凋亡蛋白、诱导的髓样白血病细胞分化蛋白Mcl-1 (MCL-1) (以红色显示)染色的NU-DHL-1细胞。图3A显示了仅用媒介物处理的细胞。在图3B中，单独的voruciclib减少MCL-1的表达，表现为轮廓线301中的更深色区域轮廓线的增加。单独的venetoclax增加MCL-1的表达，如在图3C的轮廓线302内的浅色区域中所示。voruciclib和venetoclax的组合导致MCL-1表达的显著减少，显示在图3D中，显示在轮廓线303的暗区域中。

图4A-4D证实了MCL-1抑制与细胞凋亡的协同诱导之间的关联。用媒介物、单独的voruciclib、单独的venetoclax (ABT-199)、或voruciclib和venetoclax的组合处理NU-DHL-1弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)细胞。针对作为细胞凋亡标志物的经切割的胱天蛋白酶-3 (CC3) (以红色显示)将细胞染色。图4A显示了仅用媒介物处理的细胞。在图4B中显示的单独的voruciclib表明轻微增加的CC3的表达，如在轮廓线401内的浅色区域所示。类似地，在图4C中显示的单独的venetoclax表明轻微增加的CC3的表达，如在轮廓线402内的浅色区域所示。在图4D中的voruciclib和venetoclax的组合表明协同地增加的CC3的表达，如在轮廓线403内的大量浅色区域中所示，从而提示经处理的细胞中增加的细胞凋亡诱导。

图6A-6E证实，voruciclib和venetoclax对细胞凋亡的协同效应在多种DLBCL模型中是可再现的。简而言之，用单独的voruciclib、单独的venetoclax或组合的voruciclib和venetoclax处理RIVA、Toledo、Toledo/Dox1000、NUDHL和NUDHL/Dox1000细胞，分别如在图6A、图6B、图6C、图6D和图6E中所示。单独的voruciclib和单独的venetoclax对CC3表达具有轻微效应，但是，voruciclib和venetoclax的组合证实了在所有五种DLBCL模型之间的CC3表达的协同诱导。

图7描绘了该协同效应的提议模型。通过经由CDK9抑制MCL-1，voruciclib当与Bcl-2抑制组合时可以将细胞转换至细胞凋亡。

实施例3. voruciclib与Bcl-2家族抑制剂navitoclax组合表现出协同效应

用媒介物、单独的voruciclib、单独的navitoclax (ABT-263)、或voruciclib和navitoclax的组合处理Ramos伯基特淋巴瘤细胞。图5A-5D显示了针对作为细胞凋亡标志物的经切割的胱天蛋白酶-3 (CC3) (以红色显示)染色的Ramos伯基特淋巴瘤细胞。图5A显示了仅用媒介物处理的细胞。如在图5B中所示的单独的voruciclib表明CC3的表达的轻微增加，如在轮廓线501的浅色区域内所示。类似地，如在图5C中所示的单独的venetoclax表明CC3的表达的轻微增加，如在轮廓线502的浅色区域内所示。voruciclib和navitoclax的组合表明CC3的表达的显著增加，如在图5D的轮廓线503内的大量浅色区域中所示，从而提示经处理的细胞中增加的细胞凋亡诱导。

实施例4. voruciclib与蛋白酶体抑制剂组合表现出协同效应

执行药物筛选以同时试验多种药物。图8A显示了注射进HCC1187三重阴性的乳腺癌(TNBC)异种移植物模型中的不同化合物的列表。图8B显示了异种移植物中的MCL-1诱导的平均%变化。蛋白酶体抑制剂硼替佐米表现出MCL-1表达的增加。图8C证实了用媒介物处理的异种移植物。图8D显示了用硼替佐米处理并针对MCL-1表达(以红色显示)染色的异种移植物。硼替佐米显著地增加这些细胞中的MCL-1表达，如在轮廓线801内的浅色区域的增加所示。

实施例5. voruciclib与蛋白酶体抑制剂marizomib组合表现出协同效应

将NudHL1 DLBCL异种移植物用媒介物、单独的voruciclib、单独的marizomib、或组合的voruciclib和marizomib处理6小时。图9A-9D描绘了如上处理并针对作为细胞凋亡标志物的经切割的胱天蛋白酶-3 (CC3)(以红色显示)染色的细胞。图9A显示了仅用媒介物处理的细胞。如在图9B中所示，用单独的voruciclib处理的细胞具有较少至无CC3表达增加，如在轮廓线901内的少量浅色区域所证实的。类似地，如在图9C中所示，用单独的marizomib处理的细胞具有较少至无CC3表达增加，如在轮廓线902内的少量浅色区域所证实的。用组合voruciclib和marizomib处理的细胞表现出CC3表达的显著增加，如在图9D的轮廓线903内的大量浅色区域所证实的，从而提示对这些细胞中的细胞凋亡诱导的协同效应。

实施例6. voruciclib与蛋白酶体抑制剂硼替佐米组合表现出协同效应

简而言之，将NudHL1 DLBCL异种移植物用媒介物、单独的voruciclib、单独的硼替佐米、或组合的voruciclib和硼替佐米处理6小时。图10A-10D描绘了如上处理并针对作为细胞凋亡标志物的经切割的胱天蛋白酶-3 (CC3) (以红色显示)染色的细胞。

图10A显示了仅用媒介物处理的细胞。如在图10B中所示，用单独的voruciclib处理的细胞具有较少至无CC3表达增加。类似地，如在图10C中所示，用单独的硼替佐米处理的细胞具有较少至无CC3表达增加，如在轮廓线1001内的少量浅色区域所证实的。用组合voruciclib和硼替佐米处理的细胞表现出CC3表达的显著增加，如在图10D的轮廓线1002内的大量浅色区域所证实的，从而提示对这些细胞中的细胞凋亡诱导的协同效应。

图11描绘了在HCC1187三重阴性的乳腺癌(TNBC)异种移植物模型上执行的类似实验。简而言之，用媒介物、单独的voruciclib、单独的硼替佐米、或组合的voruciclib和硼替佐米处理细胞。然后针对作为细胞凋亡标志物的CC3表达(以红色显示)将细胞染色。图11A显示了仅用媒介物处理的细胞。如在图11B中所示，用单独的voruciclib处理的细胞具有较少至无CC3表达增加。类似地，如在图11C中所示，用单独的硼替佐米处理的细胞具有较少至无CC3表达增加。用组合voruciclib和硼替佐米处理的细胞表现出CC3表达的显著增加，如在图11D的轮廓线1101内的大量浅色区域所证实的，从而提示对这些细胞中的细胞凋亡诱导的协同效应。

用媒介物、voruciclib (200mg/kg)、硼替佐米(0.42mg/kg)、或组合的voruciclib(200mg/kg)和硼替佐米(0.42mg/kg)处理的HCC1187三重阴性的乳腺癌(TNBC)异种移植物小鼠模型。随时间测量每只小鼠中的肿瘤体积，结果显示在图12A-12D中。用voruciclib和硼替佐米的组合处理的小鼠(图12D)表现出与用单独的voruciclib(图12B)或单独的硼替佐米(图12C)处理的小鼠相比归一化的肿瘤体积随时间的显著减小。图12E显示了MLC-1蛋白表达的蛋白质印迹。与未处理的样品相比，用voruciclib处理的细胞减少了MCL-1蛋白表达，而与未处理的样品相比，用硼替佐米处理的细胞增加了MCL-1蛋白表达。此外，voruciclib减少了硼替佐米诱导的MCL-1表达的增加。

图13证实，单独的voruciclib、单独的硼替佐米或组合的voruciclib和硼替佐米的治疗未影响小鼠的体重。该数据可以提示，voruciclib和硼替佐米的联合疗法可以表现出较少至无毒性。

此外，voruciclib废除了硼替佐米诱导的促存活蛋白MCL-1和E3泛素-蛋白连接酶XIAP的上调。图15A描绘了CDK9的voruciclib抑制的提议模型。图15B显示了用单独的voruciclib、单独的硼替佐米、或组合的voruciclib和硼替佐米处理的细胞中的MCL-1和XIAP蛋白水平。蛋白质印迹证实，voruciclib会减少这些细胞中由硼替佐米诱导的MCL-1和XIAP蛋白的上调。

实施例7. Palbociclib（一种CDK 4/6抑制剂）与硼替佐米组合没有表现出协同效 应

用媒介物、帕博西尼 (120mg/kg)、硼替佐米(0.42mg/kg)、或组合的帕博西尼 (120mg/kg)和硼替佐米(0.42mg/kg)处理HCC1187三重阴性的乳腺癌(TNBC)异种移植物小鼠模型。随时间测量每只小鼠中的肿瘤体积，结果显示在图14中。不同于voruciclib，与硼替佐米组合的帕博西尼没有表现出对肿瘤体积的协同效应。Palbociclib是一种特异性的CDK4/6抑制剂，而voruciclib靶向CDK9。因而，该差异可以是CDK9-特异性的。

实施例8. 内质网(ER)应激应答途径可能在voruciclib与硼替佐米组合的协同效 应中起作用

图16A显示了用硼替佐米处理过的组织切片。硼替佐米在某些细胞中诱导细胞凋亡，而一些细胞似乎对硼替佐米治疗具有抗性。针对ER伴侣蛋白GRP178/BiP将所述细胞染色。图16B证实，对硼替佐米引起的细胞凋亡具有抗性的细胞会表达GRP178/BiP。

接着，用单独的voruciclib、单独的硼替佐米、单独的衣霉素(一种ER应激诱导物)或组合处理HCC1187三重阴性的乳腺癌细胞。单独的衣霉素在6小时强烈地诱导X-盒结合蛋白1 (XBP1)，即ER应激途径的IRE1α分支的一种ER应激蛋白。此外，衣霉素和硼替佐米在24小时强烈地诱导XBP1表达(图18B)。voruciclib与硼替佐米或衣霉素的组合减少了XBP1上调。这些结果提示，voruciclib可能抑制ER应激途径的IRE1α分支(图18B)。voruciclib也减少硼替佐米诱导的XBP1的转录诱导(图19A-19B)。将HCC1187细胞用voruciclib (1.5uM)、硼替佐米(10nM)、STF083010（IRE1a核糖核酸内切酶活性抑制剂）(Millipore) (60uM)或衣霉素(Sigma)(100nM)处理4小时。将mRNA使用Qiagen RNAeasy Kit收获，使用Nanodrop分光光度计定量。使用High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (AppliedBiosystems)和生产商的方案，使用来自每种条件的1 ug mRNA产生cDNA。使用100ng cDNA进行PCR测定以扩增XBP1未剪接或剪接形式(Thermofisher PCR Supermix)- 94℃保持2分钟，(94℃保持15秒，55℃保持30秒，72℃保持1 min) x 30个循环。72℃保持7分钟，保持在4℃。检测XBP1剪接的和未剪接的变体。

实施例9. voruciclib与蛋白酶体抑制剂ixazomib组合表现出协同效应

图20A-20D描绘了HCC1187三重阴性的乳腺癌(TNBC)异种移植物模型。简而言之，用媒介物、单独的voruciclib、单独的ixazomib、或组合的voruciclib和ixazomib处理细胞。然后针对作为细胞凋亡标志物的CC3表达(以红色显示)将细胞染色。

图20A显示了仅用媒介物处理的细胞。如在图20B中所示，用单独的voruciclib处理的细胞具有较少至无CC3表达增加，如在轮廓线2001内的少量浅色区域所证实的。类似地，如在图20C中所示，用单独的ixazomib处理的细胞具有较少至无CC3表达增加，如在轮廓线2002内的少量浅色区域所证实的。用组合voruciclib和ixazomib处理的细胞表现出CC3表达的显著增加，如在图20D的轮廓线2003内的大量浅色区域所证实的，从而提示对这些细胞中的细胞凋亡诱导的协同效应。

与ixazomib组合地试验了多种CDK抑制剂，如在图21A和21B中所示。仅与ixazomib组合的voruciclib表现出对肿瘤细胞的细胞凋亡的协同效应，如在轮廓线2101和2102内的浅色区域所证实的。单独的媒介物、单独的ixazomib、帕博西尼和ixazomib、dinaciclib和ixazomib、和flavopiradol和ixazomib都没有象voruciclib和ixazomib的组合那样表现出对肿瘤细胞的细胞凋亡的协同效应。

实施例10. voruciclib与venetoclax组合表现出协同效应

图22A-B阐述了在DLBCL的SU-DHL-4模型中来自voruciclib和venetoclax的协同作用。经切割的PARP (cPARP)可以用作细胞凋亡的生物标志物。为了评估voruciclib和venetoclax两种药物在一起的组合效力，将低剂量的每种(150 nM的voruciclib和20 nM的venetoclax)作为单一药物或作为组合在DLBCL的SUDHL4模型中进行了检查。将细胞暴露于药物24 h，然后裂解细胞，并使用对PARP、MCL-1、C-MYC和β肌动蛋白(作为图22A的蛋白负载对照)和BCL2（作为图22B中的另一种蛋白负载对照）的切割形式特异性的抗体通过蛋白质印迹进行检查。图22A表明，1.5 uM的voruciclib在DLBCL模型中抑制MCL1。

图22B利用0.15 uM浓度的voruciclib，其为作为单一药物被证实有效地诱导细胞凋亡的浓度的1/10。该水平的voruciclib对于抑制MCL-1表达而言维持一定的效力(对比图22B的泳道1和2)，而细胞向venetoclax的暴露会诱导MCL-1表达(对比图22B的泳道1和3)。低vorucicilib暴露也抑制venetoclax诱导的MCL-1 (对比图22B的泳道3和4)。

图23A-C阐述了在DLBCL的SU-DHL-4模型、OCI Ly10模型和U2932模型中来自voruciclib和venetoclax的协同作用。经切割的PARP (cPARP)可以用作细胞凋亡的生物标志物。为了评估voruciclib和venetoclax两种药物在一起的组合效力，将低剂量的每种作为单一药物或作为组合在DLBCL的三种模型中进行了检查。将细胞暴露于药物24 h，然后裂解细胞，并使用对PARP和β肌动蛋白(作为蛋白负载对照)的切割形式特异性的抗体通过蛋白质印迹进行检查。

图23A表明，0.15 uM voruciclib和20 nM venetoclax的组合在DLBCL的SUDHL4模型中表现出协同作用以诱导细胞凋亡，其中任一种化合物作为单一药物不会诱导细胞凋亡。图23B表明，5 uM voruciclib和50 nM venetoclax的组合在DLBCL的OCI Ly10模型中表现出协同作用以诱导细胞凋亡，其中任一种化合物作为单一药物不会显著地诱导细胞凋亡。图23C表明，5 uM voruciclib和50 nM venetoclax的组合在DLBCL的U2932模型中表现出协同作用以诱导细胞凋亡，其中两种化合物的组合明显大于每种化合物作为单一药物的简单累加。

实施例11. voruciclib抑制小鼠中DLBCL异种移植物肿瘤的MCL1表达

图24表明，voruciclib抑制小鼠中DLBCL异种移植物肿瘤的MCL1表达。给携带DLBCL异种移植物肿瘤(OCILY10)的小鼠每天通过经口管饲法施用voruciclib或媒介物对照持续5天，并在最终剂量后4 h收获肿瘤用于分析MCL-1表达。将肿瘤样品切成两半，将一半溶解在裂解缓冲液中用于蛋白质印迹分析，将另一半固定在福尔马林中并准备用于免疫组织化学。用对MCL-1或β肌动蛋白(蛋白负载对照)特异性的抗体进行每个治疗组的3只单独小鼠的肿瘤裂解物的蛋白质印迹。图表明，在100 mpk的voruciclib作为单一药物抑制DLBCL异种移植物肿瘤中的MCL1表达。

实施例12. voruciclib和venetoclax阻碍小鼠中的DLBCL异种移植物肿瘤的生长

图25A-B阐述了voruciclib和venetoclax的组合阻碍DLBCL异种移植物肿瘤的生长。给免疫缺陷的NOD SCID小鼠植入DLBCL的RIVA (活化的B-细胞，或ABC)模型。允许异种移植的肿瘤在NOD SCID宿主中生长直到它们达到200 mm³，在此时将异种移植的动物随机化至4个研究组: 1. 媒介物对照；2. 200 mpk的voruciclib；3.1 mpk的venetoclax；和4.200 mpk的voruciclib和1 mpk的venetoclax的组合。在每周6天中每天通过经口管饲法施用voruciclib，在循环之间停药1天。在每个每周循环的第1和4天通过经口管饲法施用venetoclax。由对研究中的每个受试者的治疗不知情的技师通过每周2次的肿瘤体积测量来评估药物效应。N=5-6只动物/治疗组。

图25A图示了4个研究组中的每一个的平均肿瘤体积(mm³)：媒介物，单一药物voruciclib，单一药物venetoclax，和voruciclib和venetoclax的组合。单一药物治疗在较长的研究天阶段中看到肿瘤体积的减小。联合治疗看到高得多的肿瘤体积大小的减小，在研究3周之前达到超过2倍的平均肿瘤体积减小。

图25B阐述了来自4个研究组中的每一个的动物的肿瘤图像：媒介物，单一药物voruciclib，单一药物venetoclax，和voruciclib和venetoclax的组合。媒介物肿瘤大小是最大的，如轮廓线2501所示。单一药物voruciclib的肿瘤较小，如轮廓线2502所示。单一药物venetoclax的肿瘤同样小于媒介物，如轮廓线2503所示。联合疗法肿瘤由轮廓线2504表示，其显著小于媒介物或单一药物疗法中的任一种的肿瘤，从而提示协同效应。

图26A-B阐述了voruciclib和venetoclax的组合阻碍DLBCL异种移植物肿瘤的生长。给免疫缺陷的NOD SCID小鼠植入DLBCL的U2932模型。允许异种移植的肿瘤在NOD SCID宿主中生长直到它们达到200 mm³，在此时将异种移植的动物随机化至4个研究组: 1. 媒介物对照; 2. 200 mpk的voruciclib; 3. 10 mpk的venetoclax；和4.200 mpk的voruciclib和10 mpk的venetoclax的组合。在每周6天中每天通过经口管饲法施用voruciclib，在循环之间停药1天。在每个每周循环的第1和4天通过经口管饲法施用venetoclax。由对研究中的每个受试者的治疗不知情的技师通过每周2次的肿瘤体积测量来评估药物效应。N=5-6只动物/治疗组。

图26A图示了4个研究组中的每一个的平均肿瘤体积(mm³)。单一药物治疗在较长的研究天阶段中看到肿瘤体积的减小。联合治疗几乎没有看到肿瘤生长，平均肿瘤体积在29天研究阶段中保持一致。

图26B图示了4个研究组中的每一个的受试者的按克(g)计算的平均体重。所有4个研究组表现出稳定的且一致的体重，即健康和安全性的一般指示。

图27A-B阐述了voruciclib和venetoclax的组合阻碍DLBCL异种移植物肿瘤的生长。给免疫缺陷的NOD SCID小鼠植入DLBCL的NUDHL1模型。允许异种移植的肿瘤在NOD SCID宿主中生长直到它们达到200 mm³，在此时将异种移植的动物随机化至4个研究组: 1. 媒介物对照; 2. 200 mpk的voruciclib; 3. 50 mpk的venetoclax；和4.200 mpk的voruciclib和50 mpk的venetoclax的组合。在每周6天中每天通过经口管饲法施用voruciclib，在循环之间停药1天。在每个每周循环的第1和4天通过经口管饲法施用venetoclax。由对研究中的每个受试者的治疗不知情的技师通过每周2次的肿瘤体积测量来评估药物效应。N=5-6只动物/治疗组。

图27A图示了4个研究组中的每一个的归一化的肿瘤体积(mm³)。单一药物治疗在较长的研究天阶段中看到肿瘤体积的减小。联合治疗看到高得多的肿瘤体积大小的减小，在研究3周之前达到超过2倍的平均肿瘤体积减小。

图27B阐述了来自4个研究组中的每一个的动物的肿瘤图像：媒介物，单一药物voruciclib，单一药物venetoclax，和voruciclib和venetoclax的组合。媒介物肿瘤大小是最大的，如轮廓线2701所示。单一药物voruciclib的肿瘤较小，如轮廓线2702所示。单一药物venetoclax的肿瘤同样小于媒介物，如轮廓线2703所示。联合疗法肿瘤由轮廓线2704表示，其显著小于媒介物或单一药物疗法中的任一种的肿瘤，从而提示协同效应。

图28阐述了voruciclib和venetoclax的组合阻碍DLBCL异种移植物肿瘤的生长。给免疫缺陷的NOD SCID小鼠植入DLBCL的SUDHL4模型。允许异种移植的肿瘤在NOD SCID宿主中生长直到它们达到200 mm³，在此时将异种移植的动物随机化至4个研究组: 1. 媒介物对照; 2. 200 mpk的voruciclib; 3. 25 mpk的venetoclax；和4.200 mpk的voruciclib和25 mpk的venetoclax的组合。在每周6天中每天通过经口管饲法施用voruciclib，在循环之间停药1天。在每周6天中每天通过经口管饲法施用venetoclax，在循环之间停药1天。由对研究中的每个受试者的治疗不知情的技师通过每周2次的肿瘤体积测量来评估药物效应。N=5-6只动物/治疗组。图28图示了4个研究组中的每一个的归一化的肿瘤体积(mm³)。单一药物治疗在研究天中看到肿瘤体积的增加。联合治疗看到比单一药物治疗和媒介物治疗更少的肿瘤生长。

图29的每个泳道代表单一SUDHL4异种移植物。蛋白质印迹一起表明，voruciclib会恢复被venetoclax废除的p53。在第26天在治疗后4小时收获肿瘤。将每个肿瘤切成2半。一半用于基于FFPE的IHC分析，另一半用于蛋白质印迹分析。

实施例13. voruciclib抑制AML细胞系中的MCL1表达

图30A-30C表明，voruciclib在AML细胞系中具有单一药物活性。将AML细胞系(SKM-1、MV-4-11和OCI-AML-3)保持不处理，或者暴露于临床上可达到的水平的voruciclib (1.5和5.0微摩尔) 2、6或24 h。在给定的时间点，将细胞裂解并用抗体进行蛋白质印迹分析，所述抗体特异性地识别磷酸化的RNA pol II (pSer2)、MCL-1、经切割的PARP和β-肌动蛋白。在所有三种AML细胞系(SKM-1、MV-4-11和OCI-AML-3)中，voruciclib抑制MCL-1并诱导细胞凋亡，如在轮廓线3001、3003和3005内所示。经切割的PARP (cPARP)可以用作细胞凋亡的生物标志物。在所有三种AML细胞系(SKM-1、MV-4-11和OCI-AML-3)中，voruciclib诱导细胞凋亡，如在轮廓线3002、3004和3006内所示。

实施例14. voruciclib和venetoclax组合诱导AML细胞系中的细胞死亡

图31表明，voruciclib和venetoclax的组合诱导AML细胞系中的协同细胞死亡。将AML细胞系(SKM-1、MV-4-11和OCI-AML-3)保持不处理，或者暴露于以前被证实低于诱导单一药物细胞凋亡所需水平的水平的voruciclib (1.5微摩尔)、venetoclax (100 nM)或在这些亚有效浓度的两种药物的组合24 h。在给定的时间点，将细胞裂解并用抗体进行蛋白质印迹分析，所述抗体特异性地识别磷酸化的RNA pol II (pSer2)、MCL-1、经切割的PARP和β-肌动蛋白。如轮廓线3101和3102内所示，当单独任一种药物没有诱导细胞凋亡时，voruciclib和venetoclax的组合诱导细胞凋亡(PARP)。观察到venetoclax在所有三种细胞系中诱导MCL-1上调。voruciclib抑制所有三种细胞系中由MCL-1驱动的抗性机制。

实施例15. voruciclib和venetoclax组合阻碍AML异种移植物中的肿瘤生长

图32表明，voruciclib和venetoclax的组合阻碍SKM1 AML异种移植物中的肿瘤生长。venetoclax的单一药物疗法具有与媒介物类似的归一化的肿瘤体积。voruciclib单一药物治疗表现出稍微更低的肿瘤体积，而voruciclib和venetoclax的组合极大地阻碍肿瘤生长，在研究的第22天之前得到的肿瘤体积是媒介物的肿瘤体积的大约一半。

实施例16. voruciclib作为单一药物在DLBCL模型中诱导细胞凋亡

图33表明，voruciclib诱导的细胞凋亡与MCL-1的抑制相关。使用了三种DLBCL模型：SUDHL4、RIvA和U2932。经切割的PARP (cPARP)可以用作细胞凋亡的生物标志物。蛋白质印迹表明，细胞凋亡随着voruciclib的浓度的增加而增加。类似地，voruciclib抑制MCL-1并随着voruciclib的浓度的增加而诱导细胞凋亡。

尽管在本文中已经显示和描述了本发明的优选实施方案，但是本领域技术人员将会明白，这样的实施方案仅作为示例提供。现在本领域技术人员会做出众多变体、变化和置换而不脱离本发明。应当理解，本文描述的发明的实施方案的各种替代方案可以用于实践本发明。以下权利要求意图限定本发明的范围，并且由此覆盖在这些权利要求和它们的等同方案的范围内的方法和结构。

Claims (66)

1.一种治疗血癌的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的由式I表示的CDK抑制剂或其药学上可接受的盐和治疗有效量的BCL-2抑制剂：

其中：

R₁是任选地被取代的苯基；

R₂和R₃各自独立地选自羟基和OR₈，其中R₈是任选地被取代的C₁-C₁₀-烷基；

R₄是任选地被取代的C₁-C₄-烷基；且

R₉是氢或任选地被取代的C₁-C₄-烷基。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述式I的化合物或盐由式Ia表示：

。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中R₁任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自羟基、氰基、卤素、氨基、C₁-C₄-烷基、C₁-C₄-烷氧基、C₁-C₄-羟基烷基、C₁-C₄-卤代烷基和硝基。

4.根据权利要求3所述的方法，其中R₁被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素和C₁-C₄-卤代烷基。

5.根据权利要求4所述的方法，其中R₁是2-氯-4-三氟甲基苯基。

6.根据权利要求1-5中的任一项所述的方法，其中R₂和R₃各自独立地选自羟基和OR₈，其中R₈是任选地被一个或多个取代基取代的C₁-C₁₀-烷基，所述取代基独立地选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。

7.根据权利要求6所述的方法，其中R₂和R₃各自是羟基。

8.根据权利要求1-7中的任一项所述的方法，其中R₄是被一个或多个取代基取代的C₁-C₄-烷基，所述取代基选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。

9.根据权利要求8所述的方法，其中R₄是被一个或多个取代基取代的C₁-C₄-烷基，所述取代基选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。

10.根据权利要求9所述的方法，其中R₄是2-羟基甲基。

11.根据权利要求1-10中的任一项所述的方法，其中R₉是任选地被羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基取代的C₁-C₄-烷基。

12.根据权利要求11所述的方法，其中R₉是甲基。

13.根据权利要求1所述的方法，其中式I的化合物由式Ib表示：

或其药学上可接受的盐。

14.根据权利要求1-13中的任一项所述的方法，其中所述BCL-2抑制剂是BH3-模拟物。

15.根据权利要求1-13中的任一项所述的方法，其中所述BCL-2抑制剂特异性地抑制Bcl-2蛋白。

16.根据权利要求1-13中的任一项所述的方法，其中所述BCL-2抑制剂选自navitoclax、venetoclax、A-1155463、A-1331852、ABT-737、obatoclax、TW-37、A-1210477、AT101、HA14-1、BAM7、S44563、sabutoclax、UMI-77、藤黄酸、maritoclax、MIM1、甲泼尼龙、iMAC2、Bax抑制剂肽V5、Bax抑制剂肽P5、Bax通道阻滞剂和ARRY 520三氟乙酸盐。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述BCL-2抑制剂选自navitoclax和venetoclax或其中任一种的药学上可接受的盐。

18.根据权利要求1-17中的任一项所述的方法，其中所述血癌选自急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性淋巴瘤(ALL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)、弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞性淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、套细胞淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、结节外边缘区B细胞淋巴瘤、结节边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤和原发性中枢神经系统淋巴瘤。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述血癌是弥漫性大B细胞性淋巴瘤、急性髓性白血病或慢性淋巴细胞白血病。

20.根据权利要求1-19中的任一项所述的方法，其中并行地施用所述CDK抑制剂和BCL-2抑制剂。

21.根据权利要求1-19中的任一项所述的方法，其中在彼此的约12小时内依次施用所述CDK抑制剂和BCL-2抑制剂。

22.根据权利要求21所述的方法，其中在彼此的约5小时内依次施用所述CDK抑制剂和BCL-2抑制剂。

23.根据权利要求1-19中的任一项所述的方法，其中将所述CDK抑制剂和BCL-2抑制剂共配制在药物组合物中。

24.根据权利要求1-23中的任一项所述的方法，其中每天、每隔一天或每三天施用所述CDK抑制剂和BCL-2抑制剂。

25.一种治疗癌症的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的由式I表示的CDK抑制剂或其药学上可接受的盐和治疗有效量的蛋白酶体抑制剂：

其中：

R₁是任选地被取代的苯基；

R₂和R₃各自独立地选自羟基和OR₈，其中R₈是任选地被取代的C₁-C₁₀-烷基；

R₄是任选地被取代的C₁-C₄-烷基；且

R₉是氢或任选地被取代的C₁-C₄-烷基。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述式I的化合物或盐由式Ia表示：

。

27.根据权利要求25或26所述的方法，其中R₁任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自羟基、氰基、卤素、氨基、C₁-C₄-烷基、C₁-C₄-烷氧基、C₁-C₄-羟基烷基、C₁-C₄-卤代烷基和硝基。

28.根据权利要求27所述的方法，其中R₁被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素和C₁-C₄-卤代烷基。

29.根据权利要求28所述的方法，其中R₁是2-氯-4-三氟甲基苯基。

30.根据权利要求25-29中的任一项所述的方法，其中R₂和R₃各自独立地选自羟基和OR₈，其中R₈是任选地被一个或多个取代基取代的C₁-C₁₀-烷基，所述取代基独立地选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。

31.根据权利要求30所述的方法，其中R₂和R₃各自是羟基。

32.根据权利要求25-31中的任一项所述的方法，其中R₄是被一个或多个取代基取代的C₁-C₄-烷基，所述取代基选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。

33.根据权利要求32所述的方法，其中R₄是被一个或多个取代基取代的C₁-C₄-烷基，所述取代基选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。

34.根据权利要求33所述的方法，其中R₄是2-羟基甲基。

35.根据权利要求25-34中的任一项所述的方法，其中R₉是任选地被羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基取代的C₁-C₄-烷基。

36.根据权利要求35所述的方法，其中R₉是甲基。

37.根据权利要求25所述的方法，其中式I的化合物由式Ib表示：

或其药学上可接受的盐。

38.根据权利要求25-37中的任一项所述的方法，其中所述蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、marizomib、ixazomib、双硫仑、表儿茶素-3-没食子酸盐、salinosporamide A、卡非佐米、ONX 0912、CEP-18770、MLN9708、环氧霉素、MG132和其中任一种的药学上可接受的盐。

39.根据权利要求38所述的方法，其中所述蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、marizomib、ixazomib和其中任一种的药学上可接受的盐。

40.根据权利要求25-39中的任一项所述的方法，其中所述癌症是血癌。

41.根据权利要求40所述的方法，其中所述血癌选自急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性淋巴瘤(ALL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)、弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞性淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、套细胞淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、结节外边缘区B细胞淋巴瘤、结节边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤和原发性中枢神经系统淋巴瘤。

42.根据权利要求41所述的方法，其中所述血癌是弥漫性大B细胞性淋巴瘤、急性髓性白血病或慢性淋巴细胞白血病。

43.根据权利要求25-39中的任一项所述的方法，其中所述癌症是三重阴性的乳腺癌(TNBC)。

44.根据权利要求25-43中的任一项所述的方法，其中并行地施用所述CDK抑制剂和蛋白酶体抑制剂。

45.根据权利要求25-43中的任一项所述的方法，其中在彼此的约12小时内依次施用所述CDK抑制剂和蛋白酶体抑制剂。

46.根据权利要求45所述的方法，其中在彼此的约5小时内依次施用所述CDK抑制剂和蛋白酶体抑制剂。

47.根据权利要求24-43中的任一项所述的方法，其中将所述CDK抑制剂和蛋白酶体抑制剂共配制在药物组合物中。

48.根据权利要求24-47中的任一项所述的方法，其中每天、每隔一天或每三天施用所述CDK抑制剂和BCL-2抑制剂。

49.一种药物组合物，其包含治疗有效量的由式I表示的CDK抑制剂或其药学上可接受的盐、治疗有效量的BCL-2抑制剂或蛋白酶体抑制剂和药学上可接受的赋形剂：

其中：

R₁是任选地被取代的苯基；

R₂和R₃各自独立地选自羟基和OR₈，其中R₈是任选地被取代的C₁-C₁₀-烷基；

R₄是任选地被取代的C₁-C₄-烷基；且

R₉是氢或任选地被取代的C₁-C₄-烷基。

50.根据权利要求49所述的药物组合物，其中所述式I的化合物或盐由式Ia表示：

。

51.根据权利要求49或50所述的药物组合物，其中R₁任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自羟基、氰基、卤素、氨基、C₁-C₄-烷基、C₁-C₄-烷氧基、C₁-C₄-羟基烷基、C₁-C₄-卤代烷基和硝基。

52.根据权利要求51所述的药物组合物，其中R₁被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素和C₁-C₄-卤代烷基。

53.根据权利要求52所述的药物组合物，其中R₁是2-氯-4-三氟甲基苯基。

54.根据权利要求49-53中的任一项所述的药物组合物，其中R₂和R₃各自独立地选自羟基和OR₈，其中R₈是任选地被一个或多个取代基取代的C₁-C₁₀-烷基，所述取代基独立地选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。

55.根据权利要求54所述的药物组合物，其中R₂和R₃各自是羟基。

56.根据权利要求49-55中的任一项所述的药物组合物，其中R₄是被一个或多个取代基取代的C₁-C₄-烷基，所述取代基选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。

57.根据权利要求56所述的药物组合物，其中R₄是被一个或多个取代基取代的C₁-C₄-烷基，所述取代基选自羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基。

58.根据权利要求57所述的药物组合物，其中R₄是2-羟基甲基。

59.根据权利要求49-53中的任一项所述的药物组合物，其中R₉是任选地被羟基、氰基、卤素、氨基、=O、=S、C₁-C₄-烷氧基和硝基取代的C₁-C₄-烷基。

60.根据权利要求59所述的药物组合物，其中R₉是甲基。

61.根据权利要求49所述的药物组合物，其中式I的化合物由式Ib表示：

或其药学上可接受的盐。

62.根据权利要求49-61中的任一项所述的药物组合物，其中所述组合物包含BCL-2抑制剂，且所述BCL-2抑制剂选自navitoclax、venetoclax、A-1155463、A-1331852、ABT-737、obatoclax、S44563、TW-37、A-1210477、AT101、HA14-1、BAM7、sabutoclax、UMI-77、藤黄酸、maritoclax、MIM1、甲泼尼龙、iMAC2、Bax抑制剂肽V5、Bax抑制剂肽P5、Bax通道阻滞剂、ARRY520三氟乙酸盐和其中任一种的药学上可接受的盐。

63.根据权利要求62所述的药物组合物，其中所述BCL-2抑制剂选自navitoclax和venetoclax或其中任一种的药学上可接受的盐。

64.根据权利要求63所述的药物组合物，其中所述BCL-2抑制剂是venetoclax。

65.根据权利要求49-61中的任一项所述的药物组合物，其中所述组合物包含蛋白酶体抑制剂，且所述蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、marizomib、ixazomib、双硫仑、表儿茶素-3-没食子酸盐、salinosporamide A、卡非佐米、ONX 0912、CEP-18770、MLN9708、环氧霉素、MG132和其中任一种的药学上可接受的盐。

66.根据权利要求65所述的方法，其中所述蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、marizomib、ixazomib和其中任一种的药学上可接受的盐。