CN109673810A - 一种再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种再生纤维素‑肌原纤维蛋白凝胶，由以下方法制得的：去除猪后腿肉结缔组织和脂肪，切成小块并绞碎，将绞碎后的猪后腿肉和标准盐溶液混合，匀浆后离心，重复匀浆和离心操作；离心得到的沉淀和0.1mol/L的NaCl溶液混合，匀浆后离心，获得肌原纤维蛋白；肌原纤维蛋白用磷酸盐缓冲溶液配制成肌原纤维蛋白溶解液，加入再生纤维素，混匀，冰浴条件下均质得到混匀样品，于75‑80℃水浴加热制成再生纤维素‑肌原纤维蛋白凝胶。本发明应用再生纤维素提高猪肉肌原纤维蛋白凝胶品质，有效提高了猪肉蛋白凝胶的保水性和质构特性，再生纤维素‑肌原纤维蛋白凝胶还具有丰富蛋白质和纤维素，丰富了肌原纤维蛋白凝胶的营养性。

Description

一种再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶及其制备方法
技术领域
本发明属于肉类食品深加工领域，具体涉及一种再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶及其制备方法，尤其是涉及一种应用再生纤维素提高猪肉肌原纤维蛋白凝胶品质的方法。
背景技术
肌原纤维蛋白在浓度为40mg/mL时就可以产生热诱导凝胶，凝胶形成的三维网状结构可以有效保留水分，提供品质特性。但肌原纤维蛋白结构变化受温度、pH、蛋白质浓度、离子强度及肌肉类型等影响较大，易引起凝胶保水性差、硬度低，导致凝胶品质下降。因此，采取有效方法改善肌原纤维蛋白凝胶保水及质构特性具有重要意义。目前尚未有将再生纤维素作添加到肌原纤维蛋白凝胶中来改善蛋白凝胶品质的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶，利用磷酸水解、水再生方法制备的再生纤维素，将再生纤维素和猪肉肌原纤维蛋白制成凝胶，通过添加再生纤维素不仅可以有效提高冷猪肉肌原纤维蛋白凝胶保水性，改善蛋白凝胶硬度、弹性和内聚性，而且还可以提高蛋白凝胶的营养性，为开发功能型猪肉蛋白凝胶提供技术依据。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶，它是由以下方法制得的：去除猪后腿肉结缔组织和脂肪，切成小块并绞碎，将绞碎后的猪后腿肉和标准盐溶液混合，匀浆后离心，重复匀浆和离心操作；离心得到的沉淀和浓度为0.1mol/L的NaCl溶液混合，匀浆后离心，获得肌原纤维蛋白；肌原纤维蛋白用磷酸盐缓冲溶液配制成肌原纤维蛋白溶解液，加入再生纤维素，混匀，冰浴条件下均质得到混匀样品，于75-80℃水浴加热20-30min，制成再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶，取出冷却。
一种再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备方法，包括以下步骤：
步骤(1)、肌原纤维蛋白的提取：去除猪后腿肉结缔组织和脂肪，切成小块并绞碎；将绞碎后的猪后腿肉和标准盐溶液混合，匀浆后2000-3000g离心15-20min，重复匀浆和离心操作2-4次；离心得到的沉淀和浓度为0.1mol/L的NaCl溶液混合，匀浆后2000-3000g离心15-20min，获得肌原纤维蛋白；
步骤(2)、再生纤维素的制备：微晶纤维素用去离子水润湿，再加入磷酸获得纤维素磷酸悬浮液，低温振荡培育获得透明的纤维素磷酸溶液，用去离子水稀释，静置，离心，水洗离心至上清液pH恒定，获得再生纤维素凝胶，通过烘箱称重法测定再生纤维素凝胶中再生纤维素含量为4.43％；其中，所述的微晶纤维素、润湿用水与磷酸的用量比为3-5:12-20:120-200g/mL/mL；所述的稀释用水与磷酸的用量比为4-6:1mL/mL；
步骤(3)、再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备：取步骤(1)制得的肌原纤维蛋白，采用磷酸盐缓冲溶液配制成肌原纤维蛋白溶解液，加入再生纤维素，混匀，冰浴条件下均质得到混匀样品，混匀样品于75-80℃水浴加热20-30min，制成再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶，取出冷却。
步骤(1)中，所述的绞碎后的猪后腿肉和标准盐溶液的质量体积比为1:4g/mL；所述的绞碎后的猪后腿肉和NaCl溶液的质量体积比为1:4g/mL。
所述的标准盐溶液为0.1mol/L NaCl、20mmol/L Na2HPO4/NaH2PO4、2mmol/L MgCl2、1mmol/L EGTA，pH值为6.5-7.0的盐溶液。
步骤(2)中，所述的磷酸为质量分数为75％-95％的磷酸，优选为质量分数为85％的磷酸；所述的低温振荡培育为在温度4℃、150-200rpm转速振荡培育24小时。
水洗离心至上清液pH恒定在6-6.5，此时再生纤维素的pH值相应的恒定在6-6.5。
步骤(3)中，所述的磷酸盐缓冲溶液为0.6mol/L NaCl、50mmol/L Na2HPO4/NaH2PO4、pH值为6.0-6.5。
所述的肌原纤维蛋白溶解液中肌原纤维蛋白的浓度为40mg/mL-45mg/mL。
所述的混匀样品中再生纤维素的浓度为0.20％-0.88％(质量分数)，优选为0.22％-0.66％。
所述的均质条件为：6000-8000rpm高速均质20-30s，均质2-3次。
所述的混匀样品在加热前进行除气泡处理，优选采用离心除气泡。所述的除气泡处理具体为：混匀样品置于离心管中，在2000g转速下离心5min，排除气泡。
所述的再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶为热诱导凝胶，置于4℃下保存。
本发明的有益效果：
本发明应用再生纤维素提高猪肉肌原纤维蛋白凝胶品质，有效提高了猪肉蛋白凝胶的保水性和质构特性，再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶还具有丰富蛋白质和纤维素，丰富了肌原纤维蛋白凝胶的营养性，为开发功能型猪肉蛋白凝胶提供技术依据。
本发明制备再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的方法简单可靠、操作方便。
附图说明
图1为再生纤维素凝胶的外观图。
图2为再生纤维素凝胶的微观结构图。
图3为再生纤维素添加量对肌原纤维蛋白凝胶保水性的影响。
图4为再生纤维素添加量对肌原纤维蛋白凝胶微观结构的影响；其中：A为实施例1中肌原纤维蛋白凝胶；B为实施例2再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶；C为实施例3再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶；D为实施例4再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶；E为实施例5再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明，实施例1-5中再生纤维素的浓度分别为0％、0.22％、0.44％、0.66％和0.88％。
实施例1：肌原纤维蛋白凝胶
步骤(1)、肌原纤维蛋白的提取：去除猪后腿肉结缔组织和脂肪，切成小块并绞碎；向100g绞碎后的猪后腿肉中加入400mL标准盐溶液(0.1mol/L NaCl、20mmol/L Na2HPO4/NaH2PO4、2mmol/L MgCl2、1mmol/L EGTA，pH值为6.5)中，匀浆后在2000g下离心15min，匀浆和离心重复2次；然后将得到的沉淀加入400mL浓度为0.1mol/L的NaCl溶液中，匀浆后在2000g下离心15min，获得肌原纤维蛋白；
步骤(2)、肌原纤维蛋白凝胶的制备：采用磷酸盐缓冲溶液(0.6mol/LNaCl，50mmol/LNa2HPO4/NaH2PO4，pH＝6.5)配制肌原纤维蛋白浓度为40mg/mL的溶解液，冰浴条件下6000rpm均质30s，重复3次，确保充分混匀；取混匀样品置于50mL离心管中，在2000g转速下离心5min，排除气泡，再将混匀样品放入80℃恒温水浴锅中加热20min，取出冷却，制成肌原纤维蛋白凝胶，在4℃下保存。
实施例2：再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶
步骤(1)、肌原纤维蛋白的提取：去除猪后腿肉结缔组织和脂肪，切成小块并绞碎；向100g绞碎的猪后腿肉加入400mL标准盐溶液(0.1mol/L NaCl、20mmol/L Na2HPO4/NaH2PO4、2mmol/L MgCl2、1mmol/L EGTA，pH值为6.5)中，匀浆后在2000g下离心15min，匀浆和离心重复2次；然后将得到的沉淀加入400mL浓度为0.1mol/L的NaCl溶液中，匀浆后在2000g下离心15min，获得肌原纤维蛋白；
步骤(2)、再生纤维素的制备：3g微晶纤维素用12mL去离子水润湿、摇匀后，加入120mL 4℃预冷85％磷酸，搅拌均匀，得到乳白色的纤维素磷酸悬浮液，在4℃、200rpm转速低温振荡培养器中培育24h，得到透明粘稠的纤维素磷酸溶液后，加入600mL去离子水稀释、混匀，静置2h，然后在17000g下离心15min，去上清液，重复水洗数次，离心至上清液pH值恒定在6.0-6.5，得到再生纤维素凝胶(如图1，外观呈高粘度凝胶状态)，再生纤维素凝胶的微观结构如图2，其微观结构呈网状，具有较高纵横比；通过烘箱称重法测定其中纯再生纤维素含量为4.43％；
步骤(3)、再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备：采用磷酸盐缓冲溶液(0.6mol/LNaCl，50mmol/LNa2HPO4/NaH2PO4，pH＝6.5)配制肌原纤维蛋白浓度为40mg/mL的溶解液，再将5g再生纤维素凝胶加入到肌原纤维蛋白溶解液中，充分混匀，冰浴条件下6000rpm均质30s，重复3次，确保充分混匀，取混匀样品(混匀样品中再生纤维素浓度为0.22％)置于50ml离心管中，在2000g转速下离心5min，排除气泡，再将混匀样品放入80℃的恒温水浴锅中加热20min，取出冷却，制成再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶，在4℃下保存。
实施例3：再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶
步骤(1)、肌原纤维蛋白的提取：去除猪后腿肉结缔组织和脂肪，切成小块并绞碎；向100g绞碎猪后腿肉加入400mL标准盐溶液(0.1mol/L NaCl、20mmol/L Na2HPO4/NaH2PO4、2mmol/L MgCl2、1mmol/L EGTA，pH值为6.5)中，匀浆后在2000g下离心15min，匀浆和离心重复2次；然后将得到的沉淀加入400mL 0.1mol/L的NaCl溶液中，匀浆后在2000g下离心15min，获得肌原纤维蛋白；
步骤(2)、再生纤维素的制备：3g微晶纤维素用12mL去离子水润湿、摇匀后，加入120mL 4℃预冷85％磷酸，搅拌均匀，得到乳白色的纤维素磷酸悬浮液，在4℃、200rpm转速低温振荡培养器中培育24h，得到透明粘稠的纤维素磷酸溶液后静置2h，然后加入600mL去离子水稀释、混匀，然后在17000g下离心15min，去上清液，重复水洗数次，离心至上清液pH值恒定在6.0-6.5，得到再生纤维素凝胶，通过烘箱称重法测定其中纯再生纤维素含量为4.43％；
步骤(3)、再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备：采用磷酸盐缓冲溶液(0.6mol/LNaCl，50mmol/LNa2HPO4/NaH2PO4，pH＝6.5)配制肌原纤维蛋白浓度为40mg/mL的溶解液，再将10g再生纤维素凝胶加入到肌原纤维蛋白溶解液，充分混匀，冰浴条件下6000rpm高速均质30s，重复3次，确保充分混匀，取混匀样品(混匀样品中再生纤维素浓度为0.44％)置于50ml离心管中，在2000g转速下离心5min，排除气泡，再将混匀样品放入80℃的恒温水浴锅中加热20min，取出冷却，制成再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶，在4℃下保存。
实施例4：再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶
步骤(1)、肌原纤维蛋白的提取：去除猪后腿肉结缔组织和脂肪，切成小块并绞碎；向100g绞碎的猪后腿肉加入400mL标准盐溶液(0.1mol/L NaCl、20mmol/L Na2HPO4/NaH2PO4、2mmol/L MgCl2、1mmol/L EGTA，pH值为6.5)中，匀浆后在2000g下离心15min，匀浆和离心重复2次；然后将得到的沉淀加入400mL 0.1mol/L的NaCl溶液中，匀浆后在2000g下离心15min，获得肌原纤维蛋白；
步骤(2)、再生纤维素的制备：3g微晶纤维素用12mL去离子水润湿、摇匀后，加入120mL 4℃预冷85％磷酸，搅拌均匀，得到乳白色的纤维素磷酸悬浮液，在4℃、200rpm转速低温振荡培养器中培育24h，得到透明粘稠的纤维素磷酸溶液后静置2h，然后加入600mL去离子水稀释、混匀，然后在17000g下离心15min，去上清液，重复水洗数次，离心至上清液pH值恒定在6.0-6.5，得到再生纤维素凝胶，通过烘箱称重法测定其中再生纤维素含量为4.43％。
步骤(3)、再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备：采用磷酸盐缓冲溶液(0.6mol/LNaCl，50mmol/LNa2HPO4/NaH2PO4，pH＝6.5)配制肌原纤维蛋白浓度为40mg/mL的溶解液，再将15g再生纤维素凝胶加入到肌原纤维蛋白溶解液中，充分混匀，冰浴条件下6000rpm均质30s，重复3次，确保充分混匀，取混匀样品(混匀样品中再生纤维素浓度为0.66％)置于50ml离心管中，在2000g转速下离心5min，排除气泡，再将混匀样品放入80℃的恒温水浴锅中加热20min，取出冷却，制成再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶，在4℃下保存。
实施例5：再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶
步骤(1)、肌原纤维蛋白的提取：去除猪后腿肉结缔组织和脂肪，切成小块并绞碎；向100g绞碎猪后腿肉加入400mL标准盐溶液(0.1mol/L NaCl、20mmol/L Na2HPO4/NaH2PO4、2mmol/L MgCl2、1mmol/L EGTA，pH值为6.5)中，匀浆后在2000g下离心15min，匀浆和离心重复2次；然后将得到的沉淀加入400mL的0.1mol/L的NaCl溶液中，匀浆后在2000g下离心15min，获得肌原纤维蛋白；
步骤(2)、再生纤维素的制备：3g微晶纤维素用12mL去离子水润湿、摇匀后，加入120mL 4℃预冷85％磷酸，搅拌均匀，得到乳白色的纤维素磷酸悬浮液，在4℃、200rpm转速低温振荡培养器中培育24h，得到透明粘稠的纤维素磷酸溶液后静置2h，然后加入600mL去离子水稀释、混匀，然后在17000g下离心15min，去上清液，重复水洗数次，离心至上清液pH值恒定在6.0-6.5，得到凝胶态再生纤维素，通过烘箱称重法测定其中纯再生纤维素含量为4.43％；
步骤(3)、再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备：采用磷酸盐缓冲溶液(0.6mol/LNaCl，50mmol/LNa2HPO4/NaH2PO4，pH＝6.5)配制肌原纤维蛋白浓度为40mg/mL的溶解液，再将20g再生纤维素凝胶加入肌原纤维蛋白溶解液中，充分混匀，冰浴条件下6000rpm均质30s，重复3次，确保充分混匀，取混匀样品(混匀样品中再生纤维素浓度为0.88％)置于50ml离心管中，在2000g转速下离心5min，排除气泡，再将混匀蛋白样品放入80℃的恒温水浴锅中加热20min，取出冷却，制成再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶，在4℃下保存。
对实施例1-5制得的五种不同肌原纤维蛋白凝胶进行保水性、质构特性、和微观结构测定，结果分别见图3、表1和图4。
1、肌原纤维蛋白凝胶保水性的测定
取出储存于4℃冷库中的凝胶，静置30min，称取离心管的重量记为W0，加入5g左右的凝胶，准确称重记为W1，离心(10000g，15min，4℃)，弃去析出的水分后称重，记为W2。
保水性＝(W2-W0)/(W1-W0)×100％
由图3可知，由于再生纤维素具有良好的保水性和凝胶性，随着再生纤维素添加量的增加，肌原纤维蛋白凝胶的保水性显著增加。说明向猪肉肌原纤维蛋白凝胶中加入再生纤维素可以有效提高蛋白凝胶保水性。
2、肌原纤维蛋白凝胶质构的测定
取出4℃冷藏的凝胶，静置30min。将样品切成2cm×2.5cm(高×直径)。采用TA-XTplus物性测试仪TPA程序对硬度、弹性和内聚性进行测定。质构仪参数如下：探头类型：P/50(直径50mm)；测前速度：3.0mm/s；测试速度：2.0mm/s；测后速度：5.0mm/s；压缩比：30％，触发力：5g。
由表1可知，随着再生纤维素添加量增加，肌原纤维蛋白凝胶的硬度和弹性逐渐增加，内聚性呈现先增加后减少的变化趋势。即实施例4添加0.66％的再生纤维素的肌原纤维蛋白凝胶的质够特性最适，内聚性达到最高。说明向猪肉肌原纤维蛋白凝胶中加入适量的再生纤维素可以有效提高蛋白凝胶的质构特性。
表1：再生纤维素添加量对肌原纤维蛋白凝胶质构特性的影响
注：同一列不同字母代表各实施例间质构特性的差异性。
3、肌原纤维蛋白凝胶微观结构的测定
从凝胶样品中心切取3×3×3(mm3)样品浸泡于2.5％戊二醛溶液中过夜，样品切成1mm厚的薄片，用0.1M磷酸缓冲液(pH7.3)浸泡10min，然后用含有1％四氧化锇的缓冲液固定5h，再用0.1M磷酸缓冲液(pH7.3)漂洗3次。再用乙醇梯度脱水(50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％，每个浓度脱水15min)。接着样品浸入丙酮中进一步脱水，冷冻干燥，最后把样品放入铝箔中，喷金2min，最后通过扫描电镜(Hitachi SU8010,Quorum PP3010T,England)进行观察并拍照。
由图4可知，实施例1中肌原纤维蛋白凝胶存在不连续的凝胶结构，并且出现较大的孔洞。添加再生纤维素后，肌原纤维蛋白凝胶的网络结构致密程度更高，且随着再生纤维素含量增加孔洞逐渐减小甚至消失。主要是添加的再生纤维素通过填充、包埋作用形成更为紧凑的结构。但是当再生纤维素添加量超过一定比例，蛋白凝胶过于紧密，形成片状结构，多余的再生纤维素破坏了蛋白质原有结构(实施例5)。从微观结构图中可以得知添加0.66％再生纤维素的肌原纤维蛋白凝胶微观结构最紧凑。
综上所述，再生纤维素的添加量为0.22-0.66％时，既能够有效提高蛋白凝胶保水性，也可以有效提高蛋白凝胶的质构特性，同时在维持蛋白质原有结构的基础上使肌原纤维蛋白凝胶的网络结构致密程度更高。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，而未脱离本发明技术方案的精神和范围，在技术方案基础上所做的任何改动，均应包含在本发明保护范围之内。

Claims (10)

1.一种再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶，其特征在于它是由以下方法制得的：去除猪后腿肉结缔组织和脂肪，切成小块并绞碎，将绞碎后的猪后腿肉和标准盐溶液混合，匀浆后离心，重复匀浆和离心操作；离心得到的沉淀和0.1mol/L的NaCl溶液混合，匀浆后离心，获得肌原纤维蛋白；肌原纤维蛋白用磷酸盐缓冲溶液配制成肌原纤维蛋白溶解液，加入再生纤维素，混匀，冰浴条件下均质得到混匀样品，于75-80℃水浴加热制成再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶。
2.根据权利要求1所述的再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶，其特征在于所述的肌原纤维蛋白溶解液中肌原纤维蛋白的浓度为40mg/mL-45mg/mL；所述的混匀样品中再生纤维素的浓度为0.20％-0.88％，优选为0.22％-0.66％。
3.一种权利要求1所述的再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤(1)、肌原纤维蛋白的提取：去除猪后腿肉结缔组织和脂肪，切成小块并绞碎；将绞碎后的猪后腿肉和标准盐溶液混合，匀浆后2000-3000g离心15-20min，重复匀浆和离心操作2-4次；离心得到的沉淀和0.1mol/L的NaCl溶液混合，匀浆后2000-3000g离心15-20min，获得肌原纤维蛋白；
步骤(2)、再生纤维素的制备：微晶纤维素用去离子水润湿，再加入磷酸获得纤维素磷酸悬浮液，低温振荡培育获得透明的纤维素磷酸溶液，用去离子水稀释，静置，离心，水洗离心至上清液pH恒定，获得再生纤维素凝胶，通过烘箱称重法测定再生纤维素凝胶中再生纤维素含量为4.43％；其中，所述的微晶纤维素、润湿用水与磷酸的用量比为3-5:12-20:120-200g/mL/mL；所述的稀释用水与磷酸的用量比为4-6:1mL/mL；
步骤(3)、再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备：取步骤(1)制得的肌原纤维蛋白，采用磷酸盐缓冲溶液配制成肌原纤维蛋白溶解液，加入再生纤维素，混匀，冰浴条件下均质得到混匀样品，混匀样品于75-80℃水浴加热20-30min，制成再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶。
4.根据权利要求3所述的再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备方法，其特征在于步骤(1)中，所述的绞碎后的猪后腿肉和标准盐溶液的质量体积比为1:4g/mL；所述的绞碎后的猪后腿肉和NaCl溶液的质量体积比为1:4g/mL。
5.根据权利要求3所述的再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备方法，其特征在于步骤(1)中，所述的标准盐溶液为0.1mol/L NaCl、20mmol/L Na2HPO4/NaH2PO4、2mmol/L MgCl2、1mmol/L EGTA，pH值为6.5-7.0的盐溶液。
6.根据权利要求3所述的再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备方法，其特征在于步骤(2)中，所述的磷酸为质量分数为75％-95％的磷酸，优选为质量分数为85％的磷酸。
7.根据权利要求3所述的再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备方法，其特征在于步骤(2)中，所述的低温振荡培育为在温度4℃、150-200rpm转速振荡培育24小时。
8.根据权利要求3所述的再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备方法，其特征在于步骤(3)中，所述的磷酸盐缓冲溶液为0.6mol/L NaCl、50mmol/L Na2HPO4/NaH2PO4、pH值为6.0-6.5。
9.根据权利要求3所述的再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备方法，其特征在于步骤(3)中，所述的肌原纤维蛋白溶解液中肌原纤维蛋白的浓度为40mg/mL-45mg/mL。
所述的混匀样品中再生纤维素的浓度为0.20％-0.88％，优选为0.22％-0.66％。
10.根据权利要求3所述的再生纤维素-肌原纤维蛋白凝胶的制备方法，其特征在于步骤(3)中，所述的均质条件为：6000-8000rpm高速均质20-30s，均质2-3次；
所述的混匀样品在加热前进行除气泡处理。
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