CN109640938A

CN109640938A - 提高皮肤微生物群的微生物多样性的方法

Info

Publication number: CN109640938A
Application number: CN201780050910.2A
Authority: CN
Inventors: K·S·韦; 赵鹤; 徐健
Original assignee: Procter and Gamble Ltd
Current assignee: Procter and Gamble Ltd; Procter and Gamble Co
Priority date: 2016-09-13
Filing date: 2017-09-13
Publication date: 2019-04-16
Also published as: WO2018049556A1; WO2018050056A1; PH12019500528A1

Abstract

在所公开的方法中提供了用于选择性地提高患有可治疗皮肤状况的受试者的皮肤微生物群的多样性的材料和方法，所述方法使用包含锌化合物、生物相容性表面活性剂和脂质的组合物。可治疗皮肤状况包括健康的皮肤和表现出特应性皮炎(具有或不具有损伤)、皮肤菌群失调和/或痤疮的皮肤。

Description

提高皮肤微生物群的微生物多样性的方法

技术领域

本公开涉及哺乳动物皮肤的美容和治疗处理领域。

背景技术

皮肤表面存在数以万亿计的细菌、真菌、病毒、古菌和小的节肢动物，它们一起构成皮肤微生物群。皮肤微生物群可能受到多种因素的影响，诸如环境、疾病、感染、和放置成与皮肤接触的材料。虽然人们一般认为皮肤上的细菌是一件坏事，但皮肤上存在有益的细菌。皮肤状况(例如特应性皮炎)能够破坏皮肤微生物组的平衡，从而允许有害细菌生长，而有益细菌受到抑制或不能在皮肤上正常生长。这导致皮肤微生物群的多样性降低。此外，施用于皮肤的组合物可加剧皮肤微生物群的不平衡，或甚至导致失衡。因此，需要能够提高皮肤微生物群多样性的组合物。

发明内容

本文包括选择性地提高可治疗皮肤的皮肤微生物群的微生物多样性的方法，该方法包括选择洗去型多相皮肤改善组合物，该组合物包含含有抗微生物化合物和发泡生物相容性表面活性剂的清洁相；和含有有益剂的有益相，该有益剂含有脂质；以及施用有效量的多相皮肤改善组合物，从而与在施用多相皮肤改善组合物之前的皮肤微生物群的微生物多样性相比，选择性地提高皮肤微生物群的微生物多样性。

本文还包括用于选择性地提高患有可治疗皮肤状况的受试者的皮肤微生物群的多样性的方法，该方法包括选择选择性地靶向葡萄球菌(Staphylococcus)的洗去型多相皮肤改善组合物，其中多相皮肤改善组合物包含含有表面活性剂和吡啶硫酮锌的清洁相；和含有有益剂的有益相；

通过以下具体实施方式(包括附图)，本公开的其他特征和优点将显而易见。然而，应当理解，提供详细描述和特定实施例仅出于示例的目的，因为根据该详细描述，本发明的精神和范围内的各种变更和修改对于本领域的技术人员将变得显而易见。

附图说明

图1示出一组柱状图，它们显示在健康受试者的皮肤上、在皮肤表现出特应性皮炎且有损伤的受试者皮肤上、以及在皮肤表现出特应性皮炎但无损伤(非损伤)的受试者皮肤上的14种菌属和一个归总类别的特性和相对丰度。葡萄球菌是与特应性皮炎相关联的主要菌属。柱状图示出特应性皮炎与微生物群多样性之间的关系；

图2是表征皮肤微生物群的一组图形。左分图示出在健康皮肤中、在患有特应性皮炎但无损伤(非损伤)的皮肤中、以及在患有特应性皮炎且有损伤的皮肤中的葡萄球菌属的相对丰度。在左分图中的下图中，呈现出两种葡萄球菌菌种的相对丰度，即，金黄色葡萄球菌(S.aureus)(左图)和表皮葡萄球菌(S.epidermidis)(右图)。显然，包括金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的葡萄球菌在患有特应性皮炎的皮肤中具有更大的丰度，并且在患有特应性皮炎且有损伤的皮肤中具有最大的丰度。右分图是示出数据的图，该数据表明与患有特应性皮炎(具有或不具有损伤)的皮肤相比，四种菌属在健康皮肤中具有更大的相对丰度。四张图示出在健康皮肤中、在患有特应性皮炎但无损伤的皮肤中、以及在患有特应性皮炎且有损伤的皮肤中的以下四种菌属的相对丰度：左上图-链球菌(Streptococcus)；右上图-丙酸杆菌(Propionibacterium)；左下图-微球菌(Micrococcus)；和右下图-棒状杆菌(Corynebacterium)。当分析箱线图时，链球菌和另一种菌属(考克氏菌(Kocuria))显示出在健康皮肤和患有特应性皮炎但无损伤的皮肤之间的显著差异。

图3示出样品的皮肤微生物群的多样性变化，该样品从具有健康皮肤、患有特应性皮炎且有损伤的皮肤、以及患有特应性皮炎但无损伤的皮肤的受试者的人体上的8个位置处采集。对样品进行DNA分离并接着结合使用qPCR进行下一代序列分析，用于测定在三种受试者类型中的每一种的图中识别的，在8个位置的皮肤微生物群的细菌组成和相对丰度。对结果进行分析，并且香农指数(Shannon index)的α多样性测量表明取自健康皮肤的样品具有最高的α多样性测量值，中等α多样性测量值可见于患有特应性皮炎但无损伤的皮肤，并且最低的α多样性测量值得自患有特应性皮炎且有损伤的皮肤。数据显示皮肤微生物群的多样性随着皮肤发展成特应性皮炎而降低，并且随着特应性皮炎发展成损伤，多样性继续降低。

图4是示出对皮肤微生物群的治疗效果的一组柱状图。只有经诊断患有特应性皮炎的受试者在治疗阶段期间接受治疗产品。这些经诊断的受试者被各自分成三个治疗组。组1接受每日0.5％的吡啶硫酮锌沐浴剂(BCP2ZPT，组2接受车身清洗剂(车身清洗剂与提供给组1的组合物相同，但是无吡啶硫酮锌，BCP2)，并且组3接受B7U条皂。在研究开始时和每日洗涤4周后，示出所有皮肤状况的构成皮肤微生物群的菌属的组成和相对丰度。“健康的”是健康的皮肤；“AD.L”是在研究开始时具有损伤的特应性皮炎，“AD.NL”是在研究开始时无损伤的特应性皮炎，“AD.L4W”是在洗涤四周后具有损伤的特应性皮炎，并且“AD.NL.4W”是在洗涤四周后无损伤的特应性皮炎。数据表明，吡啶硫酮锌在洗涤4周后选择性地降低特应性皮炎的损伤区域和非损伤区域两者中的葡萄球菌丰度。

图5示出治疗有损伤的特应性皮炎的微生物群变化。使用标准腿部洗涤测定法评估吡啶硫酮锌沐浴剂对患有特应性皮炎且有损伤的受试者的皮肤微生物群的效果。受试者使用吡啶硫酮锌(BCP2ZPT)、B7U条皂、或车身清洗剂对照(BCP2)完成4周周期的每日腿部洗涤。在基线(研究开始)和腿部洗涤4周后收集样品。结果表明，在四周的腿部洗涤后，吡啶硫酮锌选择性地降低了葡萄球菌在特应性皮炎损伤上的丰度，而丙酸杆菌、棒状杆菌和链球菌在损伤部位的丰度增加。考克氏菌也在损伤区域中增加。相对增加或降低具有统计意义上的显著性，p＝0.03，FDR＝0.09；

图6示出治疗无损伤的特应性皮炎的微生物群变化。模拟图5的附图说明中所述的研究进行一项研究，该研究利用患有特应性皮炎但无损伤的受试者，取代患有特应性皮炎且有损伤的受试者。使用16S rDNA测序和qPCR定量来测量葡萄球菌的相对丰度。受试者使用B7U条皂、单独的车身清洗剂(BCP2)、或在BCP2车身清洗剂(BCP2ZPT)中的吡啶硫酮锌来进行标准腿部洗涤。在研究开始时采集样品以建立基线，并且在腿部洗涤四周之后采集样品。两个附加的菌属，链球菌和考克氏菌，也使用箱线图进行分析，并且发现对应于BCP2车身清洗剂中的吡啶硫酮锌，它们具有统计意义上显著的相对丰度增加。结果表明吡啶硫酮锌选择性地降低患有特应性皮炎但无损伤的皮肤上的葡萄球菌的丰度。结果具有统计意义上的显著性(p＝0.027；FDR>0.05)；和

图7示出在治疗患有特应性皮炎且有损伤的受试者后的皮肤微生物群多样性。在治疗前后，对患有特应性皮炎且有损伤的受试者进行皮肤微生物群多样性分析。将受试者分成三个实验组，第一组用BCP2车身清洗剂每日洗涤，持续四周(标准腿部洗涤测定法)，第二组用B7U条皂每日洗涤，并且第三组用在BCP2车身清洗剂中的吡啶硫酮锌每日洗涤。在研究开始时测量皮肤微生物群中的菌属的组成和相对丰度以获得基线，并且在四周的每日腿部洗涤之后进行同样的测量。结果表明，BCP2沐浴剂中的吡啶硫酮锌选择性地恢复了可见于健康对照中的皮肤微生物群的多样性与多样性水平。

具体实施方式

本公开提供了在提高可治疗皮肤微生物群的多样性，从而改善健康皮肤和表现出特应性皮炎(具有或不具有损伤)、皮肤菌群失调或痤疮(即可治疗皮肤状况)的皮肤的质量和外观中有益于人及其他动物的材料和方法。健康皮肤是非患病皮肤，并且也是看起来不干燥和/或不起皮的皮肤，该干燥和/或起皮的皮肤诸如存在于具有头皮屑或具有临床干燥的皮肤的个体中。本公开的方法注重于治疗皮肤的方法而非处理毛发的方法(例如递送生物活性物质至毛囊或漏斗状器官的方法)、或是治疗头皮屑的方法，并且不涉及应用于临床干燥皮肤。此外，为了最大化根据本公开的组合物的生物活性组分(即，锌化合物、生物相容性表面活性剂和脂质)的可用性以及由此而具有的活性，该组合物及其使用方法涉及使用游离的生物活性化合物，即，不结合成聚合形式的化合物。优选地，组合物也不以颗粒形式分隔。一般来讲，本公开的材料和方法改善健康皮肤的质量和外观，并且治疗患有特应性皮炎(具有或不具有损伤)、皮肤菌群失调和/或痤疮的受试者的可治疗皮肤状况。

本公开各方面的详细描述在理解以下定义术语的情况下更易于被理解。

“含锌化合物”或“锌化合物”是导致摄取生物活性锌的任何生物相容形式的锌，诸如简单锌盐如氧化锌以及锌化合物，包括单甘油锌和锌离子载体如吡啶硫酮锌。已发现各种形式的锌对人皮肤具有除抗微生物作用之外的有益效果。具体地，已发现锌组成改善健康皮肤的质量，例如外观。因此，根据本公开的锌不为无水锌-聚合物聚集体形式。换言之，锌不在包含其他化合物诸如被设计成增强某些形式的锌(诸如吡啶硫酮锌)的抗微生物特性的聚合物的颗粒中被多价螯合。

本公开的“生物相容性表面活性剂”是本领域已知可用于清洁皮肤的任何表面活性剂，包括阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、两性离子表面活性剂或两性表面活性剂，前提条件是该表面活性剂也是生物相容的，诸如温和表面活性剂如非离子表面活性剂，但也包括已知是生物相容的含硫酸盐表面活性剂。在其清洁皮肤的作用中，生物相容性表面活性剂被定义为生物活性化合物，并且不作为赋形剂。与该定义一致，生物相容性表面活性剂是指任何温和表面活性剂或含硫酸盐表面活性剂，在根据本公开的组合物中以不伤害或以其他方式对皮肤产生有害效应的量使用。生物相容性表面活性剂包括阴离子表面活性剂(包括含硫酸盐表面活性剂)、非离子表面活性剂、两性表面活性剂、两性离子表面活性剂、以及它们的混合物。示例性表面活性剂包括月桂基聚氧乙烯醚(n)硫酸钠(SLEnS)表面活性剂。

根据本公开的“脂质”可为本领域已知的任何脂质或脂质形式。脂质可为多种一般疏水性化合物中的任一者，但根据本公开的脂质不为鞘脂类衍生物或蜡。示例性脂质包括凡士林、单油酸甘油酯、甘油、神经酰胺、胆固醇、脂肪酸、甘油三酯、磷脂、或它们的任何组合。

“可治疗皮肤状况”意指具有特应性皮炎而无损伤的皮肤、具有特应性皮炎且有损伤的皮肤、表现出皮肤菌群失调的皮肤、表现出痤疮的皮肤、或健康皮肤。可治疗皮肤状况明确地定义为排除皮肤干燥或者特征为表现出或倾向于头皮屑或皮肤漏斗管诸如毛囊的皮肤。

“生物标记”是指可单独或共同反映当前或预计未来生物系统状态的任何生物分子(基因、蛋白质、脂质、代谢物)。因此，如本文所用，在几种其他特征中就皮肤水合而言，各种生物标记可为皮肤质量的指标。生物标记的非限制性示例包括炎性细胞因子、天然保湿因子、角蛋白1、10和11中的一种或多种、脂质和总蛋白。通过测定一个或多个生物标记，可例如评估皮肤对用组合物(包括个人护理组合物)处理的响应。

“多相”是指包含至少两个可在化学上不同的相的组合物(例如清洁相和有益相)。此类相可彼此直接物理接触。个人护理组合物可为多相个人护理组合物，其中个人护理组合物的相可显著程度地共混或混合，但物理上仍不同。在这些情况下，肉眼察觉不到物理区别性。个人护理组合物可为多相个人护理组合物，其中所述相物理地接触并且在视觉上不同。视觉上不同的相可呈多种形式，例如其可呈现为条纹状、大理石花纹状等。

“天然保湿因子(NMF)”是指可存在于角质层中的水溶性化合物的集合。这些化合物占角质细胞干重的约20-30％。NMF组分从大气中吸收水分并且将水与NMF水含量组合，使得角质层的最外层保持水合状态，即使暴露于外部因素依然如此。此类NMF包括氨基酸、乳酸、尿素、以及吡咯烷酮羧酸(PCA)。

“包装件”是指用于个人护理组合物的任何适宜容器，包括但不限于瓶、管、广口瓶、非气溶胶泵、以及它们的组合。

“个人护理组合物”是指旨在用于局部施用至皮肤的组合物。个人护理组合物可为洗去型制剂，其中可将所述产品局部施用至皮肤或毛发，然后接着在数秒至数分钟内用水从皮肤上洗去。还可使用基底将产品擦去。在任一种情况下，据信产品的至少一部分保留(即沉积)在皮肤上。个人护理组合物能够从包装件中可挤出或可分配。个人护理组合物可为例如液体、半液体霜膏、洗剂、凝胶、或它们的组合的形式。个人护理组合物的示例可包括但不限于沐浴剂、保湿沐浴剂、淋浴凝胶、皮肤清洁剂、清洁乳、淋浴保湿剂、以及与一次性的清洁布品一起使用的清洁组合物。

“香农指数”赋予其在本领域内所获得的含义，即生物多样性的量度。指数使用式香农指数计算，其中p＝样品中给定物类(n)占所有个体(N)的比例(n/N)，并且s是物类的数目。

“STnS”是指十三烷基聚氧乙烯醚(n)硫酸钠，其中n可限定每分子的乙氧基化物的平均摩尔数。

“结构化”是指具有可向个人护理组合物赋予稳定性的流变特性。结构度可通过由以下方法中的一个或多个测定的特征来确定：杨氏模量方法(Young's Modulus Method)、屈服应力方法(Yield Stress Method)、或零剪切粘度方法(Zero Shear ViscosityMethod)、或通过超速离心方法(Ultracentrifugation Method)，它们描述于2012年4月17日授予的美国专利8,158,566中。如果清洁相具有一种或多种以下特征，可认为清洁相是结构化的：(a)至少100帕斯卡-秒(Pa-s)、至少约200Pa-s、至少约500Pa-s、至少约1,000Pa-s、至少约1,500Pa-s、或至少约2,000Pa-s的零剪切粘度；(b)由超速离心方法测得，大于约40％，至少约45％，至少约50％，至少约55％，至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，或至少约90％的结构域体积比率；或(c)大于约2帕斯卡(Pa)，大于约10Pa，大于约20Pa，大于约30Pa，大于约40Pa，大于约50Pa，大于约75Pa，或大于约100Pa的杨氏模量。

“泡沫”是指由向含水表面活性剂混合物(尤其是稀释的混合物)提供能量而产生的充气泡沫。

除非另外指明，否则如本文所用的短语“基本上不含”意指该组合物或方法包含少于约5％、少于约3％、少于约1％或甚至少于约0.1％的指定成分。如本文所用，术语“不含”是指该组合物或方法包含0％的指定成分，该指定成分是未被加入个人护理组合物中的成分。然而，这些成分可能附带地形成为个人护理组合物的其他组分的副产物或反应产物。

本文所公开的是抗微生物化合物与生物相容性表面活性剂和脂质组合的单相或多相洗去型应用，当其施用于可治疗皮肤时，能够提供改善健康皮肤的外观或改善诸如特应性皮炎、皮肤菌群失调或痤疮的状况的有益效果。

根据本公开的组合物包含抗微生物化合物、生物相容性表面活性剂和脂质。以下更详细地描述本公开的组合物的这些组分。

抗微生物化合物

洗去型多相清洁组合物可包含抗微生物化合物。抗微生物化合物可包括例如含锌化合物；香芹酚；新洋茉莉醛、甲萘醌；symclairol；茜素；bardic 2250；二葡萄糖酸氯已定；氯己醇；4-异丙基-3-甲基苯酚；羟甲辛吡酮，2-甲氧基-1,4-萘醌；5-羟基-1,4-萘醌；1,2-十二烷二醇；根皮素；槲皮素水合物；没食子酸丙酯；3,4,5-三羟基苯甲酸甲酯；没食子酸辛酯；没食子酸月桂酯；鞣花酸树皮；肉桂醛；香叶醇；百里酚；扁柏酚；白杨素；或它们的组合。可包含抗微生物化合物，其含量为按清洁组合物的重量计0.01％至约5％。

a)含锌化合物

一种增强皮肤外观的方法可包括将含锌化合物如锌离子载体(例如吡啶硫酮锌)施用至个体的皮肤。相似地，对可治疗皮肤状况诸如特应性皮炎(具有或不具有损伤)、皮肤菌群失调、或痤疮进行治疗的方法可包括将含锌化合物施用于个体的皮肤。此类含锌化合物的示例包括例如锌盐。可用于本文的锌盐的示例包括下列：铝酸锌、碳酸锌、氧化锌、磷酸锌、硒化锌、硫化锌、硅酸锌、氟硅酸锌、硼酸锌、氢氧化锌、羟基硫酸锌、以及它们的组合。

含锌化合物可包括1-羟基-2-吡啶硫酮的锌盐(称为“吡啶硫酮锌”或“ZPT”)，例如巯基吡啶-N-氧化物锌盐。如美国专利2,809,971中所举例说明，可通过使1-羟基-2-吡啶硫酮(即吡啶硫酮酸)或其可溶性盐与锌盐(例如硫酸锌)反应以形成吡啶硫酮锌沉淀而制备ZPT，并且如美国专利6,682,724所举例说明，可例如使用声能使吡啶硫酮锌形成为或加工成片状ZPT。

吡啶硫酮锌可呈颗粒、片状物、或它们的组合的形式。例如，在将吡啶硫酮锌作为颗粒引入的情况下，此类颗粒可具有约0.1pm至约20pm的平均粒度；此类颗粒也可具有约0.2pm至约10pm的平均粒度。

其他非限制性含锌化合物包括含锌层状物质(“ZLM”)。可用于本文的含锌层状物质的示例包括含锌层状结构，伴有主要存在于二维中的晶体生长。常规上将层结构描述为其中不仅所有原子均掺入到明确的层中的那些，而且其中在层间存在称为隧道离子(A.F.Wells的“Structural Inorganic Chemistry”，Clarendon Press，1975)的离子或分子的那些。含锌层状物质(ZLM)可具有掺入到层中的锌和/或可为隧道离子组分。许多ZLM在自然界以矿物质的形式出现。常见的示例包括水锌矿(碳酸锌氢氧化物)、碱式碳酸锌、绿铜锌矿(碳酸锌铜氢氧化物)、斜方绿铜锌矿(碳酸铜锌氢氧化物)以及许多含锌的相关矿物。天然ZLM也可存在，其中阴离子型层状物质如粘土型矿物(如页硅酸盐)包含离子交换的锌隧道离子。所有这些天然化合物也可通过合成获得，或在组合物中或在生产过程期间原位形成。另一种通常但不总是由合成制得的常见类别ZLM为层状双氢氧化物，其通常由式[M² ⁺ _1-xM³⁺ _x(OH)₂]^x+A^m- _x/m+nH₂O表示，并且部分或所有的二价离子(M²⁺)将代表锌离子(Crepaldi,E L,Pava,P C,Tronto,J,Valim,J B J.Colloid Interfac.Sci.2002年，248，429-42)。

可制备另一类别的ZLM，并且称为羟基复盐(Morioka，H.，Tagaya，H.，Karasu，M，Kadokawa，J，Chiba，KInorg.Chem.1999,38,4211-6)。羟基复盐可由通式[M²⁺ _{1_x}M²⁺ _1+x(OH)_3(1-y)]⁺A^n- _(1＝3y)/n nH₂O表示，其中两种金属离子可以不同；如果它们相同并且由锌表示，则该式简化为[Zn_1+x(OH)₂]^2x+2x A^-nH₂O。该后式代表(其中x＝0.4)并且包含常见物质，如羟基氯化锌和碱式硝酸锌。这些涉及水锌矿，其中二价阴离子置换了一价阴离子。这些化合物还可以在组合物中或在生产过程中或生产过程期间原位形成。这些类别的ZLM代表了总类别中较常见的示例，并不旨在对范围更广的符合此定义的化合物作出限制。

市售的碱式碳酸锌的来源包括碳酸锌碱性物(Cater Chemicals:Bensenville,Ill.,USA)、碳酸锌(Shepherd Chemicals:Norwood,Ohio,USA)、碳酸锌(CPS Union Corp.:New York,N.Y.,USA)、碳酸锌(Elementis Pigments:Durham,UK)和碳酸锌AC(BruggemannChemical:Newtown Square,Pa.,USA)。

碱式碳酸锌，商业上还可以称作“碳酸锌”或“碳酸锌碱性物”或“羟基碳酸锌”，为合成型式，由与天然存在的水锌矿类似的材料组成。理想的化学计量表示为Zn₅(OH)₆(CO₃)₂，但实际化学计量比可稍有不同，并且晶格中可掺有其它杂质。

羟基吡啶硫酮化合物的合适示例包括吡啶硫酮锌、吡啶硫酮钠、吡啶硫酮酸、双吡啶硫酮、壳聚糖吡啶硫酮、吡啶硫酮二硫化镁、以及它们的组合。羟基吡啶硫酮材料也可包括由重金属，诸如锌、锡、镉、镁、铝和锆形成的其他吡啶硫酮盐。

为了改善皮肤外观和/或改善适于用所公开的组合物处理的皮肤状况，将含锌化合物施用于个体的皮肤并从其洗去，每天至少一次，持续数天。用本公开的含锌化合物处理的皮肤可示出例如皮肤外观的改善。例如，含锌化合物可每天施用至少一次，持续约14天或更久；或每天施用至少一次，持续约21天或更久。

含锌化合物可直接施用于皮肤或作为洗去型个人护理组合物(其进一步在本文进行描述)的一部分提供。为了实现增强的皮肤外观或改善包括特应性皮炎(具有或不具有损伤)、皮肤菌群失调或痤疮的皮肤，将约0.1μg/cm²至约5.0μg/cm²；约0.2μg/cm²至约5.0μg/cm²；约0.5μg/cm²至约5.0μg/cm²；约1.0μg/cm²至约3.0μg/cm²；的含锌化合物沉积于皮肤上。沉积于皮肤上的含锌化合物的量的确定可使用本领域已知的技术诸如刷杯方法来实现。

皮肤外观的改善可使用已知技术进行测量，包括例如水分测试仪。例如，典型的水分测试仪单位的范围为约15-20，其中值越高，皮肤的保湿水平就越高；并且值越低，保湿水平就越低。使用水分测试仪的方法在下文有所描述。一旦含锌化合物(例如吡啶硫酮锌)被施用于个体的可治疗皮肤表面，就可以预定的时间间隔进行测量，以评价含锌化合物对改善皮肤外观，或对治疗具有特应性皮炎(具有或不具有损伤)、皮肤菌群失调或痤疮的皮肤的效果。

例如，在将含锌化合物施用于皮肤之后3小时、24小时、或48小时所进行的测量表明，沉积于皮肤上的含锌化合物可向可治疗皮肤状况或向皮肤外观提供巨大的改善。事实上，水分测试仪示出在含锌化合物第21次施用于皮肤之后约3小时，皮肤外观和/或可治疗皮肤状况(例如至少0.3个水分测试仪单位)存在易于可检测的改善。

可治疗皮肤状况(特应性皮炎(具有或不具有损伤)、皮肤菌群失调、痤疮，或健康皮肤的外观)的改善可通过使用生物标记进行测量和/或监测。具体地，天然保湿因子(NMF)构成可通过本文所述的方法检测的示例性生物标记。一种获得用于测量皮肤NMF的生物样品的合适方法是将胶带施加于上皮。任何类型的胶带，包括任何类型的医用胶带适用于获得上皮生物样品。该技术在本领域中是熟知的，并且实施起来相对简单。该技术包括将胶带施加于上皮组织(通常是皮肤)，然后从其移除胶带。可随后将获自上皮组织且存在于胶带上的生物标记分析物以任何保留生物标记分析物的方式从胶带移除，以用于合适的检测和测量测定。合适生物标记和用于NMF的测试过程描述于美国专利申请序列号13/007,630中。

虽然皮肤状况的改善可使用水分测试仪进行测量，或者生物标记是用于测量和/或监测可治疗皮肤状况诸如特应性皮炎、皮肤菌群失调、痤疮、或健康皮肤外观的示例性方法，但致力于可治疗皮肤状况的其他特性的其他合适的测量和监测方法也是可用的。例如，可治疗皮肤状况的变化可通过评估皮肤的目测干燥度、经皮水分流失(TEWL)、皮肤角质层中的总蛋白、皮肤中的包膜素水平、皮肤中的HSA水平、皮肤中的脂质水平、皮肤中角蛋白1、10和11的相对分化、皮肤中的炎性细胞因子(例如IL-1α、IL-1rα、IL-8)水平、以及皮肤中的组胺水平进行测量和/或监测。

生物相容性表面活性剂

增强皮肤外观的方法还包括至少一种生物相容性表面活性剂。生物相容性表面活性剂可为阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、两性表面活性剂、两性离子表面活性剂、或它们的组合。生物相容性表面活性剂的一个示例为十三烷基聚氧乙烯醚(n)硫酸钠(下文为SLEnS)，其中n定义平均乙氧基化摩尔数。在该语境中，变量n的范围可为约1至约3。生物相容性表面活性剂的另一个示例为十三烷基聚氧乙烯醚(n)硫酸钠阴离子表面活性剂，其中n为0.5至2.7。用于本公开的组合物的其他示例性表面活性剂包括椰油酰胺基丙基甜菜碱、月桂酰两性基乙酸钠、十三烷基聚氧乙烯醚硫酸钠和椰油酰羟乙基磺酸钠。洗去型个人护理组合物可包含两性表面活性剂和两性离子表面活性剂中的至少一种。合适的两性表面活性剂或两性离子表面活性剂包括在美国专利5,104,646和美国专利5,106,609中描述的那些。

两性表面活性剂可包括可被广泛描述为脂族仲胺和叔胺的衍生物的那些，其中脂族基团可为直链或支链，并且其中脂族取代基可包含约8至约18个碳原子，使得一个碳原子可包含水增溶性阴离子基团，例如羧基、磺酸根、硫酸根、磷酸根、或膦酸根。落入该定义范围内的化合物的示例可为3-十二烷基氨基丙酸钠、3-十二烷基氨基丙烷磺酸钠、月桂基肌氨酸钠、N-烷基牛磺酸(如根据美国专利2,658,072由十二烷基胺与羟乙基磺酸钠反应而制得的那些)、N-高级烷基天冬氨酸(如根据美国专利2,438,091制得的那些)，以及在美国专利2,528,378中描述的产物。两性表面活性剂的其他示例可包括月桂酰两性基乙酸钠、椰油酰两性基乙酸钠、月桂酰两性基乙酸二钠、椰油酰二两性基乙酸二钠、以及它们的混合物。也可使用两性乙酸盐和二两性乙酸盐。

适用的两性离子表面活性剂可包括被广泛描述为脂族季铵、鏻鎓和锍化合物的衍生物的那些，其中脂族基团可为直链或支链，并且其中脂族取代基可包含约8至约18个碳原子，使得一个碳原子可包含阴离子基团如羧基、磺酸根、硫酸根、磷酸根或膦酸根。其它两性离子表面活性剂可包括甜菜碱，包括椰油酰胺基丙基甜菜碱。

脂质

本公开的组合物还包含脂质。根据本公开的脂质包括任何多种天然或合成油、脂肪或本领域识别为脂质的其他一般疏水性化合物。示例性脂质包括适用作疏水性皮肤有益剂的甘油脂，包括蓖麻油、红花油、玉米油、胡桃油、花生油、橄榄油、鳕鱼肝油、杏仁油、鳄梨油、棕榈油、芝麻油、大豆油、植物油、向日葵籽油、植物油衍生物、椰子油和衍生的椰子油、棉籽油、衍生化棉籽油、霍霍巴油、可可油、凡士林、矿物油、以及它们的组合。

适用作本文脂质皮肤有益剂的烷基酯的非限制性示例包括脂肪酸异丙酯和长链(即，C10-C24)脂肪酸的长链酯如蓖麻油酸鲸蜡酯，其非限制性示例包括棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、蓖麻油酸鲸蜡酯和蓖麻油酸十八烷基酯。其他示例包括月桂酸己酯、月桂酸异己酯、肉豆蔻酸十四烷基酯、棕榈酸异己酯、油酸癸酯、油酸异癸酯、硬脂酸十六烷酯、硬脂酸癸酯、异硬脂酸异丙酯、己二酸二异丙酯、己二酸二异己酯、己二酸二己基癸酯、癸二酸二异丙酯、酰基异壬酸酯、乳酸月桂酯、乳酸十四烷酯、乳酸鲸蜡酯、以及它们的组合。

适用作本文疏水性皮肤有益剂的烯基酯的非限制性示例包括肉豆蔻酸油基酯、硬脂酸油基酯、油酸油基酯、以及它们的组合。

适合用作脂质皮肤有益剂的脂肪酸聚甘油酯的非限制性示例包括二硬脂酸十甘油酯、二异硬脂酸十甘油酯、一肉豆蔻酸十甘油酯、一月桂酸十甘油酯、一油酸六甘油酯、以及它们的组合。

适用作脂质皮肤有益剂的羊毛脂和羊毛脂的衍生物的非限制性示例包括羊毛脂、羊毛脂油、羊毛脂蜡、羊毛脂醇、羊毛脂脂肪酸、羊毛脂酸异丙酯、乙酰化羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、亚油酸羊毛脂醇酯、蓖麻油酸羊毛脂醇酯、以及它们的组合。

适用作脂质皮肤有益剂的硅油的非限制性示例包括聚二甲基硅氧烷共聚多元醇、二甲基聚硅氧烷、二乙基聚硅氧烷、混合的Cl-C30烷基聚硅氧烷、苯基聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、以及它们的组合。可用于本文的硅油的非限制性示例描述于美国专利5,011,681中。

其他适宜的疏水性皮肤有益剂还包括牛奶甘油三酯(如羟基化牛奶甘油酯)和多元醇脂肪酸聚酯。

洗去型个人护理组合物

如上所述，抗微生物化合物如含锌化合物(例如，吡啶硫酮锌)可通过洗去型个人护理组合物施用于皮肤。合适的含锌化合物在上文中公开。洗去型个人护理组合物可为单相组合物或多相组合物。洗去型个人护理组合物也可涉及单相施用或包括清洁相和有益相的多相施用。清洁相和/或有益相可包含抗微生物化合物如含锌化合物(例如吡啶硫酮锌)。清洁相也可包含例如如本文所述的各种生物相容性表面活性剂。有益相可包含有效量的脂质。清洁相和有益相可被共混和/或图案化。洗去型个人护理组合物为非乳液的形式。

洗去型个人护理组合物可包含按洗去型个人护理组合物的重量计至少约0.1％的含锌化合物(例如吡啶硫酮锌)。洗去型个人护理组合物还可包含按洗去型个人护理组合物的重量计约0.2％至约1.0％的含锌化合物(例如吡啶硫酮锌)。洗去型个人护理组合物也可包含按洗去型个人护理组合物的重量计约0.5％的含锌化合物(例如吡啶硫酮锌)。

A.清洁相

如本文所述，多相组合物的清洁相可包含含锌化合物(例如锌离子载体如吡啶硫酮锌)。此外，清洁相还包含至少一种生物相容性表面活性剂。例如，清洁相可包含生物相容性含水结构化表面活性剂。个人护理组合物中结构化表面活性剂的浓度的范围可为按个人护理组合物的重量计约1重量％至约20％重量；约2重量％至约15重量％；以及约5重量％至约10重量％。

此类结构化表面活性剂可包括十三烷基聚氧乙烯醚(n)硫酸钠(下文为STnS)，其中n限定平均乙氧基化摩尔数。变量n的范围可为约0至约3。变量n的范围也可为约0.5至约2.7、约1.1至约2.5、约1.8至约2.2，或者n可为约2。当n可小于3时，STnS可提供改善的稳定性，有益剂在洗去型个人护理组合物内改善的相容性，以及洗去型个人护理组合物的提高的温和性。STnS的这些有益效果描述于美国专利申请号13/157,665中。

此外，清洁相还可包含结构化体系，其中结构化体系可任选地包含非离子乳化剂和电解质。合适的乳化剂和电解质描述于美国专利申请序列号13/157,665中。洗去型个人护理组合物可任选地不含月桂基硫酸钠(SLS)，并且可包含至少70％的层状结构。

一般可用于洗去型个人护理组合物的清洁相的合适表面活性剂或辅助表面活性剂描述于上文和/或McCutcheon's:Detergents and Emulsifiers North AmericanEdition(Allured Publishing Corporation 1947)(1986)、McCutcheon 的FunctionalMaterials North American Edition(Allured Publishing Corporation 1973)(1992)和美国专利3,929,678中。

清洁相也可包含按组合物的重量计约0％至约95％的范围内的水。

B.有益相

如本文所述，洗去型个人护理组合物可包含有益相。有益相可为疏水性的和/或无水的。有益相还可基本上不含表面活性剂或者不含表面活性剂。

有益相还可包含含有脂质的有益剂。具体地，有益相可包含按所述洗去型个人护理组合物的重量计约0.1％至约50％的有益剂。有益相也可包含按所述洗去型个人护理组合物的重量计约0.5％至约20％的有益剂。有益剂的示例可包括人工汗液、蓖麻油、橄榄油、油酸、1618S、1618U、凡士林、单油酸甘油酯、矿物油、天然油(例如大豆油)、以及它们的混合物。其他合适的有益剂描述于美国专利申请序列号13/157,665中。

正如本文所提到，如上所述的有益相可包含含锌材料和/或羟基吡啶硫酮材料(例如吡啶硫酮锌)。此类含锌材料的示例可包括例如锌盐。可用的锌盐的示例可包括下列：铝酸锌、碳酸锌、氧化锌、磷酸锌、硒化锌、硫化锌、硅酸锌、氟硅酸锌、硼酸锌、氢氧化锌、羟基硫酸锌、以及它们的组合。有益相也可包含如下所述的附加成分。

有益相通常可包含如上所示的一种或多种有益剂。有益相可包含按所述洗去型个人护理组合物的重量计约0.1％至约50％的呈脂质形式的有益剂。

可将附加成分任选地加入洗去型个人护理组合物中以用于处理皮肤，或改变洗去型个人护理组合物的美观性，如具有香料、着色剂、染料等的情况。可用于本文产品中的任选材料可按照它们的美容和/或治疗有益效果或它们的假定作用方式或功能进行归类或描述。然而可以理解，在一些情况下，可用于本文的活性物质和其它材料可提供多于一种的美容和/或治疗有益效果或功能，或通过多于一种的作用模式起作用。因此，可为了方便起见进行本文的分类，并且可能不旨在将成分限制在所列的特别指出的一个或多个应用中。这些任选材料的确切性质和它们加入的含量将取决于所述组合物的物理形式和使用它所进行得清洁操作的性质。可通常以约6％或更少，约5％或更少，约4％或更少，约3％或更少，约2％或更少，约1％或更少，约0.5％或更少，约0.25％或更少，约0.1％或更少，约0.01％或更少，或约0.005％或更少的洗去型个人护理组合物来配制任选材料。

为进一步改善应力条件(如高温和振动)下的稳定性，可调节单独相的密度，使得它们可以基本上等同。为了达到这一点，低密度微球体可以被加入所述洗去型个人护理组合物的一个或多个相中。包含低密度微球的洗去型个人护理组合物的示例描述于美国专利公布No.2004/0092415A1中。

可用于个人护理组合物中的其他非限制性任选成分可包括任选有益组分，其可选自增稠剂；防腐剂；芳香剂、螯合剂(例如授予Bisset等人的美国专利5,487,884中所述的那些)；多价螯合剂；维生素(例如视黄醇)；维生素衍生物(例如乙酸生育酚酯、烟酰胺、泛醇)；防晒剂；脱屑活性物质(例如授予Bisset的美国专利5,681,852和5,652,228中所述的那些)；抗皱纹/抗萎缩活性物质(例如N-乙酰基衍生物、硫醇、羟基酸、苯酚)；抗氧化剂(例如抗坏血酸衍生物、生育酚)皮肤抚慰剂/皮肤愈合剂(例如泛酸衍生物、芦荟、尿囊素)；亮肤剂(例如曲酸、熊果苷、抗坏血酸衍生物)；皮肤美黑剂(例如二羟基丙酮)；抗痤疮药物；精油；感觉剂；颜料；着色剂；珠光剂；干涉颜料(例如美国专利No.6,395,691、美国专利No.6,645,511、美国专利No.6,759,376、美国专利No.6,780,826中所公开的那些)颗粒(例如滑石、高岭土、云母、绿土粘土、纤维素粉末、聚硅氧烷、二氧化硅、碳酸盐、二氧化钛、聚乙烯珠粒)、疏水改性的非小板颗粒(例如疏水改性的二氧化钛及美国专利公布No.2006/0182699A中所述的其他材料)，以及它们的混合物。多相个人护理组合物可包含按洗去型个人护理组合物的重量计约0.1％至约4％的疏水改性的二氧化钛。此类皮肤活性物质的其他此类合适示例描述于美国专利申请序列号13/157,665中。

其它任选成分可最典型地为被认可用于化妆品中并描述于“CTFA CosmeticIngredient Handbook”第二版(The Cosmetic，Toiletries，and Fragrance Association，Inc.1988，1992)中的那些材料。

示例性方法

A.刷杯方法

正如本文所提到，刷杯方法可用于有助于测定多少含锌化合物(例如锌离子载体，诸如吡啶硫酮锌)沉积到个体的皮肤上。在实施过程中，受试者首先在流动的水下(流速＝4.5L/min，温度＝35-38℃)润湿手掌前臂表面持续约15秒。接着，受试者将1mL剂量的沐浴剂(经由一次性注射器)接受到手掌前臂表面。受试者通过用其相对的手将施加的沐浴剂摩擦约15秒，继续在手掌前臂上产生泡沫。15秒发泡过程后，使泡沫在皮肤上再静置15秒。15秒等待时间(发泡过程开始后30秒)结束时，受试者淋洗手臂约10秒，使流动的水接触近侧手掌前臂表面，并且向下流淌(朝向远侧表面)。淋洗后，受试者使用纸巾拍干表面。

该过程的下一部分涉及皮肤接触边缘上包含硅氧烷填缝材料小珠的2cm直径玻璃圆筒，其紧紧地压靠皮肤表面以防止萃取流体渗漏。可将一mL萃取溶剂吸移到玻璃圆筒中。为测定沉积有多少吡啶硫酮锌，萃取溶剂可为例如80:20的0.05M EDTA:乙醇。在使用移液管或玻璃棒时，可采用适度压力将玻璃圆筒内的整个区域洗擦约30秒。可移出溶液并且吸移到带标签的玻璃样品小瓶中。可使用新鲜的萃取溶液重复刷杯方法，将其与带标签的小瓶中的初始萃取物合并。

在每次使用后，清洁玻璃圆筒和玻璃棒。例如，可将各个圆筒和棒浸入稀释的溶液中并用手指或软毛刷洗擦。然后可将圆筒和棒浸入异丙醇(IPA)中。最终，将圆筒和棒用例如Kimwipe或其他不起毛的纸巾擦干，以移除任何可见残留物。可在每天结束时或当任何可见残留物层可见于其底部时更换洗擦溶液。此外，可将样品储存于4℃(±3℃)，直至样品被递送以进行HPLC分析。然后采用HPLC分析测定沉积量。接着用2-2'-二巯基吡啶将游离的羟基吡啶硫酮溶液衍生化，并且随后利用UV检测，经由HPLC进行分析。结果报导为每mL溶液中的吡啶硫酮锌的μg数。

B.监测生物标记：天然保湿因子(NMF)

可测量能够指示皮肤健康状态的生物标记来评价暴露于根据本公开的产物的受试者的上皮组织的一个或多个表面上的变化。因此，生物标记可允许相对简单、有效和快速地测定产物的有效性，从而为皮肤提供一种或多种有益效果，或在皮肤暴露于根据本公开的组合物之时或之后监测皮肤的变化。

上皮组织样品可被获得用于采集和分析生物标记分析物。用于获得样品的合适技术的非限制性示例包括施加胶带、通过灌洗进行清洗、活组织检查、擦拭、刮擦、吸掉以及它们的组合。无论哪种技术用于获得样品，其应使得所获得的生物标记是存在于上皮组织表面上和/或上皮组织中的那些，并且不是存在于任何下面非上皮组织例如肌肉中的那些。

获得上皮组织的方法是通过施加胶带，例如但不限于任何类型的医用胶带。用于施加胶带的技术可如同将胶带施加于皮肤并然后移除它那样简单。可将获自皮肤且存在于胶带上的生物标记分析物通过本领域已知保留生物标记分析物的任何技术从胶带移除，以用于合适的检测和测量测定。胶带的示例可包括但不限于D-squame和其均购自CuDerm Corporation(Dallas,Tex.,USA)；以及胶带，其购自3M company(Minnesota USA)。

生物标记分析物可存在于测试和对照样品中，并且可使用本领域已知一种或多种技术进行鉴定。检测技术诸如基于抗体的结合技术、基于核苷酸探针的特异性杂交测定、使用标记物、染料及其他比色和荧光探针和测定的高度特异性化学标记，以及可检测标记的化合物的酶联产生能够被用于检测和测量生物标记分析物。在一些非限制性示例中，生物标记分析物包括炎性细胞因子、天然保湿因子(NMF)、角蛋白1、角蛋白10、角蛋白11、脂质及总蛋白。

示例性的生物标记为天然保湿因子或NMF。NMF的示例包括氨基酸、乳酸、尿素、以及吡咯烷酮羧酸(PCA)，并且更具体地包括反式-尿刊酸、瓜氨酸、甘氨酸、组氨酸、鸟氨酸、脯氨酸、2-吡咯烷酮-5-酸、以及丝氨酸。如上所示，用本公开的组合物治疗的效果可通过NMF量的增大加以证实。可测量NMF来检测皮肤外观的改善，或者呈特应性皮炎(具有或不具有损伤)、皮肤菌群失调或痤疮形式的可治疗皮肤状况的进展的减缓。此类方法进一步描述于美国专利申请号13/007,630中。

为了测量NMF值，可使用以下方法。将得自受试者的胶带条(D-Squame)置入聚丙烯管中，并通过涡旋或超声处理进行混合，用酸化水提取相应的氨基酸相关的NMF(甘氨酸、组氨酸、脯氨酸、丝氨酸、尿刊酸、瓜氨酸、鸟氨酸和2-吡咯烷酮-5-羧酸)。得自胶带条的提取物掺杂有各NMF的稳定同位素内标物，并且随后利用多反应监测，通过具有串联质谱的梯度反相高效液相色谱法进行分析。在所需浓度范围内制备用于NMF的组合标准物，其掺杂有稳定同位素内标物，并且与样品一同分析。将各NMF的各标准物的响应比(标准物响应/内标物响应)对标准浓度作图，以生成各NMF的回归曲线。然后，由适当的回归标准曲线经内推法确定提取物中各NMF的浓度。

以下实施例示出本公开的示例性方法。实施例1提供患有特应性皮炎的受试者的皮肤微生物群的分析。实施例2公开了患有特应性皮炎的受试者和健康受试者的皮肤微生物群的比较。实施例3示出健康皮肤发展出特应性皮炎时皮肤微生物群多样性的变化。实施例4显示了在用根据本公开的组合物处理可治疗皮肤状况如特应性皮炎时，皮肤微生物群的变化的测量/监测。

实施例

实施例1

患有特应性皮炎的受试者的皮肤的微生物群分析

与患有特应性皮炎的皮肤的微生物群相关联的微生物负荷比与健康皮肤相关联的微生物负荷更重。在沐浴剂中使用吡啶硫酮锌降低总细菌含量。

对来自患有特应性皮炎的皮肤的微生物群样品进行序列分析以鉴定存在于皮肤上的各种菌属，并测量相对丰度。在第一轮测序中，使用封闭式OTU分类方法获得150-800bp的读取长度。使用Mega-blast搜索引擎询问GG-13-8-91数据库。使用封闭式OTU分类方法，第二轮测序产生250-600bp的读取长度。使用Bowtie2搜索引擎再次询问GG-13-8-91数据库。使用封闭式OTU分类方法，第三轮测序涉及获取的250-600bp的读取长度。使用Bowtie2搜索引擎询问GG-13-8-97数据库。结果示于图1中。

数据表明，葡萄球菌是存在于患有特应性皮炎的受试者的皮肤微生物群中的主要菌属。此外，数据证实与特应性皮炎相关联的皮肤微生物群包含超过十四个菌属。

实施例2

特应性皮炎皮肤微生物群与健康皮肤微生物群的比较

来自健康受试者与患有特应性皮炎的受试者的皮肤微生物群的详细比较揭示了几个值得注意的特征。如图2所示，几个葡萄球菌菌种在患有特应性皮炎的受试者的皮肤微生物群中比在健康受试者的皮肤微生物群中以更大的比例存在，并且当将患有特应性皮炎且有损伤的受试者和健康受试者的比较结果与患有特应性皮炎但无损伤的受试者和健康受试者的比较结果相比时，差异更加明显。金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌各自在特应性皮炎皮肤微生物群中比在健康皮肤微生物群中以更大的相对丰度存在，并且这些葡萄球菌菌种中的每一种的相对丰度在患有特应性皮炎且有损伤的受试者的皮肤微生物群中比在患有特应性皮炎但无损伤的受试者的皮肤微生物群中更大。

相比之下，与患有特应性皮炎的受试者的皮肤微生物群相比，几种菌属在健康皮肤微生物群中表现出更大的相对丰度，无论特应性皮炎受试者是否表现出损伤。表现出这种相对丰度模式的菌属包括链球菌、丙酸杆菌、微球菌和棒状杆菌。模拟对葡萄球菌菌种进行的观察，链球菌、丙酸杆菌、微球菌、和棒状杆菌菌属中的每一种在患有特应性皮炎且有损伤的受试者中比在患有特应性皮炎但无损伤的受试者中以更大的相对丰度存在。

实施例3

特应性皮炎发展期间的细菌多样性

在发展特应性皮炎的过程中，健康皮肤发生变化，表现出特应性皮炎的特征炎性指示，最终导致皮肤损伤。数据获自对皮肤微生物群样品的序列分析(参见实施例1)，该样品从经受统计分析的受试者的以下皮肤区域采集：肘前区、臂部、腋窝、肘部、膝盖、颈、腘窝和小腿。统计分析揭示基于香农指数(Shannon Index)的α多样性值。如图3所示，特应性皮炎皮肤微生物群的细菌多样性的α多样性测量显示多样性在健康皮肤中最大，在无损伤的特应性皮炎皮肤微生物群中的多样性减少，并且在来自表现出损伤的特应性皮炎受试者的微生物群中的多样性最低。同样明显的是，相对多样性的模式在所有皮肤取样位置上保持不变。

实施例4

皮肤疾病(特应性皮炎)治疗的基于皮肤微生物群的监测

本公开的组合物包含作为显著组分的锌离子载体，并且吡啶硫酮锌为示例性的锌离子载体。对0.5％吡啶硫酮锌沐浴剂、车身清洗剂、或B7U条皂洗涤剂中的任一种的单次洗涤或四周洗涤周期后对皮肤微生物群的效应进行研究。监测11种所识别的菌属的以及一类未归类的微生物的相对丰度。11种所识别的菌属是葡萄球菌(Staphylococcus)、链球菌(Streptococcus)、微球菌(Micrococcus)、棒状杆菌(Corynebacterium)、考克氏菌(Kocuria)、丙酸杆菌(Propionibacterium)、罗氏菌(Rothia)、微杆菌(Microbacterium)、类芽孢杆菌(Paenibacillus)、副球菌(Paracoccus)、和异常球菌(Deinococcus)。皮肤样品得自健康受试者(图4中指示为“健康的”)以及接受单次洗涤的患有特应性皮炎且有损伤的受试者(“AD.L”)、接受单次洗涤的患有特应性皮炎但无可见损伤的受试者(“AD.NL”)、接受四周洗涤周期的患有特应性皮炎且有损伤的受试者(“AD.L4W”)、以及接受四周洗涤周期的患有特应性皮炎但无损伤的受试者(“AD.NL4W”)。图4所示的数据证实0.5％的吡啶硫酮锌沐浴剂洗涤导致经四周洗涤周期后，11种所识别的菌属的相对丰度发生显著变化。患有特应性皮炎且有损伤的受试者经四周洗涤周期后的变化中，值得注意的是葡萄球菌(Staphylococcus)、微杆菌(Microbacterium)、和类芽孢杆菌(Paenibacillus)的相对丰度显著降低，并且链球菌(Streptococcus)、微球菌(Micrococcus)、棒状杆菌(Corynebacterium)、考克氏菌(Kocuria)、丙酸杆菌(Propionibacterium)、罗氏菌(Rothia)、副球菌(Paracoccus)和异常球菌(Deinococcus)的相对丰度显著增加。然而，对于未表现出损伤的特应性皮炎患者，皮肤微生物群的变化模式不同。经四周洗涤周期后，葡萄球菌(Staphylococcus)、链球菌(Streptococcus)、考克氏菌(Kocuria)、微杆菌(Microbacterium)、和类芽孢杆菌(Paenibacillus)的相对丰度降低，并且微球菌(Micrococcus)、棒状杆菌(Corynebacterium)、丙酸杆菌(Propionibacterium)、副球菌(Paracoccus)和异常球菌(Deinococcus)的相对丰度增加。对于患有特应性皮炎且无可见损伤的受试者，经四周洗涤周期后，罗氏菌(Rothia)的相对丰度略有下降。

如通过所识别的菌属的相对丰度测得的皮肤微生物群多样性的变化对于使用0.5％的吡啶硫酮锌沐浴剂完成了四周洗涤研究的受试者比使用B7U条皂洗涤剂或单独的车身清洗剂的受试者更显著。此外，健康皮肤对照的菌属的相对丰度比较显示，患有特应性皮炎的受试者经四周洗涤周期后改变了他们的皮肤微生物群多样性，该改变方式使其更接近健康皮肤的微生物群多样性，同时患有特应性皮炎但无损伤的受试者更接近健康皮肤的皮肤微生物群多样性。数据表明吡啶硫酮锌有效地选择性调节或调理菌属相对丰度，并且锌离子载体使皮肤微生物群组成转变成与健康皮肤更接近的组成，这标志着该治疗剂具有调节受试者皮肤微生物群的有益效果，该受试者具有尚可但不健康的皮肤，例如患有皮肤疾病诸如特应性皮炎、皮肤菌群失调、或痤疮的受试者。

进行另一项研究以专门评估锌离子载体(即，吡啶硫酮锌)对特应性皮炎损伤的皮肤微生物群多样性的效应，该研究使用本领域熟知的标准沐浴剂方案。每日进行洗涤，持续四周周期，并且使用16S rDNA测序以鉴定菌属，同时使用qPCR扩增以给菌属丰度定量。进行基线测量和在四周洗涤周期后的测量。对照包括用B7U条皂或单独的BCP2车身清洗剂洗涤的受试者。BCP2车身清洗剂包含椰油酰胺基丙基甜菜碱(2.45％)、氯化钠(4.03％)、十三烷基聚氧乙烯醚-3(1.31％)、瓜尔羟丙基三甲基氯化铵(0.43％)、黄原胶(0.19％)、丙烯酸酯/丙烯酸C10-C30烷基酯交联聚合物(0.03％)、苯甲酸钠(0.27％)、柠檬酸(50％的DI水溶液，至pH＝5.7)、防腐剂(0.04％)、香料(0.25％)、和水及微量组分(Q.S.)；在适当情况下，可包含吡啶硫酮锌(0.5％)、十三烷基聚氧乙烯醚-2硫酸钠(8.21％)、凡士林(14.70％)、以及单油酸甘油酯(0.30％)。BCP2和BCP2ZPT组合物的组合列于下文。该组合物可通过首先将水加入主混合容器并连续混合来制备。然后加入氯化钠、黄原胶、瓜耳羟丙基三甲基氯化铵、十三烷基聚氧乙烯醚硫酸钠、椰油酰胺基丙基甜菜碱。用十三烷基聚氧乙烯醚-3和丙烯酸酯/丙烯酸C10-C30烷基酯交联聚合物来制备预混物。将预混物加入主混合容器中。加入苯甲酸钠和EDTA。然后将pH调节至5.7。加入卡松(kathon)和香料。将ZPT加入到BCP2-ZPT产品中。

图5中所示的结果表明经四周洗涤周期后，用呈吡啶硫酮锌形式的锌离子载体进行特异性处理导致葡萄球菌的相对丰度显著降低(p＝0.03,FDR＝0.09)，并且导致丙酸杆菌、棒状杆菌和链球菌的丰度显著相对增加。另外的数据表明，链球菌和另一种菌属(即，考克氏菌)的相对丰度在无损伤的特应性皮炎皮肤(尚可但不健康的皮肤)与健康皮肤之间有显著差异。

进行了评估锌离子载体对患有特应性皮炎但无损伤的受试者中的皮肤微生物群多样性的治疗效果的相关实验，用于评估该疗法在此情况下的效果。实验设计涉及在四周周期内，对患有特应性皮炎但无可见损伤的受试者进行每日沐浴，受试者每天用B7U条皂、单独的车身清洗剂(BCP2基)、或BCP2ZPT(其包含0.5％吡啶硫酮锌)进行洗涤。皮肤样品再次通过16SrDNA测序与qPCR进行微生物群组成分析，用于定量皮肤微生物群中的菌属的丰度。

结果在图6中示出，并且表明呈吡啶硫酮锌形式的锌离子载体治疗剂显著降低了葡萄球菌的丰度(p＝0.027,FDR>0.05)，而用B7U条皂或单独的车身清洗剂(BPC2)洗涤四周不显著减少患有特应性皮炎但无可见损伤的受试者皮肤上的葡萄球菌的丰度。另外的数据显示，使用锌离子载体的四周洗涤方案也导致链球菌和考克氏菌的相对丰度的显著差异。期望包含锌离子载体的组合物，诸如包含锌离子载体(例如吡啶硫酮锌)、生物相容性表面活性剂和脂质的组合物，将不仅影响葡萄球菌、链球菌和考克氏菌的相对丰度，而且还会影响实施例4中识别的其他菌属(参见图4)。

还进行了一项实验，用于评估是否可以恢复患有特应性皮炎的受试者的损伤区域的皮肤微生物群多样性。该实验设计涉及一个四周周期的每日腿部清洗，受试者使用B7U条皂、车身清洗剂(BCP2)、或BCP2ZPT进行洗涤。包含损伤的皮肤采样自以下区域：肘前区、臂部、肘部、膝盖、颈部、腘窝和小腿。在第0周和第4周获取测量的皮肤微生物群多样性比较结果。多样性测量是基于香农指数的α值。

图7中所示的结果表明来自取样的不同皮肤区域的皮肤微生物群多样性通过吡啶硫酮锌(BCP2ZPT)恢复，并且通过车身清洗剂(BCP2)达到更低的程度。因此，根据本公开的组合物的作用选择性地减少一些菌属(尤其是葡萄球菌)的相对丰度，并且增加其他菌属的相对丰度，并且对皮肤菌属的这些选择性效应用于调节皮肤微生物群，该调节方式是基于多样性和相对丰度恢复皮肤微生物群的野生型外观。

在实施例4以及本公开其他部分中提供的数据显示，包含含锌离子载体(例如，吡啶硫酮锌)、生物相容性表面活性剂和脂质的组合物可提供选择性治疗，可用于降低葡萄球菌(Staphylococcus)的相对丰度并调节多种其他皮肤菌属的相对丰度，其治疗的皮肤状况特征在于异常的皮肤微生物群多样性，例如特应性皮炎(具有或不具有损伤)、皮肤菌群失调、或痤疮。此外，数据表明评估皮肤微生物群多样性在识别发展尚可但不健康的皮肤的趋势或可能性方面的价值，该尚可但不健康的皮肤与多种皮肤疾病相关联，诸如特应性皮炎(具有或不具有损伤)、皮肤菌群失调、或痤疮。

实施例/组合

本公开的一些方面也在以下编号的段落中进行描述。

A.一种选择性地提高可治疗皮肤的皮肤微生物群的微生物多样性的方法，所述方法包括施用有效量的包含含有锌化合物和发泡生物相容性表面活性剂的清洁剂和含有脂质的有益剂的多相皮肤改善组合物，从而与在施用所述多相皮肤改善组合物之前的所述皮肤微生物群的微生物多样性相比，选择性地提高所述皮肤微生物群的微生物多样性。

B.根据段落A所述的方法，其中所述锌化合物是单甘油锌或锌离子载体。

C.根据段落A或段落B所述的方法，其中所述锌化合物为吡啶硫酮锌或巯氧吡啶锌。

D.根据段落A至段落C中任一段落所述的方法，其中每cm2皮肤施用0.1μg至2.0μg吡啶硫酮锌。

E.根据段落A至段落D中任一段落所述的方法，其中所述锌化合物作为沐浴剂施用持续至少四周。

F.根据段落A至段落E中任一段落所述的方法，其中所述生物相容性表面活性剂为非离子表面活性剂或阴离子表面活性剂。

G.根据段落F所述的方法，其中所述阴离子表面活性剂为十三烷基聚氧乙烯醚(n)硫酸钠，其中n为0.5至2.7。

H.根据段落A至段落G中任一段落所述的方法，其中所述脂质是凡士林、单油酸甘油酯、甘油、神经酰胺、胆固醇、脂肪酸、甘油三酯、磷脂、或它们的任何组合。

I.根据段落A至段落H中任一段落所述的方法，其中所述脂质组成为凡士林或凡士林和单油酸甘油酯的混合物。

J.根据段落A至段落I中任一段落所述的方法，其中每cm²皮肤施用20μg至200μg脂质。

K.根据段落A至段落J中任一段落所述的方法，其中通过相对于在施用所述多相皮肤改善组合物之前葡萄球菌的皮肤水平而选择性地降低其皮肤水平，所述皮肤微生物群的微生物多样性相对于与施用所述多相皮肤改善组合物之前的所述皮肤的微生物多样性而提高。

L.根据段落K所述的方法，其中所述葡萄球菌是金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌。

M.根据段落A至段落L中任一段落所述的方法，其中通过相对于在施用所述多相皮肤改善组合物之前丙酸杆菌、棒状杆菌或链球菌中的至少一种在所述皮肤上的水平而选择性地提高它们在所述皮肤上的水平，所述皮肤微生物群的微生物多样性相对于在施用所述多相皮肤改善组合物之前的所述皮肤微生物群的微生物多样性提高。

N.根据段落K至段落M中任一段落所述的方法，其中含量的变化导致香农指数(Shannon index)增加至少20％。

本文引用的每篇参考文献以引用的方式将全文或相关行数并入本文，如将由其引用的语境显而易见。所公开的主题参考各种具体实施例和技术进行描述。然而，应当理解，在保持在所公开主题的实质和范围内的情况下可以作出许多变化和修改。

Claims

1.一种选择性地提高可治疗皮肤的皮肤微生物群的微生物多样性的方法，所述方法包括选择洗去型多相皮肤改善组合物，所述组合物包含含有抗微生物化合物和发泡生物相容性表面活性剂的清洁相；和含有有益剂的有益相，所述有益剂含有脂质；以及施用有效量的所述多相皮肤改善组合物，从而与在施用所述多相皮肤改善组合物之前的所述皮肤微生物群的微生物多样性相比，选择性地提高所述皮肤微生物群的微生物多样性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中锌化合物为单甘油锌或锌离子载体。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述锌化合物为吡啶硫酮锌。

4.根据权利要求1所述的方法，其中每cm²皮肤施用0.1μg至2.0μg的所述锌化合物。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述锌化合物作为沐浴剂施用持续至少四周。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述生物相容性表面活性剂为非离子表面活性剂或阴离子表面活性剂。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述阴离子表面活性剂为十三烷基聚氧乙烯醚(n)硫酸钠，其中n为0.5至2.7。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述脂质为凡士林、单油酸甘油酯、甘油、神经酰胺、胆固醇、脂肪酸、甘油三酯、磷脂、或它们的任何组合。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述脂质组合物为凡士林或凡士林和单油酸甘油酯的混合物。

10.根据权利要求1所述的方法，其中每cm²皮肤施用20μg至200μg脂质。

11.根据权利要求1所述的方法，其中通过相对于在施用所述多相皮肤改善组合物之前葡萄球菌的皮肤水平而选择性地降低其皮肤水平，所述皮肤微生物群的微生物多样性相对于在施用所述多相皮肤改善组合物之前的所述皮肤的微生物多样性而提高。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述葡萄球菌为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)。

13.根据权利要求1所述的方法，其中通过相对于在施用所述多相皮肤改善组合物之前丙酸杆菌、棒状杆菌或链球菌中的至少一种在所述皮肤上的水平而选择性地提高它们在所述皮肤上的水平，所述皮肤微生物群的微生物多样性相对于在施用所述多相皮肤改善组合物之前的所述皮肤微生物群的微生物多样性而提高。

14.根据权利要求13所述的方法，其中含量的变化导致香农指数增加至少20％。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗微生物化合物包括含锌化合物；香芹酚；新洋茉莉醛、甲萘醌；symclairol；茜素；bardic 2250；二葡萄糖酸氯已定；氯己醇；4-异丙基-3-甲基苯酚；羟甲辛吡酮，2-甲氧基-1,4-萘醌；5-羟基-1,4-萘醌；1,2-十二烷二醇；根皮素；槲皮素水合物；没食子酸丙酯；3,4,5-三羟基苯甲酸甲酯；没食子酸辛酯；没食子酸月桂酯；鞣花酸树皮；肉桂醛；香叶醇；百里酚；扁柏酚；白杨素；或它们的组合。

16.一种用于选择性地提高患有可治疗皮肤状况的受试者的皮肤微生物群的多样性的方法，所述方法包括选择选择性地靶向葡萄球菌的洗去型多相皮肤改善组合物，其中所述多相皮肤改善组合物包含含有表面活性剂和吡啶硫酮锌的清洁相；和含有有益剂的有益相。

17.根据权利要求16所述的方法，其中每cm²皮肤施用0.1μg至2.0μg吡啶硫酮锌。