CN109627298B - 一种具有抗hiv-1作用的重组鞭毛蛋白及其编码基因和应用 - Google Patents

一种具有抗hiv-1作用的重组鞭毛蛋白及其编码基因和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种具有抗HIV‑1作用的重组鞭毛蛋白及其编码基因和应用，属于生物工程技术领域。本发明所述重组鞭毛蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明所述重组鞭毛蛋白对巨噬细胞无毒，能显著性上调炎性细胞因子和抗病毒因子表达，能在核酸和蛋白水平上抑制HIV‑1的复制与感染，能用于抗HIV‑1药物的制备。

Description

一种具有抗HIV-1作用的重组鞭毛蛋白及其编码基因和应用
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种具有抗HIV-1作用的重组鞭毛蛋白及其编码基因和应用。
背景技术
鞭毛是附着在菌体上呈细长波状弯曲的丝状体，是细菌的运动器官，与致病性有关。鞭毛自细胞膜长出，游离于菌细胞膜外，有基础小体、钩状体和丝状体三个部分组成。由菌体内形成的鞭毛蛋白分子不断地添加到鞭毛的末端堆积而形成。鞭毛蛋白单体(flagellin，30-60kDa，基于细菌分类群)由鞭毛蛋白输出系统从细菌中分泌出来。由于鞭毛蛋白在各种细菌物种中广泛存在，且在单个细菌细胞中含量丰富，因此成为了宿主免疫系统的主要靶标。获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS)简称艾滋病，是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)感染引起的一种传染性疾病。自从1981年发现第一例病例以来，艾滋病一直以惊人的速度在全球蔓延，成为世界上危害人类生命和健康最严重的病毒性疾病之一。艾滋病通过性接触、血液及母婴三种方式传播。据联合国艾滋病规划署(UNAIDS)的统计，截至到2017年，已有7730万[5990万-1亿]人感染了艾滋病毒。自该流行病开始以来，有3540万[2500万-49.9万]人死于与艾滋病有关的疾病。HIV-1(艾滋病病毒1型)是HIV病毒中的一个亚型，在分类上属于反转录病毒科中的慢病毒(lentivirus)亚科。HIV-1gp120与受体细胞表面CD4分子结合，主要感染CD4+T细胞、单核-巨噬细胞、树突状细胞等。HIV-1感染宿主免疫细胞后迅速繁殖，并直接导致CD4+T细胞破坏，最终引起机体免疫缺陷。HIV病毒危害巨大，现有技术中对抗HIV病毒的有效手段较为缺乏。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有抗HIV-1作用的重组鞭毛蛋白及其编码基因和应用。
本发明提供了一种具有抗HIV-1作用的重组鞭毛蛋白，所述重组鞭毛蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
本发明提供了编码上述重组鞭毛蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示。
本发明提供了一种重组载体，包括表达载体和上述基因。
优选的，所述表达载体为原核表达载体pET30a。
本发明还提供了一种重组菌，所述重组菌包括宿主细菌和上述重组载体。
优选的，所述宿主细菌为大肠杆菌BL21。
本发明提供了上述重组鞭毛蛋白、基因、重组载体或重组菌在制备抗HIV-1药物中的应用。
优选的，所述抗HIV-1药物具有抗HIV-1感染和抗HIV-1复制的功能。
本发明还提供了一种抗HIV-1药物，包括上述重组鞭毛蛋白。
有益效果：本发明提供了一种具有抗HIV-1作用的重组鞭毛蛋白，所述重组鞭毛蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。所述重组鞭毛蛋白对巨噬细胞无毒，能显著性上调炎性细胞因子和抗病毒因子表达，能在核酸和蛋白水平上抑制HIV-1的复制与感染，能用于抗HIV-1药物的制备。
附图说明：
图1为本发明实施例2所述重组鞭毛蛋白在表达纯化后的琼脂糖凝胶电泳图；
图2为本发明实施例3所述MTT法检测重组鞭毛蛋白在离体人巨噬细胞中的细胞毒性检测结果；
图3为本发明实施例4所述荧光实时定量RT-PCR检测重组鞭毛蛋白处理人巨噬细胞后不同时间点炎性因子的表达结果，其中，*表示P＜0.05；**表示P＜0.01；***表示P＜0.001)；
图4为本发明实施例4所述荧光实时定量RT-PCR检测重组鞭毛蛋白处理人巨噬细胞后不同时间点抗病毒因子IFN-β的表达结果，其中，*表示P＜0.05；
图5为本发明实施例5所述应用荧光实时定量RT-PCR和ELISA分别检测不同浓度鞭毛蛋白处理感染HIV-1 Bal株人巨噬细胞后HIV-1 gag基因和p24蛋白的表达结果，其中，**表示P＜0.01；***表示P＜0.001；
图6为本发明实施例5所述应用荧光实时定量RT-PCR和ELISA分别检测鞭毛蛋白处理感染HIV-1 Bal株人巨噬细胞不同时间后HIV-1 gag基因和p24蛋白的表达结果，其中*表示P＜0.05；**表示P＜0.01。
具体实施方式
本发明提供了一种具有抗HIV-1作用的重组鞭毛蛋白，所述重组鞭毛蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
本发明提供了一种编码上述重组鞭毛蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQID No.2所示。本发明所述基因优选为人工合成序列，合成方法包括：根据Typhi str.CT18(ID-1070204)基因的基因组信息，对大小为1521bp编码区CDS区的密码子进行优化，在其氨基末端加入一个6*His标签，最后在其两端分别加入EcoRI和XhoI酶切位点，合成相应的基因序列(SEQ ID No.2)。
本发明提供了一种重组载体，包括表达载体和上述基因。在本发明中，所述表达载体优选为原核表达载体pET30a。本发明优选利用EcoRI和XhoI酶切位点将上述基因与pET30a表达载体连接，构建得到重组表达载体。
本发明还提供了一种重组菌，所述重组菌包括宿主细菌和上述重组载体。在本发明中，所述宿主细菌优选为大肠杆菌BL21。本发明对具体的重组载体和重组菌的构建方法不作特别限定，本领域常规操作即可。
本发明利用重组菌表达并纯化，获得纯化的重组鞭毛蛋白。本发明对具体的表达纯化方法不作特别限定，本领域常规操作即可。
本发明提供了上述重组鞭毛蛋白、基因、重组载体或重组菌在制备抗HIV-1药物中的应用。优选的，所述抗HIV-1药物具有抗HIV-1感染和抗HIV-1复制的功能。本发明经实验验证，所述重组鞭毛蛋白在不高于5000ng/ml的浓度范围内对巨噬细胞无毒；用5ng/ml的重组鞭毛蛋白处理巨噬细胞，能显著上调炎性细胞因子IL-1β、IL-8、IL-6基因以及抗病毒因子IFN-β基因的表达；人巨噬细胞感染HIV-1 Bal株后，用0.5～50ng/ml的重组鞭毛蛋白处理，能分别在核酸和蛋白水平上对HIV-1的复制与感染形成抑制，证明本发明提供的重组鞭毛蛋白具有抗HIV-1的作用。
本发明还提供了一种抗HIV-1药物，所述药物包括上述重组鞭毛蛋白。在本发明中，所述重组鞭毛蛋白在所述抗HIV-1药物中的质量含量优选为0.1～99％，更优选为1～50％。所述抗HIV-1药物中重组鞭毛蛋白的有效作用浓度优选为3～8ng/ml，更优选为5ng/ml。
本发明对所述抗HIV-1药物的制备方法不作特别限定，采用本领域常规方法，以所述重组鞭毛蛋白配合本领域可接受的载体制得即可。
下面结合实施例对本发明提供的一种具有抗HIV-1作用的重组鞭毛蛋白及其编码基因和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
构建质粒和纯化表达蛋白
①根据Typhi str.CT18(ID-1070204)基因的基因组信息，进行大小为1521bp编码区CDS区的密码子优化，在其氨基末端加入一个6*His标签，最后在其两端分别加入EcoRI和XhoI酶切位点，合成相应的序列(SEQ ID No.2)；
②将以上合成的序列克隆到原核表达载体pET30a中，进行测序鉴定，得到表达质粒pF；
③将质粒pF转化至感受态菌BL21(DE3)；
④按照1：2000的体积比将转化后的菌体接种至培养基(含卡那霉素50μg/ml)中，37℃，220rpm的条件下活化11～12h过夜；
⑤转接，按1％的体积比将活化后的菌液转接至2YT培养基(含卡那霉素50μg/ml)，37℃，220rpm的条件下培养2～3h(细菌生长至对数早-中期)；
⑥向转接培养2～3h的菌液中加入IPTG(终浓度为0.5mmol/L)进行诱导表达，诱导表达4～5h后，按6000rpm的转速离心5min，收集菌体，然后用Binding Buffer重悬清洗，再离心称重计算菌体湿重后，以每克菌体/20ml1×Binding Buffer重悬；
⑦超声破碎菌体：750W，按照每超声3sec，间歇5sec的频率，共超声30-40min至菌液清亮；
⑧离心(12000rpm，20min，4℃)，取上清，0.22um滤膜过滤；
⑨柱子准备：
以10倍柱床体积/1h的速率，依次加入如下成分：
过滤后的上清重悬后静置1h
6倍柱床体积去离子水；
5倍柱床体积的0.1mol/L的NiSO4溶液；
6倍柱床体积去离子水；
5倍柱床体积的1×Binding Buffer；
⑩上样：按照15-20倍柱床体积/1h的速率上样；
Figure BDA0001877771840000051
洗脱：
以10倍柱床体积/1h的速率，依次加入如下成分：
10-15倍柱床体积Binding Buffer；
10倍柱床体积含25mmol/L的咪唑Buffer(根据情况可适当增加洗脱体积，尽量洗去杂蛋白)；
然后按照20个柱床体积/1h的速率，用100～200mmol/L的咪唑Buffer收集蛋白样品。
Figure BDA0001877771840000052
柱子再生：
以10倍柱床体积/1h的速率，依次加入如下成分：
3倍柱床体积Elute buffer；
5倍柱床体积Strip Buffer；
5倍柱床体积去离子水；
5倍柱床体积的0.1mol/L的NaOH溶液；
20倍柱床体积去离子水，至pH值小于7.5；
3倍柱床体积的25％乙醇；
加满25％乙醇，4℃保存。
Figure BDA0001877771840000061
PBS透析(4℃透析2次后，再过夜透析一次)；
Figure BDA0001877771840000062
蛋白浓缩：用超滤管4℃离心浓缩(离心力小于2000g)。
实施例2
SDS-PAGE分析重组鞭毛蛋白的表达
①安装并固定玻璃板；加分离胶，上部加满蒸馏水覆盖；分离胶聚合后，去除残余液体；加5％浓缩胶，插入干净的梳子浓缩胶聚合后，安装到电泳槽中，加入电泳缓冲液，拨出梳子。
②将蛋白样品与缓冲液混合后沸水中加热5min后离心，取5-10μl样品上样；
③电泳，开始以80V恒压30min，待溴酚兰染料进入分离胶后；将电压增加到120V，继续电泳至染料抵达分离胶底部；
④小心将胶从玻璃板上剥离下来，于容器中用蒸馏水冲洗数遍；
⑤用考马斯亮蓝染色液染色4-6h；
⑥脱色液中脱色2h，更换一次脱色液，观察结果并拍照，结果如图1所示。
实施例3
MTT法检测鞭毛蛋白在离体人巨噬细胞上的细胞毒性作用
用ficoll法分离人外周血单核细胞，DMEM培养7天后分化为巨噬细胞。加入用DMEM(含2％胎牛血清，V/V)稀释的不同浓度的鞭毛蛋白(0.5ng/ml、5ng/ml、50ng/ml、500ng/ml、5000ng/m)，培养48h，通过MTT法检测鞭毛蛋白对人巨噬细胞的细胞毒性作用，结果如图2所示。结果表示：不同浓度的鞭毛蛋白对人巨噬细胞均无毒性。
实施例4
分离健康人外周血单核细胞，用DMEM(含10％胎牛血清，V/V)培养7d后得到人单核细胞来源的巨噬细胞，用5ng/ml鞭毛蛋白处理人巨噬细胞，37℃，5％CO2(V/V)条件下培养；分别于第3h、6h、12h和24h收集细胞，应用荧光实时定量RT-PCR检测IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α和IFN-β表达，GAPDH为内参。引物如下：
IL-1β上游：5’-accaaacctcttcgaggcac-3’，(SEQ ID No.3)；
IL-1β下游：5’-tcctggaaggagcacttcat-3’，(SEQ ID No.4)；
IL-6上游：5’-actcacctcttcagaacgaattg-3’，(SEQ ID No.5)；
IL-6下游：5’-ccatctttggaaggttcaggttg-3’，(SEQ ID No.6)；
IL-8上游：5’-agacatactccaaacctttccaccc-3’，(SEQ ID No.7)；
IL-8下游：5’-cagccctcttcaaaaacttctccac-3’，(SEQ ID No.8)；
TNF-α上游：5’-tgttgtagcaaaccctcaagc-3’，(SEQ ID No.9)；
TNF-α下游：5’-gaggtacaggccctctgatg-3’，(SEQ ID No.10)；
IFN-β上游：5’-tctcctgttgtgcttctccac-3’，(SEQ ID No.11)；
IFN-β下游：5’-gcctcccattcaattgccac-3’，(SEQ ID No.12)；
GAPDH上游：5’-ggtggtctcctctgacttcaaca-3’，(SEQ ID No.13)
GAPDH下游：5’-gttgctgtagccaaattcgttgt-3’，(SEQ ID No.14)。
具体过程为：取1μl样品总RNA用RT system(Promega)进行逆转录，实验采用随机引物37℃反应1h，然后94℃，5min终止反应，产物4℃保存。逆转录产物cDNA作为实时定量RT-PCR的反应模板，取1.5μl RNA逆转录产物cDNA、0.3μl上下游引物(20pmol)、7.5μl SYBRgreen混合液，补水至总体积15μl，在实时定量PCR仪(BioRad，CFX96)上进行检测。反应程序为：95℃预变性3min；95℃变性10s，60℃退火10s，72℃延伸15s，40个循环。结果显示如图3和图4所示。结果表明：鞭毛蛋白可上调人巨噬细胞中炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α和抗病毒因子IFN-β表达。
实施例5
鞭毛蛋白在离体人巨噬细胞中抗HIV-1感染具有剂量效应和时间效应
(1)鞭毛蛋白抗HIV-1感染具有剂量效应
分离健康人外周血单核细胞，用DMEM(含10％胎牛血清，V/V)培养7d后得到人单核细胞来源的巨噬细胞，HIV-1 Bal株感染2h，后用不同浓度的鞭毛蛋白(0.5ng/ml、5ng/ml、50ng/ml)处理感染HIV-1Bal株的人巨噬细胞，于感染后第8d收集细胞和细胞上清，应用荧光实时定量RT-PCR检测HIV-1gag基因表达，其中，Gag基因上游引物的核苷酸序列为：5’-gaacgattcgcagttaatcctgg-3’，(SEQ ID No.15)；Gag基因下游引物的核苷酸序列为：5’-ttatctaaggcttccttggtgtc-3’，(SEQ ID No.16)；应用ELISA检测HIV-1p24蛋白表达。结果如图5所示。图5表明：不同浓度鞭毛蛋白均在核酸水平和蛋白水平出现抗HIV-1感染与复制作用。
(2)鞭毛蛋白抗HIV-1感染具有时间效应
分离人外周血单核细胞，用DMEM(含10％胎牛血清，V/V)培养7d后得到人单核细胞来源的巨噬细胞，HIV-1 Bal株感染2h，后加入用DMEM(含10％胎牛血清，V/V)稀释的鞭毛蛋白(5ng/mL)处理，37℃，5％CO2(V/V)培养，分别在感染后第2d、4d、6d、8d收集细胞和细胞上清，应用荧光实时定量RT-PCR检测HIV-1 gag基因表达；应用ELISA检测HIV-1 p24蛋白表达。结果如图6所示。图6-A所示结果表明：鞭毛蛋白处理组HIV-1感染第2d HIV-1 gag基因表达下降，且第6d下降最显著；图6-B所示结果表明：鞭毛蛋白处理的HIV-1感染人巨噬细胞中HIV-1 p24蛋白则在感染第4d降低，且第6d降低最为明显，与核酸结果一致。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 武汉大学
<120> 一种具有抗HIV-1作用的重组鞭毛蛋白及其编码基因和应用
<160> 16
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1545
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atggcacaag tcattaatac aaacagcctg tcgctgttga cccagaataa cctgaacaaa 60
tcccagtccg cactgggcac tgctatcgag cgtttgtctt ccggtctgcg tatcaacagc 120
gcgaaagacg atgcggcagg acaggcgatt gctaaccgtt ttaccgcgaa catcaaaggt 180
ctgactcagg cttcccgtaa cgctaacgac ggtatctcca ttgcgcagac cactgaaggc 240
gcgctgaacg aaatcaacaa caacctgcag cgtgtgcgtg aactggcggt tcagtctgcg 300
aatggtacta actcccagtc tgacctcgac tccatccagg ctgaaatcac ccagcgcctg 360
aacgaaatcg accgtgtatc cggccagact cagttcaacg gcgtgaaagt cctggcgcag 420
gacaacaccc tgaccatcca ggttggtgcc aacgacggtg aaactatcga tattgattta 480
aaagaaatca gctctaaaac actgggactt gataagctta atgtccaaga tgcctacacc 540
ccgaaagaaa ctgctgtaac cgttgataaa actacctata aaaatggtac agatcctatt 600
acagcccaga gcaatactga tatccaaact gcaattggcg gtggtgcaac gggggttact 660
ggggctgata tcaaatttaa agatggtcaa tactatttag atgttaaagg cggtgcttct 720
gctggtgttt ataaagccac ttatgatgaa actacaaaga aagttaatat tgatacgact 780
gataaaactc cgttggcaac tgcggaagct acagctattc ggggaacggc cactataacc 840
cacaaccaaa ttgctgaagt aacaaaagag ggtgttgata cgaccacagt tgcggctcaa 900
cttgctgcag caggggttac tggcgccgat aaggacaata ctagccttgt aaaactatcg 960
tttgaggata aaaacggtaa ggttattgat ggtggctatg cagtgaaaat gggcgacgat 1020
ttctatgccg ctacatatga tgagaaaaca ggtgcaatta ctgctaaaac cactacttat 1080
acagatggta ctggcgttgc tcaaactgga gctgtgaaat ttggtggcgc aaatggtaaa 1140
tctgaagttg ttactgctac cgatggtaag acttacttag caagcgacct tgacaaacat 1200
aacttcagaa caggcggtga gcttaaagag gttaatacag ataagactga aaacccactg 1260
cagaaaattg atgctgcctt ggcacaggtt gatacacttc gttctgacct gggtgcggtt 1320
cagaaccgtt tcaactccgc tatcaccaac ctgggcaata ccgtaaataa cctgtcttct 1380
gcccgtagcc gtatcgaaga ttccgactac gcaaccgaag tctccaacat gtctcgcgcg 1440
cagattctgc agcaggccgg tacctccgtt ctggcgcagg cgaaccaggt tccgcaaaac 1500
gtcctctctt tactgcgtct cgagcatcat caccatcacc attaa 1545
<210> 2
<211> 514
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Met Ala Gln Val Ile Asn Thr Asn Ser Leu Ser Leu Leu Thr Gln Asn
1 5 10 15
Asn Leu Asn Lys Ser Gln Ser Ala Leu Gly Thr Ala Ile Glu Arg Leu
20 25 30
Ser Ser Gly Leu Arg Ile Asn Ser Ala Lys Asp Asp Ala Ala Gly Gln
35 40 45
Ala Ile Ala Asn Arg Phe Thr Ala Asn Ile Lys Gly Leu Thr Gln Ala
50 55 60
Ser Arg Asn Ala Asn Asp Gly Ile Ser Ile Ala Gln Thr Thr Glu Gly
65 70 75 80
Ala Leu Asn Glu Ile Asn Asn Asn Leu Gln Arg Val Arg Glu Leu Ala
85 90 95
Val Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Ser Gln Ser Asp Leu Asp Ser Ile
100 105 110
Gln Ala Glu Ile Thr Gln Arg Leu Asn Glu Ile Asp Arg Val Ser Gly
115 120 125
Gln Thr Gln Phe Asn Gly Val Lys Val Leu Ala Gln Asp Asn Thr Leu
130 135 140
Thr Ile Gln Val Gly Ala Asn Asp Gly Glu Thr Ile Asp Ile Asp Leu
145 150 155 160
Lys Glu Ile Ser Ser Lys Thr Leu Gly Leu Asp Lys Leu Asn Val Gln
165 170 175
Asp Ala Tyr Thr Pro Lys Glu Thr Ala Val Thr Val Asp Lys Thr Thr
180 185 190
Tyr Lys Asn Gly Thr Asp Pro Ile Thr Ala Gln Ser Asn Thr Asp Ile
195 200 205
Gln Thr Ala Ile Gly Gly Gly Ala Thr Gly Val Thr Gly Ala Asp Ile
210 215 220
Lys Phe Lys Asp Gly Gln Tyr Tyr Leu Asp Val Lys Gly Gly Ala Ser
225 230 235 240
Ala Gly Val Tyr Lys Ala Thr Tyr Asp Glu Thr Thr Lys Lys Val Asn
245 250 255
Ile Asp Thr Thr Asp Lys Thr Pro Leu Ala Thr Ala Glu Ala Thr Ala
260 265 270
Ile Arg Gly Thr Ala Thr Ile Thr His Asn Gln Ile Ala Glu Val Thr
275 280 285
Lys Glu Gly Val Asp Thr Thr Thr Val Ala Ala Gln Leu Ala Ala Ala
290 295 300
Gly Val Thr Gly Ala Asp Lys Asp Asn Thr Ser Leu Val Lys Leu Ser
305 310 315 320
Phe Glu Asp Lys Asn Gly Lys Val Ile Asp Gly Gly Tyr Ala Val Lys
325 330 335
Met Gly Asp Asp Phe Tyr Ala Ala Thr Tyr Asp Glu Lys Thr Gly Ala
340 345 350
Ile Thr Ala Lys Thr Thr Thr Tyr Thr Asp Gly Thr Gly Val Ala Gln
355 360 365
Thr Gly Ala Val Lys Phe Gly Gly Ala Asn Gly Lys Ser Glu Val Val
370 375 380
Thr Ala Thr Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Ala Ser Asp Leu Asp Lys His
385 390 395 400
Asn Phe Arg Thr Gly Gly Glu Leu Lys Glu Val Asn Thr Asp Lys Thr
405 410 415
Glu Asn Pro Leu Gln Lys Ile Asp Ala Ala Leu Ala Gln Val Asp Thr
420 425 430
Leu Arg Ser Asp Leu Gly Ala Val Gln Asn Arg Phe Asn Ser Ala Ile
435 440 445
Thr Asn Leu Gly Asn Thr Val Asn Asn Leu Ser Ser Ala Arg Ser Arg
450 455 460
Ile Glu Asp Ser Asp Tyr Ala Thr Glu Val Ser Asn Met Ser Arg Ala
465 470 475 480
Gln Ile Leu Gln Gln Ala Gly Thr Ser Val Leu Ala Gln Ala Asn Gln
485 490 495
Val Pro Gln Asn Val Leu Ser Leu Leu Arg Leu Glu His His His His
500 505 510
His His
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
accaaacctc ttcgaggcac 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tcctggaagg agcacttcat 20
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
actcacctct tcagaacgaa ttg 23
<210> 6
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
ccatctttgg aaggttcagg ttg 23
<210> 7
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
agacatactc caaacctttc caccc 25
<210> 8
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
cagccctctt caaaaacttc tccac 25
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
tgttgtagca aaccctcaag c 21
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
gaggtacagg ccctctgatg 20
<210> 11
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
tctcctgttg tgcttctcca c 21
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
gcctcccatt caattgccac 20
<210> 13
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
ggtggtctcc tctgacttca aca 23
<210> 14
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
gttgctgtag ccaaattcgt tgt 23
<210> 15
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
gaacgattcg cagttaatcc tgg 23
<210> 16
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
ttatctaagg cttccttggt gtc 23

Claims (2)

1.一种重组鞭毛蛋白、重组鞭毛蛋白的基因、重组载体或重组菌在制备抗HIV-1药物中的应用；
所述重组鞭毛蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；
所述重组鞭毛蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；
所述重组载体包括表达载体和所述重组鞭毛蛋白的基因；所述表达载体为原核表达载体pET30a；
所述重组菌包括宿主细菌和所述重组载体；所述宿主细菌为大肠杆菌BL21；
所述药物通过抗HIV-1感染和抗HIV-1复制起到抗HIV-1的作用。
2.一种抗HIV-1药物，包括重组鞭毛蛋白；所述重组鞭毛蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNo.2所示。
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