CN109609650B

CN109609650B - 用于诊断和治疗肝细胞癌的生物标志物

Info

Publication number: CN109609650B
Application number: CN201910097674.0A
Authority: CN
Inventors: 李正美; 赵强; 邱建峰; 侯坤; 石丽婷; 赵慧慧; 路伟钊
Original assignee: AFFILIATED HOSPITAL OF TAISHAN MEDICAL UNIVERSITY; Taishan Medical University
Current assignee: Shandong Kaige Intelligent Machine Co ltd
Priority date: 2019-01-31
Filing date: 2019-01-31
Publication date: 2021-09-28
Anticipated expiration: 2039-01-31
Also published as: CN109609650A

Abstract

本发明公开了用于诊断和治疗肝细胞癌的生物标志物，所述生物标志物为RP5‑1120P11.1。本发明公开了一种诊断肝细胞癌的产品以及检测RP5‑1120P11.1的试剂在制备诊断肝细胞癌的产品中的应用；本发明同时公开了RP5‑1120P11.1在制备治疗肝细胞的药物组合物中的应用。

Description

用于诊断和治疗肝细胞癌的生物标志物

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及用于诊断和治疗肝细胞癌的生物标志物，所述生物标志物为RP5-1120P11.1。

背景技术

肿瘤是机体体内结构功能正常的细胞，在内外致瘤因素的协同作用下，导致的基因水平异常和功能异常，局部异常的细胞增生而形成的新生物。常见的致瘤物质包括化学致瘤物、病毒和物理致瘤物。新生的肿瘤组织在细胞形态和组织结构上，均与其来源的正常组织存在差异，该差异称为肿瘤组织的异型性。普遍认为，肿瘤组织的异型性越小，说明它的分化程度越高，预后也会越好，反之，异型性越大，分化程度越低，恶性程度就会更高，预后也会更差。肿瘤分为良性肿瘤和恶性肿瘤两大类。通常情况下，良性肿瘤生长较缓慢，而且常有完整的包膜，很少发生转移，大多数时候只表现为局部的压迫症状，手术时容易彻底切除，预后很好。恶性肿瘤，就是通常所说的癌症，具有浸润和转移的特点，而且没有完整的包膜，手术不易彻底切除。此外，它还会消耗机体大量的营养物质来进行快速繁殖，对机体的危害极大。对于恶性肿瘤，我们的原则是早发现，早诊断，早治疗。对于发现较晚的患者，往往错过了治疗的最佳机会，放疗、化疗、靶向药物等治疗对于晚期患者的疗效非常有限，使得晚期患者的生存率大幅度下降。

肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的恶性肿瘤之一，具有侵袭性强、死亡率高的特点，位列癌症相关死亡原因的第二位(Esther,Cidon.Systemictreatment of hepatocellular carcinoma:Past,present and future[J].WorldJournal of Hepatology,2017,9(18):797-807.)。目前认为乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、酒精性及非酒精性肝硬化、黄曲霉毒素、肥胖等均与肝癌的发生相关。肝癌的发病机制尚未完全明确，研究认为与基因突变、肝癌干细胞、微环境、非编码RNA、代谢异常等有关(Farazi P A,Depinho R A.Hepatocellular environment.[J].Nature ReviewsCancer,2006,carcinoma pathogenesis:from genes to 6(9):674-687.)。肝移植被认为是治疗肝癌和潜在肝疾病最有效的方法，但由于其手术费用昂贵，而且有严格的适应症，肝源相对短缺，虽然近年来肝移植技术已非常成熟，但肝癌的总体死亡率仍未有很大的改善。靶向口服化疗药物索拉菲尼被认为是晚期肝癌患者的唯一选择，但其价格昂贵，不是所有患者都能承受，而且远期疗效有限，所以中晚期肝癌患者的预后依然很差。过去的几十年中，随着科学技术的进步，肿瘤的免疫治疗、基因治疗等取得了巨大的进展，因此，深入研究肝癌细胞的基因谱及寻找新的治疗靶点至关重要。

长链非编码RNA是一类长度大于200个核苷酸且不具备蛋白翻译功能的RNA，其在转录调控中广泛表达。目前，lncRNA主要被分为五类:反义lncRNA、内含子lncRNA,lincRNA、启动子相关lncRNA和UTR相关lncRNA。LncRNA具有时空特异性，在不同组织中，表达模式行为也不同。相对于microRNA，lncRNA的长度较长，具有mRNA相似结构。LncRNA可以与microRNA,mRNA和蛋白结合，在细胞中起到重要的调控作用。目前来看，lncRNA与基因转录、表观遗传调控、蛋白编码基因、染色质组织等生物活动有关。同时，在RNA剪接、X染色体失活等分子机制中，lncRNAs也起到了重要作用(Ramos AD,Attenello FJ,Lim DA:Uncoveringthe roles of long noncoding RNAs in neural development and gliomaprogression.Neuroscience letters 2016,625:70-79.)。lncRNA长度与mRNA相近，具有mRNA结构特征，可以与转录因子、microRNA等结合。因此，lncRNA对蛋白编码基因和其它非编码RNA的表达起到了令人注目的调控作用。除了碱基序列，lncRNA还可以和蛋白结合，调节蛋白活性或行使其它功能。

尽管大多数lncRNAs的生物学功能尚未确定，已有许多研究工作指明，癌症病人的组织细胞中lncRNA表达会出现异常。在乳腺癌、大肠癌、肺癌、肝癌等研究中，发现了多个lncRNA与癌症病变相关(Parasramka MA,Maji S,Matsuda A,Yan IK,Patel T:Long non-coding RNAs as novel targets for therapy in hepatocellularcarcinoma.Pharmacol Ther 2016,161:67-78.)。基于一些lncRNAs的异常表达已经被证实与癌症密切相关，使用lncRNAs作为癌症诊断和预后的标志物也成为一个新的研究方向。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种与肝细胞癌发生发展相关的生物标志物；

本发明的目的之二在于提供一种诊断肝细胞癌的产品；

本发明的目的之三在于提供一种治疗肝细胞癌的药物组合物；

本发明的目的之四在于提供一种预测肝细胞癌的计算模型。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供了检测RP5-1120P11.1的试剂在制备诊断肝细胞癌的产品中的应用。

进一步，所述产品包括通过RT-PCR、实时定量PCR、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测RP5-1120P11.1的表达水平的试剂。

进一步，所述试剂选自：特异性识别RP5-1120P11.1的探针；或特异性扩增RP5-1120P11.1的引物。

进一步，所述特异性扩增RP5-1120P11.1的引物序列如SEQ ID NO.3～4所示。

本发明提供了一种诊断肝细胞癌的产品，所述产品包括检测RP5-1120P11.1表达水平的试剂。

进一步，所述产品包括芯片、试剂盒、核酸膜条。

进一步，所述芯片包括特异性识别RP5-1120P11.1的寡核苷酸探针；所述试剂盒包括特异性扩增RP5-1120P11.1的引物，或特异性识别RP5-1120P11.1的寡核苷酸探针；所述核酸膜条包括特异性识别RP5-1120P11.1的寡核苷酸探针。

进一步，特异性扩增RP5-1120P11.1的引物序列如SEQ ID NO.3～4所示。

本发明提供了RP5-1120P11.1在构建预测肝细胞癌的计算模型中的应用。

本发明提供了RP5-1120P11.1在制备治疗肝细胞的药物组合物中的应用。

进一步，所述药物组合物包括RP5-1120P11.1的抑制剂。

进一步，所述RP5-1120P11.1的抑制剂为降低RP5-1120P11.1水平的物质。

附图说明

图1是利用QPCR检测RP5-1120P11.1基因在肝细胞癌组织中的表达情况图。

具体的实施方式

本发明经过广泛而深入的研究，通过高通量测序的方法，检测肝细胞癌标本中lncRNA在肿瘤组织和癌旁组织的表达，发现其中具有明显表达差异的lncRNA，探讨其与肝细胞癌的发生之间的关系，从而为肝细胞癌的诊断及靶向治疗寻找更好的途径和方法。通过筛选，本发明首次发现了RP5-1120P11.1在肝癌组织中显著上调，提示RP5-1120P11.1可作为肝癌的诊断标志物以及治疗靶标。

RP5-1120P11.1基因位于6号染色体上，目前已经公开的RP5-1120P11.1的转录本有两个，分别是ENST00000422059.1(序列如SEQ ID NO.1所示)和ENST00000607590.1(序列如SEQ ID NO.2所示)。本领域技术人员知道，高通量测序之后进行生物信息学分析时，通常会将测序结果和已知的基因进行比对，只要测序片段可以比对到相关基因上，就可以看做是该基因的表达，因此，在提及差异表达的基因时，该基因的不同的转录本同时包含在本发明中，其突变型或其片段也包含在本发明中。

本领域技术人员应当理解，测定基因表达的手段不是本发明的重要方面。可以在转录水平上检测生物标志物的表达水平。本发明可以利用本领域内已知的任何方法测定基因表达。

芯片、试剂盒、核酸膜条

本发明提供了检测中RP5-1120P11.1基因的表达水平的产品，所述产品包括(但不限于)制剂、芯片或试剂盒。其中芯片包括：固相载体；以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述的寡核苷酸探针特异性地对应于RP5-1120P11.1所示的部分或全部序列。

所述固相载体包括无机载体和有机载体，所述无机载体包括但不限于有硅载体、玻璃载体、陶瓷载体等；所述有机载体包括聚丙烯薄膜、尼龙膜等。

术语“探针”指能与另一分子的特定序列或亚序列或其它部分结合的分子。除非另有指出，术语“探针”通常指能通过互补碱基配对与另一多核苷酸(往往称为“靶多核苷酸”)结合的多核苷酸探针。根据杂交条件的严格性，探针能和与该探针缺乏完全序列互补性的靶多核苷酸结合。探针可作直接或间接的标记，其范围包括引物。杂交方式，包括，但不限于：溶液相、固相、混合相或原位杂交测定法。

本发明中的示例性探针包括PCR引物以及基因特异性DNA寡核苷酸探针，例如固定于微阵列基底上的微阵列探针、定量核酸酶保护检验探针、与分子条形码连接的探针、以及固定于珠上的探针。

这些探针具有与靶点基因的特定的碱基序列互补的碱基序列。这里，所谓“互补”，只要是杂交即可，可以不是完全互补。这些多核苷酸通常相对于该特定的碱基序列具有80％以上、优选90％以上、更优选95％以上、特别优选100％的同源性。这些探针可以是DNA，也可以是RNA，另外，可以为在其一部分或全部中核苷酸通过PNA(Polyamide nucleicacid，肽核酸)、LNA(注册商标，locked nucleic acid，Bridged Nucleic Acid，交联化核酸)、ENA(注册商标，2′-O,4′-C-Ethylene-bridged nucleic acids)、GNA(Glycerolnucleic acid，甘油核酸)、TNA(Threose nucleic acid，苏糖核酸)等人工核酸置换得到的多核苷酸。

本发明的试剂盒包括检测RP5-1120P11.1基因的试剂，选自下组的一种或多种物质：容器、使用说明书、阳性对照物、阴性对照物、缓冲剂、助剂或溶剂。

本发明的试剂盒中还可附有试剂盒的使用说明书，其中记载了如何采用试剂盒进行检测，和如何利用检测结果对肿瘤发展进行判断、对治疗方案进行选择。

试剂盒的组分可以以水介质的形式或以冻干的形式来包装。试剂盒中适当的容器通常至少包括一种小瓶、试管、长颈瓶、宝特瓶、针筒或其它容器，其中可放置一种组分，并且优选地，可进行适当地等分。在试剂盒中存在多于一种的组分时，试剂盒中通常也将包含第二、第三或其它附加的容器，其中分离地放置附加的组分。然而，不同组合的组分可被包含在一个小瓶中。本发明的试剂盒通常也将包括一种用于容纳反应物的容器，密封以用于商业销售。这种容器可包括注模或吹模的塑料容器，其中可保留所需的小瓶。

本发明的核酸膜条包括基底和固定于所述基底上的针对RP5-1120P11.1的寡核苷酸探针；所述基底可以是任何适于固定寡核苷酸探针的基底，例如尼龙膜、硝酸纤维素膜、聚丙烯膜、玻璃片、硅胶晶片、微缩磁珠等。

计算模型

本发明提供了RP5-1120P11.1在制备预测肝细胞癌的计算模型中的应用。正如熟练技术人员可以领会的，可以使用两种或更多种标志物的测量来改进调查中的诊断问题。生化标志物可以个别测定，或者在本发明的一个实施方案中，它们可以同时测定，例如使用芯片或基于珠的阵列技术。然后独立解读生物标志物的浓度，例如使用每种标志物的个别截留，或者它们组合进行解读。

在本发明中，可以以不同方式实施和实现将标志物水平与某种可能性或风险关联起来的步骤。优选地，在数学上组合基因和一种或多种其它标志物的测定浓度，并将组合值与根本的诊断问题关联起来。可以通过任何适宜的现有技术数学方法将标志物值的测定组合。

抑制剂和药物组合物

基于本发明人的发现，本发明提供了RP5-1120P11.1在制备治疗肝细胞癌的药物组合物中的应用，所述药物组合物包括RP5-1120P11.1的抑制剂。如本文所用，所述的RP5-1120P11.1的抑制剂包括但不限于拮抗剂、阻滞剂、阻断剂、核酸抑制物等。

所述的RP5-1120P11.1的抑制剂是指任何可下调RP5-1120P11.1基因的表达、或抑制RP5-1120P11.1基因的转录的物质，这些物质作为对于下调RP5-1120P11.1有用的物质，可用于预防或治疗肝细胞癌。

作为本发明的一种优选方式，所述RP5-1120P11.1的抑制剂是一种RP5-1120P11.1特异性的小干扰RNA分子。如本文所用，所述的“小干扰RNA”是指一种短片段双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA，这个过程就是RNA干扰(RNAinterference)过程。小干扰RNA可以制备成双链核酸的形式，它含有一个正义链和一个反义链，这两条链仅在杂交的条件下形成双链。一个双链RNA复合物可以由相互分离的正义链和反义链来制备。因此，举例来讲，互补的正义链和反义链是化学合成的，其后可通过退火杂交，产生合成的双链RNA复合物。

本发明的药物组合物可以进一步包含一种或多种抗癌剂。在具体的实施方案中，药物组合物包含至少一种抑制RP5-1120P11.1基因表达的化合物和至少一种化疗剂。用于本发明的方法的化疗剂，包括但不限于，DNA-烷化剂，抗肿瘤抗生素剂，抗代谢剂，微管蛋白稳定剂，微管蛋白去稳定剂，激素拮抗剂，拓扑异构酶抑制剂，蛋白激酶抑制剂，HMG-COA抑制剂，CDK抑制剂，细胞周期蛋白抑制剂，胱天蛋白酶抑制剂，金属蛋白酶抑制剂，反义核酸，三链螺旋DNA，核酸适体，和分子修饰的病毒、细菌和外毒素试剂。

本发明的药物组合物还包括可药用载体，包括但不限于：病毒、脂质体、纳米颗粒或聚合物及其任意组合。相关的递送载剂可包括但不限于：脂质体、生物相容性聚合物(包括天然聚合物和合成聚合物)、脂蛋白、多肽、多糖、脂多糖、人工病毒包膜、无机(包括金属)颗粒、以及细菌或病毒(例如杆状病毒、腺病毒和逆转录病毒)、噬菌体、黏粒或质粒载体。

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1筛选与肝细胞癌相关的基因标志物

1、样品收集

分别收集27例原发性肝细胞癌患者的癌组织及相对应的癌旁组织样本，从中随机选取5例进行高通量测序，患者均知情同意，上述所有标本的取得均通过组织伦理委员会的同意。

2、RNA样品的制备及质量分析

使用TRIZOL法提取组织总RNA

1)用剪刀组织剪碎，加入1ml Trizol,振荡器上震荡1min；常温放置10min，使核蛋白体完全分解。

2)加入200μl三氯甲烷(氯仿)，盖紧管盖，剧烈震荡15s，常温静置10min。

3)4℃，11000rpm离心15min。

4)将水样层转移到一个新的离心管中，加入500μl异丙醇；颠倒混匀后，常温静置10min。

5)4℃，11000rpm离心15min。

6)用枪小心吸走液体，留沉淀在管底，加入1ml 75％的乙醇，在振荡器上震荡5s，洗涤沉淀一次。

7)4℃，8000rpm离心5min。

8)将上清小心去掉，干燥沉淀10min，加入适量的水溶解沉淀10min。

9)检测RNA浓度，鉴定RNA的产量和纯度。

3、cDNA文库的构建

1)去除rRNA

使用Epicentre的Ribo-Zero试剂盒除去总RNA中的核糖体RNA。

2)片段化RNA

对完整的RNA序列，利用金属离子进行随机打断，将RNA随机断裂成200bp左右的小片段。

3)反转录合成cDNA

利用Illumina TruseqTM RNAsample Prep Kit进行cDNA文库的构建，在逆转录酶的作用下，利用随机引物，以lncRNA为模板反转合成一链cDNA，进行二链合成时，dNTPs试剂中用dUTP代替dTTP，使cDNA第二链中碱基包含A/U/C/G。

4)连接adaptor

加入End Repair Mix将双链cDNA的粘性末端补成平末端，随后在3’末端加上一个A碱基，用于连接Y字形的接头。

5)UNG酶消化cDNA二链

用UNG酶将cDNA第二链消化，从而使文库中仅包含cDNA第一链。

4、上机测序

使用Illumina X-Ten测序平台对cDNA文库进行测序。

5、高通量转录组测序数据分析

删除不易检测到的lncRNA，使用工具R-3.3.3中的DESeq2进行生信分析。

1)用cutadapt对reads的5’和3’段进行trim，trim掉质量<20的碱基，并且删掉N大于10％的reads。

2)tophat比对到参考基因组上。所用的参考基因组版本为GRCh37。

3)cuffquant定量lncRNA的表达量并标准化输出。

4)cuffdiff比较对照组跟疾病组lncRNA的表达差异，差异表达lncRNA的筛选标准：FDR<0.05，abs(log₂FC)>1。

6、结果

高通量测序结果显示，RP5-1120P11.1基因在肝细胞癌组织中的表达量显著高于癌旁组织(P<0.001)，提示RP5-1120P11.1可以作为可能的检测靶标应用于肝细胞癌的早期诊断。

实施例2 QPCR测序验证RP5-1120P11.1基因的差异表达

1、利用前面收集的27例患者癌组织样本和癌旁组织样本对RP5-1120P11.1基因差异表达进行大样本QPCR验证。

2、RNA提取

利用Trizol法提取组织RNA，具体步骤参见实施例1。

3、QPCR检测

1)引物设计

根据RP5-1120P11.1和GADPH的基因序列设计引物，其中，对RP5-1120P11.1进行引物设计时，选择不同的转录本的共同的区域进行设计，具体引物序列如下：

RP5-1120P11.1基因：

正向引物为5’-CCAAGGCTAGGATAAGTA-3’(SEQ ID NO.3)；

反向引物为5’-CCATCTCTACAGAAGTTG-3’(SEQ ID NO.4)。

GAPDH基因：

正向引物为5’-AATCCCATCACCATCTTCCAG-3’(SEQ ID NO.5)；

反向引物为5’-GAGCCCCAGCCTTCTCCAT-3’(SEQ ID NO.6)。

2)逆转录反应

采用FastQμant cDNA第一链合成试剂盒(货号：KR106)进行lncRNA反转录，首先去除基因组DNA反应，在试管中加入5×gDNA Bμffer 2.0μl，总RNA 1μg，加Rnase Free ddH₂O使总体积至10μl，水浴锅中42℃加热3min，再将10×Fast RT Bμffer 2.0μl，RT EnzymeMix 1.0μl，FQ-RT Primer Mix 2.0μl，RNase Free ddH₂O5.0μl，混合后加入上述试管中一起混合共20μl，水浴锅中42℃加热15min，95℃加热3min。

3)QPCR扩增检验

用SuperReal PreMix Plus(SYBR Green)(货号：FP205)，进行扩增，实验操作按产品说明书进行。

采用20μl反应体系：2×SuperReal PreMix Plus 10μl，正反向引物(10μM)各0.6μl，5×ROX Reference Dye^△2μl，DNA模板2μl，灭菌蒸馏水4.8μl。每个样本设置3个平行管，所有扩增反应均重复三次以上以保证结果的可靠性。

扩增程序为：95°15min，(95℃10s，55℃30s，72℃32s)×40个循环。

4)cDNA模板浓度的筛选

将各样本cDNA混合后，以此为模板进行10倍梯度(10、100、1000、10000、100000倍)稀释，稀释后样品各取2μl作模板，分别用目的基因引物和内参基因引物进行扩增，同时在60-95℃进行融解曲线分析，根据扩增效率高和溶解曲线单峰原则进行模板浓度的筛选。

根据溶解曲线，可以看出，当cDNA的进行10倍稀释时，PCR的扩增效率较高，溶解曲线单峰比较好。

5)样品Real Time PCR检测

将各样品cDNA 10倍稀释后取2μl作模板，分别用目的基因引物和内参基因引物进行扩增。同时在60-95℃进行溶解曲线分析，通过融解曲线分析和电泳确定目的条带，2^-ΔΔCT法进行相对定量。

4、结果

QPCR结果如图1所示，与癌旁组织相比，RP5-1120P11.1在肝细胞癌组织中表达上调，差异具有统计学意义(P<0.05)，同高通量测序结果一致，其中肝细胞癌组织样本中表达上调的有25例，非差异表达的有2例；提示RP5-1120P11.1可作为生物标志物应用于肝细胞癌的诊断和治疗。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

序列表

<110> 泰山医学院泰山医学院附属医院

<120> 用于诊断和治疗肝细胞癌的生物标志物

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2232

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

gtgcagagcc caggcgcgtg ggtcggtgtc gggtgtgtgt gtacgtctgt gtgtgtaatg 60

aaactggacg ccttccttcc cggcgatctt gacttaacct gtcagcagag ggcttgaggt 120

tagaccacag gttgaaccta ggtggctgct ggagagaaac actctgtctt cctgctttga 180

ggacagctga agtcttgcca cttcttctgg atgctctgac catcagtaag ccacctcagt 240

ctcaccctcc gcagaatgca ggcccactcc gttgctgaag ggcctcctcc ttgggccagg 300

gcgcctgctt ctgccagtgg catcatcacc ccactcctca gccgccagtc atcagagaca 360

cggtctgact ttgttacccc ggctggagtg cagtggtgca atcatggctc actgcagcct 420

taacctcctg ggctcaagtg atcctctcgc caaggctagg ataagtagct aggactacag 480

atgcgcccca tcacgcccag ctaattttac aacttctgta gagatggagt gttgctgggt 540

tgcccaggct ggtcttgaat tcctgggctc aagcgatcct cctgtgtccg gaattggtgg 600

gttcttggtc tcactgactt caagaatgaa gccgcggacc ctcgcgagtc tgtatccacc 660

agctactctt ccagattcat gaggcaaggc ctgcctgctc acctggctgg ccccaagcac 720

ctcttcaacc tgttgccacc gtcctgcctt gctgcccttc tcagctcatc cagcagggtc 780

tccaagtcgt ggaaacagaa gcacatatac acacatgctc atatgtacat gcccacagtc 840

acataagcac accgagaaac accatcgcag acatgttctc acaagcacat gtgcataaca 900

ctcactaccc ctcacgcgta tacacattaa tacacacact catgcacact cagtcttaca 960

cacacagaca cacagccata atcactgttg ttggttgaat tgtgcccccc catccccacc 1020

aaaaagataa gttggagtcc taacccccag tacctgggga tgtgaccgta gttggaaata 1080

gggtgtttgt agatgtaatc aaattaagat gagatcttac tggattagag tgggccttaa 1140

atccagtgac tggtgtcctt ataaggagaa aaagatttga aaacagagac atggagacac 1200

agagcagaag gccatgtgat gatggagtca gagattggag tgatgcagct atgagccgag 1260

aaataccaag gtgctggcag cccccagaag caaggagaga ggcaaggaac aatctccatc 1320

agagcctctg gaagaaacag actctgccaa caccttgatt tcagactttt ggcctccttc 1380

actgtgcgag aatacgtttc tgttgtttta aactactgag tcaccaagtc tgtggtactg 1440

tgttatggca gccccggcaa caaatccaat cacacacaca cacacacaca cacacacaca 1500

cacacacaca cacacacaca cagctggctc caggctcagt gatgagctca gaggagttcc 1560

ccttgggagc tgctctttct ctgtcttcct tccttagtga ttggtccagt ggatccacaa 1620

aagctcatgg cccagagcag gagcccagtc atttttaatt cctcttccct ggagttctta 1680

accatgcgtt gccctcaaaa tctgctctca agatttgggt tgccatattt aggagcacca 1740

gaaaacatac aggaatgctg tgtctgcttg catcatatta attaaaaact ggaaataacc 1800

taaatgtccc agaataggta cataaactgt ggcatatcca cttaatggaa tactactcag 1860

caatacaaaa ggaaaaccta gtgttacttg agcaacatgg atgaacttca cagacataat 1920

attgcacagc acgaggcaga cacaaaagtg tgcatatgct atgattccat ttacatgaga 1980

ttcaagaaca ggcaaagcag atctatgggg atagaagtca gaatagtggt tacctctgga 2040

aggtggaatt gactgggagg ggcttcaggg aacctcctgg ggtgctgaaa acattctgtg 2100

cttgcaccgg gtggtggtta tgtgggcatt acataaaatt caccaagctg cacccttaat 2160

gatttgtaca atttgatgca caaatctaac atctcaagaa gaataaattt tacaaagtac 2220

ctaagaagca aa 2232

<210> 2

<211> 556

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 2

acagctggcc agcaggcggg gcctccgtgt ctgtggcggg gatgtcacct ttcttcgcag 60

gaagaaacac tctgtcttcc tgctttgagg acagctgaag tcttgccact tcttctggat 120

gctctgacca tcagtaagag acacggtctg actttgttac cccggctgga gtgcagtggt 180

gcaatcatgg ctcactgcag ccttaacctc ctgggctcaa gtgatcctct cgccaaggct 240

aggataagta gctaggacta cagatgcgcc ccatcacgcc cagctaattt tacaacttct 300

gtagagatgg agtgttgctg ggttgcccag gctggtcttg aattcctggg ctcaagcgat 360

cctcctgtgt ccggaattgg tgggttcttg gtctcactga cttcaagaat gaagccgcgg 420

accctcgcga gtctgtatcc accagctact cttccagatt catgaggcaa ggcctgcctg 480

ctcacctggc tggccccaag cacctcttca acctgttgcc accgtcctgc cttgctgccc 540

ttctcagctc atccag 556

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ccaaggctag gataagta 18

<210> 4

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ccatctctac agaagttg 18

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

aatcccatca ccatcttcca g 21

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

gagccccagc cttctccat 19

Claims

1.检测RP5-1120P11.1的试剂在制备诊断肝细胞癌的产品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括通过RT-PCR、实时定量PCR、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测RP5-1120P11.1的表达水平的试剂。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂选自：特异性识别RP5-1120P11.1的探针；或特异性扩增RP5-1120P11.1的引物。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述特异性扩增RP5-1120P11.1的引物序列如SEQ ID NO.3~4所示。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括芯片、试剂盒、核酸膜条。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述芯片包括特异性识别RP5-1120P11.1的寡核苷酸探针；所述试剂盒包括特异性扩增RP5-1120P11.1的引物，或特异性识别RP5-1120P11.1的寡核苷酸探针；所述核酸膜条包括特异性识别RP5-1120P11.1的寡核苷酸探针。

7.RP5-1120P11.1在构建预测肝细胞癌的计算模型中的应用。