CN109568261A - 一种预防和缓解化学性肝损伤的多肽口服液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种缓解化学性肝损伤的多肽口服液，制备1000重量份所述口服液中，各原料组分的含量如下：牛肝脏多肽4.0～5.0份、甜蜜素0.5～1.0份、食用菠萝香精0.5～1.5份、柠檬酸0.3～0.6份、余量为水，其中牛肝脏多肽以牛肝脏提取液的形式存在。所述牛肝脏提取液中多肽含量为16～20mg/ml。本发明首次将牛肝脏提取液应用于饮料制备中，其制备出来的饮料中多肽含量大于0.4g/100ml，长期饮用具保肝护肝效果，且气味清香、口感清淡微酸，易于被消费者接受，同时制备工艺适合工业化生产，适合大量推广和应用。

Description

一种预防和缓解化学性肝损伤的多肽口服液及其制备方法
技术领域
本发明涉及保健品生产开发领域，具体涉及一种预防和缓解化学性肝损伤的多肽口服液及其制备方法。
背景技术
肝脏是机体的一项重要器官，具有合成、分泌、排泄、解毒、免疫和生物转化等多种生理功能。肝损伤是临床上一类常见的危害人类健康的疾病，肝损伤的常见病因有病毒感染、饮酒过多、脂肪堆积、环境污染，可以分为免疫性肝损伤、酒精性肝损伤和药物性肝损伤等。然而目前多数护肝保肝药都带有毒副作用，在使用过程中一边修复一边增加肝细胞的工作负荷，受损的肝细胞恢复极慢，因此，保护肝脏、提高肝细胞自身的修复和再生能力，增加肝脏对有毒物质的抵抗力，是保肝、养肝的关键。
在化学性肝损伤的因素中，药物和酒精的损害尤为突出。酒精性肝病在我国近年来有逐渐增加的趋势，目前已成为仅次于病毒性肝炎的第二大病因。在欧美国家酒精性肝病的患病率高达84％，其中20％～30％可发展为肝硬化。酒精性肝损伤是因长期大量饮酒而引起的肝脏损害，主要包括酒精性脂肪肝，酒精性肝炎，酒精性肝纤维化，酒精性肝硬化，这几种病理形式可以单独存在也可以两种或多种相兼存在。由此可见，化学性肝损伤尤其是酒精性肝病正严重影响着现代人的身心健康和生活质量。
已有试验表明，牛肝脏中含有大量促肝细胞生长的小分子生物活性多肽物质，其能刺激正常肝细胞DNA合成，促进肝细胞再生,其制剂为我国研制治疗肝病的一类新药。现有技术中有通过将牛肝脏提取成分作为口服液的，其能以保健饮料的形式对肝脏进行养护，如授权公告号微CN1069198C，专利名“一种健肝口服液”的专利所述，其主要由乳牛肝脏提取液、蛋白糖、柠檬酸、蒸馏水组成，其中乳牛肝脏提取液由下列方法制得：首先将乳牛肝脏绞碎、匀浆，然后将温度控制在70～95℃，时间控制在5～20分钟范围内加热匀浆，浆液冷却后离心分离，取上清液过滤即得到乳牛肝脏提取液。该发明开创了将牛肝脏提取液制作口服液的先例，然而其制作过程中牛肝脏提取液的制备粗糙，牛肝脏提取液腥膻味重，且含有大量的多糖、脂肪和蛋白质等大分子杂质，口服液在制备和储存过程中容易产生沉淀，影响产品的观感和口感，且储存过程中由于这些杂质的存在，容易促进微生物的生产而产生变质，此外传统护肝口服液大都通过添加大量防腐剂等添加剂来延长保质期，而这种肝脏保健类的饮料若也加入大量化学添加剂，则会给肝脏带来额外的负担，不利于肝脏的修复和调养。
发明内容
本发明所解决的技术问题在于提供一种适合批量生产加工的能缓解化学性肝损伤的多肽口服液及其制备方法。
本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：
一种缓解化学性肝损伤的多肽口服液，制备1000重量份所述口服液中，各原料组分的配比如下：牛肝脏多肽4.0～5.0份、甜蜜素0.5～1.0份、食用菠萝香精0.5～1.5份、柠檬酸0.3～0.6份、余量为水，其中牛肝脏多肽以牛肝脏提取液的形式存在。
进一步的，所述牛肝脏提取液中多肽含量为16～20mg/ml。
该多肽健肝口服液的制备方法包括如下步骤：
①检测牛肝脏提取液中多肽含量，计算所需牛肝脏提取液的量；
②将牛肝脏提取液采用分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤后取滤过液；
③将滤过液加入配料罐，然后将食用菠萝香精及溶解于水中的甜蜜素、柠檬酸依次加入配料罐，搅拌10～20min后用0.22μm滤膜过滤，取滤过液；
④往经过0.22μm滤膜处理的滤过液中加入余量的水，调节PH为5.7～6.3，搅拌均匀后继续用0.22μm的滤膜过滤，取滤过液，将该滤过液灌装后高温灭菌得到产品。
进一步的，所述牛肝脏提取液的制备方法如下：
(1)将牛肝脏原料绞碎得到牛肝脏碎料、将牛肝脏碎料胶磨后得到匀浆液；
(2)往匀浆液中加入胰酶进行酶解，酶解完成后灭酶、自然沉淀6～10h后离心过滤，取滤液备用；通过绞碎、胶磨后得到的匀浆液中大都为大分子物质，不溶于水，溶于水的促肝细胞生长的小分子生物活性多肽物质含量较低，大多数的功能物质和功能物质的片段存在大分子物质中，若直接加工成口服液其杂质含量太多，且储存过程中容易产生沉淀，存在口感不好、且不易被人体吸收的问题，而采用胰酶模仿人体肠胃的酶解活动，将大分子物质在胰酶的作用下分解成小分子物质，有效的促进促肝细胞生长的小分子生物活性多肽物质含量的提高，提高牛肝脏的有效利用率。
(3)去除滤液中的酸性蛋白；酶解之后，溶液中存在一些难以酶解的酸性蛋白质和碱性蛋白质，且这类物质，除了具有普通的增加蛋白质的营养之外，保肝护肝的功能作用较少，且在储存过程中，因溶液的酸碱度的原因，会慢慢析出而产生沉淀，制成口服液后，营养产品口感和美观。
(4)超滤分离：依次采用分子量为100000道尔顿和30000道尔顿的超滤膜进行超滤分离，取滤过液；
(5)去除步骤(4)中滤过液的碱性蛋白；
(6)搅拌均匀、灌装、密封后冷冻保存得到成品。
进一步的，步骤(2)中胰酶与牛肝脏碎料的重量比为1:200。
进一步的，步骤(2)中，所述酶解为恒温连续酶解，酶解条件为：温度48～52℃：pH值8.0～8.5，时间5～6h，酶解过程中不断搅拌，酶解完成后将匀浆液加热至75～85℃后保温1h而灭酶。
进一步的，步骤(3)中酸性蛋白的去除方法为：将步骤(2)中滤液加入提取罐中，调节pH值至3.0～4.0，在95～105℃的条件下搅拌30min，然后冷却至40℃以下，离心过滤，取滤液。
进一步的，步骤(5)中碱性蛋白的去除方法为：将滤过液调节pH值至7.3～7.7，在95～105℃的条件下搅拌30min，然后冷却至40℃以下，采用分子量为10000道尔顿的超滤膜进行进一步超滤分离，取滤过液。
进一步的，步骤(5)中灌装前调节产品PH值至7.0～8.0。
将本发明生产的产品进行检验，结果如表一和表二所示。
表一 多肽口服液检验结果
表二 多肽口服液静置六个月后检测结果
本发明所述的缓解化学性肝损伤的多肽口服液的护肝机理为：化学性肝细胞损伤是酒精类毒物进入肝细胞内，经代谢产生大量自由基，引起脂质过氧化反应，导致细胞膜结构破坏，引起细胞坏死。具体的损伤机理为：①体内产生的自由基，作用于内质网膜，使膜磷脂的不饱和多脂肪酸发生过氧化，从而使内质网膜和细胞膜破坏。②自由基与肝细胞内的蛋白质、核酸等大分子物质发生不可逆共价结合，导致肝细胞坏死。③随后SOD活力下降，血清ALT进一步显著上升，提示自由基清除功能受损和脂质过氧化增强。④胞浆内Ca2+浓度升高从而引起核蛋白体解聚，蛋白质合成减低，导致细胞死亡。而本发明所述的多肽口服液能刺激肝细胞的DNA合成，促进肝细胞的再生，恢复损坏的肝细胞功能，增强肝脏枯否氏细胞的吞噬功能，降低脂源性内毒素对肝细胞进行损害，预防肝衰竭，预防和抑制肿瘤坏死因子活性的诱生，辅助阻挡肝炎后发生肝细胞坏死，通过阻挡自由基的CPO而对肝细胞起保护作用。
小鼠实验如下：
送检单位提供的试验样品为5倍浓缩液，因此成品的人群推荐日摄入量为0.67ml/kg BW，换算成试验样品的人群推荐量即为0.134ml/kg BW。本发明中以下剂量均以试验样品计算，将人群推荐剂量扩大10、20、30倍设计低、中、高三个剂量组，即1.34ml/kg BW、2.68ml/kg BW、4.02ml/kg BW，同时设阴性对照组和模型对照组。采用SPF级昆明种小鼠，连续灌胃给予，30天后开始测试。以50％乙醇造成雄性小鼠化学性肝损伤模型，16小时后进行各项指标测定，实验结果以P<0.05判断为显著性差异。
一、按14ml/kg BW的剂量给予50％酒精16h后与阴性对照组比较，肝损伤模型组肝匀浆比对照组肝匀浆中MDA、TG升高，还原型GSH降低，并均有显著性差异(均为P<0.01)，低剂量组与模型对照组比较，肝匀浆中MDA和TG含量均显著性降低，还原性GSH含量显著升高(分别为P<0.05、P<0.01、P<0.05)；中剂量组与模型对照组比较，肝匀浆中TG含量显著性降低(P<0.05)。(见表三)。其中MDA为肝脏中丙二醛，是细胞膜脂质过氧化的终产物之一，检测其含量可间接估计脂质过氧化的程度；TG为甘油三酯，甘油三脂被脂肪酶水解成甘油和脂肪酸；还原型GSH为还原型谷胱甘肽；上述三个指标，满足任一指标变化，可判定受试样品具有对化学性肝损伤有保护作用)
表三 多肽口服液对小鼠肝脏中MDA、还原型GSH、TG测定值(均数±标准差)
二、将各组动物肝脏从肝左叶中部做横切面取材，冰冻切片，苏丹Ⅲ染色。在光学显微镜下观察肝细胞损伤程度。分别记录每个视野中的各种病变所占视野的面积，累计所观察视野的病变总分。
评分标准为：
模型对照组与阴性对照组比较，肝脏脂肪细胞变性评分在统计学上有显著性差异(P<0.01)，该动物试验模型成立，成功复制出了实验小鼠酒精性肝损伤模型。低剂量组与模型组相比较，肝细胞脂肪变性程度减轻，统计学上有显著性差异(P<0.05)，判断为阳性。(统计结果见表四，切片图见附图1、附图2和附图3)
表四多肽口服液对小鼠肝脏病理组织学的影响(均数±标准差)
注:各剂量组与模型对照组比较，*p≤0.05。
有益效果：1)本发明得到的多肽口服液色泽淡黄棕色、澄澈透明、均一度高，且不含防腐剂，原料来源健康，安全性和稳定性好；
2)本发明得到的多肽口服液加工及储存过程中不产生沉淀，滋味清淡微酸，气味清香，口感和观感皆易于被消费者接受；
3)本发明得到的多肽口服液其多肽含量大于0.4g/100ml，功能多肽含量高，食用后能刺激正常肝细胞DNA合成，促进肝细胞再生，对人体化学性肝损伤起到修复效果，增加肝脏对有毒物质的抵抗力，利于保肝、养肝。
4)本发明所述的多肽口服液制备方法适合工业化批量生产，从而利于批量化推广与应用。
附图说明
图1为阴性对照组切片图
图2为模型对照组切片图。
图3为模型对照组切片图。
具体实施方式
牛肝脏提取液的制备方法为包括：
(1)将牛肝脏原料绞碎、胶磨后得到匀浆液；
(2)往匀浆液中加入胰酶进行酶解，酶解完成后灭酶、自然沉淀6～10h后离心过滤，取滤液备用；其中胰酶与牛肝脏碎料的重量比为1:200，酶解为恒温连续酶解，酶解条件为：温度48～52℃：pH值8.0～8.5，时间5～6h，酶解过程中不断搅拌，酶解完成后将匀浆液加热至75～85℃后保温1h而灭酶。
(3)去除滤液中的酸性蛋白；将步骤(2)中滤液加入提取罐中，用3mol/L HCL溶液调节pH值至3.0～4.0，在95～105℃的条件下搅拌30min，然后冷却至40℃以下，离心过滤，取滤液。
(4)超滤分离：依次采用分子量为100000道尔顿和30000道尔顿的超滤膜进行超滤分离，取滤过液；
(5)去除步骤(4)中滤过液的碱性蛋白；将滤过液用3mol/L NaoH溶液调节pH值至7.3～7.7，在95～105℃的条件下搅拌30min，然后冷却至40℃以下，采用分子量为10000道尔顿的超滤膜进行进一步超滤分离，取滤过液。
(6)用3mol/L NaoH溶液调节PH值至7.0～8.0，搅拌10～15min、灌装、密封后冷冻保存得到成品。
得到的牛肝脏提取液中多肽含量为16～20mg/ml。
实施例1
准备原料：牛肝脏多肽4.6kg、甜蜜素0.8kg、食用菠萝香精1.0kg、柠檬酸0.5kg；牛肝脏多肽以牛肝脏提取液的形式存在，牛肝脏提取液的投料量计算方法如下：
牛肝脏提取液的投料量(kg)＝(4.6*1000*1000*相对密度)/(多肽含量*1000)，其中多肽采用福林酚方法检测。
该多肽口服液的制备方法如下：
①检测牛肝脏提取液中多肽含量，计算所需牛肝脏提取液的量；
②将牛肝脏提取液采用分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤后取滤过液；
③将滤过液加入配料罐，然后将食用菠萝香精及溶解于水中的甜蜜素、柠檬酸依次加入配料罐，搅拌15min后用0.22μm滤膜过滤，取滤过液；
④往经过0.22μm滤膜处理的滤过液中加入余量的水，调节PH为5.7～6.3，搅拌均匀后继续用0.22μm的滤膜过滤，取滤过液，将该滤过液灌装后高温灭菌得到产品。
实施例2
准备原料：牛肝脏多肽5.0kg、甜蜜素1.0kg、食用菠萝香精1.5kg、柠檬酸0.4kg；牛肝脏多肽以牛肝脏提取液的形式存在，牛肝脏提取液的投料量计算方法如下：
牛肝脏提取液的投料量(kg)＝(5.0*1000*1000*相对密度)/(多肽含量*1000)，其中多肽采用福林酚方法检测。
该多肽口服液的制备方法如下：
①检测牛肝脏提取液中多肽含量，计算所需牛肝脏提取液的量；
②将牛肝脏提取液采用分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤后取滤过液；
③将滤过液加入配料罐，然后将食用菠萝香精及溶解于水中的甜蜜素、柠檬酸依次加入配料罐，搅拌20min后用0.22μm滤膜过滤，取滤过液；
④往经过0.22μm滤膜处理的滤过液中加入余量的水，调节PH为5.7～6.3，搅拌均匀后继续用0.22μm的滤膜过滤，取滤过液，将该滤过液灌装后高温灭菌得到产品。
实施例3
准备原料：牛肝脏多肽4.0kg、甜蜜素0.5kg、食用菠萝香精0.8kg、柠檬酸0.3kg；牛肝脏多肽以牛肝脏提取液的形式存在，牛肝脏提取液的投料量计算方法如下：
牛肝脏提取液的投料量(kg)＝(4.0*1000*1000*相对密度)/(多肽含量*1000)，其中多肽采用福林酚方法检测。
该多肽口服液的制备方法如下：
①检测牛肝脏提取液中多肽含量，计算所需牛肝脏提取液的量；
②将牛肝脏提取液采用分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤后取滤过液；
③将滤过液加入配料罐，然后将食用菠萝香精及溶解于水中的甜蜜素、柠檬酸依次加入配料罐，搅拌20min后用0.22μm滤膜过滤，取滤过液；
④往经过0.22μm滤膜处理的滤过液中加入余量的水，调节PH为5.7～6.3，搅拌均匀后继续用0.22μm的滤膜过滤，取滤过液，将该滤过液灌装后高温灭菌得到产品。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (9)

1.一种缓解化学性肝损伤的多肽口服液，其特征在于，制备1000重量份所述口服液中，各原料组分的配比如下：牛肝脏多肽4.0～5.0份、甜蜜素0.5～1.0份、食用菠萝香精0.5～1.5份、柠檬酸0.3～0.6份、余量为水，其中牛肝脏多肽以牛肝脏提取液的形式存在。
2.根据权利要求1所述的缓解化学性肝损伤的多肽口服液，其特征在于，所述牛肝脏提取液中多肽含量为16～20mg/ml。
3.一种缓解化学性肝损伤的多肽口服液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
①检测牛肝脏提取液中多肽含量，计算所需牛肝脏提取液的量；
②将牛肝脏提取液采用分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤后取滤过液；
③将滤过液加入配料罐，然后将食用菠萝香精及溶解于水中的甜蜜素、柠檬酸依次加入配料罐，搅拌10～20min后用0.22μm滤膜过滤，取滤过液；
④往经过0.22μm滤膜处理的滤过液中加入余量的水，调节PH为5.7～6.3，搅拌均匀后继续用0.22μm的滤膜过滤，取滤过液，将该滤过液灌装后高温灭菌得到产品。
4.根据权利要求1～3任一所述的缓解化学性肝损伤的多肽口服液，其特征在于，所述牛肝脏提取液的制备方法如下：
(1)将牛肝脏原料绞碎得到牛肝脏碎料、将牛肝脏碎料胶磨后得到匀浆液；
(2)往匀浆液中加入胰酶进行酶解，酶解完成后灭酶、自然沉淀6～10h后离心过滤，取滤液备用；
(3)去除滤液中的酸性蛋白；
(4)超滤分离：依次采用分子量为100000道尔顿和30000道尔顿的超滤膜进行超滤分离，取滤过液；
(5)去除步骤(4)中滤过液的碱性蛋白；
(6)搅拌均匀、灌装、密封后冷冻保存得到成品。
5.根据权利要求4所述的缓解化学性肝损伤的多肽口服液，其特征在于，步骤(2)中胰酶与牛肝脏碎料的重量比为1:200。
6.根据权利要求5所述的缓解化学性肝损伤的多肽口服液，其特征在于，步骤(2)中，所述酶解为恒温连续酶解，酶解条件为：温度48～52℃：pH值8.0～8.5，时间5～6h，酶解过程中不断搅拌，酶解完成后将匀浆液加热至75～85℃后保温1h而灭酶。
7.根据权利要求4所述的缓解化学性肝损伤的多肽口服液，其特征在于，步骤(3)中酸性蛋白的去除方法为：将步骤(2)中滤液加入提取罐中，调节pH值至3.0～4.0，在95～105℃的条件下搅拌30min，然后冷却至40℃以下，离心过滤，取滤液。
8.根据权利要求4所述的缓解化学性肝损伤的多肽口服液，其特征在于，步骤(5)中碱性蛋白的去除方法为：将滤过液调节pH值至7.3～7.7，在95～105℃的条件下搅拌30min，然后冷却至40℃以下，采用分子量为10000道尔顿的超滤膜进行进一步超滤分离，取滤过液。
9.根据权利要求4所述的缓解化学性肝损伤的多肽口服液，其特征在于，步骤(5)中灌装去前调节产品PH值至7.0～8.0。
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CN1183282A (zh) * 1996-11-22 1998-06-03 大连白玉山制药厂 健肝口服液及其制备方法
JP2006271377A (ja) * 2005-03-03 2006-10-12 Nippon Meat Packers Inc 動物肝臓の酵素分解物および該酵素分解物を含有する食品
CN1903357A (zh) * 2005-07-27 2007-01-31 武汉同源药业有限公司 注射用肝水解肽及其制备方法

Patent Citations (3)

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