CN109563162B - 针对il-25的中和单克隆抗体及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了与IL‑25结合分子有关的组合物和方法。

Description

针对IL-25的中和单克隆抗体及其用途

背景技术

白介素-25(IL-25)，也称为IL-17E是属于IL-17细胞因子家族的细胞因子，并且由2型辅助性T细胞(Th2)和肥大细胞分泌。IL-25在多种组织中诱导产生其他细胞因子(包括IL-4、IL-5和IL-13)，并刺激嗜酸性粒细胞的扩增。

IL-25涉及与胃肠道相关联的慢性炎症，并且已在与肠的自身免疫性疾病诸如炎症性肠病(IBD)相关联的染色体区域中鉴定出了IL-25基因。用于治疗IBD的常规疗法涉及抗生素或类固醇衍生的药物；然而，这些药物目前还不能成功地诱导或维持患者的临床缓解。

IL-25也被证实在哮喘(估计全球有3亿多人患有该病症)患者样品中上调；表明这种细胞因子的过表达有助于哮喘病和相关病症。

因此，需要用于治疗以IL-25过表达为特征的疾病和病症(包括哮喘和炎症性肠病)的有效IL-25拮抗剂。

发明内容

在一个方面，本文公开了针对IL-25的结合分子，其适用于治疗IL-25介导的疾病和障碍。

在一个方面，本文公开了包括重链可变区的分离的IL-25结合分子，该重链可变区包括如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9中所示的一个或多个互补决定区(CDR)。

还公开了IL-25结合分子，该IL-25结合分子包括重链可变区，其中重链可变区包括SEQ ID NO:13和SEQ ID NO 15。

在一个方面，本文公开了轻链可变区，该轻链可变区包括如SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12中所示的一个或多个CDR。

本文还公开了包括轻链可变区的分离的IL-25结合分子，其中轻链可变区包括SEQID NO:14、SEQ ID NO 16。

在一个方面，所公开的IL-25结合分子可包括重链可变区和轻链可变区两者或任何前述方面的互补决定区(CDR)。

因此，本文公开了IL-25结合分子，该IL-25结合分子包括选自包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9的组的重链可变区CDR中的一个、两个或三个，以及选自包括SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12的组的轻链可变区CDR中的一个、两个或三个。

本文还公开了IL-25结合分子，该IL-25结合分子包括重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区包括SEQ ID NO:13或SEQ ID NO 15，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:14或SEQ ID NO 16。

本文还公开了人源化IL-25结合分子，该人源化IL-25结合分子包括重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区包括SEQ ID NO:17，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:18。

在一个方面，本文公开了治疗、抑制或预防鼻病毒感染、气道炎症、类风湿性关节炎、骨关节炎、骨侵蚀、腹膜内脓肿和粘连、炎症性肠病、同种异体移植物排斥、牛皮癣、某些类型的癌症、血管生成、动脉粥样硬化、囊性纤维化和多发性硬化的方法，该方法包括施用治疗量的任何前述方面的任何IL-25结合分子。

附图说明

并入并构成本说明书一部分的附图示出了几个实施方案，并且连同说明书一起示出了所公开的组合物和方法。

图1示出了从用IL-25免疫的小鼠中移出的B细胞的总结和结合IL-25的B细胞的荧光分类图。

图2示出了抗体的变性的凝胶电泳：泳道1：人IgG4阳性对照，泳道2：Kaleidoscope预染标准蛋白质标记物，泳道3：ABM109，泳道4：ABM125，泳道5：ABM109.2。

图3示出了针对IL-25的单克隆抗体的HT-29细胞效力测定。

图4示出了IgG1、IgG2和IgG4同型中人源化单克隆抗体ABM109.2的HT-29细胞效力测定。

图5示出了抗IL25单克隆抗体的表面等离子体共振(SPR)和计算的抗体亲和力。

图6示出了给过敏性哮喘小鼠的鼻病毒感染模型中的总肺浸润细胞、嗜酸性粒细胞和巨噬细胞施用ABM125或对照抗体(IgG)的效果。

图7示出了用对照抗体(IgG)或ABM125处理的小鼠肺中可检测的鼻病毒RNA的量。

图8示出了用对照抗体(IgG)或ABM125处理的小鼠肺中可检测的IL-5RNA的量。

图9示出了与具有完全小鼠可变区的嵌合ABM125相比，人源化(CDR-移植)形式的ABM125(称为ABM125.9和ABM125.10)的效力和结合亲和力。

具体实施方式

应当理解，在公开和描述本发明化合物、组合物、制品、装置和/或方法之前，除非另有说明，否则它们不限于特定的合成方法或特定的重组生物技术方法，或者除非另有说明，否则不限于特定的试剂，因此当然可以改变。另外应当了解，本文所用的术语只是为了描述具体实施方案的目的，并非旨在进行限制。

A.定义

如本说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一个”和“所述”包括复数指代，除非上下文另有明确说明。因此，例如，对“药物载体”的提及包括两种或更多种这样的载体的混合物等。

在本文中，范围可被表示为从“约”一个具体的值，和/或到“约”另一个具体的值。当表示这样的范围时，另一个实施方案包括从一个具体的值和/或到其他具体的值。相似地，当前面用“约”将值表示为近似值时，应当理解，该值的具体值构成了另一个实施方案。还应当理解，每个范围的端值相对于另一个端值以及独立于另一个端值都是有意义的。还应当理解，本文公开了许多值，并且除了值本身之外，每个值在本文中也被公开为“约”该特定值。例如，如果公开了值“10”，则还公开了“约10”。还应当理解，当公开一个值时，“小于或等于”该值、“大于或等于该值”和在值之间的可能范围也被公开，如本领域技术人员适当理解的。例如，如果公开了值“10”，则还公开了“小于或等于10”以及“大于或等于10”。还应当理解，在整个申请中，数据以多种不同格式提供，并且该数据表示端点和起点，以及数据点的任何组合的范围。例如，如果公开了特定数据点“10”和特定数据点15，则应当理解，认为公开了大于、大于或等于、小于、小于或等于、等于10和15以及介于10和15之间。还应当理解，还公开了在两个特定单元之间的每个单元。例如，如果公开了10和15，则还公开了11、12、13和14。

在本说明书和随后的权利要求书中，将提及的许多术语将被定义为具有下列含义：

“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情况可发生或可不发生，并且该描述包括所述事件或情况发生的示例和不发生的示例。

多种出版物的引用贯穿于本申请。这些出版物的公开内容据此全文以引用方式并入本申请中以便更全面地描述其所属领域的现状。本发明所公开的参考文献所包含的材料也单独且具体地通过引用方式并入本文，这些材料在引用文献所依据的句子中进行了讨论。

B.组合物

公开了用于制备所公开的组合物的成份以及在本文公开的方法中使用的组合物本身。本文公开了这些及其他材料，并且应当理解，当公开这些材料的组合、子组、交互、组等时，尽管可能没有明确公开对这些化合物的各种单独和集合组合和排列中每一者的特定引用，但本文对每一者都进行了具体地设想和描述。例如，如果公开和讨论了特定的抗IL-25抗体，并且讨论了可以对包括抗IL-25抗体的许多分子进行的许多修饰，则具体地设想抗IL-25抗体的每种组合和排列以及可能的修饰，除非明确地指出相反的情况。因此，如果公开了一类分子A、B和C以及一类分子D、E和F，并且公开了组合分子的一个示例A-D，则即使没有单独地列举每一个，每一个都是单独且全部地设想的意义组合，也认为公开了A-E、A-F、B-D、B-E、B-F、C-D、C-E和C-F。同样，还公开了这些的任何子组或组合。因此，例如，将考虑公开A-E、B-F和C-E的子组。该概念适用于本申请的所有方面，包括但不限于制备和使用所公开的组合物的方法中的步骤。因此，如果存在可进行的各种附加步骤，则应当理解，这些附加步骤中的每一个步骤可利用所公开的方法的任何具体实施方案或实施方案的组合来进行。

如上所述，增加的水平IL-25与几种包括气道炎症、类风湿性关节炎(“RA”)、骨关节炎、骨侵蚀、腹膜内脓肿和粘连、炎症性肠病(“IBD”)、囊性纤维化、同种异体移植物排斥、牛皮癣、某些类型的癌症、血管生成、动脉粥样硬化和多发性硬化(“MS”)的病症、疾病或障碍相关联。

IL-17细胞因子家族目前包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E(IL-25)和IL-17F。所有IL-17家族成员具有四个涉及链内二硫键的形成的高度保守的半胱氨酸残基，并且具有两个或更多个可能涉及链间二硫键的形成的半胱氨酸残基。IL-17家族的成员与任何其他已知细胞因子没有序列相似性。

2型细胞因子在介导寄生蠕虫感染的保护性免疫、调节效应功能诸如B细胞生长和IgE分泌、诱导杯状细胞增生和相关联的粘液产生、嗜酸性粒细胞增多、肥大细胞增多和纤维化中起着重要作用。这些细胞因子在调节这些效应功能中发挥了核心作用，使其成为哮喘的关键治疗靶点。实际上，这些细胞因子过表达的小鼠模型显示出哮喘的显著特征。令人惊讶的是，通过封闭特异性2型细胞因子来减轻实验性哮喘的努力已被证实是不成功的(除了抑制IL-13外)。

对IL-13的抑制压制了AHR和气道炎症两者，尽管其机制尚不清楚。然而，鉴于病理生理学的复杂性和对哮喘的病因学知之甚少，不确定最终是否能证明靶向个体途径的治疗是成功的。

最近，已显示IL-25/IL-17E的过表达在体内诱导2型反应并增加对气道激动剂的反应性。IL-25^-/-小鼠未能驱除寄生蠕虫；无效的2型响应的关键指标。

本发明人已经生产了针对IL-25的抗体，并鉴定了以超高亲和力和特异性与IL-25结合的抗体分子。鉴定了筛选出的二十三种封闭抗体中的两种，其中一种具有极慢的解离速率。

结合分子

如本文所用，术语“结合分子”是指完整免疫球蛋白，包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体，以及包括抗原结合和/或可变区的抗体片段和功能变体，所述可变区包括免疫球蛋白片段，其与完整免疫球蛋白竞争以与免疫球蛋白例如IL-25的结合配偶体特异性结合。

在一个方面，所公开的IL-25结合分子可包括抗IL-25抗体(例如，抗IL-25抗体)。术语“抗体”在本文中以广义使用，并且包括多克隆抗体和单克隆抗体两者。如本文所用，术语“抗体”包括但不限于任何类别的完整免疫球蛋白(即，完整抗体)。除完整免疫球蛋白分子外，术语“抗体”中还包括那些免疫球蛋白分子的片段或聚合物，以及免疫球蛋白分子或其片段的人或人源化形式，只要它们因与IL-25相互作用的能力而被选择，使得抑制IL-25与IL-17RA和/或IL-17RB相互作用。还公开了结合IL-25的公开区域的抗体，所述公开区域涉及在IL-25和IL-17RA和/或IL-17RB之间的相互作用。

天然抗体通常是异四聚体糖蛋白，由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成。所公开的IL-25结合分子(无论是单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体还是人抗体)以及抗体片段和功能变体都可以包括全部或部分轻链和重链。

在完整抗体中，通常，每条轻链通过一个共价二硫键与重链连接，而二硫键的数目在不同免疫球蛋白同型的重链之间变化。每条重链和轻链还具有规则间隔的链内二硫桥。每条重链在一端具有可变区(V(H))，然后是许多恒定区(C(H))。每条轻链在一端具有可变区(V(L))，并且在另一端具有恒定区(C(L))；轻链的恒定区与重链的第一恒定区对齐，并且轻链的可变区与重链的可变区对齐。认为特定的氨基酸残基在轻链和重链的可变区之间形成界面。来自任何脊椎物种的抗体的轻链可基于其恒定区的氨基酸序列分配为两种明显不同的类型(称为κ(k)和λ(l))中的一种。根据其重链恒定区的氨基酸序列，可以将免疫球蛋白分配到不同的类别。人免疫球蛋白有五大类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中几种类别可进一步分为亚类(同型)，例如IgG-1、IgG-2、IgG-3和IgG-4；IgA-1和IgA-2。本领域技术人员将认识到可比较的小鼠类别。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定区分别称为α、δ、ε、γ和μ。

术语“可变”在本文中用于描述某些重链区和轻链区，这些重链区和轻链区在抗体之间的序列不同，并且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性通常未在抗体的可变区中均匀分布。可变区的更高度保守的部分称为框架(FR)。天然重链和轻链的可变区各自包括四个FR区，主要采用β-片层构型，通过三个互补决定区(CDR)连接，其形成连接β-片层结构的环，并且在一些情况下形成β-片层结构的一部分。可变性通常集中在轻链和重链可变区中的CDR或高变区中。

每条链中的CDR通过FR区紧密靠近在一起，并且与来自另一条链的CDR一起有助于抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat E.A.等人，“Sequences of Proteins ofImmunological Interest”，马里兰州贝塞斯达卫生研究院，1987年)。如本文所用的术语“互补决定区”意指结合分子诸如免疫球蛋白的可变区内的序列，该互补决定区产生形状和电荷分布与抗原上识别的表位互补的抗原结合位点。CDR区可以特异于蛋白质或蛋白质片段的线性表位、不连续表位或构象表位，或者以其天然构象存在于蛋白质上，或者在一些情况下，作为变性的存在于蛋白质上，例如通过在SDS中溶解。表位还可以由蛋白质的翻译后修饰组成。

还可能取代一个或多个CDR残基或省略一个或多个CDR。科学文献中已经描述了抗体，其中为了结合可以省去一个或两个CDR。Padlan等人(1995年，FASEB J.，第9期，第133-139页)基于公开的晶体结构分析了抗体与其抗原之间的接触区域，并得出结论，只有约五分之一至三分之一的CDR残基实际接触抗原。Padlan还发现了许多抗体，其中一个或两个CDR没有与抗原接触的氨基酸(参见Vajdos等人，2002年，J Mol Biol，第320期，第415-428页)。

可以基于先前的研究，通过分子建模和/或根据经验鉴定来自位于Chothia CDR之外的Kabat CDR区的未接触抗原的CDR残基(例如，通常不需要CDRH2中的残基H60-H65)。如果省略CDR或其残基，则通常用占据另一个人抗体序列或这些序列的共有序列中相应位置的氨基酸取代。CDR内的取代位置和取代的氨基酸也可根据经验选择。

恒定区不直接涉及抗体与抗原的结合，但表现出各种效应功能，诸如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。

在一个方面，本文公开了分离的IL-25结合分子，所述分离的IL-25结合分子包括重链可变区，所述重链可变区包括如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和/或SEQ ID NO:9中所示的一个或多个互补决定区(CDR)。例如，本文公开了IL-25结合分子，所述IL-25结合分子包括重链可变区，所述重链可变区包括如以下各组合中所示的CDR：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3；SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQID NO:7和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9；以及SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9。还公开了IL-25结合分子，所述IL-25结合分子包括重链可变区，其中重链可变区包括SEQ ID NO:13或SEQ ID NO 15。

应当理解并在本文中设想所公开的IL-25结合分子中的重链可变区的公开互补决定区可以是连续的或被1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸分开。因此，本文公开了IL-25结合分子，所述IL-25结合分子包括重链可变区，所述重链可变区包括至少两个CDR，其中第一CDR与第二CDR之间被10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸分开。例如，本文公开了IL-25结合分子，所述IL-25结合分子包括至少两个CDR，其中第一CDR包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7，第二CDR包括SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:8，并且其中第一CDR和第二CDR被10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸分开。本文还公开了IL-25结合分子，所述IL-25结合分子包括三个CDR，其中第一CDR包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7；第二CDR包括SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:8；第三CDR包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:9；并且其中第二CDR和第三CDR被25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸分开。

应当理解并在本文中设想IL-25结合分子可包括轻链可变区而不是重链可变区或包括除了重链可变区之外的轻链可变区。因此，在一个方面，本文公开了IL-25结合分子，所述IL-25结合分子包括轻链可变区，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQID NO:6、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和/或SEQ ID NO:12中所示的一个或多个CDR。例如，本文公开了IL-25结合分子，所述IL-25结合分子包括轻链可变区，所述轻链可变区包括如以下各组合中所示的CDR：SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6；SEQID NO:5和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:10和SEQID NO:11；SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；和SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12。本文还公开了包括分离的IL-25结合分子，所述分离的IL-25结合分子轻链可变区，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:14或SEQ ID NO 16。

应当理解并在本文中设想所公开的IL-25结合分子中的轻链可变区的公开互补决定区可以是连续的或被1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸分开。因此，本文公开了IL-25结合分子，所述IL-25结合分子包括轻链可变区包括轻链可变区，其中所述轻链可变区包括至少两个CDR，其中第一CDR与第二CDR之间被10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸分开。例如，本文公开了IL-25结合分子，所述IL-25结合分子包括至少两个CDR，其中第一CDR包括SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:22，并且第二CDR包括SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:23，并且其中第一CDR和第二CDR被10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸分开。本文还公开了IL-25结合分子，所述包括轻链可变区，其中轻链可变区包括三个CDR，其中第一CDR包括SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:10；第二CDR包括SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:11；以及第三CDR包括SEQ IDNO:6或SEQ ID NO:12；并且其中第二CDR和第三CDR被25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸分开。

在一个方面，应当理解并在本文中设想所公开的IL-25结合分子可包括重链可变区和轻链可变区两者。还应当理解，所述IL-25结合分子可包括本文公开的重链可变区CDR中的任何一个、两个或三个结合轻链可变区CDR中的任何一个、两个或三个。因此，IL-25结合分子可包括选自包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:8和/或SEQ ID NO:9的组的重链可变区CDR中的一个、两个或三个，以及选自包括SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和/或SEQ ID NO:12的组的轻链可变区CDR中的一个、两个或三个。例如，本文公开了IL-25结合分子，所述IL-25结合分子包括重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区包括SEQ ID NO:13或SEQ ID NO 15，轻链可变区包括SEQ ID NO:14或SEQ ID NO 16。

因此，在一个实施方案是包括抗原结合位点的指定ABM109的IL-25结合分子中，该抗原结合位点包括至少一个免疫球蛋白重链可变区(V_H)，该免疫球蛋白重链可变区在序列中包括高变区CDR1、CDR2和CDR3或它们的直接CDR等价物，所述CDR1具有氨基酸序列SEQ IDNO:1(SYWIE)，所述CDR2具有氨基酸序列SEQ ID NO:2(QILPGIGSTNYNEKFKG)，并且所述CDR3具有氨基酸序列SEQ ID NO:3(GYGNYGDY)。在一个方面，IL-25结合分子(诸如例如ABM109)还可以包括至少一个免疫球蛋白轻链可变区(V_L)，该免疫球蛋白轻链可变区在序列中包括高变区CDR1′、CDR2′和CDR3′或它们的直接CDR′等价物，所述CDR1′具有氨基酸序列SEQ IDNO:4(RASESVDSYGNSFM)，所述CDR2′具有氨基酸序列SEQ ID NO:5(RASNLES)，并且所述CDR3′具有氨基酸序列SEQ ID NO:6(QQSNEDPLT)。

在一个方面，还公开了包括抗原结合位点的指定ABM125的IL-25结合分子，该抗原结合位点包括至少一个免疫球蛋白重链可变区(V_H)，该免疫球蛋白重链可变区在序列中包括高变区CDR1、CDR2和CDR3或它们的直接CDR等价物，所述CDR1具有氨基酸序列SEQ ID NO:7(TSGMGVG)，所述CDR2具有氨基酸序列SEQ ID NO:8(HIWWDDVKRYNPALKS)，并且所述CDR3具有氨基酸序列SEQ ID NO:9(TLPHFFDY)。在一个方面，IL-25结合分子(诸如例如ABM125)还可以包括至少一个免疫球蛋白轻链可变区(V_L)，该免疫球蛋白轻链可变区在序列中包括高变区CDR1′、CDR2′和CDR3′或它们的直接CDR′等价物，所述CDR1′具有氨基酸序列SEQ IDNO:10(SASSSVSYMY)，所述CDR2′具有氨基酸序列SEQ ID NO:11(RTSNLAS)，并且所述CDR3′具有氨基酸序列SEQ ID NO:12(KQYHSYPPTWT)。

如上所述，所公开的IL-25结合分子也可以是抗体片段。如本文所用，术语“抗体或其片段”包括具有双重或多重抗原或表位特异性的嵌合抗体和杂合抗体和片段，诸如F(ab')2、Fab'、Fab、Fv、sFv、dAb、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、二价单链抗体、双链抗体、三链抗体、四链抗体、包含至少一个足以向(多)肽赋予特异性抗原结合的免疫球蛋白片段(包括杂合片段)的(多)肽等。因此，提供了保留结合抗体的特异性抗原的能力的抗体片段。例如，在术语“抗体或其片段”的含义中包括保持IL-25结合活性的抗体片段。此类抗体和片段可以通过本领域已知的技术制备，并且可以根据示例中所示的方法和用于生产抗体和筛选抗体的特异性和活性的一般方法来筛选特异性和活性(参见Harlow和Lane，“Antibodies,A Laboratory Manual”，Cold Spring Harbor Publications，New York，1988年)。

在“抗体或其片段”的含义中还包括抗体片段和抗原结合蛋白(单链抗体)的缀合物。缀合的抗体或片段是指与效应部分或标签(诸如尤其是有毒物质、放射性物质、荧光物质、脂质体或例如在美国专利No.4,704,692中所述的酶，该专利的内容以引用方式并入本文)可操作地连接或以其他方式物理或功能相关联的抗体或片段。

无论是什么结构，本文公开的抗原结合片段可以与完整免疫球蛋白识别的相同抗原结合。抗原结合片段可包括肽或多肽，所述肽或多肽包括结合分子的氨基酸序列的至少2个连续氨基酸残基、至少5个连续氨基酸残基、至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基、至少30个连续氨基酸残基、至少35个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基、至少125个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、至少200个连续氨基酸残基或至少250个连续氨基酸残基的氨基酸序列。

无论是否连接到其他序列，片段还可以包括特定区域或特定氨基酸残基的插入、缺失、取代或其他选择的修饰，条件是与未修饰的抗体或抗体片段相比，抗体或抗体片段的活性没有显著改变或受损。这些修饰可以提供一些附加的性质，诸如能够去除/添加氨基酸的二硫键、增加其生物寿命、改变其分泌特征等。在任何情况下，抗体或抗体片段必须具有生物活性，诸如与其同源抗原的特异性结合。可以通过诱变蛋白质的特定区域，然后表达和测试表达的多肽来识别抗体或抗体片段的功能区域或活性区域。此类方法对于本领域技术人员来说是显而易见的，并且可以包括编码抗体或抗体片段的核酸的位点特异性诱变(Zoller,M.J.，Curr.Opin.Biotechnol，第3期，第348-354页，1992年)。

如本文所用，术语“功能变体”是指包括核苷酸和/或氨基酸序列的结合分子，所述核苷酸和/或氨基酸序列与亲本结合分子的核苷酸和/或氨基酸序列相比，被一个或多个核苷酸和/或氨基酸改变，并且仍然能够与亲本结合分子竞争结合结合配偶体，例如IL-25(包括IL-25)。换句话说，亲本结合分子的氨基酸和/或核苷酸序列的修饰不会显著影响或改变通过核苷酸序列或包含氨基酸序列编码的结合分子的结合特征，即结合分子仍然能够识别并绑定其目标。功能变体可具有包括核苷酸和氨基酸取代、添加和缺失的保守序列修饰。这些修饰可以通过本领域已知的标准技术(诸如定点诱变和随机PCR介导诱变)引入，并且可以包括天然以及非天然核苷酸和氨基酸。

如本文所公开的，结合分子、抗体、片段和变体能够特异性结合抗原靶标，诸如例如IL-25。如本文所用，术语“特异性结合”是指结合分子例如抗体与其结合配偶体例如抗原的相互作用，意指相互作用取决于结合配偶体上特定结构例如抗原决定簇或表位的存在。换句话说，即使当结合配偶体存在于其他分子的混合物中时，抗体也优先结合或识别结合配偶体。结合可以通过共价或非共价相互作用或两者的组合介导。换句话说，术语“特异性结合”意指免疫特异性结合抗原或其片段，而不是免疫特异性结合其他抗原。免疫特异性结合抗原的结合分子可以通过例如放射免疫测定(RIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、BIAcore或本领域已知的其他测定法确定以较低亲和力结合其他肽或多肽。免疫特异性结合抗原的结合分子或其片段可以与相关抗原交叉反应。优选地，免疫特异性结合抗原的结合分子或其片段不与其他抗原交叉反应。

在一个方面，本文公开的抗体或结合分子可以是人抗体或人结合分子。当应用于如本文所定义的结合分子时，术语“人”是指直接来源于人或基于人序列的分子。当结合分子来源于或基于人序列并随后被修饰时，在整个说明书中该结合分子仍然被认为是人。换句话说，当应用于结合分子时，术语“人”旨在包括具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的结合分子，所述可变区和恒定区基于人或人淋巴细胞中或以修饰形式存在或不存在的可变区或恒定区。因此，人结合分子可包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基，包括取代和/或缺失(例如，通过例如体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。如本文所用，“基于”是指核酸序列可以从模板中精确复制或具有微小突变的情况，诸如通过易错PCR方法，或合成地使模板精确匹配或微小修饰。基于人序列的半合成分子也被认为是本文所用的人。

任选地，抗体在其他物种中产生并且“人源化”以对人施用。人源化形式的非人(例如小鼠)抗体是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗体的其他抗原结合子序列)，其包含来源于非人免疫球蛋白的最小序列。人源化抗体包括人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的互补决定区(CDR)的残基被来自非人物种诸如具有所需特异性、亲和力和能力的小鼠、大鼠或兔子(供体抗体)的CDR的残基取代。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架残基被相应的非人残基取代。人源化抗体还可以包括既不在受体抗体中也不在导入的CDR或框架序列中发现的残基。通常，人源化抗体将包括基本上所有至少一个、通常两个可变区，其中所有或基本上所有CDR区对应于非人免疫球蛋白的那些，并且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白共有序列中的那些。人源化抗体最佳地还将包括免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常是人免疫球蛋白的恒定区)的至少一部分(Jones等人，Nature，第321期，第522-525页，1986年；Riechmann等人，Nature第332期，第323-327页，1988年；以及Presta，Curr.Op.Struct.Biol，第2期，第593-596页，1992年)。

用于人源化非人抗体的方法是本领域熟知的。通常，人源化抗体具有从非人源引入的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常称为“输入”残基，其通常取自“进口”可变区。通过用啮齿动物的CDR或CDR序列取代人抗体的相应序列，可以基本上按照Winter及其同事的方法(Jones等人，Nature，第321期，第522-525页，1986年；Riechmann等人，Nature，第332期，第323-327页，1988年；Verhoeyen等人，Science，第239期，第1534-1536页，1988年)进行人源化。因此，此类“人源化”抗体是嵌合抗体(美国专利No.4,816,567)，其中基本上少于完整人可变区，已被来自非人物种的相应序列取代。实际上，人源化抗体通常是人抗体，其中一些CDR残基和可能的一些FR残基被来自啮齿动物抗体中类似位点的残基取代。

选择用于制备人源化抗体的人可变区(轻链和重链两者)非常重要以便降低抗原性。根据“最佳匹配”方法，针对已知人可变区序列的整个文库筛选啮齿动物抗体的可变区的序列。然后接受最接近啮齿动物序列的人序列作为人源化抗体的人框架(FR)(Sims等人，J.Immunol，第151期，第2296页，1993年，和Chothia等人J.Mol.Biol.，第196期，第901页，1987年)。另一种方法使用来源于特定轻链或重链子组的所有人抗体的共有序列的特定框架。相同的框架可用于几种不同的人源化抗体(Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第89期，第4285页，1992年；Presta等人，J.Immunol.，第151期，第2623页，1993年)。

在一些方面，重要的是抗体被人源化，保留对抗原的高亲和力和其他有利的生物特性。为了实现该目标，根据优选的方法，通过使用亲本和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念性人源化产物的方法来制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常是可用的并且是本领域技术人员熟悉的。可使用说明和显示所选候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构的计算机程序。检查这些显示允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可以从共有序列和输入序列中选择和组合FR残基，使得实现所需的抗体特征，诸如增加的对靶抗原的亲和力。通常，CDR残基直接且最基本地涉及影响抗原结合(参见WO 94/04679，公布于1994年3月3日)。

在一个具体方面，人源化形式的ABM109(指定为ABM109.2)包含ABM109重链和轻链CDR，并保留特异性结合和中和的人、小鼠和猿猴IL-25。重链和轻链可变区分别列于SEQ IDNO:17和SEQ ID NO:18中。

公开了产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群体获得的抗体，即除了可能少量存在的可能天然发生的突变之外，构成群体的各抗体是相同的。本文中的单克隆抗体具体包括“嵌合”抗体以及此类抗体的片段(只要它们表现出所需的活性)，其中重链和/或轻链的一部分与来源于特定物种或属于特定抗体类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的其余部分与来源于另一物种或属于另一抗体类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源(参见美国专利No.4,816,567和Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第81期，第6851-6855页，1984年)。

单克隆抗体可以使用杂交瘤方法来制备，诸如在“Kohler和Milstein，Nature，第256期，第495页，1975年”或“Harlow和Lane，‘Antibodies,A Laboratory Manual’，ColdSpring Harbor Publications，New York，1988年”中描述的那些。在杂交瘤方法中，通常用免疫剂免疫小鼠或其他合适的宿主动物以引发产生或能够产生特异性结合免疫剂的抗体的淋巴细胞。另选地，可以在体外免疫淋巴细胞。优选地，免疫剂包括IL-25。传统上，单克隆抗体的产生取决于纯化蛋白质或肽的可用性，以用作免疫原。最近，基于DNA的免疫已经显示出作为引发强免疫应答和产生单克隆抗体的方式的希望。在该方法中，可以使用基于DNA的免疫，其中根据本领域已知的方法并如示例中所述，将编码作为与人IgG1的融合蛋白表达的IL-25的一部分的DNA注射到宿主动物中(例如，Kilpatrick KE等人，“Gene gundelivered DNA-based immunizations mediate rapid production of murinemonoclonal antibodies to the Flt-3receptor”，Hybridoma，1998年12月，第17卷第6期，第569-576页；Kilpatrick KE等人，“High-affinity monoclonal antibodies to PED/PEA-15generated using 5μg of DNA”，Hybridoma，2000年8月，第19卷第4期，第297-302页，针对抗体产生方法，这两篇文献全文以引用方式并入本文)。

用纯化蛋白质或DNA免疫的另一种方法是使用杆状病毒中表达的抗原。该系统的优点包括易于产生、高水平表达，以及与哺乳动物系统中看到的高度相似的翻译后修饰。该系统的使用涉及表达抗IL-25抗体的结构域作为融合蛋白。通过在信号序列和抗-IL-25抗体核苷酸序列的成熟蛋白结构域之间的框内插入基因片段来产生抗原。这导致在病毒粒子表面上显示外源蛋白质。该方法允许用全病毒免疫，消除了纯化靶抗原的需要。

通常，如果需要人源细胞，则在产生单克隆抗体的方法中使用外周血淋巴细胞(“PBL”)，或者如果需要非人哺乳动物源细胞，则使用脾细胞或淋巴结细胞。然后使用合适的融合剂诸如聚乙二醇将淋巴细胞与永生化细胞系融合，形成杂交瘤细胞(Goding，“Monoclonal Antibodies:Principles and Practice”，Academic Press，1986年，第59-103页)。永生化细胞系通常是转化的哺乳动物细胞，包括啮齿动物、牛、马和人来源的骨髓瘤细胞。通常，采用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。杂交瘤细胞可以在合适的培养基中培养，所述培养基优选包含一种或多种抑制未融合的永生化细胞生长或存活的物质。例如，如果亲本细胞缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT)，则杂交瘤的培养基通常包括次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(“HAT培养基”)，这些物质阻止HGPRT型缺陷细胞的生长。优选的永生化细胞系是有效融合的细胞系，通过选择的抗体生成细胞支持抗体的稳定高水平表达，并且对培养基诸如HAT培养基非常敏感。更优选的永生化细胞系是鼠骨髓瘤细胞系，其可以例如从加利福尼亚州圣地亚哥的索尔克研究所细胞分配中心(Salk Institute CellDistribution Center,San Diego,Calif)和马里兰州罗克维尔的美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection,Rockville,Md)获得。人骨髓瘤和小鼠-人杂交骨髓瘤细胞系也已被描述用于产生人单克隆抗体(Kozbor，J.Immunol.，第133期，第3001页，1984年；Brodeur等人，“Monoclonal Antibody Production Techniques andApplications”，Marcel Dekker,Inc.，New York，1987年，第51-63页)。然后可以测定培养杂交瘤细胞的培养基中是否存在针对IL-25的单克隆抗体。优选地，由杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性通过免疫沉淀或通过体外结合测定法诸如放射免疫测定法(RIA)或酶联免疫吸附测定法(ELISA)确定。此类技术和测定法是本领域已知的，并且在下面的示例或“Harlow和Lane，‘Antibodies，A Laboratory Manual’，Cold Spring HarborPublications，New York，1988年”中进一步描述。

在鉴定出所需的杂交瘤细胞后，克隆可以通过有限稀释或FACS分选程序亚克隆，并通过标准方法培养。用于此目的的合适培养基包括例如Dulbecco's Modified Eagle'sMedium和RPMI-1640培养基。另选地，杂交瘤细胞可以在哺乳动物体内作为腹水生长。

亚克隆分泌的单克隆抗体可以通过常规免疫球蛋白纯化方法诸如例如蛋白A-琼脂糖凝胶、蛋白G、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析从培养基或腹水中分离或纯化。

当应用于如本文所定义的结合分子时，术语“分离的”是指基本上不含其他蛋白质或多肽的结合分子，特别是不含具有不同抗原特异性并且基本上不含其他细胞或组织材料和/或化学前体或其他化学品的其他结合分子。例如，当结合分子重组产生时，它们优选基本上不含培养基，并且当结合分子通过化学合成产生时，它们优选基本上不含化学前体或其他化学物质，即它们与涉及蛋白质合成的化学前体或其他化学物质分离。优选地，“基本上不含”意指结合分子通常包括纯度约50％、60％、70％、80％或90％、更通常约95％、并且优选将超过99％W/W的样品。

单克隆抗体也可以通过重组DNA方法制备，诸如美国专利No.4,816,567中所述的那些。编码单克隆抗体的DNA可以使用常规方法容易地进行分离和测序(例如，通过使用能够与编码小鼠抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。杂交瘤细胞用作这种DNA的优选来源。一旦分离，可将DNA置于表达载体中，然后将其转染到宿主细胞诸如猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、浆细胞瘤细胞或不产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞中，以在重组宿主细胞中合成单克隆抗体。也可以修饰DNA，例如，通过用人重链和轻链恒定区的编码序列取代同源小鼠序列(美国专利No.4,816,567)或共价连接免疫球蛋白的全部编码序列的或非免疫球蛋白多肽的部分编码序列。任选地，这种非免疫球蛋白多肽被抗体的恒定区取代或被抗体的一个抗原结合位点的可变区编码序列取代以形成嵌合二价抗体，其包括一个对IL-25具有特异性的抗原结合位点(包括IL-25)和另一个对不同抗原具有特异性的抗原结合位点。

体外方法也适用于制备单价抗体。消化抗体以产生其抗体片段，尤其是Fab片段，该过程可以使用本领域已知的常规技术完成。例如，可以使用木瓜蛋白酶进行消化。木瓜蛋白酶消化的示例描述于1994年12月22日公布的WO 94/29348、美国专利No.4,342,566以及Harlow和Lane，“Antibodies，A Laboratory Manual”，Cold Spring HarborPublications，New York，1988年。木瓜蛋白酶消化抗体通常产生两个相同的抗原结合片段(称为Fab片段，每个片段具有单个抗原结合位点)和残留的Fc片段。胃蛋白酶处理产生称为F(ab')2片段的片段，其具有两个抗原结合位点并且仍然能够交联抗原。

在抗体消化中产生的Fab片段还包含轻链的恒定区和重链的第一恒定区。Fab'片段与Fab片段的不同之处在于在重链结构域(包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸)的羧基末端添加了一些残基。F(ab')2片段是二价片段，其包括在铰链区通过二硫键连接的两个Fab'片段。Fab'-SH是本文中Fab'的名称，其中恒定区的半胱氨酸残基带有游离巯基基团。抗体片段最初是作为Fab'片段对(它们之间具有铰链半胱氨酸)产生的。抗体片段的其他化学偶联也是已知的。

另选地，可以利用转基因动物(例如小鼠)制备所公开的抗体，所述转基因动物在免疫后能够采用在不存在内源性免疫球蛋白产生的情况下产生完整的人抗体库。例如，已经描述了嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(J(H))基因的同合型缺失导致完全抑制内源性抗体产生。在这种种系突变小鼠中转移人种系免疫球蛋白基因阵列将导致在抗原攻击后产生人抗体(参见例如Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第90期，第2551-255页，1993年；Jakobovits等人，Nature，第362期，第255-258页，1993年；Bruggemann等人，Year in Immuno，第7期，第33页，1993年)。人抗体也可以在噬菌体展示文库中产生(Hoogenboom等人，J.Mol.Biol，第227期，第381页，1991年；Marks等人，J.Mol.Biol，第222期，第581页，1991年)。Cote等人和Boerner等人的技术也可用于制备人单克隆抗体(Cole等人，“Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy”，Alan R.Liss，第77页，1985年；Boerner等人，J.Immunol.，第147卷第1期，第86-95页，1991年)。

还提供了抗体的分离的免疫原性特异性互补位或片段。可以通过分子的化学或机械破坏从整个抗体中分离抗体的特异性免疫原性表位。通过本文教导的方法测试因此获得的纯化片段以确定它们的免疫原性和特异性。任选地，抗体的免疫反应性互补位被直接合成。免疫反应性片段定义为衍生自抗体氨基酸序列的至少约2至5个连续氨基酸的氨基酸序列。

产生包括抗体的蛋白质的一种方法是通过蛋白质化学技术将两种或更多种肽或多肽连接在一起。例如，可以使用目前可用的实验室设备，使用Fmoc(9-芴甲氧羰基)或Boc(叔丁氧羰基)化学品来化学合成肽或多肽(加利福尼亚州福斯特城的应用生物系统公司(Applied Biosystems,Inc.,Foster City,CA))。本领域技术人员可以容易地理解，例如，对应于抗体的肽或多肽可以通过标准化学反应合成。例如，可合成肽或多肽而不从其合成树脂切割，而抗体的另一片段可合成并随后从树脂切割，从而在另一片段上暴露功能性阻断的末端基团。通过肽缩合反应，这两个片段可以分别经由它们的羧基和氨基末端的肽键共价连接，形成抗体或其片段(Grant GA，1992年，Synthetic Peptides：A User Guide，W.H.Freeman and Co.，N.Y.，1992年；Bodansky M和Trost B.,Ed.，1993年，Principles ofPeptide Synthesis，Springer-Verlag Inc.，NY)。另选地，肽或多肽如上所述在体内独立合成。一旦分离，这些独立的肽或多肽可经由类似的肽缩合反应连接形成抗体或其片段。

例如，克隆或合成肽片段的酶促连接允许相对较短的肽片段连接以产生更大的肽片段、多肽或完整的蛋白质结构域(Abrahmsen L等人，Biochemistry，第30期，第4151页，1991年)。另选地，合成肽的天然化学连接可用于从较短的肽片段合成构建较大的肽或多肽。该方法由两步化学反应组成(Dawson等人，“Synthesis of Proteins by NativeChemical Ligation”，Science，第266期，第776-779页，1994年)。第一步是未保护合成肽-α-硫酯与另一个包含氨基末端Cys残基的未保护肽片段的化学选择性反应，得到硫酯连接的中间体作为初始共价产物。在不改变反应条件的情况下，该中间体进行自发的快速分子内反应，以在连接位点形成天然肽键。通过人白介素8(IL-8)的制备说明了这种天然化学连接方法在蛋白质分子的全合成中的应用(Baggiolini M等人，1992年，FEBS Lett.，第307期，第97-101页；Clark-Lewis等人，J.Biol.Chem.，第269期，第16075页，1994年；Clark-Lewis I等人，Biochemistry，第30期，第3128页，1991年；Rajarathnam K等人，Biochemistry，第33期，第6623-6630页，1994年)。

另选地，未保护的肽片段是化学连接的，其中由于化学连接而在肽片段之间形成的键是非天然(非肽)键(Schnolzer,M等人，Science，第256期，第221页，1992年)。该技术已被用于合成蛋白质结构域的类似物以及具有完整生物活性的大量相对较纯的蛋白质(deLisle Milton RC等人，Techniques in Protein Chemistry IV，Academic Press，NewYork，第257-267页，1992年)。

还公开了具有生物活性的抗体片段。多肽片段可以是通过在能够产生多肽片段的表达系统诸如腺病毒或杆状病毒表达系统中克隆编码多肽的核酸而获得的重组蛋白。例如，可以确定来自特定杂交瘤的抗体的活性结构域，所述特定杂交瘤可以引起与抗体与IL-25的相互作用相关联的生物效应。例如，可以除去发现对抗体的活性、结合特异性或亲和力无贡献的氨基酸而不损失各自的活性。例如，在各种实施方案中，从天然或修饰的非免疫球蛋白分子或免疫球蛋白分子中依次去除氨基或羧基末端氨基酸，并在许多可用测定中的一个中测定各自的活性。在另一个示例中，抗体片段包括修饰的抗体，其中在特定位置的至少一个氨基酸已经被天然存在的氨基酸取代，并且氨基末端或羧基末端氨基酸的一部分或甚至抗体的内部区域，已被多肽片段或其他部分诸如生物素取代，其可促进修饰抗体的纯化。例如，可以通过肽化学将修饰的抗体与麦芽糖结合蛋白融合，或者将编码两个多肽片段的相应核酸克隆到表达载体中，使得编码区的表达产生杂合多肽。杂合多肽可以通过使其通过直链淀粉亲和柱进行亲和纯化，并且通过用特异性蛋白酶因子Xa切割杂合多肽，可以将修饰的抗体受体与麦芽糖结合区分开(参见例“New England Biolabs Product Catalog”，1996年，第164页)。类似的纯化方法也可用于从真核细胞中分离杂合蛋白。

无论是否连接到其他序列，片段包括特定区域或特定氨基酸残基的插入、缺失、取代或其他选择的修饰，条件是与未修饰的抗体或抗体片段相比，片段的活性没有显著改变或受损。这些修饰可以提供一些附加的性质，诸如为氨基酸去除或添加二硫键、增加其生物寿命、改变其分泌特征等。在任何情况下，该片段必须具有生物活性，诸如结合活性、在结合结构域处的结合的调节等。可以通过诱变蛋白质的特定区域，然后表达和测试表达的多肽来鉴定抗体的功能或活性区域。这些方法对于本领域技术人员来说是显而易见的，并且可以包括编码抗原的核酸的位点特异性诱变(Zoller MJ等人，Nucl.Acids Res.，第10期，第6487-6500页，1982年)。

多种免疫测定形式可用于选择与特定蛋白质、变体或片段选择性结合的抗体。例如，通常使用固相ELISA免疫测定法来选择与蛋白质、蛋白质变体或其片段选择性免疫反应的抗体。参见“Harlow和Lane，‘Antibodies,A Laboratory Manual’，Cold Spring HarborPublications，New York，1988年”中对于可用于确定选择性结合的免疫测定形式和条件的描述。单克隆抗体的结合亲和力可以例如通过“Munson等人，Anal.Biochem.，第107期，第220页，1980年”的斯卡查德分析来确定。

还提供了抗体试剂盒，该抗体试剂盒包括单克隆抗体或其片段的容器和一种或多种用于检测抗IL-25抗体或其片段与IL-25分子的结合的试剂。该试剂可包括例如荧光标记、酶标记或其他标记。该试剂还可以包括用于酶促反应的第二抗体、第三抗体或试剂，其中酶促反应产生可以可视化的产物。

如全文所述，在一个方面，本文公开了分离的IL-25结合分子，该分离的IL-25结合分子包括重链可变区，所述重链可变区包括如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和/或SEQ ID NO:3中所示的一个或多个CDR。

还公开了任何前述方面的IL-25结合分子，其中CDR是SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和/或SEQ ID NO:3。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中重链可变区包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3；和/或SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2被10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸分开。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3被25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸分开。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中重链可变区包括SEQ ID NO:13。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，所述分离的IL-25结合分子还包括轻链可变区，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQID NO:6中所示的一个或多个CDR。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；和/或SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5被10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸分开。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6被25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸分开。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:14。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，所述分离的IL-25结合分子包括重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区包括SEQ ID NO:13并且轻链可变区包括SEQ ID NO:14。

在一个方面，本文公开了包括轻链可变区的分离的IL-25结合分子，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6中所示的一个或多个CDR。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；和/或SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5被10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸分开。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6被25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸分开。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:14。

在一个方面，本文公开了包括重链可变区的分离的IL-25结合分子，所述重链可变区包括如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9中所示的一个或多个CDR。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中重链可变区包括SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9；和/或SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8被10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸分开。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9被25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸分开。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中重链可变区包括SEQ ID NO:15。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，所述分离的IL-25结合分子还包括轻链可变区，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQID NO:12中所示的一个或多个CDR。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:11和SEQID NO:12；和/或SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11被10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸分开。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12被25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸分开。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:16。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，所述分离的IL-25结合分子包括重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区包括SEQ ID NO:15并且轻链可变区包括SEQ ID NO:16。

在一个方面，本文公开了分离的IL-25结合分子，所述分离的IL-25结合分子包括轻链可变区，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12中所示的一个或多个CDR。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:11和SEQID NO:12；和/或SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11被10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸分开。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12被25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸分开。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:16。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中重链可变区包括SEQ ID NO:17。

在一个方面，本文公开了任何前述方面的分离的IL-25结合分子，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:18。

在一个方面，本文公开了治疗、预防和/或抑制鼻病毒感染、气道炎症、类风湿性关节炎、骨关节炎、骨侵蚀、腹膜内脓肿和粘连、炎症性肠病、同种异体移植物排斥、牛皮癣、某些类型的癌症、血管生成、动脉粥样硬化、囊性纤维化和多发性硬化的方法，所述方法包括施用治疗量的任何前述方面的任何IL-25结合分子。

1.同源性/同一性

应当理解，本文公开的基因和蛋白质的任何已知变体和衍生物或可能出现的任何已知变体和衍生物的一种定义方法是通过在与特定已知序列的同源性方面定义变体和衍生物。例如，SEQ ID NO:13示出了IL-25重链可变区的特定序列。具体公开了本文公开的这些和其他基因和蛋白质的变体，这些变体与所述序列具有至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的同源性。本领域技术人员容易理解确定两种蛋白质或核酸诸如基因的同源性的方法。例如，可以在比对两个序列后计算同源性，使得同源性处于其最高水平。

计算同源性的另一种方法可以通过公开的算法来进行。用于比较的序列的最佳比对可以通过“Smith和Waterman，Adv.Appl.Math.，第2期，第482页，1981年”的局部同源性算法，通过“Needleman和Wunsch，J.MoL Biol.，第48期，第443页，1970年”的同源性比对算法，通过“Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，第85期，第2444页，1988年”的搜索相似性方法，通过这些算法的计算机化实现方式(威斯康星遗传学软件包(WisconsinGenetics Software Package)中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Genetics ComputerGroup,575Science Dr.,Madison,WI)，或通过检查进行。

应当理解，通常可以使用任何方法，并且在某些情况下，这些不同方法的结果可以不同，但是本领域技术人员应当理解，如果这些方法中的至少一种发现了同一性，则可以说序列具有所述的同一性，并在本文中公开。

例如，如本文所用，所述与另一序列具有特定百分比同源性的序列是指具有通过上述任何一种或多种计算方法计算的所述同源性的序列。例如，如果使用Zuker计算方法计算出第一序列与第二序列具有80％的同源性(如本文所定义)，则第一序列与第二序列具有80％的同源性，即使根据任何其他计算方法计算的第一序列与第二序列不具有80％的同源性。又如，如本文所用，如果使用Zuker计算方法与Pearson和Lipman计算方法两者计算出第一序列与第二序列具有80％的同源性(如本文所定义)，则第一序列与第二序列具有80％的同源性，即使根据Smith和Waterman计算方法、Needleman和Wunsch计算方法、Jaeger计算方法或任何其他计算方法计算的第一个序列与第二个序列不具有80％的同源性。又如，如果使用每种计算方法计算出第一序列与第二序列具有80％的同源性(如本文所定义)，则第一序列与第二序列具有80％的同源性(尽管实际上，不同的计算方法通常会得出不同的计算同源性百分比)。

2.肽

a)蛋白质变体

如本文所讨论的，本文公开的IL-25结合分子和IL-25结合CDR以及重链和轻链可变区的许多变体是已知的并且是本文中设想的。另外，对于已知的功能性菌株变体，存在IL-25结合分子和IL-25结合CDR以及重链和轻链可变区的衍生物，其也在所公开的方法和组合物中起作用。蛋白质变体和衍生物是本领域技术人员熟知的，并且可以涉及氨基酸序列修饰。例如，氨基酸序列修饰通常属于取代变体、插入变体或缺失变体这三类中的一种或多种。如本文所用，“插入”是指氨基酸或核苷酸序列中的变化，与亲本(通常是天然存在的)分子相比，分别导致添加一个或多个氨基酸或核苷酸残基。插入包括氨基和/或羧基末端融合以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。插入通常是比氨基或羧基末端融合体的那些更小的插入，例如，大约一至四个残基。免疫原性融合蛋白衍生物，诸如示例中描述的那些，是通过融合足够大的多肽以通过体外交联或通过用编码融合体的DNA转化的重组细胞培养物赋予靶序列免疫原性来制备的。缺失的特征在于从蛋白质序列中去除一个或多个氨基酸残基。通常，在蛋白质分子内的任何一个位点缺失不超过约2至6个残基。这些变体通常通过编码蛋白质的DNA中核苷酸的位点特异性诱变来制备，从而产生编码变体的DNA，然后在重组细胞培养物中表达DNA。在具有已知序列的DNA中的预定位点处进行取代突变的技术是众所周知的，例如M13引物诱变和PCR诱变。氨基酸取代通常是单个残基，但可以同时发生在多个不同的位置；插入通常将为约1至10个氨基酸残基的顺序；并且缺失将在约1至30个残基的范围内。缺失或插入优选在相邻对中进行，即缺失2个残基或插入2个残基。取代、缺失、插入或其任何组合可以组合以得到最终构型。突变不得将序列置于阅读框之外，并且优选不会形成可产生二级mRNA结构的互补区。取代变体是其中已去除至少一个残基并在其位置插入不同残基的变体。这些取代通常根据下表2进行，并称为保守取代。

表1：氨基酸缩写

表2：氨基酸取代

原始残基示例性保守取代，其他是本领域已知的。

通过选择比表2中的取代更不保守的取代来进行功能或免疫同一性的显著变化，即选择在维持(a)取代区域中多肽骨架的结构(例如片状或螺旋构象)、(b)靶位点处分子的电荷或疏水性或(c)侧链的大部分等方面效果更显著不同的残基。保守氨基酸取代包括其中氨基酸残基被具有相似结构或化学性质的氨基酸残基取代的氨基酸取代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸)、具有β-支化侧链的氨基酸(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳香侧链的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。

通常预期会在蛋白质性质中产生最大变化的取代是其中(a)亲水残基(例如丝氨酰或苏氨酰)被(或由)疏水残基(例如亮氨酰、异亮氨酰、苯丙氨酰、缬氨酰或丙氨酰)取代；(b)半胱氨酸或脯氨酸被(或由)任何其他残基取代；(c)具有带正电荷的侧链的残基(例如赖氨酰、精氨酰或组氨酰)被(或由)带负电荷的残基(例如谷氨酰或天冬氨酰)取代；或者(d)具有庞大侧链的残基(例如苯丙氨酸)被(或由)不具有侧链的残基(例如甘氨酸)取代，在这种情况下，(e)通过增加硫酸化和/或糖基化位点的数量的取代。

用生物学上和/或化学上相似的一个氨基酸残基取代另一个氨基酸残基是本领域技术人员已知的保守取代。例如，保守取代将一个疏水残基取代为另一个疏水残基，或将一个极性残基取代为另一个极性残基。取代包括组合，诸如例如Gly、Ala；Val、Ile、Leu；Asp、Glu；Asn、Gln；Ser、Thr；Lys、Arg；以及Phe、Tyr。每种明确公开的序列的这种保守取代的变体包括在本文提供的镶嵌多肽中。

可以采用取代或缺失诱变来插入N-糖基化(Asn-X-Thr/Ser)或O-糖基化(Ser或Thr)的位点。也可能需要缺失半胱氨酸或其他不稳定残基。潜在蛋白水解位点(例如Arg)的缺失或取代例如通过缺失一个碱性残基或用谷氨酰胺酰或组氨酰残基取代一个碱性残基来完成。

某些翻译后衍生化是重组宿主细胞对表达多肽的作用的结果。谷氨酰胺酰和天冬酰胺酰残基经常在翻译后脱酰胺成相应的谷氨酰和天冬酰残基。另选地，这些残基在温和的酸性条件下脱酰胺。其他翻译后修饰包括脯氨酸和赖氨酸的羟基化、丝氨酰或苏氨酰残基的羟基基团磷酸化、赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的o-氨基基团的甲基化(T.E.Creighton，“Proteins:Structure and Molecular Properties”，W.H.Freeman&Co.，San Francisco，第79-86页，1983年)、N-末端胺的乙酰化，以及在某些情况下，C-末端羧基的酰胺化。

应当理解，本文公开的蛋白质的变体和衍生物的一种方法是通过在与特定已知序列的同源性/同一性方面定义变体和衍生物。例如，SEQ ID NO:13、14、15和16。具体公开了本文公开的这些和其他蛋白质的变体，这些变体与所述序列具有至少70％或75％或80％或85％或90％或95％的同源性。本领域技术人员容易理解确定两种蛋白质的同源性的方法。例如，可以在比对两个序列后计算同源性，使得同源性处于其最高水平。

计算同源性的另一种方法可以通过公开的算法来进行。用于比较的序列的最佳比对可以通过“Smith和Waterman，Adv.Appl.Math.，第2期，第482页，1981年”的局部同源性算法，通过“Needleman和Wunsch，J.MoL Biol.，第48期，第443页，1970年”的同源性比对算法，通过“Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，第85期，第2444页，1988年”的搜索相似性方法，通过这些算法的计算机化实现方式(威斯康星遗传学软件包(WisconsinGenetics Software Package)中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Genetics ComputerGroup,575Science Dr.,Madison,WI)，或通过检查进行。

通过例如“Zuker,M.，Science，第244期，第48-52页，1989年”、“Jaeger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第86期，第7706-7710页，1989年”、“Jaeger等人，MethodsEnzymol，第183期，第281-306页，1989年”中公开的算法可以获得相同类型的核酸同源性。

应当理解，保守突变和同源性的描述可以以任何组合组合在一起，诸如与特定序列具有至少70％同源性的实施方案，其中变体是保守突变。

由于本说明书讨论了各种蛋白质和蛋白质序列，因此应当理解，还公开了可编码那些蛋白质序列的核酸。这将包括与特定蛋白质序列相关的所有简并序列，即具有编码一种特定蛋白质序列的序列的所有核酸以及编码所公开的蛋白质序列的变体和衍生物的所有核酸，包括简并核酸。因此，虽然本文中可能没有写出每个特定的核酸序列，但应当理解，实际上通过公开的蛋白质序列在本文公开和描述了每个序列。另外，例如，用公开的SEQ IDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18的保守衍生物诸如异亮氨酸(I)取代缬氨酸(V)。应当理解，对于该突变，还公开了编码SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18的该特定衍生物的所有核酸序列。

应当理解，有许多氨基酸和肽类似物可以掺入所公开的组合物中。例如，存在许多具有与表1和表2中所述的氨基酸不同的功能取代基的D氨基酸或氨基酸。公开了天然存在的肽的相反立体异构体，以及肽类似物的立体异构体。通过用所选择的氨基酸加入tRNA分子并利用例如琥珀密码子以位点特异性方式将类似物氨基酸插入肽链的工程化基因构建体，可以容易地将这些氨基酸掺入多肽链中。

可以产生类似肽但不经由天然肽键连接的分子。例如，氨基酸或氨基酸类似物的键可包括CH₂NH-、-CH₂S-、-CH₂-CH₂-、-CH＝CH-(顺式和反式)、-COCH₂-、-CH(OH)CH₂-和-CHH₂SO-(这些键和其他键可以在以下参考文献中看到：Spatola,A.F.，“Chemistry andBiochemistry of Amino Acids,Peptides,and Proteins”，B.Weinstein编辑，MarcelDekker，New York，第267页，1983年；Spatola,A.F.，Vega Data，1983年3月，第1卷第3期，“Peptide Backbone Modifications(general review)”；Morley，Trends Pharm Sci，1980年，第463-468页；Hudson,D.等人，Int J Pept Prot Res，第14期，第177-185页，1979年(-CH₂NH-、CH₂CH₂-)；Spatola等人，Life Sci，第38期，第1243-1249页，1986年(-CH H₂-S)；Hann，J.Chem.Soc Perkin Trans.，第I期，第307-314页，1982年(-CH-CH-，顺式和反式)；Almquist等人，J.Med.Chem.，第23期，第1392-1398页，1980年(-COCH₂-)；Jennings-White等人，Tetrahedron Lett，第23期，第2533页，1982年(-COCH₂-)；Szelke等人，EuropeanAppln，EP 45665CA，1982年，第97期，第39405页，1982年(-CH(OH)CH₂-)；Holladay等人，Tetrahedron.Lett，第24期，第4401-4404页，1983年(-C(OH)CH₂-)；以及Hruby，Life Sci，第31期，第189-199页，1982年(-CH₂-S-)；其中每一篇都以引用方式并入本文。特别优选的非肽键是-CH₂NH-。应当理解，肽类似物可在键原子之间具有多于一个原子，诸如b-丙氨酸、g-氨基丁酸等。

氨基酸类似物和类似物和肽类似物通常具有增强的或期望的性质，诸如更经济的生产、更好的化学稳定性、增强的药理学性质(半衰期、吸收、效力、功效等)、改变的特异性(例如，广谱的生物活性)、降低的抗原性等。

D-氨基酸可用于产生更稳定的肽，因为D氨基酸不被肽酶等识别。用相同类型的D-氨基酸(例如，用D-赖氨酸代替L-赖氨酸)系统取代共有序列的一个或多个氨基酸可用于产生更稳定的肽。半胱氨酸残基可用于将两个或更多个肽环化或连接在一起。这有利于将肽限制为特定构象。

在一个方面，所公开的IL-25结合分子可以进一步包括标记。如本文所用，标记可包括荧光染料、结合对的成员诸如生物素/链霉亲和素、金属(例如，金)、放射性取代基或可与可检测的分子特异性相互作用的表位标签，诸如通过产生有色底物或荧光。适于可检测地标记蛋白质的物质包括荧光染料(本文中也称为荧色物和荧光团)和与比色底物反应的酶(例如，辣根过氧化物酶)。在本发明的实践中通常优选使用荧光染料，因为它们可以以非常低的量检测。

荧光团是发光的化合物或分子。通常，荧光团以一个波长吸收电磁能并以第二波长发射电磁能。代表性荧光团包括但不限于1,5IAEDANS；1,8-ANS；4-甲基伞形酮；5-羧基-2,7-二氯荧光素；5-羧基荧光素(5-FAM)；5-羧基萘酚荧光素；5-羧基四甲基罗丹明(5-TAMRA)；5-羟色胺(5-HAT)；5-ROX(羧基-X-罗丹明)；6-羧基罗丹明6G；6-CR 6G；6-JOE；7-氨基-4-甲基香豆素；7-氨基放线菌素D(7-AAD)；7-羟基-4-I甲基香豆素；9-氨基-6-氯-2-甲氧基吖啶(ACMA)；ABQ；酸性品红；吖啶橙；吖啶红；吖啶黄；锥虫黄；锥虫黄孚尔根SITSA；水母发光蛋白(光蛋白)；AFP—自体荧光蛋白质—(量子生物技术)参见sgGFP、sgBFP；AlexaFluor 350^TM；Alexa Fluor 430^TM；Alexa Fluor 488^TM；Alexa Fluor 532^TM；Alexa Fluor546^TM；Alexa Fluor 568^TM；Alexa Fluor 594^TM；Alexa Fluor 633^TM；Alexa Fluor 647^TM；Alexa Fluor 660^TM；Alexa Fluor 680^TM；茜素络合指示剂；茜素红；别藻蓝蛋白(APC)；AMC、AMCA-S；氨甲基香豆素(AMCA)；AMCA-X；氨基放线菌素D；氨基香豆素；苯胺蓝；硬脂酸蒽；APC-Cy7；APTRA-BTC；APTS；阿斯屈拉崇亮红4G；阿斯屈拉崇橙R；阿斯屈拉崇红6B；阿斯屈拉崇黄7GLL；阿的平；ATTO-TAG^TM CBQCA；ATTO-TAG^TM FQ；金胺；Aurophosphine G；Aurophosphine；BAO 9(Bisaminophenyloxadiazole)；BCECF(高pH)；BCECF(低pH)；硫酸黄连素；β-内酰胺酶；BFP蓝移GFP(Y66H)；蓝色荧光蛋白；BFP/GFP FRET；Bimane；Bisbenzemide；双苯酰亚胺(Hoechst)；双BTC；布兰科福尔FFG；布兰科福尔SV；BOBO^TM-1；BOBO^TM-3；氟硼荧492/515；氟硼荧493/503；氟硼荧500/510；氟硼荧505/515；氟硼荧530/550；氟硼荧542/563；氟硼荧558/568；氟硼荧564/570；氟硼荧576/589；氟硼荧581/591；氟硼荧630/650-X；氟硼荧650/665-X；氟硼荧665/676；氟硼荧Fl；氟硼荧FL ATP；氟硼荧Fl-神经酰胺；氟硼荧R6G SE；氟硼荧TMR；氟硼荧TMR-X缀合物；氟硼荧TMR-X，SE；氟硼荧TR；氟硼荧TRATP；氟硼荧TR-X SE；BO-PRO^TM-1；BO-PRO^TM-3；亮磺基黄素FF(BrilliantSulphoflavin FF)；BTC；BTC-5N；钙黄绿素；丐黄绿素蓝；钙红-；钙绿；钙绿-1Ca²⁺染料；钙绿-2Ca²⁺；钙绿-5N Ca²⁺；钙绿-C18 Ca²⁺；钙橙；钙荧光白；羧基-X-罗丹明(5-ROX)；级联蓝^TM；级联黄；儿茶酚胺；CCF2(GeneBlazer)；CFDA；CFP(青色荧光蛋白)；CFP/YFP FRET；叶绿素；色霉素A；色霉素A；CL-NERF；CMFDA；腔肠素；腔肠素cp；腔肠素f；腔肠素fcp；腔肠素h；腔肠素hcp；腔肠素ip；腔肠素n；腔肠素O；香豆素鬼笔环肽；C-藻蓝蛋白；CPM I甲基香豆素；CTC；CTC甲臜；Cy2^TM；Cy3.1 8；Cy3.5^TM；Cy3^TM；Cy5.1 8；Cy5.5^TM；Cy5^TM；Cy7^TM；青色GFP；环腺苷酸氟传感器(FiCRhR)；Dabcyl；丹酰；丹酰胺；丹酰尸胺；丹酰氯；丹酰DHPE；丹酰氟；DAPI；Dapoxyl；Dapoxyl 2；Dapoxyl 3'DCFDA；DCFH(二氯双氢荧光素二乙酸酯)；DDAO；DHR(二氢罗丹明123)；二-4-ANEPPS；二-8-ANEPPS(非定比)；DiA(4-Di 16-ASP)；二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH)；DiD-亲脂示踪剂；DiD(DilC18(5))；DIDS；二氢罗丹明123(DHR)；Dil(DilC18(3))；I二硝基苯酚；DiO(DiOC18(3))；DiR；DiR(DilC18(7))；DM-NERF(高pH)；DNP；多巴胺；红色荧光蛋白；DTAF；DY-630-NHS；DY-635-NHS；EBFP；ECFP；EGFP；ELF 97；伊红；赤藓红；赤藓红ITC；溴化乙锭；溴乙啡锭二聚体(EthD-1)；Euchrysin；EukoLight；氯化铕(111)；EYFP；速蓝；FDA；孚尔根(副品红)；FIF(甲醛(Formaldehyd)诱导的荧光)；FITC；Flazo Orange；Fluo-3；Fluo-4；荧光素(FITC)；荧光素二乙酸酯；荧光祖母绿；荧光金(羟芪巴脒)；Fluor-Ruby；FluorX；FM 1-43^TM；FM 4-46；Fura Red^TM(高pH)；Fura Red^TM/Fluo-3；Fura-2；Fura-2/BCECF；Genacryl亮红B；Genacryl亮黄10GF；Genacryl粉红3G；Genacryl黄5GF；GeneBlazer；(CCF2)；GFP(S65T)；GFP红移(rsGFP)；非UV激发的GFP野生型(wtGFP)；UV激发的GFP野生型(wtGFP)；GFPuv；Gloxalic Acid；粒状蓝；血卟啉；Hoechst 33258；Hoechst 33342；Hoechst34580；HPTS；羟基香豆素；羟芪巴脒(荧光金)；羟色胺；Indo-1，高钙；Indo-1低钙；吲哚二碳菁(DiD)；吲哚三碳菁(DiR)；Intrawhite Cf；JC-1；JO JO-1；JO-PRO-1；LaserPro；Laurodan；LDS 751(DNA)；LDS 751(RNA)；Leucophor PAF；Leucophor SF；Leucophor WS；丽丝胺罗丹明；丽丝胺罗丹明B；钙黄绿素/溴乙啡锭二聚体；LOLO-1；LO-PRO-1；荧光黄；溶酶体蓝色探针；溶酶体蓝白探针；溶酶体绿色探针；溶酶体红色探针；溶酶体黄色探针；LysoSensor蓝；LysoSensor绿；LysoSensor黄/蓝；Mag绿；萘红(根皮红B)；Mag-Fura红；Mag-Fura-2；Mag-Fura-5；Mag-lndo-1；镁绿；镁橙；孔雀绿；海蓝；I Maxilon Brilliant Flavin10GFF；Maxilon Brilliant Flavin 8GFF；部花青；甲氧基香豆素；线粒体绿色荧光探针FM；线粒体橙色荧光探针；线粒体红色荧光探针；光辉霉素；单溴二胺；单溴二胺(mBBr-GSH)；单氯二胺；MPS(甲基绿派洛宁二苯乙烯)；NBD；NBD胺；尼罗红；硝基苯并噁二唑；去甲肾上腺素；核固红；i核黄；Nylosan Brilliant lavin E8G；俄勒冈绿^TM；俄勒冈绿^TM 488；俄勒冈绿^TM 500；俄勒冈绿^TM 514；太平洋蓝；副品红(孚尔根)；PBFI；PE-Cy5；PE-Cy7；PerCP；PerCP-Cy5.5；PE-TexasRed(红613)；根皮红B(萘红)；Phorwite AR；Phorwite BKL；Phorwite Rev；Phorwite RPA；磷化氢3R；光致抗蚀剂；藻红蛋白B[PE]；藻红蛋白R[PE]；PKH26(Sigma)；PKH67；PMIA；Pontochrome蓝黑；POPO-1；POPO-3；PO-PRO-1；PO-I PRO-3；樱草灵；普施安黄；Propidium lodid(Pl)；PyMPO；芘；派洛宁；派洛宁B；Pyrozal BrilliantFlavin 7GF；QSY 7；芥奎吖因；试卤灵；RH 414；Rhod-2；罗丹明；罗丹明110；罗丹明123；罗丹明5GLD；罗丹明6G；罗丹明B；罗丹明B 200；碱性玫瑰精；罗丹明BB；罗丹明BG；罗丹明绿；罗丹明毒伞素；罗丹明：鬼笔环肽；罗丹明红；罗丹明WT；玫瑰红；R-藻蓝蛋白；R-藻红蛋白(PE)；rsGFP；S65A；S65C；S65L；S65T；宝石蓝GFP；SBFI；血清素；Sevron亮红2B；Sevron亮红4G；Sevron I亮红B；Sevron橙；Sevron黄L；sgBFP^TM(超级发光BFP)；sgGFP^TM(超级发光GFP)；SITS(樱草灵；二苯乙烯异硫代磺酸)；SNAFL钙黄绿素；SNAFL-1；SNAFL-2；SNARF钙黄绿素；SNARF1；钠绿；SpectrumAqua；SpectrumGreen；SpectrumOrange；Spectrum Red；SPQ(6-甲氧基-N-(3磺丙基)喹啉)；二苯乙烯；磺酰罗丹明B和C；超磺酰罗丹明；SYTO 11；SYTO 12；SYTO13；SYTO 14；SYTO 15；SYTO 16；SYTO 17；SYTO 18；SYTO 20；SYTO 21；SYTO 22；SYTO 23；SYTO 24；SYTO 25；SYTO 40；SYTO 41；SYTO 42；SYTO 43；SYTO 44；SYTO 45；SYTO 59；SYTO60；SYTO 61；SYTO 62；SYTO 63；SYTO 64；SYTO 80；SYTO 81；SYTO 82；SYTO 83；SYTO 84；SYTO 85；SYTOX蓝；SYTOX绿；SYTOX橙；四环素；四甲基罗丹明(TRITC)；德克萨斯红^TM；德克萨斯红^TM缀合物；硫代二碳花菁(DiSC3)；噻嗪红R；噻唑橙；硫磺素5；硫磺素S；硫磺素TON；Thiolyte；硫唑橙；Tinopol CBS(钙荧光白)；TIER；TO-PRO-1；TO-PRO-3；TO-PRO-5；TOTO-1；TOTO-3；TriColor(PE-Cy5)；TRITC四甲基罗丹明异硫代氰酸酯；True蓝；Tru红；Ultralite；荧光素钠B；Uvitex SFC；wt GFP；WW 781；X-罗丹明；XRITC；二甲酚橙；Y66F；Y66H；Y66W；黄GFP；YFP；YO-PRO-1；YO-PRO 3；YOYO-1；YOYO-3；Sybr绿；噻唑橙(内螯合染料)；半导体纳米粒子，诸如量子点；或封闭荧光团(可用光或其他电磁能源活化)，或它们的组合。

改性剂单元诸如放射性核素可通过卤化并入或直接连接到本文所述的任何化合物上。可用于该实施方案的放射性核素的示例包括但不限于氚、碘-125、碘-131、碘-123、碘-124、砹-210、碳-11、碳-14、氮-13、氟-18。在另一个方面，放射性核素可以连接到连接基团或通过螯合基团结合，然后螯合基团直接或通过连接基团连接到化合物上。可用于该方面的放射性核素的示例包括但不限于Tc-99m、Re-186、Ga-68、Re-188、Y-90、Sm-153、Bi-212、Cu-67、Cu-64和Cu-62。诸如这些的放射性标记技术通常用于放射性药物工业中。

放射性标记的化合物可用作诊断神经疾病(例如，神经变性疾病)或精神病症或跟踪哺乳动物(例如人)中这种疾病或病症的进展或治疗的显像剂。本文所述的放射性标记的化合物可以方便地与成像技术结合使用，诸如正电子发射计算机断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)。

标记可以是直接标记或间接标记。在直接标记中，检测抗体(目标分子的抗体)或检测分子(可以通过目标分子的抗体结合的分子)包括标记。对标记的检测表明存在检测抗体或检测分子，其继而分别表明存在目标分子或目标分子的抗体。在间接标记中，使另外的分子或部分与免疫复合物接触或在免疫复合物的位点处产生。例如，信号产生分子或部分诸如酶可以与检测抗体或检测分子连接或相关联。然后，信号产生分子可以在免疫复合物的位点处产生可检测的信号。例如，当提供有合适的底物时，酶可以在免疫复合物的位点处产生可见的或可检测的产物。ELISA使用这种类型的间接标签。

作为间接标记的另一个示例，可以与目标分子或目标分子的抗体(一级抗体)结合的另外的分子(可以称为结合剂)诸如与一级抗体结合的第二抗体可以与免疫复合物接触。另外的分子可以具有标记或信号产生分子或部分。另外的分子可以是抗体，因此可以称为第二抗体。将第二抗体与一级抗体结合可以与第一(或一级)抗体和目标分子形成所谓的“三明治”。免疫复合物可以在有效条件下与标记的第二抗体接触，并持续足以允许形成第二免疫复合物的一段时间。然后通常可以清洗第二免疫复合物以去除任何非特异性结合的标记的第二抗体，并且可以检测第二免疫复合物中的剩余标记。另外的分子也可以是或包括可以彼此结合的一对分子或部分中的一个，诸如生物素/亲和素对。在该模式中，检测抗体或检测分子应包括该对中的其他成员。

其他间接标记模式包括通过两步法检测一级免疫复合物。例如，如上所述，对目标分子或相应抗体具有结合亲和力的分子(可以称为第一结合剂)诸如抗体可以用于形成第二免疫复合物。清洗后，第二免疫复合物可以与对第一结合剂具有结合亲和力的另一种分子(可以称为第二结合剂)接触，同样是在有效条件下并持续足以允许形成免疫复合物的一段时间(从而形成第三免疫复合物)。第二结合剂可以与可检测的标记或信号产生分子或部分连接，允许检测由此形成的第三免疫复合物。该系统可以使信号放大。

3.药物载体/药物产品递送

如上所述，组合物还可以在药学上可接受的载体(本文中也称为药学上可接受的赋形剂)中体内施用。所谓“药学上可接受的”是指在生物学上或其他方面不具有惰性的材料，即，该材料可以与核酸或载体一起施用于受试者，而不引起任何不期望的生物效应或不与包含其的药物组合物中的任何其他成分以有害的方式相互作用。自然地选择载体以使活性成分的任何降解最小化，并且使对受试者的任何不良副作用最小化，如本领域的技术人员所熟知的。因此，在一个方面，本文公开了包括本文公开的任何IL-25结合分子的药物组合物。

组合物可以口服、非肠道(例如，静脉内)、通过肌内注射、通过腹膜内注射、透皮、体外、局部等施用，包括局部鼻内施用或通过吸入施用。如本文所用，“局部鼻内施用”意指通过两个鼻孔中的一个或两个将组合物递送到鼻和鼻腔通道内，并且可以包括用喷涂机制或液滴机制进行递送，或通过核酸或载体的雾化。通过吸入剂施用组合物可以是通过用喷雾或液滴机制经由递送而经鼻或经口的。也可以经由插管法直接递送到呼吸系统的任何区域(例如肺)。所需组合物的确切的量因受试者而异，取决于受试者的种类、年龄、体重和一般状况、所治疗的过敏性障碍的严重程度，所用的特定核酸或载体、其施用模式等。因此，不可能为每种组合物指定确切的量。但是，在给定本文的教导的情况下，本领域的普通技术人员可以仅使用常规实验来确定适当的量。

如果使用的话，非肠道施用组合物通常以注射为特征。注射剂可以以常规形式制备，可以是液体溶液或悬浮液，适于在注射前在液体中溶解或悬浮的固体形式、或者是乳液。最近改进的非肠道施用方法涉及使用缓慢释放或持续释放系统使得保持恒定的剂量。参见例如美国专利No.3,610,795，该专利以引用方式并入本文。

材料可以是溶液、悬浮液(例如，掺入微粒、脂质体或细胞中)。这些可以经由抗体、受体或受体配体靶向特定细胞类型。以下参考文献是使用该技术将特定蛋白质靶向肿瘤组织的示例(Senter等人，Bioconjugate Chem，第2期，第447-451页，1991年；Bagshawe,K.D.，Br.J.Cancer，第60期，第275-281页，1989年；Bagshawe等人，Br.J.Cancer，第58期，第700-703页，1988年；Senter等人，Bioconjugate Chem.，第4期，第3-9页，1993年；Battelli等人，Cancer Immunol.Immunother.，第35期，第421-425页，1992年；Pietersz和McKenzie，Immunolog.Reviews，第129期，第57-80页，1992年；以及Roffler等人，Biochem.Pharmacol，第42期，第2062-2065页，1991年)。载体诸如“隐形”和其他抗体缀合脂质体(包括靶向结肠癌的脂质介导的药物)，受体介导的DNA通过细胞特异性配体靶向，淋巴细胞定向肿瘤靶向和体内小鼠神经胶质瘤细胞的高度特异性治疗性逆转录病毒靶向。以下参考文献是使用该技术将特定蛋白质靶向肿瘤组织的示例(Hughes等人，Cancer Research，第49期，第6214-6220页，1989年；以及Litzinger和Huang，Biochimica et Biophysica Acta，第1104期，第179-187页，1992年。通常，受体涉及组成型或配体诱导的内吞作用途径。这些受体聚集在披网格蛋白小窝中，经由披网格蛋白小泡进入细胞，通过其中受体被分选的酸化内体，并且然后循环到细胞表面在细胞内储存，或在溶酶体中降解。内化途径具有多种功能，诸如营养摄取、去除活化蛋白、清除大分子、机会性进入病毒和毒素、解离和降解配体，以及调节受体水平。许多受体遵循一种以上的细胞内途径，这取决于细胞类型、受体浓度、配体类型、配体化合价和配体浓度。综述了受体介导的内吞作用的分子和细胞机制(Brown和Greene，DNA andCell Biology，第10卷第6期，第399-409页，1991年)。

a)药学上可接受的载体

包括抗体的组合物可与药学上可接受的载体在治疗学上结合使用。

合适的载体及其制剂描述于Remington:The Science and Practice ofPharmacy(第19版)，编辑A.R.Gennaro，Mack Publishing Company,Easton,PA，1995年。通常，在制剂中使用适当量的药学上可接受的盐以使制剂等渗。药学上可接受的载体的示例包括但不限于盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。溶液的pH优选为约5至约8，更优选约7至约7.5。其他载体包括缓释制剂，诸如包含抗体的半透性固体疏水性聚合物基质，所述基质为成形制品形式，例如膜、脂质体或微粒。对于本领域的技术人员将显而易见的是，根据例如给药途径和所施用组合物的浓度，某些载体可能是更优选的。

药物载体是本领域的技术人员已知的。这些药物载体最典型地将是用于向人类施用药物的标准载体，包括溶液如生理pH下的无菌水、盐水以及缓冲溶液等。组合物可以肌内或皮下施用。其他化合物将根据本领域的技术人员所使用的标准方法施用。

除了所选择的分子之外，药物组合物还可以包括载体、增稠剂、稀释剂、缓冲剂、防腐剂、表面活性剂等。药物组合物还可以包括一种或多种活性成分，诸如抗微生物剂、消炎药、麻醉剂等。

药物组合物可以多种方式施用，取决于是否需要局部或全身治疗，并且取决于治疗区域。可以局部地(包括经眼地、经阴道地、经直肠地、鼻内给药)、口服、通过吸入或非肠道地施用，所述非肠道施用为例如通过静脉滴注、皮下、腹膜内或肌内注射。所公开的抗体可以静脉内、腹膜内、肌内、皮下、腔内或透皮施用。

非肠道施用的制剂包括无菌水性溶液或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂的示例是丙二醇、聚乙二醇、植物油诸如橄榄油，以及可注射的有机酯诸如油酸乙酯。水性载体包括水、醇/水性溶液、乳液或包括盐水和缓冲介质的悬浮液。非肠道载体包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏液或固定油。静脉内媒介物包括流体和营养补充剂，电解质补充剂(诸如基于林格氏葡萄糖的那些)等等。还可以存在防腐剂和其他添加剂，诸如例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。

用于局部施用的制剂可以包括膏剂、洗剂、霜剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷剂、液体和粉剂。常规的药物载体、水性、粉末或油性基质、增稠剂等可能是必需或期望的。

口服施用的组合物包括粉末或颗粒、悬浮液或水或非水性介质中的溶液、胶囊、小袋或片剂。可能需要增稠剂、调味剂、稀释剂、乳化剂、分散助剂或粘合剂。

一些组合物可以潜在地作为药学上可接受的酸或碱加成盐施用，所述酸或碱加成盐是通过与无机酸(诸如盐酸、氢溴酸、高氯酸、硝酸、硫氰酸、硫酸和磷酸)和有机酸(诸如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸和富马酸)反应，或通过与无机碱(诸如氢氧化钠、氢氧化铵、氢氧化钾)和有机碱(诸如单烷基胺、二烷基胺、三烷基胺和芳基胺以及取代的乙醇胺)反应形成的。

4.治疗用途和方法

用于施用组合物的有效剂量和时间表可凭经验确定，并且进行此类测定在本领域技术范围内。组合物施用的剂量范围大到足以产生障碍症状受到影响的期望效应。剂量不应大到引起不良副作用，例如不希望的交叉反应、过敏反应等。一般来讲，剂量将随患者的年龄、状况、性别和疾病程度、施用途径或是否包括在该方案中的其他药物而变化，并且可由本领域的技术人员确定。在任何禁忌症的情况下，个体医师可以调整剂量。剂量可以变化，并且可在一天或几天内每天给予一次或多次剂量施用。对于给定类别的药物产品，可以在文献中找到关于适当剂量的指导。例如，可以在关于抗体的治疗用途的文献中找到关于选择抗体的合适剂量的指导，例如，Handbook of Monoclonal Antibodies，Ferrone等人编辑，Noges Publications,Park Ridge,N.J.，1985年，第22章，第303-357页；Smith等人，Antibodies in Human Diagnosis and Therapy，Haber等人编辑，Raven Press,New York，1977年，第365-389页。根据上述因素，单独使用的抗体的典型日剂量可以为每天约1μg/kg至最多100mg/kg体重或更多。

在一个方面，应当理解并在本文中设想所公开的IL-25结合分子可用于治疗、预防或抑制炎症性病症或疾病，诸如例如，鼻病毒感染、气道炎症、类风湿性关节炎(“RA”)、骨关节炎、骨侵蚀、腹膜内脓肿和粘连、炎症性肠病(“IBD”)、同种异体移植物排斥、牛皮癣、某些类型的癌症、血管生成、动脉粥样硬化和多发性硬化(“MS”)。因此，在一个方面，本文公开了治疗、预防或抑制鼻病毒感染、气道炎症、类风湿性关节炎(“RA”)、骨关节炎、骨侵蚀、腹膜内脓肿和粘连、炎症性肠病(“IBD”)、同种异体移植物排斥、牛皮癣、某些类型的癌症、血管生成、动脉粥样硬化和多发性硬化(“MS”)的方法，该方法包括施用本文公开的任何IL-25结合分子。例如，本文公开了治疗、预防或抑制鼻病毒感染、气道炎症、哮喘、囊性纤维化、类风湿性关节炎(“RA”)、骨关节炎、骨侵蚀、腹膜内脓肿和粘连、炎症性肠病(“IBD”)、同种异体移植物排斥、牛皮癣、某些类型的癌症、血管生成、动脉粥样硬化和多发性硬化(“MS”)的方法，该方法包括向受试者施用包括重链可变区的一种、两种、三种或更多种IL-25结合分子，所述重链可变区包括如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:8和SEQ ID NO:9中所示的一个或多个互补决定区(CDR)。例如，本文公开了治疗、抑制或预防鼻病毒感染、气道炎症、哮喘、囊性纤维化、类风湿性关节炎(“RA”)、骨关节炎、骨侵蚀、腹膜内脓肿和粘连、炎症性肠病(“IBD”)、同种异体移植物排斥、牛皮癣、某些类型的癌症、血管生成、动脉粥样硬化和多发性硬化(“MS”)的方法，该方法包括向受试者施用包括重链可变区的一个或多个IL-25结合分子，所述重链可变区包括如以下各组合中所示的CDR：SEQID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3；SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:7和SEQ IDNO:9；SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9；和/或SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9。在一个方面，所公开的治疗、预防或抑制方法可以包括向受试者施用包括重链可变区的IL-25结合分子，其中重链可变区包括SEQ ID NO:13或SEQ ID NO 27。

还应当理解并在本文中设想所公开的治疗、预防或抑制鼻病毒感染、气道炎症、哮喘、囊性纤维化、类风湿性关节炎(“RA”)、骨关节炎、骨侵蚀、腹膜内脓肿和粘连、炎症性肠病(“IBD”)、同种异体移植物排斥、牛皮癣、某些类型的癌症、血管生成、动脉粥样硬化和多发性硬化(“MS”)的方法可以包括向患有所述病症或疾病的受试者施用IL-25结合分子，所述IL-25结合分子包括轻链可变区而不是重链可变区或包括除重链可变区之外的轻链可变区。在一个方面，本文公开了治疗、预防或抑制鼻病毒感染、气道炎症、哮喘、囊性纤维化、类风湿性关节炎(“RA”)、骨关节炎、骨侵蚀、腹膜内脓肿和粘连、炎症性肠病(“IBD”)、同种异体移植物排斥、牛皮癣、某些类型的癌症、血管生成、动脉粥样硬化和多发性硬化(“MS”)的方法，该方法在受试者中包括向受试者施用包括轻链可变区的一种、两种、三种或更多种IL-25结合分子，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:10、SEQ ID NO:11和/或SEQ ID NO:12中所示的一个或多个CDR。例如，本文公开了治疗、预防或抑制方法，该方法包括向受试者施用包括轻链可变区的一种或多种IL-25结合分子，所述轻链可变区包括如以下各组合中所示的CDR：SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:12；和/或SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示。本文还公开了方法，其中IL-25结合分子包括轻链可变区，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:14或SEQ ID NO 16。

在一个方面，应当理解并在本文中设想用于治疗、预防和/或抑制方法的所公开的IL-25结合分子可包括重链可变区和轻链可变区。还应当理解，用于所述治疗、预防和/或抑制方法的所述IL-25结合分子可包括本文公开的重链可变区CDR中的任何一个、两个或三个结合轻链可变区CDR中的任何一个、两个或三个。因此，用于治疗、预防或抑制鼻病毒感染、气道炎症、哮喘、囊性纤维化、类风湿性关节炎(“RA”)、骨关节炎、骨侵蚀、腹膜内脓肿和粘连、炎症性肠病(“IBD”)、同种异体移植物排斥、牛皮癣、某些类型的癌症、血管生成、动脉粥样硬化和多发性硬化(“MS”)的公开方法的IL-25结合分子可包括选自包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和/或SEQ ID NO:9的组的重链可变区CDR中的一个、两个或三个，以及选自包括SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQID NO:10、SEQ ID NO:11和/或SEQ ID NO:12的组的轻链可变区CDR中的一个、两个或三个。例如，本文公开了治疗患有鼻病毒感染、气道炎症、哮喘、囊性纤维化、类风湿性关节炎(“RA”)、骨关节炎、骨侵蚀、腹膜内脓肿和粘连、炎症性肠病(“IBD”)、同种异体移植物排斥、牛皮癣、某些类型的癌症、血管生成、动脉粥样硬化和多发性硬化(“MS”)的受试者的方法，该方法包括向受试者施用包括重链可变区和轻链可变区的IL-25结合分子，其中重链可变区包括SEQ ID NO:13、SEQ ID NO 15和/或SEQ ID NO 17，轻链可变区包括SEQ ID NO:14、SEQ ID NO 16和/或SEQ ID NO 18。

如本文所用，术语“治疗”是指降低受试者中疾病或病症(诸如例如炎症性病症或癌症)的一种或多种作用的方法。因此，在所公开的方法中，治疗可以指已造成的感染或感染症状的严重程度降低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。例如，与对照组相比，如果受试者的病症或癌症的一种或多种症状的严重程度降低10％，则治疗炎症性病症或癌症的方法被认为是治疗。因此，与天然或控制水平相比，降低程度可以是介于10％与100％之间的10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或任何百分比的降低程度。应当理解，治疗不一定是指治愈或完全消除病症或疾病或病症或疾病的症状。应当理解并在本文中设想，本文所讨论的治疗可以是预防性或治疗性的。因此，一方面公开了包括向受试者施用IL-25结合分子的治疗或降低受试者中炎症性疾病或病症的严重程度的方法。还公开了包括向受试者施用IL-25结合分子的预防或减少受试者中炎症性疾病或病症发作的方法。

如本文所用，术语“预防感染”是指在受试者开始表现出感染的一种或多种症状之前或几乎在受试者开始表现出感染的一种或多种症状的同一时间发生的动作，例如，施用治疗剂(例如，本文公开的组合物)，该动作抑制或延迟一种或多种感染症状的发作或恶化，或延迟一种或多种感染症状的复发。如本文所用，提及减少、降低或抑制包括相对于对照水平的10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高的变化。例如，当与没有接收IL-25结合分子来减少炎症性病症或疾病的对照受试者相比时，如果炎症性病症或疾病的发作、恶化或复发或受试者的炎症性病症或疾病的症状减少约10％，则所公开的方法被认为是预防。

应当理解并在本文中设想本文公开的治疗、预防和抑制方法设想了本文公开的IL-25结合分子的治疗性和预防性应用。

C.实施例

提出以下示例以向本领域的普通技术人员提供如何制备和评价本文要求保护的复合物、组合物、制品、设备和/或方法的完整公开内容和描述，并且预期这些示例仅仅是示例性的，并非旨在限制本公开。已经努力确保关于数字(例如，量、温度等)的准确性，但是应当考虑一定的误差和偏差。除非另有说明，否则份数是重量份，温度是℃或为环境温度，压力是大气压或接近大气压。

1.实施例1

以2周的间隔向过表达小鼠Ig-α、小鼠Ig-β和人白介素6的转基因小鼠的腹膜内注射重组人IL-25(R&D系统)。用血清ELISA测量显著的免疫应答后，收集淋巴结、脾脏和骨髓细胞，用磁珠减去B细胞表面表达的IgM同型抗体，并使用MoFlo荧光-活化细胞分选仪对剩余细胞的结合IL-25的能力进行分类(图1)。

将IL-25结合阳性的细胞分选到96孔板中，进行单细胞RT-PCR以扩增可变区，并将可变区克隆到包含重链人IgG4恒定区或轻链人IgK恒定区的表达载体中。将得到的重链和轻链克隆对转染到HEK293细胞中，并用蛋白A树脂纯化得到的抗体蛋白质(图2)，并测定其中和HT-29细胞中重组人IL-25活性的能力(图3)。还测试了人源化形式的ABM109(命名为ABM109.2)在HT-29测定中的效力(图4)。

使用Biacore T-100(通用电气医疗集团(GE Healthcare))，使用表面等离子体共振(SPR)测量抗体对IL-25的亲和力。(图5、图9)将抗体固定在CM5芯片上的流通池2-4中的羧甲基化葡聚糖上(流通池1用作参考)。将HBS-P缓冲液中的rhIL25或rmIL15以递增的浓度(2.5、5.0、10、20和40nM)在芯片上运行，每种浓度注射120秒。在第5次注射后，使HBS-P缓冲液通过每个流通池运行，并使IL-25解离20分钟。用pH值为1.5的10mM甘氨酸-HCL暴露30秒使表面再生。减去参考细胞，对每种抗体进行单循环动力学分析。

纯化ABM125，并在过敏性哮喘的鼻病毒感染模型中将其施用于小鼠。用低LPS鸡蛋卵清蛋白(2mg明矾中的50μg OVA)致敏小鼠。然后连续三天用50μg卵清蛋白(OVA)鼻内(i.n.)攻击小鼠。在最终的OVA攻击后，直接向小鼠腹膜内(i.p.)施用ABM125或同型对照(IgG)。mAb给药4小时后，用2.5×10⁶TCID₅₀RV1B感染小鼠。在注射后第3天评估炎症反应。然后在支气管肺泡灌洗液中评估细胞聚集，并在感染后第3天，通过相对于盐水/PBS对照，用SYBR Green化学品以Log 2(倍数变化)表达的qPCR评估IL-5的肺mRNA表达。

随后从存储在RNA中的小鼠顶端肺叶中提取总RNA(Qiagen)，然后进行cDNA合成(

RT试剂盒，Qiagen)。RV-1B基因组RNA引物和探针序列：有义5'-GTGAAGAGCCSCRTGTGCT-3'(SEQ ID NO:19)50nm、反义5'-GCTSCAGGGTTAAGGTTAGCC-3'(SEQID NO:20)300nm和探针-5'-FAM-TGAGTCCTCCGGCCCCTGAATG-TAMRA-3'(SEQ ID NO:21)100nm。使用ABI 7500Taqman(ABI)分析PCR反应。使用通过扩增质粒DNA产生的标准曲线定量RNA，并表示为每μl cDNA反应的拷贝数。

D.序列

SEQ ID NO:1

SYWIE

SEQ ID NO:2

QILPGIGSTNYNEKFKG

SEQ ID NO:3

GYGNYGDY

SEQ ID NO:4

RASESVDSYGNSFM

SEQ ID NO:5

RASNLES

SEQ ID NO:6

QQSNEDPLT

SEQ ID NO:7

TSGMGVG

SEQ ID NO:8

HIWWDDVKRYNPALKS

SEQ ID NO:9

TLPHFFDY

SEQ ID NO:10

SASSSVSYMY

SEQ ID NO:11

RTSNLAS

SEQ ID NO:12

KQYHSYPPTWT

SEQ ID NO:13

EVKVVESGADLMKPGASVKISCKATGYTFSSYWIEWVKQRPGHGLEWIGQILPGIGSTNYNEKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGYGNYGDYWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO:14

DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQSNEDPLTFGAGTKLELKR

SEQ ID NO:15

QVTLKVSGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLNTSGMGVGWIRQPSGKGLEWLAHIWWDDVKRYNPALKSRLTISKDTSGSQVFLKIASVDTADTATYYCARTLPHFFDYWGQGTTLTVSS

SEQ ID NO:16

DIQMTQSPAIMSASPGEKVTISCSASSSVSYMYWYQQKSGSSPKPWIYRTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCKQYHSYPPTWTFGGGTKLEIKR

SEQ ID NO:17

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSSYWIEWVRQAPGQGLEWIGQILPGIGSTNYNEKFKGRVTITADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGYGNYGDYWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO:18

DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVDSYGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEAQDTANYYCQQSNEDPLTFGAGTKLELKR

SEQ ID NO:19

GTGAAGAGCCSCRTGTGCT

SEQ ID NO:20

GCTSCAGGGTTAAGGTTAGCC

SEQ ID NO:21

TGAGTCCTCCGGCCCCTGAATG

Claims (5)

1.一种分离的IL-25抗体，所述分离的IL-25抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括如SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8和SEQ ID NO: 9所示的三个CDR；所述轻链可变区包括如SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11和SEQ ID NO: 12所示的三个CDR；

其中，

SEQ ID NO: 7是TSGMGVG；

SEQ ID NO: 8是HIWWDDVKRYNPALKS；

SEQ ID NO: 9是TLPHFFDY；

SEQ ID NO: 10是SASSSVSYMY；

SEQ ID NO: 11是RTSNLAS；

SEQ ID NO: 12是KQYHSYPPTWT。

2.根据权利要求1所述的分离的IL-25抗体，其中所述重链可变区包括SEQ ID NO: 15：

QVTLKVSGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLNTSGMGVGWIRQPSGKGLEWLAHIWWDDVKRYNPALKSRLTISKDTSGSQVFLKIASVDTADTATYYCARTLPHFFDYWGQGTTLTVSS。

3. 根据权利要求1所述的分离的IL-25抗体，其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO:16：

DIQMTQSPAIMSASPGEKVTISCSASSSVSYMYWYQQKSGSSPKPWIYRTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCKQYHSYPPTWTFGGGTKLEIKR。

4. 根据权利要求1所述的分离的IL-25抗体，其中所述重链可变区包括SEQ ID NO:15：

QVTLKVSGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLNTSGMGVGWIRQPSGKGLEWLAHIWWDDVKRYNPALKSRLTISKDTSGSQVFLKIASVDTADTATYYCARTLPHFFDYWGQGTTLTVSS；

并且所述轻链可变区包括SEQ ID NO: 16：

DIQMTQSPAIMSASPGEKVTISCSASSSVSYMYWYQQKSGSSPKPWIYRTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCKQYHSYPPTWTFGGGTKLEIKR。

5.权利要求1至4中任一项所述的IL-25抗体在制备治疗鼻病毒感染、气道炎症、类风湿性关节炎、骨关节炎、骨侵蚀、腹膜内脓肿和粘连、炎症性肠病、同种异体移植物排斥、牛皮癣、血管生成、动脉粥样硬化、囊性纤维化和多发性硬化的药物中的应用。

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