CN109563121B - 5’s-lna核苷酸和寡核苷酸 - Google Patents

5’s-lna核苷酸和寡核苷酸 Download PDF

Info

Publication number
CN109563121B
CN109563121B CN201780046484.5A CN201780046484A CN109563121B CN 109563121 B CN109563121 B CN 109563121B CN 201780046484 A CN201780046484 A CN 201780046484A CN 109563121 B CN109563121 B CN 109563121B
Authority
CN
China
Prior art keywords
methyl
compound
formula
hept
dioxabicyclo
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201780046484.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109563121A (zh
Inventor
K·布莱谢尔
J·杜施梅尔
G·萨哈
J·A·沙科赫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Roche Innovation Center Copenhagen AS
Original Assignee
Roche Innovation Center Copenhagen AS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Roche Innovation Center Copenhagen AS filed Critical Roche Innovation Center Copenhagen AS
Priority to CN202211703363.2A priority Critical patent/CN116178468A/zh
Publication of CN109563121A publication Critical patent/CN109563121A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109563121B publication Critical patent/CN109563121B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C07H19/207—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids the phosphoric or polyphosphoric acids being esterified by a further hydroxylic compound, e.g. flavine adenine dinucleotide or nicotinamide-adenine dinucleotide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H5/00—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium
    • C07H5/08—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to sulfur, selenium or tellurium
    • C07H5/10—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to sulfur, selenium or tellurium to sulfur
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及式(I)的化合物
Figure DDA0001958085670000011
其中R2和R4结合在一起形成基团如‑CH2O‑。式(I)的化合物可以用于制备作为反义药物的5’S‑LNA寡核苷酸。

Description

5’S-LNA核苷酸和寡核苷酸
本发明涉及在糖环的5’-位上带有硫原子的LNA亚磷酰胺(phosphoramidite) 结构单元、用于制备这种结构单元的方法和用于制备包含这种结构单元的寡核 苷酸的方法。
本发明由此特别地涉及式(I)的化合物
Figure BDA0001958085660000011
其中
R1是磷酸酯保护基；
R2和R4一起形成-CH2O-、-CH2NH-、-CH2S-、-CH2N(ORp)-、-CHCH3O-、 -C(CH3)2O-、-CH2C(＝CH2)-、-CHCH3C(＝CH2)-、-CHCH3S-、-CH2NRp-、 -CH2CH2O-、-CH2CH2CH2O-、-CH2OCH2-、-CH(CH2OCH3)O-、 -CH(CH2CH3)O-或-CH2OCH2O-；
R3是二烷基氨基；
R5是硫羟基保护基；
每个Rp是烷基；且
Nu是任选包含被保护的伯氨基基团的核碱基(nucleobase)。
使用寡脱氧核苷酸作为治疗剂，其中充分理解的Watson-Crick杂交原理被 用于靶向互补RNA链，自1970年代后期开始以来取得了显著进展(P.C. Zamecnik,M.L.Stephenson,P Natl Acad Sci USA 1978,75,280-284；S.T. Crooke,Antisense drugtechnology:principles,strategies,and applications,第2 版,Boca Raton,FL:CRCPress,2008)。
随后在合成寡核苷酸中引入了几种类型的化学修饰，以例如延长其半衰期、 改善药代动力学、增强RNaseH活性、降低毒性或增强错配区分。
最成功的修饰之一是引入硫代磷酸酯键(phosphorothioate)，其中一个非 桥连磷酸酯基氧原子被硫原子替代(F.Eckstein,Antisense and Nucleic Acid DrugDevelopment 2009,10,117-121)。这种硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸显示出增加的蛋 白质结合以及明显更高的核溶解降解稳定性，因此血浆、组织和细胞中的半衰 期显著高于未修饰的磷酸二酯类似物。这使得研发了第一代寡核苷酸治疗剂， 并且打开了例如锁定核酸(Locked Nucleic Acids，LNA)这样的后代修饰的大门。
然而，用硫代磷酸酯替代磷酸二酯键在磷原子上产生手性中心。因此，迄 今为止所有批准的寡核苷酸治疗剂都是大量非对映异构化合物的混合物，它们 具有潜在不同(和可能相反)的生理化学性质。
为了降低这种寡脱氧核苷酸的非对映异构体复杂性，硫代磷酸酯内的硫原 子理论上可以从非桥接位置之一转移到核糖的桥接5'-位置。这种修饰赋予围绕 磷对称的取代模式且因此除去了手性中心，从而降低了分子的非对映异构体复 杂性。
已经制备了含有这种2',5'-双脱氧-5-巯基结构单元的寡核苷酸(参见R.Cosstick,J.Gaynor,Curr.Org.Chem.2008,12,291-308和其中的参考文献)并检 查了在不同的背景下如例如特定地点的裂解(例如K.Jahn-Hofmann,J.W. Engels,Helv.Chim.Acta2004,87,2812-2828)或化学生物学中的机械研究(例如 S.R.Das,J.A.Piccirilli,NatChem Biol 2005,1,45-52)。然而，它们在治疗环境 中的应用，特别是旨在降低硫代磷酸酯寡核苷酸的非对映异构体复杂性的目的， 受到的关注较少。此外，这种2',5'-双脱氧-5'-巯基修饰与锁定核酸(LNA)糖部分 的组合是完全前所未有的。
我们已经惊奇地发现了一种方法，它首次获得在糖环的5'-位置带有硫原子 的LNA亚磷酰胺结构单元，并将它们应用于合成修饰的寡核苷酸。因此，本发 明提供了进入这种5'-巯基修饰的LNA的方法。当包含在寡核苷酸中时，它降 低了所得分子的非对映异构体复杂性。
在本说明书中，单独或组合的术语“烷基”表示具有1-8个碳原子的直链 或支链烷基，特别是具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，且更特别地，具有 1-3个碳原子的直链或支链烷基。直链和支链C1-C8烷基基团的实例是甲基、乙 基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、异构戊基、异构己基、异构庚基 和异构辛基，特别是甲基、乙基、丙基、丁基和戊基，且更特别是甲基、乙基、 丙基、异丙基、异丁基、叔丁基和异戊基。烷基的具体实例是甲基、乙基、丙 基和异丙基。
单独或组合的术语“烷氧基”或“烷基氧基”表示式烷基-O-的基团，其中 术语“烷基”具有先前给出的含义，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、 正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。特别的“烷氧基”是甲氧基和乙 氧基。.
单独或组合的术语“卤素”或“卤代”表示氟、氯、溴或碘，特别是氯、 溴或碘。术语“卤代”与另一个基团组合时表示用至少一个卤素取代所述基团， 特别是取代有一至五个卤素，特别是一至四个卤素，即一个、两个、三个或四 个卤素。
单独或组合的术语“芳基”表示苯基或萘基基团。
单独或组合的术语“羟基”和“羟”表示-OH基团。
单独或组合的术语“硫羟基”和“硫羟”表示-SH基团。
单独或组合的术语“氨基”表示伯氨基基团(-NH2)、仲氨基基团(-NH-)或叔 氨基基团(-N-)。
单独或组合的术语“氧基”表示-O-基团。
单独或组合的术语“保护基”表示通过为在随后化学反应中得到化学选择 性而化学修饰官能团被引入分子的基团。
“磷酸酯保护基”是磷酸酯基团的保护基。磷酸酯保护基的实例是2-氰基 乙基和甲基。磷酸酯保护基的具体实例是2-氰基乙基。
“羟基保护基”是羟基基团的保护基。羟基保护基的实例是乙酰基(Ac)、 苯甲酰基(Bz)、苄基(Bn)、β-甲氧基乙氧基甲基醚(MEM)、二甲氧基三苯甲基(或 双-(4-甲氧基苯基)苯基甲基)(DMT)、三甲氧基三苯甲基(或三-(4-甲氧基苯基)苯 基甲基)(TMT)、甲氧基甲基醚(MOM)、甲氧基三苯甲基[(4-甲氧基苯基)二苯基 甲基(MMT)、对-甲氧基苄基醚(PMB)、甲硫基甲基醚、新戊酰基(Piv)、四氢吡 喃基(THP)、四氢呋喃(THF)、三苯甲基或三苯基甲基(Tr)、甲硅烷基醚(例如三 甲基甲硅烷基(TMS)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、三-异-丙基甲硅烷基氧 基甲基(TOM)和三异丙基甲硅烷基(TIPS)醚)、甲基醚和乙氧基乙基醚(EE)。羟 基保护基的具体实例是DMT和TMT，特别是DMT。
“硫羟基保护基”是硫羟基基团的保护基。硫羟基保护基的实例是“羟基 保护基”的那些。
术语“离去基团”是指在杂原子键裂解中能够带电子对脱离的分子碎片。 离去基团的实例是Cl、Br、I、Ots、OTf或OMs。
术语“亲核体”是指能够在反应期间贡献电子对给另一种类以形成化学键 的化学种类。
术语“核碱基”是指核苷酸的碱基部分并且覆盖天然存在和非天然存在的 变体。因此，“核碱基”不仅涵盖已知的嘌呤和嘧啶杂环，而且涵盖其杂环类似 物和互变体。核碱基的实例包括但不限于腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、 尿嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假异胞嘧啶、5-溴尿嘧 啶、5-丙炔基尿嘧啶、6-氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、肌苷、二氨基嘌呤和2-氯-6- 氨基嘌呤。
如本文所用的术语“核苷酸”是指包含糖部分、碱基部分和共价连接的基 团(连接基)的糖苷，所述共价连接的基团例如磷酸酯或硫代磷酸核苷酸间键合连 接基，并且覆盖天然存在的核苷酸如DNA或RNA，和包含修饰的糖和/或碱基 部分的非天然存在的核苷酸。
术语“固体支持物”是指用于固相合成的支持物，特别是寡聚化合物。固 相支持物的实例包含交联聚苯乙烯(Primer Support 5G或NittoPhaseHL)、可控 孔度玻璃(CPG)；草酰基可控的孔度玻璃、包含二氧化硅的颗粒例如多孔玻璃珠 和硅胶，例如通过三氯-[3-(4-氯甲基)苯基]丙基硅烷和多孔玻璃珠
Figure BDA0001958085660000041
Figure BDA0001958085660000042
反应形成。可控孔度玻璃是特别有用的固相支持物。
术语“寡核苷酸合成活化剂”是指能够活化未保护的核苷与新到来的核苷 亚磷酰胺单体反应的化合物。这类寡核苷酸合成活化剂的实例可以在X.Wei, Tetrahedron 2013,69,3615-3637中找到。寡核苷酸合成活化剂的实例为基于唑 类(azole)的活化剂，如1H-四唑、5-硝基苯基-1H-四唑(NPT)、5-乙硫基-1H-四 唑(ETT)、5-苄硫基-1H-四唑(BTT)、5-甲硫基-1H-四唑(MTT)、5-巯基-四唑(MCT) 和4,5-二氰基咪唑(DCI)或酸式盐，如盐酸吡啶鎓、三氟甲磺酸咪唑鎓、三氟甲 磺酸苯并咪唑鎓、三氟甲磺酸5-硝基苯并咪唑鎓或弱酸，例如2,4-二硝基苯甲 酸或2,4-二硝基苯酚。5-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-四唑是特别有用的寡核苷酸 合成活化剂。
术语“封端”或“封端步骤”是指在寡核苷酸偶联期间未反应的羟基或硫 羟基基团转化成被保护的羟基或硫羟基基团。这种封端由此阻碍了所述羟基或 硫羟基基团在下一步偶联步骤中的反应。封端步骤例如通过与乙酐(Ac2O)或苯 氧乙酐(Pac-酸酐)反应便利地进行，例如与活化剂组合，如吡啶和N-甲基-咪唑， 例如在THF或乙腈中。得到的被保护的羟基或硫羟基基团是例如乙酸酯或硫代 乙酸酯基团。
术语“糖修饰的核苷”是指核苷，其中糖不是DNA或RNA。
本发明由此特别地涉及：
式(I)的化合物，其中R1是氰基乙基或甲基；
式(I)的化合物，其中R2和R4一起形成-CH2O-；
式(I)的化合物，其中R3是二异丙基氨基；
式(I)的化合物，其中R5是三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4,4’-二甲氧基三 苯甲基或4,4’,4”-三甲氧基三苯甲基；
式(I)的化合物，其中R5是4,4’-二甲氧基三苯甲基；
式(I)的化合物，其中每个Rp独立地是甲基、乙基或丙基；
式(I)的化合物，其中核碱基是腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、5-甲基-胞嘧啶、 胸腺嘧啶或尿嘧啶；
式(I)的化合物，其中Nu是(A)、(B)、(C)或(D)
Figure BDA0001958085660000051
其中R6是氢或所连接的氨基基团的保护基；
式(I)的化合物，其中氨基基团的保护基是苯甲酰基、二甲基甲脒、乙酰 基或异丁酰基；和
式(I)的化合物，其中Nu是(A1)、(B1)或(C1)
Figure BDA0001958085660000061
本发明还涉及选自如下的式(I)的化合物：
N-{9-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-({[双(丙-2-基)氨基](2-氰 基乙氧基)磷烷基(phosphanyl)}氧基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-9H-嘌呤-6- 基}苯甲酰胺；
3-[({[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-3-(5-甲基-2,4-二氧代 -1,2,3,4-四氢嘧啶-1-基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基]氧基}[双(丙-2-基)氨基]磷 烷基)氧基]丙腈；
N'-{9-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-({[双(丙-2-基)氨基](2- 氰基乙氧基)磷烷基}氧基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌 呤-2-基}-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺(methanimidamide)；和
N-{1-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-({[双(丙-2-基)氨基](2-氰 基乙氧基)磷烷基}氧基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢 嘧啶-4-基}苯甲酰胺。
本发明还特别地涉及选自如下的化合物：
N-(9-{1-[(苯甲酰基硫烷基)甲基]-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基}-9H-嘌呤 -6-基)苯甲酰胺；
N-{9-[7-羟基-1-(硫烷基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲 酰胺；
N-{9-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环 [2.2.1]庚-3-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲酰胺；
1-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1] 庚-3-基]-5-甲基-1,2,3,4-四氢嘧啶-2,4-二酮；
N'-(9-{1-[(苯甲酰基硫烷基)甲基]-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基}-6-氧代 -6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基)-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺；
N'-{9-[7-羟基-1-(硫烷基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-6-氧代-6,9-二氢 -1H-嘌呤-2-基}-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺；
N'-{9-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环 [2.2.1]庚-3-基]-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基}-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺；
N-(1-{1-[(苯甲酰基硫烷基)甲基]-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基}-5-甲基 -2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基)苯甲酰胺；
N-{1-[7-羟基-1-(硫烷基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-2-氧代-1,2- 二氢嘧啶-4-基}苯甲酰胺；和
N-{1-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环 [2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基}苯甲酰胺。
式(I)化合物的合成可以例如根据下列方案进行。除非另有指定，否则R1至 R9和Nu如上述所定义的含义。
方案1
Figure BDA0001958085660000071
从5'-保护的核苷1(例如5'-DMT)以及碱基保护的LNA结构单元(例如Nu＝ 受保护的A、G或C)开始，相应的LNA5'/3'二醇2通过酸促进脱保护获得。使 用例如硫代苯甲酸作为亲核体、通过Mitsunobu反应将硫引入3中的5'位置。 随后水解得到的硫酯，得到游离硫醇4，然后用例如DMT基团保护，得到5。 最后，预备用于固相寡核苷酸合成的期望的亚磷酰胺结构单元(I)通过使用适合 的亚磷酰胺与作为酸性活化剂的四唑衍生物将3'-羟基基团亚磷酰化 (phosphitylation)而得到。
方案2
Figure BDA0001958085660000081
通过在例如吡啶中的DMAP存在下、用例如甲磺酰氯处理，将LNA 5'/3' 二醇1(例如Nu＝T)转化为相应的5'-甲磺酸酯2。然后该中间体与受保护的硫代 乙酸酯(例如DMT-保护的硫代乙酸酯，其通过例如DMT氯化物与硫代乙酸的 反应获得)在碱和例如甲醇钠作为亲核体的存在下反应，得到3。然后将得到的 产物通过在酸性四唑活化剂存在下用亚磷酰胺使3'-羟基基团亚磷酰化，转化为 期望的亚磷酰胺结构单元(I)。
本发明还涉及：用于制备式(I)化合物的方法，包含使式(II)的化合物
Figure BDA0001958085660000082
在P(R3)2OR1和寡核苷酸合成活化剂存在下反应，其中R1至R5和Nu如上述所 定义；
本发明的方法，其中如上述所定义的式(II)化合物通过使式(III)化合物
Figure BDA0001958085660000083
在R5X1和碱存在下反应得到，其中R2、R4、R5和Nu如上述所定义，且其中 X1是离去基团；
本发明的方法，其中X1是Cl、Br、I、Ots、OTf或OMs；
本发明的方法，其中如上述所定义的式(III)化合物通过水解式(IV)化合物得 到
Figure BDA0001958085660000091
其中
R7是烷基、芳基、芳基烷基、取代的芳基或取代的芳基烷基，其中取代的 芳基和取代的芳基烷基是在芳基上被1-3个取代基取代的芳基和芳基烷基，所 述取代基独立地选自烷基、烷氧基和卤素；且
其中R2、R4和Nu如上述所定义；
本发明的方法，其中式(IV)化合物的水解在亲核体存在下进行，例如NaOH、 KOH、NaOMe、KOMe、甲胺或NH3，特别是NaOH；
本发明的方法，其中取代的芳基和取代的芳基烷基是在芳基上被1-3个取 代基取代的芳基和芳基烷基，所述取代基独立地选自甲基、甲氧基、氯、溴和 碘；
本发明的方法，其中R7是甲基、乙基、丙基、异丙基、苄基、苯基、取代 的苄基或取代的苯基，其中取代的苯基和取代的苄基是在苯基上被1-3个取代 基取代的苯基和苄基，所述取代基独立地选自甲基、甲氧基、氯、溴和碘；
本发明的方法，其中R7是苯基；
本发明的方法，其中如上述所定义的式(IV)化合物通过使式(V)化合物
Figure BDA0001958085660000092
在R7COSH、膦和脱水剂存在下反应得到，其中R2、R4、R7和Nu如上述所定 义；
本发明的方法，其中式(V)化合物通过除去式(VI)化合物的羟基保护基R5得到
Figure BDA0001958085660000101
其中R5是羟基保护基，且其中R2、R4和Nu如上述所定义；
本发明的方法，其中如上述所定义的式(II)化合物通过使式(VII)化合物
Figure BDA0001958085660000102
在碱、亲核体和式(VIII)化合物存在下反应得到，
Figure BDA0001958085660000103
其中
R8是离去基团；
R9是烷基；且
R2、R4、R5和Nu如上述所定义；
本发明的方法，其中R9是甲基；
本发明的方法，其中如上述所定义的式(VII)化合物通过使如上述所定义的 式(V)化合物在R8X2和非亲核碱存在下反应来获得，其中X2是离去基团，且 R8是能够与式(V)化合物的5’羟基氧原子一起形成离去基团的基团；
本发明的方法，其中X2是Cl、Br、I、Ots、OTf或OMs；
本发明的方法，其中如上述所定义的式(VIII)化合物通过使R5X3在 R9C(O)SH存在下反应获得，其中R5和R9如上述所定义，且X3是离去基团；
本发明的方法，其中X3是Cl、Br、I、Ots、OTf或OMs；
本发明的方法，其中寡核苷酸合成活化剂是唑类化合物(an azole)；
本发明的方法，其中寡核苷酸合成活化剂是1H-四唑、5-硝基苯基-1H-四唑(NPT)、5-乙硫基-1H-四唑(ETT)、5-苄硫基-1H-四唑(BTT)、5-甲硫基-1H-四唑 (MTT)、5-巯基-四唑(MCT)或4,5-二氰基咪唑(DCI)；
本发明的方法，其中用于得到如上述所定义的式(II)化合物的亲核体是 NaOH、KOH、NaOMe、KOMe、甲胺或NH3；
本发明的方法，其中用于得到如上述所定义的式(II)化合物的亲核体是 NaOMe；
本发明的方法，其中脱水剂是偶氮二甲酸二乙酯或偶氮二甲酸二异丙酯；
本发明的方法，其中脱水剂是偶氮二甲酸二乙酯；
本发明的方法，其中所述膦是三苯膦或三甲膦；
本发明的方法，其中所述膦是三苯膦；
本发明的方法，其中除去如上述所定义的式(VI)化合物的羟基保护基R5通 过使式(VI)化合物在酸存在下反应来进行；
本发明的方法，其中所述酸是全氯乙酸、乙酸、氯乙酸、二氯乙酸或三氟 乙酸；
本发明的方法，其中所述酸是全氯乙酸；
式(II)的化合物，如上述所定义；
式(III)的化合物，如上述所定义；和
式(IV)的化合物，如上述所定义。
本发明还涉及本发明化合物在制备寡核苷酸中的用途。
本发明还涉及寡核苷酸，其包含式(IX)的片段
Figure BDA0001958085660000111
其中R2、R4和Nu如上述所定义。
本发明还涉及用于制备寡核苷酸的方法，所述寡核苷酸包含如上述所定义 的式(IX)的片段，该方法包括下列步骤：
(a)提供固体支持物，其包含：
羟基基团；
包含羟基基团的核苷酸；或
包含羟基基团的寡核苷酸；
(b)使本发明的化合物、核苷酸、锁定的核酸核苷酸、2’-糖修饰的核苷酸、 3’S-DNA或3’S-LNA与所述固体支持物的羟基基团偶联；
(c)氧化或硫氧化(thiooxydizing)得自(b)的产物；
(d)任选地将得自步骤(c)的产物的未反应的羟基基团封端；
(e)任选地从得自步骤(c)或(d)的产物中除去羟基保护基或硫羟基保护基；
(f)任选地重复步骤(b)至(e)；
(g)任选地从得自步骤(c)至(f)任一个的产物中除去任意其余的保护基；且
(h)任选地从固体支持物上裂解寡核苷酸。
本发明特别地涉及用于制备寡核苷酸的方法，所述寡核苷酸包含本发明式 (IX)的片段，该方法包括偶联步骤(b)中的本发明的至少一种化合物，且特别是 式(I)的化合物。
现在通过下列具有非限制性特征的实施例示例本发明。
实施例
缩写:
AcOH＝乙酸，CAS RN＝化学文摘登记号，DMAP＝4-二甲基氨基吡啶，DME＝ 二甲氧基乙烷，DMF＝N,N-二甲基甲酰胺，DIPEA＝N,N-二异丙基乙胺，dppf＝1,1 双(二苯基膦基)二茂铁，EI＝电子轰击，ESI＝电喷雾电离，h＝小时，HATU＝1-[双 (二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓-3-氧化物六氟磷酸盐， HPLC＝高效液相色谱法，ISP＝正离子喷雾(模式)，ISN＝负离子喷雾(模式)，min＝ 分钟，LAH＝氢化铝锂，LiHMDS＝双(三甲基甲硅烷基)氨基锂，MPLC＝中效液 相色谱法，MS＝质谱，PG＝保护基，Pd-C＝披钯活性炭，PdCl2(dppf)-CH2Cl2＝1,1'- 双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯化物二氯甲烷复合物，RT＝室温，S-PHOS＝2- 二环己基膦基-2',6'-二甲氧基联苯，TFA＝三氟乙酸，THF＝四氢呋喃，TMEDA＝ N,N,N',N'-四甲基乙二胺，HBTU＝O-苯并三唑-N,N,N’,N’-四甲基-脲鎓-六氟-磷 酸盐，DMEDA＝N,N’-二甲基乙二胺，ACN＝乙腈，TBAI＝碘化四丁基铵，DME＝ 二甲氧基乙烷，DEAD＝偶氮二甲酸二乙酯，DMTrCl＝4,4'-二甲氧基三苯甲基氯。
如果没有另外的指定，则在氩气气氛中制备所有实施例和中间体。
实施例1
N-{9-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-({[双(丙-2-基)氨基](2-氰 基乙氧基)磷基}氧基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲酰胺
Figure BDA0001958085660000131
在氩气气氛中、在室温将5-乙基巯基-1H-四唑(1.3g,9.97mmol,0.25M在 38.4mL干CAN中的溶液CAS RN 89797-68-2)的溶液加入到搅拌的 N-{9-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环 [2.2.1]庚-3-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲酰胺(3.5g,4.99mmol)在干DCM(120mL)中的 溶液中，然后添加磷亚胺二酸2-氰基乙基四异丙酯(2-cyanoethyl tetraisopropyl phosphorodiamodite)(3.17mL,9.98mmol,CAS RN102691-36-1)。将该反应混合 物在室温搅拌4h。然后用DCM(300mL)稀释该反应混合物，倾入饱和NaHCO3溶液(100mL)。分离出有机层，用DCM(70mL x 2)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，减压蒸发。通过combiflash(10-20％ACN的DCM溶液) 纯化得到的粗化合物，得到(2.7g)不纯化合物。采用相同方案，再进行另一个1g 批次，得到0.6g不纯化合物。采用相同方案，再进行一个2.5g批次，得到1g(纯) 化合物和1.5g不纯化合物。将得自不同批次的不纯化合物混合，再纯化，得到 标题产物(3.0g)，与纯化合物(1g)混合，得到标题化合物(4.0g,44％)，为白色固 体。MS:(ESI):m/z＝901.6[M+H]+。
实施例1.1
N-{9-[7-羟基-1-(羟基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲酰 胺
Figure BDA0001958085660000132
在25℃向Cl3CCOOH(2.98g,18.23mmol,CAS RN 76-03-9)在DCM (150mL)中的溶液中加入N-[9-(1-{[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基]甲基}-7-羟基 -2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基)-9H-嘌呤-6-基]苯甲酰胺(10g,14.58mmol)。然后 将该反应混合物在25℃搅拌3h。减压除去挥发性物质，通过combiflash纯化 得到的粗产物(10％MeOH的DCM溶液)，得到标题产物(2)(5g,89％)，为白色 固体。MS:(ESI):m/z＝383.8[M+H]+。
实施例1.2
N-(9-{1-[(苯甲酰基硫烷基)甲基]-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基}-9H-嘌呤 -6-基)苯甲酰胺
Figure BDA0001958085660000141
向冰冷却的PPh3(10.26g,39.13mmol CAS RN 603-35-0)在无水THF (150.0mL)中的溶液中加入DEAD(6.14mL,39.13mmol,CAS RN 1972-28-7)，将 该反应混合物在0℃搅拌30min。将PhCOSH(4.62mL,39.13mmol,CAS RN 98-91-9)滴加到该反应混合物中，将其在0℃再搅拌30min。在0℃将N-{9-[7- 羟基-1-(羟基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲酰胺(5.0g, 13.04mmol)加入到搅拌的反应混合物中2h。然后将该反应混合物在室温搅拌2 h。用水(200mL)稀释该反应混合物，用乙酸乙酯(120mL x 3)萃取。用NaHCO3 (100mL)洗涤合并的有机部分，用Na2SO4干燥，过滤，减压蒸发，得到标题产 物(25g,粗)，为黄色粘性油状物。MS:(ESI):m/z＝504.3[M+H]+。
实施例1.3
N-{9-[7-羟基-1-(硫烷基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲 酰胺
Figure BDA0001958085660000151
使氩气鼓泡通过NaOH(0.5M,238mL)以及THF-MeOH的溶液(6:4, 250mL)30min。在氩气气氛中将N-(9-{1-[(苯甲酰基硫烷基)甲基]-7-羟基-2,5-二 氧杂双环[2.2.1]庚-3-基}-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(20g,粗)溶于氩气吹扫的 THF-MeOH溶液(6:4,250mL)，在0℃至-5℃冷却。向该溶液中加入NaOH溶 液(0.5M,238mL,119.16mmol)，将该反应混合物在0℃至-5℃搅拌30min。然 后在0℃加入柠檬酸溶液(30.04g,142.98mmol)。将饱和NaHCO3溶液(300mL) 加入到该反应混合物中，用乙酸乙酯(200mLx 3)萃取该混合物。用盐水洗涤合 并的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，减压蒸发，得到标题产物(20g,粗)，为米 白色粘性油状物。MS:(ESI):m/z＝400.2[M+H]+。
实施例1.4
N-{9-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环 [2.2.1]庚-3-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲酰胺
Figure BDA0001958085660000152
在25℃向N-{9-[7-羟基-1-(硫烷基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲酰胺(20g,粗)在无水吡啶(20mL,氩气吹扫的)中的溶液中加入 DMTrCl(5.09g,15.02mmol CAS RN 40615-36-9)，将该反应混合物在25℃搅拌 4h。减压除去挥发性物质，用DCM(300mL)稀释该反应混合物。用NaHCO3溶液(100mL x 2)、然后用盐水(100mL)洗涤DCM层。用Na2SO4干燥有机层， 过滤，减压蒸发。通过combiflash(包含0.5％TEA的2％MeOH的DCM溶液) 纯化得到的粗产物，得到标题产物(5g，68％，3步)，为淡黄色固体。MS:(ESI): m/z＝702.14[M+H]+。
实施例2
3-[({[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-3-(5-甲基-2,4-二氧代 -1,2,3,4-四氢嘧啶-1-基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基]氧基}[双(丙-2-基)氨基]磷 烷基)氧基]丙腈
Figure BDA0001958085660000161
在氩气气氛中、在25℃将5-乙基巯基-1H-四唑(1.77g,13.59mmol,0.25M在55.3mL干CAN中的溶液,CAS RN 89797-68-2)和磷亚胺二酸2-氰基乙基四异丙 酯(4.31mL,13.59mmol,CAS RN 102691-36-1)依次加入到搅拌的1-[1-({[双(4-甲 氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-5-甲 基-1,2,3,4-四氢嘧啶-2,4-二酮(4.0g,6.80mmol)在干DCM(150mL)中的溶液中， 将该反应混合物在25℃搅拌4h。然后用DCM(200mL)稀释该反应混合物，倾 倒在饱和NaHCO3溶液(200mL)上。分离出有机层，用DCM(70mL x 2)萃取水 层。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，减压蒸发。通过FCC在氩气气氛中 (10-20％ACN的DCM溶液)纯化得到的粗化合物，得到标题化合物(TM-6)(2.45g,46％)，为米白色固体。MS:(ESI):m/z＝789.4[M+H]+。
实施例2.1
甲磺酸[7-羟基-3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-1-基)-2,5-二氧杂双环 [2.2.1]庚-1-基]甲酯
Figure BDA0001958085660000162
在0℃至-5℃向搅拌的1-[7-羟基-1-(羟基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-1,2,3,4-四氢嘧啶-2,4-二酮(10g,37.00mmol)在无水吡啶(100.0mL, CAS RN110-86-1)中的溶液中依次加入DMAP(0.452g,3.7mmol)和甲磺酰氯 (3.15mL,40.71mmol)。然后将该反应混合物在0℃再搅拌3h。减压除去挥发性 物质，通过combiflash纯化得到的粗产物(5％MeOH的DCM溶液)，得到标题 产物(2)(8g,62％)，为浅白色固体。MS:(ESI):m/z＝348.97[M+H]+。
实施例2.2
1-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1] 庚-3-基]-5-甲基-1,2,3,4-四氢嘧啶-2,4-二酮
Figure BDA0001958085660000171
在25℃、在氩气气氛中向氩气吹扫的1-{[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}乙-1-酮(10.43g,27.56mmol)在干DMF(80mL)中的溶液中以滴加方式加入新 鲜制备的NaOMe溶液(通过加入钠(0.758g,34.45mmol)至24mL无水甲醇、然后 用DMF(8mL)稀释得到的溶液制备)。向得到的反应混合物中快速地加入甲磺酸 [7-羟基-3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-1-基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-1- 基]甲酯(4.0g,11.48mmol)和1,1,3,3四甲基胍(3.03mL,24.12mmol,CAS RN 80-70-6)在DMF(32mL)中的溶液。将该反应混合物在25℃搅拌3h。然后用 DCM(400mL)稀释该反应混合物，用饱和NaHCO3溶液(200mL)洗涤。用硫酸 钠干燥有机层。过滤，减压蒸发。通过combiflash(含0.5％TEA的乙酸乙酯) 纯化粗化合物，得到标题产物(3.3g,49％)，为浅棕色固体。MS:(ESI):m/z＝588.89[M+H]+。
实施例2.3
1-{[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}乙-1-酮
Figure BDA0001958085660000181
在0℃至-5℃向DMTrCl(10.0g,29.51mmol,CAS RN 40615-36-9)在无水 DCM(100.0mL)中的溶液中滴加CH3COSH(6.24mL,88.54mmol,CAS RN 507-09-5)，将该反应混合物在0℃再搅拌30min。反应完成后，在0℃通过滴 加用TEA(12.2mL,88.54mmol)中和该反应混合物。然后用饱和NaHCO3溶液 (200mL x 2)和盐水(100mL)洗涤反应混合物，用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩， 得到标题化合物(11g,98％)，为浅棕色蜡样固体。
实施例3
N'-{9-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-({[双(丙-2-基)氨基](2- 氰基乙氧基)磷烷基}氧基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌 呤-2-基}-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺
Figure BDA0001958085660000182
在25℃将5-乙基巯基-1H-四唑(2.65g,20.34,0.25M在87.5mL干ACN中的 溶液，CAS RN 89797-68-2)和磷亚胺二酸2-氰基乙基四异丙酯(6.45mL, 20.34mmol,CAS RN102691-36-1)依次加入到搅拌的N'-{9-[1-({[双(4-甲氧基苯 基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-6-氧代-6,9- 二氢-1H-嘌呤-2-基}-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺(6.8g,10.17mmol)在干DCM (200mL)中的溶液中，将该反应混合物在25℃搅拌4h。然后用DCM(250mL) 稀释该反应混合物，倾倒在饱和NaHCO3溶液(200mL)上。分离出有机层，用 DCM(2x 100mL)萃取水层。用硫酸钠干燥有机层，过滤，减压蒸发。通过combiflash(90％ACN的DCM溶液)纯化得到的粗化合物，得到标题化合物(4.2g, 48％)。MS:(ESI):m/z＝869.0[M+H]+。
实施例3.1
N'-{9-[7-羟基-1-(羟基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-6-氧代-6,9-二氢-1H- 嘌呤-2-基}-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺
Figure BDA0001958085660000191
在25℃向2-氨基-9-[7-羟基-1-(羟基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3- 基]-6,9-二氢-1H-嘌呤-6-酮(10g,33.87mmol)在DMF(100mL)中的溶液中加入 DMF-DMA(9.0mL,67.74mmol,CAS RN 4637-24-5)。将该混合物在25℃搅拌 4h。减压除去挥发性物质，用正己烷(50mL x 3)洗涤得到的粗化合物，干燥，得 到标题化合物(13g,粗)，为白色固体。MS:(ESI):m/z＝350.7[M+H]+。
实施例3.2
N'-(9-{1-[(苯甲酰基硫烷基)甲基]-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基}-6-氧代 -6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基)-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺
Figure BDA0001958085660000192
向冰冷却的PPh3(29.20g,111.32mmol,CAS RN 603-35-0)在无水THF (400mL)中的溶液中加入DEAD(17.46mL,111.32mmol,CAS RN 1972-28-7)，将 该反应混合物在0℃搅拌30min。将PhCOSH(13.15mL,37.11mmol,CAS RN 98-91-9)滴加到该反应混合物中，在0℃再持续搅拌30min。加入N'-{9-[7-羟基 -1-(羟基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2- 基}-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺(13g,粗)，在0℃持续搅拌2h。然后将该反应混 合物在室温搅拌2h。减压除去挥发性物质，通过combiflash(5％MeOH的DCM 溶液)纯化得到的粗化合物，得到标题产物(18g,粗)，为淡黄色固体。MS:(ESI):m/z＝470.83[M+H]+。
实施例3.3
N'-{9-[7-羟基-1-(硫烷基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-6-氧代-6,9-二氢 -1H-嘌呤-2-基}-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺
Figure BDA0001958085660000201
向冰冷却的N'-(9-{1-[(苯甲酰基硫烷基)甲基]-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1] 庚-3-基}-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基)-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺(18g,粗)在 无水MeOH(300mL)中的溶液中加入K2CO3(42.30g,306.05mmol,CAS RN 584-08-7)，将该反应混合物在0℃搅拌2h，在25℃搅拌2h。减压蒸发溶剂， 得到标题化合物(60g,粗)，为浅棕色固体。MS:(ESI):m/z＝366.6[M+H]+。
实施例3.4
N'-{9-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环 [2.2.1]庚-3-基]-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基}-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺
Figure BDA0001958085660000202
在25℃向用氩气脱气的N'-{9-[7-羟基-1-(硫烷基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1] 庚-3-基]-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基}-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺(60g,粗)在 无水吡啶(80mL,CAS RN 110-86-1)中的溶液中加入DMTrCl(19.42g, 57.32mmol,CASRN 40615-36-9)，将该反应混合物在25℃搅拌4h。减压除去 挥发性物质，用水(200mL)稀释粗反应混合物。用乙酸乙酯(3x 250mL)萃取水 相。用Na2SO4干燥合并的有机部分，过滤，减压蒸发。通过combiflash(包含 0.5％TEA的5％MeOH的DCM溶液)纯化得到的粗产物，得到标题产物(6.8g, 30％，4步)，为淡黄色固体。MS:(ESI):m/z＝668.6[M+H]+。
实施例4
N-{1-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-({[双(丙-2-基)氨基](2-氰 基乙氧基)磷烷基}氧基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢 嘧啶-4-基}苯甲酰胺
Figure RE-GDA0003840303900000011
在氩气气氛中、在25℃向冰冷却的N-{1-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基}苯甲酰胺(4.8g,6.938)在DCM(50mL)中的溶液中加入5-乙硫基-1H-四唑 (1.8g,13.87mmol,CAS RN 89797-68-2)在乙腈(35mL)中的溶液，然后加入磷亚 胺二酸2-氰基乙基四异丙酯(6.6mL,20.18mmol,CAS RN 102691-36-1)，将该反 应混合物在25℃搅拌4h。然后将该反应混合物倾倒至饱和NaHCO3溶液(50mL) 上，分离出有机层，用DCM(25mL x 2)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层， 过滤，减压蒸发。通过硅胶柱色谱法纯化得到的粗产物(20％乙腈的DCM溶液)， 得到标题产物(3.0g,48％收率)，为米白色固体。使用上述方案，再进行另一个 3g批次，与该批次混合，得到可递送量。MS:(ESI):m/z＝892.1[M+H]+。
实施例4.1
N-{1-[7-羟基-1-(羟基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-2-氧代-1,2-二 氢嘧啶-4-基}苯甲酰胺
Figure RE-GDA0003840303900000012
在25℃向搅拌的CCl3CO2H(4.5g,27.74mmol,CAS RN 76-03-9)在DCM (100mL)中的溶液中加入N-[1-(1-{[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基]甲基}-7-羟基 -2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基)-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基]苯甲酰胺(15g, 22.19mmol)，将该反应混合物在25℃搅拌2小时。完成后，减压除去挥发性物 质，得到粗残余物，通过combiflash(10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到标 题产物(5.8g,69％)，为米白色固体。MS:(ESI):m/z＝373.9[M+H]+。
实施例4.2
N-(1-{1-[(苯甲酰基硫烷基)甲基]-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基}-5-甲基 -2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基)苯甲酰胺
Figure RE-GDA0003840303900000021
向冰冷却的PPh3(11.1g,42.58mmol,CAS RN 603-35-0)在干THF(150mL) 中的溶液中滴加DEAD(6.7mL,42.58mmol,CAS RN 1972-28-7)，将该反应混合 物在0℃在氩气气氛中搅拌30min。向其中加入PhCOSH(5.03mL,42.58mmol, CAS RN 98-91-9)，在0℃持续搅拌30min。向得到的反应混合物中加入N-{1-[7- 羟基-1-(羟基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4- 基}苯甲酰胺(5.3g,14.19mmol)，在0℃持续搅拌2h，在25℃持续搅拌2h。然 后用水(200mL)稀释该反应混合物，用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取。用Na2SO4干 燥合并的有机层，减压蒸发。通过combiflash色谱法(50％乙酸乙酯的己烷溶液) 纯化得到的粗产物，得到标题产物(7.2g,粗，污染有PPh3O)，为米白色固体， 照此不经进一步纯化用于下一步。MS:(ESI):m/z＝493.6[M+H]+。
实施例4.3
N-{1-[7-羟基-1-(硫烷基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-2-氧代-1,2- 二氢嘧啶-4-基}苯甲酰胺
Figure RE-GDA0003840303900000022
在–5℃向在氩气气氛中脱气的N-(1-{1-[(苯甲酰基硫烷基)甲基]-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基}-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基)苯甲酰胺(2.0g,4.052mmol)在THF/MeOH(6:4)(40mL)中的溶液中加入NaOH溶液(0.5M, 24.3mL)，将该反应混合物在0至-5℃搅拌30min。在0℃向得到的反应混合物 中加入10％柠檬酸水溶液(30mL)。将饱和碳酸氢钠溶液(50mL)加入到该反应混 合物中，用乙酸乙酯(70mL x 3)萃取化合物。用盐水洗涤合并的有机层(100mL x 2)，用硫酸钠干燥，减压浓缩，得到标题化合物(1.7g,粗)，为白色固体，将其 照此不经进一步纯化用于下一步。MS:(ESI):m/z＝390.2[M+H]+。
实施例4.4
N-{1-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环 [2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基}苯甲酰胺
Figure RE-GDA0003840303900000023
在25℃向氩气吹扫的粗N-{1-[7-羟基-1-(硫烷基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基}苯甲酰胺(5.5g,14.123mmol)在干吡啶(20mL,CAS RN 110-86-1)中的溶液中加入DMTrCl(7.1g,21.18mmol, CAS RN40615-36-9)，将该反应混合物在25℃搅拌16h。减压除去挥发性物质， 用DCM(200mL)稀释由此得到的粗反应混合物。用饱和NaHCO3溶液(50mL x 2)、然后用盐水(50mL x 2)洗涤有机部分，用硫酸钠干燥，减压蒸发。通过 combiflash色谱法(包含0.5％TEA的35％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化得到的粗 产物，得到不纯的化合物，其通过combiflash(30％乙酸乙酯/己烷)再纯化，得 到标题化合物(4.8g,49％收率)。MS:(ESI):m/z＝690.7[M+H]+。

Claims (27)

1.式(I)的化合物
Figure FDA0003840303890000011
其中
R1是磷酸酯保护基；
R2和R4一起形成-CH2O-；
R3是二烷基氨基；
R5是硫羟基保护基；且
Nu是腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、5-甲基-胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶、
Figure FDA0003840303890000012
其中R6是所连接的氨基的保护基。
2.权利要求1的化合物，其中R1是氰基乙基或甲基。
3.权利要求1的化合物，其中R3是二异丙基氨基。
4.权利要求1的化合物，其中R5是三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4,4’-二甲氧基三苯甲基或4,4’,4”-三甲氧基三苯甲基。
5.权利要求1的化合物，其中氨基的保护基是苯甲酰基、二甲基甲脒、乙酰基或异丁酰基。
6.权利要求1的化合物，其中Nu是(A1)、(B1)或(C1)
Figure FDA0003840303890000021
7.权利要求1的化合物，选自
N-{9-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-({[双(丙-2-基)氨基](2-氰基乙氧基)磷烷基}氧基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲酰胺；3-[({[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-1-基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基]氧基}[双(丙-2-基)氨基]磷烷基)氧基]丙腈；
N'-{9-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-({[双(丙-2-基)氨基](2-氰基乙氧基)磷烷基}氧基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基}-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺；和
N-{1-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-({[双(丙-2-基)氨基](2-氰基乙氧基)磷烷基}氧基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基}苯甲酰胺。
8.用于制备如权利要求1-7任一项中所定义的式(I)化合物的方法，包括使式(II)的化合物
Figure FDA0003840303890000022
在P(R3)2OR1和寡核苷酸合成活化剂存在下反应，其中R1至R5和Nu如权利要求1-6任一项中所定义。
9.权利要求8的方法，其中权利要求8中所定义的式(II)化合物如下获得：使式(III)的化合物
Figure FDA0003840303890000031
在R5X1和碱存在下反应，其中R2、R4、R5和Nu如权利要求1和4-6任一项中所定义，且其中X1是离去基团。
10.权利要求9的方法，其中权利要求9中所定义的式(III)化合物如下获得：水解式(IV)的化合物
Figure FDA0003840303890000032
其中
R7是烷基、芳基、芳基烷基、取代的芳基或取代的芳基烷基，其中取代的芳基和取代的芳基烷基是在芳基上被1-3个取代基取代的芳基和芳基烷基，所述取代基独立地选自烷基、烷氧基和卤素；且
其中R2、R4和Nu如权利要求1和5-6任一项中所定义。
11.权利要求10的方法，其中R7是苯基。
12.权利要求10或11的方法，其中权利要求10中所定义的式(IV)化合物如下获得：使式(V)化合物
Figure FDA0003840303890000033
在R7COSH、膦和脱水剂存在下反应，其中R7如权利要求10或11中所定义，且其中R2、R4和Nu如权利要求1和5-6任一项中所定义。
13.权利要求12的方法，其中式(V)的化合物通过除去式(VI)化合物的羟基保护基R5得到，
Figure FDA0003840303890000034
其中R5是羟基保护基，且其中R2、R4和Nu如权利要求1和5-6任一项中所定义。
14.权利要求8的方法，其中权利要求8中所定义的式(II)化合物通过使式(VII)化合物
Figure FDA0003840303890000041
在碱、亲核体和式(VIII)化合物存在下反应得到，
Figure FDA0003840303890000042
其中
R8是离去基团；
R9是烷基；且
R2、R4、R5和Nu如权利要求1和4-6任一项中所定义。
15.权利要求14的方法，其中权利要求14中所定义的式(VII)化合物通过使权利要求12中所定义的式(V)化合物在R8X2和非亲核碱存在下反应得到，其中X2是离去基团，且R8是能够与式(V)化合物的5’羟基氧原子一起形成离去基团的基团。
16.权利要求14或15的方法，其中权利要求14中所定义的式(VIII)化合物通过使R5X3在R9C(O)SH存在下反应得到，其中R5如权利要求1或4中所定义，R9如权利要求14中所定义，且X3是离去基团。
17.权利要求8的方法，其中寡核苷酸合成活化剂是唑类。
18.权利要求17的方法，其中寡核苷酸合成活化剂是1H-四唑、5-硝基苯基-1H-四唑(NPT)、5-乙硫基-1H-四唑(ETT)、5-苄硫基-1H-四唑(BTT)、5-甲硫基-1H-四唑(MTT)、5-巯基-四唑(MCT)或4,5-二氰基咪唑(DCI)。
19.权利要求14的方法，其中亲核体是NaOH、KOH、NaOMe、KOMe、甲胺或NH3。
20.权利要求12的方法，其中脱水剂是偶氮二甲酸二乙酯或偶氮二甲酸二异丙酯。
21.权利要求12的方法，其中膦是三苯膦或三甲膦。
22.权利要求13的方法，其中除去权利要求13所定义的式(VI)化合物的羟基保护基R5是通过使式(VI)化合物在酸存在下反应来进行。
23.权利要求22的方法，其中所述酸是全氯乙酸、乙酸、氯乙酸、二氯乙酸或三氟乙酸。
24.权利要求8中所定义的式(II)的化合物。
25.化合物，选自
N-(9-{1-[(苯甲酰基硫烷基)甲基]-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基}-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺；
N-{9-[7-羟基-1-(硫烷基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲酰胺；
N-{9-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲酰胺；
1-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-1,2,3,4-四氢嘧啶-2,4-二酮；
N'-(9-{1-[(苯甲酰基硫烷基)甲基]-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基}-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基)-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺；
N'-{9-[7-羟基-1-(硫烷基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基}-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺；
N'-{9-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基}-N,N-二甲基甲亚氨酸酰胺；
N-(1-{1-[(苯甲酰基硫烷基)甲基]-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基}-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基)苯甲酰胺；
N-{1-[7-羟基-1-(硫烷基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基}苯甲酰胺；和
N-{1-[1-({[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]硫烷基}甲基)-7-羟基-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-3-基]-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基}苯甲酰胺。
26.权利要求1-7和25任一项的化合物在制备寡核苷酸中的用途。
27.用于制备寡核苷酸的方法，所述寡核苷酸包含式(IX)的片段，
Figure FDA0003840303890000061
其中R2、R4和Nu如权利要求1和5-6的任一项中所定义，
该方法包括下列步骤：
(a)提供固体支持物，其包含：
羟基基团；
包含羟基基团的核苷酸；或
包含羟基基团的寡核苷酸；
(b)偶联权利要求1-5任一项的化合物、核苷酸、锁定核酸核苷酸、2’-糖修饰的核苷酸、3’S-DNA或3’S-LNA至所述固体支持物的羟基基团；
(c)氧化或硫氧化得自(b)的产物；
(d)任选地将得自步骤(c)的产物的未反应羟基基团封端；
(e)任选地从得自步骤(c)或(d)的产物中除去羟基保护基或硫羟基保护基；
(f)任选地重复步骤(b)至(e)；
(g)任选地从得自步骤(c)至(f)任一个的产物中除去任意剩余的保护基；且
(h)任选地从固体支持物上裂解寡核苷酸。
CN201780046484.5A 2016-07-27 2017-07-24 5’s-lna核苷酸和寡核苷酸 Active CN109563121B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211703363.2A CN116178468A (zh) 2016-07-27 2017-07-24 5’s-lna核苷酸和寡核苷酸

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IN201641025669 2016-07-27
IN201641025669 2016-07-27
PCT/EP2017/068575 WO2018019748A1 (en) 2016-07-27 2017-07-24 5's-lna nucleotides and oligonucleotides

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211703363.2A Division CN116178468A (zh) 2016-07-27 2017-07-24 5’s-lna核苷酸和寡核苷酸

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109563121A CN109563121A (zh) 2019-04-02
CN109563121B true CN109563121B (zh) 2022-12-27

Family

ID=59520880

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780046484.5A Active CN109563121B (zh) 2016-07-27 2017-07-24 5’s-lna核苷酸和寡核苷酸
CN202211703363.2A Pending CN116178468A (zh) 2016-07-27 2017-07-24 5’s-lna核苷酸和寡核苷酸

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211703363.2A Pending CN116178468A (zh) 2016-07-27 2017-07-24 5’s-lna核苷酸和寡核苷酸

Country Status (5)

Country Link
US (2) US11390641B2 (zh)
EP (1) EP3491001A1 (zh)
JP (2) JP2019525916A (zh)
CN (2) CN109563121B (zh)
WO (1) WO2018019748A1 (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019226952A1 (en) * 2018-05-24 2019-11-28 Valkyrie Pharmaceutics, Inc. Methods and formulations for the treatment of obesity and obesity-related metabolic diseases
WO2020165334A1 (en) * 2019-02-14 2020-08-20 Dna Script Process for preparing 3'-o-amino-ribonucleotide
KR20220107246A (ko) * 2019-11-27 2022-08-02 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 3'-rna 올리고뉴클레오타이드의 합성
US11787831B2 (en) * 2020-06-22 2023-10-17 Illumina Cambridge Limited Nucleosides and nucleotides with 3′ acetal blocking group

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1115320A (zh) * 1994-04-27 1996-01-24 希巴-盖吉股份公司 具有2′-醚基的核苷和寡核苷酸
WO1996004295A1 (en) * 1994-07-29 1996-02-15 Amgen Inc. 5'-dithio-modified oligonucleotides
WO2003018838A2 (de) * 2001-08-31 2003-03-06 Clondiag Chip Technologies Gmbh Detektion von wechselwirkungen auf sonden-arrays

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2004209598B2 (en) * 2003-02-10 2009-08-06 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds for the modulation of survivin expression
WO2016017422A1 (ja) * 2014-07-31 2016-02-04 国立大学法人大阪大学 架橋型ヌクレオシドおよびヌクレオチド

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1115320A (zh) * 1994-04-27 1996-01-24 希巴-盖吉股份公司 具有2′-醚基的核苷和寡核苷酸
WO1996004295A1 (en) * 1994-07-29 1996-02-15 Amgen Inc. 5'-dithio-modified oligonucleotides
WO2003018838A2 (de) * 2001-08-31 2003-03-06 Clondiag Chip Technologies Gmbh Detektion von wechselwirkungen auf sonden-arrays

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Design and Synthesis of LNA-Based Mercaptoacetamido-Linked Nucleoside Dimers;Vivek K. Sharma,et al.;《Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids》;20131231;第32卷;第256-272页 *
Vivek K. Sharma,et al..Design and Synthesis of LNA-Based Mercaptoacetamido-Linked Nucleoside Dimers.《Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids》.2013,第32卷 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20190292213A1 (en) 2019-09-26
CN109563121A (zh) 2019-04-02
EP3491001A1 (en) 2019-06-05
CN116178468A (zh) 2023-05-30
US20220363706A1 (en) 2022-11-17
JP2022120169A (ja) 2022-08-17
US11390641B2 (en) 2022-07-19
JP2019525916A (ja) 2019-09-12
WO2018019748A1 (en) 2018-02-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109563121B (zh) 5’s-lna核苷酸和寡核苷酸
EP2567964B1 (en) Monomer compositions for the synthesis of RNA, methods of synthesis, and methods of deprotection
US20210309690A1 (en) Oligonucleotide synthesis
JPH11510790A (ja) オリゴヌクレオチド合成のための改良された方法
MXPA05006865A (es) Proceso para la produccion de profarmacos 3'-nucleosidos.
EP3684780A1 (en) Floxuridine synthesis
EP1317466B1 (en) Synthons for oligonucleotide synthesis
EP0611075A1 (en) Modified oligodeoxyribonucleotides, their preparation and their therapeutic use
WO2002018406A1 (en) Alkylated hexitol nucleoside analogues and oligomers thereof
JP4802712B2 (ja) リボ核酸化合物及びオリゴ核酸化合物の液相合成法
JP7478660B2 (ja) 修飾ヌクレオシドホスホロアミダイト
CA2659703C (en) Method for introducing a nucleic-acid-protecting group
JP2019508438A (ja) 核配列に組み込むための５−（ｎ−保護−トリプタミノカルボキシアミド）−２’−デオキシウリジンホスホロアミダイトの化合物及び合成方法
JP4255227B2 (ja) Ｎ３’−ｐ５’結合を有する２’，４’−ｂｎａオリゴヌクレオチド
CN115135658A (zh) 桥连型核苷和使用其的核苷酸
EA045540B1 (ru) Модифицированные нуклеозидные амидофосфиты
WO2021080021A1 (ja) オリゴヌクレオチドを製造する方法
TW202128704A (zh) 雙環亞磷醯胺之製造方法
JP2019119739A (ja) ヌクレオシド誘導体の製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40005349

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant