CN109536555B - 一种牡蛎小肽及其提取方法和应用 - Google Patents

一种牡蛎小肽及其提取方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及聚合物提取领域，具体涉及一种牡蛎小肽及其提取方法和应用。所述提取方法包括将牡蛎肉匀浆后进行酶解反应，所述酶解反应使用的酶由枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶酶组成；优选所述枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶的用量比为(1‑5)：(5‑1)。本发明具有以下有益效果：本发明方法简单，温和，牡蛎小肽提取率高；本发明方法获得的牡蛎小肽肽链具有适当的配比，且抗氧化作用显著。

Description

一种牡蛎小肽及其提取方法和应用
技术领域
本发明涉及聚合物提取领域，具体涉及一种牡蛎小肽及其提取方法和应用。
背景技术
牡蛎，属牡蛎科或燕蛤科，双壳类软体动物，分布于温带和热带各大海洋沿岸水域。在我国沿海牡蛎分布很广，渤海、黄海至南沙群岛均产，约有20种。牡蛎肉肥爽滑，味道鲜美，营养丰富，素有“海底牛奶”之美称。目前，国外除了将牡蛎作为还未直接食用外，还大量开发研制了以牡蛎为主要成分的保健食品、食品、调味剂等多种产品。随着牡蛎提取物及牡蛎功能性食品和保健食品的效用的确认，其应用范围会不断的扩大，研制和开发牡蛎保健食品的前景十分诱人，而且作为营养辅助食品，可以带来显著的社会效益和经济效益，目前，全世界年产牡蛎1Mt左右，年贸易总额9000万美元，是沿海国家的一种重要的海洋经济贝类。
中医理论认为，牡蛎肉味甘、咸，微寒，性平，归肝、胆、肾经。《海药本草》中：牡蛎肉“主治男子遗精、虚劳乏损，补肾正气，止盗汗，去烦热”。《本草纲目》中：牡蛎“肉甘温、无毒，主治虚损，调中，解丹毒”。牡蛎味道鲜美，营养丰富。牡蛎肉中含有蛋白质7.284％，糖原4.914％，牛磺酸646.3mg/100g(以湿重计)；干牡蛎中蛋白质含量高达45％-57％，牡蛎中含有处理人体必需的20种常用氨基酸，所含糖分为糖原，占其肝重的20％-40％。糖原可为机体所吸收利用，从而减轻胰腺负担，对糖尿病的防治有十分重要的意义，并且具有调节机体免疫、抑制肿瘤、延缓衰老、降血糖、血脂等生物活性。
近年来对牡蛎功能的研究多数是基于牡蛎肉提取物(蛋白质≧25％，糖原≧25％，牛磺酸≧10(g/Kg)等)进行的，牡蛎提取物是以全牡蛎为原料，采用特殊方法分离提取的一种混合物的简称。目前，关于牡蛎提取物在抗疲劳、抗动脉粥样硬化和预防高血脂症等方面已有报道，但少有抗氧化功能的牡蛎小肽方面的研究。因此，研究提取牡蛎中抗氧化小肽及相应的肠溶胶囊制剂将具有重大意义。
发明内容
本发明提供一种提取牡蛎小肽的方法，为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种提取牡蛎小肽的方法，将牡蛎肉匀浆后进行酶解反应，所述酶解反应使用的酶由枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶酶组成。
本发明所述的提取方法，优选地，所述枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶的用量比(此处是指重量比)为(1-5)：(5-1)；更优选地，所述用量比为(1-2)：(1-2)。
本发明所述的提取方法，优选地，所述酶解反应的条件是：pH值至6-8，温度为30-50℃，加入所述枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶酶解2-6小时后，升温至80-90℃保持5-10分钟后，降温至20-40℃，离心取上清液；在上述特定的温度调节方式下，可更有利于获得所需的牡蛎小肽产品。
本发明所述的提取方法，所述枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶的用量是所述牡蛎肉的2-10％。
本发明所述的提取方法，还包括在所述酶解反应之后，分离纯化的步骤；所述分离纯化包括：
用截留分子量为1000-1500Da的膜分离上清液，得到透过液；
将所述透过液以Sephadex G-15柱进行吸附，经洗脱、干燥即得牡蛎小肽。
优选地，所述Sephadex G-15的用量为所述牡蛎肉的2-3wt％。
更优选地，所述分离纯化中，将所述透过液加入Sephadex G-15柱，搅拌吸附60-100分钟，静置40-100分钟用以Tris-HCl缓冲液，pH值7.0缓冲溶液平衡Sephadex G-15柱，用NaCl(0～1M)以1.5mL/min的流速梯度线洗脱，收集0.2-0.6M洗脱液，喷雾干燥，即得。
具体地，本发明所述的提取方法，包括如下步骤：
步骤一、将牡蛎肉洗净，加入1-6倍重量的水，匀浆；
步骤二、调节匀浆液pH值至6-8，温度为30-50℃，加入枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶酶解2-6小时，升温至80-90℃，保持5-10分钟后，降温至20-40℃，离心取上清液；
步骤三、用截留分子量为1000Da的膜分离上清液，得到透过液；
步骤四、透过液的处理：将透过液加入新鲜牡蛎肉重量2.0～3.0％的Sephadex G-15柱，搅拌吸附60分钟，静置40分钟以上用Tris-HCl缓冲液，pH值7.0缓冲溶液平衡Sephadex G-15柱，用NaCl(0～1M)以1.5mL/min的流速梯度线洗脱，收集0.2-0.6M洗脱液，喷雾干燥，得牡蛎小肽。
优选地，在步骤二中所述枯草杆菌蛋白酶的用量为牡蛎肉重量的1％-5％，所述米曲霉蛋白酶的用量为牡蛎肉重量的1％-5％。
本发明同时提供上述任意一项技术方案所述的提取方法制备得到的牡蛎小肽。
本发明进一步提供所述牡蛎小肽用于制备抗氧化的药物、保健品等的应用。
本发明还提供一种牡蛎小肽肠溶胶囊，包括上述任意一项技术方案所述的牡蛎小肽；
具体地，所述牡蛎小肽以所述牡蛎小肽微丸提供；所述牡蛎小肽微丸包括(由以下组分所组成)：所述牡蛎小肽、丸芯、淀粉、蔗糖、聚维酮。
优选地，所述牡蛎小肽微丸按照重量份计，包括：所述牡蛎小肽100份，丸芯100-300份，淀粉10-60份，蔗糖10-60份，1％-3％聚维酮1-5份。
所述的牡蛎小肽微丸中，所述丸芯优选由乳糖、微晶纤维素、30％-50％蔗糖浆，1％-3％羟丙基甲基纤维素水溶液制备而成；更优选地，其中，乳糖10-50份，微晶纤维素10-50份，30％-50％蔗糖浆20-40份，1％-3％羟丙基甲基纤维素水溶液1-4份。所述牡蛎小肽肠溶胶囊还包括包衣层包裹所述牡蛎小肽微丸；所述包衣层优选以聚乙二醇、羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯组成；其中，所述包衣层的用量是所述牡蛎小肽微丸的4-25wt％；更优选地，所述羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯组成和聚乙二醇的重量比为(3-10)：(1-15)。
本发明同时提供上述任意一项技术方案所述的牡蛎小肽肠溶胶囊的制备方法：
丸芯在运动状态下，将蔗糖和所述聚维酮喷洒至所述丸芯湿润，再将所述牡蛎小肽、淀粉的混合粉散布至所述丸芯表面，过20目筛；再以所述包衣层包裹所述牡蛎小肽微丸；最后将包裹包衣层的所述牡蛎小肽微丸装入胶囊即可。
更为具体地：
丸芯的制备方法：分别将乳糖、微晶纤维素粉碎，过100目筛，按比例混合均匀后加入流化床包衣机中，在投料量200-300g，进风量100-130m3/h，物料温度30-35℃，雾化压力1.5-2Kg，喷液速度200-300mL/h的条件下，用30％-50％蔗糖浆和1％-3％羟丙基甲基纤维素水溶液作为粘合剂湿法制粒；于30-35℃干燥30-60分钟，过50目筛，制得丸芯。
牡蛎小肽微丸的制备方法：将牡蛎小肽、淀粉粉碎，过100目筛，按比例混合均匀后备用，将蔗糖加入纯化水制备成40％-60％蔗糖浆；将丸芯加入流化床包衣机中，在投料量200-300g，进风量100-130m3/h，物料温度30-35℃，雾化压力1.5-2Kg，喷液速度200-300mL/h的条件下，使丸芯在运动状态下，将蔗糖浆和1％-3％聚维酮经喷枪喷乳，待丸芯湿润后，将牡蛎小肽和淀粉混合粉均匀散布至丸芯表面，30-35℃干燥30-60分钟，过20目筛，制得牡蛎小肽微丸。
牡蛎小肽肠溶微丸的制备方法：将聚乙二醇、羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯用75％的乙醇溶解，静置24小时，过100目筛制备成包衣液；将牡蛎小肽微丸加入流化床包衣机中，在投料量200-300g，进风量100-130m3/h，物料温度30-35℃，雾化压力1.5-2Kg，喷液速度200-300mL/h的条件下，使牡蛎小肽微丸在运动状态下，将包衣液经喷枪喷入，30-35℃干燥60-120分钟，过20目筛，得牡蛎小肽肠溶微丸。
将牡蛎小肽肠溶微丸装入胶囊中即得牡蛎小肽肠溶胶囊。
本发明具有以下有益效果：本发明方法简单，温和，牡蛎小肽提取率高；本发明方法获得的牡蛎小肽肽链具有适当的配比，且抗氧化作用显著。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
本实施例提供一种牡蛎小肽及其制备方法，具体步骤如下：
称取4Kg牡蛎肉(含蛋白质349.95g)洗净，加入12Kg的水，匀浆；调节匀浆液pH值至7.0，温度为37℃，加入80g枯草杆菌蛋白酶和80g的米曲霉蛋白酶酶解4小时，升温至80℃，保持5-10分钟后，降温至25℃。用截留分子量为1000Da的膜分离上清液，得到透过液。
将透过液加入新鲜牡蛎肉重量2.0～3.0％的Sephadex G-15柱，搅拌吸附60分钟，静置40分钟以上用Tris-HCl缓冲液，pH值7.0缓冲溶液平衡Sephadex G-15柱，用NaCl(0～1M)以1.5mL/min的流速梯度线洗脱，收集0.2-0.6M洗脱液，喷雾干燥，得牡蛎小肽159.4g，收率为45.5％，检测肽链组成。
实施例2
本实施例提供一种牡蛎小肽及其制备方法，具体步骤如下：
称取4Kg牡蛎肉洗净，加入12Kg的水，匀浆；调节匀浆液pH值至7.0，温度为37℃，加入60g枯草杆菌蛋白酶和100g的米曲霉蛋白酶酶解4小时，升温至80℃，保持5-10分钟后，降温至20℃。用截留分子量为1000Da的膜分离上清液，得到透过液。
将透过液加入新鲜牡蛎肉重量2.0～3.0％的Sephadex G-15柱，搅拌吸附60分钟，静置40分钟以上用Tris-HCl缓冲液，pH值7.0缓冲溶液平衡Sephadex G-15柱，用NaCl(0～1M)以1.5mL/min的流速梯度线洗脱，收集0.2-0.6M洗脱液，喷雾干燥，得牡蛎小肽。
实施例3
本实施例提供一种牡蛎小肽及其制备方法，具体步骤如下：
称取4Kg牡蛎肉洗净，加入12Kg的水，匀浆；调节匀浆液pH值至7.0，温度为37℃，加入50g枯草杆菌蛋白酶和110g的米曲霉蛋白酶酶解4小时，升温至80℃，保持5-10分钟后，降温至25℃。用截留分子量为1000Da的膜分离上清液，得到透过液。
将透过液加入新鲜牡蛎肉重量2.0～3.0％的Sephadex G-15柱，搅拌吸附60分钟，静置40分钟以上用Tris-HCl缓冲液，pH值7.0缓冲溶液平衡Sephadex G-15柱，用NaCl(0～1M)以1.5mL/min的流速梯度线洗脱，收集0.2-0.6M洗脱液，喷雾干燥，得牡蛎小肽。
实施例4
本实施例提供一种牡蛎小肽及其制备方法，具体步骤如下：
称取4Kg牡蛎肉洗净，加入12Kg的水，匀浆；调节匀浆液pH值至7.0，温度为37℃，加入120g枯草杆菌蛋白酶和45g的米曲霉蛋白酶酶解4小时，升温至80℃，保持5-10分钟后，降温至25℃。用截留分子量为1000Da的膜分离上清液，得到透过液。
将透过液加入新鲜牡蛎肉重量2.0～3.0％的Sephadex G-15柱，搅拌吸附60分钟，静置40分钟以上用Tris-HCl缓冲液，pH值7.0缓冲溶液平衡Sephadex G-15柱，用NaCl(0～1M)以1.5mL/min的流速梯度线洗脱，收集0.2-0.6M洗脱液，喷雾干燥，得牡蛎小肽。
实施例5
一种牡蛎小肽肠溶胶囊的制备方法：
步骤一、制备丸芯：分别将乳糖4Kg、微晶纤维素4Kg粉碎，过100目筛，按比例混合均匀后加入流化床包衣机中，在投料量200g，进风量130m3/h，物料温度35℃，雾化压力1.5Kg，喷液速度250mL/h的条件下，用40％蔗糖浆2Kg和2％羟丙基甲基纤维素水溶液300g作为粘合剂湿法制粒；于30-35℃干燥60分钟，过50目筛，制得丸芯。
步骤二、制备牡蛎小肽微丸：将牡蛎小肽1Kg、淀粉600g粉碎，过100目筛，按比例混合均匀后备用，将600g蔗糖加入纯化水制备成40％-60％蔗糖浆；将1Kg丸芯加入流化床包衣机中，在投料量220g，进风量120m3/h，物料温度30℃，雾化压力1.5Kg，喷液速度200mL/h的条件下，使丸芯在运动状态下，将蔗糖浆和50g1％-3％聚维酮经喷枪喷乳，待丸芯湿润后，将牡蛎小肽和淀粉混合粉均匀散布至丸芯表面，30℃干燥60分钟，过20目筛，制得牡蛎小肽微丸。
步骤三、制备牡蛎小肽肠溶微丸：将60g聚乙二醇、100g羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯用75％的乙醇溶解，静置24小时，过100目筛制备成包衣液；将1Kg牡蛎小肽微丸加入流化床包衣机中，在投料量200g，进风量100m3/h，物料温度335℃，雾化压力1.8Kg，喷液速度300mL/h的条件下，使牡蛎小肽微丸在运动状态下，将包衣液经喷枪喷入，30℃干燥120分钟，过20目筛，得牡蛎小肽肠溶微丸。
步骤四、制备牡蛎小肽肠溶胶囊：将牡蛎小肽肠溶微丸装入胶囊中即得牡蛎小肽肠溶胶囊，每粒胶囊0.5g。
实施例6
一种牡蛎小肽肠溶胶囊的制备方法：
步骤一、制备丸芯：分别将乳糖4Kg、微晶纤维素4Kg粉碎，过100目筛，按比例混合均匀后加入流化床包衣机中，在投料量200g，进风量130m3/h，物料温度35℃，雾化压力1.5Kg，喷液速度250mL/h的条件下，用40％蔗糖浆2Kg和2％羟丙基甲基纤维素水溶液300g作为粘合剂湿法制粒；于30-35℃干燥60分钟，过50目筛，制得丸芯。
步骤二、制备牡蛎小肽微丸：将牡蛎小肽1Kg、淀粉600g粉碎，过100目筛，按比例混合均匀后备用，将400g蔗糖加入纯化水制备成40％-60％蔗糖浆；将1Kg丸芯加入流化床包衣机中，在投料量220g，进风量120m3/h，物料温度30℃，雾化压力1.5Kg，喷液速度200mL/h的条件下，使丸芯在运动状态下，将蔗糖浆和40g1％-3％聚维酮经喷枪喷乳，待丸芯湿润后，将牡蛎小肽和淀粉混合粉均匀散布至丸芯表面，30℃干燥60分钟，过20目筛，制得牡蛎小肽微丸。
步骤三、制备牡蛎小肽肠溶微丸：将60g聚乙二醇、100g羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯用75％的乙醇溶解，静置24小时，过100目筛制备成包衣液；将1Kg牡蛎小肽微丸加入流化床包衣机中，在投料量200g，进风量100m3/h，物料温度335℃，雾化压力1.8Kg，喷液速度300mL/h的条件下，使牡蛎小肽微丸在运动状态下，将包衣液经喷枪喷入，30℃干燥120分钟，过20目筛，得牡蛎小肽肠溶微丸。
步骤四、制备牡蛎小肽肠溶胶囊：将牡蛎小肽肠溶微丸装入胶囊中即得牡蛎小肽肠溶胶囊，每粒胶囊0.5g。
对比例1
本对比例提供中牡蛎小肽的制备方法，具体步骤如下：
称取4Kg牡蛎肉(含蛋白质349.95g)洗净，加入12Kg的水，匀浆；调节匀浆液pH值至7.0，温度为37℃，加入160g枯草杆菌蛋白酶酶解4小时，升温至80℃，保持5-10分钟后，降温至25℃。用截留分子量为1000Da的膜分离上清液，得到透过液。
将透过液加入新鲜牡蛎肉重量2.0～3.0％的Sephadex G-15柱，搅拌吸附60分钟，静置40分钟以上用Tris-HCl缓冲液，pH值7.0缓冲溶液平衡Sephadex G-15柱，用NaCl(0～1M)以1.5mL/min的流速梯度线洗脱，收集0.2-0.6M洗脱液，喷雾干燥，得牡蛎小肽81.9g，收率为23.4％，检测肽链组成。
对比例2
本对比例提供中牡蛎小肽的制备方法，具体步骤如下：
称取4Kg牡蛎肉(含蛋白质349.95g)洗净，加入12Kg的水，匀浆；调节匀浆液pH值至7.0，温度为37℃，加入160g米曲霉蛋白酶酶解4小时，升温至80℃，保持5-10分钟后，降温至25℃。用截留分子量为1000Da的膜分离上清液，得到透过液。
将透过液加入新鲜牡蛎肉重量2.0～3.0％的Sephadex G-15柱，搅拌吸附60分钟，静置40分钟以上用Tris-HCl缓冲液，pH值7.0缓冲溶液平衡Sephadex G-15柱，用NaCl(0～1M)以1.5mL/min的流速梯度线洗脱，收集0.2-0.6M洗脱液，喷雾干燥，得牡蛎小肽65.4g，收率为18.7％，检测肽链组成。
对比例3
本对比例提供中牡蛎小肽的制备方法，具体步骤如下：
称取4Kg牡蛎肉(含蛋白质349.95g)洗净，加入12Kg的水，匀浆；调节匀浆液pH值至7.0，温度为37℃，加入200g枯草杆菌蛋白酶和200g的米曲霉蛋白酶酶解4小时，升温至80℃，保持5-10分钟后，降温至25℃。用截留分子量为1000Da的膜分离上清液，得到透过液。
将透过液加入新鲜牡蛎肉重量2.0～3.0％的Sephadex G-15柱，搅拌吸附60分钟，静置40分钟以上用Tris-HCl缓冲液，pH值7.0缓冲溶液平衡Sephadex G-15柱，用NaCl(0～1M)以1.5mL/min的流速梯度线洗脱，收集0.2-0.6M洗脱液，喷雾干燥，得牡蛎小肽32.2g，收率为9.2％，检测肽链组成。
对比例4
本对比例提供中牡蛎小肽的制备方法，具体步骤如下：
称取4Kg牡蛎肉(含蛋白质349.95g)洗净，加入12Kg的水，匀浆；调节匀浆液pH值至7.0，温度为37℃，加入10g枯草杆菌蛋白酶和10g的米曲霉蛋白酶酶解4小时，升温至80℃，保持5-10分钟后，降温至25℃。用截留分子量为1000Da的膜分离上清液，得到透过液。
将透过液加入新鲜牡蛎肉重量2.0～3.0％的Sephadex G-15柱，搅拌吸附60分钟，静置40分钟以上用Tris-HCl缓冲液，pH值7.0缓冲溶液平衡Sephadex G-15柱，用NaCl(0～1M)以1.5mL/min的流速梯度线洗脱，收集0.2-0.6M洗脱液，喷雾干燥，得牡蛎小肽24.8g，收率为7.1％，检测肽链组成。
试验例1
本试验例验证实施例1，对比例1-4所提供的牡蛎小肽的组成。
表1 牡蛎小肽肽链组成
Figure BDA0001915264040000111
由表1结果可知，当枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶的用量及比例改变后，所的牡蛎小肽的肽链组成也发生变化。
试验例2
本试验例提供实施例1、对比例1-4所提供的牡蛎小肽的应用性能检测。
牡蛎小肽对小鼠抗氧化功能的影响
选取昆明种小鼠70只(体重20.4±0.6g)，雌雄各半，将小鼠随机分为7组，每组10只(雌雄各半)，分笼饲养，分组为：空白对照组、阳性对照组、牡蛎小肽组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、对比例4组。空白对照组每只小鼠每天灌胃0.25mL生理盐水；阳性对照组，每天每只小鼠灌胃0.25mL维生素E(10mg/mL)；牡蛎小肽组每天灌胃实施例1牡蛎小肽5mg/mL；对比例1每天灌胃对比例1牡蛎小肽5mg/mL；对比例2每天灌胃对比例2牡蛎小肽5mg/mL；对比例3每天灌胃对比例3牡蛎小肽5mg/mL；对比例4每天灌胃对比例4牡蛎小肽5mg/mL。以上各组连续灌胃两周，按照实验动物饲养方法饲养。
实验末期，动物禁食12小时后摘取眼球采血，肝素抗凝，在0-4℃以3000r/min离心10分钟制备血浆；颈椎脱臼法处死，取肝脏用生理盐水洗净后称重，并制成10％匀浆，3000r/min离心，取匀浆上清液至-20℃冰柜保存。分别进行肝脏重量差测定、超氧化物气化酶(SOD)活性测定、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性测定、丙二醛(MDA)浓度测定，进行数据分析，结论如下。
表2 牡蛎小肽对小鼠肝脏重量的影响
组别 肝脏重量(g)
空白对照组 1.03±0.08
阳性对照组 1.16±0.14
牡蛎小肽组 1.24±0.16*
对比例1组 1.11±0.05
对比例2组 1.08±0.07
对比例3组 1.14±0.03
对比例4组 1.06±0.04
注：*表示P<0.05。
由表2结果可知，实验末期小鼠肝脏重量相较于空白对照组，牡蛎小肽组小鼠肝脏重量差异显著(P<0.05)。对比例1-4组与空白对照组差异不显著。
表3 牡蛎小肽对小鼠血浆和肝脏SOD活性的影响
Figure BDA0001915264040000131
由表3结果可知，与对照组血浆SOD活性相比，牡蛎小肽组增加了28.1％；与对照组肝脏SOD活性相比，牡蛎小肽组增加了20.4％。对比例1-4组血浆SOD和肝脏SOD无明显变化。
表4 牡蛎小肽对小鼠血浆和肝脏GSH-Px活性的影响
Figure BDA0001915264040000132
由表4结果可知，与对照组血浆GSH-Px活性相比，牡蛎小肽组极显著高于空白对照组和阳性对照组(P<0.01)；与对照组肝脏GSH-Px活性相比，牡蛎小肽组增加了59.5％。对比例1-4组血浆GSH-Px活性和肝脏GSH-Px活性无明显变化。
表5 牡蛎小肽对小鼠血浆和肝脏MDA活性的影响
Figure BDA0001915264040000141
由表5结果可知，与对照组血浆MDA浓度相比，牡蛎小肽组降低了34.4％；与对照组肝脏MDA浓度相比，牡蛎小肽组降低了25.7％。对比例1-4组血浆MDA浓度无明显下降。
由表2-5结果可知，牡蛎小肽能够显著提高小鼠肝脏和血浆的SOD活性及GSH-Px活性，并能够显著降低小鼠肝脏和血浆MDA浓度，具有较好的抗氧化功能。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (13)

1.一种牡蛎小肽的提取方法，其特征在于，将牡蛎肉匀浆后进行酶解反应，所述酶解反应使用的酶由枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶酶组成，所述枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶的用量比为(1-2)：(1-2)；
所述酶解反应的条件是：在pH值为7，温度为37℃下进行酶解反应；在加入所述枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶酶解4小时后，升温至80℃保持5-10分钟后，降温至25℃即可；
述枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶的用量是所述牡蛎肉的4％。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，还包括在所述酶解反应之后，分离纯化的步骤；
所述分离纯化包括：
用截留分子量为1000-1500Da的膜分离上清液，得到透过液；将所述透过液以SephadexG-15柱进行吸附，经洗脱、干燥即得牡蛎小肽。
3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述Sephadex G-15的用量为所述牡蛎肉的2-3wt％。
4.一种牡蛎小肽，其特征在于，由权利要求1-3任一项所述的提取方法制备而得。
5.权利要求4所述的牡蛎小肽用于制备抗氧化的药物、保健品的应用。
6.一种牡蛎小肽肠溶胶囊，其特征在于，包括权利要求4所述的牡蛎小肽。
7.根据权利要求6所述的牡蛎小肽肠溶胶囊，其特征在于，所述牡蛎小肽以所述牡蛎小肽微丸提供；所述牡蛎小肽微丸包括：所述牡蛎小肽、丸芯、淀粉、蔗糖、聚维酮。
8.根据权利要求7所述的牡蛎小肽肠溶胶囊，其特征在于，所述牡蛎小肽微丸按照重量份计，包括：所述牡蛎小肽100份，丸芯100-300份，淀粉10-60份，蔗糖10-60份，1％-3％聚维酮1-5份。
9.根据权利要求7或8所述的牡蛎小肽肠溶胶囊，其特征在于，所述丸芯由包括乳糖、微晶纤维素、蔗糖浆，羟丙基甲基纤维素水溶液的原料制备而成；
和/或，
所述牡蛎小肽肠溶胶囊还包括包衣层以包裹所述牡蛎小肽微丸；所述包衣层以聚乙二醇、羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯组成。
10.根据权利要求9所述的牡蛎小肽肠溶胶囊，其特征在于，乳糖10-50份，微晶纤维素10-50份，30％-50％蔗糖浆20-40份，1％-3％羟丙基甲基纤维素水溶液1-4份。
11.根据权利要求9所述的牡蛎小肽肠溶胶囊，其特征在于，所述包衣层的用量是所述牡蛎小肽微丸的4-25wt％。
12.根据权利要求11所述的牡蛎小肽肠溶胶囊，其特征在于，所述羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯和聚乙二醇的重量比为(3-10)：(1-15)。
13.一种制备权利要求9所述的牡蛎小肽肠溶胶囊的方法，其特征在于，在丸芯运动状态下，将蔗糖和所述聚维酮喷洒至所述丸芯湿润，再将所述牡蛎小肽、淀粉的混合粉散布至所述丸芯表面，过20目筛；再将所述包衣层包裹所述牡蛎小肽微丸；最后将包裹了包衣层的所述牡蛎小肽微丸装入胶囊即可。
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