CN109528651A - 一种含多肽类药物的w/o/w型复合纳米乳凝胶透皮制剂及其制备方法 - Google Patents

一种含多肽类药物的w/o/w型复合纳米乳凝胶透皮制剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂及其制备方法，先将多肽类药物溶于PBS缓冲液，加入乳化剂A并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加油相至澄清透明，得含多肽类药物的W/O型纳米乳，再将W/O型纳米乳作为油相，加入乳化剂B与助乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液至澄清透明，得含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳，将凝胶骨架材料加入到上述含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再调节pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂。本发明制备工艺简单，条件温和，有利于保持多肽类药物的活性，可工业化生产；制得的复合纳米乳粒径小，渗透性强，易于药物穿透。

Description

一种含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂及其 制备方法
技术领域
本发明涉及一种透皮制剂，特别涉及一种含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂及其制备方法。
背景技术
多肽类药物为生物大分子药物，其具有影响和调节机体生理、生化及病理过程的功能。多肽类药物可以通过现代生物工程技术、基因工程或人工合成手段生产制备。与化学药物相比，多肽类药物由于具有良好的选择性和生物活性，往往疗效显著、不良反应小、安全性高，很少引起严重的免疫反应，在治疗肿瘤、糖尿病、心血管疾病、骨质疏松症、胃肠道疾病、中枢神经系统疾病、免疫疾病以及抗病毒、抗菌等方面具有显著的疗效。多肽药物虽然具有独特的优势，但也有不足之处：即多肽分子的稳定性较差，易受消化系统酸、酶的影响而失活，故常采用注射给药；同时由于其半衰期较短，需要长期连续给药以维持其药效，给患者带来极大的痛苦和不便。因此，开发体内外稳定性好、使用安全方便、长效稳定释放、生物利用度较高的新型蛋白多肽类药物非注射给药系统具有重要的研究意义和应用价值。
多肽类药物非注射途径包括鼻腔、直肠、口服、肺部吸收、透皮吸收等给药途径。其中，透皮给药系统与其他常用药物剂型相比主要具有以下优势：避免了口服给药会发生的胃肠道酶解和肝脏首过效应；延长了药物作用时间，减少用药次数，改善病人的顺应性；维持恒定的血药浓度，增强了疗效，减少了副作用；患者可自主用药，并随时可中断给药。虽然透皮给药系统具有以上优势，但其也有局限性，特别是多肽这类水溶性大分子药物，很难透过角质层屏障进入真皮层被毛细血管吸收从而进入体循环。近年来，采用物理学手段提高蛋白多肽类药物的透皮吸收的新技术获得了长足进展。离子导入法、电致孔法、超声波法、光机械波法等新技术单独使用或协同作用，已成功地运用于增加多种蛋白多肽类药物 (如胰岛素、干扰素α2b、促黄体激素释放激素等)的透皮转运。不过这些技术往往需要借助于高端仪器才能产生一定的透皮吸收效果，仍不能满足普通患者的日常用药需求。相比于物理透皮新技术的突破，多肽类药物透皮新剂型上的进展仍十分有限，尚没有适合临床使用的产品上市。
发明内容
本发明的目的是提供一种含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂的制备方法。
本发明的另一目的是提供通过上述制备方法得到的含多肽类药物的W/O/W 型复合纳米乳凝胶透皮制剂。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种含多肽类药物的W/O/W 型复合纳米乳凝胶透皮制剂的制备方法，包含如下步骤：
(1)将多肽类药物溶于PBS缓冲液，加入乳化剂A并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加油相至澄清透明，得含多肽类药物的W/O型纳米乳；其中，PBS缓冲液、乳化剂A、油相按质量比(1～10):(30～50):(40～69)配比；
(2)将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂B与助乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液至澄清透明，得含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳；其中，W/O型纳米乳、乳化剂B、助乳化剂、PBS 缓冲液按质量百分比(1～40):(3～40):(1～32):(50～95)配比；乳化剂与助乳化剂按质量比6:1～1:2配比；
(3)将凝胶骨架材料加入到上述含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再调节pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶；其中，凝胶骨架材料占W/O/W型复合纳米乳质量的0.5％～2％。
优选的，步骤(1)中所述的多肽类药物为促皮质素、锌促皮质素、磷锌促皮质素、明胶促皮质素、羧纤促皮质素、丝赖促皮质18肽、甘精促皮质18肽、锌促皮质24肽、促皮质24肽、促皮质25肽、促皮质28肽、促性腺素释放激素、促甲状腺素释放激素、生长激素释放激素(CHRH)、生长激素抑制素(CHIH)、促黑色素细胞抑制激素(MRIH)、促黑色素细胞释放激素(MRH)、催乳素释放激素(PRH)、催乳素抑制激素(PIH)、促皮质素释放激素(LRH)、醋酸亮丙瑞林(LPA)、戈舍瑞林、曲普瑞林、胸腺素、胰岛素、胰高血糖素、降钙素、十肽血管紧张肽Ⅰ、八肽血管紧张肽Ⅱ、七肽血管紧张肽Ⅲ、脑啡肽、内啡肽、睡眠肽、记忆肽、松果肽、谷胱甘肽、棕榈酰二肽-5、棕榈酰三肽-1、棕榈酰三肽 -5、棕榈酰四肽-7、棕榈酰五肽-3、棕榈酰六肽、棕榈酰六肽-6、肉豆蔻五肽-11、乙酰四胜肽-5、乙酰基六肽-8、乙酰基八肽-1、二肽蛇毒素、五肽-3、六肽-8、六肽-9、六肽-10、肌肽、三肽-1、二肽-2、二肽-4、铜胜肽中的一种或多种。
优选的，步骤(1)中所述的乳化剂A为司盘20、司盘40、司盘60、司盘 80、司盘85中的一种与吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温85中的一种按质量比9:1～1:9复配而成。
优选的，步骤(1)中所述的油相为中链甘油三酯(MCT)、大豆油、薄荷油、橄榄油、茶油、肉豆蔻酸异丙酯(IPM)、棕榈酸异丙酯、油酸、油酸乙酯、辛酸癸酸甘油三酯中的一种或多种。
优选的，步骤(2)中所述的乳化剂B为平平加-O、OP-10、蓖麻油聚氧乙烯醚、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)中的一种或多种。
优选的，步骤(2)中所述的助乳化剂为甘油、丙二醇、正丁醇、乙醇、卡必醇中的一种或多种。
优选的，步骤(3)中所述的凝胶骨架材料为卡波姆、黄原胶、明胶、卡拉胶、壳聚糖、羧甲基纤维素钠、聚维酮、聚乙烯醇中的一种或多种。
优选的，步骤(2)中所述的含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳的平均液滴直径在20nm～100nm。
优选的，步骤(3)中所述的含多肽类药物复合纳米乳凝胶的透皮制剂中多肽类药物的终浓度为500μg/mL。
本发明还提供由上述制备方法制得的含多肽类药物复合纳米乳凝胶的透皮制剂。
采用低能乳化法制备含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳，多肽类药物被包载于复合纳米乳的内水相中，再向含多肽类药物的复合纳米乳中加入凝胶基质，自然溶胀形成水凝胶后用于多肽类药物的透皮给药。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)制备工艺简单，条件温和，有利于保持多肽类药物的活性，且易于工业化生产；
(2)复合纳米乳的构成组分是良好的透皮吸收促进剂，可改变角质层的流动性，使其细胞紧密连接变得松散，易于药物穿透；
(3)纳米乳粒径小，渗透性强，容易跨越细胞间隙或进入毛囊等部位，提高了透皮吸收率；
(4)将纳米乳固定在水凝胶中，易涂展、无油腻、易洗除，顺应性好；
(5)水凝胶中的壳聚糖组分能够改变角质层角蛋白的二级结构，同时增加角质层的含水量，增强角质细胞膜的流动性，提高药物的透皮吸收效果；
(6)通过调整水凝胶基质比例，可实现长效控释给药。
附图说明
图1为本发明实施例2中制得的含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳的透射电镜图；
图2为本发明实施例2中制得的含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳的粒度分布图；
图3为本发明实施例2中制得的含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳的体外透皮释放曲线；
图4为本发明实施例2中制得的含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳的体外透皮释放曲线；
图5为本发明实施例2中制得的含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳凝胶的体外透皮释放曲线。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1
将醋酸亮丙瑞林(20mg)溶于1mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘60 (3.2g)与吐温60(0.8g)的混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加IPM (5.0g)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂OP-10(3.4g)与助乳化剂卡必醇(0.8g) 并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(25.8mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将卡波姆940(0.4g)加入上述W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再用三乙醇胺调节pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳凝胶。
实施例2
将醋酸亮丙瑞林(20mg)溶于1mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘80 (3.2g)与吐温80(0.8g)混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加IPM (5.0g)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂OP-10(3.4g)与助乳化剂卡必醇(0.8g) 并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(25.0mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将上述W/O/W型复合纳米乳置于透射电镜下观察，结果如图1所示，可以看到所制备的W/O/W型复合纳米乳在自然晾干后，呈现不十分圆整的类球形结构，平均粒径为20-100nm。这可能是由于组成复乳的油相与乳化剂为液体或柔性分子，在干燥过程中受张力作用发生形变导致。通过激光纳米粒经仪测定的粒度分布如图2所示，平均粒径为139.1± 24.1nm，粒径分布较为均匀；与透射电镜图相比，激光散射法测定的粒径偏大，因其测定的是纳米乳在水相中的水化粒径。
将卡波姆940(0.3g)加入上述W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再加入壳聚糖(Mw≈8000，脱乙酰度85％)溶液0.1mL(pH5.0，1.0g/mL)，最后用三乙醇胺调pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳凝胶。
FITC标记的醋酸亮丙瑞林(FITC-LPA)的制备：
精密称取醋酸亮丙瑞林(200mg)与FITC(32mg)，溶于适量的碳酸盐缓冲液(pH9.0)中，避光常温搅拌反应24h。将反应液转移于离心管中，再向离心管中加入适量的无水乙醇，静置1h；然后10000rpm离心15min，弃去上清液，沉淀用无水乙醇洗三遍，最后用氮气吹干，得橙黄色粉末，即FITC-LPA。
FITC-LPA荧光分析条件：
采用F-4600型荧光分光光度计(日本，日立)定量测定FITC-LPA的含量。激发波长494nm，发射波长525nm，激发波长与发射波长的狭缝宽度均为10nm，强度900V，室温扫描。
标准曲线的制备：
精密称取FITC-LPA(2.5mg)至25mL容量瓶，用pH7.4磷酸盐缓冲液配置成1mg/mL的标准储备液，再用磷酸盐缓冲液分别稀释成0.05ug/mL、0.1 ug/mL、0.5ug/mL、1ug/mL、5ug/mL、10ug/mL的标准溶液。用F-4600型荧光分光光度计测定FITC-LPA的荧光强度。以浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标绘制标准曲线，标准曲线方程为：
F＝581.6C+177.2(r＝0.999) 式(1)
体外透皮吸收实验：
采用改良的Franz扩散池，该装置的有效接触面积为2.5cm2，接收室容积为6.5mL。选用昆明小鼠皮肤作为体外透皮皮肤模型。将昆明小鼠麻醉后，将被毛剪短，用适量脱毛膏均匀涂于小鼠腹部，3min后刮去腹部的毛，用沾有生理盐水的棉球清洗小鼠腹部皮肤，再用剪刀剪取小鼠腹部皮肤，剥离皮下脂肪组织，用生理盐水反复冲洗干净。将皮肤平整固定在扩散池的给药室与接收室之间，真皮层面向接收室，与接收液完全接触，排除气泡。接收液为磷酸盐缓冲液(pH7.4, 0.15M)。分别于4h、8h、12h、24h、36h、48h、72h与96h从接收池取样 2mL，并补充等体积的同温新鲜空白接收液。以式(1)所示的标准曲线方程计算接收液中的药物浓度。
按照下式计算单位面积累积透皮渗透量Q：
式中Q为第n次取样时的累积渗透量，V为接收池体积，Cn为第n次取样测得的接收液中的药物浓度(μg/mL)，Vi为第i(i＝n-1)次取样的体积，Ci为第i次取样测得的接收液中的药物浓度，A为扩散渗透面积。
体外透皮吸收实验结果如图3-5所示，可以看出，与醋酸亮丙瑞林水溶液相比，醋酸亮丙瑞林复合纳米乳及醋酸亮丙瑞林复合纳米乳凝胶的单位面积累积透皮渗透量显著提高(96h的累积渗透量分别达到水溶液的21.9倍与24.1倍)，显示出良好的透皮渗透效果。
醋酸亮丙瑞林复合纳米乳凝胶在48h内累积渗透率低于醋酸亮丙瑞林复合纳米乳。这可能是由于纳米乳首先要从凝胶的空间网络结构向外渗透到皮肤接触面，才能开始透皮转运，透皮速率受到凝胶的控制。但是，复合纳米乳凝胶的累积透皮释药曲线在48h后仍保持增长，而复合纳米乳的透皮吸收在48h后已基本饱和，表明复合纳米乳凝胶具有更好的长效释放能力。
家兔急性皮肤刺激性试验：
试验前24小时将家兔背部脊椎两侧毛脱掉，不可损伤毛皮，脱毛面积左右各3cm×3cm。取实施例2制得的复合纳米乳凝胶(受试样品)适量直接涂布在皮肤上，用纱布覆盖，再用胶布加以固定。对侧皮肤作为对照。采用封闭实验，敷用时间为4h。实验结束后，用温水清除残留受试样品。于清除受试样品后的 1h、24h、48h、和72h观察受试部位的皮肤反应。按表1进行皮肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，根据24、48和72h各观察点最高积分均值，按表2判定皮肤刺激强度。
表1皮肤刺激反应评分
表2皮肤刺激强度分级
表3醋酸亮丙瑞林W/O/W型纳米乳凝胶对家兔急性皮肤刺激性试验结果
由表3可以看出，抹完受试物24h后皮肤表面出现轻微的红肿现象，36h 后红肿现象消失；按照评分对照刺激强度分级表明W/O/W型复合纳米乳凝胶对皮肤无刺激性。
实施例3
将醋酸亮丙瑞林(20mg)溶于1mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘80 (3.2g)与吐温60(0.8g)混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加IPM (5.0g)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂Labrasol(3.4g)与助乳化剂乙醇(0.8g) 并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(25.0mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将卡波姆940(0.3g)加入上述W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再加入壳聚糖(Mw≈8000，脱乙酰度85％)溶液0.1mL(pH5.0，1.0g/mL)，最后用三乙醇胺调pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳凝胶。
实施例4
将醋酸亮丙瑞林(20mg)溶于1mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘80 (3.2g)与吐温60(0.8g)混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加IPM (5.0g)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂平平加-O(3.4g)与助乳化剂正丁醇(0.8 g)并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(25.0mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将卡波姆940(0.3g)加入上述W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再加入壳聚糖(Mw≈8000，脱乙酰度85％) 溶液0.1mL(pH5.0，1.0g/mL)，最后用三乙醇胺调pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成。即得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳凝胶。
实施例5
将醋酸亮丙瑞林(20mg)溶于1mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘80 (3.2g)与吐温80(0.8g)混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加薄荷油(5.0g)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂OP-10(3.4g)与助乳化剂卡必醇(0.8 g)并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(25.0mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将卡波姆940(0.3g)加入上述W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再加入壳聚糖(Mw≈8000，脱乙酰度85％) 溶液0.1mL(pH5.0，1.0g/mL)，最后用三乙醇胺调pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型纳米乳复合凝胶。
实施例6
将醋酸亮丙瑞林(20mg)溶于1mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘80 (3.2g)与吐温80(0.8g)混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加辛酸癸酸甘油三酯(5.0g)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂OP-10(3.4g)与助乳化剂卡必醇(0.8g)并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(25.0mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将卡波姆940(0.3g) 加入上述W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再加入壳聚糖(Mw≈8000，脱乙酰度85％)溶液0.1mL(pH5.0，1.0g/mL)，最后用三乙醇胺调pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型纳米乳复合凝胶。
包封率与载药量的测定：
采用凝胶渗透层析柱(Sephadex G50)，以生理盐水为洗脱液，洗脱分离并收集载FITC-LPA的复合纳米乳与游离的FITC-LPA两个组分。测量载FITC-LPA 的复合纳米乳组分体积后，以实施例2中的荧光分析条件测定，并根据标准曲线方程计算复合纳米乳中包载的FITC-LPA药物浓度C。另取FITC-LPA纳米复合乳原液，直接测定原液中FITC-LPA总浓度C0。按下式计算包封率(Encapsulation Efficiency，EE)与载药量(Drug Loading Content，LC)：
EE(％)＝C/C0×100％ 式(3)
LC(％,w/w)＝C×V/(C×V+W)×100％ 式(4)
式中C：被包裹的FITC-LPA浓度，C0：FITC-LPA纳米复合乳原液中 FITC-LPA总浓度，V：FITC-LPA纳米复合乳组分总体积，W：FITC-LPA纳米复合乳中油相与乳化剂的总质量。
实施例2-6所制得的含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳的包封率与载药量结果如表4所示。
表4醋酸亮丙瑞林W/O/W型复合纳米乳的包封率与载药量
由表4可知，5种不同处方的W/O/W型醋酸亮丙瑞林复合纳米乳的包封率均超过90％，表明本发明使用的制备工艺对醋酸亮丙瑞林肽的包载效率较高。
实施例7
将醋酸亮丙瑞林(20mg)溶于1mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘80 (3.2g)与吐温80(0.8g)混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加IPM (5.0g)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂OP-10(3.4g)与助乳化剂甘油(0.8g) 并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(24.8mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将黄原胶(0.8g)加入上述W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再加入壳聚糖(Mw≈8000，脱乙酰度85％)溶液 0.2mL(pH5.0，1.0g/mL)，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含醋酸亮丙瑞林的 W/O/W型复合纳米乳凝胶。
实施例8
将醋酸亮丙瑞林(20mg)溶于1mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘60 (3.2g)与吐温60(0.8g)混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加油酸乙酯(5.0g)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂OP-10(3.4g)与助乳化剂卡必醇(0.8 g)并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(25.0mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将卡波姆940(0.4g)加入上述W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再加入壳聚糖(Mw≈8000，脱乙酰度85％) 溶液0.1mL(pH5.0，1.0g/mL)，最后用三乙醇胺调节pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳凝胶。
实施例9
将生长激素释放激素(20mg)溶于1mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘80(3.2g)与吐温80(0.8g)混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加 IPM(5.0g)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂蓖麻油聚氧乙烯醚(3.4g)与助乳化剂卡必醇(0.8g)并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(25.0mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将卡波姆940(0.3g)加入上述W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再加入壳聚糖(Mw≈8000，脱乙酰度85％)溶液0.1mL(pH5.0，1.0g/mL)，最后用三乙醇胺调pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含生长激素释放激素的W/O/W型复合纳米乳凝胶。
实施例10
将胰岛素(20mg)溶于1mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘80(3.2g) 与吐温80(0.8g)混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加IPM(5.0g) 至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂OP-10(3.4g)与助乳化剂卡必醇(0.8g)并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(25.0mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将卡波姆940(0.3g)加入上述W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再加入壳聚糖(Mw≈8000，脱乙酰度85％)溶液0.1mL(pH5.0，1.0g/mL)，最后用三乙醇胺调pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含胰岛素的W/O/W型复合纳米乳凝胶。
实施例11
将催乳素释放激素(20mg)溶于1mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘 85(0.8g)与吐温85(3.2g)混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加橄榄油(5.0g)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂蓖麻油聚氧乙烯醚(3.4g)与助乳化剂卡必醇(0.8g)并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(25.0mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将卡波姆940(0.3g)加入上述W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再加入壳聚糖(Mw≈8000，脱乙酰度85％)溶液0.1mL(pH5.0，1.0g/mL)，最后用三乙醇胺调pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含胰岛素的W/O/W型复合纳米乳凝胶。
实施例12
将促黑色素细胞释放激素(20mg)溶于1mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘80(4.5g)与吐温80(0.5g)混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加油酸乙酯(4.0g)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂Labrasol(4.8g)与助乳化剂丙二醇(0.8g)并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(51mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将卡波姆940(0.25g)加入上述W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再加入壳聚糖(Mw≈8000，脱乙酰度85％)溶液0.08mL(pH5.0，1.0g/mL)，最后用三乙醇胺调pH值至 6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含胰岛素的W/O/W型复合纳米乳凝胶。
实施例13
将乙酰四胜肽-5(2mg)溶于0.01mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘 80(0.03g)与吐温80(0.27g)混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加中链甘油三酯(0.69g)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂OP-10(3g)与助乳化剂甘油(1g)并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(95.0mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将卡波姆940(1.5g)加入上述W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再加入壳聚糖(Mw≈8000，脱乙酰度85％)溶液0.5mL(pH5.0，1.0g/mL)，最后用三乙醇胺调pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含胰岛素的W/O/W型复合纳米乳凝胶。
实施例14
将棕榈酰五肽-3(25mg)溶于0.1mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘 60(0.27g)与吐温60(0.03g)混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加橄榄油(0.69g)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O 型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂OP-10(20g)与助乳化剂卡必醇 (4g)并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(25.0mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将卡波姆940(0.375g)加入上述 W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再加入壳聚糖(Mw≈8000，脱乙酰度 85％)溶液0.125mL(pH5.0，1.0g/mL)，最后用三乙醇胺调pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含胰岛素的W/O/W型复合纳米乳凝胶。
实施例15
将铜胜肽(25mg)溶于0.1mL的PBS缓冲液(pH7.4)，加入司盘60(0.27 g)与吐温60(0.03g)混合乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加橄榄油(0.69 g)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O型纳米乳。将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂OP-10(8g)与助乳化剂卡必醇(16g)并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液(25.0mL)至澄清透明，得含醋酸亮丙瑞林的W/O/W型复合纳米乳。将卡波姆940(0.375g)加入上述W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再加入壳聚糖(Mw≈8000，脱乙酰度85％)溶液 0.125mL(pH5.0，1.0g/mL)，最后用三乙醇胺调pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含胰岛素的W/O/W型复合纳米乳凝胶。
除以上实施例中涉及的醋酸亮丙瑞林、生长激素释放激素、胰岛素、催乳素释放激素、促黑色素细胞释放激素、乙酰四胜肽-5、棕榈酰五肽-3、铜胜肽外，多肽类药物还可以有促皮质素、锌促皮质素、磷锌促皮质素、明胶促皮质素、羧纤促皮质素、丝赖促皮质18肽、甘精促皮质18肽、锌促皮质24肽、促皮质24 肽、促皮质25肽、促皮质28肽、促性腺素释放激素、促甲状腺素释放激素、生长激素释放激素(CHRH)、促黑色素细胞抑制激素(MRIH)、催乳素抑制激素 (PIH)、促皮质素释放激素(LRH)、戈舍瑞林、曲普瑞林、胸腺素、胰高血糖素、降钙素、十肽血管紧张肽Ⅰ、八肽血管紧张肽Ⅱ、七肽血管紧张肽Ⅲ、脑啡肽、内啡肽、睡眠肽、记忆肽、松果肽、谷胱甘肽、棕榈酰二肽-5、棕榈酰三肽 -1、棕榈酰三肽-5、棕榈酰四肽-7、五肽-3、棕榈酰六肽、棕榈酰六肽-6、肉豆蔻五肽-11、乙酰基六肽-8、乙酰基八肽-1、二肽蛇毒素、六肽-8、六肽-9、六肽 -10、肌肽、三肽-1、二肽-2、二肽-4等。

Claims (10)

1.一种含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：
(1)将多肽类药物溶于PBS缓冲液，加入乳化剂A并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加油相至澄清透明，得含多肽类药物的W/O型纳米乳；其中，PBS缓冲液、乳化剂A、油相按质量比(1～10):(30～50):(40～69)配比；
(2)将所得W/O型纳米乳作为复合纳米乳的油相，加入乳化剂B与助乳化剂并搅拌均匀，室温下边搅拌边滴加PBS缓冲液至澄清透明，得含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳；其中，W/O型纳米乳、乳化剂B、助乳化剂、PBS缓冲液按质量百分比(1～40):(3～40):(1～32):(50～95)配比；乳化剂与助乳化剂按质量比6:1～1:2配比；
(3)将凝胶骨架材料加入到上述含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳中，待其充分溶胀，再调节pH值至6.5，轻微搅拌至凝胶自然形成，即得含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶；其中，凝胶骨架材料占W/O/W型复合纳米乳质量的0.5％～2％。
2.根据权利要求1所述的一种含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的多肽类药物为促皮质素、锌促皮质素、磷锌促皮质素、明胶促皮质素、羧纤促皮质素、丝赖促皮质18肽、甘精促皮质18肽、锌促皮质24肽、促皮质24肽、促皮质25肽、促皮质28肽、促性腺素释放激素、促甲状腺素释放激素、生长激素释放激素、生长激素抑制素、促黑色素细胞抑制激素、促黑色素细胞释放激素、催乳素释放激素、催乳素抑制激素、促皮质素释放激素、醋酸亮丙瑞林、戈舍瑞林、曲普瑞林、胸腺素、胰岛素、胰高血糖素、降钙素、十肽血管紧张肽Ⅰ、八肽血管紧张肽Ⅱ、七肽血管紧张肽Ⅲ、脑啡肽、内啡肽、睡眠肽、记忆肽、松果肽、谷胱甘肽、棕榈酰二肽-5、棕榈酰三肽-1、棕榈酰三肽-5、棕榈酰四肽-7、棕榈酰五肽-3、棕榈酰六肽、棕榈酰六肽-6、肉豆蔻五肽-11、乙酰四胜肽-5、乙酰基六肽-8、乙酰基八肽-1、二肽蛇毒素、五肽-3、六肽-8、六肽-9、六肽-10、肌肽、三肽-1、二肽-2、二肽-4、铜胜肽中的一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的一种含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的乳化剂A为司盘20、司盘40、司盘60、司盘80、司盘85中的一种与吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温85中的一种按质量比9:1～1:9复配而成。
4.根据权利要求1或2所述的一种含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的油相为中链甘油三酯、大豆油、薄荷油、橄榄油、茶油、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、油酸、油酸乙酯、辛酸癸酸甘油三酯中的一种或多种。
5.根据权利要求1或2所述的一种含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的乳化剂B为平平加-O、OP-10、蓖麻油聚氧乙烯醚、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯中的一种或多种。
6.根据权利要求1或2所述的一种含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的助乳化剂为甘油、丙二醇、正丁醇、乙醇、卡必醇中的一种或多种。
7.根据权利要求1或2所述的一种含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的凝胶骨架材料为卡波姆、黄原胶、明胶、卡拉胶、壳聚糖、羧甲基纤维素钠、聚维酮、聚乙烯醇中的一种或多种。
8.根据权利要求1或2所述的一种含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳的平均液滴直径在20nm～100nm。
9.根据权利要求1或2所述的一种含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的含多肽类药物复合纳米乳凝胶的透皮制剂中多肽类药物的终浓度为500μg/mL。
10.一种权利要求1～9任一项所述的制备方法得到的含多肽类药物的W/O/W型复合纳米乳凝胶透皮制剂。
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