CN109517830A - 大戟二萜类化合物合成基因cyp71d452、其编码的蛋白质与应用 - Google Patents

大戟二萜类化合物合成基因cyp71d452、其编码的蛋白质与应用 Download PDF

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蒋继宏
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    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
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Abstract

大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452、其编码的蛋白质与应用，涉及分子生物学、基因工程领域，本发明通过基因筛选，异源表达，酶活检测等技术对一个药用植物大戟的CYP450进行了功能鉴定，该酶可以在蓖麻烯及其衍生物的9位加一个羟基，依据细胞色素P450基因命名法则命名为CYP71D452。本发明提供的CYP71D452基因可应用于通过合成生物学或代谢工程技术异源合成和生产二萜类化合物，也可用于调节植物二萜类化合物的生物合成，及通过生物技术提高大戟中活性二萜类化合物的含量。同时该基因也可以用于大戟的杂交育种和优良品种选育。

Description

大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452、其编码的蛋白质与 应用
技术领域
本发明涉及分子生物学、基因工程领域，具体地涉及一种大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452、其编码的蛋白质与应用。
背景技术
药用植物次生代谢产物是其生物活性成分的主要来源。近年来，测序技术的发展为药用植物生物活性成分合成相关基因的发掘与鉴定奠定了前期研究基础。生物活性成分合成相关基因的克隆及功能验证也为代谢工程和合成生物学研究提供必要的生物元件，为药用植物的选种育种及品质改良提供指导。
京大戟是药用植物大戟(Euphorbia pekinensis Rupr)的干燥根，在临床上主要用于治疗水肿胀满、胸腹积水、痰饮积聚、气逆咳喘、二便不利、痈肿疮毒、瘰疬痰核等病症，但由于其刺激性，限制了其大量的应用。大量的研究表明二萜类化合物是京大戟的主要活性成分，具有显著的抗肿瘤活性。目前已经从京大戟中分离了大量的二萜类化合物，如casbane烷型二萜京大戟素(euphpekinensin)，异京大戟素，pekinenal，pekinenin A、B、C、D、E、F、G，月腺大戟素B；千金二萜烷(ingol)型二萜3,12-O-diacetyl-7-O-benzoyl-8-methoxyingol，ingol-12-acetate，ingol等；西松烷(cembrane)型二萜(－)-(1S)-15-hydroxy-18-carboxycembrene等。其中casbane烷型二萜和千金二萜烷型二萜都以蓖麻烯为中间代谢物通过各种不同的CYP450酶催化衍生而来。
细胞色素P450(cytochromeP450,简称CYP450)是血红蛋白大家族中极其重要的成员，催化有机化合物的氧化还原反应是它重要的效用，CYP450是单加氧酶中的一种，所以又称做单加氧蛋白P450。CYP450在自然界以单体或二聚体的形式普遍存在，参与植物中多种结构产物的修饰，特别是多结构类型的萜类化合物的合成。在千金二萜烷型二萜的生物合成过程中需要在蓖麻烯5位和9位碳上先发生氧化，而这两个部位的氧化需要CYP71D家族和CYP726A家族的CYP450酶的参与。在续随子中CYP71D445催化9位碳上的氧化，CYP726A27催化5位碳上的氧化，这两个酶在乙醇脱氢酶同时存在的情况下可以将casbane烷型结构转变为千金二萜烷型结构，在此基础上形成多种骨架和活性的二萜。
发明内容
作为本发明的一个方面，提供了一个参与大戟活性二萜类化合物合成途径的细胞色素P450基因CYP71D452，其编码的蛋白能在蓖麻烯及其衍生物的9位加一个羟基，其核苷酸序列为下列序列之一：
(1)如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；
(2)如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列经添加、替换、插入或缺失一个或几个核苷酸而成的同源序列；
(3)如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的等位基因或所述等位基因衍生物的核苷酸序列。
本发明还提供了一种表达载体，其含有上述大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452的全序列或部分片段。
本发明还提供了一种转基因细胞系，其含有上述大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452的全序列或部分片段。
本发明还提供了一种工程菌，其含有上述大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452的全序列或部分片段。
本发明还提供了一种转基因植物，其含有上述大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452的全序列或部分片段。
本发明还提供了上述大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452在大戟育种中的应用。
本发明还提供了用于PCR扩增上述基因cDNA序列的特异性引物对，包括：如SEQ IDNo.2所示的正向引物和如SEQ ID No.3所示的反向引物。
本发明还提供了大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452编码的蛋白质，其氨基酸序列为下列序列之一：
(1)如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列；
(2)如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列经替换、缺失、或添加一个或几个氨基酸残基形成的具有同等功能的氨基酸序列。
本发明还提供了上述蛋白质在大戟育种中的应用。
本发明还提供了上述基因或上述蛋白质在调节和生产植物二萜类化合物中的应用。
本发明的有益效果：
本发明通过基因筛选，异源表达，酶活检测等技术对一个药用植物大戟的CYP450进行了功能鉴定，该酶可以在蓖麻烯及其衍生物的9位加一个羟基，依据细胞色素P450基因命名法则命名为CYP71D452。本发明提供的CYP71D452基因可应用于通过合成生物学或代谢工程技术异源合成和生产二萜类化合物，也可用于调节植物二萜类化合物的生物合成，及通过生物技术提高大戟中活性二萜类化合物的含量。同时该基因也可以用于大戟的杂交育种和优良品种选育。
具体实施方式：
本发明提供的项目实施方案用于说明本发明，但是不局限于本发明的研究范围。如果没有特别指出，本发明实施中的技术手段为本研究领域的常用技术，所用原料为市场所购。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1大戟中CYP450基因的克隆
1、根据大戟的转录组数据，通过拼接、注释、筛选等操作，获得大戟活性二萜类化合物合成途径中的候选CYP450基因cDNA序列。
2、使用引物设计软件Primer设计该候选CYP450基因的引物，引物序列为：
正向引物：ATGATGGAGTTTCAATTAG(SEQ ID No.2)
反向引物：TTAATTGGTTGAAGTTGTT(SEQ ID No.3)
引物由上海生工生物技术有限责任公司合成。
3、取生长旺盛的大戟植株叶片，使用天根生物有限公司植物总RNA提取试剂盒提取总RNA，利用TAKARA逆转录试剂盒进行逆转录获得cDNA，以cDNA为模板扩增CYP71D452的基因序列。
4、琼脂糖凝胶电泳检测在1500bp处出现特异性条带，对目标条带进行切胶回收，胶回收产物连接到TAKARA的pMD18-T载体，并转化大肠杆菌DH5a，挑取阳性克隆送上海生工生物有限公司测序，选择和保存序列正确的CYP71D452基因克隆用于后续表达载体的构建。
实施例2 CYP71D452基因序列的生物信息学
本发明涉及的大戟活性二萜类化合物合成代谢途径CYP450基因CYP71D452，该基因全长开放阅读框(ORF)的长度为1560bp，编码519个氨基酸，如SEQ ID No.1和SEQ IDNo.4所示。将CYP71D452全长开放阅读框用BLAST程序在NCBI数据库中进行同源检索，该基因在氨基酸水平上比对分析显示，大戟CYP71D452基因编码的蛋白质氨基酸序列与其它物种的同源性较低。
实施例3 CYP71D452基因真核表达及功能分析
1、酵母表达载体的构建
根据基因CYP71D452的编码序列及酶切位点分析结果，对CYP71D452设计带有HindIII酶切位点附件序列的引物，用该引物对CYP71D452的ORF进行扩增，扩增产物连接到pMD18-T后进行测序验证，最后用诺唯赞公司的无缝克隆试剂盒将目的基因CYP71D452连接到用HindIII酶切过的酵母表达载体pYES2上，通过测序确定载体pYES2-CYP71D452的正确性。
2、酵母转化
利用醋酸锂转化法将pYES2-CYP71D452载体转入酿酒酵母菌株InvSci中，通过菌落PCR法挑选阳性克隆。
3、诱导表达
挑取阳性单克隆接种于5ml SD液体培养基中，30℃，200rpm培养24h；按照1∶50的接种量接入50ml SD液体培养基中，30℃，200rpm，培养2-4h至对数中期，2000×g离心去上清，用去离子水洗涤菌体两次后转接入含半乳糖的SD诱导培养基中，30℃，200rpm，诱导两小时后加入蓖麻烯作为底物，继续培养24h。
4、催化产物的提取与鉴定
加入等体积正己烷对催化产物进行涡旋提取。提取的产物进行GC-MS分析，结果发现含有CYP71D452基因重组表达载体pYES2-CYP71D452的催化组与含空载pYES2对照组相比有新物质产生，经分析显示该新产物为9-羟基蓖麻烯。
序列表
<110> 江苏师范大学
<120> 大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452、其编码的蛋白质与应用
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1560
<212> DNA
<213> 大戟(Euphorbia pekinensis Rupr)
<400> 1
atgatggagt ttcaattagc ctcctcatca gaatgggcaa taatgtccat gcttagcctc 60
atcttcctta tcctgatatg gaagaaactc aaaaaaccaa gtccaaacct tccaccaggg 120
ccatggagac tgcctctgat aggaagtatg caccacttat ttggaggttt accacaccag 180
aaaatgagag acttagccaa caaatatgga cccattatgc atcttcagct cggcgaggtc 240
acaaacatag tgatttcatc tccagaagct gctcaacaag tcctcaaaac ccatgatctc 300
atctttgctc aaaggcctct aataagtgct gctaggtgta ccagctatga gtacaccaac 360
atcacctttt ctccctacgg agattactgg agacagttga aaaagatttt cacaatggag 420
ttcctgggct ccaaaagagt cgagtcgttc aggtcgatca gggaagatga aacacgaagg 480
ctcatcgact cgataaatat taattcatcg tctactgatc aaggtaataa attagctatt 540
aacttttcca agatgatcac ttccttaatc tattgcatca cttcaagagc agcctatggg 600
aagatatggg aaggggaaga ttcaattgta acagcaattg agaatatatt gtttgagatt 660
gggaaaggga ttagtatagc tgatgcctat ccttctataa aatgtcttga gatgttcagt 720
gggatcaata aaagagttga aaaatttcac aaacaacttg atcaaactgc ccaggcaatt 780
ctcaatcaac acagatctga tagactaaca aagatcagta caatcaattc gggtattaaa 840
gaagatcttg tagatgttct tttgaatctt caagaaaaag gggaccttca aatccctttg 900
actgatgaca ccatcaaagc actcatcatg gacacatttg ctggtggtgt tgatagttca 960
gctgcaacaa tggaatggac aatgtcggaa ctgatgaaaa acccaagagt aatggaaaag 1020
acgcaagcag aattaaggca gaaatataat gcaagaggaa gagtagatga agcagatttg 1080
aatgaattaa agtatctaaa tttggtaatc aaagaaagct tcaggctgca cccaaatgtt 1140
ccgttgttga ttccaagaga atgcagagag agttgtgtga tcggcggata tgatattcca 1200
gtcaaatcga gaatcatggt caatacatgg gcaatgggaa gagattccaa atattgggat 1260
gaccctgagg aattcagacc ggagagattt attgatagtt catttgattt tagaggaaat 1320
aaatttgagt accttccatt tggtgcggga aggagaagct gtcctggaat gacgttcggg 1380
ttagctaatg ttgagcttcc gcttgccaag ttgctctatc attttgattg gaaacttgcc 1440
gatggaatca caccggaaaa tcttgacacg actgaagcaa ttggtgttac tactaaaagg 1500
aaatttaatc tatgcatcat tcccactcca taccatcctc caacaacttc aaccaattaa 1560
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
atgatggagt ttcaattag 19
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ttaattggtt gaagttgtt 19
<210> 4
<211> 520
<212> PRT
<213> 大戟(Euphorbia pekinensis Rupr)
<400> 4
Met Met Met Glu Phe Gln Leu Ala Ser Ser Ser Glu Trp Ala Ile Met
1 5 10 15
Ser Met Leu Ser Leu Ile Phe Leu Ile Leu Ile Trp Lys Lys Leu Lys
20 25 30
Lys Pro Ser Pro Asn Leu Pro Pro Gly Pro Trp Arg Leu Pro Leu Ile
35 40 45
Gly Ser Met His His Leu Phe Gly Gly Leu Pro His Gln Lys Met Arg
50 55 60
Asp Leu Ala Asn Lys Tyr Gly Pro Ile Met His Leu Gln Leu Gly Glu
65 70 75 80
Val Thr Asn Ile Val Ile Ser Ser Pro Glu Ala Ala Gln Gln Val Leu
85 90 95
Lys Thr His Asp Leu Ile Phe Ala Gln Arg Pro Leu Ile Ser Ala Ala
100 105 110
Arg Cys Thr Ser Tyr Glu Tyr Thr Asn Ile Thr Phe Ser Pro Tyr Gly
115 120 125
Asp Tyr Trp Arg Gln Leu Lys Lys Ile Phe Thr Met Glu Phe Leu Gly
130 135 140
Ser Lys Arg Val Glu Ser Phe Arg Ser Ile Arg Glu Asp Glu Thr Arg
145 150 155 160
Arg Leu Ile Asp Ser Ile Asn Ile Asn Ser Ser Ser Thr Asp Gln Gly
165 170 175
Asn Lys Leu Ala Ile Asn Phe Ser Lys Met Ile Thr Ser Leu Ile Tyr
180 185 190
Cys Ile Thr Ser Arg Ala Ala Tyr Gly Lys Ile Trp Glu Gly Glu Asp
195 200 205
Ser Ile Val Thr Ala Ile Glu Asn Ile Leu Phe Glu Ile Gly Lys Gly
210 215 220
Ile Ser Ile Ala Asp Ala Tyr Pro Ser Ile Lys Cys Leu Glu Met Phe
225 230 235 240
Ser Gly Ile Asn Lys Arg Val Glu Lys Phe His Lys Gln Leu Asp Gln
245 250 255
Thr Ala Gln Ala Ile Leu Asn Gln His Arg Ser Asp Arg Leu Thr Lys
260 265 270
Ile Ser Thr Ile Asn Ser Gly Ile Lys Glu Asp Leu Val Asp Val Leu
275 280 285
Leu Asn Leu Gln Glu Lys Gly Asp Leu Gln Ile Pro Leu Thr Asp Asp
290 295 300
Thr Ile Lys Ala Leu Ile Met Asp Thr Phe Ala Gly Gly Val Asp Ser
305 310 315 320
Ser Ala Ala Thr Met Glu Trp Thr Met Ser Glu Leu Met Lys Asn Pro
325 330 335
Arg Val Met Glu Lys Thr Gln Ala Glu Leu Arg Gln Lys Tyr Asn Ala
340 345 350
Arg Gly Arg Val Asp Glu Ala Asp Leu Asn Glu Leu Lys Tyr Leu Asn
355 360 365
Leu Val Ile Lys Glu Ser Phe Arg Leu His Pro Asn Val Pro Leu Leu
370 375 380
Ile Pro Arg Glu Cys Arg Glu Ser Cys Val Ile Gly Gly Tyr Asp Ile
385 390 395 400
Pro Val Lys Ser Arg Ile Met Val Asn Thr Trp Ala Met Gly Arg Asp
405 410 415
Ser Lys Tyr Trp Asp Asp Pro Glu Glu Phe Arg Pro Glu Arg Phe Ile
420 425 430
Asp Ser Ser Phe Asp Phe Arg Gly Asn Lys Phe Glu Tyr Leu Pro Phe
435 440 445
Gly Ala Gly Arg Arg Ser Cys Pro Gly Met Thr Phe Gly Leu Ala Asn
450 455 460
Val Glu Leu Pro Leu Ala Lys Leu Leu Tyr His Phe Asp Trp Lys Leu
465 470 475 480
Ala Asp Gly Ile Thr Pro Glu Asn Leu Asp Thr Thr Glu Ala Ile Gly
485 490 495
Val Thr Thr Lys Arg Lys Phe Asn Leu Cys Ile Ile Pro Thr Pro Tyr
500 505 510
His Pro Pro Thr Thr Ser Thr Asn
515 520

Claims (10)

1.一种大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452，其特征在于，其核苷酸序列为下列序列之一：
(1)如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；
(2)如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列经添加、替换、插入或缺失一个或几个核苷酸而成的同源序列；
(3)如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的等位基因或所述等位基因衍生物的核苷酸序列。
2.一种表达载体，其特征在于：所述表达载体含有权利要求1所述大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452的全序列或部分片段。
3.一种转基因细胞系，其特征在于：所述转基因细胞系含有权利要求1所述大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452的全序列或部分片段。
4.一种工程菌，其特征在于，所述工程菌含有权利要求1所述大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452的全序列或部分片段。
5.一种转基因植物，其特征在于，所述转基因植物含有权利要求1所述大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452的全序列或部分片段。
6.权利要求1所述大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452在大戟育种中的应用。
7.用于PCR扩增权利要求1所述基因cDNA序列的特异性引物对，其特征在于，包括：如SEQ ID No.2所示的正向引物和如SEQ ID No.3所示的反向引物。
8.大戟二萜类化合物合成基因CYP71D452编码的蛋白质，其特征在于：所述蛋白质的氨基酸序列为下列序列之一：
(1)如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列；
(2)如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列经替换、缺失、或添加一个或几个氨基酸残基形成的具有同等功能的氨基酸序列。
9.权利要求8所述蛋白质在大戟育种中的应用。
10.权利要求1所述的基因或权利要求8所述蛋白质在调节和生产植物二萜类化合物中的应用。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101928715A (zh) * 2009-06-30 2010-12-29 中国中医科学院中药研究所 丹参一细胞色素P450(SmP450)基因及其编码的蛋白和应用
WO2016107920A1 (en) * 2014-12-30 2016-07-07 Evolva Sa Production of macrocyclic diterpenes in recombinant hosts
CN106244605A (zh) * 2016-09-13 2016-12-21 四川农业大学 Cyp71z18基因及其编码蛋白与应用
US10604743B2 (en) * 2015-03-16 2020-03-31 Dsm Ip Assets B.V. UDP-glycosyltransferases

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101928715A (zh) * 2009-06-30 2010-12-29 中国中医科学院中药研究所 丹参一细胞色素P450(SmP450)基因及其编码的蛋白和应用
WO2016107920A1 (en) * 2014-12-30 2016-07-07 Evolva Sa Production of macrocyclic diterpenes in recombinant hosts
US10604743B2 (en) * 2015-03-16 2020-03-31 Dsm Ip Assets B.V. UDP-glycosyltransferases
CN106244605A (zh) * 2016-09-13 2016-12-21 四川农业大学 Cyp71z18基因及其编码蛋白与应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CAO,X等: ""cytochrome P450 71D451[Euphorbia pekinensis]"", 《GENBANK DATABASE》 *
XINMIN WANG等: ""In Vitro and in vivo assessment of CYP2C9-mediated herb-herb interaction of Euphorbiae Pekinensis Radix and Glycyrrhizae Radix"", 《FRONTIERS IN PHARMACOLOGY》 *
李晓娜等: ""巴西橡胶树HbCYP450基因克隆与表达分析"", 《热带作物学报》 *
董栩等: ""药用植物中细胞色素P450基因的研究进展"", 《云南中医中药杂志》 *
訾佳辰: ""中药蓖麻中蓖麻烯型二萜类成分的生物合成酶的功能鉴定及其催化产物的结构分析"", 《中国化学会第十八届全国有机分析及生物分析学术研讨会摘要集》 *

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