CN109513041B - 一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管及其制备方法,采用具有较强力学性能的医用金属镁丝为轴纱加入到蚕丝编织结构中,既起到纵向引导作用,又能提高编织骨架的径向抗压性能,同时,镁丝能缓慢降解,促进雪旺细胞的生长和增殖,有利于损伤神经的恢复;编织纱线为脱胶蚕丝,具有良好的生物相容性,在保证力学性能良好的同时,形成促进神经再生的生物微环境。

Description

一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管及其制备方法
技术领域
本发明属于生物医用材料技术领域,具体涉及一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管及其制备方法。
背景技术
周围神经损伤是临床上常见的病症,利用生物材料和组织工程技术促进缺损神经修复与再生是神经科学领域的研究热点。理想的生物材料、合适的物理力学引导和适宜的生物微环境是促进受损神经恢复感觉、运动等生物学功能的关键因素。目前神经导管研究较多的是使用模型浇铸法、静电纳米纺丝法、3D生物打印成型等技术,以及采用丝素蛋白、壳聚糖和胶原蛋白等生物可降解材料制作出具有物理引导作用的中空导管,但是这些技术制备出来的神经导管的机械力学和柔韧性较差。如一种采用丝素纳米纤维定向引导功能的神经导管,使用冷凝诱导丝素溶液形成纳米微孔作为物理引导,但是该发明中形成的微孔难以控制形状大小和方向,而且导管的径向抗压性能一般,弯曲柔韧度未做考虑;又如先用纳米取向纤维制成不同降解浓度的薄膜然后卷成管状结构的神经导管,此种神经导管对细胞的物理导向性优良,但本身机械性能较差,内部供神经再生的空间较少;再如使用3D生物打印对材料有较大的限制,以及目前分辨率较低,大概是1~300 mPa/s。
研究发现,镁元素是人体必需的重要元素之一,在大脑及中枢神经系统中参与蛋白质的合成,激活体内多种酶,调节神经肌肉的活动。在微环境下,金属镁离子具有抗炎、抗氧化、抗凋亡以及调节线粒体钙缓冲等多种生物学功能。最新研究表明镁离子在适宜的微环境的培养下可以促进雪旺细胞的增殖,如分泌生长因子、细胞外基质(ExtracellularMatrix,ECM)等,对神经元起到支持和保护的作用。家蚕丝是由家蚕合成与分泌的天然动物蛋白,来源广泛,丝素蛋白是蚕丝中主要的组成部分,约占蚕丝质量的70%-80%,其余主要成分为丝胶蛋白及碳水化合物等。丝素蛋白含有多种氨基酸,其中比较常见的丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)约占总组成的85%。丝素本身具有良好的理化性质、透气透湿、生物相容性,能在体内降解为多肽和游离的氨基酸可被机体吸收从而促进神经细胞的生长。丝素蛋白制成的神经导管体内炎症反应低,可生物降解,能够促进周围神经损伤的功能性恢复。壳聚糖又称脱乙酰甲壳素,是由自然界广泛存在的几丁质(chitin)经过脱乙酰作用得到的,结构性质与ECM 中氨基多糖极为相似,吸附性良好,降解速度可调节,其降解的中间产物壳寡糖可抑制神经元凋亡,支持细胞黏附,促进受伤轴突再生。
用于制备神经导管的常见技术有:(1)浇铸-浸渍法,该方法虽然操作简便,但是支架上易残留有毒溶剂,且不易控制孔洞的大小和分布;(2)传统静电纺丝技术,能形成高孔隙率和比表面积的纳米纤维,可制造出类似细胞外基质网状结构的微环境,有利于神经再生长,但是传统静电纺制造出的神经导管机械强度不足,无法为受损神经提供稳定的力学环境;(3)编织技术,该技术采用锭子编织机,使纱线编织成管状织物,可增大导管内部的表面积,力学性能较好。但是,在诱导细胞定向迁移和组织再生方面,仍然有不足之处。
针对上述问题,本发明提出了一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管及其制备方法。
发明内容
本发明目的是:提供一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管及其制备方法,能提高神经再生有序性以及神经导管机械强度,以解决上述问题。
本发明的一种技术方案是:
一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管,包括神经导管外层、神经导管中间层和神经导管内层,所述神经导管中间层包覆于所述神经导管内层的外部,所述神经导管外层包覆于所述神经导管中间层的外部,所述神经导管外层为丝素蛋白溶液和壳聚糖溶液混合后形成的多孔海绵结构,所述神经导管外层的厚度为0.5-1.5mm,孔径为20-150μm,孔隙率为75%-90%,所述神经导管中间层为三维编织结构,所述神经导管中间层的厚度为0.3-1mm,所述三维编织结构的编织角为45-60°,所述神经导管内层为多孔凝胶结构,所述神经导管内层的直径为1.8-5mm。
进一步的,所述三维编织结构为菱形编织结构、规则编织结构和赫格利斯编织结构中的任意一种。
进一步的,所述三维编织结构是以镁丝为轴纱、脱胶蚕丝为编织纱复合编织成型的三维结构导管骨架,所述镁丝的直径为0.1-0.25mm,根数为4-16根,相邻两根镁丝之间的间距为200-2000μm,所述脱胶蚕丝的线密度为20-120D。
进一步的,所述多孔凝胶结构为丝素蛋白凝胶、雪旺细胞和神经生长因子组成的复合凝胶层,所述丝素蛋白凝胶冷冻形成网状纤维,所述雪旺细胞和神经生长因子设置于所述网状纤维内,所述网状纤维的直径为10-1000nm,孔径为10-500μm。
本发明的另一种技术方案是:
一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管的制备方法,该方法包括如下步骤:
(1)制备神经导管中间层:采用带芯功能的立锭式编织机制备神经导管骨架结构,以镁丝为轴纱、脱胶蚕丝为编织纱复合编织成型;
(2)制备神经导管外层:按照丝素蛋白溶液:壳聚糖溶液=1:1~1:5,将所述丝素蛋白溶液缓慢加入至所述壳聚糖溶液中,搅拌混合6-12小时,获得第二混合溶液,将所述神经导管中间层固定在模具中,再将所述第二混合溶液浇入所述模具中,然后放入-20℃冰箱冷冻4-12小时,再放入冷冻干燥机中冷冻干燥12-36小时后取出,得到具有多孔且为中空结构的神经导管外层;
(3)制备神经导管内层:将浓度为0.01-0.5%培养有雪旺细胞的丝素蛋白溶液注入到所述神经导管外层的中空结构内,在温度为37℃下放置12小时,形成凝胶化导管;将所述凝胶化导管垂直插入到液氮罐中,沿所述凝胶化导管的轴向以0.1-1mm/s的速度缓慢向下进行冷冻,再放入冷冻干燥机中冷冻干燥24-48小时,获得镁丝蚕丝复合编织结构神经导管。
进一步的,步骤(2)中所述丝素蛋白溶液的制备方式为:称取家蚕生丝在沸腾的Na2CO3水溶液中脱胶30分钟,每10分钟用玻璃棒进行搅拌,用去离子水多次冲洗后放在通风橱中过夜自然风干,获得干燥的家蚕丝素纤维,将所述干燥的家蚕丝素纤维溶于LiBr溶液中,在60℃的烘箱中溶解4小时,每小时轻微摇晃以保证溶解完全,获得第一混合溶液,将透析后的第一混合溶液离心,获得丝素蛋白溶液,放置于4℃冰箱中放置待用。
进一步的,步骤(2)中所述透析为:将所述第一混合溶液倒入截留分子量为3500D的透析袋中,在去离子水中透析36小时,每4小时换一次水。
进一步的,步骤(2)中所述离心为:在高速离心机中以9000 r/min离心两次,每次20分钟。
进一步的,步骤(2)中所述壳聚糖溶液的制备方式为:称取脱乙酰度为80-95%的壳聚糖,溶于0.5-4%的醋酸溶液中,搅拌4-12小时,制成质量百分比为1-5%的壳聚糖溶液。
本发明提供了一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管及其制备方法,其优点是:
(1)增加了导管的径向抗压和拉伸等机械性能,同时增加了神经导管的柔韧弯曲性能,更适应复杂的体内受力环境;
(2)导管生物相容性、表面活性和通透性良好,能促进神经元细胞的粘附、生长和增殖,加快受损神经的再生速度;
(3)可通过选择不同的材料和改性工艺,调控导管的降解速率,从而为神经的再生提供合适的生长空间;
(4)由于导管中的镁丝有导电性,可刺激和引导神经生长,同时降解时产生的镁离子有助于提高神经元细胞的活性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案,下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动性的前提下,还可以根据这些附图获得其它的附图。其中,
图1为本发明所述的一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管在实施例1中的结构示意图;
图2为本发明所述的一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管在实施例2中的结构示意图;
图3为本发明所述的一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管在实施例1中的结构示意图;
图4为本发明实施例1所述的采用不同参数制备的内径分别为2 mm和3 mm镁丝蚕丝复合编织结构神经导管的编织角;
图5为本发明实施例1所述的采用不同参数制备的内径分别为2 mm和3 mm镁丝蚕丝复合编织结构神经导管的载荷-拉伸应变曲线。
其中:1为神经导管外层、2为神经导管中间层、3为神经导管内层、4为轴纱、5为编织纱、6为丝素蛋白凝胶、7为雪旺细胞、8为神经生长因子、9为钛、镍合金丝。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂,下面结合具体实施方式和附图对本发明作进一步详细的说明。
本发明提供一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管,如图1所示,该导管分为三层,包括:神经导管外层1为丝素蛋白溶液和壳聚糖溶液混合后形成的多孔海绵结构,厚度为0.5-1.5mm,孔径在20-150μm,孔隙率在75%-90%,神经导管中间层2为三维编织结构,可以为菱形编织(1/1交织)、规则编织(2/2交织)和赫格利斯(3/3交织)三种编织结构中的任意一种编织结构,厚度在0.3-1mm,编织角为45-60°,神经导管内层3为多孔凝胶结构,直径为1.8-5mm,其降解时间为1-5天。神经导管中间层2是由镁丝为轴纱4,其直径为0.1-0.25mm,根数为4-16根,镁丝之间的间距为200-2000μm,脱胶蚕丝为编织纱5,其线密度为20-120D,复合编织成型的三维结构导管骨架;神经导管内层3由丝素蛋白凝胶6、雪旺细胞7和神经生长因子8组成的复合凝胶层,具有引导神经细胞定向生长的效果。神经生长因子8为神经元生长和存活所必需的蛋白质分子,其冷冻形成的网状纤维直径为10-1000nm,孔径在10-500μm。导管结构具有优良的柔韧性和弯曲性,能很好地适应体内复杂的受力环境。
上述镁丝蚕丝复合编织结构神经导管的制备方法包括以下步骤:
(一)制备神经导管中间层2,采用带芯功能的立锭式编织机制备神经导管骨架结构,镁丝为轴纱4,脱胶蚕丝为编织纱5,复合编织成型。
(二)丝素蛋白溶液的制备:称取30g家蚕生丝在12L沸腾的Na2CO3(0.02 M)水溶液中脱胶30分钟,每10分钟用玻璃棒进行搅拌,以保证脱胶的彻底性,然后用去离水多次冲洗,将洗好的丝素蛋白纤维放在通风橱中过夜自然风干。称取干燥后的25 g家蚕丝素纤维溶于100 mL LiBr(9.3M)溶液中,在60℃的烘箱中溶解4小时,每小时轻微摇晃以保证溶解完全,获得第一混合溶液。取出第一混合溶液倒入透析袋(截留分子量3500D)中,在去离子水中透析36小时,每4小时换一次水。透析后的溶液在高速离心机中以9000 r/min离心两次,每次20分钟,以去除杂质,最终获得丝素蛋白溶液,放置于4℃冰箱中放置待用。
(三)制备神经导管外层1:称取2-8g脱乙酰度为80-95%的壳聚糖,溶于0.5-4%的醋酸溶液中,搅拌4-12小时,制成质量百分比为1-5%的壳聚糖溶液。按照丝素蛋白溶液:壳聚糖溶液=1:1~1:5,将丝素溶液缓慢加入到制备好的壳聚糖溶液中,搅拌混合6-12小时,获得第二混合溶液。将脱胶蚕丝编织层(神经导管中间层2)固定在模具中,再将第二混合溶液浇入模具中,然后放入-20℃冰箱冷冻4-12小时,再放入冷冻干燥机中冷冻干燥12-36小时后取出,得到具有多孔结构的海绵外层材料。
(四)制备神经导管内层3:
1)密封冷冻后的导管,将浓度为0.01-0.5%培养有雪旺细胞的丝素蛋白溶液注入到导管中空结构内,37℃下放置12小时诱导其凝胶化;2)将导管垂直插入到液氮罐中,沿导管轴向以0.1-1 mm/s的速度缓慢向下进行冷冻,再放入冷冻干燥机中冷冻干燥24-48小时。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂,下面结合附图和实施例进一步说明本发明的技术方案。但是本发明不限于所列出的实施例,还应包括在本发明所要求的权利范围内其他任何公知的改变。
首先,此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例,也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
其次,本发明利用结构示意图等进行详细描述,在详述本发明实施例时,为便于说明,示意图会不依一般比例作局部放大,而且所述示意图只是实例,其在此不应限制本发明保护的范围。此外,在实际制作中应包含长度、宽度及深度的三维空间。
实施例1
本实施案例展示一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管结构及制备方法,如图1所示,该神经导管共有三层,其中,神经导管中间层2的轴纱4为镁丝,神经导管中间层2的编织纱5为脱胶蚕丝,神经导管外层1为丝素蛋白和壳聚糖溶液混合制成的多孔海绵层,丝素蛋白与壳聚糖质量比为10:1,壳聚糖溶液浓度为3-6 mg/mL,丝素蛋白水溶液浓度为5-10%(w/v)。神经导管内层3是由浓度为5-10%(w/v)丝素蛋白水溶液制成的多孔丝素凝胶层。制备工艺流程如下:
(1)采用编织方法制备神经导管中间层2:原材料为20-100 D脱胶蚕丝,直径在0.05-0.2 mm的镁丝,编织工艺采用8-32锭立式编织机,菱形编织(1/1交织),上机编织角为45-60°,齿轮比(大齿轮:小齿轮 = 80-120:18-60),转速设置为5-100 rpm。
(2)将编织好的神经导管中间层2固定在管状聚四氟乙烯模具中,再将制备好的溶液浇入模具中,成型温度为60±2℃,成型时间15-30 min。放入-20℃冰箱冷冻4-12小时,再放入冷冻干燥机中冷冻干燥12-36小时后取出后,对导管进行水蒸气处理,水蒸气处理5-10小时,处理温度为50-70℃,得到带有多孔海绵层的神经导管。
(3)密封冷冻后的导管,将含有雪旺细胞的浓度为0.01-0.5%的丝素蛋白溶液注入到导管中空结构内,37℃下放置12小时诱导其凝胶化;再将导管垂直插入到液氮罐中,沿导管轴向以0.1-1mm/s的速度缓慢向下进行液氮冷冻,最后,置于冷冻干燥机进行冷冻干燥24-48小时,得到含有雪旺细胞的丝素凝胶层。
上述方法所制得的镁丝蚕丝复合编织结构神经导管的性能请参阅图4-图5,如图4可知,镁丝蚕丝复合编织结构神经导管的编织角在40-55°之间变化,编织角稳定;如图5可知,第一个峰表示编织纱断裂峰,此时拉伸应变为8%,载荷高达35N,第二个峰表示轴纱的断裂峰,此时载荷大于65N,表明轴纱的加入大大增强了神经导管的拉伸性能。
实施例2
本实施案例展示一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管结构及的制备方法,如图2所示,该神经导管共有三层,其中,神经导管中间层2的轴纱4为镁丝,编织纱5中对称加入四根可降解的钛、镍合金丝9以增强神经导管的径向抗压强度,神经导管外层1是由浓度为3-6mg/mL的壳聚糖溶液制成的多孔海绵层,其溶液浓度为3-6 mg/mL,神经导管内层3是由浓度为5-10%(w/v)丝素蛋白水溶液制成的丝素凝胶。制备工艺流程如下:
(1)采用编织方法制备神经导管中间层2:原材料为20-100 D脱胶蚕丝,直径在0.05-0.2 mm的镁丝和钛、镍合金丝,编织工艺采用8-32锭立式编织机,规则编织(2/2交织),上机编织角为45-60°,齿轮比(大齿轮:小齿轮 = 80-120:18-60),转速设置为5-100rpm。
(2)将神经导管中间层固定在管状聚四氟乙烯模具中,再将制备好的溶液浇入模具中,成型温度为60±2℃,成型时间15-30 min。放入-20℃冰箱冷冻4-12小时,再置入冷冻干燥机中冷冻干燥12-36小时后取出后,对导管进行水蒸气处理,水蒸气处理5-10小时,处理温度为50-70℃,得到神经导管的多孔海绵层。
(3)密封冷冻后的导管,将含有雪旺细胞的浓度为0.01-0.5%的丝素蛋白溶液注入到导管中空结构内,37℃下放置12小时诱导其凝胶化;再将导管垂直插入到液氮罐中,沿导管轴向以0.1-1mm/s的速度缓慢向下进行冷冻,最后,置于冷冻干燥机进行冷冻干燥24-48小时,得到含有雪旺细胞的丝素凝胶层。
实施例3
本实施案例展示一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管结构及的制备方法,如图3所示,该神经导管共有三层,其中,神经导管中间层2的轴纱4为镁丝和脱胶蚕丝交织,编织纱5为脱胶蚕丝,神经导管外层1是由浓度为5-10%(w/v)的丝素蛋白水溶液制备的多孔海绵层;神经导管内层3是由浓度为5-10%(w/v)丝素蛋白水溶液制成的多孔丝素凝胶层。制备工艺流程如下:
(1)采用编织方法制备神经导管中间层2:原材料为20-100 D脱胶蚕丝,直径为0.05-0.2 mm的镁丝,编织工艺采用8-32锭立式编织机,赫格利斯(3/3交织),上机编织角为45-60°,齿轮比(大齿轮:小齿轮 = 80-120:18-60),转速设置为5-100 rpm。
(2)将神经导管中间层固定在管状聚四氟乙烯模具中,再将制备好的溶液浇入模具中,成型温度为60±2℃,成型时间15-30 min。放入-20℃冰箱冷冻4-12小时,再置入冷冻干燥机中冷冻干燥12-36小时后取出后,对导管进行水蒸气处理5-10小时,处理温度为50-70℃,得到外层1为多孔海绵层的神经导管。
(3)密封冷冻后的导管,将含有雪旺细胞的浓度为0.01-0.5%的丝素蛋白溶液注入到导管中空结构内,37℃下放置12小时诱导其凝胶化;再将导管垂直插入到液氮罐中,沿导管轴向以0.1-1 mm/s的速度缓慢向下进行冷冻,最后,置于冷冻机进行冷冻干燥24-48小时,得到含有雪旺细胞的丝素凝胶层。
综上所述,本发明公开了一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管及其制备方法,采用具有较强力学性能的医用金属镁丝为轴纱加入到蚕丝编织结构中,既起到纵向引导作用,又能提高编织骨架的径向抗压性能,同时,镁丝能缓慢降解,促进雪旺细胞的生长和增殖,有利于损伤神经的恢复;编织纱线为脱胶蚕丝,具有良好的生物相容性,在保证力学性能良好的同时,产生促进神经再生的生物微环境。
应说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的精神和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (6)

1.一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管,其特征在于:包括神经导管外层、神经导管中间层和神经导管内层,所述神经导管中间层包覆于所述神经导管内层的外部,所述神经导管外层包覆于所述神经导管中间层的外部,所述神经导管外层为丝素蛋白溶液和壳聚糖溶液混合后形成的多孔海绵结构,所述神经导管外层的厚度为0.5-1.5mm,孔径为20-150μm,孔隙率为75%-90%,所述神经导管中间层为三维编织结构,所述神经导管中间层的厚度为0.3-1mm,所述三维编织结构的编织角为45-60°,所述神经导管内层为多孔凝胶结构,所述神经导管内层的直径为1.8-5mm,所述三维编织结构为菱形编织结构、规则编织结构和赫格利斯编织结构中的任意一种,所述三维编织结构是以镁丝为轴纱、脱胶蚕丝为编织纱复合编织成型的三维结构导管骨架,所述镁丝的直径为0.1-0.25mm,根数为4-16根,相邻两根镁丝之间的间距为200-2000μm,所述脱胶蚕丝的线密度为20-120D,所述多孔凝胶结构为丝素蛋白凝胶、雪旺细胞和神经生长因子组成的复合凝胶层,所述丝素蛋白凝胶冷冻形成网状纤维,所述雪旺细胞和神经生长因子设置于所述网状纤维内,所述网状纤维的直径为10-1000nm,孔径为10-500μm。
2.一种根据权利要求1所述的镁丝蚕丝复合编织结构神经导管的制备方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:
(1)制备神经导管中间层:采用带芯功能的立锭式编织机制备神经导管骨架结构,以镁丝为轴纱、脱胶蚕丝为编织纱复合编织成型;
(2)制备神经导管外层:按照丝素蛋白溶液:壳聚糖溶液=1:1~1:5,将所述丝素蛋白溶液缓慢加入至所述壳聚糖溶液中,搅拌混合6-12小时,获得第二混合溶液,将所述神经导管中间层固定在模具中,再将所述第二混合溶液浇入所述模具中,然后放入-20℃冰箱冷冻4-12小时,再放入冷冻干燥机中冷冻干燥12-36小时后取出,得到具有多孔且为中空结构的神经导管外层;
(3)制备神经导管内层:将浓度为0.01-0.5%培养有雪旺细胞的丝素蛋白溶液注入到所述神经导管外层的中空结构内,在温度为37℃下放置12小时,形成凝胶化导管;将所述凝胶化导管垂直插入到液氮罐中,沿所述凝胶化导管的轴向以0.1-1mm/s的速度缓慢向下进行冷冻,再放入冷冻干燥机中冷冻干燥24-48小时,获得镁丝蚕丝复合编织结构神经导管。
3.根据权利要求2所述的镁丝蚕丝复合编织结构神经导管的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述丝素蛋白溶液的制备方式为:称取家蚕生丝在沸腾的Na2CO3水溶液中脱胶30分钟,每10分钟用玻璃棒进行搅拌,用去离子水多次冲洗后放在通风橱中过夜自然风干,获得干燥的家蚕丝素纤维,将所述干燥的家蚕丝素纤维溶于LiBr溶液中,在60℃的烘箱中溶解4小时,每小时轻微摇晃以保证溶解完全,获得第一混合溶液,将透析后的第一混合溶液离心,获得丝素蛋白溶液,放置于4℃冰箱中放置待用。
4.根据权利要求3所述的镁丝蚕丝复合编织结构神经导管的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述透析为:将所述第一混合溶液倒入截留分子量为3500D的透析袋中,在去离子水中透析36小时,每4小时换一次水。
5.根据权利要求3所述的镁丝蚕丝复合编织结构神经导管的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述离心为:在高速离心机中以9000r/min离心两次,每次20分钟。
6.根据权利要求2所述的镁丝蚕丝复合编织结构神经导管的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述壳聚糖溶液的制备方式为:称取脱乙酰度为80-95%的壳聚糖,溶于0.5-4%的醋酸溶液中,搅拌4-12小时,制成质量百分比为1-5%的壳聚糖溶液。
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Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109513041B (zh) * 2018-12-29 2023-10-03 南通纺织丝绸产业技术研究院 一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管及其制备方法
CN110251732B (zh) * 2019-06-18 2020-10-27 南通纺织丝绸产业技术研究院 一种多层复合编织的可降解神经导管结构及其制备方法
CN110786965B (zh) * 2019-11-14 2021-04-30 苏州大学 变锭编织法制备多通道抗菌神经导管的方法
CN111297513A (zh) * 2020-03-19 2020-06-19 中国海洋大学 一种负载营养因子的人工神经导管及其制备方法和应用
CN111281599A (zh) * 2020-03-19 2020-06-16 中国海洋大学 一种增强型人工神经导管及其制备方法和应用
CN113634048B (zh) * 2021-09-10 2022-10-14 武汉纺织大学 天然蚕丝微纳米纤维复合多孔材料及其应用
CN114470325A (zh) * 2022-03-24 2022-05-13 合肥工业大学 一种可缝裁单面导电抗菌的甲壳素水凝胶神经导管材料的制备方法
CN114983622B (zh) * 2022-06-01 2024-06-25 奥精医疗科技股份有限公司 一种神经导管的制备方法及神经导管
CN116899014B (zh) * 2023-07-24 2024-05-07 上海工程技术大学 一种三维拓扑结构多通道神经导管及其制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102688076A (zh) * 2011-03-25 2012-09-26 广州迈普再生医学科技有限公司 一种神经导管及其制备方法
CN103083720A (zh) * 2013-02-28 2013-05-08 苏州大学 一种丝素蛋白管及其制备方法

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6599323B2 (en) * 2000-12-21 2003-07-29 Ethicon, Inc. Reinforced tissue implants and methods of manufacture and use
US8106014B2 (en) * 2004-09-14 2012-01-31 Neurotex Limited Methods and apparatus for enhanced growth of peripheral nerves and nervous tissue
JP4982887B2 (ja) * 2007-02-20 2012-07-25 北海道曹達株式会社 神経再生チューブ及びその製造方法
KR101116237B1 (ko) * 2009-08-12 2012-03-09 서울대학교산학협력단 실크 나노섬유 신경도관 및 이의 제조방법
CN102274089A (zh) * 2011-05-24 2011-12-14 苏州大学 一种丝素蛋白管状支架及其制备方法
JP2014155622A (ja) * 2013-02-15 2014-08-28 Terumo Corp 管状体
CN103598927A (zh) * 2013-10-17 2014-02-26 上海交通大学 用于神经缺损修复的可降解镁合金神经导管及其制备方法
US20170014548A1 (en) * 2014-03-17 2017-01-19 University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education Magnesium/polymer composite-containing scaffolds to enhance tissue regeneration
CN104107096B (zh) * 2014-07-18 2016-09-07 上海交通大学 可弯曲全降解镁合金神经导管及其制备方法
ES2577883B2 (es) * 2014-12-16 2016-11-21 Universitat Politècnica De València Biohíbrido para su uso en la regeneración de tractos neurales
CN104548205B (zh) * 2014-12-29 2017-07-21 东莞颠覆产品设计有限公司 一种动物源神经支架及其制备方法
CN105748171B (zh) * 2016-02-21 2017-09-15 新乡医学院 生物型神经导管
EP3573676B1 (en) * 2017-01-25 2021-06-02 B. Braun Melsungen AG Endoluminal device
CN108853587B (zh) * 2017-05-10 2021-08-03 上海交通大学 镁合金与高分子丝材混编复合补片及其用途
CN109513041B (zh) * 2018-12-29 2023-10-03 南通纺织丝绸产业技术研究院 一种镁丝蚕丝复合编织结构神经导管及其制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102688076A (zh) * 2011-03-25 2012-09-26 广州迈普再生医学科技有限公司 一种神经导管及其制备方法
CN103083720A (zh) * 2013-02-28 2013-05-08 苏州大学 一种丝素蛋白管及其制备方法

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