CN109511653A - 植物提取防dna和rna降解并保持细胞原有形态的保存液 - Google Patents

Abstract

植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，属于医疗领域，包括下列份数的物质：中药杀虫抑菌提取物3‑6份,中药染料提取物0.1‑1份,中药香料提取物0.1‑1份,中药抗氧化剂提取物0.1‑1份,湿润剂10‑40份,表面活性性剂1‑5份,碱金属盐1‑10份,溶剂100‑500份。本发明用贯众或苦楝皮的提取物替代2，2‑二溴‑2‑氰基乙酰胺，贯众和苦楝皮的提取物低毒低害，且能够杀死细胞组织和寄生虫等物质，对多种病毒和细菌有抑制作用，是环保无害的生物样品保存的优选物质，同时还可以快速去除红细胞，快速裂解痰液，把细胞快速分离出来，保持了原有细胞不破坏，降解其它的杂质，且能够保持细胞原有的形态以及细胞内外的DNA和RNA的形态不变，便于后续观察。

Description

植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液

技术领域

本发明属于医疗领域，具体地说是植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，生物样品可用该固定液中得到最佳的保存和固定，生物样品是指人或动物的生物组织、细胞、器官和分泌物以及细菌、病毒、酵母、寄生虫等物质。本发明的创新点在于该固定溶液主要成份采用纯天然提取物生产过程以及使用过程中无毒无害，不会造成环境污染，不会危害人体健康。

背景技术

在医疗领域中无论是病理检测、寄生虫检测、细胞的形态观察以及DNA和RNA的的形态观察等操作都需要用到固定液来固定样品避免样品被等污染，确保样品的准确性。目前市面上最常用的固定液为福尔马林，由于其固定效果好而且制作成本低从而得到广泛的应用，但是福尔马林为甲醛的水溶液，甲醛具有强毒性，其被人体吸收后会对人体造成损害，2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中，已经将甲醛放在一类致癌物列表中，而现实生活中因为甲醛带来的健康问题也屡见不鲜。故而随着社会的发展越来越多的企业在研发替代福尔马林的低毒低害的固定液，专利号为：CN201180071839.9，名称：用于固定和保存生物样品的固定溶液的专利提供一种新的低毒低害的固定液，其成分中不含有甲醛，但是其选用的有效物质为2，2-二溴-2-氰基乙酰胺，2，2-二溴-2-氰基乙酰胺为工业杀虫剂，虽然其毒性没有甲醛强，其自身也带有一定的毒性，对人体也有一定的危害，且2，2-二溴-2-氰基乙酰胺的生产过程中也会产生大量的有毒污染物，为了环保所产生的污染物需要处理后才能排放，增加了生产成本，甚至有些企业为了节约成本直接排放对环境造成极大的污染，而且使用抗氧化剂、香味剂以及染料均为工业合成都存在上述问题。

发明内容

本发明提供植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，用以解决现有技术中的缺陷。

本发明通过以下技术方案予以实现：

植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，包括下列份数的物质：

如上所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，所述的中药杀虫抑菌提取物为贯众和苦楝皮的任意一种或者二者混合的提取物。

如上所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，所述的中药香料提取物和中药抗氧化剂提取物均为薄荷精油。

如上所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，所述的中药染料提取物为紫草、郁金、茜草中的任意一种或者任意两种以上的混合的提取物。

如上所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，所述的湿润剂为乙二醇、丙二醇、赤藓糖、醇山梨糖醇中的任意一种或者任意两种以上的混合物。

如上所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，所述的表面活性性剂为吐温80或十二烷基硫酸钠中的任意一种。

如上所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，所述的碱金属盐为锂、钠、钾、镁、钙、锶的柠檬酸盐、乙酸盐、氯化物、碳酸盐、硫酸盐、硝酸盐中的任意一种或任意两种以上的混合物。

如上所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，所述的溶剂为蒸馏水。

如上所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，其制备方法包括如下步骤：

步骤一：取含有中药杀虫抑菌提取物的中药称重，然后粉碎，然后加入10-20体积比的蒸馏水，加热至80-100℃，处理2-4h，冷却过滤，滤渣加入5-10体积比的蒸馏水，加热至80-100℃，处理1-2h，冷却过滤，合并两次滤液减压浓缩后干燥得中药杀虫抑菌提取物；

步骤二：取含有中药染料提取物的中药称重，然后粉碎，然后加入5-10体积比的蒸馏水，加热至80-100℃，处理2-4h，冷却过滤，滤渣加入3-6体积比的蒸馏水，加热至80-100℃，处理1-2h，冷却过滤，合并两次滤液减压浓缩后干燥得中药染料提取物；

步骤三：取薄荷称重，然后粉碎，放入容器中加入10-20体积比的蒸馏水，加热至90-100℃，反应4-6h，期间通过水蒸气蒸馏法将得到薄荷精油与水的混合物，将水去除后得薄荷精油；

步骤四：安装权利要求1的重量份数准确称取各物质，然后将除薄荷精油的所有物质与溶剂加入容器中在室温下搅拌1-2h，再加入薄荷精油，在5-15℃的温度下搅拌0.2-0.4h，后分装既得固定液。

本发明的优点是：

1、本发明用贯众或苦楝皮的提取物替代2，2-二溴-2-氰基乙酰胺，贯众和苦楝皮的提取物低毒低害，即使少量挥发对人体的危害极小，且其提取过程完除了药渣不会产生任何污染物，既保护环境又降低成本，贯众提取物中的主要成分绵马素类等物质有驱虫杀虫作用，可驱除杀死绦虫、钩虫、蛔虫、鞭虫及牛片形血吸虫等且贯众提取物对多种病毒和细菌有抑制作用，是将细胞组织或寄生虫等固定并保存的优选物质，且将细胞杀死后能够保持细胞的形态以及细胞内外的DNA和RNA的形态不变，同时贯众提取物可以快速去除红细胞，快速裂解痰液，把细胞快速分离出来，保持了原有细胞不破坏，降解其它的杂质，且能够保持细胞原有的形态以及细胞内外的DNA和RNA的形态不变，便于后续检测观察；苦楝皮提取物中主要成分苦楝素具有驱虫杀虫的作用、且能抑制呼吸中枢并影响神经肌肉传递功能，对多种病毒和细菌有抑制作用，能够完成将细胞组织或寄生虫等固定并保存的目的，同时贯众提取物可以快速去除红细胞，快速裂解痰液，把细胞快速分离出来，保持了原有细胞不破坏，降解其它的杂质，且能够保持细胞原有的形态以及细胞内外的DNA和RNA的形态不变，便于后续检测观察；而且大多中药提取物均具有抗氧化性，贯众提取物与苦楝皮提取物也具有一定的抗氧化性，虽然其抗氧化性效果一般，但是能够起到辅助抗氧化性的作用；

2、本发明用薄荷的挥发油提取物薄荷精油作为香料和抗氧化剂，薄荷精油的主要成分是薄荷醇和薄荷酮，二者功效基本相同，都是具有薄荷的香味能够作为香料使用，同时薄荷醇和薄荷酮具有很强的抗氧化性从而能作为抗氧化剂使用，同时薄荷醇和薄荷酮还具有清热消炎的作用，对于多种病毒和细菌有抑制作用，能够起到辅助保存的作用；

3、本发明用中药染料提取物作为染料，紫草、郁金、茜草都是常见的药用染料，其提取物能够作为染料，且药用染料一般都具有抑制细菌和病毒生长的作用，从而够起到辅助保存的作用。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

本实施例所述的中药杀虫抑菌提取物为贯众和苦楝皮的任意一种或者二者混合的提取物；

本实施例所述的中药染料提取物为紫草、郁金、茜草中的任意一种或者任意两种以上的混合的提取物；

本实施例所述的湿润剂为乙二醇、丙二醇、赤藓糖、醇山梨糖醇中的任意一种或者任意两种以上的混合物；

本实施例所述的表面活性性剂为吐温80或十二烷基硫酸钠中的任意一种。

本实施例所述的碱金属盐为锂、钠、钾、镁、钙、锶的柠檬酸盐、乙酸盐、氯化物、碳酸盐、硫酸盐、硝酸盐中的任意一种或任意两种以上的混合物；

按照如下步骤制备：

步骤一：准确称量含有中药杀虫抑菌提取物的中药100g，然后粉碎，然后加入1000ml的蒸馏水，加热至80℃，处理2h，冷却过滤，滤渣加入500ml的蒸馏水，加热至80℃，处理1h，冷却过滤，合并两次滤液减压浓缩后干燥得中药杀虫抑菌提取物；

步骤二：准确称量含有中药染料提取物的中药100g，然后粉碎，然后加入500ml的蒸馏水，加热至80℃，处理2h，冷却过滤，滤渣加入300ml的蒸馏水，加热至80℃，处理1h，冷却过滤，合并两次滤液减压浓缩后干燥得中药染料提取物；

步骤三：准确称取100g薄荷，然后粉碎，放入容器中加入1000ml的蒸馏水，加热至90℃，反应4h，期间通过水蒸气蒸馏法将得到薄荷精油与水的混合物，将水去除后得薄荷精油；

步骤四：准确称量中药杀虫抑菌提取物3g，中药染料提取物0.1g，薄荷精油0.2g，湿润剂10g，表面活性性剂1g，碱金属盐1g，量取蒸馏水100ml，然后将除薄荷精油的所有物质与溶剂加入容器中在室温下搅拌1h，再加入薄荷精油，在5℃的温度下搅拌0.2h，后分装既得固定液。

实施例2

本实施例所述的中药杀虫抑菌提取物为贯众和苦楝皮的任意一种或者二者混合的提取物；

本实施例所述的中药染料提取物为紫草、郁金、茜草中的任意一种或者任意两种以上的混合的提取物；

本实施例所述的湿润剂为乙二醇、丙二醇、赤藓糖、醇山梨糖醇中的任意一种或者任意两种以上的混合物；

本实施例所述的表面活性性剂为吐温80或十二烷基硫酸钠中的任意一种。

本实施例所述的碱金属盐为锂、钠、钾、镁、钙、锶的柠檬酸盐、乙酸盐、氯化物、碳酸盐、硫酸盐、硝酸盐中的任意一种或任意两种以上的混合物；

按照如下步骤制备：

步骤一：准确称量含有中药杀虫抑菌提取物的中药100g，然后粉碎，然后加入2000ml的蒸馏水，加热至100℃，处理4h，冷却过滤，滤渣加入1000ml的蒸馏水，加热至100℃，处理2h，冷却过滤，合并两次滤液减压浓缩后干燥得中药杀虫抑菌提取物；

步骤二：准确称量含有中药染料提取物的中药100g，然后粉碎，然后加入1000ml蒸馏水，加热至100℃，处理4h，冷却过滤，滤渣加入600ml的蒸馏水，加热至100℃，处理2h，冷却过滤，合并两次滤液减压浓缩后干燥得中药染料提取物；

步骤三：准确称取100g薄荷，然后粉碎，放入容器中加入2000ml的蒸馏水，加热至100℃，反应6h，期间通过水蒸气蒸馏法将得到薄荷精油与水的混合物，将水去除后得薄荷精油；

步骤四：准确称量中药杀虫抑菌提取物6g，中药染料提取物1g，薄荷精油2g，湿润剂40g，表面活性性剂5g，碱金属盐10g，量取水500ml，然后将除薄荷精油的所有物质与溶剂加入容器中在室温下搅拌2h，再加入薄荷精油，在15℃的温度下搅拌0.4h，后分装既得固定液。

实施例3

本实施例所述的中药杀虫抑菌提取物为贯众和苦楝皮的任意一种或者二者混合的提取物；

本实施例所述的中药染料提取物为紫草、郁金、茜草中的任意一种或者任意两种以上的混合的提取物；

本实施例所述的湿润剂为乙二醇、丙二醇、赤藓糖、醇山梨糖醇中的任意一种或者任意两种以上的混合物；

本实施例所述的表面活性性剂为吐温80或十二烷基硫酸钠中的任意一种。

本实施例所述的碱金属盐为锂、钠、钾、镁、钙、锶的柠檬酸盐、乙酸盐、氯化物、碳酸盐、硫酸盐、硝酸盐中的任意一种或任意两种以上的混合物；

按照如下步骤制备：

步骤一：准确称量含有中药杀虫抑菌提取物的中药100g，然后粉碎，然后加入1500ml的蒸馏水，加热至90℃，处理3h，冷却过滤，滤渣加入750ml的蒸馏水，加热至90℃，处理1.5h，冷却过滤，合并两次滤液减压浓缩后干燥得中药杀虫抑菌提取物；

步骤二：准确称量含有中药染料提取物的中药100g，然后粉碎，然后加入750ml的蒸馏水，加热至90℃，处理3h，冷却过滤，滤渣加入450ml的蒸馏水，加热至90℃，处理1.5h，冷却过滤，合并两次滤液减压浓缩后干燥得中药染料提取物；

步骤三：准确称取100g薄荷，然后粉碎，放入容器中加入1500ml的蒸馏水，加热至95℃，反应5h，期间通过水蒸气蒸馏法将得到薄荷精油与水的混合物，将水去除后得薄荷精油；

步骤四：准确称量中药杀虫抑菌提取物4.5g，中药染料提取物0.55g，薄荷精油1.1g，湿润剂25g，表面活性性剂3g，碱金属盐5.5g，量取水300ml，然后将除薄荷精油的所有物质与溶剂加入容器中在室温下搅拌1.5h，再加入薄荷精油，在10℃的温度下搅拌0.3h，后分装既得固定液。

验证试验

实施例1-3的产品分别记做实施例1、实施例2以及实施例3，福尔马林记做对照例1，专利号为：CN201180071839.9的专利产品记做对照例2，进行验证试验。

验证试验1

将小白鼠的细胞组织切下，均匀分成五分，分别放入装有实施例1、实施例2、实施例3、对照例1以及对照例2的试剂盒中进行保存，在12h、24h、48h后各取出显微观察一次，对于细胞组织的形态、细胞的形态以及DNA和RNA的形态进行显微观测，试验结果如表一所示：

表一

验证试验2

将生长状况相同的寄生虫，各取10条，分别放入装有实施例1、实施例2、实施例3、对照例1以及对照例2的试剂盒中进行保存，在12h、24h、48h后各取出显微观察一次，对于寄生虫的形态、细胞的形态以及DNA和RNA的形态进行显微观测，试验结果如表二所示：

表二

通过表一和表二的试验结果证明本发明的固定液在48h内能够对细胞组织、寄生虫、细胞形态以及DNA和RNA的形态起到良好的固定保存作用，一般医院在进行检测和观察时一般不会使细胞组织和寄生虫等物质在固定液内浸泡超过48h，故而本发明的产品能够起到良好的固定并保存细胞组织、寄生虫、细胞形态以及DNA和RNA的形态的作用，同时通过对痰液以及红细胞的降解试验证明本发明能在3h内可以快速去除红细胞，快速裂解痰液，把细胞快速分离出来，保持了原有细胞不破坏，降解其它的杂质，且能够保持细胞原有的形态以及细胞内外的DNA和RNA的形态不变，便于医疗检测使用。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (9)

1.植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，其特征在于，包括下列份数的物质：

2.根据权利要求1所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，其特征在于，所述的中药杀虫抑菌提取物为贯众和苦楝皮的任意一种或者二者混合的提取物。

3.根据权利要求1所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，其特征在于，所述的中药香料提取物和中药抗氧化剂提取物均为薄荷精油。

4.根据权利要求1所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，其特征在于，所述的中药染料提取物为紫草、郁金、茜草中的任意一种或者任意两种以上的混合的提取物。

5.根据权利要求1所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，其特征在于，所述的湿润剂为乙二醇、丙二醇、赤藓糖、醇山梨糖醇中的任意一种或者任意两种以上的混合物。

6.根据权利要求1所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，其特征在于，所述的表面活性性剂为吐温80或十二烷基硫酸钠中的任意一种。

7.根据权利要求1所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，其特征在于，所述的碱金属盐为锂、钠、钾、镁、钙、锶的柠檬酸盐、乙酸盐、氯化物、碳酸盐、硫酸盐、硝酸盐中的任意一种或任意两种以上的混合物。

8.根据权利要求1所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，其特征在于，所述的溶剂为蒸馏水。

9.根据权利要求1所述的植物提取防DNA和RNA降解并保持细胞原有形态的保存液，其特征在于，制备方法包括如下步骤：

步骤一：取含有中药杀虫抑菌提取物的中药称重，然后粉碎，然后加入10-20体积比的蒸馏水，加热至80-100℃，处理2-4h，冷却过滤，滤渣加入5-10体积比的蒸馏水，加热至80-100℃，处理1-2h，冷却过滤，合并两次滤液减压浓缩后干燥得中药杀虫抑菌提取物；

步骤二：取含有中药染料提取物的中药称重，然后粉碎，然后加入5-10体积比的蒸馏水，加热至80-100℃，处理2-4h，冷却过滤，滤渣加入3-6体积比的蒸馏水，加热至80-100℃，处理1-2h，冷却过滤，合并两次滤液减压浓缩后干燥得中药染料提取物；

步骤三：取薄荷称重，然后粉碎，放入容器中加入10-20体积比的蒸馏水，加热至90-100℃，反应4-6h，期间通过水蒸气蒸馏法将得到薄荷精油与水的混合物，将水去除后得薄荷精油；

步骤四：安装权利要求1的重量份数准确称取各物质，然后将除薄荷精油的所有物质与溶剂加入容器中在室温下搅拌1-2h，再加入薄荷精油，在5-15℃的温度下搅拌0.2-0.4h，后分装既得固定液。