CN109476638B - 吡唑衍生物、其组合物及治疗用途 - Google Patents
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Abstract
本文描述了式(I)的化合物及其盐和作为Janus激酶抑制剂的使用方法：
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年5月5日提交的国际申请号PCT/CN2016/081093、2016 年5月10日提交的国际申请号PCT/CN2016/081566和2016年11月7日提交的 美国临时申请序列号62/418,500的优先权，其各自通过引用整体并入。
发明领域
本发明的领域涉及作为Janus激酶如JAK1抑制剂的化合物，以及含有这些 化合物的组合物和使用方法，包括但不限于诊断或治疗患有对JAK激酶抑制有响 应的病症的患者。
发明背景
细胞因子通路介导多范围的生物学功能，包括炎症和免疫的多个方面。 Janus激酶(JAK)包括JAK1、JAK2、JAK3和TYK2，它们是细胞质蛋白激酶， 与I型和II型细胞因子受体有关，调节细胞因子信号转导。细胞因子与同源受体 的接合触发了受体相关JAKs的激活，这导致JAK-介导的信号传导和转录激活因 子(STAT)蛋白的酪氨酸磷酸化，最终导致特定基因群的转录激活(Schindler等人, 2007,J.Biol.Chem.282:20059-63)。JAK1、JAK2和TYK2表现出广泛的基因表 达模式，而JAK3表达仅限于白细胞。细胞因子受体典型地以杂二聚体形式起作 用，因此，一种类型以上的JAK激酶通常与细胞因子受体复合物有关。在多种情 况下，与不同细胞因子受体有关的特定JAKs已经通过基因研究而确定并通过其 它实验证据获得证实。例如，在国际申请号WO 2013/014567中讨论了JAK酶抑 制的示例性治疗有益性。
JAK1最初是在新激酶筛选中被鉴定的(WilksA.F.,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:1603-1607)。基因和生物化学研究已经表明：JAK1在功能方面和生 理方面与I型干扰素(例如IFNα)、II型干扰素(例如IFNγ)、IL-2和IL-6细胞因 子受体复合物有关(Kisseleva等人,2002,Gene 285:1-24；Levy等人,2005,Nat. Rev.Mol.Cell Biol.3:651-662；O’Shea等人,2002,Cell,109(增刊):S121-S131)。 来源于JAK1敲除小鼠由于LIF受体信号缺陷而在围产期即死亡(Kisseleva等， 2002，Gene 285：1-24；O’Shea等，2002，Cell，109(增刊)：S121-S131)。来源 于JAK1敲除小鼠的组织表征证明这种激酶在IFN、IL-10、IL-2/IL-4和IL-6通 路中的关键性作用。在许多国家批准了靶向IL-6通路的人源化单克隆抗体(塔西 单抗/tocilizumab)，用于治疗中度至重度类风湿性关节炎(Scheinecker等人,2009, Nat.Rev.Drug Discov.8:273-274)。
CD4T细胞通过在肺内产生TH2细胞因子而在哮喘发病机制中起重要作 用，包括IL-4、IL-9和IL-13(Cohn等人,2004,Annu.Rev.Immunol.22:789- 815)。IL-4和IL-13诱导增加的粘液产生、向肺中募集嗜酸性粒细胞和增加IgE 的产生(Kasaian等人,2008,Biochem.Pharmacol.76(2):147-155)。IL-9导致肥大 细胞活化，这加剧了哮喘症状(Kearley等人,2011,Am.J.Resp.Crit.Care Med., 183(7):865-875)。当与公共γ链或IL-13Rα1链结合时，IL-4Rα链激活JAK1并 与IL-4或IL-13结合(Pernis等人,2002,J.Clin.Invest.109(10):1279-1283)。公共 γ链也可以与IL-9Rα联合以结合IL-9，IL-9Rα也激活JAK1(Demoulin等人, 1996,Mol.Cell Biol.16(9):4710-4716)。虽然公共γ链激活JAK3，但已显示JAK1 优于JAK3并且JAK1的抑制足以通过公共γ链使信号失活，尽管存在JAK3活 性(Haan等人,2011,Chem.Biol.18(3):314-323)。通过阻断JAK/STAT信号通路 抑制IL-4、IL-13和IL-9信号传导可以缓解临床前肺炎症模型中的哮喘症状 (Mathew等人,2001,J.Exp.Med.193(9):1087-1096；Kudlacz等人,2008,Eur.J. Pharmacol.582(1-3):154-161)。
生物化学和遗传学研究已经显示JAK2和单链(single-chain)(例如EPO)、 IL-3和干扰素γ细胞因子受体家族之间的关联性(Kisseleva等人,2002,Gene 285:1-24；Levy等人,2005,Nat.Rev.Mol.Cell Biol.3:651-662；O’Shea等人, 2002,Cell,109(增刊):S121-S131)。与此相符，JAK2敲除小鼠死于贫血(O’Shea 等人,2002,Cell,109(增刊):S121-S131)。激酶激活的JAK2突变(例如JAK2 V617F)与人类骨髓增生性疾病有关。
JAK3唯一地与γ共同细胞因子受体链(common cytokine receptor chain)相关，这些受体链存在于IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21细胞因子受体复 合物中。JAK3对于淋巴样细胞的发育和增生是至关重要的，JAK3中的突变导致 重症综合性免疫缺陷(SCID)(O’Shea等人,2002,Cell,109(增刊):S121-S131)。根 据其在淋巴细胞调节中的作用，JAK3和JAK3-介导的通路可以靶向免疫抑制适 应症(例如移植排斥和类风湿性关节炎)(Baslund等人,2005,Arthritis& Rheumatism 52:2686-2692；Changelian等人,2003,Science 302:875-878)。
TYK2与I型干扰素(例如IFNα)、IL-6、IL-10、IL-12和IL-23细胞因子受 体复合物有关(Kisseleva等人,2002,Gene 285:1-24；Watford,W.T.&O’Shea,J.J., 2006,Immunity25:695-697)。与此相符，来源于TYK2缺乏人类的原代细胞在I 型干扰素、IL-6、IL-10、IL-12和IL-23信号传导中存在缺陷。在许多国家批准 了靶向IL-12和Il-23细胞因子的共享p40亚单位的全人单克隆抗体(乌司奴单抗 /Ustekinumab)，用于治疗中度至重度斑块状银屑病(Krueger等人,2007,N.Engl. J.Med.356:580-92；Reich等人,2009,Nat.Rev.DrugDiscov.8:355-356)。另外， 靶向IL-12和IL-23通路的抗体经历了治疗局限性回肠炎的临床试验(Mannon等 人,2004,N.Engl.J.Med.351:2069-79)。
目前仍需要另外的化合物作为Janus激酶的抑制剂。例如，需要的化合物 具有作为一种或多种Janus激酶(例如JAK1)的抑制剂的有用效力，并且具有实现 有用治疗益处所必需的其他药理学性质。例如，需要有效的化合物，其通常对一 种Janus激酶的选择性高于其他激酶(例如对JAK1相对其他激酶的选择性，例如 富含亮氨酸的重复激酶2LRRK2)。还需要有效的化合物，其对一种Janus激酶 的选择性高于其他Janus激酶(例如对JAK1相对其他Janus激酶的选择性)。对 于响应于JAK1抑制的病症，对JAK1显示选择性的激酶可以提供治疗益处，副 作用较少。另外，目前需要有效的JAK1抑制剂，其具有制剂和吸入施用所需的其它性质(例如熔点、pK、溶解度等)。这些化合物特别适用于治疗病症如哮喘。
发明概述
本发明的一个方面包括本发明的化合物，其为式(I)的化合物：
或其盐，其中：
R1和R1a与它们所连接的原子一起形成3-10元碳环基，其任选地被Ra取代 并且任选地被Rb取代；或R1和R1a与它们所连接的原子一起形成3-15元杂环， 其任选地被Rc取代并且任选地被Rd取代；
R2是–NReRf；
R3是–CH3或–CN；
Ra是–NRrRs或-ORr；
Rb各自独立地选自卤素、氰基、羟基、氧代、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、- NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-SH和-SCH3，其中任意C1-C6烷基和C1-C6烷氧基任 选地被卤素、氰基、羟基、氧代、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-NH2、-NHCH3、- N(CH3)2、-SH或-SCH3取代，其中任意C1-3烷基和C1-3烷氧基任选地被卤素、羟 基、氰基或氧代取代；
Rc是-ORm、-SRm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、- NRmC(O)Rn、-S(O)1-2Rm、-NRmS(O)1-2Rn、-S(O)1-2NRmRn、C1-C6烷基、C2-C6烯 基、C2-C6炔基、3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元芳基或5-10元杂芳基， 其中Rc的任意C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选地被Rx取代；
Rd各自独立地选自卤素、氰基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基，其中任意C1- C6烷基和C1-C6烷氧基任选地被卤素、羟基、氰基或氧代取代；
Re是H或C1-C4烷基；
Rf是–C(＝O)-Rg，或芳基，其任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自 卤素、氰基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、–S(O)2Rh和–P(＝O)(ORk)2；
Rg是H、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-NRtRu，或3-10元碳环基，该 3-10元碳环基任选地被卤素、羟基、氰基、氧代、C1-C3烷基、C2-C3炔基、6-10 元芳基、5-6元杂芳基或3-5元碳环基取代，其中任意C1-C3烷基、6-10元芳基、 5-6元杂芳基或3-5元碳环基任选地被卤素、羟基、氰基或C1-C3烷基取代；
Rh各自独立地选自C1-C6烷基，其任选地被卤素取代；
Rk各自独立地选自H和任选地被卤素取代的C1-C6烷基；
Rm和Rn独立地选自氢、3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10 元杂芳基和C1-C6烷基，其中Rm和Rn的任意3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10 元芳基、5-10元杂芳基和C1-C6烷基任选地被Rw取代；或Rm和Rn与它们所连 接的原子一起形成3-8元杂环基，其任选地被Rw取代；
Rr和Rs各自独立地选自氢、3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5- 10元杂芳基和C1-C3烷基，其中Rr和Rs的任意3-6元杂环基、3-6元碳环基、6- 10元芳基、5-10元杂芳基和C1-C3烷基任选地被Rv取代；或Rr和Rs与它们所连 接的原子一起形成3-8元杂环基或5-10元杂芳基，该3-8元杂环基和5-10元杂芳 基任选地被Rv取代；
Rt和Ru独立地选自氢、3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10元 杂芳基和C1-C3烷基，其中Rt和Ru的任意3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元 芳基、5-10元杂芳基和C1-C3烷基任选地被卤素、羟基、氰基或氧代取代；或Rt和Ru与它们所连接的原子一起形成3-6元杂环基，其任选地取代有卤素、羟基、 氰基或氧代，或任选地被卤素、羟基、氰基或氧代取代的C1-C6烷基；
Rv各自独立地选自卤素、羟基、氰基、氧代、6-10元芳基、5-10元杂芳 基、C1-C6烷基、C2-C3烯基、C2-C3炔基、3-6元碳环基、3-6元杂环基、(6-10元 芳基)-O-、(5-10元杂芳基)-O-、(3-6元碳环基)-O-、(3-6元杂环基)-O-和C1-C6烷 氧基，其中Rv的任意6-10元芳基、5-10元杂芳基、C1-C6烷基、3-6元碳环基、 3-6元杂环基、(6-10元芳基)-O-、(5-10元杂芳基)-O-、(3-6元碳环基)-O-、(3-6元 杂环基)-O-和C1-C6烷氧基任选地被卤素、羟基、氰基、C1-C6烷基、C2-C3炔 基、氧代、3-6元碳环、3-6元杂环基、C1-C6烷氧基、5-10元杂芳基或6-10元芳 基取代，它们各自任选地被卤素、羟基、氰基、氧代、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基 取代；
Rw各自独立地选自卤素、羟基、氰基、氧代、6-10元芳基、5-10元杂芳 基、C1-C6烷基、3-6元碳环基、3-6元杂环基和C1-C6烷氧基，其中Rw的任意6- 10元芳基、5-10元杂芳基、C1-C6烷基、3-6元碳环基、3-6元杂环基和C1-C6烷 氧基任选地被卤素、羟基、氰基、C1-C6烷基、氧代、3-6元碳环基、3-6元杂环 基C1-C6烷氧基、5-10元杂芳基或6-10元芳基取代，它们各自任选地被卤素、羟 基、氰基、氧代、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基取代；且
Rx各自独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、氧代、-ORm、-SRm、- NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、-NRmC(O)Rn、-S(O)1-2Rm、- NRmS(O)1-2Rn、-S(O)1-2NRmRn、3-10元碳环基、3-15元杂环基、6-10元芳基和 5-15元杂芳基，其中任意3-10元碳环基、3-15元杂环基、6-10元芳基和5-15 元杂芳基任选地被卤素、羟基、氰基、硝基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、- ORm、-SRm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、-NRmC(O)Rn、- S(O)1-2Rm、-NRmS(O)1-2Rn、-S(O)1- 2NRmRn、C1-C6烷基、氧代、3-10元碳环 基、3-10元杂环基、6-10元芳基或5-10元杂芳基取代，其中任意C1-C6烷基、 C2-C6烯基、C2-C6炔基、3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元芳基和5-10 元杂芳基任选地取代有卤素、羟基、氰基、氧代、-ORm、-NRmRn、- C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、3-6元碳环基、6-10元芳基，或任选地被 卤素、羟基、氰基、氧代或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基。
还提供了药物组合物，其包含本发明的化合物或其盐(例如药学上可接受 的盐)和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
另一方面包括本发明的化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)，其用于 疗法，例如治疗炎性疾病或癌症。所述炎性疾病可以是哮喘。
另一方面包括预防、治疗或减轻疾病或病症的严重性的方法，所述疾病 或病症响应于患者中Janus激酶如JAK1激酶的抑制。该方法可包括给患者施 用治疗有效量的本发明的化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)。
另一方面包括本发明的化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)在制备用于 治疗对Janus激酶如JAK1激酶的抑制有响应的疾病的药剂中的用途。
另一方面包括用于治疗响应于Janus激酶如JAK1激酶抑制的疾病或病 症的药盒。所述药盒可包含第一药物组合物，其包含本发明的化合物或其盐 (例如药学上可接受的盐)和使用说明书。
本发明的某些化合物具有作为一种或多种Janus激酶(例如JAK1)抑制剂的 有益效能。某些化合物也是a)相对于其他激酶对一种Janus激酶具有选择性，b) 对JAK1比其他Janus激酶具有选择性，和/或c)具有制剂和通过吸入施用所需的 其他性质(例如熔点、pK、溶解度等)。某些式(I)的化合物可以特别用于治疗病症 例如哮喘。
发明详述
定义
“卤素”或“卤代”是指F、Cl、Br或I。另外，术语例如“卤代烷基”的含 义是包括单卤代烷基和多卤代烷基。
术语“烷基”指饱和的直链或支链单价烃基团，其中所述烷基可任选被取 代。在一个实例中，所述烷基具有1-18个碳原子(C1-C18)。在其他实例中，所述 烷基是C0-C6、C0-C5、C0-C3、C1-C12、C1-C10、C1-C8、C1-C6、C1-C5、C1-C4或 C1-C3。C0烷基是指价键。烷基的实例包括甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、- CH2CH3)、1-丙基(n-Pr、n-丙基、-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr、i-丙基、- CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu、n-丁基、-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、i-丁 基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu、s-丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基 (t-Bu、t-丁基、-C(CH3)3)、1-戊基(n-戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(- CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(- C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(- CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(- CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊 基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基 -3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲 基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3、1-庚基和 1-辛基。在某些实施方案中，“任选取代的烷基”的取代基包括F、Cl、Br、I、 OH、SH、CN、NH2、NHCH3、N(CH3)2、NO2、N3、C(O)CH3、COOH、 CO2CH3、甲基、乙基、丙基、异-丙基、丁基、异丁基、环丙基、甲氧基、乙氧 基、丙氧基、氧代、三氟甲基、二氟甲基、磺酰基氨基、甲磺酰基氨基、SO、 SO2、苯基、哌啶基、哌嗪基和嘧啶基的1-4个实例，其中其烷基、苯基和杂环部 分可以任选地被例如选自该相同清单的取代基的1-4个实例取代。
“芳基”是指碳环芳族基团，无论是否与一个或多个基团稠合，具有指定 的碳原子数或如果没有指定的碳原子数为达14个碳原子。一个实例包括具有6- 14个碳原子的芳基基团。另一实例包括具有6-10个碳原子的芳基基团。芳基基 团的实例包括苯基、萘基、联苯基、菲基、并四苯基(naphthacenyl)、1,2,3,4-四 氢萘基、1H-茚基、2,3-二氢-1H-茚基等(参见例如Lang’s Handbook of Chemistry (Dean,J.A.,ed.)第13版，表7-2[1985])。具体的芳基是苯基。取代的苯基或取代 的芳基是指被1、2、3、4或5个取代基取代的苯基或芳基，例如1-2、1-3或1-4 个取代基，例如选自本文指定的基团(参见“任选取代的”定义)，如F、Cl、 Br、I、OH、SH、CN、NH2、NHCH3、N(CH3)2、NO2、N3、C(O)CH3、 COOH、CO2CH3、甲基、乙基、丙基、异-丙基、丁基、异丁基、环丙基、甲氧 基、乙氧基、丙氧基、氧代、三氟甲基、二氟甲基、磺酰基氨基、甲磺酰基氨 基、SO、SO2、苯基、哌啶基、哌嗪基和嘧啶基，其中其烷基、苯基和杂环部分 可以任选地被例如选自该相同清单的取代基的1-4个实例取代。术语“取代的苯 基”的实例包括一-或二(卤素)苯基例如2-氯苯基、2-溴苯基、4-氯苯基、2,6-二氯 苯基、2,5-二氯苯基、3,4-二氯苯基、3-氯苯基、3-溴苯基、4-溴苯基、3,4-二溴苯 基、3-氯-4-氟苯基、2-氟苯基、2,4-二氟苯基等；一-或二(羟基)苯基例如4-羟基 苯基、3-羟基苯基、2,4-二羟基苯基、其被保护的-羟基衍生物等；硝基苯基例如 3-或4-硝基苯基；氰基苯基，例如4-氰基苯基；一-或二(烷基)苯基例如4-甲基苯 基、2,4-二甲基苯基、2-甲基苯基、4-(异丙基)苯基、4-乙基苯基、3-(正-丙基)苯 基等；一或二(烷氧基)苯基、例如3,4-二甲氧基苯基、3-甲氧基-4-苄氧基苯基、3- 乙氧基苯基、4-(异丙氧基)苯基、4-(t-丁氧基)苯基、3-乙氧基-4-甲氧基苯基等；3- 或4-三氟甲基苯基；一-或二羧基苯基或(被保护的羧基)苯基例如4-羧基苯基、一 -或二(羟基甲基)苯基或(被保护的羟基甲基)苯基例如3-(被保护的羟基甲基)苯基或 3,4-二(羟基甲基)苯基；一-或二(氨基甲基)苯基或(被保护的氨基甲基)苯基例如2- (氨基甲基)苯基或2,4-(被保护的氨基甲基)苯基；或一-或二(N-(甲基磺酰基氨基)) 苯基例如3-(N-甲基磺酰基氨基))苯基。此外，术语“取代的苯基”表示二取代的 苯基，其中取代基不同，例如3-甲基-4-羟基苯基、3-氯-4-羟基苯基、2-甲氧基-4- 溴苯基、4-乙基-2-羟基苯基、3-羟基-4-硝基苯基、2-羟基-4-氯苯基、2-氯-5-二氟 甲氧基等；以及三取代的苯基，其中取代基不同，例如3-甲氧基-4-苄氧基-6-甲基 磺酰基氨基、3-甲氧基-4-苄氧基-6-苯基磺酰基氨基；和四取代的苯基，其中取代 基不同，例如3-甲氧基-4-苄氧基-5-甲基-6-苯基磺酰基氨基。
除非另有说明，术语“本发明的化合物”和“本发明化合物”等包括 式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)的化合物，和本文实施例的化合物，包括立体异构 体(包括阻转异构体)、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、同位素、 盐(例如药学上可接受的盐)和其前药。在某些实施方案中，不包括溶剂化物、代 谢物、同位素或前药或其任何组合。
本文所用的术语“芳基”是指单个全碳芳环或多个稠合全碳环系统，其中 至少一个环是芳族的。在某些实施方案中，芳基基团具有6至20个碳原子、6至 15个碳原子、6至12或6至10个碳原子。芳基包括苯基。芳基还包括具有9至 20个碳原子的多个稠环系统(例如包含2、3或4个环的环系统)，其中至少一个环 是芳族的，其中其他环可以是芳族的或非芳族的(即碳环)。这种多个稠环系统任 选地在多个稠环系统的任何碳环部分上被一个或多个(例如1、2或3个)氧代基团 取代。当由化合价要求允许时，多个稠环系统的环可通过稠合、螺和桥键连接到 各自的其他环。应理解，如上定义的多稠环系统的连接点可位于环系统的任何位 置，包括环的芳香环或碳环部分。芳基的非限制性实例包括但不限于苯基、茚基、萘基、1,2,3,4-四氢萘基、蒽基等。
术语“碳环”或“碳环基”是指单个饱和的(即环烷基)或单个部分不饱和的 (例如环烯基、环二烯基等)所有具有3至7个碳原子的碳环(即(C3-C7)碳环)。术语 “碳环”或“碳环基”还包括多个稠合的、饱和的和部分不饱和的全碳环系统(例 如包含2、3或4个碳环的环系)。因此，碳环包括多环碳环，例如双环碳环(例如 具有约6-12个碳原子的双环碳环，例如双环[3.1.0]己烷和双环[2.1.1]己烷)和多环 碳环(例如三环和四环碳环，具有达约20个碳原子)。当由化合价要求允许时，多 个稠环系统的环可通过稠合、螺和桥键连接到各自的其他环。例如，多环碳环可 以通过单个碳原子与各自相连以形成螺键连接(例如螺戊烷、螺[4,5]癸烷等)、通 过两个相邻的碳原子形成稠合连接(例如碳环，例如碳环如十氢化萘、norsabinane、norcarane)或通过两个不相邻的碳原子形成桥接连接(例如降冰片 烷、双环[2.2.2]辛烷等)。“碳环”或“碳环基”也可任选地被一个或多个(例如 1、2或3个)氧代基取代。在一个实施方案中，术语碳环包括3-20元碳环。在另 一个实施方案中，术语碳环包括3-15元碳环。在另一个实施方案中，术语碳环包 括3-10元碳环。在一个实施方案中，术语碳环包括3-8元碳环。在一个实施方案 中，术语碳环包括3-6元碳环。在一个实施方案中，术语碳环包括3-5个碳环。 碳环的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯 基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己基-1-烯基、1-环己-2-烯基、双环[2.2.1]庚烷、蒎烷、金刚烷、降冰片烯(norborene)、螺环C5-12烷烃和1-环己-3-烯基。
本文所用的术语“杂芳基”是指在环中具有至少一个除碳以外的原子的单 个芳环，其中原子选自氧、氮和硫；“杂芳基”也包括多个具有至少一个这样的 芳环的稠环系统，下面将进一步描述多个稠环系统。在某些实施方案中，杂芳基 基团具有5至20个成员、5至15个成员、5至12个成员或5至10个成员。因 此，“杂芳基”包括具有约1至6个碳原子和约1-4个选自氧、氮和硫的杂原子 的单个芳环。硫和氮原子也可以以氧化形式存在，条件是环是芳族的。示例性杂 芳基环系包括但不限于吡啶基、嘧啶基、噁唑基或呋喃基。“杂芳基”还包括多 个稠环系统(例如包含2、3或4个环的环系)，其中如上定义的杂芳基与一个或多 个选自以下的环稠合：杂芳基(形成例如萘啶基，例如1,8-萘啶基)、杂环(形成例 如1,2,3,4-四氢萘啶基，例如1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶基)、碳环(形成例如5,6,7,8-四 氢喹啉基)和芳基(形成例如吲唑基)，形成多个稠环系统。因此，杂芳基(单个芳环 或多个稠环系统)在杂芳基环内具有约1-20个碳原子和约1-6个杂原子。这种多个 稠合环系统可任选地在稠环的碳环或杂环部分上被一个或多个(例如1、2、3或4 个)氧代基团取代。当由化合价要求允许时，多个稠环系统的环可通过稠合、螺和 桥键连接到各自的其他环。应理解，多个凝聚环系统的各个环可以相对于彼此以 任何顺序连接。还应理解，多稠环系统(如上文对杂芳基所定义)的连接点可位于 多稠环系统的任何位置，包括多稠环系统的杂芳基、杂环、芳基或碳环部分。还 应理解，杂芳基或杂芳基多稠环系统的连接点可以在杂芳基或杂芳基多个稠环系统的任何适合的原子上，包括碳原子和杂原子(例如氮)。示例性杂芳基包括但不 限于吡啶基、吡咯基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡唑基、噻吩基、吲哚基、咪 唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、呋喃基、噁二唑基、噻二唑基、喹啉基、异 喹啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、吲唑基、喹喔啉基、喹唑啉基(quinazolyl)、 5,6,7,8-四氢异喹啉基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、硫杂茚基(thianaphthenyl)、吡 咯并[2,3-b]吡啶基、喹唑啉基-4(3H)-酮、三唑基、4,5,6,7-四氢-1H-吲唑和 3b,4,4a,5-四氢-1H-环丙[3,4]环戊二烯并[1,2-C]吡唑。
本文所用的术语“杂环基”或“杂环”是指单个饱和或部分不饱和的环， 其在环中具有至少一个除碳以外的原子，其中原子选自氧、氮和硫；该术语也包 括多个稠环系统，其具有至少一个这样的饱和或部分不饱和的环，下面将进一步 描述多个稠环系统。因此，该术语包括单个饱和或部分不饱和的环(例如3、4、 5、6或7元环)，在环中具有约1至6个碳原子和约1至3个选自氧、氮和硫的杂 原子。该环可以被一个或多个(例如1、2或3个)氧代基取代，并且硫和氮原子也 可以以它们的氧化形式存在。示例性杂环包括但不限于氮杂环丁烷基、四氢呋喃 基和哌啶基。术语“杂环”还包括多个稠环系统(例如包含2、3或4个环的环系统)，其中单个杂环(如上所定义)可与选自以下的一个或多个基团稠合：杂环(形成 例如1,8-十氢萘啶基)、碳环(形成例如十氢喹啉基)和芳基，以形成多个稠环系 统。因此，杂环(单个饱和或单个部分不饱和的环或多个稠环系统)在杂环内具有 约2-20个碳原子和1-6个杂原子。这种多个稠合环系统可任选地在多个稠环的碳 环或杂环部分上被一个或多个(例如1、2、3或4个)氧代基取代。当由化合价要 求允许时，多个稠环系统的环可通过稠合、螺和桥键连接到各自的其他环。应理 解，多个稠合环系统的各个环可以相对于彼此以任何顺序连接。还应理解，多稠 环系统(如上文对杂环所定义)的连接点可位于多稠环系统的任何位置，包括环的 杂环、芳基和碳环部分。还应理解，杂环或杂环多稠环系统的连接点可以在杂环 或杂环多稠环系统的任何适合的原子上，包括碳原子和杂原子(例如氮)。在一个 实施方案中，术语杂环包括C2-20杂环。在一个实施方案中，术语杂环包括C2-7杂 环。在一个实施方案中，术语杂环包括C2-5杂环。在一个实施方案中，术语杂环 包括C2-4杂环。在一个实施方案中，术语杂环包括3-20元杂环。在另一个实施方 案中，术语杂环包括3-15个元杂环。在另一个实施方案中，术语杂环包括3-10 元杂环。示例性杂环包括但不限于氮丙啶基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶 基、高哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、四氢呋喃基、二氢噁唑基、四氢 吡喃基、四氢噻喃基、1,2,3,4-四氢喹啉基、苯并噁嗪基、二氢噁唑基、苯并二氢吡喃基、1,2-二氢-吡啶基、2,3-二氢-苯并呋喃基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基、1,4- 苯并二噁烷基、[环丙烷-1,1'-异二氢吲哚基]-3'-酮、异吲哚啉基-1-酮、2-氧杂-6-氮 杂螺[3.3]庚基、咪唑烷-2-酮N-甲基哌啶、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰 胺、咪唑烷酮、乙内酰脲、二氧戊环、邻苯二甲酰亚胺、1,4-二噁烷、硫吗啉、 硫吗啉-S-氧化物、硫吗啉-S,S-氧化物、吡喃、3-吡咯啉、噻喃、吡喃酮、四氢噻 吩、奎宁环、托烷(tropane)、2-氮杂螺[3.3]庚烷、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.2.1]辛 烷、(1s,4s)-2-氮杂双环[2.2.2]辛烷、(1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.2]辛烷和吡咯 烷-2-酮。
术语“烷氧基”是指由式-OR表示的直链或支链一价基团，其中R是烷 基，如本文所定义。烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、单-、二- 和三-氟甲氧基和环丙氧基。
术语“烷酰基”是指基团(烷基)-C(＝O)-，其中烷基如本文所定义。例如， C1-C6烷酰基是指式(C1-C5烷基)-C(＝O)-的基团。烷酰基包括甲酰基、乙酰基、丙 酰基、异丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、3-甲基戊酰基和己酰基。
除非另有说明，否则“任选取代的”是指基团可以是未取代的或被对该基 团所列的取代基中的一个或多个(例如0、1、2、3、4或5或更多个或其任何可衍 生的范围)取代的基团，其中所述取代基可以相同或不同。在一个实施方案中，任 选取代的基团具有1个取代基。在另一实施方案中，任选取代的基团具有2个取 代基。在另一实施方案中，任选取代的基团具有3个取代基。在另一实施方案 中，任选取代的基团具有4个取代基。在另一实施方案中，任选取代的基团具有 5个取代基。
如本文所用，与化学结构中的键相交的波浪线
表示波状键在化学结 构中所连接的原子与分子的其余部分或与分子片段的其余部分的连接点。在某些 实施方案中，箭头与星号一起以波浪线的方式使用以指示连接点。
在某些实施方案中，一般性地描述二价基团而没有特定的键合构型。应理 解，除非另有说明，否则一般描述意味着包括两种键合构型。例如在基团R1–R2– R3中，如果基团R2被描述为–CH2C(O)–，则可以理解该基团可以作为R1– CH2C(O)–R3和R1–C(O)CH2–R3键合，除非另有说明。
短语“药学上可接受的”是指分子实体和组合物，当施用于动物如人时， 如果适合，其不产生不利的、过敏的或其他不良反应。
本发明化合物可以是盐的形式，例如药学上可接受的盐。“药学上可接受 的盐”包括酸和碱加成盐。“药学上可接受的酸加成盐”是指保留游离碱的生物 有效性和性质的那些盐，其在生物学上或其他方面都不是不合乎需要的，由无机 酸形成，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸等，和有机酸可以选自脂 族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、羧基和磺酸类有机酸，如甲酸、乙酸、丙 酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀 酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、 苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、双羟萘酸(embonic acid)、苯基乙酸、甲磺酸、乙磺 酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。
“药学上可接受的碱加成盐”包括衍生自无机碱的那些，例如钠、钾、 锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝盐等。具体的碱加成盐是铵盐、钾盐、钠 盐、钙盐和镁盐。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括以下的盐：伯、仲 和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代的胺、环胺和碱性离子交换树脂如异丙基 胺、三甲基胺、二乙基胺、三乙基胺、三丙基胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、 氨丁三醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、hydrabamine、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡萄胺、可可碱、嘌呤、 哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、多胺树脂等。特定的有机无毒碱包括异丙基胺、二乙 基胺、乙醇胺、氨丁三醇、二环己胺、胆碱和咖啡因。
在某些实施方案中，盐选自盐酸盐、氢溴酸盐、三氟乙酸盐、硫酸盐、磷 酸盐、乙酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、丙酮酸 盐、琥珀酸盐、草酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、硫酸氢盐、苯磺酸盐、乙磺 酸盐、丙二酸盐、昔萘酸盐(xinafoate)、抗坏血酸盐、油酸盐、烟酸盐、糖精盐 (saccharinate)、己二酸盐、甲酸盐、乙醇酸盐、棕榈酸盐、L-乳酸盐、D-乳酸 盐、天冬氨酸盐、苹果酸盐、L-酒石酸盐、D-酒石酸盐、硬脂酸盐、糠酸盐(例如 2-糠酸盐或3-糠酸盐))、萘二磺酸盐(萘-1,5-二磺酸盐或萘-1-(磺酸)-5-磺酸盐)、乙 二磺酸盐(乙烷-1,2-二磺酸盐或乙烷-1-(磺酸)-2-磺酸盐))、羟乙磺酸盐(2-羟基乙磺 酸盐)、2-均三甲苯磺酸盐、2-萘磺酸盐、2,5-二氯苯磺酸盐、D-扁桃酸盐、L-扁 桃酸盐、肉桂酸盐、苯甲酸盐、己二酸盐、乙磺酸盐(esylate)、丙二酸盐、均三 甲苯磺酸盐(mesitylate)(2-均三甲苯磺酸盐)/萘磺酸盐(2-萘磺酸盐)、右旋樟脑磺酸 盐(camsylate)(樟脑-10-磺酸盐，例如(1S)-(+)-10-樟脑磺酸盐)、谷氨酸盐、戊二酸 盐、马尿酸盐(2-(苯甲酰基氨基)乙酸盐)、乳清酸盐、xylate(对-二甲苯-2-磺酸盐) 和扑酸盐(2,2'-二羟基-1,1'-二萘甲烷-3,3'二甲酸盐)。
“无菌”制剂是无菌的或不含所有活微生物及其孢子。
“立体异构体”是指具有相同化学组成但在空间中原子或基团的排列方面 不同的化合物。立体异构体包括非对映异构体、对映异构体、构象异构体等。
“手性”是指具有镜像配偶体不可重叠性的分子，而术语“非手性”是指 其镜像配偶体可重叠的分子。
“非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心并且其分子彼此不是镜 像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱性 质或生物活性。非对映异构体的混合物可以在高分辨率分析程序下分离，例如电 泳和色谱法如HPLC。
“对映体”是指化合物的两种立体异构体，它们是彼此不可重叠的镜像。
本文使用的立体化学定义和惯例通常遵循S.P.Parker,Ed.,McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York； 和Eliel,E.和Wilen,S.,“Stereochemistry of Organic Compounds”,John Wiley& Sons,Inc.,NewYork,1994。许多有机化合物以光学活性形式存在，即它们具有旋 转平面偏振光平面的能力。在描述光学活性化合物时，前缀D和L或R和S用 于表示分子关于其手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)用于表示化合物旋 转平面偏振光的符号，(-)或l表示该化合物是左旋的。以(+)或d为前缀的化合物 是右旋的。对于给定的化学结构，这些立体异构体是相同的，除了它们是彼此镜 像。特定的立体异构体也可称为对映异构体，这些异构体的混合物通常称为对映 体混合物。50:50的对映体混合物被称为外消旋混合物或外消旋体，其可以在化 学反应或过程中没有立体选择性或立体特异性的情况下发生。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指两种对映体物质的等摩尔混合物，没有光学活性。
术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指不同能量的结构异构体，其 可通过低能垒相互转化。质子互变异构体(也称为质子异变异构体)包括通过质子 迁移的互变，例如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体包括通过重组一 些成键电子的相互转换。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式以及溶剂化形式存在，包括水合 形式。“溶剂化物”是指一种或多种溶剂分子与本发明化合物的缔合或复合物。 形成溶剂化物的溶剂的实例包括水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、 乙酸和乙醇胺。本发明的某些化合物可以以多种结晶或无定形形式存在。通常， 所有物理形式都在本发明的范围内。术语“水合物”是指溶剂分子为水的复合 物。
“代谢物”是指通过在体内代谢特定化合物或其盐而产生的产物。这样的 产物可以例如来自所施用化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺、酯化、 脱酯化、酶促裂解等。
代谢物通常通过制备本发明的化合物的放射性标记(例如14C或3H)同位素来 鉴定，以可检测剂量(例如大于约0.5mg/kg)给予动物例如大鼠，小鼠，豚鼠， 猴，或者给予人，允许足够的时间进行新陈代谢(典型地约30秒至30小时)并从 尿液，血液或其他生物样品中分离其转化产物。这些产物易于分离，因为它们被 标记(其他产物通过使用能够结合在代谢物中存活的表位的抗体来分离)。代谢物 结构以常规方式测定，例如通过MS，LC/MS或NMR分析。通常，代谢物的分 析以与本领域技术人员公知的常规药物代谢研究相同的方式进行。代谢物产物， 只要它们在体内没有发现，就可用于治疗性给予本发明化合物的诊断试验。
如本文所用，“氨基保护基团”是指基团的衍生物，其通常用于在对化合 物上的其他官能团进行反应时阻断或保护氨基。这种保护基团的实例包括氨基甲 酸酯，酰胺，烷基和芳基基团和亚胺，以及许多N-杂原子衍生物，它们可被除去 以再生所需的胺基。具体的氨基保护基团是Pmb(对-甲氧基苄基)，Boc(叔丁基氧 基羰基)，Fmoc(9-芴基甲氧基羰基)和Cbz(苄酯基)。这些基团的其他例子可以在 T.W.Greene和P.G.M.Wuts,“ProtectingGroups in Organic Synthesis,3rd ed., John Wiley&Sons,Inc.,1999中找到。术语”被保护的氨基“是指被一个上述氨基 保护基取代的氨基。
如本文所用，“羧基保护基团”是指对分子其他位置的后续反应条件稳定 的那些基团，其可以在适当的时间点除去而不破坏分子的其余部分，从而得到未 被保护的羧基基团。羧基保护基团的实例包括酯基和杂环基。羧酸基团的酯衍生 物可用于在对化合物上的其他官能团进行反应时阻断或保护羧酸基团。这类酯基 的实例包括取代的芳基烷基，包括取代的苄基，例如4-硝基苄基，4-甲氧基苄 基，3,4-二甲氧基苄基，2,4-二甲氧基苄基，2,4,6-三甲氧基苄基，2,4,6-三甲基苄 基，五甲基苄基，3,4-亚甲二氧基苄基，二苯甲基，4,4'-二甲氧基二苯甲基， 2,2',4,4'-四甲氧基二苯甲基，烷基或取代烷基酯例如甲基，乙基，t-丁基烯丙基或 叔戊基，三苯基甲基(三苯甲基)，4-甲氧基三苯甲基，4,4'-二甲氧基三苯甲基， 4,4',4“-三甲氧基三苯甲基，2-苯基丙-2-基，硫酯例如t-丁基硫酯，硅烷基酯例如 三甲基硅烷基，叔丁基二甲基硅烷基酯，苯甲酰基，2,2,2-三氯乙基，β-(三甲基 硅烷基)乙基，β-(二(正-丁基)甲基硅烷基)乙基，对甲苯磺酰基乙基，4-硝基苄基 磺酰基乙基，烯丙基，肉桂基，1-(三甲基硅烷基甲基)丙-1-烯-3-基等。羧基保护 基团的另一个实例是杂环基，例如1,3-噁唑啉基。这些基团的其他例子可以在T. W.Greene和P.G.M.Wuts，“Protecting Groups in Organic Synthesis，第3版， John Wiley&Sons，Inc.，1999中找到。术语”被保护的羧基“是指被一个上述羧 基保护基取代的羧基。
如本文所用，“羟基保护基团”是指通常用于在对化合物上的其他官能团 进行反应时阻断或保护羟基的羟基衍生物。这种保护基团的实例包括四氢吡喃氧 基、苯甲酰基、乙酰氧基、氨基甲酰氧基、苄基和硅烷基醚(例如TBS、 TBDPS)。这些基团的其他例子可以在T.W.Greene和P.G.M.Wuts, “Protecting Groups in Organic Synthesis,第3版,JohnWiley&Sons,Inc.,1999中 找到。术语“被保护的羟基”是指被一个上述羟基保护基团取代的羟基。
本发明化合物可含有一个或多个不对称碳原子。因此，化合物可以非对映 异构体、对映异构体或其混合物形式存在。化合物的合成可以使用外消旋物，非 对映异构体或对映异构体作为起始原料或作为中间体。特定非对映异构化合物的 混合物可通过色谱或结晶方法分离或富集为一种或多种特定的非对映异构体中。 类似地，可以使用相同的技术或本领域已知的其他技术分离对映体混合物或对映 体富集。各自的不对称碳原子或氮原子可以是R或S构型，这两种构型均在本发 明的范围内。
在本文所示的结构中，当未指定任何特定手性原子的立体化学时，则考虑 并包括所有立体异构体作为本发明的化合物。在立体化学由表示特定构型的实心 楔形或虚线指定的情况下，该立体异构体是如此指定和定义的。除非另有说明， 否则如果使用实心楔形或虚线，则旨在说明相对立体化学。在某些情况下，立体 化学尚未确定或已临时指定。
另一方面包括本发明化合物的前药，其包括已知的氨基保护和羧基保护基 团，它们在生理条件下释放，例如水解，得到本发明化合物。
术语“前药”是指药物活性物质的前体或衍生物形式，其与母体药物相比 对患者不太有效，并且能够被酶促或水解活化或转化成更具活性的母体形式。参 见例如Wilman，“Prodrugs in Cancer Chemotherapy”，Biochemical Society Transactions，14，pp.375-382，第615届Belfast会议(1986)和Stella等人， “Prodrugs：A Chemical Approach toTargeted Drug Delivery，”Directed Drug Delivery，Borchardt等人，(编辑)，pp。247-267，Humana Press(1985)。前药包 括但不限于含磷酸酯的前药，含硫代磷酸酯的前药，含硫酸酯的前药，含肽的前 药，D-氨基酸修饰的前药，糖基化的前药，含β-内酰胺的前药，任选取代的苯氧 基乙酰胺的前药或任选取代的含苯基乙酰胺的前药，以及5-氟胞嘧啶和5-氟尿苷 前药。
一类具体的前药是这样的化合物，其中氨基、脒基、氨基亚烷基氨基、亚 氨基亚烷基氨基或胍基的氮原子被羟基、烷基羰基(-CO-R)、烷氧基羰基(-CO- OR)或酰氧基烷基-烷氧基羰基(-CO-ORO-CO-R)基团取代，其中R是一价或二价 基团，例如烷基、亚烷基或芳基或具有式-C(O)-O-CP1P2-卤代烷基的基团，其中 P1和P2相同或不同且为氢、烷基、烷氧基、氰基、卤素、烷基或芳基。在一个 具体实施方案中，氮原子是本发明化合物的脒基的氮原子之一。前药可以通过使 本发明化合物与活化基团(例如酰基)反应来制备，以将例如化合物中的氮原子键 合到示例性的活化酰基的羰基上。活化的羰基化合物的实例是含有与羰基键合的 离去基团的化合物，包括例如酰卤、酰基胺、酰基吡啶鎓盐、酰基醇化物、酰基 苯氧化物，例如对-硝基苯氧基酰基、二硝基苯基氧基酰基、氟苯氧基酰基和二氟 苯基酰基。反应通常在惰性溶剂中在例如-78℃至约50℃的低温下进行。反应也 可以在无机碱存在下进行，例如碳酸钾或碳酸氢钠或有机碱，例如胺，包括吡 啶、三甲胺、三乙胺、三乙醇胺等。
还包括其他类型的前药。例如，本发明的化合物的游离羧基可以衍生为酰 胺或烷基酯。作为另一个实例，包含游离羟基的本发明化合物可以通过将羟基转 化为基团而衍生化为前药，所述基团例如但不限于磷酸酯，半琥珀酸酯，二甲基 氨基乙酸酯或磷酰基氧基甲氧基羰基基团，如Fleisher,D.等人,(1996)Improved oral drug delivery:solubilitylimitations overcome by the use of prodrugs Advanced Drug Delivery Reviews,19:115概括的。还包括羟基和氨基的氨基甲酸 酯前药，碳酸酯前药，磺酸酯和羟基的硫酸酯也是如此。将羟基衍生为(酰氧基) 甲基和(酰氧基)乙基醚，其中酰基可以是任选被以下基团取代的烷基酯，所述基 团包括但不限于醚，胺和羧酸基官能团，或其中酰基是如上所述的氨基酸酯，也 包括在内。这种类型的前药描述于J.Med.Chem.,(1996),39:10。更具体的实例包 括用例如(C1-C6)烷酰基氧基甲基，1-((C1-C6)烷酰基氧基)乙基，1-甲基-1-((C1-C6) 烷酰基氧基)乙基，(C1-C6)烷氧基羰基氧基甲基，N-(C1-C6)烷氧基羰基氨基甲基， 琥珀酰基，(C1-C6)烷酰基，α-氨基(C1-C4)烷酰基，芳基酰基和α-氨基酰基，或α- 氨基酰基-α-氨基酰基的基团取代醇基的氢原子，其中α-氨基酰基各自独立地选自 天然存在的L-氨基酸、P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1-C6)烷基)2或糖基(由除去碳水化合 物的半缩醛形式的羟基得到的基团)。
术语“离去基团”指化学反应中第一个反应物的部分，在化学反应中，该 部分从第一个反应物中被置换。离去基团的实例包括但不限于卤素原子、烷氧基 和磺酰基氧基。磺酰基氧基的实例包括但不限于烷基磺酰基氧基(例如甲基磺酰基 氧基(甲磺酸酯基)和三氟甲基磺酰基氧基(三氟甲磺酸酯基))和芳基磺酰基氧基(例 如对-甲苯磺酰基氧基(甲苯磺酸酯基)和对-硝基苯磺酰基氧基(对-硝基苯磺酸酯 基))。
“受试者”、“个体”或“患者”是脊椎动物。在某些实施方案中，脊椎 动物是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于农场动物(例如奶牛)、运动动物、宠物 (例如豚鼠、猫、狗、兔和马)、灵长类动物、小鼠和大鼠。在某些实施方案中， 哺乳动物是人。在包括向患者施用化合物的实施方案中，患者典型地有此需要。
术语“Janus激酶”是指JAK1、JAK2、JAK3和TYK2蛋白激酶。在某些 实施方案中，Janus激酶可以进一步定义为JAK1、JAK2、JAK3或TYK2之 一。在任意的实施方案中，JAK1、JAK2、JAK3和TYK2的任意一种可以特别 地作为Janus激酶排除。在某些实施方案中，Janus激酶是JAK1。在某些实施方 案中，Janus激酶是JAK1和JAK2的组合。
术语“抑制”和“减少”或这些术语的任何变体包括任何可测量的减少或 完全抑制以实现期望的结果。例如，与正常相比，减少可以是活性(例如JAK1活 性)降低约、至多约或至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、 40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、 95％、99％或以上或其中可衍生的任何范围。
在某些实施方案中，式(I)的化合物对JAK1抑制的选择性超过对JAK3和 TYK2。在某些实施方案中，式(I)的化合物对JAK1抑制的选择性超过对JAK2、 JAK3或TYK2或JAK2、JAK3或TYK2的任意组合。在某些实施方案中，式(I) 的化合物对JAK1和JAK2抑制的选择性超过对JAK3和TYK2。在某些实施方 案中，式(I)的化合物对JAK1抑制的选择性超过对JAK3。所谓“抑制选择性” 是指与另一种特定Janus激酶(例如JAK3)活性相比，该化合物对特定Janus激酶 活性(例如JAK1)为至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、 45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％ 或以上或其中任意衍生的范围更好的抑制剂，或与另一种特定Janus激酶(例如 JAK3)活性相比为特定Janus激酶(例如JAK1)至少2-、3-、4-、5-、10-、25-、 50-、100-、250-或500-倍更好的抑制剂。
术语“治疗有效量”指本发明化合物的如下量：(i)治疗或预防本文所述的 具体疾病、病症或障碍，或(ii)减轻、改善或消除一种或多种本文所述的具体疾 病、病症或障碍的症状，和任选地(iii)预防或延缓本文所述的具体疾病、病症或 障碍的一种或多种症状的发作。在一些实施方案中，治疗有效量是足以降低或缓 解自身免疫或炎症疾病(例如哮喘)的症状的量。在一些实施方案中，治疗有效量 是足以显著降低B细胞数量和活性的本文所述化学实体的量。在癌症的情况下， 治疗有效量的药物可以减少癌症细胞的数目；减小肿瘤体积；抑制(即在某种程度 上减缓并优选终止)癌症细胞渗入周围器官；抑制(即在某种程度上减缓并优选终 止)肿瘤转移；在某种程度上抑制肿瘤生长；或在某种程度上缓解与癌症相关的一 种或多种症状。在某种程度上，所述药物可以预防癌症细胞生长或杀死现有的癌 症细胞，所述药物可以是抑制细胞生长的或细胞毒性的。对于癌症治疗，效能可 以例如通过评价疾病进展的时间(TTP)或检测响应率(RR)进行测量。
“治疗”(和变体例如“治疗”或“治疗”)是指试图改变所治疗的个体或细 胞的自然进程的临床干预，并且可以在预防或在临床病理学过程中进行。理想的 治疗效果包括预防疾病的发生或复发、缓解症状、减少疾病的任何直接或间接病 理后果、稳定(即不恶化)疾病状态、降低疾病进展率、改善或缓解疾病状态、与 如果不接受治疗的预期存活相比延长存活期或改善预后。在某些实施方案中，本 发明化合物用于延缓疾病或病症的发展或减缓疾病或病症的进展。需要治疗的人 包括已经患有病症或病症的人以及易患病症或病症的人(例如通过遗传突变)或者 要预防病症或病症的人。
“炎性病症”是指任何疾病、病症或综合征，其中过度或失调的炎症反应 导致过度炎症症状、宿主组织损伤或组织功能丧失。“炎性病症”还指由白细胞 流入或中性粒细胞趋化性介导的病理状态。
本文中所述的“炎症”指组织损伤或破坏引发的局部保护反应，该反应用 于破坏、冲淡或屏蔽有害物质和受伤的组织。炎症主要与白细胞流入或中性粒细 胞趋化作用有关。炎症可能由致病性的微生物和病毒感染引起，也可以由下列非 传染性方式引起，例如创伤或心肌梗塞后再灌注或中风、对外来性抗原的免疫反 应和自身免疫反应。因此，可用本发明化合物如式I化合物治疗的炎性疾病包括 与特异性防御系统反应有关的疾病以及与非特异性防御系统反应有关的疾病。
“特异性防御系统”指能够与存在的特异性抗原反应的免疫系统的组分。 由特异性免疫系统产生的炎症的示例包括对外来性抗原产生的常规反应、自身免 疫性疾病和由T-细胞介导的迟发性超敏反应。慢性炎性疾病、实体移植组织和器 官的排斥反应如肾和骨髓移植物和移植物抗宿主病(GVHD)也是特异性防御系统 炎性反应的实例。
本文中所述的术语“非特异性防御系统”指由不具有免疫记忆的白细胞(例 如粒细胞和巨嗜细胞)介导的炎性疾病。至少部分由非特异性防御系统反应导致的 炎症的示例包括与下列病症有关的炎症，如成人(急性)呼吸窘迫综合征(ARDS)或 多器官损伤综合征；再灌注损伤；急性肾小球肾炎；反应性关节炎；伴有急性炎 症成分的皮肤病；急性化脓性脑膜炎或其它中枢神经系统炎性疾病如中风；烧伤 (thermal injury)；炎性肠病；粒细胞输液相关性综合征(granulocyte transfusion associated syndromes)；和细胞因子诱导的毒性。
本文中使用的“自身免疫性疾病”是指其中组织损伤与体液或细胞介导的 对机体自身组分响应有关的任何一类疾病。自身免疫疾病的非限制性实例包括类 风湿性关节炎、狼疮和多发性硬化。
本文中使用的“变应性疾病”是指由变态反应所导致的任何症状、组织损 伤或组织功能的缺失。本文中使用的“关节炎疾病”是指以各种病因引起的关节 的炎性损伤为特征的任何疾病。本文中使用的“皮炎”是指以各种病因引起的皮 肤炎症为特征的一大类皮肤疾病的任何一种。本文中使用的“移植排斥反应”是 指与移植组织如器官或细胞(例如骨髓)对抗的任何免疫反应，其特征在于移植组 织及其周边组织功能的丧失、疼痛、肿胀、白细胞增多以及血小板减少。本发明 的治疗方法包括与炎性细胞激活有关的疾病的治疗方法。
“炎性细胞激活”是指在下列细胞中刺激物(包括但不限于细胞因子、抗原 或自抗体)诱导的增殖细胞响应、产生可溶性介质(包括但不限于细胞因子、氧自 由基、酶、前列腺素或血管活性胺(vasoactive amine))，或者炎性细胞中细胞表面 表达新的或增加数量的介质(包括但不限于主要组织相容性抗原或细胞粘附分 子)：炎性细胞包括但不限于单核细胞、巨嗜细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、粒 细胞(即多形核白细胞如中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞)、肥大细 胞、树突细胞、朗格汉斯细胞和内皮细胞。本领域技术人员应当理解，在这些细 胞中的这些表型中的一种或其组合的激活可能导致炎性疾病的开始、持久存在或 恶化。
在某些实施方案中，可根据本发明的方法治疗的炎性疾病包括但不限于哮 喘、鼻炎(例如过敏性鼻炎)、过敏性气道综合征、特应性皮炎、支气管炎、类风 湿性关节炎、银屑病、接触性皮炎、慢性阻塞性肺疾病和迟发型超敏反应。
术语“癌症”和“癌性”、“赘生物”和“肿瘤”及相关术语是指或描述 哺乳动物中通常以不受调节的细胞生长为特征的生理状况。“肿瘤”包括一种或 多种癌细胞。癌症的实例包括癌、胚细胞瘤、肉瘤、精原细胞瘤、成胶质细胞 瘤、黑素瘤、白血病和髓样或淋巴恶性肿瘤。此类癌症的更具体的实例包括鳞状 细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)和肺癌，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌 (“NSCLC”)、肺腺癌和肺鳞状细胞癌。其他癌症包括皮肤、角化棘皮瘤、滤泡 癌、毛细胞白血病、口腔、咽(口腔)、唇、舌、口、唾液腺、食道、喉、肝细 胞、胃、胃、胃肠、小肠、大肠、胰腺、宫颈、卵巢、肝脏、膀胱、肝癌、乳腺 癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、泌尿生殖系统、胆道、甲状腺、乳突癌、肝 脏、子宫内膜、子宫、唾液腺、肾或肾、前列腺、睾丸、外阴、腹膜、肛门、阴 茎、骨、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、中枢神经系统、脑、头颈、霍奇金和相 关转移。赘生性疾病的实例包括骨髓增生性疾病，如真性红细胞增多症、原发性 血小板增多症、骨髓纤维化如原发性骨髓纤维化和慢性髓性白血病(CML)。
“化疗剂”为用于治疗指定疾病的药物，例如癌症或炎性疾病。化疗剂的 实例是本领域众所周知的且包括实例如美国公开申请号US2010/0048557中公开 的那些，其作为引用并入本文。另外，化疗剂包括任意化疗剂的药学上可接受的 盐、酸或衍生物以及它们中的两种或多种的组合。
“包装说明书”用于指通常包括在治疗产品中的商品包装中的说明书，其 包含有关涉及这类治疗产品应用的适应证、用法、剂量、施用、禁忌症或警告的 信息。
除非另有描述，否则本文所述的结构也指包括不同仅在于存在一个或多个 富含同位素的原子的化合物。可掺入本发明化合物中的示例性同位素包括氢、 碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，例如分别为2H、3H、11C、13C、 14C、13N、15N、15O、17O、18O、32P、33P、35S、18F、36Cl、123I和125I。同位素标 记的化合物(例如那些用3H和14C标记的)可以用于化合物或底物组织分布测定。 氚标记(即3H)和碳-14(即14C)同位素由于易于制备和检测所以是有用的。此外， 用重的同位素例如氘(即2H)取代由于具有更大的代谢稳定性使得它具有某些治疗优势(例如增加体内半衰期或减少剂量需要)。在某些实施方案中，在本发明的化 合物中，一个或多个碳原子被富含13C-或14C-的碳替代。发射正电子同位素例如 15O、13N、11C和18F可以用于正电子发射断层扫描(PET)研究以测定底物受体占 有。同位素标记的化合物通常可以根据与本文的方案或实施例中描述的方法类似 的方法、通过用同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂制备。
特别考虑的是，关于本发明的一个实施方案讨论的任何限制可以适用于本 发明的任何其他实施方案。此外，本发明的任何化合物或组合物可用于本发明的 任何方法，并且本发明的任何方法可用于生产或利用本发明的任何化合物或组合 物。
使用术语“或”用于表示“和/或”，除非明确指出仅指代替代方案或替代 方案是相互排斥的，不过，本公开支持仅涉及替代和“和/或”的定义。
在整个本申请中，术语“约”用于表示数值包括用于确定该值的装置或方 法的标准偏差。
如本文所用，除非另有明确说明，否则“一”或“一个”表示一个或多 个。如本文所用，“另一个”意指至少第二个或更多个。
本文使用的标题仅用于编制目的。
JANUS激酶抑制剂
在一个实施方案中，本发明提供了作为Janus激酶(例如JAK1)抑制剂的式 (I)的化合物：
或其盐，其中：
R1和R1a与它们所连接的原子一起形成3-10元碳环，其任选地被Ra取代并 且任选地被Rb取代；或R1和R1a与它们所连接的原子一起形成3-10元杂环，其 任选地被Rc取代并且任选地被Rd取代；
R2是–NReRf；
R3是–CH3或–CN；
Ra是–NRrRs；
Rb各自独立地选自卤素、氰基、羟基、氧代、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、- NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-SH和-SCH3，其中任意C1-C6烷基和C1-C6烷氧基任 选地被卤素、氰基、羟基、氧代、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-NH2、-NHCH3、- N(CH3)2、-SH或-SCH3取代，其中任意C1-3烷基和C1-3烷氧基任选地被卤素、羟 基、氰基或氧代取代；
Rc是-ORm、-SRm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、- NRmC(O)Rn、-S(O)1-2Rm、-NRmS(O)1-2Rn、-S(O)1-2NRmRn、C1-C6烷基、C2-C6烯 基、C2-C6炔基、3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元芳基或5-10元杂芳基， 其中Rc的任意C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选地被Rx取代；
Rd各自独立地选自卤素、氰基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基，其中任意C1- C6烷基和C1-C6烷氧基任选地被卤素、羟基、氰基或氧代取代；
Re是H或C1-C4烷基；
Rf是–C(＝O)-Rg，其中Rg是H、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-NRtRu或3-10元碳环基，所述3-10元碳环基任选地被卤素、羟基、氰基、氧代、C1-C3烷基或3-5元碳环基取代；
Rm和Rn独立地选自氢、3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10 元杂芳基和C1-C6烷基，其中Rm和Rn的任意3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10 元芳基、5-10元杂芳基和C1-C6烷基任选地被Rw取代；或Rm和Rn与它们所连 接的原子一起形成3-8元杂环基，其任选地被Rw取代；
Rr和Rs各自独立地选自氢、3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5- 10元杂芳基和C1-C3烷基，其中Rr和Rs的任意3-6元杂环基、3-6元碳环基、6- 10元芳基、5-10元杂芳基和C1-C3烷基任选地被Rv取代；或Rr和Rs与它们所连 接的原子一起形成3-8元杂环基或5-10元杂芳基，该3-8元杂环基和5-10元杂芳 基任选地被Rv取代；
Rt和Ru独立地选自氢、3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10元 杂芳基和C1-C3烷基，其中Rt和Ru的任意3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元 芳基、5-10元杂芳基和C1-C3烷基任选地被卤素、羟基、氰基或氧代取代；或Rt和Ru与它们所连接的原子一起形成3-6元杂环基，其任选地取代有卤素、羟基、 氰基或氧代，或任选地被卤素、羟基、氰基或氧代取代的C1-C6烷基；
Rv各自独立地选自卤素、羟基、氰基、氧代、6-10元芳基、5-10元杂芳 基、C1-C6烷基、3-6元碳环基、3-6元杂环基和C1-C6烷氧基，其中Rv的任意6- 10元芳基、5-10元杂芳基、C1-C6烷基、3-6元碳环基、3-6元杂环基和C1-C6烷 氧基任选地被卤素、羟基、氰基、C1-C6烷基、氧代、3-6元碳环、3-6元杂环 基、C1-C6烷氧基、5-10元杂芳基或6-10元芳基取代，它们各自任选地被卤素、 羟基、氰基、氧代、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基取代；
Rw各自独立地选自卤素、羟基、氰基、氧代、6-10元芳基、5-10元杂芳 基、C1-C6烷基、3-6元碳环基、3-6元杂环基和C1-C6烷氧基，其中Rw的任意6- 10元芳基、5-10元杂芳基、C1-C6烷基、3-6元碳环基、3-6元杂环基和C1-C6烷 氧基任选地被卤素、羟基、氰基、C1-C6烷基、氧代、3-6元碳环基、3-6元杂环 基、C1-C6烷氧基、5-10元杂芳基或6-10元芳基取代，它们各自任选地被卤素、 羟基、氰基、氧代、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基取代；且
Rx各自独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、氧代、-ORm、-SRm、- NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、-NRmC(O)Rn、-S(O)1-2Rm、- NRmS(O)1-2Rn、-S(O)1-2NRmRn、3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元芳基和5- 10元杂芳基，其中任意3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元芳基和5-10元杂芳基任选地被卤素、羟基、氰基、硝基、C2-C3炔基、-ORm、-SRm、-NRmRn、- C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、-NRmC(O)Rn、-S(O)1-2Rm、-NRmS(O)1-2Rn、-S(O)1-2NRmRn、C1-C6烷基、氧代、3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元 芳基或5-10元杂芳基取代，其中任意C1-C6烷基、C2-C3炔基、3-10元碳环基、 3-10元杂环基、6-10元芳基和5-10元杂芳基任选地取代有卤素、羟基、氰基、氧 代、-ORm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、3-6元碳环基、6-10元芳基，或任选地被卤素、羟基、氰基、氧代或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷 基。
在某些实施方案中，Rg是H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-NRtRu，或3-10 元碳环基，所述3-10元碳环基任选地被卤素、羟基、氰基、氧代、C1-C3烷基或 3-5元碳环基取代。
在某些实施方案中，Rx各自独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、氧代、- ORm、-SRm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、-NRmC(O)Rn、- S(O)1-2Rm、-NRmS(O)1-2Rn、-S(O)1- 2NRmRn、3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10 元芳基和5-10元杂芳基，其中任意3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元芳基 和5-10元杂芳基任选地被卤素、羟基、氰基、硝基、-ORm、-SRm、-NRmRn、- C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、-NRmC(O)Rn、-S(O)1-2Rm、-NRmS(O)1-2Rn、-S(O)1- 2NRmRn、C1-C6烷基、氧代、3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元 芳基或5-10元杂芳基取代，其中任意C1-C6烷基、3-10元碳环基、3-10元杂环 基、6-10元芳基和5-10元杂芳基任选地取代有卤素、羟基、氰基、氧代、- ORm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、6-10元芳基，或任选地被 卤素、羟基、氰基、氧代或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基。
在某些实施方案中，R3是–CH3。
在某些实施方案中，R3是–CN。
在某些实施方案中，式(I)的化合物进一步定义为式(Ia)的化合物：
或其盐。
在某些实施方案中，式(I)的化合物进一步定义为式(Ib)的化合物：
在某些实施方案中，式(I)的化合物进一步定义为式(Ic)的化合物：
或其盐。
在某些实施方案中，式(I)的化合物进一步定义为式(Id)的化合物：
或其盐。
在某些实施方案中，R2选自：
在某些实施方案中，R2选自：
在某些实施方案中，R2是环丙基羰基氨基.
在某些实施方案中，基团
选自：
在某些实施方案中，基团
选自：
在某些实施方案中，基团
选自：
在某些实施方案中，基团
选自：
在某些实施方案中，基团
选自：
在某些实施方案中，Ra选自：
在某些实施方案中，Ra选自：
在某些实施方案中，Rc是被Rx取代的C1-C6烷基；且Rx选自3-10元碳环 基、3-10元杂环、6-10元芳基和5-10元杂芳基，其中任意3-10元碳环基、3-10 元杂环、6-10元芳基和5-10元杂芳基任选地被3-10元碳环基、3-10元杂环、6- 10元芳基或5-10元杂芳基取代，其中任意3-10元碳环基、3-10元杂环、6-10元 芳基和5-10元杂芳基任选地取代有卤素、羟基、氰基、氧代、-ORm、-NRmRn、- C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn，或任选地被卤素、羟基、氰基、氧代或C1- C6烷氧基取代的C1-C6烷基。
在某些实施方案中，Rc选自：
在某些实施方案中，Rc选自：
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
及其盐。
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
及其盐。
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
及其盐。
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
及其盐。
在某些实施方案中，基团
选自：
在一些实施方案中，Ra选自：
在某些实施方案中，Rc选自：
还提供了选自实施例1-304的化合物及其盐。
还提供了选自下表1的化合物或其任意的组合及其任意的盐。
表1：本发明的示例性化合物
在一个实施方案中，所述疾病或病症是癌症、真性红细胞增多症、特发性 血小板增多症、骨髓纤维化、慢性髓性白血病(CML)、类风湿性关节炎、炎性肠 病(inflammatorybowel syndrome)、局限性回肠炎、银屑病、接触性皮炎或迟发 型超敏反应。
在一个实施方案中，提供了式(I)的化合物或其盐在治疗癌症、真性红细胞 增多症、特发性血小板增多症、骨髓纤维化、慢性髓性白血病(CML)、类风湿性 关节炎、炎性肠病、局限性回肠炎、银屑病、接触性皮炎或迟发型超敏反应中的 用途。
在一个实施方案中，提供了配制成用于通过吸入施用的组合物。
在一个实施方案中，提供了包含式(I)的化合物或其盐的定量剂量吸入器。
在一个实施方案中，式(I)的化合物或其盐作为JAK1抑制剂的有效性至少 是作为JAK2抑制剂的5-倍。
在一个实施方案中，式(I)的化合物或其盐作为JAK1抑制剂的有效性至少 是作为JAK2抑制剂的10-倍。
在一个实施方案中，式(I)的化合物或其盐作为JAK1抑制剂的有效性至少 是作为JAK3抑制剂的5-倍。
在一个实施方案中，式(I)的化合物或其盐作为JAK1抑制剂的有效性至少 是作为JAK3抑制剂的10-倍。
在一个实施方案中，提供了治疗哺乳动物脱发的方法，包括对该哺乳动物 施用式(I)的化合物或其盐。
在一个实施方案中，提供了式(I)的化合物或其盐用于治疗脱发的用途。
在一个实施方案中，提供了式(I)的化合物或其盐在制备用于治疗哺乳动物 脱发的药剂中的用途。
JANUS激酶抑制剂化合物的合成
本发明化合物可通过本文所述的合成途径合成。在某些实施方案中，除了 本文所包含的描述之外或根据本文所包含的描述，可以使用化学领域中公知的方 法。起始原料通常可从商业来源获得，例如Aldrich Chemicals(Milwaukee, Wis.)，或者使用本领域技术人员熟知的方法容易地制备(例如通过一般描述在 Louis F.Fieser和Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis,v.1-19,Wiley,N.Y. (1967-1999ed.)，BeilsteinsHandbuch der organischen Chemie,4,Aufl.ed. Springer-Verlag,Berlin,包括增刊(也可以通过Beilstein在线数据库得到))，或 Comprehensive Heterocyclic Chemistry,Editors Katrizky和Rees,Pergamon Press,1984中的方法制备。
化合物可以单独制备或作为包含至少2例、例如5至1,000种化合物或10- 100种化合物的化合物库制备。化合物文库可以通过组合“分裂和混合”方法或 通过使用溶液相或固相化学的多种平行合成、通过本领域技术人员已知的方法制 备。因此，根据本发明的另一方面，提供了包含至少2种本发明化合物、例如式 (I)化合物的化合物库。
为了示例性目的，下面的反应方案提供了合成本发明化合物以及关键中间 体的途径。有关各个反应步骤的更详细说明，请参阅下面实施例部分。本领域技 术人员将理解可以使用其他合成路线。尽管在下面讨论的方案中描述了一些特定 的起始材料和试剂，但是可以替换其他起始材料和试剂以提供各种衍生物或反应 条件。此外，可以使用本领域技术人员熟知的常规化学方法、根据本公开内容进 一步修饰通过下述方法制备的许多化合物。
在制备本发明化合物时，可能需要保护中间体的远程官能团(例如伯或仲 胺)。对这种保护的需求将根据远程官能团的性质和制备方法的条件而变化。适合 的氨基保护基包括乙酰基、三氟乙酰基、苄基、苯基磺酰基、叔丁氧基羰基 (BOC)、苄氧基羰基(CBz)和9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)。本领域技术人员容易确定 对这种保护的需要。有关保护基及其用途的一般说明，请参阅T.W.Greene, Protective Groups in Organic Synthesis,JohnWiley&Sons,New York,1991。
常用于合成本发明化合物并且可以使用各种试剂和条件实施的其它转化包 括如下：
(1)羧酸与胺反应形成酰胺。这种转化可以使用本领域技术人员已知的各种试剂来实现，但是可以在Tetrahedron,2005,61,10827-10852中找到全面的综述。
(2)使用各种催化剂、配体和碱可以实现伯胺或仲胺与芳基卤化物或假卤化物(例如三氟甲磺酸酯的反应，通常称为“Buchwald-Hartwig交叉偶联”。这些方 法的综述提供于Comprehensive Organic Name Reactions and Reagents,2010, 575–581中。
(3)芳基卤和乙烯基硼酸或硼酸酯之间的钯交叉偶联反应。这种转变是一种“Suzuki-Miyaura交叉偶联”，该类反应已经充分综述在Chemical Reviews, 1995,95(7)，2457-2483中。
(4)酯的水解得到相应的羧酸，是本领域技术人员公知的，条件包括：对于甲基 和乙基酯，使用强碱水溶液，例如锂、钠或钾的氢氧化物或者强的含水无机 酸例如HCl；对于叔丁基酯，可以使用酸、例如在二噁烷中的HCl或在二氯 甲烷(DCM)中的三氟乙酸(TFA)进行水解。
方案1
式4的化合物可以通过方案1中所示的通用合成方法制备。
式2的化合物可以通过在适合的有机溶剂、例如但不限于二氯甲烷(DCM) 中、在0℃至室温的温度范围用各种酰氯处理苯胺1来合成，时间为约30分钟到 48小时。或者，式2的化合物可以通过在酰胺偶联剂、例如但不限于(1-[双(二甲 基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸酯)(HATU)存在 下、在适合的有机溶剂例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中、在室温到65℃ 的温度用各种羧酸处理苯胺1来制备，时间约为12小时。在约室温使用质子酸、 例如但不限于三氟乙酸或盐酸将2的N-叔-丁氧基羰基(Boc)基团脱保护，容易地 得到式3的化合物。式4的化合物可以通过还原胺化、使用式3的化合物和适当 的醛或酮、在还原剂例如但不限于三乙酰氧基硼氢化钠存在下、在适合的有机溶 剂例如但不限于二氯甲烷中、在约室温合成，时间约30分钟至48小时。或者， 式4的化合物可以通过在碱例如但不限于二异丙基乙胺(DIEA)或三乙胺(TEA)的 存在下、在适合的有机溶剂例如但不限于DCM或DMF中、在约0℃至约室温的 温度范围、使用烷基碘化物/溴化物/甲磺酸盐/三氟甲磺酸盐直接烷基化3的哌啶 来合成。在钯催化剂条件下用芳基、杂芳基或杂环硼酸或硼酸酯处理4(其中Rg包括适合的基团、例如Cl、Br、I、OTf等)，得到相应的芳基、杂芳基或杂环取 代的化合物，例如但不限于[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)、在无机碱例 如但不限于碳酸钾存在下、在有机溶剂例如但不限于1,4-二噁烷中、在升温下。
方案2
式9的化合物可以通过方案2中所示的通用合成方法制备。
在约室温使用质子酸例如但不限于三氟乙酸或盐酸、将1的Boc基团脱保 护，容易地得到化合物7。式8的化合物可以通过还原胺化、在还原剂例如但不 限于三乙酰氧基硼氢化钠存在下、在适合的有机溶剂例如但不限于二氯甲烷中、 在约室温、通过处理7和适当的醛或酮约6小时至12小时来合成。或者，式8的 化合物可以通过在碱例如但不限于二异丙基乙胺或三乙胺存在下、在适合的有机 溶剂例如但不限于DCM或DMF、在约0℃至约室温的温度范围、使用烷基碘化 物/溴化物/甲磺酸盐/三氟甲磺酸盐直接烷基化7的哌啶来合成。在适合的有机溶 剂例如但不限于二氯甲烷(DCM)中、在0℃至室温的温度和约30分钟至12小时 的时间内，用各种酰氯处理式8的化合物，得到式9的化合物。或者，式9的化 合物可以通过在酰胺偶联试剂例如但不限于HATU存在下、在适合的有机溶剂例 如但不限于DMF中、在室温至65℃的温度范围用各种羧酸处理苯胺8约12小时 来制备。
方案3
式10、11和12的化合物可以通过方案3中所示的通用合成方法制备。
式10的化合物可以通过用各种取代的4-硝基碳酸酯和有机碱例如但不限于 三乙胺、在合适的有机溶剂例如但不限于乙醇(EtOH)中、在约室温处理3约30 分钟到12小时来合成。同样地，可以使用其他氨基甲酸酯形成方法，例如但不限 于用烷基或芳基氯甲酸酯处理化合物3。用适当取代的环氧乙烷、高氯酸锂和有 机碱例如但不限于DIEA、在合适的有机溶剂例如但不限于乙腈中、在约室温处 理式3的化合物约6小时至16小时，提供了式11的化合物。式12的化合物可以 通过在酰胺偶联试剂例如但不限于HATU、在适合的有机溶剂例如但不限于 DMF中、在室温至65℃的温度范围用各种羧酸处理哌啶3约12小时来制备。从化合物3，式13的化合物可以通过用羰基二咪唑、有机碱例如但不限于DIEA、 在有机溶剂例如但不限于1-甲基-2-吡咯烷酮中、在约为80℃的温度处理化合物3 达1小时到24小时来形成。或者，可以使用其他方法形成式13的化合物，例如 但不限于用各种取代的异氰酸酯处理化合物3。
方案4
式17的化合物可以通过方案4中所示的通用合成方法制备。
式15的化合物可以通过下列方式合成：在适合的有机溶剂例如但不限于二氯 甲烷(DCM)、在0℃至室温的温度用不同酰氯处理苯胺14，处理时间在约30分 钟至48小时。或者，式15的化合物可以通过在酰胺偶合试剂例如但不限于 HATU、在适合的有机溶剂例如但不限于DMF中、在室温至65℃的温度范围、 用各种羧酸处理苯胺14约12小时来制备。使用质子酸例如但不限于三氟乙酸或 盐酸、在约室温对15的乙缩醛基团进行脱保护，容易地得到酮16。式17的化合 物可以通过还原胺化、使用式16的化合物和适当取代的胺、在还原剂例如但不限 于三乙酰氧基硼氢化钠存在下、在适合的有机溶剂例如但不限于二氯甲烷中、在约室温进行约6小时至12小时来合成。
方案5
式1的化合物可以通过方案5中所示的通用合成方法制备。
用(氰基甲基)膦酸二乙酯、在四氢呋喃与氢化钠中、在0℃-约室温的温度处 理18，得到化合物19。化合物20可以由3-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺和化合物19 在乙腈中、在有机碱例如但不限于1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)存在下、 在约室温进行约48hrs的1,4-共轭加成形成。
方案6
式29的化合物可以通过方案6中所示的通用合成方法制备。
式29的化合物可以使用方案1和方案5中概括的类似通用方法制备。
式30、31、32、33、34和35的化合物可以通过方案7中所示的通用合成方 法制备。
式30–35的化合物可以由其相应的乙腈类似物4–6和23–25直接合成。在适 合的有机溶剂例如但不限于DCM中、在-78℃的温度，用氢化二异丁基铝分别 处理4–6和23–25约2-4hrs，得到相应的醛。用乙-1,2-二硫醇和酸例如但不限于 4-甲基苯磺酸、在适合的有机溶剂例如但不限于DCM中、在室温至60℃的温度 处理这些醛约2-6hrs，产生相应的二噻烷。可以用阮内镍、在氢气气氛中、在适 合的有机溶剂例如但不限于THF中、在室温处理该二噻烷约8-24hrs，得到各个 相应的乙基类似物30–35。另外的实施例参见例如WO 2016/061751和WO 2016/064935。
应当理解，在适当的官能团存在的情况下，各种化学式的化合物或其制备 中使用的任何中间体可以通过一种或多种标准合成方法、采用缩合、取代、氧 化、还原或裂解反应进一步衍生化。具体的取代方法包括常规烷基化、芳基化、 杂芳基化、酰化、磺酰化、卤化、硝化、甲酰化和偶联方法。
在另一个实例中，伯胺或仲胺基团可通过酰化转化成酰胺基团(-NHCOR’或 –NRCOR’)。酰化的实现可以通过在碱例如三乙基胺存在下、在适合的溶剂例如 二氯甲烷中与适合的酰卤反应，或在适合的偶联剂如HATU(O-(7-氮杂苯并三唑- 1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下、在适合的溶剂如二氯甲烷中与适 当的羧酸反应。类似地，胺基可以在适合的碱例如三乙胺存在下、在适合的溶剂 例如二氯甲烷中通过与适合的磺酰氯反应，转化成磺酰胺基团(-NHSO2R’或– NR”SO2R’)。在适合的碱如三乙胺的存在下、在适合的溶剂例如在二氯甲烷中， 通过与适当的异氰酸酯反应，伯或仲胺基团可以转化成脲基团(-NHCONR’R”或– NRCONR’R”)。
胺(-NH2)可以通过还原硝基(-NO2)基团来获得，例如通过催化氢化、使用例 如氢、在金属催化剂例如支持物如碳上的靶存在下、在溶剂例如乙酸乙酯或醇例 如甲醇中。或者，可以在酸如盐酸的存在下，使用例如金属例如锡或铁，通过化 学还原进行转化。
在另一个实例中，胺(-CH2NH2)基团可以通过还原腈(-CN)来获得，例如通 过催化氢化、使用例如氢在金属催化剂例如在支持物如碳上的钯或阮内镍存在 下、在溶剂如醚、例如环醚如四氢呋喃中、在适合的温度例如约-78℃至溶剂的回 流温度。
在另一个实例中，胺(-NH2)基团可以从羧酸基团(-CO2H)获得，通过转化为 相应的酰基叠氮化物(-CON3)、Curtius重排和所得异氰酸酯(-N＝C＝O)的水解。
醛基(-CHO)可以通过使用胺和硼氢化物例如三乙酰氧基硼氢化钠或氰基硼 氢化钠的还原胺化、在溶剂如卤代烃如二氯甲烷或醇如乙醇中、必要时在酸如乙 酸存在下、在约环境温度，转化为胺基(-CH2NR’R”)。
在另一个实例中，在本领域技术人员已知的标准条件下，使用适当的膦烷 或膦酸酯，通过使用Wittig或Wadsworth-Emmons反应，可以将醛基转化为烯 基(-CH＝CHR')。
醛基可以通过在适合的溶剂如甲苯中使用二异丁基氢化铝还原酯基(例如–CO2Et)或腈(-CN)来获得。或者，醛基可以通过使用本领域技术人员已知的任何 适合的氧化剂氧化醇基来获得。
酯基(-CO2R’)可通过酸或碱催化水解转化为相应的酸基(-CO2H)，这取决于 R的性质。如果R是t-丁基，酸催化水解可以例如通过用有机酸例如三氟乙酸在 水性溶剂中处理、或通过用无机酸如盐酸在水性溶剂中处理来实现。
羧酸基团(-CO2H)可以在适合的偶联剂如HATU存在下、在适合的溶剂如 二氯甲烷中，通过与适当的胺反应而转化成酰胺(CONHR’或–CONR’R”)。
在另一个实例中，通过转化为相应的酰氯(-COCl)、然后进行Arndt-Eistert 合成，可将羧酸一碳同系化(即–CO2H至–CH2CO2H)。
在另一个实例中，-OH基团可以由相应的酯(例如-CO2R’)或醛(-CHO)通过 还原产生，使用例如复合金属氢化物如氢化锂铝在二乙醚或四氢呋喃中，或硼氢 化钠在溶剂如甲醇中。或者，可以通过使用例如氢化铝锂在溶剂如四氢呋喃中， 或使用硼烷在溶剂如四氢呋喃中，还原相应的酸(-CO2H)来制备醇。
使用本领域技术人员已知的条件，醇基可以转化为离去基团，例如卤原子 或磺酰基氧基如烷基磺酰基氧基、例如三氟甲基磺酰基氧基或芳基磺酰基氧基、 例如对甲苯磺酰基氧基团。例如，醇可以与亚硫酰氯在卤代烃如二氯甲烷中反 应，得到相应的氯化物。碱(例如三乙胺)也可用于该反应。
在另一个实例中，醇、酚或酰胺基团可以通过在在溶剂如四氢呋喃中、在 膦如三苯基膦和活化剂如偶氮二甲酸二乙基-、二异丙基或二甲基酯存在下偶联酚 或酰胺与醇而形成。或者，可以通过使用适合的碱如氢化钠进行去质子化，然后 加成烷基化剂如烷基卤来实现。
化合物中的芳族卤素取代基可以进行卤素-金属交换，通过用碱例如锂碱如 正丁基或叔丁基锂、任选地在低温例如约-78℃、在溶剂如四氢呋喃中处理，然后 用亲电试剂猝灭，以引入所需的取代基。因此，例如，可以通过使用N,N-二甲基 甲酰胺作为亲电试剂引入甲酰基。或者，芳族卤素取代基可以进行金属(例如钯或 铜)催化的反应，以引入例如酸、酯、氰基、酰胺、芳基、杂芳基、烯基、炔基、 硫代或氨基取代基。可采用的适合方法包括Heck，Suzuki，Stille，Buchwald或 Hartwig描述的方法。
芳族卤素取代基在与适当的亲核试剂如胺或醇反应后也可经历亲核取代。 有利地，这种反应可以在微波辐射存在下、在升高的温度进行。
分离方法
在各个示例性方案中，将反应产物彼此分离或与起始材料分离可能是有利 的。通过本领域常用的技术将各个步骤或一系列步骤的所需产物分离或纯化(下文 中分离)至所需的均匀度。通常，这种分离包括从溶剂或溶剂混合物中研磨、多相 萃取或结晶，蒸馏、升华或色谱法。色谱法可涉及许多方法，包括例如：反相和 正相；尺寸排阻；离子交换；超临界流体；高、中和低压液相色谱方法和装置； 小规模分析；模拟移动床(SMB)和制备型薄层或厚层色谱，以及小规模薄层和快 速色谱技术。
另一类分离方法包括用选择的试剂处理混合物，以结合或以其它方式分离 所需产物、未反应的原料、产物反应等。这些试剂包括吸附剂或吸收剂，如活性 炭、分子筛、离子交换介质等。或者，试剂可以是碱性物质情况下的酸、酸性物 质情况的碱、结合试剂如抗体、结合蛋白、选择性螯合剂如冠醚、液/液离子提取 试剂(LIX)等。
选择适合的分离方法取决于所涉及材料的性质。实施例分离方法包括蒸馏 和升华中的沸点和分子量、色谱中是否存在极性官能团、多相萃取中材料在酸性 和碱性介质中的稳定性等。本领域技术人员将应用最可能实现所需分离的技术。
非对映异构体混合物可以通过本领域技术人员熟知的方法如通过色谱法或 分级结晶、基于它们的物理化学差异分离成它们各自的非对映异构体。对映异构 体可以如下分离：通过与适当的光学活性化合物(例如手性助剂如手性醇或 Mosher酰氯)反应，将对映体混合物转化为非对映体混合物，分离非对映异构体 并转化(例如水解)各个非对映异构体为相应的纯对映体。此外，本发明的一些化 合物可以是阻转异构体(例如取代的联芳基化合物)并且被认为是本发明的一部 分。也可以通过使用手性HPLC柱或超临界流体色谱法分离对映体。
单一立体异构体，例如对映异构体，基本上不含其立体异构体，可以通过 使用方法如使用光学活性拆分剂形成非对映异构体来拆分外消旋混合物(Eliel,E. 和Wilen,S.,Stereochemistry of Organic Compounds,John Wiley&Sons,Inc., New York,1994；Lochmuller,C.H.,J.Chromatogr.,113(3):283-302(1975))而获 得。本发明的手性化合物的外消旋混合物可以通过任何适合的方法分离，包括： (1)与手性化合物形成离子、非对映异构体盐并通过分级结晶或其他方法分离，(2) 与手性衍生化试剂形成非对映异构体化合物、分离非对映异构体并转化为纯立体 异构体，和(3)在手性条件下直接分离基本上纯的或富集的立体异构体。参见: Drug Stereochemistry,Analytical Methods andPharmacology,Irving W.Wainer, Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York(1993)。
非对映体盐可以通过对映体纯的手性碱如番木鳖碱、奎宁、麻黄碱、士的 宁、α-甲基-β-苯基乙胺(安非他明)等与带有酸性官能团如羧酸和磺酸的不对称化 合物反应来形成。可以通过分级结晶或离子色谱法诱导非对映异构体盐分离。为 了分离氨基化合物的光学异构体，加入手性羧酸或磺酸如樟脑磺酸、酒石酸、扁 桃酸或乳酸可导致形成非对映体盐。
或者，待拆分的底物与手性化合物的一种对映体反应形成非对映异构体对(Eliel,E.和Wilen,S.,Stereochemistry of Organic Compounds,John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994,p.322)。非对映异构化合物可以通过使不对称化合物与对映 体纯的手性衍生试剂如薄荷基衍生物反应、然后分离非对映异构体和水解以产生 纯的或富集的对映异构体来形成。确定光学纯度的方法包括制备外消旋混合物的 手性酯，如在碱存在下制备薄荷酯如(-)氯甲酸薄荷酯，或乙酸α-甲氧基-α-(三氟 甲基)苯酯(Jacob,J.Org.Chem.47:4165(1982))，并分析NMR光谱以确定存在两 种阻转异构对映体或非对映体。阻转异构化合物的稳定的非对映异构体可以按照 分离阻转异构体萘基-异喹啉的方法、通过正相和反相色谱法分开和分离(WO 96/15111，在此引入作为参考)。通过方法(3)，可以使用手性固定相(Chiral Liquid Chromatography W.J.Lough,Ed.,Chapman和Hall,New York,(1989)； Okamoto,J.of Chromatogr.513:375-378(1990))的色谱法分离两种对映异构体的 外消旋混合物。富集或纯化的对映体可以通过用于区分具有不对称碳原子的其他 手性分子的方法来区分，例如旋光和圆二色性。手性中心和对映体的绝对立体化 学可以通过X射线晶体学确定。
可以通过表征方法如NMR和分析型HPLC观察式(I)化合物的位置异构体 如E和Z形式和用于它们合成的中间体。对于其中相互转化的能垒足够高的某些 化合物，可以分离E和Z异构体，例如通过制备型HPLC。
药物组合物和施用
本发明所涉及的化合物是JAK激酶抑制剂，如JAK1抑制剂，可用于治疗几 种疾病，例如炎性疾病如哮喘。
因此，另一个实施方案提供了药物组合物或药剂，其包含本发明的化合物如 式(I)的化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)和药学上可接受的载体、稀释剂或 赋形剂，以及使用本发明化合物制备这类组合物和药剂的方法。
在一个实例中，式(I)的化合物可以通过在环境温度、在适当的pH和所需的 纯度下与生理学上可接受的载体即在所用剂量和浓度下对接受者无毒的载体混合 来配制为盖仑制剂施用形式。制剂的pH主要取决于具体用途和化合物的浓度， 但通常在约3至约8的范围内。在一个实例中，式(I)的化合物配制在pH5的乙酸 盐缓冲液中。另一个实施方案中，本发明的化合物例如式(I)的化合物是无菌的。 化合物可以例如作为固体或无定形组合物、作为冻干制剂或作为水溶液储存。
以符合良好医学实践的方式配制、给药和施用组合物。在这种情况下考虑的 因素包括所治疗的特定疾病、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床状况、疾 病的原因、药剂的递送部位、施用方式、施用方案以及医务人员所知的其他因 素。
应该理解，任何特定患者的特定剂量水平将取决于多种因素，包括所用特定 化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、施用途 径、排泄率、药物组合和正在接受治疗的特定疾病的严重程度。最佳剂量水平和 施用频率将通过临床试验确定，如制药领域所要求的。通常，口服施用的日剂量 范围为每公斤体重约0.001mg至约100mg、通常为0.01mg至约50mg/kg、例如 0.1至10mg/kg的单剂量或分剂量。通常，吸入施用的日剂量范围为每千克人体 重约0.1μg至约1mg、优选0.1μg至50μg/kg的单次或分次剂量。另一方面，在某 些情况下可能需要使用超出这些限制的剂量。
本发明的化合物如式(I)的化合物可以通过任何适合的方式施用，包括口服、 局部(包括口腔和舌下)、直肠、阴道、透皮、肠胃外、皮下、腹膜内、肺内、皮 内、鞘内、吸入和硬膜外和鼻内，且如果需要局部治疗则病灶内施用。肠胃外输 注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。在某些实施方案中，使用吸 入施用。
本发明化合物如式(I)的化合物，可以任何方便的施用形式施用，例如片 剂、粉剂、胶囊剂、锭剂、颗粒剂、溶液剂、分散剂、混悬剂、糖浆剂、喷雾 剂、蒸气剂、栓剂、凝胶剂、乳剂、贴剂等。这些组合物可含有药物制剂中常用 的组分，例如稀释剂(例如葡萄糖、乳糖或甘露醇)、载体、pH调节剂、缓冲剂、 甜味剂、填充剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防 腐剂、抗氧化剂、不透明剂、助流剂、加工助剂、着色剂、芳香剂、调味剂、其 它已知添加剂以及其它活性剂。
适合的载体和赋形剂是本领域技术人员公知的，并且在例如Ansel,Howard C.,等人,Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2004；Gennaro,Alfonso R.,等人，Remington:The Science and Practice of Pharmacy.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2000；和Rowe,Raymond C.Handbook of PharmaceuticalExcipients.Chicago,Pharmaceutical Press,2005中详细描述。例如载体包括溶 剂、分散介质、涂料、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌 剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、凝胶、粘合剂、赋 形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料、类似物质及其组合，如本领域 普通技术人员已知的(参见例如Remington'sPharmaceutical Sciences,pp 1289- 1329,1990)。除非任何常规载体与活性成分不相容，否则考虑其在治疗或药物组 合物中的用途。示例性赋形剂包括磷酸二钙、甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、 糖精钠、纤维素、碳酸镁或其组合。药物组合物可包含不同类型的载体或赋形 剂，这取决于它是以固体、液体或气溶胶形式施用以及是否需要对这些施用途径 灭菌。
例如，用于口服施用的片剂和胶囊可以是单位剂量呈递形式，并且可以含 有常规赋形剂如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄蓍胶或聚乙 烯基-吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨糖醇或甘氨 酸；压片润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解剂，例如马 铃薯淀粉，或可接受的润湿剂如十二烷基硫酸钠。可以根据常规药学实践中熟知 的方法包衣片剂。口服液体制剂可以是例如水性或油性悬浮液、溶液、乳液、糖 浆或酏剂的形式，或者可以作为干产品存在，用于在使用前用水或其它适合的载 体重构。这种液体制剂可含有常规添加剂如悬浮剂，例如山梨糖醇、糖浆、甲基 纤维素、葡萄糖浆、明胶氢化食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨糖醇单 油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(可包括食用油)例如杏仁油、分馏椰子油、油性 酯如甘油、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸，以及如 果需要时的常规调味剂或着色剂。
对于局部施用于皮肤，化合物可以制成霜剂、洗剂或软膏。可用于药物的 霜剂或软膏制剂是本领域熟知的常规制剂，例如药学标准教科书例如英国药典中 描述的。
本发明的化合物如式(I)的化合物也可以配制用于吸入，例如鼻喷雾剂或干 粉剂或气溶胶吸入剂。对于通过吸入的递送，化合物通常为微粒形式，其可通过 多种技术制备，包括喷雾干燥、冷冻干燥和微粉化。气溶胶的产生可以使用例如 压力驱动的喷射雾化器或超声雾化器进行，例如通过使用推进剂驱动的计量气溶 胶，或从例如吸入胶囊或其他“干粉”递送系统的无推进剂施用微粉化的化合 物。
作为实例，本发明的组合物可以制备成悬浮液，用于从雾化器递送或作为 液体推进剂中的气雾剂，例如用于加压定量吸入器(PMDI)。适用于PMDI的推进 剂是技术人员已知的并且包括CFC-12、HFA-134a、HFA-227、HCFC-22 (CCl2F2)和HFA-152(CH4F2和异丁烷)。
在某些实施方案中，本发明的组合物是干粉形式，用于使用干粉吸入器 (DPI)递送。已知许多类型的DPI。
通过施用递送的微粒可以与辅助递送和释放的赋形剂一起配制。例如，在 干粉制剂中，微粒可以用大载体颗粒配制，从而有助于从DPI流入肺部。适合的 载体颗粒是已知的并且包括乳糖颗粒；它们可以具有质量中值空气动力学直径， 例如大于90μm。
在基于气雾剂的制剂的情况中，实例为：
＊例如式(I)的化合物。
化合物如式(I)的化合物可根据所用的吸入器系统按所述给药。除化合物 外，施用形式还可含有如上所述的赋形剂，或者例如推进剂(例如在计量气溶胶的 情况下为Frigen)、表面活性物质、乳化剂、稳定剂、防腐剂、调味剂、填充剂 (例如粉末吸入剂情况下的乳糖)；或者，如果适合，还有其他活性化合物。
出于吸入的目的，可以使用很多系统，利用适合于患者的吸入技术，可以 产生和施用最佳粒径的气溶胶。除了使用适配器(垫片(spacer)、膨胀器)和梨形容 器(例如
)和喷射吹气喷雾的自动装置
用于计 量气溶胶外，特别对于粉末吸入器，许多技术方案是可用的(例如
或吸入器如美国专利No.5,263,475中所述，在此引入作 为参考)。另外，本发明的化合物如式(I)的化合物可以在多室装置中递送，从而允 许递送组合剂。
所述化合物如式(I)的化合物也可以在无菌介质中肠胃外施用。取决于所使 用的载体和浓度，化合物可以悬浮或溶解在媒介物中。有利地，可以将佐剂如局 部麻醉剂、防腐剂或缓冲剂溶解在媒介物中。
靶向吸入递药
最近已经综述了通过局部(吸入)施用递送至肺部的药物的优化(Cooper,A.E. 等人Curr.Drug Metab.2012,13,457-473)。由于递送装置的限制，吸入药物的剂 量在人体中可能较低(约<1mg/天)，这使得需要高效分子。对于预定通过干粉吸入 递送的化合物，还需要能够产生结晶形式的化学物质，其可以微粉化至1-5μm的 尺寸。另外，化合物需要在给定的时间段内在肺中保持足够的浓度，以便能够发 挥所需持续时间的药理学作用，并且对于其中所述靶的全身抑制是不希望的药理 学靶标，需要具有低的全身暴露。肺对大分子(蛋白质、肽)以及小分子具有固有 的高渗透性以及伴随的短肺半衰期，因此有必要通过修饰化合物的一种或多种特 征来减弱肺吸收率：最小化膜渗透性、降低溶解速率或将一定程度的碱性引入化 合物中以增强与富含磷脂的肺组织的结合或通过捕获在酸性亚细胞区室(例如溶酶 体(pH 5))中。因此，在某些实施方案中，本发明的化合物表现出这些特征中的一 种或多种。
使用JANUS激酶抑制剂的治疗方法和用途
本发明的化合物如式(I)的化合物，抑制Janus激酶的活性，例如JAK1激 酶。本发明的化合物如式(I)的化合物，通过JAK1激酶以及STAT介导的细胞因 子产生而抑制信号传导和转录激活因子(STAT)的磷酸化。本发明的化合物如式(I) 的化合物可用于通过细胞因子途径抑制细胞中的JAK1激酶活性，如IL-6、IL- 15、IL-7、IL-2、IL-4、IL-9、IL-10、IL-13、IL-21、G-CSF、IFNα、IFNβ或 IFNγ途径。因此，在一个实施方案中，提供了使细胞与本发明化合物如式(I)的化 合物接触的方法，以抑制细胞中的Janus激酶活性(例如JAK1活性)。
本发明化合物如式(I)的化合物，可用于治疗由异常IL-6、IL-15、IL-7、IL- 2、IL-4、IL9、IL-10、IL-13、IL-21、G-CSF、IFNα、IFNβ或IFNγ细胞因子信 号传导驱动的免疫疾病。
因此，一个实施方案包括本发明的化合物如式(I)的化合物，其用于疗法。
在某些实施方案中，提供了本发明的化合物如式(I)的化合物在治疗炎性疾 病中的用途。进一步提供了本发明化合物如式(I)的化合物在制备用于治疗炎性疾 病如哮喘的药物中的用途。还提供了本发明的化合物如式(I)的化合物用于治疗炎 性疾病如哮喘的用途。
另一个实施方案包括预防、治疗或减轻患者疾病或病症例如哮喘的严重性 的方法，所述疾病或病症响应于Janus激酶活性如JAK1激酶活性的抑制。该方 法可包括给患者施用治疗有效量的本发明化合物如式(I)的化合物的步骤。在一个 实施方案中，响应于Janus激酶如JAK1激酶抑制的疾病或病症是哮喘。
在一个实施方案中，疾病或病症是癌症、中风、糖尿病、肝肿大、心血管 疾病、多发性硬化症、阿尔茨海默病、囊性纤维化、病毒性疾病、自身免疫性疾 病、动脉粥样硬化、再狭窄、银屑病、类风湿性关节炎、炎症性肠病、哮喘、过 敏性疾病、炎症、神经障碍、激素相关疾病、与器官移植相关的病症(例如移植排 斥)、免疫缺陷病、破坏性骨病、增生性疾病、感染性疾病、与细胞死亡相关的病 症、凝血酶诱导的血小板聚集、肝病、涉及T细胞活化的病理性免疫病症、CNS 紊乱或骨髓增生性疾病。
在一个实施方案中，所述炎性疾病是类风湿性关节炎、银屑病、哮喘、炎 性肠病、接触性皮炎或迟发型超敏反应。在一个实施方案中，所述自身免疫疾病 是类风湿性关节炎、狼疮或多发性硬化。
在一个实施方案中，癌症是乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、睾丸 癌、阴茎癌、泌尿生殖道癌、精原细胞瘤、食道癌、喉癌、胃癌(gastric)、胃癌 (stomach)、胃肠道癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、滤泡癌、黑色素瘤、肺癌、小细胞 肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、结肠癌、胰腺癌、甲状 腺癌、乳头状癌、膀胱癌、肝癌、胆道癌、肾癌、骨癌、骨髓疾病、淋巴系统疾 病(lymphoid disorder)、毛细胞癌、口腔和咽(口)癌、唇癌、舌癌、口腔癌、唾液 腺癌、咽癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲 状腺癌、大肠癌、子宫内膜癌、子宫癌、脑癌、中枢神经系统癌、腹膜癌、肝细 胞癌、头癌、颈癌、霍奇金病或白血病。
在一个实施方案中，所述疾病是一种骨髓增生性疾病。在一个实施方案 中，骨髓增生性疾病是真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、骨髓纤维化或 慢性粒细胞白血病(CML)。
另一个实施方案包括本发明的化合物如式(I)的化合物在制备用于治疗本文 所述疾病(例如炎性病症、免疫病症或癌症)的药物的用途。在一个实施方案中， 本发明提供了通过靶向抑制JAK激酶如JAK1来治疗如本文所述的疾病或病症如 炎性病症、免疫病症或癌症的方法。
联合疗法
本发明的化合物如式(I)的化合物可以单独使用，也可以与用于治疗的其他 治疗药物联合使用。药物组合物或施用方案的第二种化合物通常具有与本发明化 合物互补的活性，由此它们不会彼此产生不利影响。这类药剂适合地以对于预期 目的有效的量组合存在。所述化合物可以在单一药物组合物中一起施用或分开施 用，并且当分开施用时，这可以同时或顺序施用。这种顺序施用在时间上可能是 接近或远程的。
例如其他化合物可以与本发明涉及的化合物组合用于预防或治疗炎性疾病 如哮喘。因此，本发明还涉及包含治疗有效量的本发明化合物和一种或多种其他 治疗剂的药物组合物。用于与本发明化合物联合治疗的适合治疗剂包括但不限 于：腺苷A2A受体拮抗剂；抗感染剂；非甾体糖皮质激素受体(GR受体)激动 剂；抗氧化剂；β肾上腺素能受体激动剂；CCR1拮抗剂；趋化因子拮抗剂(不是 CCR1)；皮质类固醇；CRTh2拮抗剂；DP1拮抗剂；甲酰肽受体拮抗剂；组蛋白 去乙酰基激活剂；氯通道hCLCA1阻断剂；上皮钠通道阻滞剂(ENAC阻断剂； 细胞间粘附分子1阻断剂)(ICAM阻断剂)；IKK2抑制剂；JNK抑制剂；环加氧 酶抑制剂(COX抑制剂)；脂氧合酶抑制剂；白三烯受体拮抗剂；双β2肾上腺素 受体激动剂/M3受体拮抗剂(MABA化合物)；MEK-1抑制剂；髓过氧化物酶抑制 剂(MPO抑制剂)；毒蕈碱拮抗剂；p38MAPK抑制剂；磷酸二酯酶PDE4抑制 剂；磷脂酰肌醇3-激酶δ抑制剂(PI3-激酶δ抑制剂)；磷脂酰肌醇3-激酶γ抑制剂 (PI3-激酶γ抑制剂)；过氧化物酶体增殖物激活受体激动剂(PPARγ激动剂)；蛋白 酶抑制剂；视黄酸受体调节剂(RARγ调节剂)；他汀类；血栓烷拮抗剂；TLR7受 体激动剂；或血管扩张剂。
此外，本发明的化合物如式(I)的化合物可以与如下药物联用：(1)皮质类固 醇，例如双丙酸阿氯米松、阿洛米松(amelometasone)、倍氯米松双丙酸酯、布地 奈德、丙酸布替可特(butixocort propionate)、biclesonide、blobetasol propionate、去异丁酸酯环索奈德(desisobutyrylciclesonide)、地塞米松、 dtiprednol dicloacetate、肤轻松、氟替卡松糠酸酯、丙酸氟替卡松、氯替泼诺碳 酸乙酯(loteprednol etabonate)(局部)或糠酸莫米松；(2)β2-肾上腺素受体激动剂， 例如舒喘灵(salbutamol)、沙丁胺醇、特布他林、非诺特罗、比托特罗、卡巴特 罗、克仑特罗、吡布特罗、rimoterol、特布他林、曲托喹酚(tretoquinol)、妥洛特 罗(tulobuterol)和长效β2-肾上腺素受体激动剂，如间羟异丙肾上腺素、异丙肾上 腺素(isoproterenol)、异丙肾上腺素(isoprenaline)、沙美特罗、茚达特罗、福莫特 罗(包括富马酸福莫特罗)、阿福特罗、卡莫特罗、abediterol、vilanteroltrifenate、奥达特罗(olodaterol)；(3)皮质类固醇/长效β2激动剂组合产品，如沙 美特罗/丙酸氟替卡松(
也以
出售)、福莫特罗/布地奈德
福莫特罗/氟替卡松丙酸酯
福莫特罗/环索奈德、福 莫特罗/糠酸莫米松、茚达特罗/糠酸莫米松、三氟甲磺酸维兰特罗酯(vilanterol trifenate)/氟替卡松糠酸酯或阿福特罗/环索奈德；(4)抗胆碱能药，例如毒蕈碱- 3(M3)受体拮抗剂如异丙托溴铵、噻托溴铵、阿地溴铵(aclidinium)(LAS-34273)、 格隆溴铵、芜地溴铵(umeclidinium bromide)；(5)M3-抗胆碱能/β2-肾上腺素受体 激动剂组合产品，如维兰特罗/芜地溴铵(umeclidinium)
奥达 特罗/噻托溴铵、格隆溴铵/茚达特罗(
也已作为
售出)、氢溴 酸非诺特罗/异丙托溴铵
硫酸沙丁胺醇/异丙托溴铵
富马酸福莫特罗/格隆溴铵，或阿地溴铵(aclidinium bromide)/福莫特罗；(6)双重 药理学M3-抗胆碱能药/β2-肾上腺素受体激动剂，例如batefenterol succinate、 AZD-2115或LAS-190792；(7)白三烯调节剂，如白三烯拮抗剂，例如孟鲁司特、 扎鲁司特(zafirulast)或普仑司特(pranlukast)，或白三烯生物合成抑制剂如齐留 通，或LTB4拮抗剂如阿美芦班(amelubant)，或FLAP抑制剂如fiboflapon、 GSK-2190915；(8)磷酸二酯酶-IV(PDE-IV)抑制剂(口服或吸入)，例如罗氟司特 (roflumilast)、西洛司特(cilomilast)、奥米司特(oglemilast)、咯利普兰(rolipram)、替托司特(tetomilast)、AVE-8112、revamilast、CHF 6001；(9)抗组 胺药，如选择性组胺-1(H1)受体拮抗剂，例如非索非那定、西替利嗪、氯雷他定 或阿司咪唑，或双重H1/H3受体拮抗剂如GSK 835726或GSK 1004723；(10)镇 咳药，例如：可待因或dextramorphan；(11)粘液溶解药，例如N-乙酰基半胱氨 酸或fudostein；(12)祛痰/粘液动力学调节剂，例如氨溴索、高渗溶液(例如盐水或 甘露醇)或表面活性剂；(13)肽粘液溶解剂，例如重组人脱氧核糖核酸酶I(链道酶- α和rhDNase)或螺杀菌素(helicidin)；(14)抗生素，例如阿奇霉素、妥布霉素或氨 曲南；(15)非选择性COX-1/COX-2抑制剂，例如布洛芬或酮洛芬；(16)COX-2抑 制剂，例如塞来昔布和罗非昔布；(17)VLA-4拮抗剂，例如WO97/03094和 WO97/02289中描述的那些，各自通过引用并入本文；(18)TACE抑制剂和TNF- α抑制剂，例如抗TNF单克隆抗体，例如
和CDP-870和TNF受体免 疫球蛋白分子，例如
(19)基质金属蛋白酶抑制剂，例如MMP-12；(20) 人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂，如BAY-85-8501或WO2005/026124、 WO2003/053930和WO06/082412中描述的那些，各自通过引用并入本文； (21)A2b拮抗剂，例如WO2002/42298中描述的那些，通过引用并入本文；(22)趋 化因子受体功能的调节剂，例如CCR3和CCR8的拮抗剂；(23)调节其他前列腺素类受体作用的化合物，例如血栓素A2拮抗剂；DP1拮抗剂，例如拉罗皮兰 (laropiprant)或asapiprant；CRTH2拮抗剂，例如OC000459、fevipiprant、 ADC 3680或ARRY 502；(24)PPAR激动剂，包括PPARα激动剂(例如非诺贝 特)、PPARδ激动剂、PPARγ激动剂如吡格列酮、罗格列酮和巴拉格列酮 (balaglitazone)；(25)甲基黄嘌呤，如茶碱或氨茶碱，和甲基黄嘌呤/皮质类固醇组 合如茶碱/布地奈德、茶碱/丙酸氟替卡松、茶碱/环索奈德、茶碱/糠酸莫米松和茶 碱/倍氯米松二丙酸酯；(26)A2a激动剂，例如EP1052264和EP1241176描述的 那些；(27)CXCR2或IL-8拮抗剂，例如AZD-5069、AZD-4721、danirixin；(28) IL-R信号传导调节剂，如阿那白滞素(kineret)和ACZ 885；(29)MCP-1拮抗剂， 例如ABN-912；(30)p38MAPK抑制剂，例如BCT197、JNJ49095397、洛吡莫 德(losmapimod)或PH-797804；(31)TLR7受体激动剂，例如AZD 8848；(32) PI3-激酶抑制剂，例如RV1729或GSK2269557。
在某些实施方案中，本发明的化合物如式(I)的化合物可以与一种或多种另 外的药物联用，例如抗过度增殖药、抗癌药、细胞抑制剂、细胞毒性剂、抗炎药 或化疗剂，例如美国公开申请号US2010/0048557中公开的那些，其通过引用并 入本文。本发明的化合物如式(I)的化合物可以与放疗或手术联用，正如本领域公 知的。
制品
另一个实施方案包括用于治疗对Janus激酶如JAK1激酶抑制有响应的疾病 或病症的制品(例如药盒)。该药盒可以包含：
(a)第一种药物组合物，其包含本发明的化合物如式(I)的化合物；和
(b)使用说明书。
在另一个实施方案中，该药盒还包含：
(c)第二种药物组合物，例如包含如上所述治疗活性剂的药物组合物，例 如用于治疗炎性障碍的治疗剂或化疗剂。
在一个实施方案中，该说明书描述了所述第一和第二药物组合物同时、顺 序或分开施用于有需要的患者。
在一个实施方案中，第一和第二组合物包含在单独的容器中。在另一个实 施方案中，第一和第二组合物包含在同一容器中。
使用的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、泡罩包装等。容器可以由多种 材料形成，例如玻璃或塑料。容器包括本发明的化合物如式(I)的化合物或其组合 物，其有效治疗病症并且可具有无菌进入口(例如容器可以是静脉内溶液袋或具有 可通过皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。标签或包装说明书指示化合物或组合物用 于治疗选择的病症，例如哮喘或癌症。在一个实施方案中，标签或包装说明书表 明该化合物或组合物可用于治疗疾病。另外，标签或包装说明书可以指示待治疗 的患者是患有以过度活跃或不规则的Janus激酶活性为特征的疾病的患者，例如 过度活跃或不规则的JAK1活性。标签或包装说明书还可指示化合物或组合物可 用于治疗其他病症。
或者或另外，药盒可进一步包含第二(或第三)容器，其包含药学上可接受的 缓冲液如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液或右旋糖溶液。 还可以包括从商业和用户角度所需的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤 器、针和注射器。
为了示例本发明，包括以下实施例。然而，应当理解，这些实施例不限制 本发明，并且仅意味着提出实施本发明的方法。本领域技术人员将认识到，所述 化学反应可以容易地适用于制备本发明的其他化合物，制备化合物的替代方法也 在本发明的范围内。例如，通过本领域技术人员显而易见的修改，例如通过适当 保护干扰基团、通过利用本领域已知的除所述之外的其他适合的试剂或通过进行 反应条件的常规改变，可以成功地进行根据本发明的非示例性化合物的合成。或 者，本文公开的或本领域已知的其他反应将被认为适用于制备本发明的其他化合 物。
实施例
尽管已经以一定程度的细节描述和示例了本发明，但是应当理解，本公开 仅通过示例的方式给出，并且本领域技术人员可以在不脱离权利要求所限定的本 发明的精神和范围的情况下采用部分的组合和排列的多种改变。
实施例1&2(通用方法A)
1-((1S,4S)-1-(氰基甲基)-4-((2,2,2-三氟乙基)氨基)环己基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H- 吡唑-4-甲酰胺&1-((1R,4R)-1-(氰基甲基)-4-((2,2,2-三氟乙基)氨基)环己基)-3-(环丙 烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在0℃将环丙烷羰基氯(750mg,7.18mmol)滴加到3-氨基-1-[8-(氰基甲基)-1,4-二 氧杂螺[4.5]癸-8-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.00g,6.55mmol)和DIPEA(1.69g,13.1mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液中。将得到的溶液在20℃搅拌5 h，减压浓 缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇洗脱(10/1)。合并适合的 级分，减压浓缩，得到1.60g(65％)的1-(8-(氰基甲基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-3- (环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，为黄色固体。TLC:Rf＝0.6；DCM/MeOH ＝10/1。
将1-(8-(氰基甲基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4- 甲酰胺(1.50g,4.02mmol)在四氢呋喃(10mL)和4N HCl水溶液(20mL)中的溶液在 20℃搅拌过夜。谨慎地加入K2CO3，直到pH达到～8。用乙酸乙酯(5x)萃取该混 合物。合并有机层，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残 余物，用二氯甲烷/甲醇(5/1)洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到0.801g (56％)的1-(1-(氰基甲基)-4-氧代环己基)-3-(环丙烷-甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺， 为黄色固体。TLC:Rf＝0.5；DCM/MeOH＝10/1。
在氮气气氛中向1-(1-(氰基甲基)-4-氧代环己基)-3-环丙烷-甲酰氨基)-1H-吡唑 -4-甲酰胺(150mg,0.455mmol)在乙醇(8.0mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙-1-胺(68.0mg,0.686mmol)和四(丙-2-基氧基)钛(263mg,0.925mmol)。将该反应混合物在 60℃搅拌2h。加入AcOH(0.1mL)和NaBH3CN(29.0mg,0.461mmol)。将得到的 溶液在60℃搅拌过夜，减压浓缩。使残余物通过短硅胶垫，用二氯甲烷/甲醇(3/1) 洗脱。合并适合的级分，浓缩。通过制备型-HPLC进一步纯化残余物(150mg)， 使用以下条件：柱,XBridge ShieldRP18OBD柱,19*150mm,5um；流动相,10 mM NH4HCO3水溶液和CH3CN(10.0％CH3CN-28.0％，8min)；检测器,UV 254 nm，得到两种级分。将绝对构型任选地指定为每种非对映异构体：
实施例1：第一级分,28.4mg，为白色固体,LC/MS(方法A,ESI): [M+H]+＝413,RT＝1.04min；1H NMR(300MHz,CD3OD):δ(ppm)8.35(s,1H), 3.21-3.06(m,3H),2.91(s,2H),2.79–2.53(m,3H),1.84–1.65(m,4H),1.11–0.93(m, 2H),0.90–0.85(m,4H)。
实施例2：第二级分,5.6mg，为白色固体,LC/MS(方法B,ESI): [M+H]+＝413.1,RT＝1.42min；1H NMR(300MHz,CD3OD):δ(ppm)8.41(s,1H), 3.29–3.10(m,4H),2.78–2.76(m,1H),2.39–2.36(m,2H),2.19–2.11(m,2H),1.96– 1.85(m,3H),1.68–1.51(m,2H),1.05–0.86(m,4H)。
实施例3(通用方法B)
1-(4-(氰基甲基)-1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)-4-(3-甲基脲基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
将4-(3-氨基-4-氨基甲酰基-1H-吡唑-1-基)-4-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔-丁酯(5.00g,14.4mmol)加入到4N HCl的二噁烷溶液(50mL)中。将该反应混合物在室温 搅拌6h。通过过滤采集沉淀，减压干燥，得到5.30g 3-氨基-1-[4-(氰基甲基)哌啶- 4-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺盐酸盐，为灰白色固体，不经进一步纯化直接使用。 LC/MS(方法G,ESI):[M+H]+＝249,RT＝0.16min。
在室温向3-氨基-1-[4-(氰基甲基)哌啶-4-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺盐酸盐(1.00g, 来自最后步骤的粗品)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液中加入三乙胺(710mg, 7.02mmol)和三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙酯(980mg,4.22mmol)。将该反应混合物在室 温搅拌过夜。然后通过添加40％甲胺水溶液使反应淬灭，减压浓缩。使残余物分 配在水与二氯甲烷之间。用二氯甲烷(2x)萃取水相。用水和盐水洗涤合并的有机 相，用硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/甲 醇(95/5)洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到1.10g(95％)3-氨基-1-[4-(氰基 甲基)-1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺，为黄色固体。LC/MS(方 法G,ESI):[M+H]+＝331,RT＝0.54min。
在0℃、氮气气氛中向3-氨基-1-[4-(氰基甲基)-1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基]- 1H-吡唑-4-甲酰胺(100mg,0.303mmol)和DIPEA(78.3mg,0.606mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入甲基氨基甲酰氯(34.3mg,0.363mmol)。将该反应混合物在 室温搅拌4h。加入水(20mL)，分离各相。用二氯甲烷(2x)萃取水相。用盐水洗涤 合并的有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。使残余物通过短硅胶垫，用二氯 甲烷/甲醇洗脱(95:5)。合并适合的级分，减压浓缩。通过制备型-HPLC与如下条 件进一步纯化粗产物：柱,XBridgeShield RP18OBD柱,19*150mm,5um；流动 相:水(0.05％NH4OH)和CH3CN(18％CH3CN-50％，6min)；检测器,UV 254/220nm，得到11.1mg(9％)的1-[4-(氰基甲基)-1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基]-3- [(甲基氨基甲酰基)氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法D,ESI): [M+H]+＝388,RT＝1.89min；1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.46(s,1H), 3.16–3.05(m,4H),2.93–2.90(m,5H),2.59–2.54(m,4H),2.24–2.17(m,2H)。
实施例4(通用方法C)
(4-氨基甲酰基-1-(4-(氰基甲基)-1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3-基)氨基甲 酸甲酯
在室温向3-氨基-1-[4-(氰基甲基)-1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基]-1H-吡唑-4-甲 酰胺(100mg,0.303mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液和DIPEA(78.3mg, 0.606mmol)加入氯甲酸甲酯(42.9mg,0.454mmol)。将该反应混合物在室温搅拌12 h。使得到的混合物分配在二氯甲烷与水之间。用盐水洗涤有机相，用无水硫酸 钠干燥，减压浓缩。使残余物通过短硅胶垫，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱。通过 制备型-HPLC与如下条件进一步纯化粗产物：柱,XBridge Shield RP18OBD柱, 19*150mm,5um；流动相：水(0.05％NH4OH)和CH3CN(35％CH3CN-38％，9 min)；检测器,UV 254/220nm，得到52.7mg(45％)N-[4-氨基甲酰基-1-[4-(氰基甲 基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-哌啶-4-基]-1H-吡唑-3-基]氨基甲酸甲酯，为白色固体。 LC/MS(方法E,ESI):[M+H]+＝389,RT＝1.27min；1H NMR(300MHz,CD3OD):δ (ppm)8.43(s,1H),3.79(s,3H),3.13(s,2H),3.06(q,J＝9.9Hz,2H),2.90–2.84(m, 2H),2.62–2.48(m,4H),2.21–2.13(m,2H)。
实施例5(通用方法D)
1-(7-(氰基甲基)-2-氧杂螺[3.5]壬-7-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在室温、氮气气氛中向(氰基甲基)膦酸二乙酯(303mg,1.71mmol)在四氢呋喃(7.0mL)中的溶液中加入氢化钠(40.0mg,60％的矿物油分散液,1.00mmol)。将该反 应体系在室温搅拌2h。然后加入2-氧杂螺[3.5]壬-7-酮(200mg,1.43mmol)。将得 到的溶液在25℃搅拌12h，用水猝灭。用二氯甲烷(3x)萃取得到的溶液，合并有 机层，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(100/3)洗 脱，得到190mg 2-[2-氧杂螺[3.5]壬-7-亚基]乙腈，为白色固体。TLC:Rf＝0.4；乙 酸乙酯/己烷＝1/4。
向2-[2-氧杂螺[3.5]壬-7-亚基]乙腈(190mg,1.16mmol)在CH3CN(4.0mL)中的 溶液中加入DBU(354mg,2.33mmol)和3-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(150mg, 1.19mmol)。将该反应混合物在50℃搅拌12h，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法 纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇洗脱(10/1)，得到160mg(50％)的3-氨基-1-[7-(氰基 甲基)-2-氧杂螺[3.5]壬-7-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺，为白色固体。TLC:Rf＝0.5； DCM/MeOH＝10/1。
在0℃向3-氨基-1-[7-(氰基甲基)-2-氧杂螺[3.5]壬-7-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺(160mg,0.553mmol)和DIPEA(143mg,1.11mmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的溶液中 滴加环丙烷羰基氯(64.0mg,0.612mmol)。将得到的溶液在25℃搅拌12h，减压浓 缩。使残余物通过短硅胶垫，用二氯甲烷/甲醇洗脱(10/1)。合并适合的级分，减 压浓缩。通过制备型-HPLC与如下条件进一步纯化粗产物(160mg)：柱,Xbridge 苯基OBD柱,19*150mm,5um；流动相,水(0.05％NH4OH)和CH3CN(5％ CH3CN-35％，8min)；检测器,UV 220nm，得到98.2mg 1-(7-(氰基甲基)-2-氧杂 螺[3.5]壬-7-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方 法A,ESI):[M+H]+＝358,RT＝1.20min；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm)10.13(s,1H),8.45(s,1H),7.50(s,1H),7.21(s,1H),4.33(s,2H),4.18(s,2H),3.02(s,2H),2.32–2.28(m,2H),1.96–1.78(m,5H),1.52–1.45(m,2H),0.81–0.79(m,4H)。
实施例6(通用方法E)
1-(1-([1,1'-联苯基]-4-基甲基)-4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑 -4-甲酰胺
在0℃向3-氨基-1-[4-(氰基甲基)哌啶-4-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺(10.0g,40.3mmol)和DIPEA(7.41g,57.4mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液中滴加环丙烷 羰基氯(4.48g,42.9mmol)。将得到的溶液在室温搅拌2天，减压浓缩。通过硅胶 快速色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇洗脱(10/1))，得到12.4g(74％)4-(4-氨 基甲酰基-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-1-基)-4-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔-丁酯， 为黄色固体。TLC:Rf＝0.6；DCM/MeOH＝10/1。
向4-(4-氨基甲酰基-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-1-基)-4-(氰基甲基)哌啶-1- 甲酸叔-丁酯(12.1g,29.1mmol)在二噁烷(150mL)中的溶液中加入4N HCl的二噁烷 溶液(40mL)。将得到的溶液在室温搅拌6h。通过过滤采集沉淀。减压浓缩滤 液，得到另一批产物。合并固体，减压干燥，得到11.4g 1-(4-(氰基甲基)哌啶-4- 基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺盐酸盐，为白色固体。LC/MS(方法G, ESI):[M+H]+＝317,RT＝0.52min。
向1-(4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺盐酸盐(100mg,0.283mmol)在二氯甲烷(3.0mL)中的混合物中加入4-苯基苯甲醛(103mg,0.565mmol)和NaOAc(23.0mg,0.280mmol)。将该混合物在室温搅拌1h，然后加 入NaBH(OAc)3(120mg,0.566mmol)。将得到的溶液在室温搅拌过夜，减压浓 缩。使残余物通过短硅胶垫，用EtOAc/THF(85/15)洗脱。合并适合的级分，减 压浓缩。通过制备型-HPLC与如下条件进一步纯化粗产物(50mg)：柱,XBridge Shield RP18OBD柱,19*150mm,5um；流动相,10mMNH4HCO3溶液和CH3CN (23％CH3CN-45％，8min内)；检测器,UV 254nm，得到10.5mg 1-(1-([1,1'-联苯 基]-4-基甲基)-4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，为 白色固体。LC/MS(方法E,ESI):[M+H]+＝483,RT＝1.66min.1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.46(s,1H),7.65–7.55(m,4H),7.46–7.41(m,4H),7.34(m,1H), 3.55(s,2H),3.14(s,2H),2.78–2.75(m,2H),2.63–2.60(m,2H),2.29–2.20(m,2H), 2.17–2.14(m,2H),1.90–1.70(m,1H),1.04–1.00(m,2H),0.98–0.94(m,2H)。
实施例7&8(通用方法F)
1-((1S,4S)-1-(氰基甲基)-4-(3-(三氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)环己基)-3-(环丙烷甲酰氨 基)-1H-吡唑-4-甲酰胺&1-((1R,4R)-1-(氰基甲基)-4-(3-(三氟甲基)氮杂环丁烷-1-基) 环己基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
向1-(1-(氰基甲基)-4-氧代环己基)-3-(环丙烷-甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(200mg,0.607mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入3-(三氟甲基)氮杂环丁烷 盐酸盐(118mg,0.730mmol)和NaOAc(49.8mg,0.607mmol)。将该混合物在室温搅 拌1h，然后加入NaBH(OAc)3(258mg,1.22mmol)。将得到的溶液在室温搅拌4 h，加入水。用乙酸乙酯(3x)萃取得到的溶液，合并有机层。用水和盐水洗涤有机 相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。使残余物通过短硅胶垫，用二氯甲烷/甲醇 (95/5)洗脱。通过制备型-HPLC与如下条件进一步纯化粗产物(120mg)：柱, XBridge Shield RP18OBD柱,19*150mm,5um；流动相:10mM NH4HCO3溶液和 CH3CN(22％CH3CN-46％，9min内)；检测器,UV 254nm，得到两种级分。将 绝对构型任选地指定给每种非対映异构体：
实施例7：第一级分,36.7mg，为灰白色固体,LC/MS(方法E,ESI): [M+H]+＝439,RT＝1.31min,1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.45(s,1H), 3.59–3.46(m,2H),3.29–3.15(m,3H),3.04(s,2H),2.75(m,2H),2.35–2.30(m,1H), 1.96–1.78(m,5H),1.15–0.98(m,4H),0.96-0.92(m,2H)。
实施例8：第二级分,19.3mg，为白色固体,LC/MS(方法D,ESI): [M+H]+＝439,RT＝2.16min,1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.40(s,1H), 3.56–3.50(m,2H),3.30–3.24(m,3H),3.16(s,2H),2.33-2.28(m,3H),2.20-2.14(m, 2H),1.90-1.70(m,1H),1.69–1.64(m,2H),1.47-1.41(m,2H),1.04-1.00(m,2H), 0.98-0.92(m,2H)。
实施例9&10(通用方法G)
1-((1S,4S)-1-(氰基甲基)-4-(3-乙氧基-3-(三氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)环己基)-3-(环丙 烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺&1-((1R,4R)-1-(氰基甲基)-4-(3-乙氧基-3-(三氟甲 基)氮杂环丁烷-1-基)环己基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
向3-羟基-3-(三氟甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔-丁酯(250mg,1.04mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中加入氢化钠(104mg,60％的矿物油分散液, 2.59mmol)。将得到的溶液在0℃搅拌20min，然在氮气气氛中滴加碘乙烷 (809mg,5.19mmol)。将得到的溶液在室温搅拌3h，倾入水(20mL)，用乙酸乙酯 (3x)萃取。合并有机萃取物，依次用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓 缩，得到183mg(66％)3-乙氧基-3-(三氟甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔-丁酯，为黄色 固体。
向3-乙氧基-3-(三氟甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔-丁酯(180mg,0.668mmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的溶液中加入三氟乙酸(8.0mL)。将得到的溶液在室温搅拌4h， 减压浓缩。这产生169mg(粗品)3-乙氧基-3-(三氟甲基)氮杂环丁烷TFA盐，为淡 黄色固体，其不经进一步纯化使用。
向1-(1-(氰基甲基)-4-氧代环己基)-3-(环丙烷-甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(160mg,0.486mmol)在二氯甲烷(8.0mL)中的溶液中加入3-乙氧基-3-(三氟甲基)氮 杂环丁烷TFA盐(98.6mg)和NaOAc(39.9mg,0.486mmol)。将该溶液在室温搅拌 2h，然后加入NaBH(OAc)3(206mg,0.973mmol)。将该反应混合物在室温搅拌过 夜，然后使其分配在水与乙酸乙酯之间。分离各相。用乙酸乙酯(2x)萃取水相。 合并有机相，依次用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。使残余物通 过短硅胶垫，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱。通过制备型-HPLC与如下条件进一步 纯化粗产物(120mg)：柱,XBridge Shield RP18OBD柱,19*150mm,5um；流动相: 水(0.05％NH4OH)和CH3CN(40％CH3CN-90％，9min内)；检测器,UV220nm，得到两种级分。将绝对构型任选地指定给每种非対映异构体：
实施例9：第一级分,19.6mg，为白色固体,LC/MS(方法F,ESI): [M+H]+＝483,RT＝1.19min,1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.44(s,1H),3.67 (q,J＝6.8Hz,2H),3.52(d,J＝9.8Hz,2H,AB)、3.40(d,J＝9.8Hz,2H,AB)、3.04(s, 2H),2.75(m,2H),2.38–2.32(m,1H),1.90–1.78(m,5H),1.23(t,J＝6.8Hz,3H), 1.14–1.01(m,2H),1.00–0.98(m,2H),0.96–0.91(m,2H)。
实施例10：第二级分,20.6mg，为白色固体，LC/MS(方法F,ESI): [M+H]+＝483,RT＝1.22min；1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.40(s,1H), 3.72(q,J＝6.8Hz,2H),3.55(d,J＝9.4Hz,2H,AB)、3.40(d,J＝9.4Hz,2H,AB)、 3.15(s,2H),2.39–2.29(m,3H),2.19–2.17(m,2H),1.94–1.60(m,3H),1.49–1.47(m, 2H),1.25(t,J＝6.8Hz,3H),1.04–0.93(m,4H)。
实施例11(通用方法H)
1-(4-(氰基甲基)-1-((2-羟基-[1,1'-联苯基]-4-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨 基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
向1-(4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺盐酸盐(300mg,0.850mmol)在二氯甲烷(8.0mL)中的混合物中加入4-溴-3-羟基苯甲醛 (341mg,1.70mmol)和NaOAc(69.9mg,0.852mmol)。将该混合物搅拌2h，然后加 入NaBH(OAc)3(361mg,1.71mmol)。将得到的溶液在室温搅拌过夜，使其分配在 乙酸乙酯与水之间。用乙酸乙酯(2x)萃取水相。依次用水和盐水洗涤合并的有机 相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用二氯甲 烷/甲醇(95/5)洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到310mg(73％)1-(1-(4-溴-3- 羟基苄基)-4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷-甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，为白 色固体。
在氮气气氛中向1-(1-(4-溴-3-羟基苄基)-4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲 酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(100mg,0.199mmol)在二噁烷(5.0mL)中的溶液中加入 苯基硼酸(36.6mg,0.300mmol)、Pd(dppf)Cl2(14.6mg,0.0200mmol)、碳酸钾 (55.2mg,0.399mmol)和水(0.50mL)。将该反应混合物在80℃搅拌2h，冷却至室 温，倾入水(10mL)。用乙酸乙酯(3x)萃取得到的溶液。用水和盐水洗涤合并的有 机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。使残余物通过短硅胶垫，用二氯甲烷/甲醇 (95/5)洗脱。通过制备型-HPLC与如下条件进一步纯化粗产物：柱,XBridge Shield RP18OBD柱,19*150mm,5um；流动相：水(0.05％NH4OH)和CH3CN (20％CH3CN-50％，6min内)；检测器,UV 220nm，得到10.2mg(10％)1-(4-(氰基甲基)-1-((2-羟基-[1,1'-联苯基]-4-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡 唑-4-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法C,ESI):[M+H]+＝499,RT＝1.49min；1H NMR(300MHz,CD3OD):δ(ppm)8.45(s,1H),7.54–7.51(m,2H),7.39–7.34(m, 2H),7.29–7.21(m,1H),7.19(d,J＝7.8Hz,1H),6.87–6.84(m,2H),3.45(s,2H),3.12 (s,2H),2.76–2.73(m,2H),2.62–2.58(m,2H),2.26–2.12(m,4H),1.90–1.65(m,1H), 1.03–0.91(m,4H)。
实施例12、13、14&15(通用方法I)
1-((3S,4R)-1-([1,1'-联苯基]-4-基甲基)-4-(氰基甲基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰 氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；1-((3S,4S)-1-([1,1'-联苯基]-4-基甲基)-4-(氰基甲基)-3-氟 哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；1-((3R,4R)-1-([1,1'-联苯基]-4- 基甲基)-4-(氰基甲基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺&1- ((3R,4S)-1-([1,1'-联苯基]-4-基甲基)-4-(氰基甲基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨 基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在0-10℃向(氰基甲基)膦酸二乙酯(44.9g,253mmol)在四氢呋喃(500mL)中 的溶液中分几批加入氢化钠(18.3g,60％的矿物油分散液,275mmol)。将得到的溶 液在室温搅拌1h，然后加入3-氟-4-氧代哌啶-1-甲酸叔-丁酯(50.0g,230mmol)。将 得到的溶液在室温搅拌1h。加入水(300mL)。用乙酸乙酯(3x)萃取得到的溶液， 合并有机层。用盐水(200mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。将残 余物在己烷中研磨，通过过滤采集固体，减压干燥，得到44.0g(80％)(4Z)-4-(氰 基亚甲基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔-丁酯，为黄色固体。LC/MS(方法G,ESI): [M+H]+＝241,RT＝0.87min&0.94min。
向(4Z)-4-(氰基亚甲基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔-丁酯(22.9g,95.1mmol)在CH3CN(100mL)中的溶液中加入3-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(10.0g,79.3mmol)和DBU (24.1g,159mmol)。将该反应混合物在室温搅拌3天，减压浓缩。通过硅胶快速色 谱法纯化残余物，用二氯甲烷/乙酸乙酯(100/70)洗脱。合并适合的级分，减压浓 缩，得到7.01g(24％)4-(3-氨基-4-氨基甲酰基-1H-吡唑-1-基)-4-(氰基甲基)-3-氟哌 啶-1-甲酸叔-丁酯，为黄色固体。LC/MS(方法F,ESI):[M+H]+＝367,RT＝1.12min &1.19min。
在0-10℃将环丙烷羰基氯(500mg,4.78mmol)滴加到4-(3-氨基-4-氨基甲酰 基-1H-吡唑-1-基)-4-(氰基甲基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔-丁酯(500mg,1.37mmol)和 DIPEA(800mg,6.19mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液中。将得到的溶液在室温 搅拌2h，然后通过添加20mL水猝灭。分离各相。用二氯甲烷(3x)萃取水相。依 次用水和盐水洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶快速 色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇洗脱(100/5)。合并适合的级分，减压浓缩， 得到500mg(84％)4-(4-氨基甲酰基-3-环丙烷酰氨基-1H-吡唑-1-基)-4-(氰基甲基)- 3-氟哌啶-1-甲酸叔-丁酯，为黄色固体。LC/MS(方法F,ESI):[M+H]+＝435, RT＝1.25min&1.30min。
将4-(4-氨基甲酰基-3-环丙烷酰氨基-1H-吡唑-1-基)-4-(氰基甲基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔-丁酯(200mg,0.460mmol)在4N HCl的二噁烷溶液(10mL)中的溶液在室 温搅拌3h。然后减压浓缩该反应混合物，得到200mg 1-(4-(氰基甲基)-3-氟哌啶- 4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺盐酸盐，为黄色固体。LC/MS(方法I, ESI):[M+H]+＝335,RT＝0.87min。
向上述粗1-(4-(氰基甲基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺盐酸盐(200mg)在二氯甲烷(20mL)中的混合物中加入4-苯基苯甲醛(125mg,0.688mmol)和NaOAc(112mg,1.38mmol)。将该混合物在30℃搅拌4h，冷却至 室温，加入NaBH(OAc)3(292mg,1.38mmol)。将得到的溶液在室温搅拌过夜，然 后通过添加100mL饱和碳酸氢钠溶液猝灭。用乙酸乙酯(3x)萃取得到的溶液。合 并有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残 余物，用四氢呋喃/乙酸乙酯洗脱(1:3)。合并适合的级分，减压浓缩。通过手性- HPLC与如下条件分离外消旋混合物：柱:CHIRAL ARTCellulose-SB, 250*20mm；流动相A：己烷,流动相B:EtOH；流速:20mL/min；梯度:25分钟 内20％B；254/220nm，得到4种异构体。将绝对构型任选地指定给每种立体异 构体：
实施例12：RT1:16.76min；第一级分,12.9mg，为白色固体,LC/MS(方 法A,ESI):[M+H]+＝501,RT＝1.49min；1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.40 (s,1H),7.51–7.46(m,4H),7.34–7.29(m,4H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),5.39–5.28(m, 1H),3.50(d,J＝13.2Hz,1H,AB)、3.45(d,J＝13.2Hz,1H,AB)、3.25(d,J＝17.2Hz, 1H,AB)、3.08(d,J＝17.2Hz,1H,AB)、2.95–2.75(m,1H),2.72–2.70(m,1H),2.49– 2.46(m,1H),2.33–2.15(m,3H),1.77–1.64(m,1H),0.92–0.78(m,4H)。
实施例13：RT2:18.54min,第二级分,7.9mg，为白色固体。LC/MS(方法 A,ESI):[M+H]+＝501,RT＝1.49min；1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.30(s, 1H),7.50(m,4H),7.34–7.31(m,4H),7.22(t,J＝7.2Hz,1H),5.24–4.92(m,1H),3.59 (d,J＝12.8Hz,1H,AB)、3.54(d,J＝12.8Hz,1H,AB)、3.49–3.43(m,1H),3.21–3.10 (m,1H),2.95–2.91(m,1H),2.76–2.47(m,4H),2.11–2.08(m,1H),1.93–1.68(m, 1H),0.91–0.82(m,4H)。
实施例14：RT3:20.7min；第三级分,8.8mg，为白色固体。LC/MS(方法 A,ESI):[M+H]+＝501,RT＝1.49min；1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.30(s, 1H),7.50(m,4H),7.39–7.31(m,4H),7.22(t,J＝7.2Hz,1H),5.03–4.92(m,1H),3.60 (d,J＝13.2Hz,1H,AB)、3.55(d,J＝13.2Hz,1H,AB)、3.49(d,J＝16.8Hz,1H, AB)、3.19(d,J＝16.8Hz,1H,AB)、2.95–2.92(m,1H),2.77–2.48(m,4H),2.12–2.09 (m,1H),1.93–1.51(m,1H),0.91–0.78(m,4H)。
实施例15：RT4:23.36min,第四种级分,15mg，为白色固体。LC/MS(方法 A,ESI):[M+H]+＝501,RT＝1.49min；1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.40(s, 1H),7.49(m,4H),7.34–7.29(m,4H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),5.40-5.28(m,1H),3.51 (d,J＝12.8Hz,1H,AB)、3.46(d,J＝12.8Hz,1H,AB)、3.25(d,J＝17.2Hz,1H, AB)、3.08(d,J＝17.2Hz,1H,AB)、2.95–2.88(m,1H),2.72–2.71(m,1H),2.49–2.46 (m,1H),2.34–2.24(m,3H),1.93–1.70(m,1H),0.92–0.91(m,2H),0.90–0.78(m, 2H)。
实施例16(通用方法J)
1-(1-((6-(5-氯噻吩-3-基)吡啶-3-基)甲基)-4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨 基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
向1-(4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷-甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺盐酸盐(217mg,0.615mmol)在二氯甲烷(8.0mL)中的混合物中加入6-溴吡啶-3-甲醛 (200mg,1.08mmol)和NaOAc(46.6mg,0.568mmol)。将该反应混合物在室温搅拌 1h，然后加入NaBH(OAc)3(241mg,1.14mmol)。将得到的反应混合物在室温搅拌 过夜。加入水(10mL)。分离各相。用乙酸乙酯(2x)萃取水相。合并有机层，依次 用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余 物，用二氯甲烷/甲醇洗脱(85/15)。合并适合的级分，减压浓缩，得到182mg (61％)1-(1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H- 吡唑-4-甲酰胺，为白色固体。
在氮气气氛中向1-(1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷 甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(100mg,0.173mmol)在二噁烷(8.0mL)中的溶液中加入2-(5-氯噻吩-3-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(151mg,0.617mmol)、 Pd(dppf)Cl2(15.1mg,0.0206mmol)、碳酸钾(56.9mg,0.412mmol)和水(0.30mL)。 将该反应混合物在80℃搅拌过夜，冷却至室温。加入水(10mL)。用乙酸乙酯(3x) 萃取得到的溶液。合并有机层，依次用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压 浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(90/10)洗脱。合并适合 的级分，减压浓缩，得到42.2mg(46％)1-(1-((6-(5-氯噻吩-3-基)吡啶-3-基)甲基)- 4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，为白色固体。 LC/MS(方法F,ESI):[M+H]+＝524,RT＝1.47min；1HNMR(400MHz,CD3OD):δ (ppm)8.49(s,1H),8.45(s,1H),7.86–7.82(m,2H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.60(d, J＝1.6Hz,1H),3.57(s,2H),3.14(s,2H),2.76(m,2H),2.62(m,2H),2.29–2.20(m, 2H),2.19–2.05(m,2H),1.90–1.70(m,1H),1.04–0.98(m,2H),0.97–0.92(m,2H)。
实施例17(通用方法K)
4-(4-氨基甲酰基-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-1-基)-4-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸环丙 基甲酯
在0℃、氮气气氛中向环丙基甲醇(1.00g,13.8mmol)和吡啶(1.32g,16.6mmol) 在二氯甲烷(30mL)中的溶液中滴加氯甲酸4-硝基苯酯(1.68g,8.33mmol)。将得到 的溶液在室温搅拌过夜。加入水(10mL)。然后将得到的混合物用10mL盐水洗 涤。用无水硫酸钠干燥有机混合物，过滤出固体。减压浓缩有机混合物。通过从 正己烷中重结晶纯化粗产物。这产生1.20g(36％)碳酸环丙基甲基4-硝基苯酯， 为白色固体。TLC:Rf＝0.5；Hex/EA＝4/1。
向1-(4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(100mg, 0.316mmol)和三乙胺(95.9mg,0.948mmol)在乙醇(30mL)中的溶液中加入碳酸环丙 基甲基4-硝基苯酯(74.9mg,0.316mmol)。将得到的溶液在室温搅拌12h，减压浓 缩。使残余物分配在二氯甲烷与水之间。分离各相。用盐水洗涤有机相，用无水 硫酸钠干燥，减压浓缩。使残余物通过短硅胶垫，用二氯甲烷/甲醇(93:7)洗脱。 采集适合的级分，浓缩。通过制备型-HPLC与如下条件进一步纯化粗产物： XBridge Shield RP18OBD柱,19*150mm,5um；流动相：水(0.05％NH4OH)和 CH3CN(18％CH3CN-50.0％，6min内)；检测器,UV 254/220nm，得到48.5mg (37％)4-(4-氨基甲酰基-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-1-基)-4-(氰基甲基)哌啶-1-甲 酸环丙基甲酯，为白色固体。LC/MS(方法E,ESI):[M+H]+＝415,RT＝1.31min； 1HNMR(300MHz,CD3OD):δ(ppm)8.47(s,1H),3.94–3.90(m,4H),3.15–3.08 (m,4H),2.63–2.58(m,2H),2.10–2.01(m,2H),1.94–1.80(m,1H),1.19–1.11(m,1 H),1.04–0.98(m,2H),0.97–0.90(m,2H),0.59–0.53(m,2H),0.32–0.27(m,2H)。
实施例18(通用方法L)
1-(4-(氰基甲基)-1-(2-苯基乙酰基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰 胺
在0℃向1-(4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰 胺(100mg,0.316mmol)和二异丙基乙胺(109mg,0.843mmol)在二氯甲烷(5mL)中的 溶液中滴加2-苯基乙酰氯(79.0mg,0.511mmol)。将得到的溶液温至室温，搅拌 6h。减压浓缩得到的混合物。使残余物通过短硅胶垫，用乙酸乙酯:THF(85:15) 洗脱。合并适合的级分，减压浓缩。通过制备型-HPLC与如下条件进一步纯化残 余物：XBridge Shield RP18OBD柱,19*150mm,5um；流动相,10mM NH4HCO3水溶液和CH3CN(23％CH3CN-45％，12min内)；检测器,UV254nm，得到 4.70mg 1-(4-(氰基甲基)-1-(2-苯基乙酰基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑- 4-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法E,ESI):[M+H]+＝435,RT＝1.22min.1HNMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.31(s,1H),7.24–7.21(m,2H),7.16–7.14(m, 3H),4.16(d,J＝13.6Hz,1H),3.74(d,J＝15.2Hz,1H),3.71(s,2H),3.22–2.90(m, 4H),2.52–2.40(m,2H),1.95–1.85(m,1H),1.73–1.67(m,2H),0.92–0.88(m,2H), 0.85–0.81(m,2H)。
实施例19&20(通用方法M)
1-(4-(氰基甲基)-1-(2-羟基-1-苯基乙基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4- 甲酰胺&1-(4-(氰基甲基)-1-(2-羟基-2-苯基乙基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)- 1H-吡唑-4-甲酰胺
向1-(4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(100mg, 0.316mmol)在乙腈(15mL)中的溶液中加入2-苯基环氧乙烷(34.0mg,0.283mmol)、高氯酸锂(30.0mg,0.282mmol)和DIPEA(36.0mg,0.279mmol)。将该反应混合物在 室温搅拌16h，减压浓缩。使残余物通过短硅胶垫，用乙酸乙酯:THF(85:15)洗 脱。合并适合的级分，减压浓缩。通过制备型-HPLC与如下条件进一步纯化残余 物：XBridge Prep C18OBD柱,19*150mm,5um；流动相,10mM NH4HCO3水溶 液和CH3CN(7％CH3CN-39％，7min内)；检测器，UV254nm，得到两种级分:
实施例19：第一级分(8.3mg)，为白色固体,LC/MS(方法E,ESI): [M+H]+＝437,RT＝1.16min.1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.39(s,1H), 7.35–7.27(m,5H),3.97–3.92(m,1H),3.82–3.78(m,1H),3.47–3.44(m,1H),3.07 (s,2H),2.90–2.80(m,1H),2.68–2.66(m,1H),2.60–2.52(m,2H),2.40–2.30(m,1 H),2.25–2.05(m,3H),1.85–1.75(m,1H),1.03–0.99(m,2H),0.96–0.91(m,2H)。
实施例20：第二级分(10.5mg)，为白色固体。LC/MS(方法D,ESI): [M+H]+＝437,RT＝1.91min.1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.47(s,1H), 7.39-7.31(m,4H),7.28–7.24(m,1H),4.82(dd,J＝9.2,3.6Hz,1H),3.15(s,2H), 2.91–2.89(m,1H),2.83–2.80(m,1H),2.66–2.60(m,3H),2.50–2.43(m,2H),2.34– 2.25(m,1H),2.23–2.17(m,2H),1.85–1.70(m,1H),1.04–1.00(m,2H),0.97–0.92 (m,2H)。
实施例21(通用方法N)
4-(4-氨基甲酰基-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-1-基)-4-(氰基甲基)-N-(3,3-二氟环丁 基)哌啶-1-甲酰胺
在室温将1-[4-(氰基甲基)-4-哌啶基]-3-(环丙烷羰基氨基)-吡唑-4-甲酰胺(25.0mg,0.0790mmol)、羰基二咪唑(14.1mg,0.0869mmol)、1-甲基-2-吡咯烷酮 (0.395mL)和N,N-二异丙基乙胺(0.206mL,1.19mmol)的溶液搅拌1hr。加入3,3-二 氟环丁胺盐酸盐(113mg,0.790mmol)，将该反应混合物在80℃搅拌16小时。直接 纯化该混合物，通过反相色谱法纯化((20-60％乙腈：0.10％NH4OH水溶液，15 min)，得到4-[4-氨基甲酰基-3-(环丙烷羰基-氨基)吡唑-1-基]-4-(氰基甲基)-N-(3,3- 二氟环丁基)哌啶-1-甲酰胺(3.8mg,11％)，为白色固体。LC/MS(方法J,ESI): [M+H]+＝450,RT＝3.25min.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.15(s,1H),8.48(s, 1H),7.47(s,1H),7.23(s,1H),6.91(d,J＝6.5Hz,1H),4.03–3.86(m,1H),3.75–3.58 (m,2H),3.13(s,2H),3.01–2.87(m,2H),2.87–2.73(m,2H),2.69–2.38(m,2H),2.40– 2.26(m,2H),1.99–1.82(m,2H),0.94(d,J＝6.9,5.7Hz,1H),0.80(d,J＝6.4Hz, 4H)。
实施例186(通用方法O)
(4-氨基甲酰基-1-(4-(氰基甲基)-1-((2-羟基-[1,1'-联苯基]-4-基)甲基)哌啶-4- 基)-1H-吡唑-3-基)氨基甲酸甲酯
将4-(3-氨基-4-氨基甲酰基-1H-吡唑-1-基)-4-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔-丁酯(300mg,0.861mmol)、DIPEA(222mg,1.72mmol)在二氯甲烷(8.00mL)中的溶液在 0℃搅拌30min。将氯甲酸甲酯(121mg,1.28mmol)滴加到得到的混合物中。将该 反应混合物温至室温，搅拌3天。加入水，用乙酸乙酯(3x)萃取得到的溶液。用 水和盐水洗涤合并的有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶快速色谱 法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇洗脱(90:10)。合并适合的级分，减压浓缩，得到 164mg(47％)4-[4-氨基甲酰基-3-[(甲氧基羰基)氨基]-1H-吡唑-1-基]-4-(氰基甲基) 哌啶-1-甲酸叔-丁酯，为白色固体。TLC:Rf＝0.4；PE/EA＝1/1。
将4-[4-氨基甲酰基-3-[(甲氧基羰基)氨基]-1H-吡唑-1-基]-4-(氰基甲基)哌啶- 1-甲酸叔-丁酯(164mg,0.404mmol)和HCl/二噁烷(4M,10mL)的混合物在室温搅拌 3h。减压浓缩得到的混合物，得到N-[4-氨基甲酰基-1-[4-(氰基甲基)哌啶-4-基]- 1H-吡唑-3-基]氨基甲酸甲酯HCl盐(176mg)，为白色固体。
将N-[4-氨基甲酰基-1-[4-(氰基甲基)哌啶-4-基]-1H-吡唑-3-基]氨基甲酸甲酯HCl盐(176mg)、4-溴-3-羟基苯甲醛(230mg,1.14mmol)、NaOAc(47.2mg, 0.575mmol)、NaBH(OAc)3(243mg,1.15mmol)在二氯甲烷(8mL)中的混合物在室 温搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯，分离各相。用水和盐水洗涤有机层，用无水硫 酸钠干燥，过滤，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化得到的残余物，用二氯甲 烷/甲醇洗脱(90:10)。合并适合的级分，减压浓缩，得到169mg(60％)N-(1-[1-[(4- 溴-3-羟基苯基)甲基]-4-(氰基甲基)哌啶-4-基]-4-氨基甲酰基-1H-吡唑-3-基)氨基甲 酸甲酯，为白色固体。TLC:Rf＝0.4；MeOH/DCM＝1/10。
向35mL微波反应器中放入N-(1-[1-[(4-溴-3-羟基苯基)甲基]-4-(氰基甲基) 哌啶-4-基]-4-氨基甲酰基-1H-吡唑-3-基)氨基甲酸乙酯(169mg,0.334mmol)、苯基 硼酸(63.1mg,0.518mmol)、Pd(dppf)Cl2(28.1mg,0.0380mmol,)、碳酸钾(95.2mg, 0.689mmol)、水(1.50mL)和二噁烷(7.00mL)。然后给反应容器脱气，载入氮气3 次。将得到的混合物在80℃油浴中加热2h，冷却至室温。用水稀释得到的混合 物，用乙酸乙酯(x2)萃取。用水和盐水洗涤合并的有机相，用硫酸钠干燥，过 滤，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇洗脱(90:10)。 合并适合的级分，减压浓缩。通过制备型-HPLC与如下条件进一步纯化粗产物： 柱:XBridge Prep C18OBD柱,5um,19*150mm；流动相,水(0.05％NH3H2O)和 ACN(25％ACN-40％，11min内)；检测器,UV 220,254nm，得到27.5mg(17％) N-[4-氨基甲酰基-1-[4-(氰基甲基)-1-[(3-羟基-4-苯基苯基)甲基]哌啶-4-基]-1H-吡唑- 3-基]氨基甲酸甲酯，为白色固体。LC/MS(方法F,ESI):[M+H]+＝489.2,RT＝1.35. 1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.45(s,1H),7.55(dd,J＝8.4,1.2Hz,2H),7.39 (dd,J＝8.4,7.6Hz,2H),7.31–7.26(m,1H),7.22(d,J＝7.6Hz,1H),6.90(d,J＝1.6Hz, 1H),6.89(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),3.80(s,3H),3.48(s,2H),3.15(s,2H),2.79–2.76 (m,2H),2.63–2.60(m,2H),2.29–2.21(m,2H),2.18–2.15(m,2H)。
实施例210&211(通用方法P)
1-(4-([1,1'-联苯基]-4-基氧基)-1-(氰基甲基)环己基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡 唑-4-甲酰胺
向1-(1-(氰基甲基)-4-氧代环己基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(500mg,1.51mmol)在四氢呋喃(9.0mL)和乙醇(3.0mL)中的溶液中加入NaBH4 (115mg,3.04mmol)。将得到的溶液在室温搅拌4h。然后通过添加水(1.0mL)使反 应淬灭，减压浓缩。使残余物分配在水与EtOAc之间。用盐水洗涤有机层，用硫 酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇洗脱 (90/10)。合并适合的级分，减压浓缩，得到475mg(94％)1-(1-(氰基甲基)-4-羟基 环己基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，为黄色固体。TLC:Rf＝0.3； PE/EA＝1/1。
向1-(1-(氰基甲基)-4-羟基环己基)-3-(环丙烷-甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(400mg,1.20mmol)在四氢呋喃(20.0mL)中的溶液中加入4-苯基苯酚(308mg, 1.81mmol)、PPh3(475mg,1.81mmol)和DIAD(366mg,1.81mmol)。将得到的溶液 在室温搅拌过夜，然后减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/ 甲醇洗脱(97/3)。合并适合的级分，减压浓缩，得到具有相同质量离子的两个级分:
不期望的异构体：4.60mg(1％)1-(4-([1,1'-联苯基]-4-基氧基)-1-(氰基甲基)环 己基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(异构体1)，为白色固体.,LC/MS(方 法J,ESI):[M+H]+＝484.4,RT＝3.31min；1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm) 8.52(s,1H),7.56(dd,J＝7.6,1.6Hz,2H),7.54(d,J＝8.8Hz,2H),7.41(dd,J＝8.0,7.6 Hz,2H),7.31–7.27(m,1H),7.02(d,J＝8.8Hz,2H),4.60–4.50(m,1H),3.17(s,2H), 2.80–2.65(m,2H),2.13–2.05(m,4H),1.95–1.75(m,1H),1.68–1.63(m,2H),1.05– 1.01(m,2H),0.97–0.93(m,2H)。
期望的异构体：10.8mg(2％)1-(4-([1,1'-联苯基]-4-基氧基)-1-(氰基甲基)环己 基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(异构体2)，为白色固体。LC/MS(方法 K,ESI):[M+H]+＝484.3,RT＝1.90min；1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.50 (s,1H),7.57(d,J＝8.8Hz,2H),7.59–7.55(dd,J＝8.4,1.6Hz,2H),7.42(dd,J＝8.4,7.6 Hz,2H),7.31–7.27(m,1H),7.07(d,J＝8.8Hz,2H),4.68–4.58(m,1H),3.14(s,2H), 2.56–2.52(m,2H),2.35–2.29(m,2H),2.04–2.00(m,2H),1.95–1.85(m,3H),1.05– 0.1.01(m,2H),0.98–0.92(m,2H)。
实施例248(通用方法R)
N-[4-氨基甲酰基-1-[4-(氰基甲基)-1-[(2,6-二氟-3-羟基-4-苯基苯基)甲基]-3-氟 哌啶-4-基]-1H-吡唑-3-基]氨基甲酸甲酯
通过手性SFC，使用下列条件分离外消旋4-(3-氨基-4-氨基甲酰基-1H-吡唑- 1-基)-4-(氰基甲基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(280g,4种异构体的混合物)：柱: CHIRALPAKIA-SFC-02,5um,5cm*25cm；流动相A:CO2:60,流动相B:乙醇: 40；流速:160mL/min；检测器:220nm；RT1＝3.74min(包含两个峰)； RT2＝4.91min；RT3＝6.65min。采集来自第三个峰的级分，蒸发，得到25.76g (5.5％)4-(3-氨基-4-氨基甲酰基-1H-吡唑-1-基)-4-(氰基甲基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔-丁 酯，为灰白色固体。LC/MS(方法N,ESI):[M+H]+＝367.2,RT＝1.07min.1H NMR (300MHz,CD3OD):δ(ppm)8.17(s,1H),5.08–5.01(m,1H),4.28–4.20(m,2H), 3.42–3.36(m,3H),3.32–3.17(m,1H),2.46–2.42(m,1H),2.15–2.10(m,1H),1.46(s,9H)。
向单一期望的异构体4-(3-氨基-4-氨基甲酰基-1H-吡唑-1-基)-4-(氰基甲基)-3- 氟哌啶-1-甲酸叔-丁酯(4.00g,10.9mmol)在二氯甲烷(35.0mL)中的溶液中加入 DIPEA(8.40g,65.0mmol)。将得到的溶液在水/冰浴中冷却至0℃，然后滴加氯甲 酸甲酯(7.60g,80.4mmol)。将得到的溶液在室温搅拌过夜。加入水(30mL)，用乙 酸乙酯(3x20mL)萃取该混合物。用水和盐水洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干 燥，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(70/30)洗脱。 合并适合的级分，蒸发，得到3.9g(84％)4-[4-氨基甲酰基-3-[(甲氧基羰基)氨基]- 1H-吡唑-1-基]-4-(氰基甲基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯，为淡黄色固体。LC/MS(方 法N,ESI):[M+H]+＝425.2,RT＝1.08min。
将4-[4-氨基甲酰基-3-[(甲氧基羰基)氨基]-1H-吡唑-1-基]-4-(氰基甲基)-3-氟哌 啶-1-甲酸叔-丁酯(5.00g,11.78mmol,)在HCl/二噁烷(4.0M,30mL)中的溶液在室温搅拌4h。减压浓缩该混合物，将得到的残余物用乙酸乙酯研磨。通过过滤采集沉 淀的固体，得到4.30g N-[4-氨基甲酰基-1-[4-(氰基甲基)-3-氟哌啶-4-基]-1H-吡唑- 3-基]氨基甲酸甲酯盐酸盐，为淡黄色固体。LC/MS(方法N,ESI):[M+H]+＝325.1, RT＝0.66min。
向N-4-氨基甲酰基-1-[4-(氰基甲基)-3-氟哌啶-4-基]-1H-吡唑-3-基氨基甲酸甲 酯(320mg,0.987mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液中加入4-溴-2,6-二氟-3-羟基苯 甲醛(300mg,1.26mmol)、DIPEA(150mg,1.16mmol)和NaBH(OAc)3(600mg, 2.83mmol)。将得到的溶液在室温搅拌过夜，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化 残余物，用石油醚/乙酸乙酯(50/50)洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到 40mg(6％)N-(1-[1-[(4-溴-2,6-二氟-3-羟基苯基)甲基]-4-(氰基甲基)-3-氟哌啶-4-基]- 4-氨基甲酰基-1H-吡唑-3-基)氨基甲酸甲酯，为白色固体。LC/MS(方法N,ESI): [M+H]+＝545.2,RT＝0.93min。
将N-(1-[1-[(4-溴-2,6-二氟-3-羟基苯基)甲基]-4-(氰基甲基)-3-氟哌啶-4-基]-4- 氨基甲酰基-1H-吡唑-3-基)氨基甲酸甲酯(20.0mg,0.037mmol)、苯基硼酸(10.0mg, 0.0820mmol)、Pd(dppf)Cl2(3mg,0.00367mmol)和Cs2CO3(24.0mg,0.0740mmol)在二噁烷(5.0mL)和水(1.0mL)中的脱气的混合物在60℃加热6h，然后减压浓 缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱。合并适合的 级分，减压浓缩。通过制备型-HPLC与如下条件纯化粗产物：柱,XBridge Prep C18OBD柱,5um,19*150mm；流动相,水(0.05％NH3H2O)和ACN(25％ACN- 50％，10min内)；检测器,UV 220,254nm。合并适合的级分，蒸发，得到 3.90mg(20％)N-[4-氨基甲酰基-1-[4-(氰基甲基)-1-[(2,6-二氟-3-羟基-4-苯基苯基) 甲基]-3-氟哌啶-4-基]-1H-吡唑-3-基]氨基甲酸甲酯，为灰白色固体。LC/MS(方法 K,ESI):[M+H]+＝543.3,RT＝1.36min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm) 9.54(s,1H),9.49(s,1H),8.44(s,1H),7.63(s,1H),7.60(dd,J＝6.8,1.6Hz,2H),7.44 (dd,J＝8.4,6.8,2H),7.39–7.34(m,1H),7.30(s,1H),7.04(dd,J＝10.4,2.0Hz,1H), 5.00–4.88(m,1H),3.69(s,2H),3.64(s,3H),3.36–3.33(m,1H),3.22(s,2H),2.95– 2.80(m,2H),2.75–2.60(m,2H),2.06–2.03(m,1H)。
实施例262(通用方法Q)
N-[4-氨基甲酰基-1-[1-(氰基甲基)-4-[(2-苯基苯基)氨基]环己基]-1H-吡唑-3-基] 氨基甲酸甲酯
在0℃向3-氨基-1-[8-(氰基甲基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基]-1H-吡唑-4-甲酰 胺(1.00g,3.27mmol)和DIPEA(1.70g,13.1mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加 入氯甲酸甲酯(2.45g,22.5mmol)。将得到的溶液在0℃、在水/冰浴中搅拌15 min，然后温至室温，搅拌3h。用水稀释该反应混合物，用二氯甲烷(3x)萃取。 用盐水洗涤合并的有机相，用硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化 残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到1.82g N-[4-氨基甲酰基-1-[8-(氰基甲基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基]-1H-吡唑-3-基]氨基甲 酸甲酯，为白色固体。TLC:Rf＝0.4；PE/EA＝2/1。
将N-[4-氨基甲酰基-1-[8-(氰基甲基)-1,4-二氧杂螺-[4.5]癸-8-基]-1H-吡唑-3-基] 氨基甲酸甲酯(500mg,1.38mmol)在四氢呋喃(5mL)和3N HCl水溶液(5mL)中的溶 液在室温搅拌3h。减压浓缩得到的混合物。使残余物分配在乙酸乙酯与饱和碳酸 氢钠溶液之间。用乙酸乙酯(3x)萃取水相。用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸钠 干燥，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇洗脱 (10/1)。合并适合的级分，减压浓缩，得到150mg(34％)N-[4-氨基甲酰基-1-[1- (氰基甲基)-4-氧代环己基]-1H-吡唑-3-基]氨基甲酸甲基，为黄色固体。TLC: Rf＝0.3；PE/EA＝2/1。
向N-[4-氨基甲酰基-1-[1-(氰基甲基)-4-氧代环己基]-1H-吡唑-3-基]氨基甲酸甲 酯(300mg,0.940mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入4-苯基苯胺(238mg,1.40mmol)、NaOAc(77.1mg,0.940mmol)和NaBH(OAc)3(399mg,1.88mmol)。将 得到的溶液在室温搅拌12h，然后减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物， 用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱。合并适合的级分，减压浓缩。通过制备型-HPLC与 如下条件进一步纯化粗产物：柱,XBridge Prep C18OBD柱,5um,19*150mm； 流动相,水(0.05％NH3H2O)和ACN(25％ACN-50％，10min内)；检测器,VU 220, 254nm，得到具有正确质量离子的两种级分:
异构体1：14.0mg(3％)N-[4-氨基甲酰基-1-[1-(氰基甲基)-4-[(2-苯基苯基)氨基]环己基]-1H-吡唑-3-基]氨基甲酸甲酯(异构体1)，为白色固体,LC/MS(方法F, ESI):[M+H]+＝473.3,RT＝1.61min；1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.52(s, 1H),7.52(dd,J＝8.4,1.2Hz,2H),7.41(dd,J＝6.4,2.0Hz,2H),7.36(dd,J＝8.4,7.6 Hz,2H),7.24–7.20(m,1H),6.73(dd,J＝6.4,2.0Hz,2H),3.80(s,3H),3.50–3.46(m, 1H),3.08(s,2H),2.85–2.81(m,2H),2.11–1.96(m,4H),1.32–1.23(m,2H)。
异构体2：1.40mg N-[4-氨基甲酰基-1-[1-(氰基甲基)-4-[(2-苯基苯基)氨基]环己基]-1H-吡唑-3-基]氨基甲酸甲酯(异构体2)，为白色固体。LC/MS(方法L,ESI): [M+H]+＝473.3,RT＝2.95min；1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)8.44(s,1H), 7.54(dd,J＝7.2,1.6Hz,2H),7.43(d,J＝8.8Hz,2H),7.37(dd,J＝7.6,7.2Hz,2H), 7.24–7.20(m,1H),6.77(d,J＝8.8Hz,2H),3.81(s,3H),3.60–3.50(m,1H),3.30(s, 2H),2.45–2.35(m,2H),2.30–2.20(m,2H),2.05–1.95(m,2H),1.70–1.60(m,2H)。
实施例294(通用方法S)
1-(1-(氰基甲基)-4-(3-(4-乙炔基苯氧基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)环己基)-3-(环丙烷 甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
将4-溴苯酚(1.74g,10.0mmol)和Ph3P(2.33g,8.88mmol)在甲苯(15.0mL)中的 混合物在50℃加热10min。向加热的反应混合物中加入1-(二苯基甲基)-3-甲基氮 杂环丁烷-3-醇(1.50g,5.92mmol)和DIAD(1.80g,8.90mmol)在甲苯(15mL)中的溶 液。将得到的溶液在95℃加热过夜，冷却至室温，减压浓缩。通过硅胶快速色 谱法纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1/20)洗脱。合并适合的级分，减压浓缩， 得到1.10g(45％)3-(4-溴苯氧基)-1-(二苯基甲基)-3-甲基氮杂环丁烷，为灰白色固 体。LC/MS(方法N,ESI):[M+H]+＝408.1；410.1,RT＝1.18min。
将氯甲酸1-氯乙酯(4.25g,29.7mmol)加入到3-(4-溴苯氧基)-1-(二苯基甲基)-3- 甲基氮杂环丁烷(1.10g,2.694mmol)在CH3CN(20.0mL)中的溶液中。将得到的溶 液在50℃搅拌5h。加入甲醇(20.0mL)，将该混合物在50℃再搅拌2h。将该混 合物冷却至环境温度，通过过滤除去固体。减压浓缩滤液，得到760mg 3-(4-溴苯 氧基)-3-甲基氮杂环丁烷盐酸盐，为黄色粗固体。LC/MS(方法N,ESI): [M+H]+＝242.1；244.1,RT＝0.95min。
将1-(1-(氰基甲基)-4-氧代环己基)-3-(环丙烷-甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(500mg,1.51mmol)、3-(4-溴苯氧基)-3-甲基氮杂环丁烷盐酸盐(509mg,1.82mmol) 和NaOAc(125mg,1.52mmol)在二氯甲烷(40.0mL)中的混合物在室温搅拌过夜， 然后添加NaBH(OAc)3(644mg,3.03mmol)。将得到的溶液在室温再搅拌4h，然 后减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(15/1)洗脱。合 并适合的级分，减压浓缩，得到620mg(74％)1-(4-(3-(4-溴-苯氧基)-3-甲基氮杂环 丁烷-1-基)-1-(氰基甲基)环己基)-3-(环丙烷-甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，为淡黄 色固体。LC/MS(方法N,ESI):[M+H]+＝555.2&557.2,RT＝1.02min。
将1-(4-(3-(4-溴苯氧基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-1-(氰基甲基)环己基)-3-(环丙 烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(300mg,0.540mmol)、乙炔基三甲基硅烷(529mg,5.38mmol)、Pd(OAc)2(24.0mg,0.107mmol)、P(t-Bu)3.HBF4(63.0mg, 0.217mmol)、CuI(21.0mg,0.110mmol)和三乙胺(6.00mL)在DMSO(2.00mL)中的 脱气的混合物在90℃加热6h。将该反应混合物冷却至室温，通过添加水(50mL) 使反应淬灭。用乙酸乙酯(3x)萃取得到的溶液，用无水硫酸镁干燥合并的有机 层，过滤，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(16/1) 洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到200mg(65％)1-(1-(氰基甲基)-4-(3-甲基 -3-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-基)环己基)-3-(环丙烷甲酰氨 基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，为棕色固体。LC/MS(方法N,ESI):[M+H]+＝573.4, RT＝1.17min。
将1-(1-(氰基甲基)-4-(3-甲基-3-(4-((三甲基甲硅烷基)-乙炔基)苯氧基)氮杂环 丁烷-1-基)环己基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(200mg,0.349mmol)和碳酸钾(145mg,1.04mmol)在甲醇(10mL)中的混合物在室温搅拌2h，然后减压浓 缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇洗脱(13/1)。合并适合的 级分，减压浓缩。通过制备型-HPLC与如下条件分离异构体混合物：柱,Kinetex EVO C18柱,5um,30*150mm；流动相,水(10mmol/L NH4HCO3)和ACN(30％ ACN-40％，10min内)；检测器,UV 254nm，得到两种级分:
异构体1(第一种级分):24.8mg(14％)1-[1-(氰基甲基)-4-[3-(4-乙炔基苯氧基)- 3-甲基氮杂环丁烷-1-基]环己基]-3-环丙烷-1H-吡唑-3,4-二酰氨基，为白色固体。异构体1:LC/MS(方法M,ESI):[M+H]+＝501.3,RT＝2.15min.1H NMR(400MHz, DMSO-d6):δ(ppm)10.18(s,1H),8.43(s,1H),7.53(s,1H),7.37(d,J＝8.8Hz,2H), 7.23(s,1H),6.71(d,J＝8.8Hz,2H),4.03(s,1H),3.45(d,J＝7.6Hz,2H),3.07(d, J＝7.2Hz,2H),3.01(s,2H),2.50–2.45(m,3H),2.15–2.05(m,1H),1.80–1.65(m,4H), 1.53(s,3H),0.95–0.85(m,2H),0.85–0.75(m,4H)。
异构体,21.4mg(12％)1-[1-(氰基甲基)-4-[3-(4-乙炔基苯氧基)-3-甲基氮杂环丁 烷-1-基]环己基]-3-环丙烷-1H-吡唑-3,4-二酰氨基，为白色固体。LC/MS(方法M,ESI):[M+H]+＝501.3,RT＝2.15min.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)10.18 (s,1H),8.43(s,1H),7.52(s,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,2H),7.22(s,1H),6.74(d,J＝8.8 Hz,2H),4.04(s,1H),3.52(d,J＝7.6Hz,2H),3.10(d,J＝7.2Hz,2H),3.09(s,2H), 2.51–2.50(m,1H),2.25–2.20(m,1H),2.18–2.00(m,4H),1.61(s,3H),1.50–1.35(m, 4H),1.85–1.75(m,4H)。
实施例298(通用方法T)
(4-氨基甲酰基-1-(4-(氰基甲基)-3-氟-1-(4-(丙-1-炔-1-基)苄基)哌啶-4-基)-1H-吡唑- 3-基)氨基甲酸甲酯
向(4-氨基甲酰基-1-(4-(氰基甲基)-3-氟哌啶-4-基)-1H-吡唑-3-基)氨基甲酸甲 酯盐酸盐(180mg,0.50mmol)在1,2-二氯乙烷(3.0mL)中的混合物中加入三甲胺(0.21mL,1.50mmol)和4-碘苯甲醛(174mg,0.75mmol)。将该反应混合物在室温搅 拌10mins，然后加入NaBH(OAc)3(423mg,1.99mmol)。将得到的反应混合物在 室温搅拌过夜。加入水(20mL)，分离各相。用二氯甲烷(2x)萃取水相。用水和盐 水洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化 残余物，用二氯甲烷/甲醇(85/15)洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到105mg (39％)(4-氨基甲酰基-1-(4-(氰基甲基)-3-氟-1-(4-碘苄基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3-基) 氨基甲酸甲酯，为白色固体。LC/MS(方法P,ESI):[M+H]+＝541.2,RT＝1.14min。
将(4-氨基甲酰基-1-(4-(氰基甲基)-3-氟-1-(4-碘苄基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3-基) 氨基甲酸甲酯(105mg,0.194mmol)、氯化双(三苯膦)钯(14mg,0.019mmol)、三丁 基(丙-1-炔基)锡(99mg,0.292mmol)在N-甲基-2-吡咯烷酮(1mL)中的脱气溶液在 65℃搅拌18h。将该混合物冷却至室温；加入乙酸乙酯，通过硅藻土过滤除去沉 淀的固体。用水和饱和氯化钠水溶液洗涤滤液。用无水硫酸镁干燥有机相，过 滤，浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，用0-15％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱。合 并适合的级分，蒸发，得到(4-氨基甲酰基-1-(4-(氰基甲基)-3-氟-1-(4-(丙-1-炔-1-基) 苄基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3-基)氨基甲酸甲酯(22mg,25％)，为橙色固体。LC/MS (方法P,ESI):[M+H]+＝453.3,RT＝1.14min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm) 9.48(s,1H),8.46(s,1H),7.61(s,1H),7.48(s,1H),7.40–7.32(m,2H),7.31–7.19(m, 2H),5.05–4.75(m,1H),3.64(s,3H),3.57(s,2H),3.48–3.38(m,1H),3.38–3.31(m, 1H),2.87–2.82(m,1H),2.75–2.67(m,2H),2.66–2.49(m,2H),2.07–2.00(m,1H), 2.03(s,3H)。
实施例299(通用方法U)
1-(4-(氰基甲基)-1-(4-(环丙基乙炔基)苄基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑 -4-甲酰胺
将1-(4-(氰基甲基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺盐酸盐(1.00g,2.83mmol)、三甲胺(1.19mL,8.5mmol)和4-碘苯甲醛(986mg,4.25mmol)在 1,2-二氯乙烷(15.0mL)中的混合物在室温搅拌10mins，然后添加NaBH(OAc)3 (2.40g,11.34mmol)。将得到的反应混合物在室温搅拌过夜。加入水(50mL)，用二 氯甲烷(3x)萃取该混合物。用水和盐水洗涤合并的有机层，用无水硫酸镁干燥， 减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(85/15)洗脱。合并 适合的级分，减压浓缩，得到570mg(38％)1-(4-(氰基甲基)-1-(4-碘苄基)-哌啶-4- 基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法P,ESI): [M+H]+＝533.1,RT＝0.94min。
将1-(4-(氰基甲基)-1-(4-碘苄基)哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4- 甲酰胺(50mg,0.094mmol)、氯化双(三苯膦)钯(7mg,0.0094mmol)、碘化亚酮(I) (2mg,0.0094mmol)、乙炔基环丙烷(10mg,0.14mmol)和三甲胺(0.2mL,1.43mmol) 在N-甲基-2-吡咯烷酮(0.4mL)中的溶液在90℃搅拌1h。将该混合物冷却至室 温，加入乙酸乙酯，通过硅藻土过滤除去沉淀的固体。用水和饱和氯化钠水溶液 洗涤滤液，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用0- 15％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱。合并适合的级分，蒸发，得到30mg(67％)1-(4- (氰基甲基)-1-(4-(环丙基-乙炔基)苄基)-哌啶-4-基)-3-(环丙烷甲酰氨基)-1H-吡唑-4- 甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法P,ESI):[M+H]+＝471.2,RT＝1.13min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm)10.13(s,1H),8.47(s,1H),7.48(s,1H),7.29(d,J＝8.2Hz,2H),7.23(d,J＝8.1Hz,2H),3.40(s,2H),3.17(d,J＝5.3Hz,0H),3.06(s, 2H),2.60(d,J＝8.8Hz,2H),2.45–2.36(m,2H),2.06–1.93(m,3H),1.52(tt,J＝8.3,5.0 Hz,1H),0.92–0.82(m,2H),0.86–0.76(m,4H),0.77–0.66(m,2H)。
实施例301(通用方法V)
3-((4-((二氟甲基)磺酰基)苯基)氨基)-1-(4-乙基-1-(2-氟-5-羟基苄基)哌啶-4- 基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
向冷却(0℃)的叔-丁醇钾(3.55g,31.6mmol,1.05当量)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中加入2-二乙氧基磷酰基-N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺(7.92g,33.1mmol)。将该 反应混合物温至室温，历时30mins，然后在室温再搅拌1h。将该混合物冷却至- 78℃，加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔-丁酯(6g,30.1mmol)在四氢呋喃(50mL)中的溶 液。将该混合物缓慢温热至室温，搅拌16h。加入水(250mL)，用乙酸异丙酯(3x 100mL)萃取该混合物。用水和盐水洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，减压浓 缩，得到4-[2-[甲氧基(甲基)氨基]-2-氧代-亚乙基]哌啶-1-甲酸叔-丁酯，为白色固 体，不经进一步纯化用于下一步。
用碳酸铯(21.5g,66mmol)处理5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺半硫酸盐(hemisulfate)(6.31g,36mmol)和4-[2-[甲氧基(甲基)氨基]-2-氧代-亚乙基]哌啶-1-甲酸叔-丁酯(8.53g,30mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的混悬液，然后在室温 搅拌16h。通过硅藻土过滤除去沉淀的固体，减压浓缩滤液。通过硅胶快速色谱 法纯化残余物，用0-10％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱。合并适合的级分，减压 浓缩，得到600mg(5％)4-(3-氨基-4-氨基甲酰基-吡唑-1-基)-4-[2-[甲氧基(甲基)氨 基]-2-氧代-乙基]哌啶-1-甲酸叔-丁酯，为白色固体。
将4-(3-氨基-4-氨基甲酰基-吡唑-1-基)-4-[2-[甲氧基(甲基)氨基]-2-氧代-乙基] 哌啶-1-甲酸叔丁酯(600mg,1.46mmol)、1-溴-4-(二氟甲基磺酰基)苯(594mg,2.19mmol)、磷酸三钾(640mg,2.92mmol)、2-二-叔-丁基膦基-2',4',6'-三异丙基联 苯(32mg,0.073mmol,0.05当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(17mg,0.018mmol, 0.0125当量)在1,4-二噁烷(20mL)和叔-丁醇(5mL)中的脱气的混合物在80℃加热 16h。将该混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤除去沉淀的固体。减压浓缩滤 液，通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用0-5％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱。 合并适合的级分，减压浓缩，得到600mg(68％)4-[4-氨基甲酰基-3-[4-(二氟甲基 磺酰基)苯胺基]吡唑-1-基]-4-[2-[甲氧基(甲基)氨基]-2-氧代-乙基]哌啶-1-甲酸叔丁 酯，为白色固体。
将氢化二异丁基铝(1M的庚烷溶液,10mL,10mmol)加入到冷却的(-78℃)4- [4-氨基甲酰基-3-[4-(二氟甲基-磺酰基)苯胺基]吡唑-1-基]-4-[2-[甲氧基(甲基)氨基]- 2-氧代-乙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(600mg,1.0mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中。 将该混合物在-78℃搅拌30mins，然后用5％柠檬酸水溶液(50mL)和饱和硫酸钠 (50mL)猝灭。加入iPrOAc(100mL)，通过硅藻土过滤除去沉淀的固体。分离滤 液层，用盐水洗涤有机萃取物；用二氯甲烷(100mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合 并的有机层，过滤，减压浓缩，得到620mg4-[4-氨基甲酰基-3-[4-(二氟甲基磺酰 基)苯胺基]吡唑-1-基]-4-(2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，为白色固体，将其不经 进一步纯化使用。
向4-[4-氨基甲酰基-3-[4-(二氟甲基磺酰基)-苯胺基]吡唑-1-基]-4-(2-氧代乙基) 哌啶-1-甲酸叔丁酯(270mg,0.50mmol)在乙腈(3mL)中的溶液中加入1,2-乙二硫醇(0.41mL,470mg,5.0mmol)，然后加入对甲苯磺酸一水合物(10mg,0.05mmol)。将 该混合物在室温搅拌16h，然后减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用 0-5％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到220mg (71％)4-[4-氨基甲酰基-3-[4-(二氟甲基磺酰基)苯胺基]-吡唑-1-基]-4-(1,3-二硫戊环- 2-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，为白色固体。
向4-[4-氨基甲酰基-3-[4-(二氟甲基磺酰基)苯胺基]-吡唑-1-基]-4-(1,3-二硫戊 环-2-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(220mg,0.36mmol)在四氢呋喃(4mL)中的溶液中加入阮内镍浆液(Raney 2800,约50％(w/v)在水中,1mL)。将该混合物在氢气囊气氛 中在RT搅拌1h。通过硅藻土过滤除去固体，减压浓缩滤液。通过硅胶快速色谱 法纯化残余物，用0-5％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱。合并适合的级分，减压 浓缩，得到73mg(39％)4-[4-氨基甲酰基-3-[4-(二氟甲基磺酰基)苯胺基]吡唑-1- 基]-4-乙基-哌啶-1-甲酸叔丁酯，为白色固体。
将三氟乙酸(1mL)加入到4-[4-氨基甲酰基-3-[4-(二氟甲基磺酰基)苯胺基]吡唑-1-基]-4-乙基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(73mg,0.14mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液 中，将该混合物在室温搅拌1h。加入甲苯(5mL)，减压浓缩该混合物。将残余物 与甲苯再共蒸发两次(2x 5mL)，得到3-[4-(二氟甲基磺酰基)苯胺基]-1-(4-乙基-4- 哌啶基)吡唑-4-甲酰胺三氟乙酸盐，其全部不经纯化用于下一步。
将3-[4-(二氟甲基磺酰基)苯胺基]-1-(4-乙基-4-哌啶基)-吡唑-4-甲酰胺三氟乙 酸盐(全部粗物质来自上述步骤)、3-羟基-6-氟苯甲醛(29mg,0.21mmol,1.5当量)和 三乙酰氧基硼氢化钠(59mg,0.28mmol,2.0当量)在乙腈(2mL)中的混合物在室温 搅拌16h。注意到转化不完全，加入甲醇(1mL)、3-羟基-6-氟苯甲醛(29mg, 0.21mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(59mg,0.28mmol)，在室温持续搅拌2h。将该 反应混合物直接加载用于通过硅胶快速色谱法纯化，用0-20％甲醇的二氯甲烷溶 液梯度洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到36mg(47％)3-[4-(二氟甲基磺酰 基)苯胺基]-1-[4-乙基-1-[(2-氟-5-羟基-苯基)甲基]-4-哌啶基]吡唑-4-甲酰胺，为白色 固体。LC/MS(方法J,ESI):[M+H]+＝552.1,RT＝3.58min；1H NMR(400MHz, DMSO-d6):δ(ppm)11.94(s,2H),9.76(s,1H),9.26(s,1H),8.45(s,1H),7.86–7.75 (m,4H),7.62(s,1H),7.40–6.57(m,4H),3.44–3.32(m,2H),2.68–2.61(m,2H),2.41– 2.33(m,2H),2.14–2.09(m,3H),1.91(s,2H),1.81–1.72(m,2H),0.54(t,J＝7.1Hz,4H)。
实施例302(通用方法X)
1-((1S,4S)-1-乙基-4-(3-(三氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)环己基)-3-((4-(甲基磺酰 基)苯基)氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺&1-((1R,4R)-1-乙基-4-(3-(三氟甲基)氮杂环丁烷- 1-基)环己基)-3-((4-(甲基磺酰基)苯基)氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
向冷却(0℃)的叔丁醇钾(4.6g,41mmol)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中加入2- 二乙氧基磷酰基-N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺(10g,43mmol)。将该混合物温热至室 温，历时30mins，再搅拌1h。将该混合物冷却至-78℃，加入4-苄氧基环己酮 (7.9g,39mmol,1.0当量)的四氢呋喃(50mL)溶液。将该混合物缓慢温热至室温，搅 拌16h。用水(250mL)稀释该混合物，用乙酸异丙酯(3x 100mL)萃取。用水和盐 水洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余 物，用0-70％乙酸异丙酯的庚烷溶液梯度洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得 到10g(89％)2-(4-苄氧基环己亚基)-N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺，为无色油状物。
向3-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(5g,39.6mmol)和2-(4-苄氧基环己亚基)-N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺(10.0g,34.6mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中加入 碳酸铯(12.4g,38.0mmol)。将该混合物在室温搅拌16h。注意到低转化率，由此向 该混合物中加入1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(5.2mL,34.6mmol)，将该混合物 加热至60℃达3h。此后，用5％柠檬酸水溶液(150mL)使反应淬灭，用乙酸异 丙酯(3x 100mL)萃取。用水和盐水洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，减压浓 缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用0-8％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱。 合并适合的级分，减压浓缩，得到3.3g(23％)3-氨基-1-[4-苄氧基-1-[2-[甲氧基(甲 基)氨基]-2-氧代-乙基]环己基]吡唑-4-甲酰胺，为白色固体。
在80℃将3-氨基-1-[4-苄氧基-1-[2-[甲氧基(甲基)氨基]-2-氧代-乙基]环己基] 吡唑-4-甲酰胺(1.0g,2.4mmol)、1-溴-4-甲基磺酰基-苯(622mg,2.65mmol)、磷酸三钾(1.05g,4.8mmol)、2-二-叔-丁基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯(53mg,0.12mmol)和 三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(28mg,0.03mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和叔-丁醇(5mL) 中的脱气溶液加热16h。将该混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤除去固体，减 压浓缩滤液。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用0-7％甲醇的二氯甲烷溶液梯 度洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到1.36g(99％)1-[4-苄氧基-1-[2-[甲氧基 (甲基)氨基]-2-氧代-乙基]环己基]-3-(4-甲基磺酰基苯胺基)吡唑-4-甲酰胺，为白色 固体。
将氢化二异丁基铝(1M的庚烷溶液,24mL,24mmol)加入到冷却的(-78℃)1- [4-苄氧基-1-[2-[甲氧基(甲基)氨基]-2-氧代-乙基]环己基]-3-(4-甲基磺酰基苯胺基) 吡唑-4-甲酰胺(1.36g,2.4mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中。将该混合物在- 78℃搅拌30mins，然后用饱和硫酸钠(25mL)猝灭，搅拌10mins。加入固体无水 硫酸钠，将该混合物再搅拌30mins。通过硅藻土过滤除去固体，用四氢呋喃充分 洗涤垫。减压浓缩滤液，通过硅胶快速色谱法纯化，用0-10％甲醇的二氯甲烷溶 液梯度洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到800mg(66％)1-[4-苄氧基-1-(2- 氧代乙基)环己基]-3-(4-甲基磺酰基苯胺基)吡唑-4-甲酰胺，为白色固体。
向1-[4-苄氧基-1-(2-氧代乙基)环己基]-3-(4-甲基磺酰基苯胺基)吡唑-4-甲酰胺(800mg,1.6mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中加入1,2-乙二硫醇(1.29mL, 15.7mmol)和对-甲苯磺酸一水合物(30mg,0.16mmol)。将该混合物在室温搅拌 16h，然后减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用0-5％甲醇的二氯甲烷 溶液梯度洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到530mg(58％)1-[4-苄氧基-1- (1,3-二硫戊环-2-基甲基)环己基]-3-(4-甲基磺酰基苯胺基)吡唑-4-甲酰胺，为白色 固体。
将1-[4-苄氧基-1-(1,3-二硫戊环-2-基甲基)环己基]-3-(4-甲基磺酰基苯胺基)吡 唑-4-甲酰胺(530mg,0.9mmol)和阮内镍(Raney 2800,约50％(w/v)在水中,2mL)的 四氢呋喃(4mL)溶液中的浆液的混合物在室温、氢气囊气氛中搅拌16h。通过硅藻 土过滤除去固体，减压浓缩滤液，通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用0-5％甲 醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到100mg(22％)1- (4-苄氧基-1-乙基-环己基)-3-(4-甲基磺酰基苯胺基)吡唑-4-甲酰胺，为白色固体。
向1-(4-苄氧基-1-乙基-环己基)-3-(4-甲基磺酰基苯胺基)吡唑-4-甲酰胺(100mg,0.20mmol)在乙醇(2mL)和四氢呋喃(2mL)中的溶液中加入10％披钯碳 (43mg,0.04mmol)。将该混合物在室温、氢气囊气氛中搅拌16h。注意到低转化 率，由此向该混合物中加入10％氢氧化钯(57mg,0.04mmol)，将该混合物在 50℃、氢气囊气氛中搅拌72h。通过硅藻土过滤除去固体，减压浓缩。通过硅胶 快速色谱法纯化残余物，用0-10％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱。合并适合的级 分，减压浓缩，得到10mg(12％)1-(1-乙基-4-羟基-环己基)-3-(4-甲基磺酰基苯胺 基)吡唑-4-甲酰胺，为白色固体。
将戴斯-马丁试剂(Dess-Martin periodinane)(21mg,0.05mmol)加入到1-(1-乙基-4-羟基-环己基)-3-(4-甲基磺酰基苯胺基)吡唑-4-甲酰胺(10mg,0.02mmol)在二氯 甲烷(2mL)中的溶液中，将该混合物在室温搅拌1h。注意到转化不完全，由此向 该混合物中再加入戴斯-马丁试剂(21mg,0.05mmol)，在室温持续搅拌1h。再加入 部分戴斯-马丁试剂(21mg,0.05mmol)，将该混合物在室温搅拌1h。加入乙腈 (2mL)、3-(三氟甲基)氮杂环丁烷盐酸盐(32mg,0.20mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠 (42mg,0.20mmol)，将该混合物在室温搅拌1h。使该反应混合物直接上柱，用于 通过硅胶快速色谱法纯化，用0-25％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱。合并适合的 级分，减压浓缩，得到15mg 1-[1-乙基-4-[3-(三氟甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己基]- 3-(4-甲基磺酰基苯胺基)吡唑-4-甲酰胺，为非对映异构体混合物。使用手性SFC 与如下条件拆分非对映异构体：柱:Chiralpak IA 150x 21.2mm I.D.,5μm流动相: A:CO2B:甲醇(0.1％NH4OH)等度:25％B，6min；流速:70mL/min，柱温： 40℃,BPR:100巴,检测器,UV 254nm，得到两种级分。将相对构型任选地指定 给每种非对映异构体：
第一个洗脱级分,2.1mg(17％)，为白色固体,LC/MS(方法J,ESI): [M+H]+＝514.2,RT＝3.21min
第二个洗脱级分,1.9mg(15％)，为白色固体,LC/MS(方法J,ESI): [M+H]+＝514.2,RT＝3.00min
实施例303(通用方法Y)
(4-((4-氨基甲酰基-1-((1R,4R)-1-(氰基甲基)-4-(3-(三氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)环己 基)-1H-吡唑-3-基)氨基)苯基)膦酸二乙酯
将1-溴-4-碘-苯(2.42g,8.54mmol)、碳酸铯(3.8g,11.6mmol)、四(三苯膦)钯(0)(449mg,0.38mmol)和亚磷酸二乙酯(1mL,1.1g,7.82mmol)在四氢呋喃(10mL)中的 脱气的混悬液在微波照射下在120℃加热30mins。将该混合物冷却至室温，通过 硅藻土过滤除去固体，减压浓缩滤液。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用0- 5％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到430mg (19％)1-溴-4-二乙氧基磷酰基-苯，为淡黄色油状物。
在100℃将3-氨基-1-[8-(氰基甲基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基]-1H-吡唑-4-甲 酰胺(400mg,1.3mmol)、1-溴-4-二甲基磷酰基-苯(430mg,1.5mmol)、磷酸三钾 (573mg,2.6mmol)、2-二-叔-丁基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯(29mg,0.065mmol)和 三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(15mg,0.016mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的脱气的混合 物加热16h。将该混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤除去固体，减压浓缩滤 液。通过硅胶快速色谱法纯化残余物，用0-10％甲醇的乙酸异丙酯溶液梯度洗 脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到160mg(24％)1-[8-(氰基甲基)-1,4-二氧杂 螺[4.5]癸-8-基]-3-(4-二乙氧基磷酰基苯胺基)吡唑-4-甲酰胺，为白色固体。
将甲酸(4mL)加入到1-[8-(氰基甲基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基]-3-(4-二甲基 磷酰基苯胺基)吡唑-4-甲酰胺(160mg,0.31mmol)在水(0.2mL)中的混悬液中，将该 混合物在室温搅拌16h。减压浓缩该混合物，得到146mg(100％)1-[1-(氰基甲 基)-4-氧代-环己基]-3-(4-二乙氧基磷酰基苯胺基)吡唑-4-甲酰胺，为白色固体，将 其不经进一步纯化使用。
向3-(三氟甲基)氮杂环丁烷盐酸盐(75mg,0.46mmol)、1-[1-(氰基甲基)-4-氧代-环己基]-3-(4-二甲基磷酰基苯胺基)吡唑-4-甲酰胺(146mg,0.31mmol)在乙腈 (2mL)中的混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(131mg,0.62mmol)，将该混合物在 室温搅拌2h。将该混合物直接加载用于通过硅胶快速色谱法纯化，用0-20％甲醇 的二氯甲烷溶液梯度洗脱。合并适合的级分，减压浓缩，得到50mg(28％)(4-((4- 氨基甲酰基-1-((1R,4R)-1-(氰基甲基)-4-(3-(三氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)环己基)-1H- 吡唑-3-基)氨基)苯基)膦酸二乙酯，为白色固体。LC/MS(方法J,ESI): [M+H]+＝583.3,RT＝3.20min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)(ppm)δ9.42(s,1H), 8.50(s,1H),7.70–7.62(m,3H),7.62–7.52(m,2H),7.22(s,1H),4.05–3.89(m,4H), 3.47–3.18(m,3H),3.15–3.07(m,4H),2.28–2.19(m,1H),2.16–2.08(m,4H),1.50– 1.36(m,4H),1.22(t,J＝7.0Hz,6H)。
实施例304(通用方法W)
1-(1-(2-氰基乙酰基)-4-乙基哌啶-4-基)-3-((4-((二氟甲基)磺酰基)苯基)氨基)- 1H-吡唑-4-甲酰胺
向1-[4-(氰基甲基)-4-哌啶基]-3-(环丙烷-羰基-氨基)吡唑-4-甲酰胺(88mg,0.16mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中依次加入氰基乙酸(17mg, 0.19mmol)、N,N-二异丙基-乙胺(0.11mL,84mg,0.65mmol)、1-羟基苯并三唑 (27mg,0.19mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(40mg, 0.21mmol)。将该混合物在室温搅拌16h。将该反应混合物直接加载用于通过反相 HPLC纯化(条件：柱,Gemini-NX C18 5um,50x 30mm；流动相：水(0.1％甲酸) 和CH3CN(20％CH3CN-60％，10min内)；流速60mL/min)。合并适合的级分， 蒸发，得到30mg(36％)1-(1-(2-氰基乙酰基)-4-乙基哌啶-4-基)-3-((4-((二氟甲基) 磺酰基)苯基)氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法J,ESI): [M+H]+＝495.1,RT＝4.50min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm)9.74(s,1H), 8.48(s,1H),7.88–7.74(m,4H),7.61(s,1H),7.36–6.97(m,2H),4.16–3.96(m,3H), 3.65–3.52(m,1H),3.17–3.04(m,1H),3.00–2.87(m,1H),2.45–2.30(m,2H),2.03– 1.90(m,1H),1.90–1.70(m,3H),0.57(t,J＝7.4Hz,3H)。
上述涉及的LCMS方法的描述
方法A
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与C18-反相柱(50x 3mm Shim-pack XR- ODS,2.2μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B:乙腈+ 0.05％三氟乙酸。
梯度:
检测–UV(220和254nm)和ELSD
方法B
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与C18-反相柱(50x 3mm Shim-pack XR- ODS,2.2μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B:乙腈+ 0.05％三氟乙酸。
梯度:
检测–UV(220和254nm)和ELSD
方法C
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与Shim-pack XR-ODS柱(50x 3mm Shim-pack XR-ODS,2.2μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水+0.05％TFA；溶剂B: 乙腈+0.05％TFA。
梯度:
检测–UV(220和254nm)和ELSD
方法D
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与C18-反相柱(50x 3mm Gemini-NX C18 110A,3.0μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水5mM NH4HCO3；溶剂B:乙腈。
梯度:
检测–UV(220和254nm)和ELSD
方法Ｅ
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与C18-反相柱(50x 3mm Gemini-NX C18 110A,3.0μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水5m NH4HCO3；溶剂B:乙腈。
梯度:
检测–UV(220和254nm)和ELSD
方法F
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与C18-反相柱(50x 3mm Gemini-NX C18 110A,3.0μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水5mM NH4HCO3；溶剂B:乙腈。
梯度:
检测–UV(220和254nm)和ELSD
方法G
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与C18-反相柱(50x 2.1mm Ascentis ExpressC18,2.7μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B:乙 腈+0.05％三氟乙酸。
梯度:
检测–UV(220和254nm)和ELSD
方法H
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与Ascentis Express C18柱(50x 2.1mm, 2.7μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水+0.05％TFA；溶剂B:乙腈+0.05％ TFA。
梯度:
检测–UV(220和254nm)和ELSD
方法I
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与Ascentis Express C18柱(50x 2.1mm, 2.7μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水+0.05％TFA；溶剂B:乙腈+0.05％ TFA。
梯度:
检测–UV(220和254nm)和ELSD
方法J
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与C18-反相柱(50x 3mm Shim-pack XR- ODS,2.2μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B:乙腈+ 0.05％三氟乙酸。
梯度:
检测–UV(220和254nm)和ELSD
方法K(LCMS15)
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与C18-反相柱(50x 3mm Shim-pack XR- ODS,2.2μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B:乙腈+ 0.05％三氟乙酸。
梯度:
检测–UV(220和254nm)和ELSD
方法L(LCMS34)
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与C18-反相柱(50x 3mm Gemini-NX C18 110A,3.0μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水5mNH4HCO3；溶剂B:乙腈。
梯度:
检测–UV(220和254nm)和ELSD
方法M(LCMS53)
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与C18-反相柱(50x 3mm Shim-pack XR- ODS,2.2μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B:乙腈+ 0.05％三氟乙酸。
梯度:
检测–UV(220和254nm)和ELSD
方法N(LCMS53)
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与C18-反相柱(50x 3mm Shim-pack XR- ODS,2.2μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B:乙腈+ 0.05％三氟乙酸。
梯度:
检测–UV(220和254nm)和ELSD
方法O
实验使用Agilent 1290UHPLC偶联Agilent MSD(6140)质谱仪、应用ESI作 为离子化源进行。LC分离使用Phenomenex XB-C18,1.7μm,50×2.1mm柱与 0.4mL/分钟流速进行。溶剂A是含有0.1％甲酸的水，且溶剂B是含有0.1％甲酸 的乙腈。梯度由2–98％溶剂B历时7min、平衡1.5min后保持98％B 1.5min组 成。LC柱温是40℃。在220nm和254nm采集UV吸光度并且将质谱全扫描应 用于全部实验。
方法P
实验使用SHIMADZU LCMS-2020与C18-反相柱(Waters BEH 30x 2.1mm, 1.7μm粒径)进行，洗脱用溶剂A：水+0.1％甲酸；溶剂B:乙腈+0.1％甲酸。
梯度:
检测–UV(254nm)
使用与如上所述类似的方法制备下表中的实施例。任意地将绝对构型指定 给每种立体异构体。
表2.LCMS方法
使用与本文所述类似的方法，也可以制备下列式(I)的化合物及其立体异构 体和盐。
酶测定
如下进行JAK酶测定：
采用Caliper
技术(Caliper Life Sciences,Hopkinton,MA)，通过监测源于JAK3(Val-Ala-Leu-Val-Asp-Gly-Tyr-Phe-Arg-Leu-Thr-Thr，在N-末 端上采用5-羧基荧光素荧光标记)的肽的磷酸化，从而测定分离的重组JAK1和 JAK2激酶域的活性。为了测定抑制常数(Ki)，将化合物在DMSO中系列稀释， 加至50uL激酶反应物中，其中含有纯化的酶(1.5nM JAK1或0.2nM JAK2)、 100mM HEPES缓冲液(pH 7.2)、0.015％Brij-35、1.5μM肽底物、ATP(25 μM)、10mM MgCl2、4mM DTT，DMSO终浓度2％。将反应物于22℃在384孔聚丙烯微量板中温育30分钟，然后通过加入25uL含有EDTA的溶液(100mM HEPES缓冲液(pH7.2)、0.015％Brij-35、150mM EDTA)终止反应，使得EDTA 的终浓度为50mM。终止激酶反应后，根据生产商说明书，采用Caliper 
3000测定作为总肽底物一部分的磷酸化产物的比例。然后，采用对于 ATP-竞争性抑制[Ki＝Ki,app/(1+[ATP]/Km,app)]改良的Morrison紧密结合模型测定Ki值(Morrison,J.F.,Biochim.Biophys.Acta.185:269-296(1969)；William,J.W.和 Morrison,J.F.,Meth.Enzymol.,63:437-467(1979))。
如下进行细胞系中的JAK1通路测定：
在为测定JAK1依赖性STAT磷酸化设计的基于细胞的测定中测定抑制剂 效能(EC50)。如上所述，通过阻断Jak/Stat信号传导通路抑制IL-4、IL-13和IL- 9信号传导，可以缓解临床前肺炎症模型中的哮喘症状(Mathew等人,2001,J Exp Med 193(9):1087-1096；Kudlacz等人,2008,Eur J.Pharmacol 582(1-3):154- 161)。
在一种测定方法中，将得自美国模式培养物保藏中心(American Type CultureCollection)(ATCC；Manassas,VA)的TF-1人红白血病细胞用于测定IL- 13刺激的JAK1-依赖性STAT6磷酸化下游。在用于测定前，使TF-1细胞在 Optime M培养基(LifeTechnologies,Grand Island,NY)中饥饿GM-CSF过夜，该 培养基中补充有0.5％活性炭/葡聚糖剥离的胎牛血清(FBS)、0.1mM非必需氨基 酸(NEAA)和1mM丙酮酸钠。该测定在384-孔板中的无血清Optime M培养基中 使用300,000细胞/孔进行。在第二种测定方法中，在实验前1天，将得自ATCC 的BEAS-2B人支气管上皮细胞以100,000细胞/孔在96-孔板中铺板。BEAS-2B测 定在完全生长培养基(支气管上皮细胞培养基+bulletkit；Lonza；Basel,Switzerland)中进行。
用DMSO按照1:2连续稀释测试化合物，然后在临使用前用培养基按照1:50 稀释。将稀释的化合物加入到细胞中，最终DMSO浓度为0.2％，在37℃温育 30min(用于TF-1测定)；或温育1hr(用于BEAS-2B测定)。然后用人重组细胞 因子在其相应EC90浓度下刺激细胞，如上述对每个批次所测定的。在37℃用IL- 13(R&D Systems,Minneapolis,MN)将细胞刺激15min。通过直接添加10x裂解 缓冲液(Cell Signaling Technologies,Danvers,MA)终止TF-1细胞反应，同时通过 除去培养基并且添加1x裂解缓冲液停止BEAS-2B细胞温育。将得到的样品在- 80℃冷冻在平板中。使用MesoScale Discovery(MSD)技术(Gaithersburg,MD)测 定细胞裂解液中的化合物介导的STAT6磷酸化抑制。将EC50值测定为相对于 DMSO对照测定的STAT磷酸化50％抑制所需的化合物浓度。
表3提供了所示实施例的JAK1Ki、JAK2Ki和IL-13-pSTAT6IC50信息。
表3：
Claims (33)
1.式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，
其中：
R1和R1a与它们所连接的原子一起形成3-10元碳环，其任选地被Ra取代，且任选地被Rb取代；或R1和R1a与它们所连接的原子一起形成3-15元杂环，其任选地被Rc取代，且任选地被Rd取代；
R2是–NReRf；
R3是–CH3或–CN；
Ra是–NRrRs或-ORr；
Rb各自独立地选自卤素、氰基、羟基、氧代、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-SH和-SCH3，其中任意C1-C6烷基和C1-C6烷氧基任选地被卤素、氰基、羟基、氧代、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-SH或-SCH3取代，其中任意C1-3烷基和C1-3烷氧基任选地被卤素、羟基、氰基或氧代取代；
Rc是-ORm、-SRm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、-NRmC(O)Rn、-S(O)1-2Rm、-NRmS(O)1-2Rn、-S(O)1-2NRmRn、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元芳基或5-10元杂芳基，其中Rc的任意C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选地被Rx取代；
Rd各自独立地选自卤素、氰基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基，其中任意C1-C6烷基和C1-C6烷氧基任选地被卤素、羟基、氰基或氧代取代；
Re是H或C1-C4烷基；
Rf是–C(＝O)-Rg；
Rg是H、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-NRtRu，或3-10元碳环基，其任选地被卤素、羟基、氰基、氧代、C1-C3烷基、C2-C3炔基、6-10元芳基、5-6元杂芳基或3-5元碳环基取代，其中任意C1-C3烷基、6-10元芳基、5-6元杂芳基或3-5元碳环基任选地被卤素、羟基、氰基或C1-C3烷基取代；
Rm和Rn独立地选自氢、3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10元杂芳基和C1-C6烷基，其中Rm和Rn的任意3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10元杂芳基和C1-C6烷基任选地被Rw取代；或Rm和Rn与它们所连接的原子一起形成3-8元杂环基，其任选地被Rw取代；
Rr和Rs各自独立地选自氢、3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10元杂芳基和C1-C3烷基，其中Rr和Rs的任意3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10元杂芳基和C1-C3烷基任选地被Rv取代；或Rr和Rs与它们所连接的原子一起形成3-8元杂环基或5-10元杂芳基，该3-8元杂环基和5-10元杂芳基任选地被Rv取代；
Rt和Ru独立地选自氢、3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10元杂芳基和C1-C3烷基，其中Rt和Ru的任意3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10元杂芳基和C1-C3烷基任选地被卤素、羟基、氰基或氧代取代；或Rt和Ru与它们所连接的原子一起形成3-6元杂环基，其任选地取代有卤素、羟基、氰基或氧代，或任选地被卤素、羟基、氰基或氧代取代的C1-C6烷基；
Rv各自独立地选自卤素、羟基、氰基、氧代、6-10元芳基、5-10元杂芳基、C1-C6烷基、C2-C3烯基、C2-C3炔基、3-6元碳环基、3-6元杂环基、(6-10元芳基)-O-、(5-10元杂芳基)-O-、(3-6元碳环基)-O-、(3-6元杂环基)-O-和C1-C6烷氧基，其中Rv的任意6-10元芳基、5-10元杂芳基、C1-C6烷基、3-6元碳环基、3-6元杂环基、(6-10元芳基)-O-、(5-10元杂芳基)-O-、(3-6元碳环基)-O-、(3-6元杂环基)-O-和C1-C6烷氧基任选地被卤素、羟基、氰基、C1-C6烷基、C2-C3炔基、氧代、3-6元碳环、3-6元杂环基、C1-C6烷氧基、5-10元杂芳基或6-10元芳基取代，它们各自任选地被卤素、羟基、氰基、氧代、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基取代；
Rw各自独立地选自卤素、羟基、氰基、氧代、6-10元芳基、5-10元杂芳基、C1-C6烷基、3-6元碳环基、3-6元杂环基和C1-C6烷氧基，其中Rw的任意6-10元芳基、5-10元杂芳基、C1-C6烷基、3-6元碳环基、3-6元杂环基和C1-C6烷氧基任选地被卤素、羟基、氰基、C1-C6烷基、氧代、3-6元碳环基、3-6元杂环基、C1-C6烷氧基、5-10元杂芳基或6-10元芳基取代，它们各自任选地被卤素、羟基、氰基、氧代、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基取代；且
Rx各自独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、氧代、-ORm、-SRm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、-NRmC(O)Rn、-S(O)1-2Rm、-NRmS(O)1-2Rn、-S(O)1-2NRmRn、3-10元碳环基、3-15元杂环基、6-10元芳基和5-15元杂芳基，其中任意3-10元碳环基、3-15元杂环基、6-10元芳基和5-15元杂芳基任选地被取代有卤素、羟基、氰基、硝基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-ORm、-SRm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、-NRmC(O)Rn、-S(O)1-2Rm、-NRmS(O)1-2Rn、-S(O)1-2NRmRn、C1-C6烷基、氧代、3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元芳基或5-10元杂芳基，其中任意C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元芳基和5-10元杂芳基任选地取代有卤素、羟基、氰基、氧代、-ORm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、3-6元碳环基、6-10元芳基，或任选地被卤素、羟基、氰基、氧代或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基。
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1和R1a与它们所连接的原子一起形成3-10元碳环，其任选地被Ra取代且任选地被Rb取代；或R1和R1a与它们所连接的原子一起形成3-10元杂环，其任选地被Rc取代且任选地被Rd取代；
R2是–NReRf；
R3是–CH3或–CN；
Ra是–NRrRs；
Rb各自独立地选自卤素、氰基、羟基、氧代、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-SH和-SCH3，其中任意C1-C6烷基和C1-C6烷氧基任选地被卤素、氰基、羟基、氧代、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-SH或-SCH3取代，其中任意C1-3烷基和C1-3烷氧基任选地被卤素、羟基、氰基或氧代取代；
Rc是-ORm、-SRm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、-NRmC(O)Rn、-S(O)1-2Rm、-NRmS(O)1-2Rn、-S(O)1-2NRmRn、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元芳基或5-10元杂芳基，其中Rc的任意C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选地被Rx取代；
Rd各自独立地选自卤素、氰基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基，其中任意C1-C6烷基和C1-C6烷氧基任选地被卤素、羟基、氰基或氧代取代；
Re是H或C1-C4烷基；
Rf是–C(＝O)-Rg，其中Rg是H、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-NRtRu，或3-10元碳环基，所述3-10元碳环基任选地被卤素、羟基、氰基、氧代、C1-C3烷基或3-5元碳环基取代；
Rm和Rn独立地选自氢、3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10元杂芳基和C1-C6烷基，其中Rm和Rn的任意3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10元杂芳基和C1-C6烷基任选地被Rw取代；或Rm和Rn与它们所连接的原子一起形成3-8元杂环基，其任选地被Rw取代；
Rr和Rs各自独立地选自氢、3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10元杂芳基和C1-C3烷基，其中Rr和Rs的任意3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10元杂芳基和C1-C3烷基任选地被Rv取代；或Rr和Rs与它们所连接的原子一起形成3-8元杂环基或5-10元杂芳基，该3-8元杂环基和5-10元杂芳基任选地被Rv取代；
Rt和Ru独立地选自氢、3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10元杂芳基和C1-C3烷基，其中Rt和Ru的任意3-6元杂环基、3-6元碳环基、6-10元芳基、5-10元杂芳基和C1-C3烷基任选地被卤素、羟基、氰基或氧代取代；或Rt和Ru与它们所连接的原子一起形成3-6元杂环基，任选地取代有卤素、羟基、氰基或氧代，或任选地被卤素、羟基、氰基或氧代取代的C1-C6烷基；
Rv各自独立地选自卤素、羟基、氰基、氧代、6-10元芳基、5-10元杂芳基、C1-C6烷基、3-6元碳环基、3-6元杂环基和C1-C6烷氧基，其中Rv的任意6-10元芳基、5-10元杂芳基、C1-C6烷基、3-6元碳环基、3-6元杂环基和C1-C6烷氧基任选地被卤素、羟基、氰基、C1-C6烷基、氧代、3-6元碳环、3-6元杂环基、C1-C6烷氧基、5-10元杂芳基或6-10元芳基取代，它们各自任选地被卤素、羟基、氰基、氧代、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基取代；
Rw各自独立地选自卤素、羟基、氰基、氧代、6-10元芳基、5-10元杂芳基、C1-C6烷基、3-6元碳环基、3-6元杂环基和C1-C6烷氧基，其中Rw的任意6-10元芳基、5-10元杂芳基、C1-C6烷基、3-6元碳环基、3-6元杂环基和C1-C6烷氧基任选地被卤素、羟基、氰基、C1-C6烷基、氧代、3-6元碳环基、3-6元杂环基、C1-C6烷氧基、5-10元杂芳基或6-10元芳基取代，它们各自任选地被卤素、羟基、氰基、氧代、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基取代；且
Rx各自独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、氧代、-ORm、-SRm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、-NRmC(O)Rn、-S(O)1-2Rm、-NRmS(O)1-2Rn、-S(O)1-2NRmRn、3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元芳基和5-10元杂芳基，其中任意3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元芳基和5-10元杂芳基任选地被卤素、羟基、氰基、硝基、C2-C3炔基、-ORm、-SRm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、-NRmC(O)Rn、-S(O)1-2Rm、-NRmS(O)1-2Rn、-S(O)1-2NRmRn、C1-C6烷基、氧代、3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元芳基或5-10元杂芳基取代，其中任意C1-C6烷基、C2-C3炔基、3-10元碳环基、3-10元杂环基、6-10元芳基和5-10元杂芳基任选地取代有卤素、羟基、氰基、氧代、-ORm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn、3-6元碳环基、6-10元芳基，或C1-C6烷基，所述C1-C6烷基任选地被卤素、羟基、氰基、氧代或C1-C6烷氧基取代。
3.权利要求1的化合物，其中R3是–CH3。
4.权利要求1的化合物，其中R3是–CN。
5.权利要求1的化合物，其为式(Ia)的化合物：
或其药学上可接受的盐。
6.权利要求1的化合物，其为式(Ib)的化合物：
或其药学上可接受的盐。
7.权利要求1的化合物，其为式(Ic)的化合物：
或其药学上可接受的盐。
8.权利要求1的化合物，其是式(Id)化合物：
或其药学上可接受的盐。
9.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自：
10.权利要求9的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自：
11.权利要求10的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是环丙基羰基氨基。
12.权利要求1、3、4和9-11任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中基团
选自：
13.权利要求1-4和9-11任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中基团
选自：
14.权利要求1、3、4和9-11任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中基团
选自：
15.权利要求1-4和9-11任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中基团
选自：
16.权利要求1、3、4和9-11任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中基团
选自：
17.权利要求1-4和9-11任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中基团
选自：
18.权利要求1、3、4、5、7和9-11任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中Ra选自：
19.权利要求1-5、7和9-11任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中Ra选自：
20.权利要求1-4、6和8-11任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
Rc是被Rx取代的C1-C6烷基；且
Rx选自3-10元碳环基、3-10元杂环、6-10元芳基和5-10元杂芳基，其中任意的3-10元碳环基、3-10元杂环、6-10元芳基和5-10元杂芳基任选地被3-10元碳环基、3-10元杂环、6-10元芳基或5-10元杂芳基取代，其中任意3-10元碳环基、3-10元杂环、6-10元芳基和5-10元杂芳基任选地取代有卤素、羟基、氰基、氧代、-ORm、-NRmRn、-C(O)Rm、-C(O)ORm、-C(O)NRmRn，或任选地被卤素、羟基、氰基、氧代或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基。
21.权利要求1、3、4、6和8-11任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中Rc选自：
22.权利要求1-4、6和8-11任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中Rc选自：
23.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，选自：
及其药学上可接受的盐。
24.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，选自：
及其药学上可接受的盐。
25.权利要求1-4和9-11任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中基团
选自：
26.权利要求1-5、7和9-11任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中Ra选自：
27.权利要求1-4、6和8-11任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中Rc选自：
28.药物组合物，包含权利要求1-27任一项的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
29.权利要求1-27任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗炎性疾病的药剂中的用途。
30.权利要求29的用途，其中所述炎性疾病是哮喘。
31.治疗有效量的权利要求1-27任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防、治疗患者的响应于抑制Janus激酶活性的疾病或病症或减轻其严重程度的药物中的用途。
32.权利要求31的用途，其中所述疾病或病症是哮喘。
33.权利要求31的用途，其中所述Janus激酶是JAK1。
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