CN109456386A - 一种提取肉糜中界面蛋白的方法 - Google Patents

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杨慧娟
陈黎洪
唐宏刚
肖朝耿
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Abstract

本发明公开了一种提取肉糜中界面蛋白的方法，包括以下步骤：将磷酸缓冲液加入肉糜中并搅拌混匀，得到一级缓冲混合液，对一级缓冲混合液进行离心处理以收集上层的乳化层，得到一级乳化层，用去离子水对一级乳化层进行多次离心清洗，得到终级乳化层，向终级乳化层中加入Trix缓冲液并搅拌混匀，得到二级缓冲混合液，将二级缓冲混合液在‑20℃下冻存12h，并在4℃下解冻，如此重复操作多次，进而得到终级缓冲混合液，将终级缓冲混合液进行离心处理以收集蛋白质溶液层，得到界面蛋白。本发明通过分析界面蛋白的功能性质，进而能为肉糜制品品质分析提供可靠的技术支撑。

Description

一种提取肉糜中界面蛋白的方法
技术领域
本发明属于蛋白质提取技术领域，具体涉及一种提取肉糜中界面蛋白的方法。
背景技术
蛋白质、脂类物质和水作为肉糜体系中的重要组成部分，其分子的界面特性及分子间的相互作用对乳化体系-肉糜的乳化稳定性与经加热形成的凝胶体系-乳化肠等肉糜制品成品的品质有决定性的影响。
目前关于肉糜制品乳化稳定性机制主要存在两种学说，即水包油型乳化学说和蛋白质基质物理镶嵌固定学说。蛋白质基质物理镶嵌固定学说的研究侧重于对蛋白质分子的研究，即强调蛋白质基质的形成利于脂肪和水发生物理镶嵌；而水包油型乳化学说则强调界面蛋白膜的形成对整个乳化性能的影响。界面蛋白膜的形成不仅在肉糜制品生产中十分重要，而且在许多食品中都占有重要的位置，例如冰淇淋、搅打植脂鲜奶油、咖啡伴侣及一些婴儿营养品等都是界面蛋白膜研究的领域，而界面蛋白膜的形成也会受到很多因素的影响，包括各类蛋白质的分子特性及交互作用、外来乳化剂的作用、原料的添加顺序等。蛋白质分子在油-水界面上首先发生延伸，然后是蛋白质分子的结构打开，随后会进行分子重排。
基于全面了解界面蛋白膜及膜外蛋白质分子在界面上变化情况的重要性，及界面蛋白膜的形成情况对肉糜制品的生产改良等具有的重要实际意义，提取肉糜体系中的界面蛋白是系统研究其功能性质的重要步骤。
发明内容
本发明提供一种提取肉糜中界面蛋白的方法，通过分析本方法制得的界面蛋白的功能性质，进而能为肉糜制品品质分析提供可靠的技术支撑。目前，暂无一种成熟的提取界面蛋白的方法，本发明通过提取界面蛋白到分析界面蛋白的性质，进而提出了一种相对健全的提取界面蛋白的方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种提取肉糜中界面蛋白的方法，包括以下步骤：
(1)将磷酸缓冲液加入肉糜中并搅拌混匀，得到一级缓冲混合液；
(2)将步骤(1)中的一级缓冲混合液进行离心处理，得到上层的乳化层、中层的肌肉蛋白质溶液层与下层的沉淀物层，并收集上层的乳化层，得到一级乳化层；
(3)向步骤(2)中的一级乳化层中加入去离子水并搅拌混匀，得到一级清洗混合液，并将一级清洗混合液进行离心处理，得到上层的乳化层与下层的去离子水层，并收集上层的乳化层，得到二级乳化层；
(4)二级乳化层重复步骤(3)处理后得到三级乳化层，依此类推，重复步骤(3)多次，进而得到终级乳化层；
(5)向步骤(4)中得到的终级乳化层中加入Trix缓冲液并搅拌混匀，得到二级缓冲混合液，将二级缓冲混合液在-20℃下冻存12h，并在4℃下解冻，再在-20℃下冻存12h，并在4℃下解冻，如此重复操作多次冻存并解冻过程，进而得到终级缓冲混合液；
(6)将步骤(5)中的终级缓冲混合液进行离心处理，得到上层的脂肪层与下层的蛋白质溶液层，然后收集下层的蛋白质溶液层，得到界面蛋白。
进一步地，步骤(1)中，磷酸缓冲液的浓度为0.2mol·L-1，磷酸缓冲液的pH值为6.5。
进一步地，步骤(1)中，肉糜与磷酸缓冲液的混合份数比例为1:2.9-1:3.1，其中肉糜的份数为重量份数，且肉糜的单位为g，磷酸缓冲液的份数为体积份数，且磷酸缓冲液的单位为mL，并且搅拌的时间为55-65s。
进一步地，步骤(2)中，离心处理的条件为：离心力10000×g，离心时间18-22min。
进一步地，步骤(3)中，一级乳化层与去离子水的混合份数比例为1:2.9-1:3.1，其中一级乳化层的份数为重量份数，且一级乳化层的单位为g，去离子水的份数为体积份数，且去离子水的单位为mL。
进一步地，步骤(3)中，离心处理的条件为：离心力10000×g，离心时间18-22min，离心温度4℃。
进一步地，步骤(5)中，终级乳化层与Trix缓冲液的混合份数比例为1:3.9-1:4.1，其中终级乳化层的份数为重量份数，且终级乳化层的单位为g，Trix缓冲液的份数为体积份数，且Trix缓冲液的单位为mL，并且Trix缓冲液中含有1wt％的SDS，而且重复操作三次冻存与解冻工艺。
进一步地，步骤(6)中，离心处理的条件为：离心力10000×g，离心时间8-12min。
进一步地，步骤(1)中，
肉糜是由下列重量份配比的原料配制而成：瘦肉1490-1510份、肥肉470-490份、冰水400-415份、食盐20-30份；
肉糜的制备方法包括以下步骤：
(1.1)按所述配比量分别称取各原料，并将称得的各原料分别盛装在对应容器中；
(1.2)剔除步骤(1.1)中称得的瘦肉中的结缔组织，得到精制瘦肉；
(1.3)将步骤(1.1)中称得的肥肉与步骤(1.2)中的精制瘦肉分别用绞肉机绞碎，得到碎肥肉与碎瘦肉；
(1.4)将步骤(1.3)中的碎瘦肉于1490-1510rpm下斩拌25-35s，得到一级斩拌碎肉，然后将步骤(1.1)中称得的食盐和2/3的冰水加入一级斩拌碎肉中，得到一级碎肉混合物，再将一级碎肉混合物于2990-3010rpm下斩拌55-65s后暂停115-125s，得到二级斩拌碎肉，再将步骤(1.3)中的碎肥肉与步骤(1.1)中称得的1/3的冰水加入二级斩拌碎肉中，得到二级碎肉混合物，然后将二级碎肉混合物于1490-1510rpm下斩拌55-65s，得到三级斩拌碎肉，再将三级斩拌碎肉于2990-3010rpm下斩拌60-90s，进而得到肉糜，并将肉糜灌入肠衣中以备用，且该步骤中斩拌温度控制于9-11℃。
进一步地，肉糜是由下列重量份配比的原料配制而成：瘦肉1500份、肥肉480份、冰水408份、食盐24份。
图1是通过激光共聚焦显微镜(CLSM)观察终极乳化层中界面蛋白膜形态构象的变化情况，图1中蛋白质相为蓝色，由图可知，一方面可清晰观察到吸附在脂肪小液滴外的界面蛋白质，另一方面可观察到界面蛋白质间的聚集现象。
蛋白质-蛋白质间的相互作用会受到化学作用力等较多因素的影响，会使蛋白质间发生不同程度的絮凝和聚集，直接影响加热后形成的三维网络凝胶结构的致密性及感官特性，因此，蛋白质粒径的变化对于进一步了解蛋白质发生解聚、聚集程度有积极意义。
界面蛋白的功能性质与肉糜制品品质紧密相关，因此关注界面蛋白膜的功能性质是深入研究肉糜制品品质的重要突破，表1为对本发明提取到的界面蛋白进行的相关性分析，表1的相关性分析表明界面蛋白膜上功能性质的变化与界面蛋白所处的状态有密切的关系，由表可知，蛋白质的粒径与蛋白质二级结构中的β-折叠和β-转角呈极显著正相关(P<0.01)，而蛋白质的粒径与α-螺旋和无规则卷曲呈极显著负相关(P<0.01)，此外，蛋白质的粒径与蛋白质高级结构中的氢键、疏水相互作用以及二硫键呈极显著负相关(P<0.01)，蛋白质的溶解度与蛋白质二级结构中的β-折叠呈极显著负相关(P<0.01)，蛋白质的溶解度与蛋白质二级结构中的β-转角呈显著负相关(P<0.05)，而蛋白质的溶解度与α-螺旋呈显著正相关(P<0.05)，蛋白质的溶解度与无规则卷曲呈极显著正相关(P<0.01)，此外，蛋白质的溶解度与蛋白质高级结构中的氢键和二硫键呈极显著正相关(P<0.01)，而蛋白质的溶解度与疏水相互作用呈显著正相关(P<0.05)，从表中还可知，蛋白质高级结构中的二硫键与总巯基呈显著负相关(P<0.05)，而蛋白质高级结构中的二硫键与活性巯基呈显著正相关(P<0.05)。
因此，建立一种提取界面蛋白的方法对系统评价肉糜制品品质及界面蛋白膜功能性质具有重要意义。
表1界面蛋白各指标间的相关性分析
注：*表示显著相关性，P<0.05；**表示极显著相关性，P<0.01。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：
本发明从肉糜中提取出了界面蛋白，这样可以系统研究分析界面蛋白膜的功能性质，进而能系统评价肉糜制品的品质，因而能为肉糜制品品质分析提供可靠的技术支撑。
附图说明
图1为终极乳化层中界面蛋白膜的分布情况。(图中的A、B分别为终极乳化层不同视野下界面蛋白膜的分布情况)
具体实施方式
实施例1
一种提取肉糜中界面蛋白的方法，包括以下步骤：
(1)将580mL磷酸缓冲液加入200g肉糜中并搅拌55s以混匀，得到一级缓冲混合液，其中磷酸缓冲液的浓度为0.2mol·L-1，磷酸缓冲液的pH值为6.5；
(2)将步骤(1)中的一级缓冲混合液在10000×g的离心力下离心18min，得到上层的乳化层、中层的肌肉蛋白质溶液层与下层的沉淀物层，并收集上层的乳化层，得到一级乳化层；
(3)向步骤(2)中的一级乳化层中加入去离子水并搅拌混匀，得到一级清洗混合液，并将一级清洗混合液在10000×g的离心力下离心18min，且离心温度4℃，得到上层的乳化层与下层的去离子水层，并收集上层的乳化层，得到二级乳化层，其中一级乳化层与去离子水的混合份数比例为1:2.9，其中一级乳化层的份数为重量份数，且一级乳化层的单位为g，去离子水的份数为体积份数，且去离子水的单位为mL；
(4)二级乳化层重复步骤(3)处理后得到三级乳化层，依此类推，重复步骤(3)三次，进而得到终级乳化层；
(5)向步骤(4)中得到的终级乳化层中加入Trix缓冲液并搅拌混匀，得到二级缓冲混合液，将二级缓冲混合液在-20℃下冻存12h，并在4℃下解冻，再在-20℃下冻存12h，并在4℃下解冻，如此重复操作三次冻存并解冻过程，进而得到终级缓冲混合液，其中，终级乳化层与Trix缓冲液的混合份数比例为1:3.9，其中终级乳化层的份数为重量份数，且终级乳化层的单位为g，Trix缓冲液的份数为体积份数，且Trix缓冲液的单位为mL，并且Trix缓冲液中含有1wt％的SDS；
(6)将步骤(5)中的终级缓冲混合液在10000×g的离心力下离心8min，得到上层的脂肪层与下层的蛋白质溶液层，然后收集下层的蛋白质溶液层，得到界面蛋白。
其中，步骤(1)中，
肉糜是由下列重量份配比的原料配制而成：瘦肉1490份、肥肉470份、冰水400份、食盐20份；
肉糜的制备方法包括以下步骤：
(1.1)按所述配比量分别称取各原料，并将称得的各原料分别盛装在对应容器中；
(1.2)剔除步骤(1.1)中称得的瘦肉中的结缔组织，得到精制瘦肉；
(1.3)将步骤(1.1)中称得的肥肉与步骤(1.2)中的精制瘦肉分别用绞肉机绞碎，得到碎肥肉与碎瘦肉；
(1.4)将步骤(1.3)中的碎瘦肉于1490rpm下斩拌25s，得到一级斩拌碎肉，然后将步骤(1.1)中称得的食盐和2/3的冰水加入一级斩拌碎肉中，得到一级碎肉混合物，再将一级碎肉混合物于2990rpm下斩拌55s后暂停115s，得到二级斩拌碎肉，再将步骤(1.3)中的碎肥肉与步骤(1.1)中称得的1/3的冰水加入二级斩拌碎肉中，得到二级碎肉混合物，然后将二级碎肉混合物于1490rpm下斩拌55s，得到三级斩拌碎肉，再将三级斩拌碎肉于2990rpm下斩拌60s，进而得到肉糜，并将肉糜灌入肠衣中以备用，且该步骤中斩拌温度控制于9℃。
实施例2
一种提取肉糜中界面蛋白的方法，包括以下步骤：
(1)将600mL磷酸缓冲液加入200g肉糜中并搅拌60s以混匀，得到一级缓冲混合液，其中磷酸缓冲液的浓度为0.2mol·L-1，磷酸缓冲液的pH值为6.5；
(2)将步骤(1)中的一级缓冲混合液在10000×g的离心力下离心20min，得到上层的乳化层、中层的肌肉蛋白质溶液层与下层的沉淀物层，并收集上层的乳化层，得到一级乳化层；
(3)向步骤(2)中的一级乳化层中加入去离子水并搅拌混匀，得到一级清洗混合液，并将一级清洗混合液在10000×g的离心力下离心20min，且离心温度4℃，得到上层的乳化层与下层的去离子水层，并收集上层的乳化层，得到二级乳化层，其中一级乳化层与去离子水的混合份数比例为1:3，其中一级乳化层的份数为重量份数，且一级乳化层的单位为g，去离子水的份数为体积份数，且去离子水的单位为mL；
(4)二级乳化层重复步骤(3)处理后得到三级乳化层，依此类推，重复步骤(3)三次，进而得到终级乳化层；
(5)向步骤(4)中得到的终级乳化层中加入Trix缓冲液并搅拌混匀，得到二级缓冲混合液，将二级缓冲混合液在-20℃下冻存12h，并在4℃下解冻，再在-20℃下冻存12h，并在4℃下解冻，如此重复操作三次冻存并解冻过程，进而得到终级缓冲混合液，其中，终级乳化层与Trix缓冲液的混合份数比例为1:4，其中终级乳化层的份数为重量份数，且终级乳化层的单位为g，Trix缓冲液的份数为体积份数，且Trix缓冲液的单位为mL，并且Trix缓冲液中含有1wt％的SDS；
(6)将步骤(5)中的终级缓冲混合液在10000×g的离心力下离心10min，得到上层的脂肪层与下层的蛋白质溶液层，然后收集下层的蛋白质溶液层，得到界面蛋白。
其中，步骤(1)中，
肉糜是由下列重量份配比的原料配制而成：瘦肉1500份、肥肉480份、冰水408份、食盐24份；
肉糜的制备方法包括以下步骤：
(1.1)按所述配比量分别称取各原料，并将称得的各原料分别盛装在对应容器中；
(1.2)剔除步骤(1.1)中称得的瘦肉中的结缔组织，得到精制瘦肉；
(1.3)将步骤(1.1)中称得的肥肉与步骤(1.2)中的精制瘦肉分别用绞肉机绞碎，得到碎肥肉与碎瘦肉；
(1.4)将步骤(1.3)中的碎瘦肉于1500rpm下斩拌30s，得到一级斩拌碎肉，然后将步骤(1.1)中称得的食盐和2/3的冰水加入一级斩拌碎肉中，得到一级碎肉混合物，再将一级碎肉混合物于3000rpm下斩拌60s后暂停120s，得到二级斩拌碎肉，再将步骤(1.3)中的碎肥肉与步骤(1.1)中称得的1/3的冰水加入二级斩拌碎肉中，得到二级碎肉混合物，然后将二级碎肉混合物于1500rpm下斩拌60s，得到三级斩拌碎肉，再将三级斩拌碎肉于3000rpm下斩拌75s，进而得到肉糜，并将肉糜灌入肠衣中以备用，且该步骤中斩拌温度控制于10℃。
实施例3
一种提取肉糜中界面蛋白的方法，包括以下步骤：
(1)将620mL磷酸缓冲液加入200g肉糜中并搅拌65s以混匀，得到一级缓冲混合液，其中磷酸缓冲液的浓度为0.2mol·L-1，磷酸缓冲液的pH值为6.5；
(2)将步骤(1)中的一级缓冲混合液在10000×g的离心力下离心22min，得到上层的乳化层、中层的肌肉蛋白质溶液层与下层的沉淀物层，并收集上层的乳化层，得到一级乳化层；
(3)向步骤(2)中的一级乳化层中加入去离子水并搅拌混匀，得到一级清洗混合液，并将一级清洗混合液在10000×g的离心力下离心22min，且离心温度4℃，得到上层的乳化层与下层的去离子水层，并收集上层的乳化层，得到二级乳化层，其中一级乳化层与去离子水的混合份数比例为1:3.1，其中一级乳化层的份数为重量份数，且一级乳化层的单位为g，去离子水的份数为体积份数，且去离子水的单位为mL；
(4)二级乳化层重复步骤(3)处理后得到三级乳化层，依此类推，重复步骤(3)三次，进而得到终级乳化层；
(5)向步骤(4)中得到的终级乳化层中加入Trix缓冲液并搅拌混匀，得到二级缓冲混合液，将二级缓冲混合液在-20℃下冻存12h，并在4℃下解冻，再在-20℃下冻存12h，并在4℃下解冻，如此重复操作三次冻存并解冻过程，进而得到终级缓冲混合液，其中，终级乳化层与Trix缓冲液的混合份数比例为1:4.1，其中终级乳化层的份数为重量份数，且终级乳化层的单位为g，Trix缓冲液的份数为体积份数，且Trix缓冲液的单位为mL，并且Trix缓冲液中含有1wt％的SDS；
(6)将步骤(5)中的终级缓冲混合液在10000×g的离心力下离心12min，得到上层的脂肪层与下层的蛋白质溶液层，然后收集下层的蛋白质溶液层，得到界面蛋白。
其中，步骤(1)中，
肉糜是由下列重量份配比的原料配制而成：瘦肉1510份、肥肉490份、冰水415份、食盐30份；
肉糜的制备方法包括以下步骤：
(1.1)按所述配比量分别称取各原料，并将称得的各原料分别盛装在对应容器中；
(1.2)剔除步骤(1)中称得的瘦肉中的结缔组织，得到精制瘦肉；
(1.3)将步骤(1)中称得的肥肉与步骤(1.2)中的精制瘦肉分别用绞肉机绞碎，得到碎肥肉与碎瘦肉；
(1.4)将步骤(1.3)中的碎瘦肉于1510rpm下斩拌35s，得到一级斩拌碎肉，然后将步骤(1.1)中称得的食盐和2/3的冰水加入一级斩拌碎肉中，得到一级碎肉混合物，再将一级碎肉混合物于3010rpm下斩拌65s后暂停125s，得到二级斩拌碎肉，再将步骤(1.3)中的碎肥肉与步骤(1.1)中称得的1/3的冰水加入二级斩拌碎肉中，得到二级碎肉混合物，然后将二级碎肉混合物于1510rpm下斩拌65s，得到三级斩拌碎肉，再将三级斩拌碎肉于3010rpm下斩拌90s，进而得到肉糜，并将肉糜灌入肠衣中以备用，且该步骤中斩拌温度控制于11℃。

Claims (10)

1.一种提取肉糜中界面蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将磷酸缓冲液加入肉糜中并搅拌混匀，得到一级缓冲混合液；
（2）将步骤（1）中的一级缓冲混合液进行离心处理，得到上层的乳化层、中层的肌肉蛋白质溶液层与下层的沉淀物层，并收集上层的乳化层，得到一级乳化层；
（3）向步骤（2）中的一级乳化层中加入去离子水并搅拌混匀，得到一级清洗混合液，并将一级清洗混合液进行离心处理，得到上层的乳化层与下层的去离子水层，并收集上层的乳化层，得到二级乳化层；
（4）二级乳化层重复步骤（3）处理后得到三级乳化层，依此类推，重复步骤（3）多次，进而得到终级乳化层；
（5）向步骤（4）中得到的终级乳化层中加入Trix缓冲液并搅拌混匀，得到二级缓冲混合液，将二级缓冲混合液在-20℃下冻存12h，并在4℃下解冻，再在-20℃下冻存12h，并在4℃下解冻，如此重复操作多次冻存并解冻过程，进而得到终级缓冲混合液；
（6）将步骤（5）中的终级缓冲混合液进行离心处理，得到上层的脂肪层与下层的蛋白质溶液层，然后收集下层的蛋白质溶液层，得到界面蛋白。
2.根据权利要求1所述的提取肉糜中界面蛋白的方法，其特征在于步骤（1）中，
肉糜是由下列重量份配比的原料配制而成：瘦肉1490-1510份、肥肉470-490份、冰水400-415份、食盐20-30份；
肉糜的制备方法包括以下步骤：
（1.1）按所述配比量分别称取各原料，并将称得的各原料分别盛装在对应容器中；
（1.2）剔除步骤（1.1）中称得的瘦肉中的结缔组织，得到精制瘦肉；
（1.3）将步骤（1.1）中称得的肥肉与步骤（1.2）中的精制瘦肉分别用绞肉机绞碎，得到碎肥肉与碎瘦肉；
（1.4）将步骤（1.3）中的碎瘦肉于1490-1510rpm下斩拌25-35s，得到一级斩拌碎肉，然后将步骤（1.1）中称得的食盐和2/3的冰水加入一级斩拌碎肉中，得到一级碎肉混合物，再将一级碎肉混合物于2990-3010 rpm下斩拌55-65s后暂停115-125s，得到二级斩拌碎肉，再将步骤（1.3）中的碎肥肉与步骤（1.1）中称得的1/3的冰水加入二级斩拌碎肉中，得到二级碎肉混合物，然后将二级碎肉混合物于1490-1510rpm下斩拌55-65s，得到三级斩拌碎肉，再将三级斩拌碎肉于2990-3010rpm下斩拌60-90s，进而得到肉糜，并将肉糜灌入肠衣中以备用，且该步骤中斩拌温度控制于9-11℃。
3.根据权利要求1所述的提取肉糜中界面蛋白的方法，其特征在于步骤（1）中，磷酸缓冲液的浓度为0.2 mol·L-1，磷酸缓冲液的pH值为6.5。
4.根据权利要求1所述的提取肉糜中界面蛋白的方法，其特征在于步骤（1）中，肉糜与磷酸缓冲液的混合份数比例为1:2.9-1:3.1，其中肉糜的份数为重量份数，且肉糜的单位为g，磷酸缓冲液的份数为体积份数，且磷酸缓冲液的单位为mL，并且搅拌的时间为55-65s。
5.根据权利要求1所述的提取肉糜中界面蛋白的方法，其特征在于步骤（2）中，离心处理的条件为：离心力10000×g，离心时间18-22min。
6.根据权利要求1所述的提取肉糜中界面蛋白的方法，其特征在于步骤（3）中，一级乳化层与去离子水的混合份数比例为1:2.9-1:3.1，其中一级乳化层的份数为重量份数，且一级乳化层的单位为g，去离子水的份数为体积份数，且去离子水的单位为mL。
7.根据权利要求1所述的提取肉糜中界面蛋白的方法，其特征在于步骤（3）中，离心处理的条件为：离心力10000×g，离心时间18-22min，离心温度4℃。
8.根据权利要求1所述的提取肉糜中界面蛋白的方法，其特征在于步骤（5）中，终级乳化层与Trix缓冲液的混合份数比例为1:3.9-1:4.1，其中终级乳化层的份数为重量份数，且终级乳化层的单位为g，Trix缓冲液的份数为体积份数，且Trix缓冲液的单位为mL，并且Trix缓冲液中含有1wt%的SDS，而且重复操作三次冻存与解冻工艺。
9.根据权利要求1所述的提取肉糜中界面蛋白的方法，其特征在于步骤（6）中，离心处理的条件为：离心力10000×g，离心时间8-12min。
10.根据权利要求2所述的提取肉糜中界面蛋白的方法，其特征在于，肉糜是由下列重量份配比的原料配制而成：瘦肉1500份、肥肉480份、冰水408份、食盐24份。
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