CN109453183A - 香蜂草苷的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了香蜂草苷的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂及其应用，属于天然药物领域，涉及香蜂草苷的医药新用途，具体涉及香蜂草苷制备肿瘤多药耐药逆转剂、联合抗肿瘤药物应用于多药耐药性肿瘤的新用途。本发明香蜂草苷制备方法简便，与抗肿瘤药物联合应用于临床，提高化疗的疗效，具有广泛的应用前景。

Description

香蜂草苷的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂及其 应用

技术领域

本发明涉及一种药物制剂及其应用，具体是香蜂草苷制备肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂及其应用。

背景技术

肿瘤是危害人类健康的重大疾病之一，化疗是当前消除肿瘤细胞最重要的一个手段，而多药耐药性(multidrug resistance，MDR)又是目前导致肿瘤化疗失败的最主要原因，即肿瘤细胞对某一种抗肿瘤药物产生耐受性的同时，对其他从未接触过的、结构和作用机制完全不相同的抗肿瘤药物也产生交叉耐药性的现象。据报道称，全世界每年有超过六百万人死于肿瘤，每年的一千万新发病例中，超过半数发生在发展中国家。尽管肿瘤治疗的研究不断进展，但是仅有50％不到的肿瘤对化疗敏感，超过50％的肿瘤对化疗药物迅速产生耐药，一旦耐药产生，医生将束手无策。肿瘤的化疗过程中所产生的MDR已成为肿瘤治疗失败最常见而又难以解决的问题。

肿瘤MDR形成的机制是一种多因素、多基因和多步骤综合作用的结果，主要包括药物外排转运体表达增加或活性增强，DNA拓扑异构酶的抑制或谷胱甘肽转移酶的提高、抗凋亡通路的激活或抗凋亡基因的过表达等。传统MDR的经典化学逆转剂，如维拉帕米等，在临床使用中出现较大的毒副作用，因而限制了其临床应用。因此，寻找高效、低毒的逆转剂在抗肿瘤药物开发中有重要的意义。

中医药是以整体观为指导，辨证论治系统治疗，通过多靶点整合起效，在疾病治疗方面具有独特优势。但是普通中药提取物成分不清，给药剂量大，靶向性不强，而中药单体成分具有高效低毒、多靶点、特异性强等多重作用，已逐渐获得了广大研究者们的青睐。传统的中药单体为逆转肿瘤MDR提供了新的治疗途径，因而，寻找中药来源的且结构明确的中药单体成分作为MDR逆转剂用于肿瘤细胞的耐药逆转及化疗增效和减毒增效己成为当前肿瘤化疗研究的热点。

现代药理研究表明香蜂草苷具有多种生物活性，例如抗氧化、抗炎、耐缺氧、胰岛细胞保护、提高机体修复能力等作用。但是香蜂草苷对于多药耐药性肿瘤细胞的耐药逆转作用尚未有报道。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，提供一种香蜂草苷在制备肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂中的应用。

为实现上述目的，本发明第一个方面提供了一种肿瘤多药耐药逆转剂，其技术方案是包括有含有治疗有效量的香蜂草苷。

进一步设置是该肿瘤为乳腺癌、肠道肿瘤、肝癌、宫颈癌、卵巢癌、胃癌、脑部肿瘤、胆囊癌或血液系统肿瘤。

进一步设置是该逆转剂根据制剂需要，加入相应药用辅料，该逆转剂的制剂形式选自口服溶液剂、注射剂、片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊和糖浆。

本发明的第二个方面还提供一种抗肿瘤药物增敏剂，其包括有含有治疗有效量的香蜂草苷。

进一步设置是该抗肿瘤药物是阿霉素、紫杉醇、顺铂、柔红霉素、表柔比星、长春瑞滨、长春新碱、依托泊苷或丝裂霉素。

进一步设置是该逆转剂根据制剂需要，加入相应药用辅料，该逆转剂的制剂形式选自口服溶液剂、注射剂、片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊和糖浆。

本发明上述肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂中的药用辅料一般也称为药学上可接受的载体，如本文所用，“药学上可接受的”的成分是适用于人和/或哺乳动物而无过度不良副反应(如毒性)的，即具有合理的效益/风险比的物质。术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的载体的充分说明。在组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、甘油和山梨醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如润滑剂、助流剂、润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质和稳定剂，如白蛋白等。

本文中所用“药用辅料”，具体可以选择例如：粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；稀释剂如淀粉、预胶化淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、甘露醇等，填充剂如淀粉、蔗糖等；湿润剂如甘油；崩解剂如羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮和干淀粉等；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如聚山梨酯、脂肪酸山梨坦和脂肪酸甘油酯等；着色剂如二氧化钛、日落黄、亚甲蓝、药用氧化铁红等；润滑剂如氢化植物油、滑石粉和聚乙二醇等。包衣材料如丙烯酸树脂、羟丙甲纤维素、聚维酮、纤维醋法酯等；另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。

另外，本发明所述的“含有治疗有效量”可以考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明人研究发现一种来源于中药的单体成分香蜂草苷具有有效逆转肿瘤细胞多药耐药和抗肿瘤药物增敏的功能。

香蜂草苷，分子式为C₂₈H₃₄O₁₄，其化学结构式如下

本发明提供的香蜂草苷能够逆转肿瘤细胞多药耐药性。可作为肿瘤化疗药物的增效剂，从而提高多药耐药性肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，提高化疗药物的杀癌细胞效应，应用前景广泛。本发明人通过下列实验证实了中药单体香蜂草苷具有逆转肿瘤耐药的作用，下面的实施例用来更详细地说明本发明。

具体实施方式

下文将详细描述本发明具体实施例。应当注意的是，下述实施例中描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的，它们可以被相互组合从而达到更好的技术效果。

实施例1

香蜂草苷逆转人乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADR对阿霉素耐药作用

取对数生长期的人乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADR，用含10％FBS的MEM培养液调整细胞浓度至5×10⁴个/mL，接种于96孔细胞培养板中，100uL/孔，置于含有5％CO²的37℃恒温培养箱中培养12h，然后在各孔中加入不同浓度香蜂草苷、不同浓度阿霉素、不同浓度阿霉素+低中高浓度香蜂草苷、不同浓度阿霉素+低中高浓度枸橘苷、不同浓度阿霉素+低中高浓度柚皮苷和不同浓度阿霉素+维拉帕米。加药后继续培养48小时后，在各孔中加入10μL的MTT溶液(5mg/mL)，继续培养4小时，吸弃培养液，在各孔中加入DMSO，经微量混合振荡器振荡10分钟后，全自动酶联免疫检测仪于570nm处测定吸光度值，计算抑制率和IC₅₀，计算逆转指数＝阿霉素IC₅₀/阿霉素联合其他成分IC₅₀。结果见表1。

表1香蜂草苷逆转人乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADR对阿霉素耐药作用

实施例2

香蜂草苷逆转人乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADR对紫杉醇耐药作用

取对数生长期的人乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADR用含10％FBS的MEM培养液调整细胞浓度至5×10⁴个/mL，接种于96孔细胞培养板中，100uL/孔，置于含有5％CO²的37℃恒温培养箱中培养12h，然后在各孔中加入不同浓度香蜂草苷、不同浓度紫杉醇、不同浓度紫杉醇+低中高浓度香蜂草苷、不同浓度紫杉醇+低中高浓度枸橘苷、不同浓度紫杉醇+低中高浓度柚皮苷和不同浓度紫杉醇+维拉帕米。加药后继续培养48小时后，在各孔中加入10μL的MTT溶液(5mg/mL)，继续培养4小时，吸弃培养液，在各孔中加入DMSO，经微量混合振荡器振荡10分钟后，全自动酶联免疫检测仪于570nm处测定吸光度值，计算抑制率和IC₅₀，计算逆转指数＝紫杉醇IC₅₀/紫杉醇联合其他成分IC₅₀。结果见表2。

表2香蜂草苷逆转人乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADR对紫杉醇耐药作用

实施例3

香蜂草苷逆转人乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADR对顺铂耐药作用

取对数生长期的人乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADR用含10％FBS的MEM培养液调整细胞浓度至5×10⁴个/mL，接种于96孔细胞培养板中，100uL/孔，置于含有5％CO²的37℃恒温培养箱中培养12h，然后在各孔中加入不同浓度香蜂草苷、不同浓度顺铂、不同浓度顺铂+低中高浓度香蜂草苷、不同浓度顺铂+低中高浓度枸橘苷、不同浓度顺铂+低中高浓度柚皮苷和不同浓度顺铂+维拉帕米。加药后继续培养48小时后，在各孔中加入10μL的MTT溶液(5mg/mL)，继续培养4小时，吸弃培养液，在各孔中加入DMSO，经微量混合振荡器振荡10分钟后，全自动酶联免疫检测仪于570nm处测定吸光度值，计算抑制率和IC₅₀，计算逆转指数＝顺铂IC₅₀/顺铂联合其他成分IC₅₀。结果见表3。

表3香蜂草苷逆转人乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADR对顺铂耐药作用

实施例4

香蜂草苷逆转人结肠癌多药耐药细胞株HCT-8/VCR对阿霉素耐药作用

取对数生长期的人结肠癌多药耐药细胞株HCT-8/VCR用含10％FBS的DMEM培养液调整细胞浓度至5×10⁴个/mL，接种于96孔细胞培养板中，100uL/孔，置于含有5％CO²的37℃恒温培养箱中培养12h，然后在各孔中加入不同浓度香蜂草苷、不同浓度阿霉素、不同浓度阿霉素+低中高浓度香蜂草苷、不同浓度阿霉素+低中高浓度枸橘苷、不同浓度阿霉素+低中高浓度柚皮苷和不同浓度阿霉素+维拉帕米。加药后继续培养48小时后，在各孔中加入10μL的MTT溶液(5mg/mL)，继续培养4小时，吸弃培养液，在各孔中加入DMSO，经微量混合振荡器振荡10分钟后，全自动酶联免疫检测仪于570nm处测定吸光度值，计算抑制率和IC₅₀，计算逆转指数＝阿霉素IC₅₀/阿霉素联合其他成分IC₅₀。结果见表4。

表4香蜂草苷逆转人结肠癌多药耐药细胞株HCT-8/VCR对阿霉素耐药作用

实施例5

香蜂草苷逆转人肺癌多药耐药细胞株A549/T对阿霉素耐药作用

取对数生长期的人肺癌多药耐药细胞株/T用含10％FBS的DMEM培养液调整细胞浓度至5×10⁴个/mL，接种于96孔细胞培养板中，100uL/孔，置于含有5％CO²的37℃恒温培养箱中培养12h，然后在各孔中加入不同浓度香蜂草苷、不同浓度阿霉素、不同浓度阿霉素+低中高浓度香蜂草苷、不同浓度阿霉素+低中高浓度枸橘苷、不同浓度阿霉素+低中高浓度柚皮苷和不同浓度阿霉素+维拉帕米。加药后继续培养48小时后，在各孔中加入10μL的MTT溶液(5mg/mL)，继续培养4小时，吸弃培养液，在各孔中加入DMSO，经微量混合振荡器振荡10分钟后，全自动酶联免疫检测仪于570nm处测定吸光度值，计算抑制率和IC₅₀，计算逆转指数＝阿霉素IC₅₀/阿霉素联合其他成分IC₅₀。结果见表5。

表5香蜂草苷逆转人肺癌多药耐药细胞株A549/T对阿霉素耐药作用

实施例6

香蜂草苷对于阿霉素在人乳腺癌非耐药细胞MCF-7的细胞毒作用的影响。

取对数生长期的人乳腺癌细胞MCF-7用含10％FBS的DMEM培养液调整细胞浓度至5×10⁴个/mL，接种于96孔细胞培养板中，100uL/孔，置于含有5％CO²的37℃恒温培养箱中培养12h，然后在各孔中加入然后在各孔中加入不同浓度香蜂草苷、不同浓度阿霉素、不同浓度阿霉素+低中高浓度香蜂草苷、不同浓度阿霉素+低中高浓度枸橘苷、不同浓度阿霉素+低中高浓度柚皮苷和不同浓度阿霉素+维拉帕米。加药后继续培养48小时后，在各孔中加入10μL的MTT溶液(5mg/mL)，继续培养4小时，吸弃培养液，在各孔中加入DMSO，经微量混合振荡器振荡10分钟后，全自动酶联免疫检测仪于570nm处测定吸光度值，计算抑制率和IC₅₀。结果见表6。

表6香蜂草苷对于阿霉素在人乳腺癌细胞MCF-7的细胞毒作用的影响

组别	IC<sub>50</sub>(μg/mL)
		香蜂草苷	＞500
阿霉素	1.38±0.17
		阿霉素+香蜂草苷(5μg/mL)	1.25±0.09
阿霉素+香蜂草苷(25μg/mL)	1.19±0.07
		阿霉素+香蜂草苷(50μg/mL)	1.07±0.05
阿霉素+枸橘苷(5μg/mL)	1.39±0.08
		阿霉素+枸橘苷(25μg/mL)	1.40±0.21
阿霉素+枸橘苷(50μg/mL)	1.43±0.07
		阿霉素+柚皮苷(5μg/mL)	1.41±0.12
阿霉素+柚皮苷(25μg/mL)	1.45±0.21
		阿霉素+柚皮苷(50μg/mL)	1.43±0.10
阿霉素+维拉帕米(10μg/mL)	1.38±0.17

实施例7香蜂草苷对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR在裸鼠体内的多药耐药逆转作用。

香蜂草苷片的制备：首先将10g微粉化微晶纤维素和6g微粉化乳糖混合均匀，加入0.2g交联聚维酮，用60％的乙醇溶液制软材，24目筛网制粒。在60℃下干燥后，经20目筛网整粒；将香蜂草苷的乙醇溶液均匀喷三在干燥颗粒表面后，密闭1小时，加入0.15g微粉硅胶，混匀，测定含量后压片，制得香蜂草苷片。

体内抗肿瘤实验：按5×10⁶个细胞每只将对数期耐药细胞MCF-7/ADR接种于体重18-20g，周龄5-6周的雌性BABL/c裸鼠腋下。观察测量，当移植瘤长至50～100mm³时，将裸鼠随机分为以下四组：①对照组0.2mL/kg/day，腹腔注射生理盐水；②香蜂草苷单用组，20mg/kg/day，腹腔注射；③阿霉素单用组，5mg/kg/3day，腹腔注射；④阿霉素和香蜂草苷联用组(阿霉素，5mg/kg/3day，腹腔注射；香蜂草苷，20mg/kg/day，腹腔注射)；⑤阿霉素和枸橘苷联用组(阿霉素，5mg/kg/3day，腹腔注射；枸橘苷，20mg/kg/day，腹腔注射)；⑥阿霉素和柚皮苷联用组(阿霉素，5mg/kg/3day，腹腔注射；柚皮苷，20mg/kg/day，腹腔注射)。⑦阿霉素和香蜂草苷片联用组(阿霉素，5mg/kg/3day，腹腔注射；香蜂草苷，20mg/kg/day，口服灌胃)。连续给药21天，每三天测量记录裸鼠的体重和瘤体积。最后一天给药结束24h后，处死裸鼠，将移植瘤剥离称重记录。

最终结果表明，在整个过程中②组裸鼠的体重没有明显变化，说明香蜂草苷对裸鼠没有毒性；瘤体积的增长，联用组明显要慢于对照组以及两个单用组；最终的瘤重数据显示，②组的瘤重与对照组相比没有明显变化，③组的瘤重降低约40.63％，⑤⑥组的瘤重和③组相比没有显著性差异，而香蜂草苷和阿霉素联用的④组和⑦组的瘤重相对于对照组，分别下降了74.39％和67.83％。因此，香蜂草苷能在无毒的情况下，明显逆转耐药细胞株对阿霉素的敏感性，使阿霉素发挥更好的抗肿瘤效果。

另外，本领域技术人员还可在本发明权利要求公开的范围和精神内做其它形式和细节上的各种修改、添加和替换。当然，这些依据本发明精神所做的各种修改、添加和替换等变化，都应包含在本发明所要求保护的范围之内。

Claims (10)

1.香蜂草苷的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂，其特征在于：所述的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂中包括治疗有效量的香蜂草苷。

2.根据权利要求1所述的香蜂草苷的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂，其特征在于：所述的肿瘤包括乳腺癌、肠道肿瘤、肝癌、宫颈癌、卵巢癌、胃癌、脑部肿瘤、胆囊癌、血液系统肿瘤。

3.根据权利要求1所述的香蜂草苷的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂，其特征在于：所述肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂的制剂包括口服溶液剂、注射剂、片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊、糖浆。

4.根据权利要求3所述的香蜂草苷的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂，其特征在于：所述的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂的制剂根据需要，进一步加入药学常用的辅料。

5.根据权利要求1所述的香蜂草苷的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂，其特征在于：所述的抗肿瘤药物包括阿霉素、紫杉醇、顺铂、柔红霉素、表柔比星、长春瑞滨、长春新碱、依托泊苷和丝裂霉素。

6.一种香蜂草苷的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂的片剂制备方法，其特征在于：将填充剂微粉化，控制粒径至0.5～20um；加入崩散剂后混匀，用乙醇-水溶液制软材，24目筛制粒，在50～70℃下干燥，20目筛整粒；香蜂草苷溶于乙醇中，均匀喷撒在干燥颗粒表面，密闭1小时，加入润滑剂，混匀，测定含量后压片，制得片剂。

7.根据权利要求6所述的一种香蜂草苷的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂的片剂制备方法，其特征在于：所述的填充剂选自乳糖、蔗糖、甘露醇、木糖醇、山梨醇、微晶纤维素、糊精中的一种或几种。

8.根据权利要求6所述的一种香蜂草苷的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂的片剂制备方法，其特征在于：所述的崩散剂选自微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠中的一种或几种。

9.根据权利要求6所述的一种香蜂草苷的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂的片剂制备方法，其特征在于：所述的润滑剂为硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉中的一种或几种。

10.根据权利要求6所述的一种香蜂草苷的肿瘤多药耐药逆转剂或抗肿瘤药物增敏剂的片剂制备方法，其特征在于：所述的片剂制备过程中进一步加入矫味剂、抗氧剂、助流剂、pH调节剂。