CN109432148A - 一种提取黄蜀葵花浸出物的方法 - Google Patents

一种提取黄蜀葵花浸出物的方法 Download PDF

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Abstract

本发明一种提取黄蜀葵花浸出物的方法，它包括如下步骤：将黄蜀葵花采用浓度为50～80％甲醇的溶液加热回流提取2～3次，每次0.5～1小时得到提取液；将提取液在低于60℃的条件下减压浓缩至比重为1.13～1.16g/ml的浸膏，加入浸膏2～4倍体积的水，离心沉淀，取上清液；取离心沉淀过的上清液，通过大孔吸附树脂柱，采用水洗脱2～3个柱体积后，再采用浓度为20％的甲醇溶液洗脱3个柱体积，50～70％甲醇洗脱1个柱体积，洗脱液浓缩；喷雾干燥即得。采用本发明方法得到的黄蜀葵花浸出物按重量百分比总黄酮含量达到70％～90％，且能同时提取有效成分金丝桃苷、槲皮素和异槲皮素，时间短，含量高。

Description

一种提取黄蜀葵花浸出物的方法
技术领域
本发明属于制药领域，具体涉及提取黄蜀葵花浸出物的方法。
背景技术
黄蜀葵(Abelmoschlmanihot L medic)花为锦葵科植物黄蜀葵的干燥花。表面有纵向脉纹，呈放射状，淡棕色，边缘浅波状，多皱缩破碎，完整的花瓣呈三角状阔倒卵形，表面有纵向脉纹，呈放射状，淡棕色，边缘浅波状；内面基部紫褐色。雄蕊多数，联合成管状，花药近无柄。柱头紫黑色，匙状盘形，5裂。气微香，味甘淡。
性味甘寒滑，无毒，具有清利湿热，消炎解毒之功效，内服主治五淋，水肿；外用治疗痈疽肿毒，烫伤，其花蕾在一些地方作为蔬菜食用，安全无毒。
近年来，随着现代科学技术的发展，新的分离提取方法不断涌现，黄蜀葵化学成分及药理作用的研究取得了很大进展。黄蜀葵花中至少有2～3个黄酮化合物单体，其中最常见的单体为金丝桃苷、槲皮素、异槲皮素。
目前黄蜀葵花浸出物收率较低，且提取时间较长。目前还未有能高效的同时将槲皮素、异槲皮素和金丝桃苷同时提取出的方法。
发明内容
本发明克服上述不足之处，以甲醇为提取剂进行回流提取，同时利用喷雾干燥法，一方面缩短了提取时间，提高了产率，降低了有机溶剂消耗量，另一方面，优化工艺，使黄蜀葵花浸出物中有效成分含量高且溶剂残留量符合相关标准。
本发明的目的是通过以下方式实现的：
一种提取黄蜀葵花浸出物的方法，该方法包括如下步骤：
(a)回流萃取：将黄蜀葵花采用浓度为50～80％甲醇的溶液加热回流提取2～3次，每次0.5～1小时得到提取液；
(b)回流液浓缩：将提取液在低于60℃的条件下减压浓缩至比重为1.13～1.16g/ml的浸膏，加入浸膏2～4倍体积的水，离心沉淀，取上清液；
(c)树脂柱处理：取离心沉淀过的上清液，通过大孔吸附树脂柱，采用水洗脱2～3个柱体积后，再采用浓度为20％的甲醇溶液洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，最后采用50～70％甲醇洗脱1个柱体积，洗脱液浓缩得到浓缩液；
(d)喷雾干燥：将浓缩液喷雾干燥得黄蜀葵花浸出物，进风温度为65～70℃。
上述步骤(a)中浓度为50～80％甲醇的溶液的pH4.5～5.0，优选pH4.8。调节pH使用的是乙酸。
优选上述步骤(a)中采用浓度为50～80％甲醇溶液。本发明以甲醇溶液为提取剂，缩短了提取时间，提高了产率，降低了有机溶剂消耗量。黄蜀葵花与50～80％甲醇溶液的重量体积比为1:6-10。
优选大孔吸附树脂为D101型大孔吸附树脂。
优选上述步骤(a)中加热温度为80℃，回流提取0.5小时。
优选上述步骤(a)中所述共提取3次。
优选步骤(b)中减压浓缩至比重为1.16g/ml的浸膏。
优选步骤(b)中所述加入浸膏量3倍体积的水。
优选步骤(c)中采用60％甲醇洗脱1个柱体积。
优选步骤(d)中喷雾干燥的进风温度为70℃。
采用甲醇在提取过程中，会存在一定的甲醇残留，本发明利用特定条件的喷雾干燥法，使黄蜀葵花浸出物的溶剂残留量符合相关标准。本发明所述的黄蜀葵花浸出物亦为黄蜀葵花提取物。
与现有技术比较本发明的有益效果：采用本发明方法得到的黄蜀葵花浸出物按重量百分比总黄酮含量达到70％～90％，且能同时提取有效成分金丝桃苷、槲皮素和异槲皮素，时间短，含量高。
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明进行进一步解释说明：
实施例1回流溶剂的对比1
取两份黄蜀葵花(购自泰州市高港中药饮片有限公司)，每份10g，分别至250ml烧瓶中。分别加入100ml浓度为70％的甲醇和70％的乙醇，调节水浴锅温度为80℃，回流0.5小时，取回流液滤过，注入高效液相色谱仪，测定其中槲皮素、异槲皮素、金丝桃苷的含量。测得结果见表1。
表1回流溶剂的确定
提取条件 70％甲醇 70％乙醇
测得结果槲皮素含量μg/ml 5.5 2.7
测得结果异槲皮素含量μg/ml 5.0 2.3
测得结果金丝桃苷含量μg/ml 25.7 12.1
结论：通过采用70％甲醇提取的黄蜀葵花浸出物，较70％乙醇提取的浸出物产率高。
实施例2回流溶剂的对比2
分别取10g黄蜀葵花7份，分别至250ml烧瓶中。分别加入100ml浓度为100％的甲醇，90％的甲醇，80％的甲醇，70％的甲醇，60％的甲醇，50％的甲醇，40％的甲醇，调节水浴锅温度为80℃，回流0.5小时，取回流液滤过，注入高效液相色谱仪，测定其中槲皮素、异槲皮素和金丝桃苷的含量。测得结果见表2。
表2回流溶剂浓度确定
结论：该实施例能够证明，通过采用浓度为50～80％甲醇的溶液提取的黄蜀葵花浸出物产率较高，浓度为70％甲醇提取的黄蜀葵花浸出物产率最高。
实施例3pH的影响
分别取10g黄蜀葵花5份，分别至250ml烧瓶中。分别加入100ml用醋酸调节PH值分别为，PH＝4.0、PH＝4.5、PH＝4.8、PH＝5.0、PH＝5.5的甲醇水溶液，其中甲醇浓度为70％，调节水浴锅温度为80℃，回流0.5小时，取回流液滤过，注入高效液相色谱仪，测定其中槲皮素的含量。测得结果见表3。
表3提取溶剂PH的影响
提取条件 测得结果 备注
pH为5.5的70％的甲醇溶液 槲皮素含量8.8μg/ml 槲皮素含量小于9.0μg/ml
pH为5.0的70％的甲醇溶液 槲皮素含量9.1μg/ml 槲皮素含量大于9.0μg/ml
pH为4.8的70％的甲醇溶液 槲皮素含量9.5μg/ml 有效含量溶出最多。
pH为4.5的70％的甲醇溶液 槲皮素含量9.2μg/ml 槲皮素含量大于9.0μg/ml
pH为4.0的70％的甲醇溶液 槲皮素含量8.5μg/ml 槲皮素含量小于9.0μg/ml
结论：该实施例能够证明，通过采用pH为4.5～5.0的70％的甲醇溶液提取的有效成分较高，其中，4.8的70％的甲醇溶液提取的有效成分最高。
实施例4回流提取时间的影响
分别取10g黄蜀葵花4份，分别至250ml烧瓶中。分别加入100ml用醋酸调节pH 4.8的水-甲醇溶液，其中甲醇浓度为70％，调节水浴锅温度为80℃，回流时间分别为0.25小时、0.50小时、0.75小时、1.0小时，取回流液滤过，注入高效液相色谱仪，测定其中槲皮素的含量。测得结果见表4。
表4提取时间的确定
提取条件 测得结果 备注
回流时间0.25小时 槲皮素含量6.8μg/ml 槲皮素含量小于9.0μg/ml
回流时间0.5小时 槲皮素含量9.4μg/ml 槲皮素含量大于9.0μg/ml
回流时间0.75小时 槲皮素含量9.5μg/ml N/A
回流时间1小时 槲皮素含量9.4μg/ml N/A
结论：该实施例能够证明，通过采用pH为4.8的70％的甲醇溶液提取的黄蜀葵花浸出物时回流0.5-1小时可以达到较好的效果，回流0.5小时为最佳效果。
实施例5回流提取次数的影响
分别取10g黄蜀葵花，至250ml烧瓶中。加入100ml用醋酸调节pH 4.8的甲醇水溶液，其中甲醇浓度为70％，调节水浴锅温度为80℃，回流时间分别为0.50小时，取回流液滤过。滤液作为第一次回流液。
滤渣再加100ml用醋酸调节pH4.8的甲醇水溶液，其中甲醇浓度为70％，回流0.5小时。取回流液滤过。滤液作为第二次回流液。
滤渣再加100ml用醋酸调节pH4.8的甲醇水溶液，其中甲醇浓度为70％，回流0.5小时。取回流液滤过。滤液作为第三次回流液。
将三次回流液，分别入注入高效液相色谱仪，测定其中槲皮素的含量。测得结果见表5
表5回流次数的确定
回流次数 测得结果 备注
第一次回流 槲皮素含量9.4μg/ml 槲皮素含量大9.0μg/ml
第二次回流 槲皮素含量2.1μg/ml N/A
第三次回流 槲皮素含量0.9μg/ml N/A
结论：该实施例能够证明，经过2-3次回流可以有效提取出黄蜀葵花中有效成分，经过3次回流基本完全可以提出黄蜀葵花中有效成分。
实施例6浓缩沉淀工艺的影响
将实施例5所得的提取液在低于60℃的条件下减压浓缩至比重为1.16g/ml的浸膏。加入浸膏量2～4倍量水，观察溶液现象，结果见表6。
表6浓缩沉淀工艺的确定
浸膏：水(V/V) 观察结果
1:1 没有沉淀产生
1:2 有沉淀产生
1.3 有沉淀产生
1:4 有沉淀产生
1.5 有沉淀复溶解
结论：该实施例能够证明，加浸膏量2～4倍量水最为合适。
实施例7大孔树脂吸附洗脱工艺的确定
分别取黄蜀葵花，至250ml烧瓶中，加入100ml用醋酸调节pH4.8的水-甲醇溶液，其中甲醇浓度为70％，调节水浴锅温度为80℃，回流3次，回流时间为0.50小时。
所得的提取液，在低于60℃的条件下减压浓缩至比重为1.16g/ml，加入3倍体积的水，沉淀，离心，分离得到清液。
将所得的上清液，用大孔吸附树脂吸附，用水洗2个柱体积。
再将D101大孔树脂用20％甲醇洗脱3个柱体积，弃去洗脱液。
再将D101大孔树脂分别用40％甲醇、50％甲醇、60％甲醇、70％甲醇、80％甲醇洗脱1个柱体积，得洗脱液。将所得洗脱液注入色谱仪检测其槲皮素、异槲皮素、金丝桃苷含量检测结果见表7
表7大孔树脂吸附洗脱工艺的确定
结论：该实施例能够证明，洗脱剂选择50％～70％甲醇最为合适，其中60％甲醇最为合适，既可以保证主成分有效洗脱，也可以保证产品中杂质小于限度范围。
实施例8干燥工艺的确定
取实施例7中所得的洗脱液采用不同的干燥方法进行干燥，考察干燥时间和溶剂残留量，结果见表8。
表8干燥工艺的确定
结论：通过实验可得知，喷雾干燥，进风温度为70℃时效果最好。
实施例9
取10.5g黄蜀葵花，至250ml烧瓶中，加入100ml用醋酸调节pH 4.5的水-甲醇溶液，其中甲醇浓度为60％，调节水浴锅温度为80℃，回流3次，每次回流时间为1小时。
所得的提取液，在低于60℃的条件下减压浓缩至比重为1.16g/ml的浸膏，加入浸膏3倍体积的水，沉淀，离心，分离得到清液。
将所得的上清液，用D101大孔吸附树脂吸附，用水洗3个柱体积，
再用浓度为20％的甲醇溶液洗脱3个柱体积，弃去洗脱液。
再用70％甲醇溶液洗脱1个柱体积，得洗脱液。
洗脱液浓缩，将浓缩液喷雾干燥，设置进风温度为65℃，得到黄蜀葵花总黄酮提取物。
测得总黄酮含量82.6％，其中槲皮素含量是3.9％、异槲皮素含量是3.6％、金丝桃苷含量是26.6％。溶剂中甲醇残留量0.21％。
实施例10
取10.2g黄蜀葵花，至250ml烧瓶中，加入100ml用醋酸调节pH4.8的水-甲醇溶液，其中甲醇浓度为70％，调节水浴锅温度为80℃，回流3次，回流时间为0.50小时。
所得的提取液，在低于60℃的条件下减压浓缩至比重为1.14g/ml，加入3倍体积的水，沉淀，离心，分离得到清液。
将所得的上清液，用大孔吸附树脂吸附，用水洗2个柱体积。
再将D101大孔树脂用20％甲醇洗脱3个柱体积，弃去洗脱液。
再将D101大孔树脂用50％甲醇洗脱1个柱体积，得洗脱液。
洗脱液浓缩，将浓缩液喷雾干燥，进风温度为65℃，得到黄蜀葵花总黄酮提取物。
测得总黄酮含量88.9％，其中槲皮素含量是4.1％、异槲皮素含量是3.8％、金丝桃苷含量是26.9％。溶剂甲醇残留量0.28％。
实施例11
取10.7g黄蜀葵花，至250ml烧瓶中，加入100ml用醋酸调节pH 4.5的水-甲醇溶液，其中甲醇浓度为70％，调节水浴锅温度为80℃，回流3次，回流时间为0.50小时。
所得的提取液，在低于60℃的条件下减压浓缩至比重为1.16g/ml的浸膏，加入浸膏3倍体积的水，沉淀，离心，分离得到清液。
将所得的上清液，用大孔吸附树脂吸附，用水洗2个柱体积。
再将D101大孔树脂用20％甲醇洗脱3个柱体积，弃去洗脱液。
再将D101大孔树脂用60％甲醇洗脱1个柱体积，得洗脱液。
洗脱液浓缩，将浓缩液喷雾干燥，进风温度为68℃，得到黄蜀葵花总黄酮提取物。
测得总黄酮含量89.2％，其中槲皮素含量是4.2％、异槲皮素含量是3.8％、金丝桃苷含量是27.2％。溶剂甲醇残留量0.25％。
实施例12
取10.2g黄蜀葵花，至250ml烧瓶中，加入100ml用醋酸调节pH4.8的水-甲醇溶液，其中甲醇浓度为70％，调节水浴锅温度为80℃，回流3次，回流时间为0.50小时。
所得的提取液，在低于60℃的条件下减压浓缩至比重为1.16g/ml的浸膏，加入浸膏3倍体积的水，沉淀，离心，分离得到清液。
将所得的上清液，用大孔吸附树脂吸附，用水洗3个柱体积。
再将D101大孔树脂用20％甲醇洗脱3个柱体积，弃去洗脱液。
再将D101大孔树脂用60％甲醇洗脱1个柱体积，得洗脱液。
洗脱液浓缩，将浓缩液喷雾干燥，进风温度为70℃，得到黄蜀葵花总黄酮提取物。
测得总黄酮含量达89.6％，其中槲皮素含量是4.1％、异槲皮素含量是3.9％、金丝桃苷含量是27.6％。溶剂甲醇残留量0.19％。

Claims (10)

1.一种提取黄蜀葵花浸出物的方法，其特征在于，它包括如下步骤：
(a)回流萃取：将黄蜀葵花采用浓度为50～80％甲醇溶液加热回流提取2～3次，每次0.5～1小时得到提取液；
(b)回流液浓缩：将提取液在低于60℃的条件下减压浓缩至比重为1.13～1.16g/ml的浸膏，加入浸膏2～4倍体积的水，离心沉淀，取上清液；
(c)树脂柱处理：取离心沉淀过的上清液，通过大孔吸附树脂柱，采用水洗脱2～3个柱体积后，再采用浓度为20％的甲醇溶液洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，最后采用50～70％甲醇洗脱1个柱体积，洗脱液浓缩；
(d)喷雾干燥：将浓缩液喷雾干燥得黄蜀葵花浸出物，进风温度为65～70℃。
2.根据权利要求1所述的提取黄蜀葵花浸出物的方法，其特征在于，浓度为50～80％甲醇的溶液的pH4.5～5.0，优选pH4.8。
3.权利要求1所述的提取黄蜀葵花浸出物的方法，其特征在于，步骤(a)中加热回流温度为80℃。
4.权利要求1所述的提取黄蜀葵花浸出物的方法，其特征在于，步骤(a)中采用浓度为70％甲醇的溶液加热回流提取。
5.权利要求1所述的提取黄蜀葵花浸出物的方法，其特征在于，步骤(a)中黄蜀葵花与50～80％甲醇溶液的重量体积比为1:6-10。
6.权利要求1所述的提取黄蜀葵花浸出物的方法，其特征在于，步骤(a)中所述共提取次数为3次。
7.权利要求1所述的提取黄蜀葵花浸出物的方法，其特征在于，步骤(b)中所述减压浓缩至比重为1.16g/ml的浸膏。
8.权利要求1所述的提取黄蜀葵花浸出物的方法，其特征在于，步骤(b)中所述加入浸膏3倍重量水。
9.权利要求1所述的提取黄蜀葵花浸出物的方法，其特征在于，步骤(c)中所述浓度为60％甲醇洗脱1个柱体积。
10.权利要求1所述的提取黄蜀葵花浸出物的方法，其特征在于，步骤(d)中所述喷雾干燥的进风温度为70℃。
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