CN109402253B - Aldh18a1在结直肠癌的治疗和诊断中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及ALDH18A1在结直肠癌的治疗和诊断中的应用。ALDH18A1在结直肠癌组织高表达，与其临床病理参数及预后相关；下调ALDH18A1表达抑制结直肠癌细胞增殖；ALDH18A1与MYC表达正相关；下调ALDH18A1抑制MYC基因表达；ALDH18A1高表达患者中，c‑MYC靶基因显著富集；ALDH18A1可作为结直肠癌患者的预后判断因子，并可能通过下调MYC基因表达而抑制结肠癌细胞的增殖对结直肠癌的治疗和诊断具有重要意义。

Description

ALDH18A1在结直肠癌的治疗和诊断中的应用
技术领域
本发明属于疾病诊断和治疗领域，具体涉及ALDH18A1在结直肠癌的治疗和诊断中的应用。
背景技术
结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，全球每年初诊患者超过120万。根据美国癌症协会(American Cancer Society，ACS)资料，2018年新发病例约14万，占所有癌症病例的8.1％，死亡人数约5万，占癌症死亡人数的8.3％。目前，结直肠癌患者5年总体生存率为64.5％，约25％的患者在就诊时已出现转移，而发生转移的患者5年总体生存率仅为14％。传统的外科手术治疗以及辅助化疗，依然是结直肠癌患者的主要治疗方式。因此，寻找新的治疗靶点和策略，具有重要的临床意义。
肿瘤细胞通过改变自身代谢状态以适应细胞外微环境。同时，代谢异常又可调控众多基因表达，从而改变肿瘤细胞表型。其中，乙醛脱氢酶家族18成员A1(Aldehydedehydrogenase family 18member A1，ALDH18A1)，又称为吡咯啉-5-羧酸合成酶(pyrroline-5-carboxylate synthetase，P5CS)，在脯氨酸、鸟氨酸及谷氨酸代谢中发挥重要作用。研究表明，ALDH18A1通过蛋白质合成代谢的调控，进而促进黑色素瘤细胞增殖，提示ALDH18A1可能发挥促癌作用。然而，ALDH18A1在结直肠癌患者中的临床病理学意义，目前尚不清楚。本研究利用TCGA和GEO数据库的基因表达信息以及结直肠癌组织芯片的免疫组化分析，探讨ALDH18A1与结直肠癌临床病理参数和生存预后的关系，观察敲低ALDH18A1对结直肠癌细胞增殖活性的影响以及与MYC基因表达的关系，并进一步通过基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis，GSEA)评价ALDH18A1与MYC靶基因活化的关系，旨在为探索新的结直肠癌治疗靶点和策略提供实验依据。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的之一在于提供ALDH18A1 mRNA或ALDH18A1蛋白在作为治疗和诊断结直肠癌的标志物中的应用；本发明的目的之二在于提供检测ALDH18A1 mRNA或ALDH18A1蛋白的试剂在制备治疗和诊断结直肠癌的试剂盒中的应用；本发明的目的之三在于提供ALDH18A1 mRNA的捕获剂或ALDH18A1蛋白的捕获剂在制备治疗和诊断结直肠癌的试剂或试剂盒中的应用；本发明的目的之四在于提供下调ALDH18A1表达的试剂和抑制ALDH18A1活性的试剂在制备治疗结直肠癌的药物中的应用；本发明的目的之五在于提供下调ALDH18A1表达的试剂和抑制ALDH18A1活性的试剂在制备抑制结直肠癌细胞增殖活性的药物中的应用；本发明的目的之六在于提供下调ALDH18A1表达的试剂和抑制ALDH18A1活性的试剂在制备抑制MYC基因表达的药物中的应用。
为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
1、ALDH18A1 mRNA或ALDH18A1蛋白在作为治疗和诊断结直肠癌的标志物中的应用。
2、检测ALDH18A1 mRNA或ALDH18A1蛋白的试剂在制备治疗和诊断结直肠癌的试剂盒中的应用。
3、ALDH18A1 mRNA的捕获剂或ALDH18A1蛋白的捕获剂在制备治疗和诊断结直肠癌的试剂或试剂盒中的应用。
优选的，所述ALDH18A1 mRNA的捕获剂为特异识别ALDH18A1 mRNA的引物或探针。
优选的，所述引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。
优选的，所述ALDH18A1蛋白的捕获剂为抗ALDH18A1蛋白的抗体。
优选的，所述抗ALDH18A1蛋白的抗体为ALDH18A1兔抗人多克隆抗体。
4、下调ALDH18A1表达的试剂或抑制ALDH18A1活性的试剂在制备治疗结直肠癌的药物中的应用。
优选的，所述下调ALDH18A1表达的试剂或抑制ALDH18A1活性的试剂为ALDH18A1shRNA或ALDH18A1 siRNA。
优选的，所述ALDH18A1 shRNA的序列由如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2杂交形成；所述ALDH18A1 siRNA如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.11所示。
6、下调ALDH18A1表达的试剂或抑制ALDH18A1活性的试剂在制备抑制结直肠癌细胞增殖活性的药物中的应用。
7、下调ALDH18A1表达的试剂或抑制ALDH18A1活性的试剂在制备抑制MYC基因表达的药物中的应用。
本发明的有益效果在于：本发明公开了ALDH18A1在结直肠癌的治疗和诊断中的应用，通过数据库比较ALDH18A1在人结直肠癌和正常结肠组织的表达，列联表分析ALDH18A1与临床病理参数的相关性，Kaplan-Meier及Cox回归分析ALDH18A1的预后判断意义；MTS检测下调ALDH18A1表达对结直肠癌细胞增殖的影响；分析ALDH18A1与MYC基因表达之间的相关性；Real-Time PCR和Western blot检测敲低ALDH18A1后MYC基因的表达，GSEA分析ALDH18A1与MYC下游靶基因活化的关系。结果发现ALDH18A1在结直肠癌组织高表达，与其临床病理参数及预后相关；下调ALDH18A1表达抑制结直肠癌细胞增殖；ALDH18A1与MYC表达正相关；下调ALDH18A1抑制MYC基因表达；ALDH18A1高表达患者中，c-MYC靶基因显著富集。因此ALDH18A1可作为结直肠癌患者的预后判断因子，并可能通过下调MYC基因表达而抑制结肠癌细胞的增殖，用于结直肠癌的治疗。
附图说明
图1为正常结肠组织和结直肠癌患者的ALDH18A1 mRNA表达水平(a：P<0.01，与正常结肠组织比较)。
图2为免疫组化检测ALDH18A1在不同原发肿瘤大小/蔓延范围结直肠癌组织的表达(A：免疫组化检测结果，代表性图片；B：ALDH18A1定量分析结果(独立样本t检验，P＝0.0076)a：P<0.01，与T1+T2比较)。
图3为免疫组化检测ALDH18A1在不同淋巴结转移状态结直肠癌组织的表达(A：免疫组化检测结果，代表性图片；B：ALDH18A1定量分析结果(独立样本t检验，P＝0.0297)a：P<0.05，与N0比较)。
图4为免疫组化检测ALDH18A1在不同AJCC临床分期结直肠癌组织的表达(A：免疫组化检测结果，代表性图片；B：ALDH18A1定量分析结果(独立样本t检验，P＝0.0297)a：P<0.05，与I+II比较)。
图5为ALDH18A1高/低表达患者之间的预后差异(A：基于TCGA结直肠癌数据库ALDH18A1表达水平差异的Kaplan-Meier生存曲线；B：基于结直肠癌组织芯片ALDH18A1表达差异的Kaplan-Meier生存曲线)。
图6为下调ALDH18A1表达后结直肠癌细胞增殖活性的变化(A：HT29：对照组和ALDH18A1敲低组，独立样本t检验，n＝6，P＝9.4306×10-12；B：HCT116：对照组和ALDH18A1敲低组，独立样本t检验，n＝6，P＝3.0567×10-14；a：P<0.01，与HT29对照组比较；b：P<0.01，与HCT116对照组比较)。
图7为ALDH18A1和MYC在mRNA水平的相关性(A：GSE41258数据集结直肠癌患者ALDH18A1与MYC表达之间的相关性；B：MYC高/低表达组的表达谱差异分析)。
图8为免疫组化分析ALDH18A1和c-MYC蛋白之间的相关性(A：结直肠癌组织芯片中ALDH18A1与c-MYC表达之间的相关性；B：免疫组化检测结直肠癌患者ALDH18A1和c-MYC的表达，代表性图片)。
图9为基于ALDH18A1表达水平差异的GSEA分析(A：正常结肠上皮细胞和结直肠癌细胞的ALDH18A1、c-MYC在蛋白水平的表达情况；B：下调ALDH18A1表达后MYC mRNA的变化a：P<0.01，与siCTR组比较；C：下调ALDH18A1表达后c-MYC蛋白的变化)。
图10为基于ALDH18A1表达水平差异的GSEA分析(A：HALLMARK_MYC_TARGETS_V1；B：HALLMARK_MYC_TARGETS_V2；C：DANG_REGULATED_BY_MYC_UP；D：DANG_MYC_TARGETS_UP)。
具体实施方式
下面将对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1、ALDH18A1在结直肠癌中高表达并具有预后判断价值
(1)ALDH18A1在结直肠癌组织中高表达
登录Xena Public Data Hubs(http://xena.ucsc.edu/public-hubs/)下载结直肠癌RNA测序数据(TCGA Colon And Rectal Cancer，COADREAD)，芯片平台为IlluminaHiSeq 2000RNA Sequencing platform；通过R数据包(affy 1.42.3)下载GEO数据库的GSE41258数据集，芯片平台为Affymetrix Human Genome U133A Array，表达谱差异分析利用R语言包(limma 3.20.9)。
整理GSE41258数据集的表达数据，取ALDH18A1中位表达量为临界值，分为ALDH18A1高/低表达组，制作表型数据文件。GSE41258数据集显示，与正常结肠组织(平均表达量8.237±0.0374，n＝103)相比，结直肠癌患者(平均表达量8.365±0.0296，n＝186)的ALDH18A1 mRNA表达水平显著升高(独立样本t检验，P＝0.0088)(图1)。
(2)ALDH18A1与结直肠癌临床病理参数密切相关
对结直肠癌患者的组织芯片(共90例)进行免疫组化染色，具体方法如下：样本烘烤30分钟后标准脱蜡处理，37℃过氧化氢阻断液内浸泡30分钟以阻断内源性过氧化氢酶，随后用PBS液洗涤3次，每次5分钟，放入枸橼酸抗原修复工作液中进行修复，血清封闭30分钟。之后加入ALDH18A1兔抗人多克隆抗体(1:20)(Abgent，美国)，4℃孵育过夜；第二天用PBS液洗涤3次，每次5分钟，滴加鼠兔通用二抗，37℃孵育30分钟；DAB显色3-5分钟，苏木素复染细胞核30秒，酒精梯度脱水后置于二甲苯中透明，待晾干后用中性树胶封片。用光学显微镜下观察并拍照，采用Image-pro-plus 6.0软件定量分析ALDH18A1累积光密度值。
并采用Image-Pro Plus软件对ALDH18A1表达进行量化分析，发现ALDH18A1与原发肿瘤大小蔓延范围(pT)、区域淋巴结转移(pN)以及AJCC(American Joint Committee onCancer，美国癌症联合委员会)临床分期等结直肠癌病理参数密切相关(表1及图2-4)。
表1、ALDH18A1表达量与结直肠癌临床病理参数的关系
Figure GDA0003847349280000051
Figure GDA0003847349280000061
ALDH18A1low为ALDH18A1低表达患者，ALDH18A1high为ALDH18A1高表达患者，取ALDH18A1中位表达量为临界值；P值采用Continuity连续性校正公式所得。
(3)ALDH18A1高表达的结直肠癌患者预后不良
将TCGA结直肠癌数据库的结直肠癌患者进行基于ALDH18A1表达差异的Kaplan-Meier生存分析(利用ROC曲线确定临界值)，结果显示：ALDH18A1低表达患者，其生存时间(中位生存时间2821天，n＝325)较ALDH18A1高表达患者(中位生存时间1566天，n＝93)显著延长(Log-rank检验，P＝0.0333)(图5A)。同时，基于结直肠癌患者组织芯片的免疫组化数据，发现ALDH18A1低表达患者的预后(中位生存时间77.65月，n＝43)较高表达患者(中位生存时间52.39月，n＝46)显著延长(Log-rank检验，P＝0.0021)，与TCGA结直肠癌数据库分析结果一致(图5B)。
进一步对上述90例结直肠癌患者的预后预测因子进行单因素和多因素回归分析，结果提示ALDH18A1在结直肠癌中具有显著的预后判断价值(风险比为1.996，95％置信区间为1.012～3.939，P＝0.046)(表2)。
表2、结直肠癌预后预测因素的单因素及多因素Cox回归分析a
Figure GDA0003847349280000062
Figure GDA0003847349280000071
ALDH18A1low为ALDH18A1低表达患者，ALDH18A1high为ALDH18A1高表达患者，取ALDH18A1中位表达量为临界值。a：pN的自由度已由于线性相关协变量AJCC临床分期而降低；b：线性相关协变量AJCC＝pN
实施例2、shRNA敲低ALDH18A1基因的表达对结直肠癌细胞增殖活性的影响
(1)细胞培养
人结直肠癌细胞系HT29、HCT116以及正常结肠上皮细胞NCM460，采用含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基，置于37℃、5％CO2、95％湿度的恒温培养箱中培养，隔日换液，3天～5天传代。
(2)ALDH18A1 shRNA慢病毒包装及感染
采用分子克隆技术将ALDH18A1 shRNA(5’-ccggccauuauuugaccagaucauucucgagaaugaucuggucaaauaaugguuuuug-3’(SEQ ID NO.1)，5’-aauucaaaaaccauuauuugaccagaucauucucgagaaugaucuggucaaauaaugg-3’(SEQ ID NO.2))(Sigma-Aldrich，美国)构建到pLVshRNA-eGFP慢病毒载体(英茂盛业，北京)中，命名为ALDH18A1 shRNA。利用Lipofectamine 3000转染试剂(Invitrogen，美国)将5μg ALDH18A1 shRNA，3.75μg PSPAX2和1.25μg PMD2.G包装质粒转入5×10-6生长状态良好的HEK293T细胞，48小时后收取病毒上清加入HT29、HCT116细胞中，置于37℃恒温培养箱中培养，6小时后换成新鲜培养基，流式细胞分选仪筛选eGFP阳性细胞。MTS检测，具体是将HT29、HCT116细胞消化后，用含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基配成单细胞悬液，按1000个细胞/孔的密度接种于96孔板中，每孔体积100μL，置于37℃、5％CO2、95％湿度的恒温培养箱中培养24小时；第二天，每孔加入MTS溶液10μL，继续孵育2小时；选择490nm波长，在分光光度计上测定各孔吸光度值，记录结果，以时间为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制细胞生长曲线。结果发现，利用ALDH18A1 shRNA下调其表达后，结直肠癌细胞的增殖能力显著抑制(图6)。
实施例3、ALDH18A1表达与癌基因MYC相关性
(1)ALDH18A1和MYC在mRNA水平呈正相关
研究发现，几乎所有结直肠癌患者都有不同程度的MYC基因表达失控，其在结直肠癌的恶性增殖、干性维持、癌性转化等方面扮演重要的角色。于是，我们接下来探讨ALDH18A1对结直肠癌细胞增殖能力的调控，是否与MYC基因有关。
提取结肠癌患者GSE41258数据集中ALDH18A1和MYC的mRNA表达量信息，采用Real-Time PCR检测ALDH18A1和MYC的mRNA水平，具体方法如下：按照RNAiso Plus说明书提取结肠癌患者细胞RNA，利用NanoDrop2000超微量分光光度计测量RNA浓度。根据Prime ScriptRT Reagent Kit(Takara)说明书，将上述提取的RNA反转录为cDNA，并按照SYBR Premix ExTaqTM II说明书，取7.5μL SYBR Premix Ex TaqTM II、1μL cDNA、1μL上游引物、1μL下游引物、4.5μL ddH2O，配制成15μL Real-Time PCR反应体系。GAPDH引物(上游：5’-acaactttgtatcgtggaagg-3’(SEQ ID NO.3)，下游：5’-gccatcacgccacagtttc-3’(SEQ IDNO.4))；ALDH18A1引物(上游：5’-gcccttcaaccaacatcttct-3’(SEQ ID NO.5)，下游：5’-aggggtacagtgataaacggg-3’(SEQ ID NO.6))；MYC引物(上游：5’-ggctcctggcaaaaggtca-3’(SEQ ID NO.7)，下游：5’-ctgcgtagttgtgctgatgt-3’(SEQ ID NO.8))。反应条件为：95℃30秒，1个循环；95℃5秒，60℃30秒，72℃30秒，40个循环；溶解曲线65.0℃～95.0℃，温度间隔0.5℃，每15秒读板一次。相关性分析结果提示：ALDH18A1与MYC的表达水平呈显著正相关(相关系数r＝0.3647，P＝1.0390×10-13)(图7，A)。
同时，提取GSE41258数据集中的MYC基因表达值，并根据患者生存结局，利用ROC曲线确定临界值，将结直肠癌患者分为MYC高表达组和低表达组。表达谱差异分析结果显示，与MYC低表达组相比，ALDH18A1在MYC高表达组的表达水平较高，差异显著(Log2FoldChange＝0.1947，P＝0.0149)(图7，B)，提示两者在mRNA水平存在高度相关性。
(2)ALDH18A1和MYC在蛋白水平呈正相关
进一步，对结直肠癌组织芯片免疫组化结果进行ALDH18A1和c-MYC蛋白水平的量化分析，采用Western Blot检测ALDH18A1和c-MYC的蛋白表达，具体方法如下：收集直肠癌患者细胞，加入适量M-PERTMMammalian Protein Extraction Reagent(ThermoScientific，美国)，并按100:1加入蛋白酶抑制剂，吹打混匀后置于冰上裂解30分钟，之后4℃、14000转/分钟离心10分钟，提取上清，BCA试剂盒测定蛋白浓度。随后加入适量蛋白上样缓冲液(5×)，混匀后金属浴加热至100℃，10分钟变性。配置电泳凝胶，蛋白上样量为50μg/孔。恒压电泳80V、40分钟，之后120V、45分钟，PVDF转膜100V、100分钟。将膜放入含5％脱脂奶粉的PBST中封闭1小时后孵育一抗，GAPDH兔抗人多克隆抗体(1:1000)(Cell SignalingTechnology，美国)、ALDH18A1兔抗人多克隆抗体(1:1000)以及c-MYC兔抗人单克隆抗体(1:1000)，4℃孵育过夜。PBST洗膜10分钟×3次，然后将膜放入1:3000的羊抗兔二抗(中杉金桥，北京)中，室温孵育1小时；PBST洗膜10分钟×3次，加入SuperSignaling Technologyit\o"PE(Thermo Scientific，34095)，Bio-Rad凝胶成像仪显影。结果发现结直肠癌患者的ALDH18A1和c-MYC蛋白水平呈显著的正相关(相关系数r＝0.4278，P＝2.6000×10-5)(图8)。
Western Blot实验结果提示，与正常结肠上皮细胞NCM460相比，ALDH18A1在结直肠癌细胞中表达明显较高。同时，c-MYC的表达趋势与ALDH18A1基本一致(图9，A)。
实施例4、下调ALDH18A1对MYC基因表达的影响
(1)下调ALDH18A1基因表达显著抑制MYC mRNA水平
根据广州锐博生物设计合成的siRNA干扰系列：siALDH18A1#1：5’-guucguucuuggagcaaca-3’(SEQ ID NO.9)；siALDH18A1#2：5’-gaaccucaauggaacacuu-3’(SEQ ID NO.10)；siALDH18A1#3：5’-gaagggaucugucacaugu-3’(SEQ ID NO.11)，以及及产品使用说明书，分别将5μL siALDH18A1-1、siALDH18A1-2和siALDH18A1-3以及阴性对照，与5μL的Lipofectamine RNAiMAX(Invitrogen，美国)转染试剂在200μL的Opti-MEM(Gibco，美国)中混匀，室温孵育15分钟。同时，将HT29、HCT116细胞消化后按(3-5)×105/孔的密度接种于6孔板中，并加入上述混合液，置于37℃、5％CO2、95％湿度的恒温培养箱中培养，转染48小时后收集细胞用于ALDH18A1的mRNA和蛋白表达水平的检测。
Real-Time PCR结果显示，siALDH18A1组与siCTR组相比，其ALDH18A1mRNA水平显著下调(siCTR组，1.0000±0.0856；siALDH18A1#1组，0.0985±0.0053；siALDH18A1#2组，0.1811±0.0060；siALDH18A1#3组，0.0758±0.0044。siCTR组与siALDH18A1#1组相比，独立样本t检验，n＝4，P＝2.8687×10-5；siCTR组与siALDH18A1#2组相比，独立样本t检验，n＝4，P＝5.5047×10-8；siCTR组与siALDH18A1#3组相比，独立样本t检验，n＝4，P＝2.3631×10-8)；而下调ALDH18A1之后，MYC mRNA水平呈现同向变化(siCTR组，1.0000变化(siCTR组，1.0000±0.0502；siALDH18A1#1组，0.39635±0.0260；siALDH18A1#2组0.6403±0.0218；siALDH18A1#3组0.5696±0.0435。siCTR组与siALDH18A1#1组相比，独立样本t检验，n＝4，P＝1.8975×10-7；siCTR组与siALDH18A1#2组相比，独立样本t检验，n＝4，P＝4.0000×10-6；siCTR组与siALDH18A1#3组相比，独立样本t检验，n＝4，P＝2.0000×10-6)(图9，B)。
(3)下调ALDH18A1表达显著降低c-MYC蛋白水平
Western Blot检测同样提示，siALDH18A1可显著降低ALDH18A1蛋白水平，而c-MYC与ALDH18A1在蛋白水平上呈现同向变化：即下调ALDH18A1，c-MYC在蛋白水平同样出现显著性下降(图9，C)。
(4)ALDH18A1高表达患者存在c-MYC靶基因的活化
接下来，对GSE41258数据集进行基因集富集分析(gene set enrichmentanalysis，GSEA)，具体如下在GSEA官方网站(http://software.broadinstitute.org/gsea)下载功能基因集文件：HALLMARK_MYC_TARGETS_V1、HALLMARK_MYC_TARGETS_V2、DANG_REGULATED_BY_MYC_UP和DANG_MYC_TARGETS_UP。完善参数设置，进行GSEA分析，提取标准化富集得分(normalized enrichment score，NES)、错误发现率(false discovery rate，FDR)和P值(nominal P value)。结果显示，高表达ALDH18A1的结直肠癌患者存在多个c-MYC靶基因集的富集，包括：HALLMARK_MYC_TARGETS_V1(共含200个基因，其中152个基因显著富集，FDR＝0.0060，P＝0.0041)、HALLMARK_MYC_TARGETS_V2(共含58个基因，其中44个基因显著富集，FDR＝0.0359，P＝0.0425))、c-MYC正向调控基因(DANG_REGULATED_BY_MYC_UP(含72个基因，其中39个基因显著富集，FDR＝0.0467，P＝0.0418)和DANG_MYC_TARGETS_UP(含143个基因，其中75个基因显著富集，FDR＝0.0040，P＝0.0041))(图10)。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> Shicang, Yu
<120> ALDH18A1在结直肠癌的治疗和诊断中的应用
<130> TCGA和GEO数据库
<160> 11
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 58
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 1
ccggccauua uuugaccaga ucauucucga gaaugaucug gucaaauaau gguuuuug 58
<210> 2
<211> 58
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 2
aauucaaaaa ccauuauuug accagaucau ucucgagaau gaucugguca aauaaugg 58
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
acaactttgt atcgtggaag g 21
<210> 4
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
gccatcacgc cacagtttc 19
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
gcccttcaac caacatcttc t 21
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
aggggtacag tgataaacgg g 21
<210> 7
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
ggctcctggc aaaaggtca 19
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
ctgcgtagtt gtgctgatgt 20
<210> 9
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 9
guucguucuu ggagcaaca 19
<210> 10
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 10
gaaccucaau ggaacacuu 19
<210> 11
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 11
gaagggaucu gucacaugu 19

Claims (2)

1.ALDH18A1 shRNA在制备治疗结直肠癌的药物中的应用，其特征在于，所述ALDH18A1shRNA的序列由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2杂交形成。
2.ALDH18A1 siRNA在制备治疗结直肠癌的药物中的应用，其特征在于，所述ALDH18A1siRNA的序列如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.11所示。
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MYC regulation of glutamine–proline regulatory axis is key in luminal B breast cancer;Madeleine L Craze等;《Br J Cancer.》;20180131;第118卷;结果部分、讨论部分 *

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