CN109394696A - 一种脂质体的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明揭示了一种脂质体的制备方法，包括以下步骤，首先是合成二亚乙基三胺五乙酸衍生物，其次是合成具有两亲性分子的钆‑二亚乙基三胺五乙酸‑硬脂胺，然后是脂质体壳层的形成、药物自组装，最后是制备得到脂质体材料，本发明通过自组装和纳米沉淀的方法制备得到具有核壳结构的脂质体，工艺简单、可重复性强，且形成的该脂质体颗粒尺寸均一，具有良好的水溶性、分散性和生物相容性，克服钆类小分子生物相容性差，组织特异性低，毒性大等缺陷，同时，利用近红外光照射间接引发脂肪酸发生相转变，可控地释放出化疗药物，实现了多模态成像引导的协同治疗。
Description
技术领域
本发明涉及一种脂质体的制备方法及其应用，尤其涉及一种具有多功能特性的脂质体的制备方法及应用，属于生物医学领域。
背景技术
磁共振成像（MRI）技术是利用原子核的磁共振效应衍生出的成像技术，具有空间分辨率高、软组织对比度高、非侵入性和无电离辐射伤害等特点，因而被广泛应用于临床诊断和治疗中。在临床MRI中，多数诊断须用磁共振造影剂，磁共振造影剂是用来缩短成像时间、提高成像对比度和清晰度的一种成像增强对比剂，它能改变体内局部组织中水质子的驰豫速率、提高正常与患病部位的成像对比度。磁共振造影剂的发展也促进MRI技术日趋成熟。
另外，近年来，许多近红外响应释放药物的多功能纳米探针被开发用于癌症的协同治疗，例如：化疗或光疗，但这些纳米探针在近红外刺激下，仅能实现封装药物的持续释放，而不能实现可控和按需释放，造成病灶特异性低，治疗效果差等问题。
然而，目前临床使用最多的造影剂，如钆类造影剂、钆双胺（Gd-DTPA-BMA,）1,4,7-三（叔丁氧羰甲基）-10-（乙酸）-1,4,7,10-四氮杂环十二烷（Gd-DOTA）等都是小分子造影剂，属于细胞外试剂，存在组织特异性较低，体内停留时间短，组织毒性较大等缺点。
综上所述，如何提供一种脂质体的制备方法，应用于生物医学，可以构建靶向特异性、低毒、生物相容的MRI造影剂，就成为本领域技术人员亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种将两种天然脂肪酸低共熔物构成的温敏性脂质体与顺磁性钆类两亲小分子相结合，通过包覆光热/光动力试剂吲哚菁绿（ICG）与化疗药物阿霉素（DOX），形成可用于生物医学领域的磁共振成像的有机纳米粒子，同时，利用近红外光照射间接引发脂肪酸发生相转变，可控地释放出化疗药物，实现了多模态成像引导的协同治疗。
本发明的技术解决方案是：
根据本发明的一个方面，提出一种脂质体制备方法，包括以下步骤：
S1: 合成二亚乙基三胺五乙酸衍生物：将硬脂胺放入到氯仿中溶解形成4~10 ml的硬脂胺的氯仿溶液；将二亚乙基三胺五乙酸双酐放入到N,N-二甲基甲酰胺中溶解形成5~10ml的二亚乙基三胺五乙酸双酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液，再将硬脂胺的氯仿溶液缓慢加入到二亚乙基三胺五乙酸双酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，其中，硬脂胺与二亚乙基三胺五乙酸双酐的摩尔比为2～4：1，并在40 °C下搅拌2~3 h后，置于4 °C下冷却2~3 h，过滤得到二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺的白色沉淀，然后通过清洗剂清洗所述白色沉淀以除去未反应的二亚乙基三胺五乙酸双酐和硬脂胺；
S2: 合成具有两亲性分子的钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺：将六水氯化钆的水溶液加入到柠檬酸钠的水溶液中，其中，六水氯化钆与柠檬酸钠的摩尔比为1:2～4，得到柠檬酸钆溶液；用缓冲液调节所述柠檬酸钆溶液的pH至中性，再将调节至中性后的柠檬酸钆溶液缓慢加入到热的步骤S1中所述二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺水溶液中，其中金属钆与二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺含量的比例为1~3:1，在N2气氛中室温下搅拌反应2~4 h后过滤产物，沉淀物干燥过夜，即得到钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺；
S3：形成脂质体壳层：将质量比为3～5:1:1的卵磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸、及步骤S2中的所述钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺混合溶解于3~6 ml含有4 %乙醇的水溶液中，并加热至50~60 ℃形成热脂质溶液；
S4: 药物自组装：将质量比为4:1的月桂酸与硬脂酸比例溶于甲醇溶液制得浓度为4~8mg/ml的月桂酸与硬脂酸低共熔物的甲醇溶液；将浓度为4~8 mg/ml的月桂酸与硬脂酸低共熔物的甲醇溶液、浓度为2.5~4 mg/ml的吲哚菁绿的N,N-二甲基甲酰胺溶液、及浓度为2.5~4 mg/ml的阿霉素的二甲亚砜溶液混合，并逐滴加入到步骤S3中所述的热脂质溶液形成脂质溶液，并涡旋5~10 min；
S5：制备得到脂质体材料：将步骤S4中的脂质溶液在4 °C冰水浴中超声，恢复至室温后继续搅拌涡旋5~10 min，再通过超滤洗涤将步骤S4中的脂质溶液用超纯水多次洗涤，以除去未被包覆的吲哚菁绿、阿霉素和有机溶剂，得到均匀分散的温敏性脂质体材料。
优选地，所述步骤S1中的清洗剂包括丙酮及氯仿，且清洗的顺序为丙酮清洗和氯仿清洗。
优选地，所述步骤S2中缓冲液为盐酸与氢氧化钠的混合液或三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液。
优选地，所述步骤S2中调节至中性后的柠檬酸钆溶液的pH至为7~7.4。
优选地，所述步骤S5中脂质溶液在4 °C冰水浴中超声的超声时间为10~20 min。
优选地，所述步骤S5中超滤洗涤的截留分子量为10 KDa，转速为8000~10000 rpm。
优选地，所述步骤S5中得到的温敏性脂质体材料还需经过无表面活性剂的醋酸纤维素膜过滤。
优选地，所述无表面活性剂的醋酸纤维素膜过滤的过滤孔径为0.22~0.45 μm。
根据本发明的另一方面，提出一种脂质体的应用，将该脂质体应用于磁共振成像或光声成像。
此外，提出上述脂质体的另一种应用，将该脂质体应用于近红外光照射下肿瘤的光热和光动力治疗，或近红外光照射下实现化疗药物的可控释放。
本发明提供了一种脂质体的制备方法及其应用，其优点主要体现在：
（1）本发明通过自组装和纳米沉淀的方法制备得到具有核壳结构的脂质体，工艺简单、可重复性强。
（2）本发明中将两种天然脂肪酸低共熔物构成的温敏性脂质体与顺磁性钆类两亲分子相结合，通过包覆光热/光动力试剂吲哚菁绿、与化疗药物阿霉素，可形成可用于生物医学领域的磁共振成像的有机纳米粒子，且该脂质体颗粒尺寸均一，具有良好的水溶性、分散性和生物相容性。
（3）本发明中制备的脂质体在近红外光的照射下，荧光染料吲哚菁绿被激发产生局部高温可以实现光热和光动力协同治疗，同时使相变材料脂肪酸的低共熔物发生固液转变，从而释放出化疗药物阿霉素，最终提高癌症治疗的效果。
（4）本发明中在实现基于吲哚菁绿的荧光成像和光声成像的同时，脂质体表面共轭的钆离子可以实现体内肿瘤的磁共振成像，提高肿瘤诊断的准确性。
以下便结合实施例附图，对本发明的具体实施方式作进一步的详述，以使本发明技术方案更易于理解、掌握。
附图说明
图 1 为本发明中脂质体的制备方法流程图；
图2为ID@TSL-Gd的结构及在近红外光下响应释放示意图；
图3为ID@TSL-Gd的透射电子显微镜图像以及动态光散射图；
图4为ID@TSL-Gd在近红外辐射后的透射电子显微镜图像以及动态光散射图；
图5为ID@TSL-Gd体外磁共振成像及其强度-浓度关系图；
图6为ID@TSL-Gd体外光声成像及其强度-浓度关系图；
图7为ID@TSL-Gd的光热升温曲线图；
图8a为ID@TSL-Gd与DPBF混合后在808 nm，0.5 W/cm2的近红外光光照5 min时，DPBF在414 nm的紫外吸收特征峰的强度变化图；
图8b为单线态氧指示剂DPBF在414 nm波长处，并随着光照时间的增加紫外吸收特征峰逐渐减弱的变化图；
图9为ID@TSL-Gd在光照与无光照下，DOX释放率随时间变化图。
具体实施方式
一种脂质体的制备方法，是将钆类小分子与天然相转变材料有机结合形成可实现多模态成像的温敏性脂质体的过程，合成路线为：首先通过酰胺化反应和金属配位将钆与含两条十八烷基侧链的二亚乙基三胺五乙酸（DTPA）衍生物相结合，制得具有两亲性的钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬酯酰胺( Gd-DTPA-SA）化合物，然后将吲哚菁绿、阿霉素与脂肪酸的低共熔混合物逐滴加入预先加热的两亲性分子的溶液中，通过自组装与纳米沉淀的方式得到一种钆修饰的具有近红外响应释放性能的温敏性脂质体，如图1所示，包括如下具体步骤：
S1: 合成二亚乙基三胺五乙酸衍生物：将硬脂胺（SA）放入到氯仿中溶解形成硬脂胺的4~10 ml的氯仿溶液；将二亚乙基三胺五乙酸双酐放入到N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中溶解形成5~10 ml的二亚乙基三胺五乙酸双酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液，再将硬脂胺的氯仿溶液缓慢加入到二亚乙基三胺五乙酸双酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，其中，硬脂胺与二亚乙基三胺五乙酸双酐的摩尔比为2～4：1，并在40 °C下搅拌2~3 h后，置于4 °C下冷却2~3 h，过滤得到二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺的白色沉淀，然后通过清洗剂清洗所述白色沉淀以除去未反应的二亚乙基三胺五乙酸双酐和硬脂胺；在本发明的技术方案中，清洗剂包括丙酮及氯仿，且清洗的顺序为丙酮清洗和氯仿清洗；
S2: 合成具有两亲性分子的钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺：将六水氯化钆（GdCl3·6H2O）的水溶液加入到柠檬酸钠的水溶液中，其中，六水氯化钆与柠檬酸钠的摩尔比为1:2～4，得到柠檬酸钆溶液；用缓冲液调节所述柠檬酸钆溶液的pH至中性，调节至中性后的柠檬酸钆溶液的pH至为7~7.4；再将调节至中性后的柠檬酸钆溶液缓慢加入到热的步骤S1中所述二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺水溶液中，其中金属钆与二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺含量的比例为1~3:1，在N2气氛中室温下搅拌反应2~4 h后过滤产物，沉淀物干燥过夜，即得到钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺；在本发明的技术方案中，缓冲液为盐酸与氢氧化钠的混合液或三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液；
S3：形成脂质体壳层：将质量比为3～5:1:1的卵磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸（DSPE-PEG2000-FA）、及步骤S2中的所述钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺混合溶解于3~6 ml含有4%乙醇的水溶液中，并加热至50~60 ℃形成热脂质溶液；
S4: 药物自组装：将质量比为4:1的月桂酸与硬脂酸比例溶于甲醇溶液制得浓度为4~8mg/ml的月桂酸与硬脂酸低共熔物的甲醇溶液；将浓度为4~8 mg/ml的月桂酸与硬脂酸低共熔物的甲醇溶液、浓度为2.5~4 mg/ml的吲哚菁绿的N,N-二甲基甲酰胺溶液、及浓度为2.5~4 mg/ml的阿霉素的二甲亚砜（DMSO）溶液混合，并逐滴加入到步骤S3中所述的热脂质溶液形成脂质溶液，并强烈涡旋5~10min；
S5：制备得到脂质体材料：将步骤S4中的脂质溶液在4 °C冰水浴中超声10~20 min，恢复至室温后继续搅拌涡旋5~10 min，再通过超滤洗涤将步骤S4中的脂质溶液用超纯水多次洗涤，以除去未被包覆的吲哚菁绿、阿霉素和有机溶剂，得到均匀分散的温敏性脂质体（ID@TSL-Gd）材料；在本发明的技术方案中，超滤洗涤的截留分子量为10 KDa，转速为8000~10000 rpm。
最后，再将温敏性脂质体材料经过无表面活性剂的醋酸纤维素膜过滤，可得到大小均匀，分散性、水溶性和生物相容性良好的多功能脂质体，无表面活性剂的醋酸纤维素膜过滤的过滤孔径为0.22~0.45 μm。
以下通过具体实施例对本发明所述的技术方案给予进一步详细的说明：
一种脂质体制备方法，包括如下步骤：
S1: 合成二亚乙基三胺五乙酸衍生物：将0.054g、0.2mmol的硬脂胺（SA）溶解到氯仿中形成4ml的硬脂胺的氯仿溶液；将0.04g、0.11mmol的二亚乙基三胺五乙酸双酐溶解到N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中溶解形成5ml的二亚乙基三胺五乙酸双酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液，再将硬脂胺的氯仿溶液缓慢加入到二亚乙基三胺五乙酸双酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，并在40 °C下搅拌2 h后，置于4 °C下冷却2 h，过滤得到二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺的白色沉淀，然后通过丙酮洗涤一次后，再用氯仿洗涤除去未反应的二亚乙基三胺五乙酸和硬脂胺。
S2: 合成具有两亲性分子的钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺：将含0.049g的六水氯化钆（GdCl3·6H2O）溶于水，形成5ml的六水氯化钆水溶液；将含0.0647g的柠檬酸钠溶于水，形成5ml的柠檬酸钠水溶液；将5ml的六水氯化钆水溶液加入到5ml柠檬酸钠的水溶液中，得到柠檬酸钆溶液；用盐酸与氢氧化钠的混合液调节柠檬酸钆溶液的pH值至7.4；再将调节至中性后的柠檬酸钆溶液缓慢加入到热的步骤S1中所述二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺水溶液中，其中金属钆与二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺含量的比例为1:1，在N2气氛中室温下搅拌反应2 h后过滤产物，沉淀物干燥过夜，即得到0.115 g钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺。
S3：脂形成质体壳层：将15mg卵磷脂、5mg二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸（DSPE-PEG2000-FA）、及步骤S2中的所述5mg钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺混合溶解于6ml含有4%乙醇的水溶液中，伴随超声10min，并加热至50℃形成热脂质溶液；
S4: 药物自组装：将质量比为4:1的月桂酸与硬脂酸比例溶于甲醇溶液制得浓度为4mg/ml的月桂酸与硬脂酸低共熔物的甲醇溶液；将浓度为4 mg/ml的月桂酸与硬脂酸低共熔物的甲醇溶液2 ml、浓度为2.5 mg/ml的吲哚菁绿的N,N-二甲基甲酰胺溶液2ml、及浓度为2.5 mg/ml的阿霉素的二甲亚砜（DMSO）溶液1ml混合，并逐滴加入到步骤S3中所述的热脂质溶液形成脂质溶液，并强烈涡旋10 min；
S5：制备得到脂质体材料：将步骤S4中的脂质溶液在4 °C冰水浴中超声10 min，恢复至室温后继续搅拌涡旋10 min，再通过超滤洗涤将步骤S4中的脂质溶液用超纯水3次洗涤，以除去未被包覆的吲哚菁绿、阿霉素和有机溶剂，得到均匀分散的温敏性脂质体（ID@TSL-Gd）材料；在本发明的技术方案中，超滤洗涤的截留分子量为10 KDa，转速为10000 rpm。
最后，再将温敏性脂质体材料经过无表面活性剂的醋酸纤维素膜过滤，可得到大小均匀，分散性、水溶性和生物相容性良好的多功能脂质体，无表面活性剂的醋酸纤维素膜过滤的过滤孔径为0.22 μm；ID@TSL-Gd的结构及在在近红外光下响应释放示意图，如图2所示， ID@TSL-Gd的透射电子显微镜图像以及动态光散射图，如图3所示，ID@TSL-Gd在近红外辐射后的透射电子显微镜图像以及动态光散射图，如图4所示。
本发明结合图5-图9说明该脂质体的应用：
一方面，本发明制备的脂质体可应用于磁共振成像、近红外区域荧光成像或光声成像：
磁共振成像
分别配制含有不同Gd3+浓度的ID@TSL-Gd水溶液，使用临床磁共振扫描仪检测磁共振信号和T1值，如图5所示，随着ID@TSL-Gd中Gd3+浓度的增加，ID@TSL-Gd的磁共振信号逐渐增强，ID@TSL-Gd的弛豫率可以达到31.25 mM-1S-1，表明该ID@TSL-Gd纳米颗粒具有良好的磁共振成像效果。
光声成像
分别配制含有不同ICG浓度的ID@TSL-Gd水溶液200 μL于小试管中，然后用光声成像仪检测其光声信号，如图6所示，随着ID@TSL-Gd中ICG浓度的增加，ID@TSL-Gd纳米颗粒的光声信号逐渐增强，表明该ID@TSL-Gd纳米颗粒具有良好的光声成像效果。
此外，另一方面，本发明制备的脂质体可应用于近红外光照射下肿瘤的光热和光动力治疗，或近红外光照射下实现化疗药物的可控释放。
光热性能检测
分别配制含有不同ICG浓度的ID@TSL-Gd水溶液，将其置于激发波长为808nm，功率为0.5 W/cm2的近红外光下照射5 min，使用近红外成像仪记录溶液的温度变化，如图7所示，随着近红外光照射时间增加，ID@TSL-Gd水溶液的温度逐渐上升，含有的ICG浓度越大，最终达到的温度越高，表明该ID@TSL-Gd纳米颗粒具有良好的光热性能。
光动力性能检测
含有20 μg/ml ICG的ID@TSL-Gd溶液与1,3-二苯基异苯并呋喃（DPBF）混合，将其置于激发波长为808 nm，功率为0.5 W/cm2的近红外光下照射5 min，通过在指定的时间点检测DPBF在414 nm波长处的紫外吸收特征峰的变化，来证明该温敏性脂质纳米颗粒具有良好的光动力性能，如图8a所示；随着光照时间的增加，单线态氧指示剂DPBF在414nm波长处的紫外吸收特征峰逐渐减弱，DPBF在414 nm的吸收值随光照时间变化的线性关系，如图8b所示，表明该ID@TSL-Gd纳米颗粒在近红外光下能持续产生单线态氧，具有良好的光动力性能。
近红外光触发DOX释放检测
体外DOX释放曲线通过测量水中DOX的荧光信号变化获得。将2 ml ID@TSL-Gd溶液（DOX浓度为30 μg/ ml），在808 nm，0.5W / cm 2的近红外光（2 W，Leimai，China）下，分别进行100 min的激光照射或不进行照射，通过检测水溶液中的荧光强度变化确定DOX在各个辐射时间点的释放率，DOX释放率利用公式（Ft-F0）/（F100-F0）×100％进行计算，其中F0表示起始点处ID@TSL-Gd水溶液的初始DOX 荧光强度，Ft表示各辐射时间点的DOX 荧光强度，F100表示相同浓度的游离DOX 荧光强度，如图9所示，近红外光照射下的ID@TSL-Gd纳米颗粒在100min内释放DOX的量远远高于未进行照射的ID@TSL-Gd纳米颗粒，表明该ID@TSL-Gd纳米颗粒具有良好的近红外光控制释放药物的性能。
综上所述，本发明将两种天然脂肪酸低共熔物构成的温敏性脂质体与顺磁性钆类两亲小分子相结合，通过包覆光热/光动力试剂ICG与化疗药物DOX，形成可用于生物医学领域的磁共振成像的有机纳米粒子，克服钆类小分子生物相容性差，组织特异性低，毒性大等缺陷，同时，利用近红外光照射间接引发脂肪酸发生相转变，可控地释放出化疗药物，实现了多模态成像引导的协同治疗。
应该注意的是，上述实施例对本发明进行说明而不是对本发明进行限制，并且本领域技术人员在不脱离所附权利要求的范围的情况下可设计出替换实施例。
Claims (10)
1.一种脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1: 合成二亚乙基三胺五乙酸衍生物：将硬脂胺放入到氯仿中溶解形成4~10 ml的硬脂胺的氯仿溶液；将二亚乙基三胺五乙酸双酐放入到的N,N-二甲基甲酰胺中溶解形成5~10ml二亚乙基三胺五乙酸双酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液，再将硬脂胺的氯仿溶液缓慢加入到二亚乙基三胺五乙酸双酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，其中，硬脂胺与二亚乙基三胺五乙酸双酐的摩尔比为2～4：1，并在40 °C下搅拌2~3 h后，置于4 °C下冷却2~3 h，过滤得到二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺的白色沉淀，然后通过清洗剂清洗所述白色沉淀以除去未反应的二亚乙基三胺五乙酸双酐和硬脂胺；
S2: 合成具有两亲性分子的钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺：将六水氯化钆的水溶液加入到柠檬酸钠的水溶液中，其中，六水氯化钆与柠檬酸钠的摩尔比为1:2～4，得到柠檬酸钆溶液；用缓冲液调节所述柠檬酸钆溶液的pH至中性，再将调节至中性后的柠檬酸钆溶液缓慢加入到热的步骤S1中所述二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺水溶液中，其中金属钆与二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺含量的比例为1~3:1，在N2气氛中室温下搅拌反应2~4 h后过滤产物，沉淀物干燥过夜，即得到钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺；
S3：形成脂质体壳层：将质量比为3～5:1:1的卵磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸、及步骤S2中的所述钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺混合溶解于3~6 ml含有4%乙醇的水溶液中，并加热至50~60 ℃形成热脂质溶液；
S4: 药物自组装：将质量比为4:1的月桂酸与硬脂酸比例溶于甲醇溶液制得浓度为4~8mg/ml的月桂酸与硬脂酸低共熔物的甲醇溶液；将浓度为4~8 mg/ml的月桂酸与硬脂酸低共熔物的甲醇溶液、浓度为2.5~4 mg/ml的吲哚菁绿的N,N-二甲基甲酰胺溶液、及浓度为2.5~4 mg/ml的阿霉素的二甲亚砜溶液混合，并逐滴加入到步骤S3中所述的热脂质溶液形成脂质溶液，并涡旋5~10 min；
S5：制备得到脂质体材料：将步骤S4中的脂质溶液在4 °C冰水浴中超声，恢复至室温后继续搅拌涡旋5~10 min，再通过超滤洗涤将步骤S4中的脂质溶液用超纯水多次洗涤，以除去未被包覆的吲哚菁绿、阿霉素和有机溶剂，得到均匀分散的温敏性脂质体材料。
2.根据权利要求1所述的脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的清洗剂包括丙酮及氯仿，且清洗的顺序为丙酮清洗和氯仿清洗。
3.根据权利要求1所述的脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中缓冲液为盐酸与氢氧化钠的混合液或三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液。
4.根据权利要求1所述的脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中调节至中性后的柠檬酸钆溶液的pH至为7~7.4。
5.根据权利要求1所述的脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S5中脂质溶液在4°C冰水浴中超声的超声时间为10~20 min。
6.根据权利要求1所述的脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S5中超滤洗涤的截留分子量为10 KDa，转速为8000~10000 rpm。
7.根据权利要求1所述的脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S5中得到的温敏性脂质体材料还需经过无表面活性剂的醋酸纤维素膜过滤。
8.根据权利要求7所述的脂质体的制备方法，其特征在于：所述无表面活性剂的醋酸纤维素膜过滤的过滤孔径为0.22~0.45 μm。
9.权利要求1所述的脂质体的应用，其特征在于：将该脂质体应用于磁共振成像或光声成像。
10.权利要求1所述的脂质体的应用，其特征在于：将该脂质体应用于近红外光照射下肿瘤的光热和光动力治疗，或近红外光照射下实现化疗药物的可控释放。
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