CN103099781A - 脂质体、含其的药物组合物和通过用其递送活性剂的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供脂质体、含其的药物组合物和通过用其递送活性剂的方法。所述脂质体包括弹性蛋白样多肽。

Description

脂质体、含其的药物组合物和通过用其递送活性剂的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2011年10月19日在韩国知识产权局提交的韩国专利申请No.10-2011-107055的权益，其公开内容全部通过参考引入本文。
技术领域
本公开内容涉及包括弹性蛋白样多肽(ELP)的脂质体、包括该脂质体的药物组合物和通过使用该脂质体将活性剂递送到靶部位的方法。
背景技术
脂质体由封闭水性(aqueous)内部区室的至少一个脂双层膜组成。脂质体可以膜类型及尺寸为特征。小单层泡囊(small unilamellar vesicle,SUV)具有单层膜，并且直径典型地在20-50nm范围内。大单层泡囊(large unilamellarvesicle,LUV)典型地大于50nm。寡层大泡囊(oligolamellar large vesicle)和多层泡囊具有多个、通常同心的膜层，并且典型地大于100nm。具有若干个非同心膜(即，较大泡囊内包含的若干个较小的泡囊)的脂质体称作多泡泡囊。
将脂质体配制为携带包含于水性内部空间内(水溶性活性剂)或分配到脂双层中(水不溶性活性剂)的药物或其它活性剂。
在血流中具有短半衰期的活性剂特别适合于经由脂质体递送。例如，已知许多抗肿瘤剂在血流中具有短的半衰期，并且因此，它们的胃肠外使用是不可行的。然而，脂质体经由血流来部位特异性递送活性剂的用途严重地受限于通过网状内皮系统(RES)的细胞从血液中快速清除脂质体。
除非脂质体膜中形成洞，除非所述膜降解或溶解，或者除非所述膜温度升高至相变温度，脂质体通常不渗漏。受试者中的靶部位的温度升高(过热)可以将脂质体的温度提高到相变温度或更高，并且因此脂质体内容物可以被释放。该方法可用于治疗剂的选择性递送。然而，在脂质体的相变温度显著高于正常组织温度的情况下，此技术是受限的。
因此，设计能够有效递送活性剂的脂质体配制剂(formulation)是合乎需要的。
发明内容
提供包括弹性蛋白样多肽(ELP)的脂质体。
提供包括脂质体的药物组合物，所述脂质体包括ELP和活性剂。
提供通过使用脂质体将活性剂有效递送到个体体内的靶部位的方法。
其它方面将在以下描述中部分地阐明，并且部分地，将从所述描述明晰，或者可通过所提供的实施方式的实践获悉。
附图说明
由结合附图考虑的实施方案的以下描述，这些和/或其它方面将变得明晰和更容易理解，其中：
图1是显示钙黄绿素从以约0.55:约55:约2:约20或约0.55:约55:约2:约40的摩尔比(摩尔比例，molar ratio)使用硬脂酰-VPGVG VPGVG VPGVGVPGVG VPGVG VPGVG-NH2(SA-V6-NH2)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC)、[1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](铵盐)](DSPE-PEG-2000)和胆固醇在实施例1中制备的脂质体中的温度释放谱(profile)的图，其中使用按全部脂质计20%和40%的胆固醇；
图2是显示钙黄绿素从根据实施例2通过以约0.55:约55:约2:约20的摩尔比使用SA-V6-NH2、主要脂质(primary lipid)分子(DPPC/1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)=0/100、25/75、50/50、75/25、100/0，按摩尔比计)、DSPE-PEG和胆固醇制备的脂质体中的温度释放谱的图；
图3是显示多柔比星(doxorubicin,DX)从以约0.55:约55:约2:约20的摩尔比使用SA-V3-NH2:主要脂质(DSPC:DPPC=25:75，按摩尔比计)、DSPE-PEG和胆固醇在实施例3中制备的脂质体中的温度释放谱的图；
图4是显示DX从以约0.55:约55:约2:约20的摩尔比使用SA-V3-NH2、DPPC、DSPE-PEG和胆固醇在实施例4中制备的脂质体和溶血脂质(lysolipid)热敏感性脂质体(LTSL)中的温度释放谱的图；
图5是比较以约0.55:约55:约2:约20的摩尔比使用SA-V3-NH2:DPPC:DSPE-PEG和胆固醇在实施例5中制备的脂质体与LTSL在37℃的温度下的稳定性的图；
图6是显示通过以0.55:55:2:20的摩尔比使用SA-V3-NH2、主要脂质(DSPC/DPPC=25/75，按摩尔比计)、DSPE-PEG和胆固醇在实施例6中制备的脂质体在37℃、40℃、42℃或45℃的各温度下的DX释放动力学的图；
图7是显示在实施例7的方法中在37℃、42℃或45℃的温度下测量的根据实施例4中制备的脂质体中含有的药物量的细胞存活力的图；
图8是显示根据温度的在实施例8的方法中测量的由于实施例4的DX包载脂质体(DX量：10ug/mL)所致的DX的细胞摄取的图；及
图9是显示在根据实施例4的DX药物包载前的脂质体和具有根据实施例4包载的DX药物的脂质体的透射电子显微术(TEM)的图像的图。
具体实施方式
根据本发明的一个实施方案，脂质体包括脂双层；与疏水性部分(moiety)缀合的弹性蛋白样多肽(ELP)；和脂双层稳定剂，其中所述疏水性部分包装在所述脂双层中。
如本文中所使用的术语“脂双层”指由两层脂质分子构成的膜。脂质层可以具有与天然存在的双层例如细胞膜、核膜或病毒包膜相似的厚度。脂双层厚度的例子可以是10nm或更小，例如约1nm至约9nm、约2nm至约8nm、约2nm至约6nm、约2nm至约4nm、或约2.5nm至约3.5nm。脂双层是将离子、蛋白质和其它分子保持在需要它们的地方并且防止它们扩散到它们不应处于的区域中的屏障。天然双层通常主要由磷脂构成。磷脂具有亲水性头部和两个疏水性尾部。当磷脂暴露于水时，它们自身排列成两层的片层(双层)，其中它们所有的尾部指向片层中央。此双层的中央几乎不含水，而且还排除溶解于水中但不溶解于油中的分子，如糖或盐。具有某些头基的磷脂可以改变双层的表面化学。此外，脂质尾部可以影响膜性质，例如通过决定双层的相。双层可以在较低温度下采取固体凝胶相态，但是在较高温度下经历向流体态的相变。双层内的脂质包装也影响其机械性质，包括其对伸展和弯曲的阻力。生物膜通常包括与磷脂不同的几类脂质。动物细胞中特别重要的例子是胆固醇，其帮助加强双层并降低其透性(permeability)。
用于构建脂双层的“脂质分子”可以是具有亲水性头部和疏水性尾部的分子。脂质分子可以具有14至50个碳原子。脂质分子可以是磷脂。磷脂可以具有16至24个碳原子。磷脂可以是选自如下的至少一种：磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺及其组合，其中所述至少一种磷脂具有两个酰基基团。此外，磷脂可以具有约10℃至约70℃，例如约38至约45℃的相变温度。磷脂的酰基基团可以是饱和的或不饱和的。磷脂可以是两种或更多种磷脂分子的混合物。具有各种相变温度的脂双层可以由于两种或更多种磷脂分子的混合物而生成。
磷脂分子可以具有两个酰基基团，例如选自如下的酰基基团：C12饱和链磷脂(Tc=10℃)、C14饱和链磷脂(Tc=24℃)、C16饱和链磷脂(Tc=41℃)、C18饱和链磷脂(Tc=55℃)、C20饱和链磷脂(Tc=65℃)、C22饱和链磷脂(Tc=70℃)、及其组合。类似地，可以使用的其它常见的磷脂包括磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂和神经节苷脂，它们如同磷脂酰胆碱一样具有取决于其酰基链长度以类似的方式变化的相变温度。
C16饱和链磷脂的例子可以是二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)。DPPC是具有约41.5℃的双层转变温度的饱和链(C16)磷脂。C18饱和链磷脂的例子可以是1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)。DSPC是具有约55.10℃的双层转变温度的饱和链(C18)磷脂。
可以使用不是磷脂的其它膜形成材料。可以形成固相膜的示例性材料包括勃拉(bola)脂质或细菌脂质。另外，可以采用包括水溶性聚合物(例如，聚乙二醇)和水不溶性聚合物(例如，聚环氧丙烷和聚乙基乙烯(polyethylethylene))的嵌段共聚物。
如本文中所使用的，脂质体双层中的“主要脂质(primary lipid)”是脂质体双层材料的主要脂质组分。因此，例如，在由70摩尔%磷脂和30摩尔%胆固醇构成的脂质体双层中，磷脂是主要脂质。
脂双层可以随温度具有不同的相行为。在给定的温度下，脂双层可以液或凝胶(固)相存在。所有脂质都具有它们显示从凝胶相到液相的转变的特征性温度。在这两种相中，防止脂质分子翻转(flip-flop)双层，但是在液相双层中，给定的脂质将与其相邻物交换位置。此随机步行交换(walk exchange)允许脂质扩散，并且因此徘徊通过膜的表面。与液相双层不同，凝胶相双层中的脂质在适当的位置锁定。
脂双层的相行为很大程度上由相邻的脂质分子之间的范德华相互作用的引力的强度决定。较长尾部的脂质具有更多的相互作用面积，提高该相互作用的强度且因此降低脂质移动性。因此，在给定的温度下，短尾部脂质将比其它方面相同的(otherwise identical)长尾部脂质更具流动性。转变温度还可受到脂质尾部的不饱和程度的影响。不饱和的双键可以在烷链中产生结，破坏脂质包装。这种破坏在双层内产生额外的自由空间，其允许相邻链中的额外柔性。
大多数天然的膜是不同脂质分子的复杂混合物。如果组分中的一些在给定的温度下是液体，而其它处于凝胶相，则两个相可以在空间上分开的区域中共存，很像飘浮于海洋中的冰山。
如本文中所使用的，术语“相变温度”指材料从固相变化成液相(也称作熔解温度)或从液相变化成固相的温度。材料包括脂质分子、不包括与疏水性部分缀合的ELP的脂双层或脂质体、或包括与疏水性部分缀合的ELP的脂双层或脂质体。
脂质体包括与疏水性部分缀合的ELP，其中疏水性部分包装在脂双层中。
疏水性部分各自通过被包装在脂双层中而构成脂双层。疏水性部分可以是具有将与其缀合的ELP固定于脂双层的性质，例如疏水性质的分子。疏水性部分可以是构成脂双层的相同脂质分子或其它脂质分子。
疏水性部分可以包括仅含有疏水区的分子或含有亲水和疏水区两者的两亲性分子。在含有亲水和疏水区两者的两亲性分子中，疏水区可以向脂双层内部排列，和亲水区可以向脂双层外部排列，并且与ELP连接。在这里，“向外部”指远离脂双层中央，也就是说，向脂质体内或向脂质体外的方向。
疏水性部分可以是天然存在于生物膜中的脂质分子、或可以构成脂双层，即使不天然存在于生物膜中的脂质分子。
天然存在于生物膜中的脂质分子可以选自磷脂或其衍生物、固醇或其衍生物、鞘脂或其衍生物、及它们的组合。磷脂或其衍生物可以选自磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、及其组合。固醇或其衍生物可以是胆固醇或其衍生物、或鲨烯或其衍生物。鞘脂可以是鞘磷脂或其衍生物、或神经节苷脂或其衍生物。磷脂、固醇、或鞘脂包括在体内合成过程期间生成的中间体或前体。例如，疏水性部分包括磷酸甘油酯、鞘氨醇、神经酰胺、或脑苷脂。
疏水性部分可以是饱和或不饱和的烃、饱和或不饱和的酰基分子、或饱和或不饱和的烷氧基分子。
疏水性部分和ELP的缀合可以通过在生理学和病理学条件下的不可切割连接或者通过可切割连接进行。可切割连接的例子可以是由pH可切割接头(linker)、热可切割接头、辐射可切割接头、或在水性溶液(水溶液，aqueoussolution)中切割的接头介导的连接。
疏水性部分可以通过与N端的氮原子或C端的羰基(-C(O)-)基团结合而结合到ELP。疏水性部分可以通过与ELP侧链上选自如下的官能团的相互作用来缀合：氨基基团、羰基基团、羟基基团、硫醇基团、及其组合。疏水性部分可以通过与ELP的氮原子的胺键或酰胺键与ELP缀合。疏水性部分可以通过与ELP的C端的羰基基团的酰胺或酯键与ELP缀合。
疏水性部分的疏水区可以具有4至30个碳原子，例如，14至24个碳原子或16至24个碳原子。例如，疏水性部分可以是肉豆蔻酰基(C14)、棕榈酰基(C16)、硬脂酰基(C18)、花生四烯酰基(arachidonyl)(C20)、山萮酰基(behenoyl)(C22)或木蜡酰基(lignoceroyl)(C24)。疏水性部分可以通过疏水效应而包装在脂双层中，并且因此，与疏水性部分缀合的ELP可以固定于脂质体上。
如本文中所使用的，术语“弹性蛋白样多肽”指取决于温度经历构象变化的一类氨基酸聚合物。在本发明的一个实施方案中，ELP可以是呈现出逆相变行为的聚合物。逆相变行为表明ELP在低于逆转变温度(Tt)的水性溶液中是可溶的，但是ELP随着将温度提高得高于Tt而不可溶。通过提高温度，ELP从高度可溶性的伸长链转变成具有很大降低的溶解度的紧密折叠的聚集体。这样的逆相变可以随温度升高由具有更多β-转角结构和扭曲的β-结构的ELP结构诱导。在一些情况中，ELP可以基于相变温度限定。例如，在一些情况中，相变可以在约10至约70°C的范围内的温度发生。
当ELP与脂双层的区室连接时，由于ELP随温度从低于ELP的Tt的温度升高到更高的温度而收缩和自组装(self-assembly)，逆相变行为可以破坏脂双层。破坏脂双层可以提高脂双层的透性。因此，包括脂双层的脂质体中所包含的活性剂可以较高的透性从脂质体释放。然而，本发明的一个或多个实施方案不限于任何特定的机制。
由于ELP的逆相变行为所致的对脂质体中的脂双层的破坏可以根据脂双层的脂质分子或脂双层的相变温度而不同。脂双层在相变温度或之下以凝胶相，和在相变温度或之上以液(晶)相存在。当脂双层以凝胶相存在时，虽然ELP结构由于逆相变行为而改变为具有β-转角结构，但是脂双层的破坏可以不发生或者可以是有限的。另一方面，当脂双层以液相存在时，因为ELP结构由于逆相变行为而改变为具有β-转角结构，所以可以诱导脂双层的破坏。换言之，当脂双层以液相而不是以凝胶相存在时，逆相变更有效地诱导脂双层的破坏。因此，可以通过调节脂质体的脂双层的相变温度或ELP的逆相变温度来控制包含于脂质体中的活性剂的释放温度。例如，包括ELP的脂双层或脂质体的相变温度可以在约10至约70°C，例如约39至约45°C的范围内。
与疏水性部分缀合的ELP可以与疏水性部分的末端，而不是在侧链上缀合。而且，由于与疏水性部分缀合的ELP与末端，而不是在侧链上缀合，因此ELP可以与具有一条链的疏水性部分缀合。例如，疏水性部分可以通过与N端的氮原子或C端的羰基(-C(O)-)基团结合而与ELP缀合。疏水性部分可以通过与ELP的氮原子的胺键或酰胺键或者通过与ELP的C端的羰基基团的酰胺或酯键与ELP缀合。在这里，疏水性部分可以具有4至30个碳原子，例如，14至24个碳原子或16至24个碳原子。
与不包括ELP，但仅是脂双层的脂质体相比，可以使用根据一个或多个实施方案的包括ELP的脂质体来有效释放脂质体中包含的活性剂。当仅利用脂双层的脂质分子的相变时，通过脂质分子的分散诱导脂质体中的活性剂的释放。同时，当使用包括ELP的脂质体时，可以通过ELP的逆相变行为诱导活性剂的进一步释放，换言之，可以通过由于ELP的收缩和组装所致的破坏的脂双层诱导活性剂的进一步释放。在这里，活性剂可以包含在脂质体的内部空间中、脂双层的内部中、脂双层的表面上、或者它们的组合之中或之上。
脂质体包括稳定剂。在包括ELP的脂质体的情况中，当用于提高脂双层的稳定性的脂双层稳定剂存在于脂双层中时，可以有效释放活性剂。稳定剂可以是具有脂双层的相变温度或更高、优选更高的脂质。脂双层稳定剂可以是选自如下的脂双层稳定剂：类固醇或其衍生物、鞘脂或其衍生物、及它们的组合。脂双层稳定剂可以是具有使得实现对脂双层的掺入(incorporationinto a lipid bilayer)的性质的类固醇。如本文中所使用的，术语“类固醇”指包括含有彼此连接的4个环烷烃环(换言之，从左到右称为环A、B和C的3个环己烷环和1个环戊烷环(D环))的特定排列的甾烷核心或自其衍生的骨架的一类有机化合物。在这里，“自其衍生的骨架”包括插入甾烷骨架中的不饱和键。类固醇在附着至4个环核心的官能团和环的氧化状态方面可以变化。例如，类固醇可以包括在环上的亲水性官能团。例如，类固醇可以具有羟基基团。类固醇可以是固醇。术语“固醇”是具有在位置C-3处的羟基基团且具有自胆甾烷衍生的骨架的一类类固醇。在这里，术语“衍生的骨架”包括插入胆甾烷骨架中的不饱和键。类固醇包括在植物、动物和真菌中找到的类固醇。例如，所有类固醇可以在细胞中如在动物和真菌中自羊毛固醇或如在植物中自环阿屯醇生成。类固醇包括胆固醇或其衍生物。在这里，“衍生物”意指维持待在脂双层中引入的性质的胆固醇衍生物。稳定剂可以是选自如下的稳定剂：胆固醇、谷固醇、麦角固醇、豆固醇、4,22-豆甾二烯-3-酮、豆固醇乙酸酯、羊毛固醇、环阿屯醇、及其组合。
当包括不含ELP的简单脂双层的脂质体含有稳定剂例如胆固醇时，可以显著降低活性剂的释放。因此，在包括ELP的脂质体的情况中，通过使用脂双层稳定剂，可以在维持脂双层或脂质体的稳定性的同时有效地释放活性剂。特别地，在窄的温度范围内，例如在约39至约45℃的范围内，药物可以被有效地释放。
ELP可以通过其氨基酸序列限定。例如，部分或整个ELP可以包括一种(个)或多种(个)重复单元，该重复单元可以选自VPGXG(SEQ NO:1)、PGXGV(SEQ NO:2)、GXGVP(SEQ NO:3)、XGVPG(SEQ NO:4)、GVPGX(SEQ NO:5)、及其组合，其中V是缬氨酸，P是脯氨酸，G是甘氨酸，且X是除了脯氨酸外的任何天然的或非天然的氨基酸。在这里，各重复单元中的X可以是相同或不同的氨基酸。重复单元可以通过不消除获得的ELP的相变性质的一个或多个氨基酸分开，或者末端部分可以变为一个或多个氨基酸或其它接头部分。重复单元对其它氨基酸或接头部分的比可以是重复单元和其它氨基酸两者中的约0.1至约99.9%的重复单元。选择的重复单元可以重复两次或更多次，例如，2至200次。
在本发明的一个实施方案中，ELP可以是嵌段(block)，其中VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、GVPGX或其组合是串联地(tandemly)重复的，或者ELP可以包括嵌段，其中VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、GVPGX或其组合是串联地重复的。只要维持逆相变行为，ELP可以由VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、GVPGX或其组合构成，并且可以包括分子中的另一部分，例如接头和封闭基团(blocking group)。ELP的N端或C端可以与疏水性部分连接。此外，疏水性部分可以通过与ELP中的氨基酸残基的侧链之中的反应性基团连接与ELP缀合。反应性基团可以是氨基基团、羟基基团、硫醇基团、或羧基基团。不与疏水性部分连接的另一末端可以是封闭的或未封闭的。例如，当疏水性部分和ELP经由ELP的N端连接时，ELP的C端的羧基基团可以是封闭的或未封闭的。可以通过与可以是生物相容的、非免疫原性的、有助于特异性递送、或者可避免生物学降解系统的材料连接或相互作用来实现封闭。例如，可以通过结合氨基基团和ELP的C端的羧基基团形成的酰胺键实现封闭。氨基基团可以是氨分子、伯胺、仲胺、或叔胺。伯、仲或叔胺可以各自具有1至10个碳原子，例如，1至6个碳原子。X可以是缬氨酸或丙氨酸。
重复单元可以一个或多个整数重复数各自独立包括在ELP中。重复数可以各自独立是2至200、2至100、2至80、2至60、2至40、2至10、2至12、2至8、2至6、4至100、8至80、10至60、12至40、20至40、4至10、4至8、或4至6的整数。
在脂质体中，脂双层的主要脂质分子:与疏水性部分缀合的ELP的摩尔比可以根据所选择的脂双层的性质和与疏水性部分缀合的ELP的性质适当地选择。例如，主要脂质分子:与疏水性部分缀合的ELP的摩尔比可以是约50至约99.9:约0.1至约50。例如，主要脂质分子(DPPC或DPPC和DSPC的混合物):与疏水性部分(棕榈酰(VPGXG)n或硬脂酰(VPGXG)n，其中n是2至12)缀合的ELP的摩尔比可以是约50至约99.0:约0.1至约50。
在脂质体中，脂双层可以包括在脂双层中间的脂双层稳定剂以提高脂双层的稳定性。稳定剂可以是具有比脂双层的相变温度高的相变温度的脂质。稳定剂可以是固醇或糖脂。固醇可以是胆固醇或其衍生物。稳定剂，例如胆固醇可以帮助加强脂双层，并且降低其透性。因此，稳定剂，例如胆固醇使脂质体能够在正常的体温下稳定存在。主要脂质分子:稳定剂例如胆固醇的摩尔比可以是约50至约99.9:约0.1至约50。主要脂质分子:稳定剂的比可以是约50至约99.9:约0.1至约50，例如约50至约99.9:约3至约50、约50至约99.9:约5至约50、约50至约99.9:约7至约50、约50至约99.9:约9至约50、约50至约99.9:约11至约50、约50至约99.9:约15至约50、约50至约99.9:约20至约50、约50至约99.9:约20至约35、约50至约99.9:约20至约30、约50至约99.9:约25至约30、约50至约99.9:约25至约50、约50至约99.9:约30至约50、约50至约99.9:约35至约50、约50至约99.9:约1至约35、约50至约99.9:约3至约30、约50至约99.9:约5至约25、约50至约99.9:约7至约20、或约50至约99.9:约9至约15。
脂质体由于由其被肝和脾(内皮系统或网状内皮系统(RES)的器官)的巨噬细胞快速摄取所致的其在血液循环中相对较短的半衰期而可能不在渗漏的肿瘤组织中积累。脂质体制备物(preparation)可以设计为避免快速的RES摄取，并且因此增加循环时间。脂双层可以含有，例如，用亲水性聚合物衍生化(derivatize)的脂质衍生物，例如磷脂衍生物。亲水性聚合物可以选自聚乙二醇(PEG)、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、寡糖、及其混合物。衍生物可以是与PEG缀合的C4-C30，例如C16-C24的磷脂。衍生物可以是DPPC-PEG或DSPE-PEG。PEG可以具有约180至约50,000Da的分子量。
脂质体可以是单层泡囊(SUV)或多泡泡囊。脂质体的直径可以是约50nm至约500nm，例如约50nm至约400nm、约50nm至约300nm、约50nm至约200nm、约100nm至约500nm、约100nm至约400nm、约100nm至约300nm、或约100nm至约200nm。
在本发明的一个实施方案中，脂双层可以包括磷脂、与疏水性部分缀合的ELP、用亲水性聚合物衍生化的磷脂衍生物、和胆固醇。脂双层中的磷脂、与疏水性部分缀合的ELP、用亲水性聚合物衍生化的磷脂衍生物和胆固醇如上文所提到的。
在所述实施方案中，磷脂:具有疏水性部分的ELP:用亲水性聚合物衍生化的磷脂衍生物:胆固醇可以具有约50至约99.9:约0.1至约50:约0至约10:约0.1至约50，例如约50至约99.9:约0.1至约50:约0至约10:约20至约50、约50至约99.9:约0.1至约50:约0至约10:约20至约30、约50至约99.9:约0.1至约50:0至约10:约25至约30、约50至约99.9:约0.1至约50:约0至约10:约20至约50、约50至约99.9:约0.1至约50:约0至约10:约20至约30、或约50至约99.9:约0.1至约50:约0至约10:约25至约30的摩尔比。
磷脂可以是DPPC。磷脂可以是DPPC和DSPC的混合物。磷脂可以具有约1:约0至约0.5，例如，约1:约0.1至约0.5的DPPC:DSPC摩尔比。与疏水性部分缀合的ELP可以包括：具有酰基基团的疏水性部分、包括(VPGXG)n或(GVPGX)m的ELP，其中X是除了脯氨酸外的氨基酸，且n或m是1或更大的整数。X可以是缬氨酸或丙氨酸。n可以是1至12，且m可以是1至12。与疏水性部分缀合的ELP可以是硬脂酰-(GVPGX)2-6。硬脂酰-(GVPGX)2-6的羧基端的羧基基团可以是封闭的或不封闭的。封闭可以通过羧基基团和氨基基团(例子：氨)之间形成的酰胺键来实现。
用亲水性聚合物衍生化的磷脂衍生物可以是DPPC-PEG或DSPE-PEG。PEG可以具有约180Da至约50,000Da的数均分子量。
根据一个实施方案的脂质体可以具有为约10℃至约70℃，例如约10℃至约60℃、约10℃至约55℃、约10℃至约45℃、约20℃至约60℃、约20℃至约55℃、约25℃至约45℃、约30℃至约45℃、约35℃至约45℃的相变温度。可以通过主要脂质分子的碳链长度、不饱和键的数目、脂质分子的混合物、及它们的组合调节相变温度。例如，当将具有比DPPC的相变温度高的相变温度的DSPC与具有较低相变温度的DPPC混合时，由DPPC和DSPC混合物构成的脂质体可以具有比仅由DPPC构成的脂质体的相变温度高的相变温度。脂质体在室温下可以处于凝胶相。
根据一个实施方案的脂质体可以进一步含有活性剂。活性剂可以包载于脂质体内部内。活性剂可以包载于脂质体的脂双层中。
活性剂可以是药理学活性剂或诊断剂。药理学活性剂可以选自麻醉剂、抗组胺剂、抗肿瘤药(antineoplastics)、抗溃疡药、抗癫痫发作剂(anti-seizureagent)、肌肉松弛药、免疫抑制剂、抗感染剂、非类固醇抗炎剂、成像剂、营养剂、及其组合。活性剂可以选自甲氨蝶呤、多柔比星、表柔比星(epirubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、依托泊苷(etoposide)、艾力替新(ellipticine)、喜树碱(camptothecin)、帕利他塞(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、顺铂(cisplatin)、泼尼松(prednisone)、甲基泼尼松(methyl-prednisone)、布洛芬(ibuprofen)、及其组合。
根据本发明的另一个实施方案，用于对受试者中的靶部位递送活性剂的药物组合物包括药学可接受载体或稀释剂、和含有活性剂的脂质体。脂质体包括脂双层；与疏水性部分缀合的ELP；和稳定剂，其中疏水性部分可以包装在脂双层中。
药学可接受载体或稀释剂可以是本领域中公知的。载体或稀释剂可以选自水，例如盐水或无菌水，林格氏(Ringer’s)溶液、缓冲盐水、右旋糖溶液、麦芽右旋糖(maltodextose)溶液、甘油、乙醇、及其组合。
上文已经描述了脂质体。
脂质体可以分散于水性介质中。水性介质可以包括生理盐水或PBS。
活性剂可以包载于脂质体内部内。活性剂可以包载于脂质体的脂双层中。脂质体可以具有约39至约45℃的相变温度。脂质体在室温下可以处于凝胶相。
活性剂可以是药理学活性剂或诊断剂。药理学活性剂可以选自如下：麻醉剂、抗组胺剂、抗肿瘤药、抗溃疡药、抗癫痫发作剂、肌肉松弛药、免疫抑制剂、抗感染剂、非类固醇抗炎剂、成像剂、营养剂及其组合。活性剂可以选自如下：甲氨蝶呤、多柔比星、表柔比星、柔红霉素、长春新碱、长春碱、依托泊苷、艾力替新、喜树碱、帕利他塞、多西他赛、顺铂、泼尼松、甲基泼尼松、布洛芬、及其组合。
根据本发明的另一个实施方案，对受试者中的靶部位递送活性剂的方法包括：对受试者施用含有活性剂的脂质体，其中各脂质体包括脂双层、与疏水性部分缀合的ELP、和稳定剂，其中疏水性部分包装在脂双层中；和加热受试者的靶部位以从靶部位的脂质体中释放活性剂。
所述方法包括对受试者施用含有活性剂的脂质体。上文已经描述了含有活性剂的脂质体。各脂质体可以具有约39至约45℃的相变温度。
施用可以是胃肠外施用。例如，胃肠外施用可以是静脉内、皮内、肌肉内、腔内(腹腔、关节或眼)或直接注射。直接注射可以涉及直接注射到患病部位诸如肿瘤部位中。可以静脉内施用脂质体，并且由此通过血流带到靶部位诸如肿瘤部位。靶部位可以具有渗漏性质。
所述方法包括加热受试者的靶部位以从靶部位的脂质体中释放活性剂。加热可以是由于诱导过热的临床方法所致或者可以涉及发炎的(inflamed)身体部分与身体的其它部分相比固有地更高的温度。诱导过热的临床方法可以通过直接传热，例如，盆中的热液体介质，例如在水中接触身体，照射超声，例如聚焦于靶部位的高强度超声，施加磁场例如放大的磁场，施加微波和/或射频进行。靶部位可以是病理症状存在，例如，肿瘤部位(即，实体瘤)，或炎症存在的区域。加热可以是加热至约38℃至约45℃的温度。
活性剂可以是药理学活性剂或诊断剂。药理学活性剂可以选自麻醉剂、抗组胺剂、抗肿瘤药、抗溃疡药、抗癫痫发作剂、肌肉松弛药、免疫抑制剂、抗感染剂、非类固醇抗炎剂、成像剂、营养剂及其组合。活性剂可以选自甲氨蝶呤、多柔比星、表柔比星、柔红霉素、长春新碱、长春碱、依托泊苷、艾力替新、喜树碱、帕利他塞、多西他赛、顺铂、泼尼松、甲基泼尼松、布洛芬及其组合。
根据一个实施方案，脂质体的透性可以取决于温度通过与疏水性部分缀合的ELP的收缩和自组装来调节。因此，可以使用脂质体作为媒介物以对受试者的靶部位有效地递送活性剂。
可以通过与疏水性部分缀合的ELP的相变温度以及脂质体自身的相变温度调节含有活性剂的脂质体的透性。因此，当脂质体具有在体温下更稳定的组成时，例如，即使在含有有效量的稳定分子诸如胆固醇以在体温下更稳定地维持脂质体的状态下，可以通过与疏水性部分缀合的ELP的相变温度有效地调节透性。
根据另一个实施方案，根据用于对受试者投递含有活性剂的脂质体的药物组合物，可以使用该组合物对受试者有效地递送活性剂。通过对受试者身体中的靶部位施用活性剂的方法，根据另一个实施方案，可以对受试者身体中的靶部位有效地递送活性剂。
本发明现在将对示例性实施方案进行更充分的描述。然而，本发明可以许多不同的形式体现，并且不应解释为限于本文中所列的实施方案。
实施例1：脂质体的制备和热敏感性的测量
以0.55:55:2:20或0.55:55:2:40的摩尔比使用硬脂酰-VPGVG VPGVGVPGVG VPGVG VPGVG VPGVG-NH2(SEQ NO:6，下文称为“SA-V6-NH2”)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC)、[1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](铵盐)](DSPE-PEG-2000)和胆固醇制备单层泡囊形式的脂质体。
详细地，将SA-V6-NH2在甲醇中溶解，并将DPPC、DSPE-PEG和胆固醇在氯仿中溶解。在圆底烧瓶中混合该甲醇和氯仿溶液后，通过使用旋转式蒸发器在室温下蒸发溶剂而在烧瓶的内壁上形成脂质薄层。
接着，通过在室温下向烧瓶添加其中溶解200mM钙黄绿素的生理盐水而使液体薄层水合。钙黄绿素是水溶性荧光分子。
通过将水合溶液过滤通过具有拥有100nm尺寸的孔的聚碳酸酯膜制备单层泡囊型脂质体。用生理盐水流动将制备的脂质体溶液通过PD-10(GEHealthcare)脱盐柱以除去未密封的钙黄绿素。结果，制得具有包载于水性内部中的钙黄绿素的脂质体。制备的脂质体具有约100nm至约200nm的平均直径，如通过Zeta粒度仪(Zeta-sizer instrument)(Malvern inst.)测量的。
通过测量在生理盐水的存在下在约25℃至约55℃的温度温育5分钟后钙黄绿素从脂质体的水性内部向周围溶液的百分比释放评估制备的脂质体配制剂的体外稳定性和热敏感性。包载于脂质体中的钙黄绿素的荧光由于其高浓度而自身淬灭，但是在从脂质体中释放并稀释到周围溶液中后，钙黄绿素显现强烈的荧光。
在温育后，在适当的稀释后以激发波长(λex)=485nm和发射波长(λem)=535nm测量样品的荧光强度以测定从脂质体中释放的钙黄绿素的量。通过与在通过添加二甲亚砜(DMSO)破坏脂质体样品后获得的包载材料的总的释放相比较来计算由于在特定的温度下的温育所导致的相对百分比荧光强度。
图1是显示钙黄绿素从以约0.55:约55:约2:约20或约0.55:约55:约2:约40的摩尔比使用SA-V6-NH2、DPPC、DSPE-PEG和胆固醇在实施例1中制备的脂质体中的温度释放谱(profile)的图。如图1中所示，钙黄绿素的释放在接近约41℃的DPPC相变温度的约35至约41℃的温度下被胆固醇的量控制。
如图1中所示，当胆固醇的摩尔比例是41时，根据温度的钙黄绿素释放是约30%或更小。这是因为促成脂质体稳定的过量胆固醇在37℃的温度存在，因此脂质体被过度稳定，并且因此消除由于根据ELP取决于温度的变化例如收缩相变所导致的脂质体破坏。
实施例2：
根据实施例1中使用的相同方法制备脂质体，除了向DPPC添加1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)作为主要脂质组分，并且以DPPC/DSPC为0/100、25/75、50/50、75/25、100/0的摩尔比混合并使用主要脂质分子。然后，评估脂质体的热敏感性。制备的脂质体与实施例1中制备的脂质体具有相似的平均直径和分布。
图2是显示钙黄绿素从根据实施例2通过以约0.55:约55(0/100,25/75,50/50,75/25,100/0(按摩尔比计)):约2:约20的摩尔比使用SA-V6-NH2、主要脂质分子(DPPC/DSPC)、DSPE-PEG和胆固醇制备的脂质体中的温度释放谱的图。如图2中所示，随着主要脂质分子的DSPC的量增加，钙黄绿素释放的起始温度升高。当使用DSPC 100作为主要脂质分子时，钙黄绿素的释放在约40℃开始，并且指数增加到约55℃。释放的最大量是在约55℃的80%或更多。考虑DSPC的相变温度是55.1℃的实情，释放量的这样的指数增加是因为所有脂质体的相变温度被认为是约55.1℃。认为释放的钙黄绿素的量在约相变温度时指数增加。
实施例3：使用硫酸铵梯度法的含有多柔比星的脂质体的制备和热敏感性测量
以25:75的混合比使用DSPC和DPPC作为主要脂质组分，以0.55:55:2:20的摩尔比使用SA-V3-NH2、DSPC+DPPC、DSPE-PEG、和胆固醇，并使用硫酸铵梯度法(J.Control.Release 2009,139,73-80)来制备密封多柔比星的单层泡囊型脂质体。
详细地，将硬脂酰-VPGVG VPGVG VPGVG-NH2(SEQ NO:7，下文为“SA-V3-NH2”)在甲醇中溶解，并将DSPC、DPPC、DSPE-PEG和胆固醇在氯仿中溶解。在圆底烧瓶中混合所述甲醇和氯仿溶液后，通过使用旋转式蒸发器在室温下蒸发溶剂在烧瓶的内壁上形成脂质薄层。
接着，通过在室温下向烧瓶添加250mM硫酸铵溶液而使脂质薄层水合。
通过将水合溶液过滤通过具有拥有100nm尺寸的孔的聚碳酸酯膜而制备单层泡囊型脂质体。通过将制备的脂质体溶液通过充满(填充有)25mMTris·HCl的Sephadex G-50柱得到脂质体溶液，该脂质体溶液由内部具有250mM硫酸铵和外部具有25mM Tris·HCl的脂质体形成。将DX以1:0.2的质量比添加至主要脂质组分，并在37℃的温度温育1小时。将制备的脂质体溶液通过充满生理盐水的Sephadex G-50柱(GE Healthcare)以除去未密封的DX。因此，制备具有包载于水性内部中的DX的脂质体(密封效率是90%或更高)。制备的脂质体具有约170nm的平均直径，如通过Zeta-粒度仪(Malvern inst.)测量的。
通过测量在生理盐水的存在下在约25℃至约55℃的温度温育5分钟后DX从脂质体的水性内部向周围溶液的百分比释放评估制备的脂质体配制剂的体外稳定性和热敏感性。
在温育后，在适当的稀释后以激发波长(λex)=485nm和发射波长(λem)=635nm测量样品的荧光强度以测定从脂质体中释放的DX的量。通过与在通过添加1%Triton X-100(乙醇)破坏脂质体样品后获得的包载材料的总的释放相比较来计算由于在特定的温度温育所导致的相对百分比荧光强度。
图3是显示DX从以约0.55:约55:约2:约20的摩尔比使用SA-V3-NH2、DSPC+DPPC、DSPE-PEG和胆固醇在实施例3中制备的脂质体中的温度释放谱的图。如图3中所示，DX的释放在接近约41℃的DPPC相变温度的约40至约41℃的温度显著增加。最大释放量超过80%。
实施例4：使用pH梯度法的含有多柔比星的脂质体的制备和热敏感性测量
以0.55:55:2:20的摩尔比使用SA-V3-NH2、DPPC、DSPE-PEG和胆固醇，并使用pH梯度法(Biochimica et Biophysica Acta 1985,816,294-302)制备密封多柔比星的单层泡囊型脂质体。
详细地，将SA-V3-NH2在甲醇中溶解，并将DPPC、DSPE-PEG和胆固醇在氯仿中溶解。在圆底烧瓶中混合该甲醇和氯仿溶液后，通过使用旋转式蒸发器在室温下蒸发溶剂在烧瓶的内壁上形成脂质薄层。
接着，通过在室温下向烧瓶添加300mM柠檬酸盐溶液(pH 4.0)而使脂质薄层水合。
通过将水合溶液过滤通过具有拥有100nm尺寸的孔的聚碳酸酯膜制备单层泡囊型脂质体。通过将制备的脂质体溶液通过充满20mM HEPES(150mM NaCl,pH 7.4)的Sephadex G-50柱制备脂质体溶液，该脂质体溶液由内部具有300mM柠檬酸盐和外部具有20mM HEPES(150mM NaCl)的脂质体形成。将DX以1:0.2的质量比添加至主要脂质组分，并在37℃的温度温育20小时。将制备的脂质体溶液通过充满生理盐水的Sephadex G-50柱以除去未密封的DX。结果，制备具有包载于水性内部中的DX的脂质体(密封效率是90%或更高)。制备的脂质体具有约150nm的平均直径，如通过Zeta-粒度仪(Malvern inst.)测量的。
通过测量在生理盐水的存在下在约25℃至约55℃的温度温育5分钟后DX从脂质体的水性内部向周围溶液的百分比释放评估制备的脂质体配制剂的体外稳定性和热敏感性。
在温育后，在适当的稀释后以激发波长(λex)=485nm和发射波长(λem)=635nm测量样品的荧光强度以测定从脂质体中释放的DX的量。通过与在通过添加1%Triton X-100(乙醇)破坏脂质体样品后获得的包载材料的总的释放相比较来计算由于在特定的温度温育所导致的相对百分比荧光强度。
图4是显示DX从以约0.55:约55:约2:约20的摩尔比使用SA-V3-NH2、DPPC、DSPE-PEG和胆固醇在实施例4中制备的脂质体中的温度释放谱的图。如图4中所示，DX的释放在接近约41℃的DPPC相变温度的约40至约41℃的温度显著增加。最大释放量表现为100%。作为比较实验的对照组，使用以约90:约10:约4的摩尔比使用DPPC、MPPC和DSPE-PEG通过pH梯度法制备的溶血脂质热敏感性脂质体(LTSL)。在LTSL的情况中，药物释放在35℃的温度开始，并且继续药物的逐渐释放，直至50℃，并且最大DX释放量表现为约60%。与对照组相比，含有ELP的脂质体的药物释放谱显示了在窄的温度范围内的快速释放。
实施例5：脂质体的稳定性的评估
使用与实施例4中使用的相同方法制备包载DX的热敏感性脂质体。作为比较实验的对照组，使用以约90:约10:约4的摩尔比使用DPPC、MPPC和DSPE-PEG通过pH梯度法制备的LTS L。DX包载脂质体具有约140±10nm的平均直径。
图5是显示DX包载脂质体的稳定性的图。图5代表在将脂质体在37℃的温度贮存时随着时间变化的测量的DX释放量。如图5中所示，自包括ELP的脂质体释放的药物量显著小于对照组。这表明包括ELP的脂质体可以在37℃的温度稳定地维持而不释放药物。
实施例6：根据温度的脂质体的药物释放动力学
使用与实施例3中使用的相同方法制备DX包载热敏感性脂质体。在37、40、42或45℃的温度随着时间的变化测量DX的释放。图6是显示通过以0.55:55:2:20的摩尔比使用SA-V3-NH2、主要脂质分子(DSPC/DPPC=25/75)、DSPE-PEG和胆固醇制备的脂质体在37、40、42或45℃的各温度的DX释放动力学的图。如图6中所示，脂质体在37℃的温度是非常稳定的，其中几乎没有发生药物的渗漏，但是利用在42℃和45℃的温度的热刺激，确认快速的药物释放。
实施例7：脂质体的细胞毒性
使用与实施例4中使用的相同方法制备DX包载热敏感性脂质体。将5.0×104个HeLa细胞在24孔中在含有10%(v/v)胎牛血清(FBS)和1%青霉素/链霉素的Dulbecco氏改良的Eagle氏培养基(DMEM)中培养24小时。使用DX包载脂质体根据浓度对培养的HeLa细胞进行处理，并将细胞立即转移到热摇动器中，并在37、42或45℃的温度温育10分钟。然后，将细胞在37℃的温度培养2小时，并用新鲜的培养基更换。随后，将细胞在37℃的温度培养46小时，并通过使用WST-8(Dojindo)试剂盒测量细胞增殖。
图7是显示根据通过实施例7的方法得到的脂质体中包载的药物量的细胞存活力的图，其中使用实施例4中相同的方法制备DX包载热敏感性脂质体。使用WST-8测定方法通过从活细胞中释放的脱氢酶的量测量细胞存活力。由于该实验，确认在37℃的温度温育的细胞没有显示毒性，但是在42℃和45℃的温度温育的细胞显示由于脂质体中注射的DX所致的根据浓度的毒性。因此，通过体外细胞毒性实验确认根据温度的药物释放和由于释放的药物所致的对细胞生长的抑制。
实施例8：脂质体的细胞摄取
使用与实施例4中使用的相同方法制备DX包载热敏感性脂质体。使用DX或DX包载热敏感性脂质体处理HeLa细胞2小时。所使用的DX浓度是10ug/ml。将细胞在37℃和42℃的温度加热10分钟，随后在DMEM中在37℃的温度温育2小时。将细胞用PBS漂洗，并用4%甲醛(w/v)在室温下处理30分钟。使用DAPI对细胞核染色。使用共聚焦激光扫描显微镜(LSM 710,Carl Zeiss,USA)观察细胞摄取。
图8是显示用实施例8的相同方法得到的DX的细胞摄取的图，其中使用与实施例4中使用的相同方法制备DX包载热敏感性脂质体。所使用的DX浓度是10ug/ml。
图8显示通过用实施例4中的注射DX的脂质体处理HeLa细胞，在37℃(B)或42℃(C)的温度将经处理的样品处理10分钟，将经处理的样品在37℃的温度在DMEM中温育2小时，并用PBS将细胞漂洗两次后的荧光确认的DAPI(左)或DX(右)的结果。对照组(A)显示通过在10ug/ml DX的存在下在37℃的温度与HeLa细胞一起在DMEM中温育2小时后的荧光确认的DAPI或DX的结果。在图8中，在左栏图中灰色区标示用DAPI染色的细胞核，而在右栏图中灰色区标示用DX染色的细胞核。由该结果，图8的细胞中存在的DX确认当在42℃的温度处理时从热敏感性脂质体中释放DX，然后释放的DX流入细胞中。
实施例9：脂质体形态学的确认
使用透射电子显微镜法(低温TEM)确认通过实施例4中的相同方法制备的脂质体和不含DX的热敏感性脂质体的形态。将脂质体在有孔碳膜支持网格(Holey carbon film-supported grid)上上样并观察。将网格在液氮中包埋，并转移到冷冻转移支架(cryotransfer holder)(Gatan)。通过使用安装有CCD照相机(2k，Gatan)的在200kV下运行的Tecnai F20场发射枪TEM(FEI)获得图像。
图9是显示在根据实施例4的DX药物包载前的脂质体和具有根据实施例4包载的DX药物的脂质体的TEM的图像的图。在图9中，A代表在37℃的温度根据实施例4的DX药物包载前的脂质体，B代表在37℃的温度具有根据实施例4包载的DX药物的脂质体，和C代表在42℃的温度具有根据实施例4包载的DX药物的脂质体。如图9中所示，根据实施例4的DX药物包载前的脂质体具有球体形状，并且在37℃的温度维持其形态，但是该形态在42℃的温度没有维持，而是被破坏。用于注射药物的方法是实施例4的pH梯度法。
应当理解，本文中所描述的示例性的实施方案应当仅在描述的意义上而不是出于限制目的考虑。通常应当认为每个实施方案内的特征或方面的描述可用于其它实施方案中的其它类似特征或方面。
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Figure IDA00002262159500031
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Claims (30)

1.脂质体，包括：
脂双层；
与疏水性部分缀合的弹性蛋白样多肽(ELP)；和
脂双层稳定剂，
其中所述疏水性部分包装在所述脂双层中。
2.权利要求1的脂质体，其中所述脂双层稳定剂是具有使得实现对脂双层的掺入的性质的类固醇。
3.权利要求1的脂质体，其中所述稳定剂是选自如下的稳定剂：固醇或其衍生物、鞘脂或其衍生物、及它们的组合。
4.权利要求1的脂质体，其中所述稳定剂是选自如下的稳定剂：胆固醇、谷固醇、麦角固醇、豆固醇、4,22-豆甾二烯-3-酮、豆固醇乙酸酯、羊毛固醇、环阿屯醇、及其组合。
5.权利要求1的脂质体，其中所述ELP包括选自如下的一种或多种重复单元：VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、GVPGX、及其组合，其中V是缬氨酸，P是脯氨酸，G是甘氨酸，且X是除了脯氨酸外的任何氨基酸。
6.权利要求5的脂质体，其中所述选择的重复单元重复2至200次。
7.权利要求1的脂质体，其中所述疏水性部分是能够通过包装在脂双层中而包括在所述脂双层中且能够在所述脂双层中固定与其缀合的所述ELP的分子。
8.权利要求1的脂质体，其中所述疏水性部分包括仅含有疏水区的分子或含有亲水和疏水区两者的两亲性分子。
9.权利要求1的脂质体，其中所述疏水性部分是饱和或不饱和的烃、饱和或不饱和的酰基分子、或饱和或不饱和的烷氧基分子。
10.权利要求1的脂质体，其中所述脂双层包括磷脂。
11.权利要求10的脂质体，其中所述磷脂是选自如下的磷脂：磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、及其组合。
12.权利要求11的脂质体，其中所述磷脂具有C16到C24酰基基团。
13.权利要求1的脂质体，其中所述脂双层包括用亲水性聚合物衍生化的磷脂衍生物。
14.权利要求13的脂质体，其中所述亲水性聚合物是选自如下的材料：聚乙二醇、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、寡糖、及其混合物。
15.权利要求1的脂质体，其中所述脂双层包括：
磷脂；
与所述疏水性部分缀合的所述ELP；
用亲水性聚合物衍生化的磷脂衍生物；和
胆固醇。
16.权利要求1的脂质体，其中所述脂质体具有在39℃至45℃范围内的相变温度。
17.权利要求1的脂质体，其中所述脂质体具有在50nm至500nm范围内的直径。
18.权利要求1的脂质体，其中所述脂质体进一步包括活性剂。
19.权利要求18的脂质体，其中所述活性剂包含在所述脂质体的内部空间中、所述脂双层的内部中、脂双层的表面上、或者它们的组合之中或之上。
20.权利要求18的脂质体，其中所述活性剂是药理学活性剂或诊断剂。
21.权利要求19的脂质体，其中所述药理学活性剂选自麻醉剂、抗组胺剂、抗肿瘤药、抗溃疡药、抗癫痫发作剂、肌肉松弛药、免疫抑制剂、抗感染剂、非类固醇抗炎剂、成像剂、营养剂、及其组合。
22.用于将活性剂递送到受试者中的部位的药物组合物，包括：
药学可接受载体或稀释剂；和
包括活性剂的根据权利要求1-17中任一项的脂质体。
23.权利要求22的组合物，其中所述活性剂包含在所述脂质体的内部空间中、所述脂双层的内部中、脂双层的表面上、或者它们的组合之中或之上。
24.权利要求22的组合物，其中所述活性剂是药理学活性剂或诊断剂。
25.权利要求22的组合物，其中所述药理学活性剂选自麻醉剂、抗组胺剂、抗肿瘤药、抗溃疡药、抗癫痫发作剂、肌肉松弛药、免疫抑制剂、抗感染剂、非类固醇抗炎剂、成像剂、营养剂、及其组合。
26.对受试者中的靶部位递送活性剂的方法，该方法包括：
对受试者施用含有所述活性剂的根据权利要求1-17中任一项的脂质体；和
加热受试者的所述靶部位以从在所述靶部位处的所述脂质体中释放所述活性剂。
27.权利要求26的方法，其中所述活性剂包含在所述脂质体的内部空间中、所述脂双层的内部中、脂双层的表面上、或者它们的组合之中或之上。
28.权利要求26的方法，其中所述活性剂是药理学活性剂或诊断剂。
29.权利要求26的方法，其中所述药理学活性剂选自麻醉剂、抗组胺剂、抗肿瘤药、抗溃疡药、抗癫痫发作剂、肌肉松弛药、免疫抑制剂、抗感染剂、非类固醇抗炎剂、成像剂、营养剂、及其组合。
30.权利要求26的方法，其中所述加热温度在39℃至45℃的范围内。
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